對似胰島素生長因子Ｉ受體專一之抗體 ANTIBODIES TO INSULIN-LIKE GROWTH FACTOR I RECEPTOR

专利汇可以提供對似胰島素生長因子Ｉ受體專一之抗體 ANTIBODIES TO INSULIN-LIKE GROWTH FACTOR I RECEPTOR专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本發明係關於專一地與似胰島素生長因子I受體(IGF-IR)，最好是人類IGF-IR結合的抗體及其 抗原 -結合部份。本發明亦關於人類抗-IGF-IR抗體，包括嵌合型、雙專一的、衍生的、單鏈抗體，或部份的融合蛋白質。本發明亦關於，衍生自抗-IGF-IR抗體之經過分離的重和輕鏈免疫球蛋白分子，以及編碼這類分子的核酸分子。本發明亦關於製造抗-IGF-IR抗體的方法，包括這些抗體的醫藥組合物，以及使用該抗體及其組合物來診斷和治療的方法。本發明亦提供使用編碼重及/或輕鏈免疫球蛋白分子之核酸分子，其包括人類抗-IGF-IR抗體的基因治療方法。本發明亦關於基因治療方法和包括本發明之核酸分子之基因轉殖的動物。 The present invention relates to antibodies and antigen-binding portions thereof that specifically bind to insulin-like growth factor I receptor (IGF-IR), which is preferably human IGF-IR. The invention also relates to human anti-IGF-IR antibodies, including chimeric, bispecific, derivatized, single chain antibodies or portions of fusion proteins. The invention also relates to isolated heavy and light chain immunoglobulin molecules derived from anti-IGF-IR antibodies and nucleic acid molecules encoding such molecules. The present invention also relates to methods of making anti-IGF-IR antibodies, pharmaceutical compositions comprising these antibodies and methods of using the antibodies and compositions thereof for diagnosis and treatment. The invention also provides gene therapy methods using nucleic acid molecules encoding the heavy and/or light immunoglobulin molecules that comprise the human anti-IGF-IR antibodies. The invention also relates to gene therapy methods and transgenic animals comprising nucleic acid molecules of the present invention. 【創作特點】 本發明提供經過分離的抗體或其抗原-結合部份，其與IGF-IR結合，較佳的是與靈長類和人類的IGF-IR結合，且更佳的是其為人類抗體。本發明提供抗-IGF-IR抗體，其抑制IGF-I或IGF-II與IGF-IR的結合作用，並亦提供激活IGF-IR的抗-IGF-IR抗體。
本發明提供包括抗體和在藥學上可接受之載劑的醫藥組合物。該醫藥組合物尚包括其他的組份，像是抗-腫瘤製劑或顯影製劑。
本發明亦提供診斷和治療的方法。診斷方法包括使用抗-IGF-IR抗體，診斷表現IGF-IR之組織的存在或 位置 。治療方法包括對需要其之個體投與該抗體。最好是連同其他治療劑一起投藥。
本發明提供經過分離的細胞株，像是融合瘤，其產製抗-IGF-IR抗體。
本發明亦提供編碼抗-IGF-IR抗體之重和/或輕鏈，或其抗原-結合部份的核酸分子。本發明提供包括該核酸分子的載體和宿主細胞，以及重組產製由該核酸分子編碼之多肽的方法。
亦提供表現抗-IGF-IR抗體之重和/或輕鏈，或其抗原-結合部份的非-人類基因轉殖之動物。本發明亦提供以有效含量之編碼抗-IGF-IR抗體之重和/或輕鏈，或其抗原-結合部份的核酸分子，治療需要其之個體的方法。
發明詳細說明
定義和普通技術
除非在本文中另行定義，關於在本發明中使用的科學和技術名詞應具有熟諳此藝者普遍瞭解的意義。此外，除非視情況另有需求，單數名詞應包括複數，且複數名詞應包括單數。一般而言，關於在本文中描述的細胞和組織培養技術、分子 生物 學、免疫學、 微生物 學、遺傳學和蛋白質與核 酸化 學，以及雜交作用，均為已熟知的那些，並在此項技藝中經常使用。除非另行指示，通常根據此項技藝中已熟知的傳統方法進行本發明之方法和技術，並如同在本說明書中提及和討論的各種普通和更專門之參考文獻中描述的。參見，例如Sambrook等人，Molecular Cloning: A Laboratory Manual,第2版,Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.(1989)，和Ausubel等人,Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates(1992)，以及Harlow和Lane Antibodies: A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.(1990)，以引用的方式併入本文中。根據製造者的說明書進行酵素反應和純化技術，如同在此項技藝中普遍完成的，或如同在本文中描述的。關於所使用的術語，以及在本文中描述的實驗室程序和分析化學、合成有機化學的技術，以及醫學和藥物化學，均為已熟知的那些，並在此項技藝中經常使用。關於化學合成、化學分析、藥學製備、調配和遞送，和患者的處理，均使用標準技術。
