伊犁贝母提取物中分离的单体化合物及其制备方法和应用
阅读：730发布：2020-05-08
专利汇可以提供伊犁贝母提取物中分离的单体化合物及其制备方法和应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及伊 犁 贝母分离纯化技术领域，是一种伊犁贝母提取物中分离的 单体 化合物及其制备方法和应用，本发明首次公开了伊犁贝母提取物中分离的单体化合物7-(4-羟基-3-甲 氧 基苯基)-9,10-酸酐-8-丙酸、4-((E)-3-羟基丁-1-烯基)-3,3,4-三甲基环己醇、2-(四氢-5-(2-羟基苯基)-2H-吡喃-3-基) 苯酚 和17β-塞瓦宁-6-氧代-5α,20β-二醇伊贝宁，该单体化合物对HepG-2细胞和HeLa细胞均具有较强的抑制作用，能够作为制备 预防 肿瘤 药物、抗肿瘤药物和防治肿瘤保健品中的应用。，下面是伊犁贝母提取物中分离的单体化合物及其制备方法和应用专利的具体信息内容。
1.一种伊犁贝母提取物中分离的单体化合物，其特征在于包括7-(4-羟基-3-甲氧基苯
基)-9,10-酸酐-8-丙酸、4-((E)-3-羟基丁-1-烯基)-3,3,4-三甲基环己醇、2-(四氢-5-(2-羟基苯基)-2H-吡喃-3-基)苯酚和17β-塞瓦宁-6-氧代-5α,20β-二醇伊贝宁，其中，7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-9,10-酸酐-8-丙酸的化学结构式为 4-
((E)-3-羟基丁-1-烯基)-3,3,4-三甲基环己醇的化学结构式为 2-(四
氢-5-(2-羟基苯基)-2H-吡喃-3-基)苯酚的化学结构式为 17β-塞瓦宁-
6-氧代-5α,20β-二醇伊贝宁的化学结构式为
2.根据权利要求1所述的伊犁贝母提取物中分离的单体化合物，其特征在于按下述方
法得到：第一步，将伊犁贝母粉碎并加入甲醇，在室温下浸泡3小时至4小时后，在50℃至60℃条件下加热回流提取3次，每次1小时至3小时，合并每次回流提取液并减压回收、浓缩，得到伊犁贝母总浸膏；第二步，将伊犁贝母总浸膏用2％盐酸调至pH值为3.5，捏溶并过滤，滤得酸液，将酸液用石油醚萃取脱脂,再用氨水调至pH值为10后，用氯仿萃取，将萃取液浓缩后得到氯仿部位浸膏；第三步，取氯仿部位浸膏用硅胶柱色谱梯度洗脱分离后得到8个馏
分，其中，硅胶柱色谱梯度洗脱液包括石油醚、丙酮和三乙胺，石油醚、丙酮和三乙胺的体积比依次为20：1：0.1、15：1：0.1、10：1：0.1、5：1：0.1、1：1：0.1、1：2：0.1、1：3：0.1和1：5：0.1；
第四步，将第3个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，并收集洗脱物，在第16.9分钟处，得到7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-9,10-酸酐-8-丙酸；第五步，将第4个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，并收集洗脱物，在第21.9分钟处，得到4-((E)-3-羟基丁-1-烯
基)-3,3,4-三甲基环己醇；第六步，将第5个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，并收集洗脱物，在第35.7分钟处，得到2-(四氢-5-(2-羟基苯基)-2H-吡喃-3-基)苯酚；第七
步，将第6个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，并收集洗脱物，在第12.7分钟处，得到17β-塞瓦宁-6-氧代-5α,20β-二醇伊贝宁。
3.根据权利要求1或2所述的伊犁贝母提取物中分离的单体化合物，其特征在于第一步
中，每1g伊犁贝母加入8ml至10ml甲醇。
4.根据权利要求1或2或3所述的伊犁贝母提取物中分离的单体化合物，其特征在于第
四步、第五步、第六步和第七步中，高效液相色谱梯度洗脱的洗脱液均为甲醇和水的混合
液，混合物中甲醇和水的体积比依次为60：40、70：30、85：15和80：20。
5.一种伊犁贝母提取物中分离的单体化合物的制备方法，其特征在于按下述方法进
行：第一步，将伊犁贝母粉碎并加入甲醇，在室温下浸泡3小时至4小时后，在50℃至60℃条件下加热回流提取3次，每次1小时至3小时，合并每次回流提取液并减压回收、浓缩，得到伊犁贝母总浸膏；第二步，将伊犁贝母总浸膏用2％盐酸调至pH值为3.5，捏溶并过滤，滤得酸液，将酸液用石油醚萃取脱脂,再用氨水调至pH值为10后，用氯仿萃取，将萃取液浓缩后得到氯仿部位浸膏；第三步，取氯仿部位浸膏用硅胶柱色谱梯度洗脱分离后得到8个馏分，其中，硅胶柱色谱梯度洗脱液包括石油醚、丙酮和三乙胺，石油醚、丙酮和三乙胺的体积比依次为20：1：0.1、15：1：0.1、10：1：0.1、5：1：0.1、1：1：0.1、1：2：0.1、1：3：0.1和1：5：0.1；第四步，将第3个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，并收集洗脱物，在第16.9分钟处，得到7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-9,10-酸酐-8-丙酸；第五步，将第4个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，并收集洗脱物，在第21.9分钟处，得到4-((E)-3-羟基丁-1-烯基)-3,3,
4-三甲基环己醇；第六步，将第5个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，并收集洗脱物，在第35.7分钟处，得到2-(四氢-5-(2-羟基苯基)-2H-吡喃-3-基)苯酚；第七步，将第6个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，并收集洗脱物，在第12.7分钟处，得到17β-塞瓦宁-6-氧代-5α,20β-二醇伊贝宁。
6.根据权利要求5所述的伊犁贝母提取物中分离的单体化合物，其特征在于第一步中，
每1g伊犁贝母加入8ml至10ml甲醇。
7.根据权利要求5或6所述的伊犁贝母提取物中分离的单体化合物，其特征在于第四
步、第五步、第六步和第七步中，高效液相色谱梯度洗脱的洗脱液均为甲醇和水的混合液，混合物中甲醇和水的体积比依次为60：40、70：30、85：15和80：20。
8.一种伊犁贝母提取物中分离的单体化合物作为制备预防肿瘤药物中的应用。
9.一种伊犁贝母提取物中分离的单体化合物作为制备抗肿瘤药物中的应用。
