一种食、药用外生菌根菌制种和人工栽培方法
专利汇可以提供一种食、药用外生菌根菌制种和人工栽培方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且一种食、药用外生菌根菌制种和人工栽培方法,采用常规食用菌人工栽培工序即取种－制母种－制原种－制栽培种－制栽培袋－出菇管理,本 发明 的特点是:在取种时使用无菌保鲜液处理子实体,取靠近菌索的菌柄基部组织 块 ,组织分离和母种培养基采用PDA培养基加松树汁,原种和栽培种采用稻谷颗粒种,栽培方法用塑料袋栽培覆土出菇,配合补 水 补液实现外生菌根菌一次栽培多年多季节出菇。，下面是一种食、药用外生菌根菌制种和人工栽培方法专利的具体信息内容。
1.一种食、药用外生菌根菌制种和人工栽培方法，采用常规食用菌人工栽培工序即取种-制母种-制原种-制栽培种-制栽培袋-出菇管理，本发明的特征是：(1.1)采种时用无菌保鲜液在采集地就地处理子实体，组织分离在无菌无毒环境中取靠近菌索的菌柄基部黄豆大组织块，转入母种培养基上，于22-32℃中培养，待组织块萌发菌丝后提纯转管；(1.1.1)无菌保鲜液配制方法，配方为食用明矾10克、加碘食盐20克、3％呋喃丹30克、水1000毫升，配制方法为：将明矾和呋喃丹分别加水加热溶解后，过滤，取滤液混合，加食盐熔解后装瓶灭菌，用时摇匀；(1.1.2)食、药用外生菌根菌母种培养基配制方法：A.制松树汁：取鲜马尾松无节木质部为原料剁或粉碎成颗粒，加水煮沸后改文火熬制2小时，1千克木料加水1升熬至0.5升用纱布过滤备用；B.制马铃薯汁：将0.25千克去皮马铃薯加水0.7升，用文火熬至0.5升，过滤，备用；C.磷酸二氢钾1.5克，硫酸镁1克，用少量热水溶解；D.将上述三种溶液混合，加琼脂20克、蔗糖20克，煮沸溶解后文火煮干至1000毫升，分装试管，每管10毫升。试管棉塞内端包微孔防潮膜，然后7支1捆，捆紧后包牛皮纸；E.灭菌时必须先将高压锅内冷空气排出，灭菌压力为1.2-1.5千克/平方厘米，灭菌45分钟，压力回0后开锅，让余热烘干棉塞，于50℃温度左右摆斜面。摆斜面时试管上下需盖保温材料，待斜面凝固后立即将试管竖直让冷凝水重新回到斜面内；(1.2)原种、栽培种使用稻谷颗粒种，其制备方法是：将发芽破胸的稻谷用马铃薯20％、白糖2％、磷酸二氢钾0.1％、硫酸镁0.05％混合液煮沸杀青，拌入3％石膏粉，用盐水瓶分装灭菌；冷却后接种，置22-32℃温度下培养，三天后进行第一次摇瓶，以后每天摇一次瓶并检查纯度，直至菌丝充满谷粒，栽培种用同样的方法扩大培养1次；(1.3)栽培袋的制作方法是：(1.3.1)栽培料配方是：马尾松新鲜木屑400千克、棉壳100千克、麦麸100千克、白糖10千克、磷酸二氢钾0.75千克、硫酸镁0.5千克、马尾松林地腐殖质土100千克、明矾5千克，含水量60％，PH自然；(1.3.2)培养料采用两次灭菌方法：培养料混合拌匀调湿后，迅速装入75cm*45cm纤维袋中，离地建堆，堆四周用塑料膜密封，设保温层，保温层外加通过地脚螺栓固定的双层密网，利用风机加压使高压蒸汽在蒸汽发生器和培养料中快速循环加热，培养料在1个小时达到55℃，2小时达到70℃，3小时达到85℃，并保持4小时，经这样预蒸，干湿均匀的培养料翻凉后，分装塑料袋，十袋装入一纤维袋；再进行第二次蒸汽消毒，保持温度100℃10小时；(1.3.3)接种方法为：接种前将菌种摇散，火焰消毒瓶口，打开塑料袋后，用手指隔膜在基料面上挖一小孔，菌种倒入孔内，用手指隔膜挤捏培养料盖严菌种，再用扁形环套口，袋口反折后用橡皮筋扎口，接种后的菌袋袋口朝下，就地接种就地培养。