除非另行指示，應瞭解下列的名詞將具有下列的意義："多肽"一詞，包括天然或人造的蛋白質、蛋白質 片段 和蛋白質序列的多肽類似物。多肽可以是單體或聚合的。
"經過分離的蛋白質"或"經過分離的多肽"一詞，是由於其衍生起源或來源(1)未與在其天然狀態下伴隨其之天然連結的組份連結，(2)不含其他得自相同物種的蛋白質，(3)由得自不同物種之細胞表現，或(4)並非天然存在的蛋白質或多肽。因此，以化學方式合成，或在與其天然起源之細胞不同的細胞系統中合成的多肽，將是與其天然連結之組份"分離的"。亦可藉著分離，使用此項技藝中已熟知的蛋白質純化技術，使蛋白質成為實質上不含天然連結之組份的。
當試樣的至少大約60至75%，顯示為單一種的多肽時，該蛋白質或多肽是"實質上純的"、"實質上均一的"或"實質上經過純化的"。多肽或蛋白質可以是單體或多聚體的。實質上純的多肽或蛋白質通常將包括大約50%、60%、70%、80%或90%重量/重量的蛋白質試樣，較常見的是大約95%，而最好是超過99%純的。可藉著此項技藝中已熟知的各種方法，指示蛋白質純度或均一性，像是蛋白質試樣的聚丙烯醯胺凝膠電泳，接著以此項技藝中已熟知的染料將凝膠 染色 ，使單一多肽譜帶呈像。為了某種目的，可藉著使用HPLC或純化技藝中已熟知的其他方法，提供較高的解析度。
當在本文中使用"多肽片段"一詞時，意指具有胺基-終端及/或羧基-終端之刪除，但剩下的胺基酸序列仍與在天然存在之序列中相對應的位置相同的多肽。片段通常是至少5、6、8或10個胺基酸長，較佳的是至少14個胺基酸長，更佳的是至少20個胺基酸長，通常是至少50個胺基酸長，再更佳的是至少70、80、90、100、150或200個胺基酸長。
當在本文中使用"多肽類似物"一詞時，意指包括至少25個胺基酸之斷片的多肽，其對胺基酸序列的一部份具有相當大同一性，並具有至少一種下列的特性：(1)在適當的結合條件下，與IGF-IR專一地結合，(2)阻斷IGF-I或IGR-II與IGF-IR結合的能 力 ，或(3)在活體外或在活體內降低IGF-IR細胞之表面表現或酪胺酸 磷酸 化作用的能力。通常，相對於天然存在的序列，多肽類似物包括保留性胺基酸置換(或插入或刪除)。類似物通常是至少20個胺基酸長，較佳的是至少50、60、70、80、90、100、150或200個胺基酸長或更長，且通常可以像全長的天然存在之多肽一樣長。
較佳的胺基酸取代是下列的那些：(1)降低對蛋白 水 解 的感受性，(2)降低對 氧 化作用的感受性，(3)為了形成蛋白質複合物，以及(4)賦與或 修改 這類類似物其他的物理化學或功能特性。類似物可包括與天然存在之肽序列不同的序列的各種突變蛋白。例如，可在天然存在的序列中(最好是在多肽中在功能部位(們)之外形成分子間接觸的部份)，進行單一或多重的胺基酸取代(最好是保留性胺基酸置換)。保留性胺基酸置換實質上不應改變親代序列的結構特徵(例如，置換的胺基酸不應有破壞在親代序列中出現之螺旋的傾向，或瓦解親代序列特有的其他類型之二級結構)。在Proteins, Structures and Molecular Principles(Creighton編輯,W.H. Freeman and Company, New York (1984))；Introduction to Protein Structure(C. Branden和J. Tooze編輯,Garland Publishing, New York, N.Y. (1991))；以及Thornton等人,Nature 354:105 (1991)中描述了此項技藝認可之多肽二級和三級結構的實例，分別以引用的方式併入本文中。
經常在藥學工業中使用非-肽類似物，作為具有類似那些模板肽之特性的藥物。將這些類型的非-肽化合物稱為"肽模仿物"或"肽模仿物"。Fauchere, J. Adv. Drug Res. 15:29(1986);Veber和Freidinger TINS 392頁(1985)；以及Evans等人J. Med. Chem. 30:1229 (1987)，以引用的方式併入本文中。經常是利用電腦化分子塑型的幫助，來發展這類化合物。可使用在結構上類似在治療上有效之肽的肽模仿物，產生相等的治療或預防效果。一般而言，肽模仿物在結構上類似典型的多肽(也就是具有想要之生化特性或藥學活性的多肽)，像是人類抗體，但有一或多個肽鍵結，可視需要藉著此項技藝中已熟知的方法，被選自包括：-CH2NH-、-CH2S-、-CH2-CH2-、-CH=CH-(順和反)、-COCH2-、-CH(OH)CH2-和-CH2SO-的鍵結置換。亦可使用以相同類型的D-胺基酸系統性取代一致序列的一或多種胺基酸(例如以D-離胺酸代替L-離胺酸)，產製較穩定的肽。此外，亦可藉著此項技藝中已知的方法，產製受限制的肽，包括一致序列或實質上相同的一致序列變化(Rizo和Gierasch Ann. Rev. Biochem. 61:387(1992)，以引用的方式併入本文中)；例如藉著加入能夠形成分子內二硫橋的內部半胱胺酸殘基，其使肽環化。
"免疫球蛋白"是四聚的分子。在天然存在的免疫球蛋白中，每個四聚體由兩對相同的多肽鏈所組成，每對具有一個"輕"鏈(大約25 kDa)和一個"重"鏈(大約50-70 kDa)。每個鏈的胺基-終端部份包括大約100至110或更多個胺基酸的可變區，主要負責抗原的認知。每個鏈的羧基-終端部份限定為恆定區，主要負責效應物功能。人類輕鏈被分類為κ和λ輕鏈。重鏈被分類為μ、Δ、γ、α或ε，並分別定義抗體之同型物為IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。在輕和重鏈之中，藉著大約12或更多個胺基酸的"J"區，連接可變和恆定區，而重鏈亦包括大約10或更多個胺基酸的"D"區。通常參見Fundamental Immunology第7章(Paul, W.編輯，第2版Raven Press, N.Y.(1989))(為了所有的目的，全部以引用的方式併入本文中)。每個輕/重鏈對的可變區形成抗體結合位置，使得整個免疫球蛋白具有兩個結合位置。
