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一种基于瑞香狼毒根的 植物源 杀虫剂制备方法

阅读：935发布：2020-06-22

专利汇可以提供一种基于瑞香狼毒根的植物源杀虫剂制备方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明公开了一种基于瑞香狼毒根的植物源杀虫剂制备方法。根结线虫是一种高度专化型的杂食性植物病原线虫。本发明具体如下：一、粉碎烘干的瑞香狼毒根部。二、将一种所得粉末加入到乙醇中浸泡。三、对浸泡液进行三次进行超声波提取。四、对提取液进行减压过滤浓缩。五、将萃取物加入到乙醇水溶液中溶解。得到萃前液。六、对步骤七所得萃前液用萃取剂在室温下连续萃取，得到萃取液。对萃取液进行减压过滤浓缩。得到目标萃取物。七、烘干目标萃取物。本发明提高了瑞香狼毒根部萃取物的提取速度，在13小时内即可完成提取。本发明具有良好的线虫杀灭效果。，下面是一种基于瑞香狼毒根的植物源杀虫剂制备方法专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种基于瑞香狼毒根的植物源杀虫剂制备方法，其特征在于：步骤一、取瑞香狼毒的根部在30～40℃的条件下烘干至质量不再发生变化；
步骤二、对步骤一中烘干的瑞香狼毒根部进行粉碎，并用300目的标准筛进行筛选；得到瑞香狼毒根部粉末；
步骤三、将步骤二所得瑞香狼毒根部粉末按料液比1:a加入到乙醇中浸泡12～24小时，
15≤a≤25；得到初步乙醇浸泡液；
步骤四、将步骤三所得的初步乙醇浸泡液过滤分离为瑞香狼毒根部浸泡物和浸泡后乙醇；再将瑞香狼毒根部浸泡物按料液比1:b加入到浸泡后乙醇中，3≤b≤5，得到目标乙醇浸泡液；
步骤五、对步骤四所得目标乙醇浸泡液在35～45℃的温度下进行三次进行超声波提取；每次超声波提取的时间为30～50min；过滤后得到瑞香狼毒根部乙醇提取液；
步骤六、对步骤五所得瑞香狼毒根部乙醇提取液进行减压过滤浓缩，得到乙醇浸膏萃取物；
步骤七、将步骤六所得乙醇浸膏萃取物加入到乙醇水溶液中溶解；得到萃前液；
步骤八、对步骤七所得萃前液用萃取剂在室温下萃取，得到萃取液；对萃取液进行减压过滤浓缩；得到目标萃取物；
步骤九、将目标萃取物放入烘箱，在45～55℃的条件下烘干至质量不再发生变化；得目标杀虫剂。
2.根据权利要求1所述的一种基于瑞香狼毒根的植物源杀虫剂制备方法，其特征在于：
步骤六和步骤九中的减压过滤浓缩均通过旋转蒸发仪完成。
3.根据权利要求1所述的一种基于瑞香狼毒根的植物源杀虫剂制备方法，其特征在于：
步骤八中，共连续萃取五次，并将五次萃取所得的萃取液混合。
4.根据权利要求1所述的一种基于瑞香狼毒根的植物源杀虫剂制备方法，其特征在于：
步骤二中乙醇的浓度为95％。
5.根据权利要求1所述的一种基于瑞香狼毒根的植物源杀虫剂制备方法，其特征在于：
步骤七中乙醇水溶液的浓度为30％。

说明书全文

一种基于瑞香狼毒根的植物源 杀虫剂制备方法

技术领域

[0001] 本发明属于生物源杀虫剂技术领域，具体涉及一种基于瑞香狼毒根的植物源杀虫剂制备方法。

背景技术

[0002] 瑞香狼毒(Stellera chamaejasme L)是指瑞香科狼毒属多年生草本植物，又称断肠草、山萝卜等。瑞香狼毒通常生长在海拔2000-4200m的向阳坡、高山草地上，广泛分布于我国西南、华北、东北、西北地区。瑞香狼毒毒性较大且全株有毒，根部毒性强于其他部位，牲畜易误食导致食物中毒。瑞香狼毒生物量大，种群优势明显，在与其他草原植物竞争时处于优势，极易抑制牧草生长，现今在北方草地大肆蔓延，导致牧草连年退化，致使了草场出现逆行演替，危及了草原和畜牧业的发展。

