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含有枯草芽孢杆菌BAB-1和啶酰菌胺的复配 杀菌剂及其应用

阅读：1发布：2023-09-24

专利汇可以提供含有枯草芽孢杆菌BAB-1和啶酰菌胺的复配杀菌剂及其应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明涉及一种含有枯草芽孢杆菌BAB‑1和啶酰菌胺的复配杀菌剂及其在防治番茄灰霉病和叶霉病中的应用。所述复配杀菌剂原料含有活性成分、填料和/助剂；所述活性成分由枯草芽孢杆菌BAB‑1和啶酰菌胺组成。本发明所述复配杀菌剂将枯草芽孢杆菌BAB‑1与啶酰菌胺复配后，形成优势互补的作用，既能发挥啶酰菌胺的高效、快速的抑菌作用及对灰霉病和叶霉病的治疗作用，又能发挥枯草芽孢杆菌BAB‑1在诱导番茄抗性及对灰霉病和叶霉病的保护作用；可形成一个稳定的、平衡的、生物多样性的生态系统，达到提高药效、减少化学农药使用量、持久的控制番茄灰霉病和叶霉病流行的目的。，下面是含有枯草芽孢杆菌BAB-1和啶酰菌胺的复配杀菌剂及其应用专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种含有枯草芽孢杆菌BAB-1和啶酰菌胺的复配杀菌剂，其活性成分由啶酰菌胺和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BAB-1组成；
所述活性成分中啶酰菌胺与枯草芽孢杆菌BAB-1的重量比为1～4∶4～1；
所述啶酰菌胺为质量浓度98％的啶酰菌胺原药；所述枯草芽孢杆菌BAB-1为其冻干菌粉，所述冻干菌粉的活菌总数为2.0×1010CFU/g。
2.根据权利要求1所述的复配杀菌剂，其特征在于，所述活性成分中啶酰菌胺与枯草芽孢杆菌BAB-1的重量比为4∶1。
3.根据权利要求1所述的复配杀菌剂，其特征在于，所述活性成分中啶酰菌胺与枯草芽孢杆菌BAB-1的重量比为2∶1。
4.根据权利要求1所述的复配杀菌剂，其特征在于，所述活性成分中啶酰菌胺与枯草芽孢杆菌BAB-1的重量比为1∶1。
5.根据权利要求1所述的复配杀菌剂，其特征在于，所述活性成分中啶酰菌胺与枯草芽孢杆菌BAB-1的重量比为1∶2。
6.根据权利要求1所述的复配杀菌剂，其特征在于，所述活性成分中啶酰菌胺与枯草芽孢杆菌BAB-1的重量比为1∶4。
7.根据权利要求1-6任一项所述的复配杀菌剂，其特征在于，以重量份计，其原料含有以下组分：活性成分10～80份，分散剂1～8份，润湿剂1～8份，填料10～80份。
8.根据权利要求7所述的复配杀菌剂，其特征在于，以重量份计，其原料含有以下组分：
活性成分40～70份，分散剂3～7份，润湿剂3～7份，填料20～50份。
9.根据权利要求8所述的复配杀菌剂，其特征在于，以重量份计，其原料含有以下组分：
活性成分50～60份，分散剂4～6份，润湿剂4～6份，填料30～40份。
10.根据权利要求7所述的复配杀菌剂，其特征在于，所述分散剂为木质素磺酸钠盐、羧甲基纤维素钠盐、脱糖木质素磺酸钠、亚硫酸纸浆废液、烷基酚聚氧乙烯醚、乙二醇单丁基醚、聚氧乙基烷基醚、壬基酚聚氧乙烯醚、十二烷基苯磺酸钠中的一种或多种的混合物；所述的润湿剂为二丁基萘磺酸钠、脂肪醇聚氧乙烯醚、十二烷基磺酸钠、十二烷基苯磺酸钠盐、烷基酚聚氧乙烯基甲醛缩合物磺酸盐中的一种或多种的混合物；所述填料为白炭黑、高岭土、硅藻土、轻质碳酸钙、膨润土中的一种或多种的混合物。
11.根据权利要求8或9所述的复配杀菌剂，其特征在于，所述分散剂为木质素磺酸钠盐、羧甲基纤维素钠盐、脱糖木质素磺酸钠、亚硫酸纸浆废液、烷基酚聚氧乙烯醚、乙二醇单丁基醚、聚氧乙基烷基醚、壬基酚聚氧乙烯醚、十二烷基苯磺酸钠中的一种或多种的混合物；所述的润湿剂为二丁基萘磺酸钠、脂肪醇聚氧乙烯醚、十二烷基磺酸钠、十二烷基苯磺酸钠盐、烷基酚聚氧乙烯基甲醛缩合物磺酸盐中的一种或多种的混合物；所述填料为白炭黑、高岭土、硅藻土、轻质碳酸钙、膨润土中的一种或多种的混合物。
12.根据权利要求1所述的复配杀菌剂，其特征在于，以重量份计，含有以下组分：质量浓度98％的啶酰菌胺原药：20.41份；活菌总数为2.0×1010CFU/g的枯草芽孢杆菌BAB-1冻干菌粉：40份；分散剂羧甲基纤维素钠盐：3份；润湿剂：十二烷基磺酸钠：4.5份；填料轻质碳酸钙：32.09份。
13.权利要求1-12任一项所述复配杀菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：按照所述配比将各种组分混合搅拌，进行一级粉碎，颗粒细度达到80目；混合搅拌后，再经气流粉碎机进行二级粉碎，颗粒细度达到325目，即得。
14.权利要求1-12任一项所述复配杀菌剂在防治植物灰霉病和叶霉病方面的应用。
15.根据权利要求14所述的应用，其特征在于，所述植物包括但不限于水果、蔬菜和花卉。
16.根据权利要求15所述的应用，其特征在于，所述植物为番茄。