培养温度为22-32℃，湿度为70％，菌丝基本布满培养料，气温稳定在32℃以下时打孔通气；(1.3.4)打孔通气的方法是：将长满菌丝的菌筒用特制的高温电烙铁在菌筒的下部打三至四个手指粗的孔通气，打孔后的菌筒排放在底铺有塑料膜的干净河沙上，坚持早晚喷洒消毒杀虫杀螨剂，温度保持在25-32℃；(1.3.5)消毒杀虫杀螨剂的配制方法：配比为40％甲醛溶液900毫升、无水乙醇50毫升、40％乐果20毫升、80％敌敌畏20毫升、20％三氯杀螨醇10毫升，配制方法是将乐果、敌敌畏、三氯杀螨醇分别量取，倒入一个非金属容器中，加入酒精，摇匀后加入甲醛，充分摇匀后装瓶密封，置阴凉干燥处避光保存，用时摇匀；(1.4)出菇管理方式是；将发好菌的菌筒脱袋，排放在消毒过的出菇场地上，每袋菌筒间留间隙4cm，边排边盖好塑料膜。待菌筒恢复伤口并长菌丝时分4次盖发酵料土和松林土每次1-2厘米后，盖土后喷杀虫螨剂，菌丝长出土表再在箱面种植禾本科植物，待草长到二叶一心时喷雾状水，采用白天盖膜，晚上盖无纺布，早晨6-8时不盖物，促进子实体的形成和生长；(1.4.1)制作发酵料土。选田土或菜土晒干过筛，每1000千克放人粪100千克、过磷酸钙20千克、马尾松树木屑100千克、明矾10千克、呋喃丹10千克，拌匀调水至含水量60％，堆成长条，上盖透明塑料膜，利用太阳光照发热发酵半个月，建堆后第七天进行第一次翻堆至预先消毒杀虫的空地上，表面喷洒5％的消毒杀虫杀螨剂，打通气孔至料底，盖塑料膜，第10天将料土二次翻堆，15天后晒干备用；(1.4.2)出菇场地消毒，选排水良好座北朝南的空地，搭建阴蓬开好排水沟，气温稳定在35℃以下后，场地整箱喷洒消毒杀虫杀螨剂，盖膜48小时进行场地消毒。
一种食、药用外生菌根菌制种和人工栽培方法
本发明属于食药用菌制种及人工栽培技术领域，尤其涉及食药用外生菌根菌制种及人工栽培方法。
目前没有成功的人工栽培美味牛肝菌(Boletus edulis)、松乳菇(Lactrius deliciosus)、多汁乳菇(Lactarius volemus)、鸡油菌(Cantharellus vibarius)、绿菇(Russula virescens)等食药用外生菌根菌的方法。所见报道有：1、方平夷的《对松乳菇人工栽培的尝试》(《食用菌》1994年第3期)。其采用的方法是：(1)采用MS基本培养基，除去植物生长素和细胞分裂素，补充3克蛋白胨、2克酵母浸膏、20克琼脂作为分离菌种、母种培养和保存培养基；(2)原种培养基采用小麦或牛粪粉与大米的混合物；(3)子实体形成培养基为棉子壳腐烂茅草和蔗糖；(4)分离培养母种方法是选取菌柄或菌柄着生处的部分菌盖，于斜面培养基上培养，挑选菌丝转接培养成母种，再扩原种，最后进行子实体培养。其实验结果是人工栽培条件下可以形成子实体，但不易形成，就是形成也不易长大。2、发明《松乳菇母种培养基及松乳菇人工栽培方法》(C1240572A)所提供的是半人工栽培方法，所用培养基菌丝生长缓慢，生长周期长，从制种到出菇需4-5年，同时需栽种马尾松。
本发明的目的是提供一种开发新菌株特别是食、药用外生菌根菌的制种和高产稳产人工栽培方法，拓宽食药用菌人工栽培领域，实现美味牛肝菌、松乳菇、多汁乳菇等食药用外生菌根菌当年栽培当年可产多批菇、一年栽培多年出菇。