免疫球蛋白鏈顯示相對上較保留之架構區(FR)的相同共同結構，藉著三個高變區連接，亦稱為互補性決定區或CDRs。得自每一對兩個鏈的CDRs，與架構區排成一直線，而能夠與特定的抗原決 定位 結合。從N-終端到C-終端，輕和重鏈兩者均包括功能部位FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。每個功能部位的胺基酸分派，係根據Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest(National Institutes of Health, Bethesda, Md.(1987和1991))，或Chothia & Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917(1987);Chothia等人,Nature 342:878-883 (1989)的定義。
"抗體"意指完整的免疫球蛋白或其抗原-結合部份，其與完整抗體競爭專一結合作用。可藉著重組DNA技術，或藉著完整抗體的酵素或化學切開作用，產製抗原-結合部份。抗原-結合部份特別包括Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、dAb和互補性決定區(CDR)片段、單鏈抗體(scFv)、嵌合型抗體、完全體(diabodies)，以及含有至少一部份免疫球蛋白的多肽，該免疫球蛋白足以賦與該多肽專一的抗原結合。
當在本文中使用時，稱為例如2.12.1、2.13.2、2.14.3、4.9.2、4.17.3和6.1.1的抗體，為衍生自相同名稱之融合瘤的抗體。例如抗體2.12.1係衍生自融合瘤2.12.1。
Fab片段是單價片段，由VL、VH、CL和CH I功能部位所組成；F(ab')2片段為二價的片段，包括兩個Fab片段，在絞鏈區藉著二硫橋連接；Fd片段由VH和CH1功能部位所組成；Fv片段則由抗體單臂的VL和VH功能部位所組成；而dAb片段(Ward等人,Nature 341:544-546, 1989)則由VH功能部位所組成。
單鏈抗體(scFv)是其中經由能夠將其製成單一蛋白質鏈的合成交聯劑，使VL和VH區配對，而形成單價分子的抗體(Bird等人,Science 242:423-426, 1988，和Huston等人,Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 5879-5883, 1988)。完全體是二價的、雙重專一性的抗體，其中在單一多肽鏈上表現VH和VL功能部位，但使用的交聯劑太短，以致於不容許在相同鏈上的兩個功能部位之間發生配對，藉此迫使該功能部位與另一個鏈的互補功能部位配對，並產生兩個抗原結合位置(參見，例如Holliger, P.等人,Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448, 1993，和Poljak, R.J.等人,Structure2:1121-1123, 1994)。可將一或多個CDRs共價或非-共價地併入分子內，使其成為免疫黏附素(immunoadhesin)。免疫黏附素可併入CDR(s)，成為較大多肽鏈的一部份，可將CDR(s)與其他多肽鏈共價連接，或可非共價地併入CDR(s)。CDRs容許免疫黏附素專一地與感興趣的特定抗原結合。
抗體可具有一或多個結合位置。如果有一個以上的結合位置，結合位置可以是彼此相同的，或可以是不同的。例如，天然存在的免疫球蛋白具有兩個相同的結合位置，單鏈抗體或Fab片段具有一個結合位置，而"雙重專一的"或"雙重功能的"抗體具有兩個不同的結合位置。
"經過分離的抗體"是(1)並未與天然存在之組份連接，包括在自然狀態下伴隨著它的其他天然連接之抗體，(2)不含得自相同物種的其他蛋白質，(3)由得自不同物種的細胞表現，或(4)在自然界中不存在的抗體。經過分離之抗體的實例，包括已經使用IGF-IR(已經分離的抗體)，以親和力純化的抗-IGF-IR抗體，已經藉著融合瘤或其他細胞株，在活體外合成的抗-IGF-IR抗體，以及衍生自基因轉殖老鼠的人類抗-IGF-IR抗體。
"人類抗體"一詞，包括所有具有一或多個衍生自人類免疫球蛋白序列之可變和恆定區的抗體。在較佳的具體實施例中，所有的可變和恆定功能部位均衍生自人類的免疫球蛋白序列(完全的人類抗體)。可藉著各種方法，像是在下文中描述的，來製備這些抗體。
人類化抗體是衍生自非-人類物種的抗體，其中已經使在重和輕鏈之架構和恆定功能部位中的某些胺基酸突變，而得以避免或廢止在人類中的免疫反應。或者，可藉著將得自人類抗體的恆定功能部位與非-人類物種的可變功能部位融合，來產製人類化的抗體。可在美國專利第6,054,297號、5,886,152號和5,877,293號中，找到如何製造人類化抗體的實例。
"嵌合型抗體"一詞意指含有一或多個得自一個抗體的區域，以及一或多個得自一或多個其他抗體的區域的抗體。在較佳的具體實施例中，一或多個CDRs衍生自人類抗-IGF-IR抗體。在一個更佳的具體實施例中，所有的CDRs均衍生自人類抗-IGF-IR抗體。在另一個較佳的具體實施例中，混合得自一個以上的人類抗-IGF-IR抗體之CDRs，並與嵌合型抗體相配。例如，嵌合型抗體可包括得自第一個人類抗-IGF-IR抗體之輕鏈的CDR1，可使其與得自第二個人類抗-IGF-IR抗體之輕鏈的CDR2和CDR3混合，而得自重鏈的CDRs則可衍生自第三個抗-IGF-IR抗體。此外，架構區可衍生自相同的抗-IGF-IR抗體其中之一、一或多個不同的抗體，像是人類抗體，或衍生自人類化的抗體。
"中和抗體"或"抑制性抗體"，為抑制IGF-IR與IGF-I結合的抗體，此時過量的抗-IGF-IR抗體，降低了與IGF-IR結合之IGF-I含量至少大約20%。在較佳的具體實施例中，抗體降低與IGF-IR結合之IGF-I的含量至少40%，更佳的是60%，再更佳的是80%，或再更佳的是85%。可藉著熟諳此藝者已知的任何方法來測量結合作用的降低，例如，以在活體外的競爭性結合測定來測量之。在下文的實例Ⅳ中提供了測量在IGF-I與IGF-IR之結合作用上的降低的實例。