说明书全文

含有枯草芽孢杆菌BAB-1和啶酰菌胺的复配杀菌剂及其应用

技术领域

[0001] 本发明涉及一种复配杀菌剂及其应用，尤其涉及一种含有枯草芽孢杆菌BAB-1和啶酰菌胺的复配杀菌剂及其在防治番茄灰霉病和叶霉病中的应用。

背景技术

[0002] 灰霉病是由灰葡萄孢(Botrytis cinerea)引起的一种真菌性病害，灰葡萄孢可以侵染番茄、草莓、黄瓜、瓠瓜、菊花、苹果、西葫芦和葡萄等200多种植物，引起灰霉病的发生。灰霉病是一种世界性的重要病害，在设施果蔬上危害尤为严重。

[0003] 叶霉病是番茄生产上另一种真菌性病害，主要危害叶片，严重时也可以为害茎、花、果实等。病斑多从下部叶片开始逐渐向上蔓延，严重时可引起全叶干枯卷曲，造成植株早衰，影响番茄的产量和质量。

[0004] 由于种质资源中尚无抗灰霉病的材料和品种，生产上主要以化学防治为主，辅以生物及生态防治。目前，化学防治是防治灰霉病的重要手段，但灰葡萄孢具有繁殖快，遗传变异大和适合度高的特点，连续使用同一药剂易产生抗药性。生产上，防治灰霉病常用的化学杀菌剂如苯并咪唑类的多菌灵、二甲酰亚胺类的腐霉利、苯胺基嘧啶类的嘧霉胺等均因灰葡萄孢抗药性的产生而防治效果大大降低。若为提高防效随意加大用药量，其结果是不但没有有效控制灰霉病的发生，反而提高了果蔬中农残的风险，加大了农药对环境的污染。

[0005] 随着人们对食品安全关注度的提高，生物防治因对人畜安全、环境兼容性好、病菌不易产生抗药性等特点，已日益引起人们的重视。特别是枯草芽孢杆菌，由于其能够产生多种抗菌物质，防效明显，目前国内外已有很多优良的枯草芽孢杆菌菌株应用于生产实践。生物农药对于减少农田化学农药污染、保障农产品质量安全具有重要意义。但是，生物防治也存在一些不足，如田间防治效果不稳定、田间药效作用缓慢等，严重影响了其推广使用。

[0006] 为了弥补生物防治与化学防治的不足，开展生防微生物与低毒化学药剂协同控制番茄灰霉病的技术研究，既能发挥化学药剂高效、快速的抑菌作用，又能发挥生防微生物在诱导植物抗病性、持久的控番茄灰霉病的流行的目的。

[0007] 啶酰菌胺(Boscalid)是由德国巴斯夫公司开发的新型烟酰胺类杀菌剂，主要用于防治灰霉病、白粉病、各种腐烂病、褐腐病和根腐病等。啶酰菌胺属于线粒体呼吸链中琥珀酸辅酶Q还原酶抑制剂，对孢子的萌发有很强的抑制能力，且与其它杀菌剂无交互抗性。另外啶酰菌胺的毒性也很低，对雄雌大鼠、小鼠急性经口LD50均大于5000mg/kg。对雄雌大鼠急性经皮LD50均>2000mg/kg。对雄雌小鼠急性吸入LD50>6.7mg/kg。对兔眼睛和皮肤试验无刺激。豚鼠试验无致敏性。对蜜蜂、鸟、蚯蚓、蚕等均无影响。对蜜蜂和鸟类在喷洒液干燥后即可放饲。同时，对各种天敌亦无影响。