10.一种伊犁贝母提取物中分离的单体化合物作为制备防治肿瘤保健品中的应用。
伊犁贝母提取物中分离的单体化合物及其制备方法和应用
技术领域
[0001] 本发明涉及伊犁贝母分离纯化技术领域，是一种伊犁贝母提取物中分离的单体化合物及其制备方法和应用。
背景技术
[0002] 伊犁贝母Fritillaria pallidiflora Schrenk为百合科Liliaceae贝母属Fritillaria植物，主要分布于新疆伊犁河流域，主产于新疆西北部的伊宁、昭苏、绥定、霍城、尼勒克、博乐等地。其鳞茎入药，味苦、甘、微凉，归肺、心经，临床上具有镇咳、祛痰、平喘之功效，其镇静、耐缺氧作用对于哮喘病人非常有利，其消炎抗菌作用能协同治疗呼吸道感染。伊犁贝母是新疆的特产药物，也是传统维药之一，且产量较高，和同类贝母相比较具有较高的生物碱含量，且抗病力强、药材价格低廉，特别是其镇咳祛痰和抗炎抗菌等生理活性比川贝母略强，由于近些年来川贝母资源的日渐枯竭，人们对其替代性品种的研究正不断
的进行，而伊犁贝母的人工培育已经实现，能够大面积的推广种植，因此伊犁贝母是一种很好的川贝母替代性物种，近年来备受人们的关注。
的进行，而伊犁贝母的人工培育已经实现，能够大面积的推广种植，因此伊犁贝母是一种很好的川贝母替代性物种，近年来备受人们的关注。
[0003] 伊犁贝母的药效主要来源于其中的甾体生物碱类化合物，但其非生物碱类化合物的报道较为少见，所以，开发和利用伊犁贝母的非生物碱单体化合物，进一步挖掘其潜在的药用价值，并对其单体化合物的结构和理化性质进行确定和表征，对于开发利用伊犁贝母
具有重要意义。
具有重要意义。
发明内容
[0004] 本发明提供了一种伊犁贝母提取物中分离的单体化合物及其制备方法和应用，本发明首次公开了伊犁贝母提取物中分离的单体化合物7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-9,10-酸
酐-8-丙酸、4-((E)-3-羟基丁-1-烯基)-3,3,4-三甲基环己醇、2-(四氢-5-(2-羟基苯基)-
2H-吡喃-3-基)苯酚和17β-塞瓦宁-6-氧代-5α,20β-二醇伊贝宁，该单体化合物对HepG-2细胞和HeLa细胞均具有较强的抑制作用，能够作为制备预防肿瘤药物、抗肿瘤药物和防治肿
瘤保健品中的应用。
酐-8-丙酸、4-((E)-3-羟基丁-1-烯基)-3,3,4-三甲基环己醇、2-(四氢-5-(2-羟基苯基)-
2H-吡喃-3-基)苯酚和17β-塞瓦宁-6-氧代-5α,20β-二醇伊贝宁，该单体化合物对HepG-2细胞和HeLa细胞均具有较强的抑制作用，能够作为制备预防肿瘤药物、抗肿瘤药物和防治肿
瘤保健品中的应用。
[0005] 本发明的技术方案之一是通过以下措施来实现的：一种伊犁贝母提取物中分离的单体化合物，包括7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-9,10-酸酐-8-丙酸、4-((E)-3-羟基丁-1-烯
基)-3,3,4-三甲基环己醇、2-(四氢-5-(2-羟基苯基)-2H-吡喃-3-基)苯酚和17β-塞瓦宁-
6-氧代-5α,20β-二醇伊贝宁，其中，7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-9,10-酸酐-8-丙酸的化学结构式为 4-((E)-3-羟基丁-1-烯基)-3,3,4-三甲基环己醇的
化学结构式为 2-(四氢-5-(2-羟基苯基)-2H-吡喃-3-基)苯酚的化学
结构式为 17β-塞瓦宁-6-氧代-5α,20β-二醇伊贝宁的化学结构式为
基)-3,3,4-三甲基环己醇、2-(四氢-5-(2-羟基苯基)-2H-吡喃-3-基)苯酚和17β-塞瓦宁-
6-氧代-5α,20β-二醇伊贝宁，其中，7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-9,10-酸酐-8-丙酸的化学结构式为 4-((E)-3-羟基丁-1-烯基)-3,3,4-三甲基环己醇的
化学结构式为 2-(四氢-5-(2-羟基苯基)-2H-吡喃-3-基)苯酚的化学
结构式为 17β-塞瓦宁-6-氧代-5α,20β-二醇伊贝宁的化学结构式为
[0006] 下面是对上述发明技术方案之一的进一步优化或/和改进：
[0007] 上述伊犁贝母提取物中分离的单体化合物，按下述方法得到：第一步，将伊犁贝母粉碎并加入甲醇，在室温下浸泡3小时至4小时后，在50℃至60℃条件下加热回流提取3次，每次1小时至3小时，合并每次回流提取液并减压回收、浓缩，得到伊犁贝母总浸膏；第二步，将伊犁贝母总浸膏用2％盐酸调至pH值为3.5，捏溶并过滤，滤得酸液，将酸液用石油醚萃取脱脂,再用氨水调至pH值为10后，用氯仿萃取，将萃取液浓缩后得到氯仿部位浸膏；第三步，取氯仿部位浸膏用硅胶柱色谱梯度洗脱分离后得到8个馏分，其中，硅胶柱色谱梯度洗脱液包括石油醚、丙酮和三乙胺，石油醚、丙酮和三乙胺的体积比依次为20：1：0.1、15：1：0.1、10：1：0.1、5：1：0.1、1：1：0.1、1：2：0.1、1：3：0.1和1：5：0.1；第四步，将第3个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，并收集洗脱物，在第16.9分钟处，得到7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-9,10-酸酐-8-丙酸；第五步，将第4个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，并收集洗脱物，在第21.9分钟处，得到4-((E)-3-羟基丁-1-烯基)-3,3,4-三甲基环己醇；第六
步，将第5个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，并收集洗脱物，在第35.7分钟处，得到2-(四氢-5-(2-羟基苯基)-2H-吡喃-3-基)苯酚；第七步，将第6个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，并收集洗脱物，在第12.7分钟处，得到17β-塞瓦宁-6-氧代-5α,20β-二醇伊贝宁。
步，将第5个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，并收集洗脱物，在第35.7分钟处，得到2-(四氢-5-(2-羟基苯基)-2H-吡喃-3-基)苯酚；第七步，将第6个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，并收集洗脱物，在第12.7分钟处，得到17β-塞瓦宁-6-氧代-5α,20β-二醇伊贝宁。