"激活抗體"是在加至表現IGF-IR的細胞、組織或生物中時，激活IGF-IR至少大約20%的抗體。在較佳的具體實施例中，抗體激活IGF-IR活性至少40%，更佳的是60%，再更佳的是80%，或再更佳的是85%。在更佳的具體實施例中，在IGF-I或IGF-II的存在下加入激活抗體。在另一個較佳的具體實施例中，藉著定出IGF-IR之酪胺酸自體磷酸化作用的含量，來測量激活抗體的活性。
可由熟諳此藝者，依據本說明書的教導，迅速地製備抗體之片段或類似物。片段或類似物的胺基-和羧基終端最好出現在接近有功能之功能部位的分界處。可藉著將核苷酸及/或胺基酸序列數據與公告或專利的序列資料庫相比較，確認結構和功能上的功能部位。最好是使用電腦化的比較方法，來確認序列主題，或預測蛋白質構形功能部位，其出現在具有已知結構及/或功能的其他蛋白質中。確認折疊成已知之三維結構的蛋白質序列的方法是已知的。Bowie等人,Science 253:164 (1991)。
當在本文中使用"表面等離子體激光共振"一詞時，意指容許藉著檢測在生物感應器矩陣內，在蛋白質濃度上的改變，而分析即時生物專一之交互作用的光學現象，例如使用BIAcore系統(Pharmacia Biosensor AB, Uppsala, Sweden and Piscataway, N.J.)。關於進一步的說明，參見Jonsson, U.等人(1993)Ann. Biol. Clin. 51:19-26;Jonsson, U.等人(1991)Biotechniques 11:620-627; Johnsson, B.等人(1995)J. Mol. Recognit. 8:125-131；以及Johnsson, B.等人(1991)Anal. Biochem. 198:268-277。
"Koff"一詞意指抗體從抗體/抗原複合物中解離的分開率常數。
"Kd"一詞意指特定抗體-抗原交互作用的解離常數。
"抗原決定位"一詞意指任何能夠與免疫球蛋白或T-細胞受體專一結合的蛋白質決定位。抗原決定位的決定位，通常由分子之具有化學活性的表面基團所組成，像是胺基酸或糖側鏈，且通常具有獨特的三維結構特徵，以及獨特的電荷特徵。當解離常數1 μM時，較佳的是100 nM，而最佳的是10 nM，則說抗體專一地與抗原結合。
當在本文中使用時，二十個傳統的胺基酸及其縮寫遵循傳統的用法。參見Immunology-A Synthesis(第2版,E.S. Golub和D.R. Gren編輯,Sinauer Associates, Sunderland, Mass.(1991))，以引用的方式併入本文中。二十個傳統胺基酸的立體異構物(例如D-胺基酸)、非天然的胺基酸，像是α-,α-二經取代之胺基酸、N-烷基胺基酸、乳酸和其他非傳統的胺基酸，亦可能是本發明之多肽的適當組份。非傳統胺基酸的實例，包括：4-羥基脯胺酸、γ-羧基穀胺酸、ε-N,N,N-三甲基離胺酸、ε-N-乙醯基離胺酸、O-磷酸絲胺酸、N-乙醯基絲胺酸、N-甲醯基甲硫胺酸、3-甲基組胺酸、5-羥基離胺酸、s-N-甲基精胺酸，以及其他類似的胺基酸和亞胺基酸(例如4-羥基脯胺酸)。在本文中使用的多肽符號學中，根據標準的用法和習慣，左手的方向是胺基終端的方向，而右手的方向是羧基-終端的方向。
當在本文中提及"多核苷酸"一詞時，意指長度至少10個鹼基的核苷酸之聚合形式，核糖核苷酸或脫氧核苷酸，或兩種類型之核苷酸的修改形式。該名詞包括單和雙股形式的DNA。
當在本文中使用"經過分離的多核苷酸"一詞時，應意指基因組、cDNA或合成來源，或其某些組合的多核苷酸，由於其來源，該"經過分離的多核苷酸"(1)未與所有或一部份的天然在其中發現該"經過分離之多核苷酸"的多核苷酸連接，(2)可視需要與在自然界中並未與其連接之多核苷酸連接，或(3)在自然界中並未以較大序列的一部份存在。
在本文中提及的"寡核苷酸"一詞，包括藉著天然存在和非天然存在的寡核苷酸鍵結，連接在一起的天然存在和經過修改的核苷酸。寡核苷酸是多核苷酸的亞組，通常包括200個鹼基或更少的長度。寡核苷酸的長度最好是10至60個鹼基，而最佳的是12、13、14、15、16、17、18、19或20至40個鹼基長。寡核苷酸通常是單股的，例如就探針而言，雖然寡核苷酸也可以是雙股的，例如用來建構基因突變種。本發明之寡核苷酸可以是有意義或反義的寡核苷酸。
在本文中提及的"天然存在的核苷酸"一詞，包括脫氧核糖核苷酸和核糖核苷酸。在本文中提及的"經過修改的核苷酸"一詞，包括帶有經過修改或取代之糖基的核苷酸，及其類似物。在本文中提及的"寡核苷酸鍵結"一詞，包括諸如硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、硒代磷酸酯(phosphoroselenoate)、二硒代磷酸酯(phosphorodiselenoate)、縮苯胺硫代磷酸酯(phosphoroanilothioate)、苯胺酸磷酸酯(phosphoraniladate)、磷醯胺酸之類的寡核苷酸鍵結，及其類似物。參見，例如LaPlanche等人Nucl. Acids Res. 14:9081(1986);Stec等人J. Am. Chem. Soc. 106:6077(1984);Stein等人Nucl. Acids Res. 16:3209 (1988);Zon等人Anti-Cancer Drug Design 6:539 (1991); Zon等人Oligonucleotides and Analogues: A Practical Approach第87-108頁(F. Eckstein編輯,Oxford University Press, Oxford England (1991))；Stec等人美國專利第5,151,510號；Uhlmann和Peyman Chemical Reviews 90:543 (1990)，將其揭示內容以引用的方式併入本文中。若需要，寡核苷酸可包括檢測用的標記。