[0008] 有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

[0009] 本发明的目的在于：针对目前生产上大量使用化学农药防治番茄灰霉病和叶霉病引发病原菌的抗性、严重污染环境、导致农药残留超标、影响番茄品质等问题，提供一种对番茄灰霉病和叶霉病具有良好防治效果的含有枯草芽孢杆菌BAB-1和啶酰菌胺的复配杀菌剂及其应用。本发明所述复配杀菌剂将枯草芽孢杆菌BAB-1与啶酰菌胺复配后，形成优势互补的作用，既能发挥啶酰菌胺的高效、快速的抑菌作用及对灰霉病和叶霉病的治疗作用，又能发挥枯草芽孢杆菌BAB-1在诱导番茄抗性及对灰霉病和叶霉病的保护等作用。通过使用该复配杀菌剂，在番茄种植环境中引进大量有益微生物，恶化病原菌的生存环境，结合栽培管理等农业措施，形成一个稳定的、平衡的、生物多样性的生态系统，达到提高药效、减少化学农药使用量、持久的控制番茄灰霉病和叶霉病流行的目的。

[0010] 本发明所述枯草芽孢杆菌BAB-1由河北省农林科学院植物保护研究所筛选获得。所述枯草芽孢杆菌BAB-1于2007年7月6日，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.2099；拉丁学名为：Bacillus subtilis BAB-1(以下简称BAB-1)。该菌株具有高效、抑菌谱广、使用简单、成本低、无环境污染等特点，可用于番茄灰霉病和叶霉病的防治。枯草芽孢杆菌BAB-1对化学药剂啶酰菌胺具有天然抗性的，该菌株可以在啶酰菌胺含量为1000μg/mL的LB培养基上生长。因而可以将枯草芽孢杆菌BAB-1与啶酰菌胺复配成杀菌剂，实现二者长期共存。

[0011] 实现本发明的技术方案如下：一种含有枯草芽孢杆菌BAB-1和啶酰菌胺的复配杀菌剂，其活性成分由枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BAB-1和啶酰菌胺组成。

[0012] 优选地，所述枯草芽孢杆菌BAB-1为其菌体和/或其代谢产物。

[0013] 优选地，所述枯草芽孢杆菌BAB-1为其发酵液或其冻干菌粉；进一步优选所述发酵液的活菌总数为7×109～1×1010CFU/mL；进一步优选所述冻干菌粉的活菌总数为1.8×1010～2.4×1010CFU/g。优选地，所述活性成分中啶酰菌胺与枯草芽孢杆菌BAB-1的重量比为1～99∶99～1；进一步优选重量比为1～9∶9～1；较佳重量比为1～4∶4～1。

[0014] 具体地，一种含有枯草芽孢杆菌BAB-1和啶酰菌胺的复配杀菌剂，以重量份计，其原料含有以下组分：上述活性成分10～80份，分散剂1～8份，润湿剂1～8份，填料10～80份；优选其原料含有以下组分：活性成分40～70份，分散剂3～7份，润湿剂3～7份，填料20～50份；更优选其原料含有以下组分：活性成分50～60份，分散剂4～6份，润湿剂4～6份，填料30～40份。

[0015] 优选地，所述啶酰菌胺为质量浓度98％啶酰菌胺原药。

[0016] 优选地，所述分散剂为木质素磺酸钠盐、羧甲基纤维素钠盐、脱糖木质素磺酸钠、亚硫酸纸浆废液、烷基酚聚氧乙烯醚、乙二醇单丁基醚、聚氧乙基烷基醚、壬基酚聚氧乙烯醚、十二烷基苯磺酸钠中的一种或多种的混合物。

[0017] 优选地，所述的润湿剂为二丁基萘磺酸钠(拉开粉BX)、润湿剂wgwin D30、脂肪醇聚氧乙烯醚、十二烷基磺酸钠、十二烷基苯磺酸钠盐、烷基酚聚氧乙烯基甲醛缩合物磺酸盐中的一种或多种的混合物。

[0018] 优选地，所述填料为白炭黑、高岭土、轻钙、硅藻土、轻质碳酸钙、膨润土中的一种或多种的混合物。

[0019] 具体地，一种含有枯草芽孢杆菌BAB-1和啶酰菌胺的复配杀菌剂，以重量份计，含有以下组分：质量浓度98％的啶酰菌胺原药：20.41份；枯草芽孢杆菌BAB-1冻干菌粉(活菌总数为2.0×1010CFU/g)：40份；分散剂羧甲基纤维素钠盐：3份；润湿剂：十二烷基磺酸钠：4.5份；填料轻质碳酸钙：32.09份。以此配方可按下述方法制得20％啶酰菌胺·80亿枯草芽孢杆菌BAB-1可湿性粉剂。

[0020] 本发明所述重量份可以是μg、mg、g、kg等本领域公知的重量单位，也可以是其倍数，如1/10、1/100、10倍、100倍等。

[0021] 本发明所述含有枯草芽孢杆菌BAB-1和啶酰菌胺的复配杀菌剂可按现有技术方法制备成液体制剂或可湿性粉剂。

[0022] 本发明还提供上述含有枯草芽孢杆菌BAB-1和啶酰菌胺的复配杀菌剂的制备方法包括：按照上述配比将各种组分混合搅拌后，进行一级气流粉碎(颗粒细度达到80目)；混合搅拌后，再进行二级气流粉碎(颗粒细度达到325目)，即得。