[0008] 上述第一步中，每1g伊犁贝母加入8ml至10ml甲醇。
[0009] 上述第四步、第五步、第六步和第七步中，高效液相色谱梯度洗脱的洗脱液均为甲醇和水的混合液，混合物中甲醇和水的体积比依次为60：40、70：30、85：15和80：20。
[0010] 本发明的技术方案之二是通过以下措施来实现的：一种伊犁贝母提取物中分离的单体化合物的制备方法，按下述方法进行：第一步，将伊犁贝母粉碎并加入甲醇，在室温下浸泡3小时至4小时后，在50℃至60℃条件下加热回流提取3次，每次1小时至3小时，合并每次回流提取液并减压回收、浓缩，得到伊犁贝母总浸膏；第二步，将伊犁贝母总浸膏用2％盐酸调至pH值为3.5，捏溶并过滤，滤得酸液，将酸液用石油醚萃取脱脂,再用氨水调至pH值为
10后，用氯仿萃取，将萃取液浓缩后得到氯仿部位浸膏；第三步，取氯仿部位浸膏用硅胶柱色谱梯度洗脱分离后得到8个馏分，其中，硅胶柱色谱梯度洗脱液包括石油醚、丙酮和三乙胺，石油醚、丙酮和三乙胺的体积比依次为20：1：0.1、15：1：0.1、10：1：0.1、5：1：0.1、1：1：
0.1、1：2：0.1、1：3：0.1和1：5：0.1；第四步，将第3个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，并收集洗脱物，在第16.9分钟处，得到7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-9,10-酸酐-8-丙酸；
第五步，将第4个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，并收集洗脱物，在第21.9分钟处，得到4-((E)-3-羟基丁-1-烯基)-3,3,4-三甲基环己醇；第六步，将第5个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，并收集洗脱物，在第35.7分钟处，得到2-(四氢-5-(2-羟基苯基)-2H-吡喃-3-基)苯酚；第七步，将第6个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，并收集洗脱物，在第12.7分钟处，得到17β-塞瓦宁-6-氧代-5α,20β-二醇伊贝宁。
10后，用氯仿萃取，将萃取液浓缩后得到氯仿部位浸膏；第三步，取氯仿部位浸膏用硅胶柱色谱梯度洗脱分离后得到8个馏分，其中，硅胶柱色谱梯度洗脱液包括石油醚、丙酮和三乙胺，石油醚、丙酮和三乙胺的体积比依次为20：1：0.1、15：1：0.1、10：1：0.1、5：1：0.1、1：1：
0.1、1：2：0.1、1：3：0.1和1：5：0.1；第四步，将第3个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，并收集洗脱物，在第16.9分钟处，得到7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-9,10-酸酐-8-丙酸；
第五步，将第4个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，并收集洗脱物，在第21.9分钟处，得到4-((E)-3-羟基丁-1-烯基)-3,3,4-三甲基环己醇；第六步，将第5个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，并收集洗脱物，在第35.7分钟处，得到2-(四氢-5-(2-羟基苯基)-2H-吡喃-3-基)苯酚；第七步，将第6个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，并收集洗脱物，在第12.7分钟处，得到17β-塞瓦宁-6-氧代-5α,20β-二醇伊贝宁。
[0011] 下面是对上述发明技术方案之二的进一步优化或/和改进：
[0012] 上述第一步中，每1g伊犁贝母加入8ml至10ml甲醇。
[0013] 上述第四步、第五步、第六步和第七步中，高效液相色谱梯度洗脱的洗脱液均为甲醇和水的混合液，混合物中甲醇和水的体积比依次为60：40、70：30、85：15和80：20。
[0014] 本发明的技术方案之三是通过以下措施来实现的：一种伊犁贝母提取物中分离的单体化合物作为制备预防肿瘤药物中的应用。
[0015] 本发明的技术方案之四是通过以下措施来实现的：一种伊犁贝母提取物中分离的单体化合物作为制备抗肿瘤药物中的应用。
[0016] 本发明的技术方案之五是通过以下措施来实现的：一种伊犁贝母提取物中分离的单体化合物作为制备防治肿瘤保健品中的应用。
[0017] 本发明首次公开了伊犁贝母提取物中分离的单体化合物7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-9,10-酸酐-8-丙酸、4-((E)-3-羟基丁-1-烯基)-3,3,4-三甲基环己醇、2-(四氢-5-(2-羟基苯基)-2H-吡喃-3-基)苯酚和17β-塞瓦宁-6-氧代-5α,20β-二醇伊贝宁，该单体化合物对HepG-2细胞和HeLa细胞均具有较强的抑制作用，能够作为制备预防肿瘤药物、抗肿瘤药
物和防治肿瘤保健品中的应用。
附图说明
物和防治肿瘤保健品中的应用。
附图说明
[0018] 附图1为伊犁贝母提取物中分离的单体化合物7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-9,10-酸酐-8-丙酸的1H-NMR谱图。
[0019] 附图2为伊犁贝母提取物中分离的单体化合物4-((E)-3-羟基丁-1-烯基)-3,3,4-三甲基环己醇的1H-NMR谱图。
[0020] 附图3为伊犁贝母提取物中分离的单体化合物2-(四氢-5-(2-羟基苯基)-2H-吡喃-3-基)苯酚的1H-NMR谱图。
[0021] 附图4为伊犁贝母提取物中分离的单体化合物17β-塞瓦宁-6-氧代-5α,20β-二醇伊贝宁的1H-NMR谱图。
[0022] 附图5为伊犁贝母提取物中分离的单体化合物7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-9,10-酸酐-8-丙酸的13C-APT谱图。
[0023] 附图6为伊犁贝母提取物中分离的单体化合物4-((E)-3-羟基丁-1-烯基)-3,3,4-三甲基环己醇的13C-APT谱图。
[0024] 附图7为伊犁贝母提取物中分离的单体化合物2-(四氢-5-(2-羟基苯基)-2H-吡喃-3-基)苯酚的13C-APT谱图。
[0025] 附图8为伊犁贝母提取物中分离的单体化合物17β-塞瓦宁-6-氧代-5α,20β-二醇伊贝宁的13C-APT谱图。