"以可操作之方式連接的"序列，包括與感興趣之基因相鄰的表現控制序列，和以反向作用，或在遠處控制感興趣之基因的表現控制序列。當在本文中使用"表現控制序列"一詞時，意指多核苷酸序列，其為完成表現，以及加工處理與其連接之密碼序列所必需的。表現控制序列包括適當的轉錄開始、終止、啟動基因和促進子序列；有效的RNA加工處理信號，像是接合和聚腺苷酸化作用信號；使細胞質mRNA穩定的序列；促進轉譯效力的序列(也就是Kozak一致序列)；促進蛋白質穩定性的序列；以及在想要時，促進蛋白質分泌的序列。這類控制序列的性質，依據宿主生物而有所不同；在原核生物中，這類控制序列通常包括啟動基因、核糖體結合位置和轉錄終止序列；在真核生物中，這類控制序列通常包括啟動基因和轉錄終止序列。"控制序列"一詞企圖最少包括其出現對於表現和加工處理而言是必要的所有組份，且亦可包括額外的組份，其存在是有利的，例如前導序列和融合夥伴序列。
當在本文中使用"載體"一詞時，意指能夠運送已經與其連接之其他核酸的核酸分子。一種類型的載體為"質體"，意指環狀雙股的DNA環，可將額外的DNA斷片連接到其中。其他類型的載體為病毒載體，其中可將額外的DNA斷片連接到病毒基因組內。某些載體能夠在導入其之宿主細胞內自動複製(例如，具有細菌複製起點的細菌載體，以及附加體的哺乳動物載體)。其他的載體(例如非-附加體的哺乳動物載體)，當導入宿主細胞內時，可以被整合到宿主細胞的基因組內，並藉此與宿主基因組一起複製。此外，某些載體能夠指揮以可操作方式與其連接之基因的表現。在本文中將這類載體稱為"重組表現載體"(或簡稱為"表現載體")。一般而言，用於重組DNA技術中的表現載體，通常是以質體之形式。在本說明書中，"質體"和"載體"可交替使用，因為質體是最常用的載體形式。然而，本發明亦企圖包括其他形式的表現載體，像是病毒載體(例如複製 缺陷 的逆轉錄病毒、腺病毒和與腺-有關的病毒)，其提供相等的功能。
當在本文中使用"重組的宿主細胞"(或簡稱為"宿主細胞")時，企圖意指已經在其中導入重組表現載體的細胞。請瞭解這類名詞不僅企圖意指特定的個體細胞，還包括這類細胞的子代。因為某些修改可能發生在後續的世代中，歸因於突變或環境的影響，所以這類子代事實上可能並非與親代相同，但在本文中使用時，仍包括在"宿主細胞"一詞的範圍內。
在本文中提及的"選擇性雜交"一詞，意指可檢測和專一的結合。根據本發明之多核苷酸、寡核苷酸及其片段，在將與非專一之核酸可檢測的結合減至最少可察覺量的雜交和沖洗條件下，選擇性地與核酸股雜交。可使用"高嚴格度"或"高度嚴格的"條件，達到選擇性的雜交條件，如同此項技藝中已知並在本文中討論的。"高嚴格度"或"高度嚴格的"條件是將多核苷酸與其他的多核苷酸一起，可將其中一個多核苷酸固定在諸如膜之類的固體表面上，在6X SSPE或SSC，50%甲醯胺，5X登哈特氏(Denhardt's)試劑，0.5% SDS，100微克/毫升變性的、弄斷的鮭精DNA的雜交緩衝溶液中，在42℃的雜交溫度下培養12-16小時，接著在55℃下使用1X SSC，0.5% SDS之沖洗緩衝溶液沖洗兩次的方法。亦參見Sambrook等人，在前，第9.50-9.55頁。
"序列同一性百分比"一詞，在核酸序列的前後文中，意指當為了最大的一致性而排成一直線時，在兩個序列中相同的殘基。序列同一性比較的長度，可以是在至少大約9個核苷酸的股中，通常是至少大約18個核苷酸，更常見的是至少大約24個核苷酸，代表性的是至少28個核苷酸，更具代表性的是至少大約32個核苷酸，而最好是至少大約36、48或更多個核苷酸。在此項技藝中已知有許多不同的演 算法 ，可用來測量核苷酸序列的同一性。例如，可使用FASTA、Gap或Bestfit比較多核苷酸序列，其為在Wisconsin套裝軟體10.0版，Genetics Computer Group (GCG), Madison Wisconsin中的程式。FASTA包括，例如程式FASTA2和FASTA3，提供在問題和搜尋序列之間，最佳部份重疊之區域的排列和序列同一性百分比(Pearson, Methods Enzymol. 183:63-98 (1990); Pearson, Methods Mol. Biol. 132:185-219 (2000); Pearson, Methods Enzymol. 266:227-258 (1996); Pearson, J. Mol. Biol. 276:71-84 (1998)；以引用的方式併入本文中)。除非另行 指定 ，使用特定程式或演算法的預設參數。例如，可使用FASTA及其預設參數(字之尺寸為6，以及計分矩陣的NOPAM因子)，或使用Gap及其預設參數，如同在GCG 6.1版中提供的，以引用的方式併入本文中，定出在核酸序列之間的序列同一性百分比。
提及核酸序列時，除非另行指定，包括其互補物。因此，提及具有特定序列的核酸分子時，應瞭解包括其互補股，具有其互補之序列。
在分子生物的技藝中，研究者交替地使用"序列同一性百分比"、"序列類似性百分比"和"序列同種性百分比"一詞。在本申請案中，僅就核酸序列而言，這些名詞應具有相同的意義。
當提及核酸或其片段時，"相當大的類似性"或"相當大的序列類似性"一詞表示當將適當的核苷酸插入或刪除與其他核酸最適切地排成一直線時，按照上文的討論，藉著任何已熟知的序列同一性之演算法，像是FASTA、BLAST或Gap測量，在至少大約85%，較佳的是至少大約90%，而更佳的是至少大約95%、96%、97%、98%或99%的核苷酸鹼基中，有核苷酸序列的同一性。
當應用在多肽上時，"相當大的同一性"意指當最適切地排列時，像是藉著程式GAP或BESTFIT，使用預射間隙重，兩個肽序列共享至少75%或80%的序列同一性，較佳的是至少90%或95%序列同一性，再更佳的是至少98%或99%序列同一性。不相同的殘基位置，最好是差異僅在於保留性胺基酸置換。"保留性胺基酸置換"是其中胺基酸殘基，被另一個具有帶有類似化學特性(例如電荷或忌水性)之側鏈(R基團)的胺基酸殘基所取代。一般而言，保留性胺基酸置換實質上將不會改變蛋白質的功能特性。在其中二或多個胺基酸序列由於保留性置換而彼此不同的案例中，可能向上調整序列同一性百分比或類似性的程度，以便修正取代作用的保留性質。進行該調整的方法為熟諳此藝者已熟知的。參見，例如Pearson, Methods Mol. Biol. 24:307-31 (1994)，以引用的方式併入本文中。具有帶類似化學性質之側鏈的胺基酸組別的實例，包括1)脂肪族側鏈：甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、亮胺酸和異亮胺酸；2)脂肪族-羥基側鏈：絲胺酸和蘇胺酸；3)含有醯胺之側鏈：天冬醯胺和穀胺醯胺；4)芳香族側鏈：苯丙胺酸、酪胺酸和色胺酸；5)鹼性側鏈：離胺酸、精胺酸和組胺酸；以及6)含硫之側鏈為半胱胺酸和甲硫胺酸。較佳的保留性胺基酸置換組為：纈胺酸-亮胺酸-異亮胺酸；苯丙胺酸-酪胺酸；離胺酸-精胺酸；丙胺酸-纈胺酸；穀胺酸-天冬胺酸和天冬醯胺-穀胺醯胺。