[0023] 本发明所述枯草芽孢杆菌BAB-1冻干菌粉可由枯草芽孢杆菌BAB-1发酵液按现有技术常规方法制得。所述枯草芽孢杆菌BAB-1发酵液可由现有技术如中国专利CN200710121275.0记载的方法制得；或者按以下方法制得。

[0024] 一种枯草芽孢杆菌BAB-1发酵液的制备方法，包括以下步骤：首先将BAB-1菌种在LB平板中活化，挑取单菌落划线到苛氏瓶中，3天后用无菌水将菌苔洗出接种至种子罐(如1吨罐)作为种子液，31℃培养12h后将种子液接种到发酵罐(如5吨罐)进行发酵，48h下罐，即得到枯草芽孢杆菌BAB-1发酵液。

[0025] 将所述枯草芽孢杆菌BAB-1发酵液下罐后，进行离心并冻干，即得到枯草芽孢杆菌BAB-1冻干菌粉。

[0026] 本发明还包括所述含有枯草芽孢杆菌BAB-1和啶酰菌胺的复配杀菌剂在防治植物灰霉病和叶霉病方面的应用；所述植物包括但不限于水果、蔬菜和花卉，例如番茄、草莓、黄瓜、西葫芦、葡萄、莴苣、生菜、白菜、茄子、辣椒、豆角、瓠瓜、菊花、苹果等200多种植物；优选为番茄。本发明所述含有枯草芽孢杆菌BAB-1和啶酰菌胺的复配杀菌剂对番茄灰霉病和叶霉病的防治具有显著效果，防治效果分别可达88.6％和87.5％。

[0027] 本发明所述含有枯草芽孢杆菌BAB-1和啶酰菌胺的复配杀菌剂的使用方法包括：将所述含有枯草芽孢杆菌BAB-1和啶酰菌胺的复配杀菌剂稀释后对所述植物(例如番茄)的茎叶进行喷雾，以防治灰霉病和叶霉病；优选在所述植物(例如番茄)的生长期进行防治。

[0028] 一般地，所述含有枯草芽孢杆菌BAB-1和啶酰菌胺的复配杀菌剂在使用时其有效成分含量至少为300μg/mL；优选为500μg/mL～600μg/mL。

[0029] 一般地，将所述含有枯草芽孢杆菌BAB-1和啶酰菌胺的复配杀菌剂用水稀释后使用。

[0030] 本发明的优点在于：通过利用对人畜安全，对灰霉病菌和叶霉病菌具有较强抑制作用的枯草芽孢杆菌BAB-1，将其与低毒化学药剂啶酰菌胺按一定比例复配，达到优势互补、减少了化学杀菌剂的用量，在提高防治效果的同时，改善了生态环境、降低了化学药剂在蔬菜中的残留量。

具体实施方式

[0031] 以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

[0032] 如无特殊指明，以下实施例所述含有枯草芽孢杆菌BAB-1和啶酰菌胺的复配杀菌剂中的原料啶酰菌胺为质量浓度98％啶酰菌胺原药，由江阴苏利化学股份有限公司提供；原料枯草芽孢杆菌BAB-1为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BAB-1冻干菌粉(活菌总数为2.0×1010CFU/g)，由河北省农林科学院植物保护研究所提供。

[0033] 实施例1

[0034] 本实施例提供一种含有枯草芽孢杆菌BAB-1和啶酰菌胺的复配杀菌剂，含有以下组分：活性成分60kg；分散剂：烷基酚聚氧乙烯醚5Kg，乙二醇单丁基醚1Kg；润湿剂：十二烷基苯磺酸钠盐4Kg，脂肪醇聚氧乙烯醚3Kg；填料：白炭黑5Kg，高岭土25Kg；其中活性成分由质量浓度98％啶酰菌胺原药和枯草芽孢杆菌BAB-1冻干菌粉(活菌总数为2.0×1010CFU/g)组成，二者重量比为4∶1。