本发明的目的是采用以下技术方案实现的：栽培工序包括取种-制母种-制原种-制栽培种-制栽培袋-出菇管理。本发明的主要特点是：(1.1)采种时用无菌保鲜液在采集地就地处理子实体，组织分离在无菌无毒环境中取靠近菌索的菌柄基部黄豆大组织块，转入母种培养基上，于22-32℃中培养，待组织块萌发菌丝后提纯转管；(1.1.1)无菌保鲜液配制方法，配方为食用明矾10克、加碘食盐20克、3％呋喃丹30克、水1000毫升，配制方法为：将明矾和呋喃丹分别加水加热溶解后，过滤，取滤液混合，加食盐熔解后装瓶灭菌，用时摇匀；(1.1.2)食、药用外生菌根菌母种培养基配制方法：A.制松树汁：取鲜马尾松无节木质部为原料剁或粉碎成颗粒，加水煮沸后改文火熬制2小时，1千克木料加水1升熬至0.5
升用纱布过滤备用；B.制马铃薯汁：将0.25千克去皮马铃薯加水0.7升，用文火熬至0.5升过滤，备用；C.磷酸二氢钾1.5克，硫酸镁1克，用少量热水溶解；D.将上述三种溶液混合，加琼脂20克、蔗糖20克，煮沸溶解后文火煮干至1000毫升，分装试管，每管10毫升。试管棉塞内端包微孔防潮膜，然后7支1捆，捆紧后包牛皮纸；E.灭菌时必须先将高压锅内冷空气排出，灭菌压力为1.2-1.5千克/平方厘米，灭菌45分钟，压力回0后开锅，让余热烘干棉塞，于50℃温度左右摆斜面。摆斜面时试管上下需盖保温材料，待斜面凝固后立即将试管竖直让冷凝水重新回到斜面内；(1.2)原种、栽培种使用稻谷颗粒种，其制备方法是：将发芽破胸的稻谷用马铃薯20％、白糖2％、磷酸二氢钾0.1％、硫酸镁0.05％混液煮沸杀青，拌入3％石膏粉，用盐水瓶分装灭菌；冷却后接种，置22-32℃温度下培养，三天后进行第一次摇瓶，以后每天摇一次瓶并检查纯度，直至菌丝充满谷粒，栽培种用同样的方法扩大培养1次；(1.3)栽培袋的制作方法是：(1.3.1)栽培料配方是：马尾松新鲜木屑400千克、棉壳100千克、麦麸100千克、白糖10千克、磷酸二氢钾0.75千克、硫酸镁0.5千克、马尾松林地腐殖质土100千克、明矾5千克，含水量60％，PH自然；(1.3.2)培养料采用两次灭菌方法：培养料混合拌匀调湿后，迅速装入75cm*45cm纤维袋中，离地建堆，堆四周用塑料膜密封，设保温层，保温层外加通过地脚螺栓固定的双层密网，利用风机加压使高压蒸汽在蒸汽发生器和培养料中快速循环加热，培养料在1个小时达到55℃，2小时达到70℃，3小时达到85℃，并保持4小时，经这样预蒸，干湿均匀的培养料翻凉后，分装塑料袋，十袋装入一纤维袋；再进行第二次蒸汽消毒，保持温度100℃10小时；(1.3.3)接种方法为：接种前将菌种摇散，火焰消毒瓶口，打开塑料袋后，用手指隔膜在基料面上挖一小孔，菌种倒入孔内，用手指隔膜挤捏培养料盖严菌种，再用扁形环套口，袋口反折后用橡皮筋扎口，接种后的菌袋袋口朝下，就地接种就地培养，培养温度为22-32℃，湿度为70％，菌丝基本布满培养料，气温稳定在32℃以下时打孔通气；