或者，保留性置換為任何在在Gonnet等人,Science 256:1443-45 (1992)中揭示的PAM250對數-可能性矩陣中，具有正值的改變，以引用的方式併入本文中。"適度保留性"置換是任何在PAM250對數-可能性矩陣中具有非負值的改變。
對多肽而言，序列類似性亦稱為序列同一性，通常是使用序列分析軟體來測量。蛋白質分析軟體使用指派給各種取代、刪除和其他修改，包括保留性胺基酸置換的類似性測量，將類似的序列配對。例如，GCG含有諸如"Gap"和"Bestfit"之類的程式，可與預設參數一起使用，定出在密切相關的多肽之間，像是得自生物之不同物種的同種多肽，或是在野外型蛋白質與其突變蛋白之間的序列同種性或序列同一性。參見，例如GCG 6.1版。亦可使用利用預設或建議之參數的FASTA，在GCG 6.1版中的一個程式，來比較多肽序列。FASTA(例如FASTA2和FASTA3)提供在問題和搜尋序列之間，最佳部份重疊之區域的排列和序列同一性百分比(Pearson (1990);Pearson (2000))。當比較本發明之序列與含有得自不同生物之大量序列的資料庫時，其他較佳的演算法為電腦程式BLAST，尤其是使用預設參數的blastp或tblastn。參見，例如Altschul等人,J. Mol. Biol. 215:403-410 (1990);Altschul等人,Nucleic Acids Res. 25:3389-402 (1997)；以引用的方式併入本文中。
比較同種性之多肽序列的長度，通常將是至少大約16個胺基酸殘基，經常是至少大約20個殘基，更常見的是至少大約24個殘基，代表性的是至少大約28個殘基，而更佳的是大約35個殘基以上。當搜尋含有得自大量不同生物之序列的資料庫時，最好是比較胺基酸序列。
當在本文中使用時，"標示"或"經過標示的"一詞意指在抗體中併入其他分子。在一個具體實施例中，該標示為可檢測的標記，例如併入 放射性 標示之胺基酸，或與生物素基化部份的多肽附接，其可藉著已標記之抗生物素蛋白檢測(例如，含有螢光標記或酵素活性的鏈黴菌抗生物素蛋白，其可藉著光學或比色法來檢測)。在另一個具體實施例中，標示或標記可以是治療性的，例如藥物共軛物或毒素。各種標示多肽和糖蛋白的方法，是此項技藝中已知的，並可使用之。多肽之標示的實例，包括但不限於下列的：放射性同位素或 放射性核素 (例如 3 H、 14 C、 15 N、 35 S、 90 Y、 99 Tc、 111 In、 125 I、 131 I)、螢光標示(例如FITC、若丹明、鑭系元素 磷光 體(lanthanide phosphors)、酵素標示(例如辣根過 氧化酶 、β-半乳糖苷酶、蟲螢光素酶、鹼性磷酸酶)、化學發光標記、生物素基基團、可由二級報告者(例如亮胺酸拉鍊對序列、二級抗體的結合位置、金屬結合功能部位、抗原決定位標籤)認出的預定多肽抗原決定位、諸如釓 螯合物 之類的 磁性 製劑、毒素，像是百日咳毒素、紫杉醇(taxol)、細胞鬆弛素B、短桿菌素D、溴化乙錠、吐根鹼、絲裂菌素、依托泊苷、替尼泊苷(tenoposide)、長春新鹼、長春花鹼、秋水仙素、阿黴素(doxorubicin)、道諾紅菌素、二羥基鄰 氨 基苯 甲酸 (anthracin)二 酮 、米托蒽醌(mitoxantrone)、光神黴素、放線菌素D、1-脫氫睪酮、糖皮質 激素 、普魯卡因、丁卡因(tetracaine)、利多卡因(lidocaine)、普 萘 洛爾(propranolol)和嘌呤黴素，及其類似物或同系物。在一些具體實施例中，藉著各種長度的間隔臂附接標示，降低可能的位阻現象。
在本文中使用的"製劑"一詞，代表化學化合物，化學化合物的混合物，生物學的大分子，或由生物學材料製成的萃取物。當在本文中使用"藥學製劑或藥物"一詞時，意指當適當地投與患者時，能夠引起想要之治療效果的化學化合物或組合物。其他在本文中使用的化學名詞，根據在此項技藝中的習慣用法，例如The McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms(Parker, S.編輯,McGraw-Hill, San Francisco (1985)，合併於此以作為參考)。
當在本文中使用"抗贅生物之製劑"一詞時，意指具有在人類中抑制贅生物發育或進行之功能特性的製劑，特別是惡性(癌性的)病變，像是癌、肉瘤、淋巴瘤或白血病。轉移的抑制作用通常是抗贅生物之製劑的特性。
患者一詞包括人類和獸醫個體。
人類抗-IGF-IR抗體及其特徵
人類抗體避免某些與具有老鼠或大鼠可變及/或恆定區之抗體有關的問題。這類老鼠或大鼠衍生之序列的存在，可導致抗體的迅速清除，或可導致患者產生對抗該抗體的免疫反應。因此，在一個具體實施例中，本發明提供人類化的抗-IGF-IR抗體。在較佳的具體實施例中，本發明藉著將人類免疫球蛋白基因導入囓齒類中，使得該囓齒類產製完整的人類抗體，而提供完整的人類抗-IGF-IR抗體。更佳的是完整的人類抗-人類IGF-IR抗體。預期完整的人類抗-IGF-IR抗體將對老鼠或老鼠-衍生之單株抗體(Mabs)固有的免疫原性和過敏反應減至最少，並因此增加了所投與之抗體的效力和安全性。預期使用完整的人類抗體，在慢性和再發性的人類 疾病 ，像是 炎症 反應和癌症之治療上，提供了相當大的利益，該疾病可能需要重覆的抗體投藥。在另一個具體實施例中，本發明提供不與互補物的結合抗-IGF-IR抗體。