具体实施方式
[0026] 本发明不受下述实施例的限制，可根据本发明的技术方案与实际情况来确定具体的实施方式。本发明中所提到各种化学试剂和化学用品如无特殊说明，均为现有技术中公
知公用的化学试剂和化学用品；本发明中的百分数如没有特殊说明，均为质量百分数；本发明中的溶液若没有特殊说明，均为溶剂为水的水溶液，例如，盐酸溶液即为盐酸水溶液；本发明中的常温、室温一般指15℃到25℃的温度，一般定义为25℃。
知公用的化学试剂和化学用品；本发明中的百分数如没有特殊说明，均为质量百分数；本发明中的溶液若没有特殊说明，均为溶剂为水的水溶液，例如，盐酸溶液即为盐酸水溶液；本发明中的常温、室温一般指15℃到25℃的温度，一般定义为25℃。
[0027] 下面结合实施例对本发明作进一步描述：
[0028] 实施例1：该伊犁贝母提取物中分离的单体化合物，包括7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-9,10-酸酐-8-丙酸、4-((E)-3-羟基丁-1-烯基)-3,3,4-三甲基环己醇、2-(四氢-5-(2-羟基苯基)-2H-吡喃-3-基)苯酚和17β-塞瓦宁-6-氧代-5α,20β-二醇伊贝宁，其中，7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-9,10-酸酐-8-丙酸的化学结构式为
[0029] 4-((E)-3-羟基丁-1-烯基)-3,3,4-三甲基环己醇的化学结构式为 2-(四氢-5-(2-羟基苯基)-2H-吡喃-3-基)苯酚的化学
结构式为 17β-塞瓦宁-6-氧代-5α,20β-二醇伊贝宁的化学结构式为
结构式为 17β-塞瓦宁-6-氧代-5α,20β-二醇伊贝宁的化学结构式为
[0030] 实施例2：该伊犁贝母提取物中分离的单体化合物，按下述方法得到：第一步，将伊犁贝母粉碎并加入甲醇，在室温下浸泡3小时至4小时后，在50℃至60℃条件下加热回流提取3次，每次1小时至3小时，合并每次回流提取液并减压回收、浓缩，得到伊犁贝母总浸膏；
第二步，将伊犁贝母总浸膏用2％盐酸调至pH值为3.5，捏溶并过滤，滤得酸液，将酸液用石油醚萃取脱脂,再用氨水调至pH值为10后，用氯仿萃取，将萃取液浓缩后得到氯仿部位浸
膏；第三步，取氯仿部位浸膏用硅胶柱色谱梯度洗脱分离后得到8个馏分，其中，硅胶柱色谱梯度洗脱液包括石油醚、丙酮和三乙胺，石油醚、丙酮和三乙胺的体积比依次为20：1：0.1、
15：1：0.1、10：1：0.1、5：1：0.1、1：1：0.1、1：2：0.1、1：3：0.1和1：5：0.1；第四步，将第3个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，并收集洗脱物，在第16.9分钟处，得到7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-9,10-酸酐-8-丙酸；第五步，将第4个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，并收集洗脱物，在第21.9分钟处，得到4-((E)-3-羟基丁-1-烯基)-3,3,4-三甲基环己
醇；第六步，将第5个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，并收集洗脱物，在第35.7分钟处，得到2-(四氢-5-(2-羟基苯基)-2H-吡喃-3-基)苯酚；第七步，将第6个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，并收集洗脱物，在第12.7分钟处，得到17β-塞瓦宁-6-氧代-5α,20β-二醇伊贝宁。
第二步，将伊犁贝母总浸膏用2％盐酸调至pH值为3.5，捏溶并过滤，滤得酸液，将酸液用石油醚萃取脱脂,再用氨水调至pH值为10后，用氯仿萃取，将萃取液浓缩后得到氯仿部位浸
膏；第三步，取氯仿部位浸膏用硅胶柱色谱梯度洗脱分离后得到8个馏分，其中，硅胶柱色谱梯度洗脱液包括石油醚、丙酮和三乙胺，石油醚、丙酮和三乙胺的体积比依次为20：1：0.1、
15：1：0.1、10：1：0.1、5：1：0.1、1：1：0.1、1：2：0.1、1：3：0.1和1：5：0.1；第四步，将第3个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，并收集洗脱物，在第16.9分钟处，得到7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-9,10-酸酐-8-丙酸；第五步，将第4个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，并收集洗脱物，在第21.9分钟处，得到4-((E)-3-羟基丁-1-烯基)-3,3,4-三甲基环己
醇；第六步，将第5个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，并收集洗脱物，在第35.7分钟处，得到2-(四氢-5-(2-羟基苯基)-2H-吡喃-3-基)苯酚；第七步，将第6个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，并收集洗脱物，在第12.7分钟处，得到17β-塞瓦宁-6-氧代-5α,20β-二醇伊贝宁。
[0031] 实施例3：作为上述实施例的优化，第一步中，每1g伊犁贝母加入8ml至10ml甲醇。
[0032] 实施例4：作为上述实施例的优化，第四步、第五步、第六步和第七步中，高效液相色谱梯度洗脱的洗脱液均为甲醇和水的混合液，混合物中甲醇和水的体积比依次为60：40、70：30、85：15和80：20。
[0033] 实施例5：该伊犁贝母提取物中分离的单体化合物，按下述方法得到：第一步，按照每1g伊犁贝母加入8ml至10ml甲醇，将伊犁贝母粉碎并加入甲醇，在室温下浸泡3小时至4小时后，在50℃至60℃条件下加热回流提取3次，每次1小时至3小时，合并每次回流提取液并减压回收、浓缩，得到伊犁贝母总浸膏；第二步，将伊犁贝母总浸膏用2％盐酸调至pH值为3.5，捏溶并过滤，滤得酸液，将酸液用石油醚萃取脱脂,再用氨水调至pH值为10后，用氯仿萃取，将萃取液浓缩后得到氯仿部位浸膏；第三步，取氯仿部位浸膏用硅胶柱色谱梯度洗脱分离后得到8个馏分，其中，硅胶柱色谱梯度洗脱液包括石油醚、丙酮和三乙胺，石油醚、丙酮和三乙胺的体积比依次为20：1：0.1、15：1：0.1、10：1：0.1、5：1：0.1、1：1：0.1、1：2：0.1、1：