(1.3.4)打孔通气的方法是：将长满菌丝的菌筒用特制的高温电烙铁在菌筒的下部打三至四个手指粗的孔通气，打孔后的菌筒排放在底铺有塑料膜的干净河沙上，坚持早晚喷洒消毒杀虫杀螨剂，温度保持在25-32℃；(1.3.5)消毒杀虫杀螨剂的配制方法：配比为40％甲醛溶液900毫升、无水乙醇50毫升、40％乐果20毫升、80％敌敌畏20毫升、20％三氯杀螨醇10毫升，配制方法是将乐果、敌敌畏、三氯杀螨醇分别量取，倒入一个非金属容器中，加入酒精，摇匀后加入甲醛，充分摇匀后装瓶密封，置阴凉干燥处避光保存，用时摇匀；(1.4)出菇管理方式是：将发好菌的菌筒脱袋，排放在消毒过的出菇场地上，每袋菌筒间留间隙4cm，边排边盖好塑料膜。待菌筒恢复伤口并长菌丝时分4次盖发酵料土和松林土每次1-2厘米后，盖土后喷杀虫杀螨剂，菌丝长出土表再在箱面种植禾本科植物，待草长到二叶一心时喷雾状水，采用白天盖膜，晚上盖无纺布，早晨6-8时不盖物，促进子实体的形成和生长；(1.4.1)制作发酵料土：选田土或菜土晒干过筛，每1000千克放人粪100千克、过磷酸钙20千克、马尾松树木屑100千克、明矾10千克、呋喃丹10千克，拌匀调水至含水量60％，堆成长条，上盖透明塑料膜，利用太阳光照发热发酵半个月，建堆后第七天进行第一次翻堆至预先消毒杀虫的空地上，表面喷洒5％的消毒杀虫杀螨剂，打通气孔至料底盖塑料膜，第10天将料土二次翻堆，15天后晒干备用；(1.4.2)出菇场地消毒：选排水良好座北朝南的空地，搭建阴蓬开好排水沟，气温稳定在35℃以下后，场地整箱喷洒消毒杀虫杀螨剂，盖膜48小时进行场地消毒。
食、药用外生菌跟菌因其独特的风味和药用功能备受人们关注，但一直不能大量生产，本发明具有生产工艺简单、产量高、产品品质好的优点，并解决了人工批量生产的技术问题。
以松乳菇人工栽培为实施例作详细说明：松乳菇人工栽培生产工艺流程是取种-制母种-制原种-制栽培种-制栽培袋-出菇管理。
取种和制母种时先配制无菌保鲜液，配方为：食用明矾10克、加碘食盐20克、3％呋喃丹3克、水1000毫升，配制方法为：将明矾和呋喃丹分别加水加热溶解后，过滤，取滤液混合，加食盐熔解后装瓶灭菌，用时摇匀；做母种培养基，其配制方法：
A.制松树汁：取鲜马尾松无节木质部为原料剁或粉碎成颗粒，加水煮沸后改文火熬制2小时，1千克木料加水1升熬至0.5升用纱布过滤，备用；B.制马铃薯汁：将0.25千克去皮马铃薯加水0.7升，用文火熬至0.5升过滤，备用；C.磷酸二氢钾1.5克，硫酸镁1克，用少量热水溶解；D.将上述三种溶液混合，加琼脂20克、蔗糖20克，煮沸溶解后文火煮干至1000毫升，分装试管，每管10毫升。试管棉塞内端包微孔防潮膜，然后7支1捆，捆紧后包牛皮纸；E.灭菌时必须先将高压锅内冷空气排出，灭菌压力为1.2-1.5千克/平方厘米，灭菌45分钟，压力回0后开锅，让余热烘干棉塞，于50度温度左右摆斜面。摆斜面时试管上下需盖保温材料，待斜面凝固后立即将试管竖直让冷凝水重新回到斜面内；采种时用无菌保鲜液在采集地就地处理子实体，组织分离在无菌无毒环境中取靠近菌索的菌柄基部黄豆大组织块，转入母种培养基上，于22-32℃中培养。待组织块萌发菌丝后提纯转管；原种、栽培种使用稻谷颗粒种，其制备方法是：将发芽破胸的稻谷用马铃薯20％、白糖2％、磷酸二氢钾0.1％、硫酸镁0.05％混合液煮沸杀青，拌入3％石膏粉，用盐水瓶分装灭菌；冷却后接种，置22-32℃温度下培养，三天后进行第一次摇瓶，以后每天摇一次瓶并检查纯度，直至菌丝充满谷粒，栽培种用同样的方法扩大培养1次；栽培袋的制作方法是：栽培料：取马尾松新鲜木屑400千克、棉壳100千克、麦麸100千克、白糖10千克、磷酸二氢钾0.75千克、硫酸镁0.5千克、马尾松林地腐殖质土100千克、明矾5千克，含水量60％，PH自然；配制消毒杀虫杀螨剂：配比为40％甲醛溶液900毫升、无水乙醇50毫升、40％乐果20毫升、80％敌敌畏20毫升、20％三氯杀螨醇10毫升，配制方法是将乐果、敌敌畏、三氯杀螨醇分别量取，倒入一个非金属容器中，加入酒精，摇匀后加入甲醛，充分摇匀后装瓶密封，置阴凉干燥处避光保存，用时摇匀。