在較佳的具體實施例中，抗-IGF-IR抗體為2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3或6.1.1。在另一個較佳的具體實施例中，抗-IGF-IR抗體包括輕鏈，其包括選自序列識別2、6、10、14、18或22號之胺基酸序列，或一或多個得自這些胺基酸序列的CDRs。在另一個較佳的具體實施例中，抗-IGF-IR抗體包括重鏈，其包括序列識別4、8、12、16、20或24號之胺基酸序列，或一或多個得自這些胺基酸序列的CDRs。
抗-IGF-IR抗體的組別和亞組
抗體可以是IgG、IgM、IgE、IgA或IgD分子。在較佳的具體實施例中，抗體為IgG，並為IgG1、IgG2、IgG3或IgG4亞型。在更佳的具體實施例中，抗-IGF-IR抗體為亞組IgG2。在另一個較佳的具體實施例中，抗-IGF-IR抗體是與抗體2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3或6.1.1相同的組別和亞組，其為IgG2。
可藉著此項技藝中已知的任何方法，來決定抗-IGF-IR抗體的組別和亞組。一般而言，可使用對特定組別和亞組之抗體專一的抗體，來決定抗體的組別和亞組。這類抗體是市售的。可藉著ELISA、西方墨點法和其他的技術，來決定組別和亞組。或者，可藉著定序抗體之重及/或輕鏈的全部或一部份恆定功能部位，將其胺基酸序列與各種組別和亞組的免疫球蛋白之已知的胺基酸序列相比較，並決定該抗體的組別和亞組，來決定其組別和亞組。
物種和分子選擇性
在本發明的其他觀點中，抗-IGF-IR抗體證實物種和分子選擇性。在一個具體實施例中，抗-IGF-IR抗體與人類、獼猴或恆河猴的IGF-IR結合。在較佳的具體實施例中，抗IGF-IR抗體不與老鼠、大鼠、天竺鼠、狗或兔子的IGF-IR結合。在其他較佳的具體實施例中，抗-IGF-IR抗體不與諸如小猴之類的新大陸猴物種結合。依據說明書的教導，可使用此項技藝中已熟知的方法，證實抗-IGF-IR抗體的物種選擇性。例如可使用西方墨點法、FACS、ELISA或RIA證實物種選擇性。在較佳的具體實施例中，可使用西方墨點法證實物種選擇性。
在另一個具體實施例中，抗-IGF-IR抗體對IGF-IR具有選擇性，至少比其對於胰島素受體的選擇性更高50倍。在較佳的具體實施例中，抗-IGF-IR抗體的選擇性比其對胰島素受體的選擇性更高100倍以上。在更佳的具體實施例中，抗-IGF-IR抗體對任何IGF-IR以外的其他蛋白質，不顯示任何可察覺的專一結合作用。可使用此項技藝中已熟知的方法，依據說明書的教導，證實抗-IGF-IR抗體對IGF-IR的選擇性。例如，可使用西方墨點法、FACS、ELISA或RIA證選擇性。在較佳的具體實施例中，可使用西方墨點法證實分子選擇性。
抗-IGF-IR對IGF-IR的結合親和力
在本發明的另一項觀點中，抗-IGF-IR抗體以高親和力與IGF-IR結合。在一個具體實施例中，抗-IGF-IR抗體以1×10 -8 M或更低的Kd與IGF-IR結合。在較佳的具體實施例中，抗體以1×10 -9 M或更低的Kd與IGF-IR結合。在更佳的具體實施例中，抗體以5x10 -10 M或更低的Kd與IGF-IR結合。在再更佳的具體實施例中，抗體以實質上像選自2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3或6.1.1一樣的Kd，與IGF-IR結合。在另一個較佳的具體實施例中，抗體以實質上像包括一或多個得自選自2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3或6.1.1之CDRs的抗體一樣的Kd，與IGF-IR結合。在另一個更佳的具體實施例中，抗體以實質上像包括一或多個選自序列識別2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22或24號之胺基酸序列的抗體一樣的Kd，與IGF-IR結合。在另一個較佳的具體實施例中，抗體以實質上像包括一或多個得自抗體(其包括一個選自序列識別2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22或24號之胺基酸序列)之CDRs的抗體一樣的Kd，與IGF-IR結合。
在本發明的其他觀點中，抗-IGF-IR抗體具有低解離率。在一個具體實施例中，抗-IGF-IR抗體具有1×10 -4 s -1 或更低的Koff。在較佳的具體實施例中，Koff為5x10 -5 s -1 或更低。在另一個較佳的具體實施例中，Koff實質上像選自2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3或6.1.1一樣。在另一個較佳的具體實施例中，抗體以實質上像包括一或多個得自選自2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3或6.1.1之CDRs的抗體一樣的Koff，與IGF-IR結合。在另一個更佳的具體實施例中，抗體以實質上像包括一或多個選自序列識別2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22或24號之胺基酸序列的抗體一樣的Koff，與IGF-IR結合。在另一個較佳的具體實施例中，抗體以實質上像包括一或多個得自抗體(其包括一個選自序列識別2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22號之胺基酸序列)之CDRs的抗體一樣的Koff，與IGF-IR結合。
可藉著任何此項技藝中已知的方法，定出抗-IGF-IR抗體對IGF-IR的結合親和力和解離率。在一個具體實施例中，可藉著競爭性ELISAs、RIAs或表面等離子體激光共振，像是BIAcore，來測量結合親和力。亦可藉著表面等離子體激光共振來測量解離率。在較佳的具體實施例中，藉著表面等離子體激光共振來測量結合親和力和解離率。在更佳的具體實施例中，使用BIAcore測量結合親和力和解離率。決定結合親和力和解離率的實例，在下文中描述在實例II中。
抗-IGF-IR抗體的 半衰期
根據本發明的另一個目標，抗-IGF-IR抗體在活體外或在活體內具有至少1天的半衰期。在較佳的具體實施例中，抗體或其部份具有至少3天的半衰期。在更佳的具體實施例中，抗體或其部份具有4天或更長的半衰期。在另一個具體實施例中，抗體或其部份具有8天或更長的半衰期。在其他的具體實施例中，抗體或其抗原-結合部份係衍生或經過修改，使得其具有較長的半衰期，如同在下文中討論的。在另一個較佳的具體實施例中，抗體可含有點突變，以便增加血清半衰期，像是2000年2月24日公告的WO 00/09560中描述的。