3：0.1和1：5：0.1；第四步，将第3个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，其中，高效液相色谱梯度洗脱的洗脱液为甲醇和水的混合液，混合液中甲醇和水的体积比为60：40，并收集洗脱物，在第16.9分钟处，得到7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-9,10-酸酐-8-丙酸；第五步，将第4个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，其中，高效液相色谱梯度洗脱的洗脱液为甲醇和水的混合液，混合液中甲醇和水的体积比为70：30，并收集洗脱物，在第21.9分钟处，得到4-((E)-3-羟基丁-1-烯基)-3,3,4-三甲基环己醇；第六步，将第5个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，其中，高效液相色谱梯度洗脱的洗脱液为甲醇和水的混合液，混合液中甲醇和水的体积比为85：15，并收集洗脱物，在第35.7分钟处，得到2-(四氢-5-(2-羟基苯基)-2H-吡喃-3-基)苯酚；第七步，将第6个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分
离，其中，高效液相色谱梯度洗脱的洗脱液为甲醇和水的混合液，混合液中甲醇和水的体积比为80：20，并收集洗脱物，在第12.7分钟处，得到17β-塞瓦宁-6-氧代-5α,20β-二醇伊贝宁。
3：0.1和1：5：0.1；第四步，将第3个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，其中，高效液相色谱梯度洗脱的洗脱液为甲醇和水的混合液，混合液中甲醇和水的体积比为60：40，并收集洗脱物，在第16.9分钟处，得到7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-9,10-酸酐-8-丙酸；第五步，将第4个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，其中，高效液相色谱梯度洗脱的洗脱液为甲醇和水的混合液，混合液中甲醇和水的体积比为70：30，并收集洗脱物，在第21.9分钟处，得到4-((E)-3-羟基丁-1-烯基)-3,3,4-三甲基环己醇；第六步，将第5个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，其中，高效液相色谱梯度洗脱的洗脱液为甲醇和水的混合液，混合液中甲醇和水的体积比为85：15，并收集洗脱物，在第35.7分钟处，得到2-(四氢-5-(2-羟基苯基)-2H-吡喃-3-基)苯酚；第七步，将第6个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分
离，其中，高效液相色谱梯度洗脱的洗脱液为甲醇和水的混合液，混合液中甲醇和水的体积比为80：20，并收集洗脱物，在第12.7分钟处，得到17β-塞瓦宁-6-氧代-5α,20β-二醇伊贝宁。
[0034] 实施例6：该伊犁贝母提取物中分离的单体化合物，按下述方法得到：第一步，按照每1g伊犁贝母加入10ml甲醇，将伊犁贝母粉碎并加入甲醇，在室温下浸泡4小时后，在60℃条件下加热回流提取3次，每次3小时，合并每次回流提取液并减压回收、浓缩，得到伊犁贝母总浸膏；第二步，将伊犁贝母总浸膏用2％盐酸调至pH值为3.5，捏溶并过滤，滤得酸液，将酸液用石油醚萃取脱脂,再用氨水调至pH值为10后，用氯仿萃取，将萃取液浓缩后得到氯仿部位浸膏；第三步，取氯仿部位浸膏用硅胶柱色谱梯度洗脱分离后得到8个馏分，其中，硅胶柱色谱梯度洗脱液包括石油醚、丙酮和三乙胺，石油醚、丙酮和三乙胺的体积比依次为20：1：0.1、15：1：0.1、10：1：0.1、5：1：0.1、1：1：0.1、1：2：0.1、1：3：0.1和1：5：0.1；第四步，将第3个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，其中，高效液相色谱梯度洗脱的洗脱液为甲
醇和水的混合液，混合液中甲醇和水的体积比为60：40，并收集洗脱物，在第16.9分钟处，得到7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-9,10-酸酐-8-丙酸；第五步，将第4个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，其中，高效液相色谱梯度洗脱的洗脱液为甲醇和水的混合液，混合液中甲醇和水的体积比为70：30，并收集洗脱物，在第21.9分钟处，得到4-((E)-3-羟基丁-1-烯基)-3,3,4-三甲基环己醇；第六步，将第5个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，其中，高效液相色谱梯度洗脱的洗脱液为甲醇和水的混合液，混合液中甲醇和水的体积比为
85：15，并收集洗脱物，在第35.7分钟处，得到2-(四氢-5-(2-羟基苯基)-2H-吡喃-3-基)苯酚；第七步，将第6个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，其中，高效液相色谱梯度洗脱的洗脱液为甲醇和水的混合液，混合液中甲醇和水的体积比为80：20，并收集洗脱物，在第12.7分钟处，得到17β-塞瓦宁-6-氧代-5α,20β-二醇伊贝宁。
醇和水的混合液，混合液中甲醇和水的体积比为60：40，并收集洗脱物，在第16.9分钟处，得到7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-9,10-酸酐-8-丙酸；第五步，将第4个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，其中，高效液相色谱梯度洗脱的洗脱液为甲醇和水的混合液，混合液中甲醇和水的体积比为70：30，并收集洗脱物，在第21.9分钟处，得到4-((E)-3-羟基丁-1-烯基)-3,3,4-三甲基环己醇；第六步，将第5个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，其中，高效液相色谱梯度洗脱的洗脱液为甲醇和水的混合液，混合液中甲醇和水的体积比为
85：15，并收集洗脱物，在第35.7分钟处，得到2-(四氢-5-(2-羟基苯基)-2H-吡喃-3-基)苯酚；第七步，将第6个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，其中，高效液相色谱梯度洗脱的洗脱液为甲醇和水的混合液，混合液中甲醇和水的体积比为80：20，并收集洗脱物，在第12.7分钟处，得到17β-塞瓦宁-6-氧代-5α,20β-二醇伊贝宁。