[0003] 根结线虫(Meloidogyne)是一种高度专化型的杂食性植物病原线虫。已知为害蔬菜的线虫主要有高弓根结线虫、花生根结线虫、北方根结线虫、南方根结线虫、爪哇根结线虫以及甜菜根结线虫等。线虫寄主范围广泛，常为害瓜类、茄果类、豆类及萝卜、葫萝卜、莴苣、白菜等30多种蔬菜，还能传播一些真菌和细菌性病害。根结线虫主要为害各种蔬菜的根部，表现为侧根和须根较正常增多，并在幼根的须根上形成球形或圆锥形大小不等的白色根瘤，有的呈念珠状。被害株地上部生长矮小、缓慢、叶色异常，结果少，产量低，甚至造成植株提早死亡。

发明内容

[0004] 本发明的目的在于提供一种基于瑞香狼毒根的植物源杀虫剂制备方法。

[0005] 本发明具体如下：

[0006] 步骤一、取瑞香狼毒的根部在30～40℃的条件下烘干至质量不再发生变化。

[0007] 步骤二、对步骤一中烘干的瑞香狼毒根部进行粉碎，并用300目的标准筛进行筛选。得到瑞香狼毒根部粉末。

[0008] 步骤三、将步骤二所得瑞香狼毒根部粉末按料液比1:a加入到乙醇中浸泡12～24小时，15≤a≤25。得到初步乙醇浸泡液。

[0009] 步骤四、将步骤三所得的初步乙醇浸泡液过滤分离为瑞香狼毒根部浸泡物和浸泡后乙醇。再将瑞香狼毒根部浸泡物按料液比1:b加入到浸泡后乙醇中，3≤b≤5，得到目标乙醇浸泡液。

[0010] 步骤五、对步骤四所得目标乙醇浸泡液在35～45℃的温度下进行三次进行超声波提取。每次超声波提取的时间为30～50min。过滤后得到瑞香狼毒根部乙醇提取液。

[0011] 步骤六、对步骤五所得瑞香狼毒根部乙醇提取液进行减压过滤浓缩，得到乙醇浸膏萃取物。

[0012] 步骤七、将步骤六所得乙醇浸膏萃取物加入到乙醇水溶液中溶解。得到萃前液。

[0013] 步骤八、对步骤七所得萃前液用萃取剂在室温下萃取，得到萃取液。对萃取液进行减压过滤浓缩。得到目标萃取物。

[0014] 步骤九、将目标萃取物放入烘箱，在45～55℃的条件下烘干至质量不再发生变化。得目标杀虫剂。

[0015] 进一步地，步骤六和步骤九中的减压过滤浓缩均通过旋转蒸发仪完成。

[0016] 进一步地，步骤八中，共连续萃取五次，并将五次萃取所得的萃取液混合。

[0017] 进一步地，步骤二中乙醇的浓度为95％。

[0018] 进一步地，步骤七中乙醇水溶液的浓度为30％。

[0019] 本发明具有的有益效果是：

[0020] 1、本发明提高了瑞香狼毒根部萃取物的提取速度，在13小时内即可完成提取。

[0021] 2、本发明具有良好的线虫杀灭效果。

[0022] 3、本发明能够使得原本有害的瑞香狼毒变得产生价值，能够有效遏制瑞香狼毒对草原环境的损害。附图说明

[0023] 图1为在8mg/ml浓度的目标杀虫剂进行线虫触杀试验的结果柱状图。

具体实施方式

[0024] 以下结合附图对本发明作进一步说明。

[0025] 步骤一、取瑞香狼毒的根部放入烘箱，在35℃的条件下烘干至质量不再发生变化。

[0026] 步骤二、对步骤一中烘干的瑞香狼毒根部进行粉碎，并用300目的标准筛进行筛选。得到瑞香狼毒根部粉末。

[0027] 步骤三、将步骤二所得瑞香狼毒根部粉末按料液比1:20(g：ml)加入到浓度为95％的乙醇中浸泡12小时(即将x克瑞香狼毒根部粉末加入20x毫升的浓度为95％的乙醇)。得到初步乙醇浸泡液。

[0028] 步骤四、将步骤三所得的初步乙醇浸泡液过滤分离为瑞香狼毒根部浸泡物和浸泡后乙醇。再将瑞香狼毒根部浸泡物按料液比1:4加入到浸泡后乙醇中，得到目标乙醇浸泡液。