[0035] 实施例2

[0036] 本实施例提供一种含有枯草芽孢杆菌BAB-1和啶酰菌胺的复配杀菌剂，与实施例1区别仅在于活性成分啶酰菌胺与枯草芽孢杆菌BAB-1二者重量比为2∶1。

[0037] 实施例3

[0038] 本实施例提供一种含有枯草芽孢杆菌BAB-1和啶酰菌胺的复配杀菌剂，与实施例1区别仅在于活性成分啶酰菌胺与枯草芽孢杆菌BAB-1二者重量比为1∶1。

[0039] 实施例4

[0040] 本实施例提供一种含有枯草芽孢杆菌BAB-1和啶酰菌胺的复配杀菌剂，与实施例1区别仅在于活性成分啶酰菌胺与枯草芽孢杆菌BAB-1二者重量比为1∶2。

[0041] 实施例5

[0042] 本实施例提供一种含有枯草芽孢杆菌BAB-1和啶酰菌胺的复配杀菌剂，与实施例1区别仅在于活性成分啶酰菌胺与枯草芽孢杆菌BAB-1二者重量比为1∶4。

[0043] 实施例6

[0044] 本实施例提供一种含有枯草芽孢杆菌BAB-1和啶酰菌胺的复配杀菌剂，与实施例1区别仅在于活性成分啶酰菌胺与枯草芽孢杆菌BAB-1二者重量比为1∶99。

[0045] 实施例7

[0046] 本实施例提供一种含有枯草芽孢杆菌BAB-1和啶酰菌胺的复配杀菌剂，与实施例1区别仅在于活性成分啶酰菌胺与枯草芽孢杆菌BAB-1二者重量比为99∶1。

[0047] 实施例8

[0048] 本实施例提供一种含有枯草芽孢杆菌BAB-1和啶酰菌胺的复配杀菌剂，以100kg计，含有以下组分：质量浓度98％的啶酰菌胺原药：20.41kg；枯草芽孢杆菌BAB-1冻干菌粉(活菌总数为2.0×1010CFU/g)：40kg；分散剂羧甲基纤维素钠盐：3kg；润湿剂十二烷基磺酸钠：4.5kg；填料轻质碳酸钙：32.09kg。

[0049] 实施例9

[0050] 本实施例提供了如实施例1所述配方的复配杀菌剂的制备方法，具体包括：按照配比将各种组分混合搅拌，进行一级气流粉碎，颗粒细度达到80目；混合搅拌后，再经气流粉碎机进行二气流级粉碎，颗粒细度达到325目，制得。

[0051] 实施例2-8所述的复配杀菌剂的制备方法与实施例9相同。

[0052] 实验例1

[0053] 枯草芽孢杆菌BAB-1与啶酰菌胺对番茄灰霉病菌的毒力实验

[0054] 1实验材料

[0055] 供试病原菌菌株为番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)，由河北省农林科学院植物保护研究所提供，使用PDA培养基(土豆200g，葡萄糖20g，琼脂10g，蒸馏水1000mL)于25℃±1℃条件下预培养3d，备用。质量浓度98％啶酰菌胺原药，由江阴苏利化学股份有限公司提供。枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BAB-1发酵液(活菌总数为80亿CFU/mL)，由河北省农林科学院植物保护研究所提供。实施例1-5制备的含有枯草芽孢杆菌BAB-1和啶酰菌胺的复配杀菌剂，其活性成分啶酰菌胺与枯草芽孢杆菌BAB-1二者重量比分别为4:1、2:1、1:1、
1:2、1:4。

[0056] 2实验方法

[0057] 2.1将质量浓度98％啶酰菌胺原药溶于适量丙酮，制成浓度为10000μg/mL的母液，然后用无菌水进行系列稀释，与PDA培养基按1∶9的体积比例混合，分别制成浓度为10、5、1、0.5、0.1、0.05μg/mL的含药平板。

[0058] 2.2将枯草芽孢杆菌BAB-1发酵液用无菌水进行稀释，与PDA培养基按1∶9的体积比例混合，分别制成枯草芽孢杆菌浓度为10、5、1、0.5、0.1和0.05μg/mL的含药平板。

[0059] 2.3取实施例1-5制备的含有枯草芽孢杆菌BAB-1和啶酰菌胺的复配杀菌剂用无菌水进行稀释，分别与PDA培养基混合，制成浓度为10、5、1、0.5、0.1、0.05μg/mL的含药平板。此处浓度是指所述复配杀菌剂中活性成分(即枯草芽孢杆菌BAB-1和啶酰菌胺)的浓度。

[0060] 2.4在上述经预培养3天的番茄灰霉病菌PDA平板上用打孔器打取直径为5mm的菌饼，将菌饼菌面朝下分别接种到上述步骤2.1～2.3制备的含药平板中央；并以不含药剂的PDA平板为空白对照，按同样方法操作；于25℃±1℃条件下恒温培养3d后，十字交叉法测量菌落直径。

[0061] 3结果计算

[0062] 使用EXCEL计算各处理的抑制率，根据各处理的浓度及抑制率，利用DPSv6.55 数据处理软件求出回归系数(b)、截距(a)、相关系数、EC50(有效抑制病菌生长50％时的处理浓度，单位为μg/mL)。然后写出毒力回归方程：y＝bx+a，其中y表示处理抑制率的机率值；x表示处理的浓度的对数值。