[0035] 实施例7：该伊犁贝母提取物中分离的单体化合物，按下述方法得到：第一步，按照每1g伊犁贝母加入8ml甲醇，将伊犁贝母粉碎并加入甲醇，在室温下浸泡3小时后，在50℃条件下加热回流提取3次，每次1小时，合并每次回流提取液并减压回收、浓缩，得到伊犁贝母总浸膏；第二步，将伊犁贝母总浸膏用2％盐酸调至pH值为3.5，捏溶并过滤，滤得酸液，将酸液用石油醚萃取脱脂,再用氨水调至pH值为10后，用氯仿萃取，将萃取液浓缩后得到氯仿部位浸膏；第三步，取氯仿部位浸膏用硅胶柱色谱梯度洗脱分离后得到8个馏分，其中，硅胶柱色谱梯度洗脱液包括石油醚、丙酮和三乙胺，石油醚、丙酮和三乙胺的体积比依次为20：1：0.1、15：1：0.1、10：1：0.1、5：1：0.1、1：1：0.1、1：2：0.1、1：3：0.1和1：5：0.1；第四步，将第3个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，其中，高效液相色谱梯度洗脱的洗脱液为甲醇
和水的混合液，混合液中甲醇和水的体积比为60：40，并收集洗脱物，在第16.9分钟处，得到
7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-9,10-酸酐-8-丙酸；第五步，将第4个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，其中，高效液相色谱梯度洗脱的洗脱液为甲醇和水的混合液，混合液中甲醇和水的体积比为70：30，并收集洗脱物，在第21.9分钟处，得到4-((E)-3-羟基丁-1-烯
基)-3,3,4-三甲基环己醇；第六步，将第5个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，其中，高效液相色谱梯度洗脱的洗脱液为甲醇和水的混合液，混合液中甲醇和水的体积比为
85：15，并收集洗脱物，在第35.7分钟处，得到2-(四氢-5-(2-羟基苯基)-2H-吡喃-3-基)苯酚；第七步，将第6个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，其中，高效液相色谱梯度洗脱的洗脱液为甲醇和水的混合液，混合液中甲醇和水的体积比为80：20，并收集洗脱物，在第12.7分钟处，得到17β-塞瓦宁-6-氧代-5α,20β-二醇伊贝宁。
和水的混合液，混合液中甲醇和水的体积比为60：40，并收集洗脱物，在第16.9分钟处，得到
7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-9,10-酸酐-8-丙酸；第五步，将第4个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，其中，高效液相色谱梯度洗脱的洗脱液为甲醇和水的混合液，混合液中甲醇和水的体积比为70：30，并收集洗脱物，在第21.9分钟处，得到4-((E)-3-羟基丁-1-烯
基)-3,3,4-三甲基环己醇；第六步，将第5个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，其中，高效液相色谱梯度洗脱的洗脱液为甲醇和水的混合液，混合液中甲醇和水的体积比为
85：15，并收集洗脱物，在第35.7分钟处，得到2-(四氢-5-(2-羟基苯基)-2H-吡喃-3-基)苯酚；第七步，将第6个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，其中，高效液相色谱梯度洗脱的洗脱液为甲醇和水的混合液，混合液中甲醇和水的体积比为80：20，并收集洗脱物，在第12.7分钟处，得到17β-塞瓦宁-6-氧代-5α,20β-二醇伊贝宁。
[0036] 实施例8：该伊犁贝母提取物中分离的单体化合物，按下述方法得到：第一步，按照每1g伊犁贝母加入9ml甲醇，将伊犁贝母粉碎并加入甲醇，在室温下浸泡3.5小时后，在55℃条件下加热回流提取3次，每次2小时，合并每次回流提取液并减压回收、浓缩，得到伊犁贝母总浸膏；第二步，将伊犁贝母总浸膏用2％盐酸调至pH值为3.5，捏溶并过滤，滤得酸液，将酸液用石油醚萃取脱脂,再用氨水调至pH值为10后，用氯仿萃取，将萃取液浓缩后得到氯仿部位浸膏；第三步，取氯仿部位浸膏用硅胶柱色谱梯度洗脱分离后得到8个馏分，其中，硅胶柱色谱梯度洗脱液包括石油醚、丙酮和三乙胺，石油醚、丙酮和三乙胺的体积比依次为20：1：0.1、15：1：0.1、10：1：0.1、5：1：0.1、1：1：0.1、1：2：0.1、1：3：0.1和1：5：0.1；第四步，将第3个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，其中，高效液相色谱梯度洗脱的洗脱液为甲
醇和水的混合液，混合液中甲醇和水的体积比为60：40，并收集洗脱物，在第16.9分钟处，得到7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-9,10-酸酐-8-丙酸；第五步，将第4个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，其中，高效液相色谱梯度洗脱的洗脱液为甲醇和水的混合液，混合液中甲醇和水的体积比为70：30，并收集洗脱物，在第21.9分钟处，得到4-((E)-3-羟基丁-1-烯基)-3,3,4-三甲基环己醇；第六步，将第5个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，其中，高效液相色谱梯度洗脱的洗脱液为甲醇和水的混合液，混合液中甲醇和水的体积比为
85：15，并收集洗脱物，在第35.7分钟处，得到2-(四氢-5-(2-羟基苯基)-2H-吡喃-3-基)苯酚；第七步，将第6个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，其中，高效液相色谱梯度洗脱的洗脱液为甲醇和水的混合液，混合液中甲醇和水的体积比为80：20，并收集洗脱物，在第12.7分钟处，得到17β-塞瓦宁-6-氧代-5α,20β-二醇伊贝宁。
醇和水的混合液，混合液中甲醇和水的体积比为60：40，并收集洗脱物，在第16.9分钟处，得到7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-9,10-酸酐-8-丙酸；第五步，将第4个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，其中，高效液相色谱梯度洗脱的洗脱液为甲醇和水的混合液，混合液中甲醇和水的体积比为70：30，并收集洗脱物，在第21.9分钟处，得到4-((E)-3-羟基丁-1-烯基)-3,3,4-三甲基环己醇；第六步，将第5个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，其中，高效液相色谱梯度洗脱的洗脱液为甲醇和水的混合液，混合液中甲醇和水的体积比为