培养料采用两次灭菌方法。培养料混合拌匀调湿后，迅速装入75cm*45cm纤维袋中，离地建堆，堆四周用塑料膜密封，设保温层，保温层外加通过地脚螺栓固定的双层密网，利用风机加压使高压蒸汽在蒸汽发生器和培养料中快速循环加热，培养料在1个小时达到55℃，2小时达到70℃，3小时达到85℃，并保持4小时，经这样预蒸，干湿均匀的培养料翻凉后，分装塑料袋，十袋装入一纤维袋；再进行第二次蒸汽消毒，保持温度100℃10小时；接种方法为：接种前将菌种摇散，火焰消毒瓶口，打开塑料袋后，用手指隔膜在基料面上挖一小孔，菌种倒入孔内，用手指隔膜挤捏培养料盖严菌种，再用扁形环套口，袋口反折后用橡皮筋扎口，接种后的菌袋袋口朝下，就地接种就地培养。培养温度为22-32℃，湿度为70％，菌丝基本布满培养料，气温稳定在32℃以下时打孔通气；打孔通气的方法是：将长满菌丝的菌筒用特制的高温电烙铁在菌筒的下部打三至四个手指粗的孔通气，打孔后的菌筒排放在底铺有塑料膜的干净河沙上，坚持早晚喷洒消毒杀虫杀螨剂，温度保持在25-32℃。
出菇管理：1.制作发酵料土 选田土或菜土晒干过筛，每1000千克土放人粪100千克、过磷酸钙20千克、马尾松树木屑100千克、明矾10千克、呋喃丹10千克，拌匀调水至含水量60％，堆成长条，上盖透明塑料膜，利用太阳光照发热发酵半个月，建堆后第七天进行第一次翻堆至预先消毒杀虫的空地上，表面喷洒5％的消毒杀虫杀螨剂，打通气孔至料底，盖塑料膜，第10天将料土二次翻堆，15天后晒干备用；2.出菇场地消毒 选排水良好座北朝南的空地，搭建阴蓬，开好排水沟，气温稳定在35度以下后，场地整箱喷洒消毒杀虫杀螨剂，盖膜48小时进行场地消毒；3.覆土出菇 发好菌后将菌筒脱袋，排放在消毒过的出菇场地上，每袋菌筒间留间隙4cm，边排边盖好塑料膜。待菌筒恢复伤口并长菌丝时掀膜盖发酵调湿的料土2cm，土面喷5％的消毒杀虫杀螨剂，盖膜，菌丝再次长出土表时，掀膜盖一层发酵料土和耕作层以下新土各50％的混合土2cm，喷3％的消毒杀虫杀螨剂，盖膜，箱面长满菌丝时，掀膜，盖蚕豆大小不含腐殖的松林土2cm，土壤含水量为20％，再喷2％的消毒杀虫杀螨剂，盖膜培养菌丝，进入此层土壤的菌丝粗壮浓白，待菌丝长到接近土表时，箱面种植消毒发芽的禾本科植物草籽，盖蚕豆大小的松林土1cm，湿度控制在60％，并喷1％的消毒杀虫杀螨剂，再盖膜，当土面出现菌丝时，用消毒过的竹片将塑料膜架高，并喷0.5％尿素、0.15％磷酸二氢钾、0.1％硫酸镁营养液促进禾本科植物生长，待草长到二叶一心时喷雾状水，采用白天盖膜，晚上盖无纺布，早晨6-8时不盖物，创造有利出菇的条件，促进子实体的形成和生长。草长至四叶一心时，进行割鞘处理，由于所施营养液对藻类植物生长有促进作用，床面很快会长出绿藻，此时可将禾本科植物剪稀。外生菌根菌，特别是乳菌类外生菌根菌，菌丝脆易断，出菇要求高而恒定的湿度。出菇时覆土并种植禾本科植物或绿藻避免喷水时伤菌丝，并调节湿度。
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