[0063] 抑制率(％)＝(对照菌落净生长量-处理菌落净生长量直径)/对照菌落净生长量×100％

[0064] 参照Wadley(1967)公式计算不同复配药剂的增效系数：

[0065]

[0066] SR＝EC50(th)/EC50(ob)

[0067] 上式中a、b分别代表啶酰菌胺(A)、枯草芽孢杆菌(B)两种杀菌剂在混合物中所占百分比；EC50(A)和EC50(B)分别表示A和B的实际观测EC50值，EC50(th)表示A、B两种杀菌剂按a:b混合后的理论EC50值，EC50(ob)为A、B两种杀菌剂按a:b混合后的实际观测EC50值。SR>1.5，表示增效；SR<0.5，表示拮抗；SR介于0.5和1.5之间表示相加作用。

[0068] 4实验结果

[0069] 见表1。结果表明，啶酰菌胺、枯草芽孢杆菌BAB-1和实施例1-5所述含有枯草芽孢杆菌BAB-1和啶酰菌胺的复配杀菌剂分别对番茄灰霉病菌具有良好的抑制作用；并且实施例1-5所述复配杀菌剂对番茄灰霉病菌的增效系数均大于1.5，表明实施例1-5所述含有枯草芽孢杆菌BAB-1和啶酰菌胺的复配杀菌剂中啶酰菌胺与枯草芽孢杆菌BAB-1具有增效作用。

[0070] 表1 不同配比的含有枯草芽孢杆菌BAB-1和啶酰菌胺的复配杀菌剂对番茄灰霉病菌的联合毒力

[0071]药剂毒力回归方程 EC50 相关增效

[0072] (μg/mL) 系数系数
啶酰菌胺(A) y＝0.4591x+4.9027 1.6291 0.9975 -
枯草芽孢杆菌BAB-1(B) y＝1.3081x+6.9959 0.0298 0.839 -
实施例1(A:B＝4:1) y＝0.6651x+5.6944 0.0903 0.9552 1.54
实施例2(A:B＝2:1) y＝0.6430x+5.8558 0.0467 0.9384 1.85
实施例3(A:B＝1:1) y＝1.3254x+6.9616 0.0331 0.8406 1.77
实施例4(A:B＝1:2) y＝1.5315x+7.5243 0.0225 0.845 1.97
实施例5(A:B＝1:4) y＝1.3223x+7.1449 0.0239 0.86 1.55

[0073] 表1中“A:B＝4:1”表示实施例1所述含有枯草芽孢杆菌BAB-1和啶酰菌胺的复配杀菌剂其中啶酰菌胺与枯草芽孢杆菌BAB-1的重量比例为4:1。其他与之类似。

[0074] 实验例2

[0075] 含有枯草芽孢杆菌BAB-1和啶酰菌胺的复配杀菌剂对番茄叶霉病菌的增效作用测定

[0076] 1实验材料

[0077] 实验药剂：按照实施例8制备的含有枯草芽孢杆菌BAB-1和啶酰菌胺的复配杀菌剂。

[0078] 对照药剂1：质量浓度50％啶酰菌胺水分散粒剂(巴斯夫欧洲公司提供，批号140820000)。

[0079] 对照药剂2：枯草芽孢杆菌BAB-1发酵液(河北省农林科学院植物保护研究所提供，活菌总数为80亿CFU/mL)。

[0080] 供试病原菌菌株为番茄叶霉病菌(Fulvia fulva(Cooke)Cif.)，由河北省农林科学院植物保护研究所提供，使用PDA培养基(土豆200g，葡萄糖20g，琼脂10g，蒸馏水1000mL)于24℃±1℃条件下预培养20d，产孢后备用。

[0081] 2实验方法

[0082] 2.1将对照药剂1溶于适量丙酮，制成浓度为10000μg/mL的母液，然后用无菌水进行系列稀释，与PDA培养基按1∶9的体积比例混合，分别制成浓度为10、5、1、0.5、0.1、0.05μg/mL的含药平板。

[0083] 2.2将枯草芽孢杆菌BAB-1发酵液用无菌水进行稀释，与PDA培养基按1∶9的体积比例混合，分别制成枯草芽孢杆菌浓度为10、5、1、0.5、0.1、0.05μg/mL的含药平板。

[0084] 2.3将按照实施例8制备的含有枯草芽孢杆菌BAB-1和啶酰菌胺的复配杀菌剂用无菌水稀释，分别与PDA培养基按1∶9的体积比例混合，制成浓度为10、5、1、0.5、0.1、0.05μg/mL的含药平板。此处浓度是指所述复配杀菌剂中活性成分(即枯草芽孢杆菌BAB-1和啶酰菌胺)的浓度。