85：15，并收集洗脱物，在第35.7分钟处，得到2-(四氢-5-(2-羟基苯基)-2H-吡喃-3-基)苯酚；第七步，将第6个馏分再经高效液相色谱梯度洗脱纯化分离，其中，高效液相色谱梯度洗脱的洗脱液为甲醇和水的混合液，混合液中甲醇和水的体积比为80：20，并收集洗脱物，在第12.7分钟处，得到17β-塞瓦宁-6-氧代-5α,20β-二醇伊贝宁。
[0037] 对本发明中实施例6制备的伊犁贝母提取物中分离的单体化合物7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-9,10-酸酐-8-丙酸、4-((E)-3-羟基丁-1-烯基)-3,3,4-三甲基环己醇、2-(四
氢-5-(2-羟基苯基)-2H-吡喃-3-基)苯酚和17β-塞瓦宁-6-氧代-5α,20β-二醇伊贝宁分别
1 13
进行核磁共振氢谱(H-NMR)和核磁共振碳谱( C-APT)分析。
氢-5-(2-羟基苯基)-2H-吡喃-3-基)苯酚和17β-塞瓦宁-6-氧代-5α,20β-二醇伊贝宁分别
1 13
进行核磁共振氢谱(H-NMR)和核磁共振碳谱( C-APT)分析。
[0038] 本发明中实施例6制备的伊犁贝母提取物中分离的单体化合物7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-9,10-酸酐-8-丙酸、4-((E)-3-羟基丁-1-烯基)-3,3,4-三甲基环己醇、2-(四氢-
5-(2-羟基苯基)-2H-吡喃-3-基)苯酚和17β-塞瓦宁-6-氧代-5α,20β-二醇伊贝宁的1H-NMR
1
谱图如图1至图4所示，其中，7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-9,10-酸酐-8-丙酸的H-NMR谱图
如图1所示，4-((E)-3-羟基丁-1-烯基)-3,3,4-三甲基环己醇的1H-NMR谱图如图2所示，2-
(四氢-5-(2-羟基苯基)-2H-吡喃-3-基)苯酚的1H-NMR谱图如图3所示，17β-塞瓦宁-6-氧
代-5α,20β-二醇伊贝宁的1H-NMR谱图如图4所示。伊犁贝母提取物中分离的单体化合物的
13C-APT谱图如图5至图8所示，其中，7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-9,10-酸酐-8-丙酸的13C-APT谱图如图5所示，4-((E)-3-羟基丁-1-烯基)-3,3,4-三甲基环己醇的13C-APT谱图如图6
所示，2-(四氢-5-(2-羟基苯基)-2H-吡喃-3-基)苯酚的13C-APT谱图如图7所示，17β-塞瓦宁-6-氧代-5α,20β-二醇伊贝宁的13C-APT谱图如图8所示。对图1和图5进行图谱解析，将图1和图5各峰进行归属，图1和图5的峰归属如表1所示；对图2和图6进行图谱解析，将图2和图6各峰进行归属，图2和图6的峰归属如表2所示；对图3和图7进行图谱解析，将图3和图7各峰进行归属，图3和图7的峰归属如表3所示；对图4和图8进行图谱解析，将图4和图8各峰进行归属，图4和图8的峰归属如表4所示。通过表1，表2，表3和表4的数据可知，本发明中实施例6制备的伊犁贝母提取物中分离的单体化合物7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-9,10-酸酐-8-丙
酸、4-((E)-3-羟基丁-1-烯基)-3,3,4-三甲基环己醇、2-(四氢-5-(2-羟基苯基)-2H-吡喃-
3-基)苯酚和17β-塞瓦宁-6-氧代-5α,20β-二醇伊贝宁，其中，7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-
9,10-酸酐-8-丙酸的化学结构式为 4-((E)-3-羟基丁-1-烯
基)-3,3,4-三甲基环己醇的化学结构式为 2-(四氢-5-(2-羟基苯基)-
2H-吡喃-3-基)苯酚的化学结构式为 17β-塞瓦宁-6-氧代-5α,20β-二醇
伊贝宁的化学结构式为 本发明伊犁贝母提取物中分离的单体化合物易
溶于氯仿、甲醇。
5-(2-羟基苯基)-2H-吡喃-3-基)苯酚和17β-塞瓦宁-6-氧代-5α,20β-二醇伊贝宁的1H-NMR
1
谱图如图1至图4所示，其中，7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-9,10-酸酐-8-丙酸的H-NMR谱图
如图1所示，4-((E)-3-羟基丁-1-烯基)-3,3,4-三甲基环己醇的1H-NMR谱图如图2所示，2-
(四氢-5-(2-羟基苯基)-2H-吡喃-3-基)苯酚的1H-NMR谱图如图3所示，17β-塞瓦宁-6-氧
代-5α,20β-二醇伊贝宁的1H-NMR谱图如图4所示。伊犁贝母提取物中分离的单体化合物的
13C-APT谱图如图5至图8所示，其中，7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-9,10-酸酐-8-丙酸的13C-APT谱图如图5所示，4-((E)-3-羟基丁-1-烯基)-3,3,4-三甲基环己醇的13C-APT谱图如图6
所示，2-(四氢-5-(2-羟基苯基)-2H-吡喃-3-基)苯酚的13C-APT谱图如图7所示，17β-塞瓦宁-6-氧代-5α,20β-二醇伊贝宁的13C-APT谱图如图8所示。对图1和图5进行图谱解析，将图1和图5各峰进行归属，图1和图5的峰归属如表1所示；对图2和图6进行图谱解析，将图2和图6各峰进行归属，图2和图6的峰归属如表2所示；对图3和图7进行图谱解析，将图3和图7各峰进行归属，图3和图7的峰归属如表3所示；对图4和图8进行图谱解析，将图4和图8各峰进行归属，图4和图8的峰归属如表4所示。通过表1，表2，表3和表4的数据可知，本发明中实施例6制备的伊犁贝母提取物中分离的单体化合物7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-9,10-酸酐-8-丙
酸、4-((E)-3-羟基丁-1-烯基)-3,3,4-三甲基环己醇、2-(四氢-5-(2-羟基苯基)-2H-吡喃-
3-基)苯酚和17β-塞瓦宁-6-氧代-5α,20β-二醇伊贝宁，其中，7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-