[0029] 步骤五、对步骤四所得目标乙醇浸泡液在40℃的温度下进行三次进行超声波提取。每次超声波提取的时间为30min。过滤后得到瑞香狼毒根部乙醇提取液。

[0030] 步骤六、对步骤五所得瑞香狼毒根部乙醇提取液用旋转蒸发仪进行减压过滤浓缩，得到乙醇浸膏萃取物。

[0031] 步骤七、将步骤六所得乙醇浸膏萃取物加入到浓度为30％的乙醇水溶液中溶解。得到萃前液。

[0032] 步骤八、对步骤七所得萃前液用萃取剂在室温下连续萃取五次后，混合五次萃取所得的萃取液。对萃取液用旋转蒸发仪进行减压过滤浓缩。得到目标萃取物。

[0033] 步骤九、将目标萃取物放入烘箱，在50℃的条件下烘干至质量不再发生变化。得目标杀虫剂。

[0034] 萃取剂根据如下四个实施例中的一个进行选择：

[0035] 实施例一、

[0036] 萃取剂采用乙醇。

[0037] 实施例二、

[0038] 萃取剂采用石油醚。

[0039] 实施例三、

[0040] 萃取剂采用氯仿。

[0041] 实施例四、

[0042] 萃取剂采用乙酸乙酯。

[0043] 实施例五、

[0044] 萃取剂采用无菌水。

[0045] 秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)是一种国际公认的模式生物，是一种多细胞生物，结构简单，基因测序已经完成，繁殖周期短，培养难度小，可在实验室大量繁殖。与其他模式动物相比，可以减少个体的差异性所造成的误差。有利于开展生物毒性评价的相关实验标准化与规范化，也可用于毒理学研究和毒性评价。秀丽隐杆线虫在线虫中具有代表性，根据本发明制备的目标杀虫剂对秀丽隐杆线虫的杀灭效果能够看出目标杀虫剂对各类根结线虫的杀灭效果。因此本发明以秀丽隐杆线虫为试验对象，进行目标杀虫剂的杀虫效果试验。具体试验步骤如下：

[0046] 触杀试验的具体方法为：

[0047] 1.将秀丽隐杆线虫溶液摇匀；得到线虫悬浮液。

[0048] 2.将线虫悬浮液依次注入五块24孔细胞培养板的所有个样孔中；各样孔中线虫悬浮液的体积均为V1。记录各样孔中线虫的数量，V1＝100μL。

[0049] 3.将五个实施例得到的目标杀虫剂分别与二甲基亚砜(DMSO)的药剂母液混合。并在比色管中配制得到五个杀虫剂溶液组。五个杀虫剂溶液组与五个实施例得到的目标杀虫剂一一对应。每个杀虫剂溶液组都包括八种不同浓度的杀虫剂溶液。同一杀虫剂溶液组内八种杀虫剂溶液的浓度依次为0.4mg/ml、0.8mg/ml、1.2mg/ml、2mg/ml、2.8mg/ml、4mg/ml、6mg/ml、8mg/ml。

[0050] 4.将步骤3中得到的五个杀虫剂溶液组分别加入五个24孔细胞培养板。24孔细胞培养板内的每三个样孔添加对应杀虫剂溶液组内的一种杀虫剂溶液。(即将二十四个样孔以三个分为八组，八组样孔与同一杀虫剂溶液组内的八种杀虫剂溶液分别对应)。各样孔中杀虫剂溶液的加入量均为V2。V2＝300μL。

[0051] 5.通过步骤1和步骤4的方法，用二甲基亚砜的药剂母液和蒸馏水分别作为杀虫剂溶液重复3组实验(即利用另一块24孔细胞培养板的六个样孔作空白对照组)，去除二甲基亚砜药剂母液和蒸馏水对线虫死亡率的影响。

[0052] 6.将步骤2中的五块24孔细胞培养板及步骤5中的一块24孔细胞培养板放置于温度为25℃、湿度为80％的培养箱中。

[0053] 7.分别在放入培养箱24h、48h、72h后，记录各样孔中线虫的存活数量。

[0054] 得出的毒力回归方程表如下：

[0055]

[0056] 8mg/ml浓度的目标杀虫剂对应的杀虫效果试验的结果如图1所示。

[0057] 可以看出各实施例均有杀灭线虫的效果。其中，实施例四的杀虫效果最佳。实施例五的杀虫效果最弱。

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