[0085] 2.4在上述经预培养20天的番茄叶霉病菌菌PDA平板上，加入10mL 0.5％吐温水，用涂棒将叶霉孢子刮下，利用显微镜，将孢子悬浮液调至1×105个/mL，利用移液器向上述步骤2.1～2.3制备的含药平板中注入0.1mL孢子悬浮液，然后用涂棒涂匀。并以不含药剂的PDA平板为空白对照，按同样方法操作；于24℃±1℃条件下恒温培养20h后，在低倍显微镜下调查孢子的总数及萌发数，每处理调查约100个孢子。

[0086] 3结果计算

[0087] 按下式计算孢子萌发率和抑制率，按实验例1方法计算毒力回归方程、相关系数、EC50(有效抑制病菌生长50％时的处理浓度，单位为μg/mL)及增效系数。

[0088] 萌发率(％)＝萌发数/总调查数×100％

[0089] 抑制率(％)＝(对照萌发率-处理萌发率)/对照萌发率×100％

[0090] 4实验结果

[0091] 见表2。结果表明，啶酰菌胺、枯草芽孢杆菌BAB-1和实施例8所述含有枯草芽孢杆菌BAB-1和啶酰菌胺的复配杀菌剂分别对番茄叶霉病菌菌具有良好的抑制作用；并且实施例8所述复配杀菌剂对番茄叶霉病菌的增效系数为1.90，表明实施例8所述含有枯草芽孢杆菌BAB-1和啶酰菌胺的复配杀菌剂中啶酰菌胺与枯草芽孢杆菌BAB-1具有增效作用。

[0092] 表2 含有枯草芽孢杆菌BAB-1和啶酰菌胺的复配杀菌剂对番茄叶霉病菌的联合毒力

[0093]

[0094] 表2中“A:B＝1:2”表示实施例8所述含有枯草芽孢杆菌BAB-1和啶酰菌胺的复配杀菌剂其中啶酰菌胺与枯草芽孢杆菌BAB-1的重量比例为1:2。

[0095] 实验例3

[0096] 含有枯草芽孢杆菌BAB-1和啶酰菌胺的复配杀菌剂对番茄灰霉病的田间防效[0097] 实验地点河北省保定市徐水县高林村镇白塔铺村。实验地前茬为黄瓜，番茄种植15年以上，灰霉病历年发生。供试番茄品种为东圣，试验大棚外覆盖草苫保温，白天卷起。当棚内温度过低时，采用炉火升温。2014年1月18日定植，每亩定植3000株番茄幼苗。

[0098] 1实验材料

[0099] 实验药剂：按照实施例8方法制备的含有枯草芽孢杆菌BAB-1和啶酰菌胺的复配杀菌剂。对照药剂1：质量浓度50％啶酰菌胺水分散粒剂(巴斯夫欧洲公司提供，批号140820000。对照药剂2：枯草芽孢杆菌BAB-1干粉(河北省农林科学院植物保护研究所提供，活菌总数为200亿CFU/g)。对照药剂3：浓度为400g/L嘧霉胺悬浮剂(德国拜耳作物科学公司提供，批号20131127)。对照药剂4：质量浓度10％苯醚甲环唑水分散粒剂(先正达(苏州)作物保护有限公司提供，批号SJ14BWG004)。空白对照：水。

[0100] 2实验方法

[0101] 实验共设7个处理：将实验药剂用水稀释后，分别按制剂量750g/hm2、1125g/hm2和1500g/hm2喷雾用药；将对照药剂1(50％啶酰菌胺水分散粒剂)用水稀释后，按制剂量720g/hm2喷雾用药；将对照药剂2(200亿CFU/mL枯草芽孢杆菌BAB-1干粉)用水稀释后，按3600g/hm2喷雾用药；将对照药剂3(浓度400g/L嘧霉胺悬浮剂)用水稀释后，按制剂量1500mL/hm2喷雾用药；将对照药剂4(质量浓度为10％苯醚甲环唑水分散粒剂)用水稀释后，按制剂量
2
600g/hm喷雾用药；以清水为空白对照。试验小区采用随机区组排列，每处理设4次重复，小区面积13m2。于3月1日施第一次药，3月10日和3月17日分别施第二次和第三次药，试验期间共用药3次。采用“卫士”牌背负式手动喷雾器喷雾，喷雾均匀周到，用水量900L/hm2。

[0102] 施药前灰霉病零星发生，基数视为零，末次用药后7d调查发病情况。计算病情指数及防治效果。每小区随机取5点调查，每点调查2株，每株调查全部果实，记录病果个数。病果分级标准为：