9,10-酸酐-8-丙酸的化学结构式为 4-((E)-3-羟基丁-1-烯
基)-3,3,4-三甲基环己醇的化学结构式为 2-(四氢-5-(2-羟基苯基)-
2H-吡喃-3-基)苯酚的化学结构式为 17β-塞瓦宁-6-氧代-5α,20β-二醇
伊贝宁的化学结构式为 本发明伊犁贝母提取物中分离的单体化合物易
溶于氯仿、甲醇。
[0039] 根据实施例6制备的伊犁贝母提取物中分离的单体化合物7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-9,10-酸酐-8-丙酸、4-((E)-3-羟基丁-1-烯基)-3,3,4-三甲基环己醇、2-(四氢-5-(2-羟基苯基)-2H-吡喃-3-基)苯酚和17β-塞瓦宁-6-氧代-5α,20β-二醇伊贝宁进行体外抗肿瘤药效学实验，体外抗肿瘤药效学实验采用MTT比色法。
[0040] 以本发明中实施例6制备的伊犁贝母提取物中分离的单体化合物7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-9,10-酸酐-8-丙酸、4-((E)-3-羟基丁-1-烯基)-3,3,4-三甲基环己醇、2-(四
氢-5-(2-羟基苯基)-2H-吡喃-3-基)苯酚和17β-塞瓦宁-6-氧代-5α,20β-二醇伊贝宁分别作为实验组，以Paclitaxel(紫杉醇，抗肿瘤药物)作为对照组，同时设立空白组，将实验组、对照组和空白组选取HepG-2(人肝癌)细胞和HeLa(人宫颈癌)细胞为实验对象，用培养基稀
释后，以6×104/ml的密度接种于96孔板，每孔100μl，培养箱中正常培养24小时后，各组加入相对应的药物，使各组药物的最终浓度分别为2.5μg/ml(1组)，5μg/ml(2组)，10μg/ml(3组)，20μg/ml(4组)，40μg/ml(5组)，共设5个浓度，每个浓度3个复孔；培养48小时后，于每孔加MTT10μl染色；继续培养四小时后，吸弃原培养液，每孔加入DMSO(二甲基亚砜)150μl，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解，并于酶联免疫检测仪570nm波长处检测光密度
值，根据光密度值计算50％抑制浓度(IC50，μg/mL)，光密度值计算IC50的计算方法为现有公知技术。实验组、对照组对HepG-2细胞和HeLa细胞的IC50如表5所示，由表5数据可以看出，本发明伊犁贝母提取物中分离的单体化合物7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-9,10-酸酐-8-丙酸、
4-((E)-3-羟基丁-1-烯基)-3,3,4-三甲基环己醇、2-(四氢-5-(2-羟基苯基)-2H-吡喃-3-
基)苯酚和17β-塞瓦宁-6-氧代-5α,20β-二醇伊贝宁对HepG-2细胞和HeLa细胞均具有一定的抑制作用。
氢-5-(2-羟基苯基)-2H-吡喃-3-基)苯酚和17β-塞瓦宁-6-氧代-5α,20β-二醇伊贝宁分别作为实验组，以Paclitaxel(紫杉醇，抗肿瘤药物)作为对照组，同时设立空白组，将实验组、对照组和空白组选取HepG-2(人肝癌)细胞和HeLa(人宫颈癌)细胞为实验对象，用培养基稀
释后，以6×104/ml的密度接种于96孔板，每孔100μl，培养箱中正常培养24小时后，各组加入相对应的药物，使各组药物的最终浓度分别为2.5μg/ml(1组)，5μg/ml(2组)，10μg/ml(3组)，20μg/ml(4组)，40μg/ml(5组)，共设5个浓度，每个浓度3个复孔；培养48小时后，于每孔加MTT10μl染色；继续培养四小时后，吸弃原培养液，每孔加入DMSO(二甲基亚砜)150μl，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解，并于酶联免疫检测仪570nm波长处检测光密度
值，根据光密度值计算50％抑制浓度(IC50，μg/mL)，光密度值计算IC50的计算方法为现有公知技术。实验组、对照组对HepG-2细胞和HeLa细胞的IC50如表5所示，由表5数据可以看出，本发明伊犁贝母提取物中分离的单体化合物7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-9,10-酸酐-8-丙酸、
4-((E)-3-羟基丁-1-烯基)-3,3,4-三甲基环己醇、2-(四氢-5-(2-羟基苯基)-2H-吡喃-3-
基)苯酚和17β-塞瓦宁-6-氧代-5α,20β-二醇伊贝宁对HepG-2细胞和HeLa细胞均具有一定的抑制作用。
[0041] 综上所述，本发明首次公开了伊犁贝母提取物中分离的单体化合物7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-9,10-酸酐-8-丙酸、4-((E)-3-羟基丁-1-烯基)-3,3,4-三甲基环己醇、2-(四氢-5-(2-羟基苯基)-2H-吡喃-3-基)苯酚和17β-塞瓦宁-6-氧代-5α,20β-二醇伊贝宁，该单体化合物对HepG-2细胞和HeLa细胞均具有较强的抑制作用，能够作为制备预防肿瘤药物、
抗肿瘤药物和防治肿瘤保健品中的应用。
抗肿瘤药物和防治肿瘤保健品中的应用。
[0042] 以上技术特征构成了本发明的实施例，其具有较强的适应性和实施效果，可根据实际需要增减非必要的技术特征，来满足不同情况的需求。
[0043] 表1
[0044]
[0045] 表2
[0046]
[0047]
[0048] 表3
[0049] 位置 氢的化学位移值(δH) 碳的化学位移值(δH)4 4.32(2H,t,J＝6.6Hz) 29.9
5 4.14(1H,t,J＝6.6Hz) 50.5
6 4.07(2H,t,J＝6.6Hz) 65.4
2’ -- 144.5
3‘ 7.63(1H,d,J＝7.2Hz) 124.9
4’ 7.42(1H,d,J＝7.2Hz) 127.3
5‘ 7.35(1H,d,J＝7.2Hz) 127.8
6’ 7.79(1H,d,J＝7.2Hz) 120.3
5 4.14(1H,t,J＝6.6Hz) 50.5
6 4.07(2H,t,J＝6.6Hz) 65.4
2’ -- 144.5
3‘ 7.63(1H,d,J＝7.2Hz) 124.9
4’ 7.42(1H,d,J＝7.2Hz) 127.3
5‘ 7.35(1H,d,J＝7.2Hz) 127.8
6’ 7.79(1H,d,J＝7.2Hz) 120.3
[0050] 表4
[0051]
[0052] 表5
[0053]
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