[0103] 0级：无病斑；

[0104] 1级：残留花瓣发病或柱头发病；

[0105] 3级：萼片腐烂或柱头发病蔓延到果脐部；

[0106] 5级：果脐部有浸润斑但无霉层；

[0107] 7级：果脐部有霉层但未扩展到其它部位；

[0108] 9级：果脐部霉层扩展到其它部位。

[0109] 病果率(％)＝(病果数/调查总果数)×100

[0110] 病情指数＝∑[(病果数×相对病级数)/(调查总果数×最高级数)]×100

[0111] 防治效果(％)＝[(对照病情指数-处理病情指数)/对照病情指数]×100

[0112] 3实验结果见表3。

[0113] 实验例4

[0114] 含有枯草芽孢杆菌BAB-1和啶酰菌胺的复配杀菌剂对番茄叶霉病的田间防效[0115] 实验地点河北省保定市徐水县高林村镇白塔铺村。实验地前茬为黄瓜，番茄种植15年以上，叶霉病历年发生。供试番茄品种为凯撒。试验大棚外覆盖草苫保温，白天卷起。当棚内温度过低时，采用炉火升温。2014年1月18日定植，每亩定植3000株番茄幼苗。

[0116] 1实验材料

[0117] 同实验例3。

[0118] 2实验方法

[0119] 实验药剂、对照药剂及用药量同实验例3。

[0120] 于3月4日施第一次药，3月14日和3月21日分别施第二次和第三次药，试验期间共用药3次。采用“卫士”牌背负式手动喷雾器喷雾，喷雾均匀周到，用水量900L/hm2。

[0121] 施药前叶霉病零星发生基数视为零，末次用药后7d调查发病情况。计算病情指数及防治效果。每小区随机取3点调查，每点调查5株，每株分上、中、下部分各取一张有代表性的复叶，以复叶上的每张小叶片病斑面积占整个叶片面积百分率分级，分级方法为：

[0122] 0级：无病斑；

[0123] 1级：病斑面积占整个叶片面积的5％以下；

[0124] 3级：病斑面积占整个叶片面积的5％～10％；

[0125] 5级：病斑面积占整个叶片面积的11％～20％；

[0126] 7级：病斑面积占整个叶片面积的21％～50％；

[0127] 9级：病斑面积占整个叶片面积的51％以上。

[0128] 病情指数＝∑[(病果数×相对病级数)/(调查总果数×最高级数)]×100

[0129] 防治效果(％)＝[(对照病情指数-处理病情指数)/对照病情指数]×100

[0130] 3实验结果见表3。

[0131] 如表3所示，田间实验结果表明：对照药剂1(单剂50％啶酰菌胺水分散粒剂，亩用量48g，稀释1250倍)对番茄灰霉病和叶霉病的防治效果分别为83.6％和82.3％。对照药剂2(单剂200亿枯草芽孢杆菌BAB-1干粉，亩用量240g，稀释250倍)对番茄灰霉病和叶霉病的防治效果分别76.7％和77.8％；实验药品(实施例8含有枯草芽孢杆菌BAB-1和啶酰菌胺的复配杀菌剂，亩用量100g，稀释600倍)对番茄灰霉病和叶霉病的防效最好，分别为88.6％和87.5％；对照药剂3(400g/L嘧霉胺悬浮剂，亩用量100mL，稀释600倍)对番茄灰霉病的防治效果为62.3％。

[0132] 实验药品(实施例8含有枯草芽孢杆菌BAB-1和啶酰菌胺的复配杀菌剂)在亩用量100克(稀释600倍)时，其中化学杀菌剂啶酰菌胺的用量约为其单剂啶酰菌胺的83.3％；所述复配杀菌剂中枯草芽孢杆菌BAB-1的用量约为其单剂枯草芽孢杆菌BAB-1的16.7％，但对灰霉病的防治效果与其单剂啶酰菌胺相当，但对叶霉病的防治效果优于其单剂啶酰菌胺。

[0133] 实验药品(实施例8含有枯草芽孢杆菌BAB-1和啶酰菌胺的复配杀菌剂)在亩用量50克(稀释1200倍)时，其中化学杀菌剂啶酰菌胺的用量约为其单剂啶酰菌胺的41.7％；所述复配杀菌剂中枯草芽孢杆菌BAB-1的用量约为其单剂枯草芽孢杆菌BAB-1的8.3％，所述复配杀菌剂对番茄灰霉病和叶霉病的防效分别为78.7％和78.0％，与对照药剂1、对照药剂
1两个单剂对灰霉病和叶霉病的防治效果相当；对灰霉病的防治效果显著高于常规药剂
400g/L嘧霉胺悬浮剂(亩用量100mL，600倍稀释)；对叶霉病的防治效果与常规药剂10％苯醚甲环唑水分散粒剂(亩用量40克，1500倍稀释)没有显著差异。

[0134] 表3 对番茄灰霉病和叶霉病的田间防治效果

[0135]

[0136]

[0137] 以上各实施例不是对本发明的具体限制，只要根据权利要求限定的范围，在本专利的启示下，结合本领域的基本常识，将所述复配菌剂用于番茄等作物的病害防治中，都属于本发明的保护范围。

[0138] 虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

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含有枯草芽孢杆菌BAB-1和啶酰菌胺的复配杀菌剂及其应用

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