可藉著熟諳此藝者已知的任何方法來測量抗體半衰期。例如，可藉著西方墨點法、ELISA或RIA，在一段適當的期間內，測量抗體半衰期。可在任何適當的動物中，例如猴子，像是獼猴、靈長類或人類中，測量抗體的半衰期。
確認由抗-IGF-IR抗體認出的IGF-IR抗原決定位
本發明亦提供與人類抗-IGF-IR抗體相同的抗原或抗原決定位結合的抗-IGF-IR抗體。此外，本發明亦提供與人類抗-IGF-IR抗體交叉-競爭的抗-IGF-IR抗體。在較佳的具體實施例中，人類抗-IGF-IR抗體為2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3或6.1.1。在另一個較佳的具體實施例中，人類抗-IGF-IR包括一或多個得自選自2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3或6.1.1之抗體的CDRs。在另一個較佳的具體實施例中，人類抗-IGF-IR包括一個選自序列識別2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22或24號的胺基酸序列。在另一個較佳的具體實施例中，人類抗-IGF-IR包括一或多個得自抗體(其包括一個選自序列識別2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22或24號之胺基酸序列)的CDRs。在更佳的具體實施例中，抗-IGF-IR抗體為另一個人類抗體。
可使用此項技藝中已知的方法，決定抗-IGF-IR抗體是否與相同的抗原結合。例如，可藉著使用抗-IGF-IR抗體來捕捉已知與抗-IGF-IR抗體結合的抗原，像是IGF-IR，從抗體中洗脫出抗原，然後決定受試抗體是否將與該洗脫出的抗原結合，來決定受試的抗-IGF-IR抗體是否與相同的抗原結合。亦可藉著使抗-IGF-IR抗體與IGF-IR在飽和的條件下結合，然後測量受試抗體與IGF-IR結合的能力，來決定抗體是否與像抗-IGF-IR抗體一樣的抗原決定位結合。如果受試抗體能夠在與抗-IGF-IR抗體相同的時間內與IGF-IR結合，則此時受試抗體是與抗-IGF-IR抗體不同的抗原決定位結合。然而，如果受試抗體不能在同時與IGF-IR結合，則此時受試抗體是與人類抗-IGF-IR抗體相同的抗原決定位結合。可使用ELISA、RIA或表面等離子體激光共振進行該實驗。在較佳的具體實施例中，使用表面等離子體激光共振來進行該實驗。在更佳的具體實施例中，使用BIAcore。亦可決定抗-IGF-IR抗體是否與抗-IGF-IR抗體產生交叉-競爭。在較佳的具體實施例中，可藉著使用與用來測量抗-IGF-IR抗體是否能夠與其他抗-IGF-IR抗體相同之抗原決定位結合相同的方法，來決定抗-IGF-IR抗體是否與其他抗體交叉-競爭。
重和輕鏈的用法
本發明亦提供抗-IGF-IR抗體，其包括由人類κ基因編碼的可變序列。在較佳的具體實施例中，該可變序列是由V κ A27、A30或O12基因家族編碼的。在較佳的具體實施例中，該可變序列是由人類V κ A30基因家族編碼的。在更佳的具體實施例中，輕鏈包括與生殖種系V κ A27、A30或O12有不超過10個的胺基酸取代，較佳的是不超過6個的胺基酸取代，而更佳的是不超過3個的胺基酸取代。在較佳的具體實施例中，胺基酸取代為保留性置換。
序列識別2、6、10、14、18和22號提供六個抗-IGF-IR κ輕鏈之可變區的胺基酸序列。序列識別38、40和42號提供從其中衍生這六個抗-IGF-IR κ輕鏈之三個生殖種系κ輕鏈的胺基酸序列。圖1A-1C顯示這六個抗-IGF-IR抗體之輕鏈可變區的核苷酸序列，與從其中衍生它們的生殖種系序列彼此排成一直線。依據本說明書的教導，熟諳此藝者將能夠決定這六個抗-IGF-IR κ輕鏈和生殖種系κ輕鏈的編碼胺基酸序列，並決定在生殖種系序列與抗體序列之間的差異。
在較佳的具體實施例中，相對於生殖種系的胺基酸序列，抗-IGF-IR抗體的VL含有相同的胺基酸取代，像是任一或多個抗體2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3或6.1.1的VL。例如，抗-IGF-IR抗體的VL可含有一或多個與出現在抗體2.13.2中的那些相同的胺基酸取代，與出現在抗體2.14.3中的相同的其他胺基酸取代，以及與抗體4.9.2相同的其他胺基酸取代。以此方式，可混合並配對抗體結合的不同特徵，以便改變，例如抗體對IGF-IR的親和力，或其與抗原的解離率。在另一個具體實施例中，可在與在任一或多個抗體2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3或6.1.1之VL中找到的那些相同的位置處進行胺基酸取代，但寧可進行保留性胺基酸置換，也不願使用相同的胺基酸。例如，如果與生殖種系相比較，在抗體2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3或6.1.1其中之一上的胺基酸取代是穀胺酸，可保留性地取代天冬胺酸。同樣地，如果胺基酸取代為絲胺酸，可保留性地取代蘇胺酸。
在另一個較佳的具體實施例中，輕鏈包括與2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3或6.1.1之VL的胺基酸序列相同的胺基酸序列。在另一個更佳的具體實施例中，輕鏈包括與2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3或6.1.1之輕鏈的CDR區域相同的胺基酸序列。在另一個較佳的具體實施例中，輕鏈包括得自至少一個2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3或6.1.1之輕鏈的CDR區域的胺基酸序列。在另一個較佳的具體實施例中，輕鏈包括得自不同輕鏈之CDRs的胺基酸序列。在更佳的具體實施例中，該得自不同輕鏈之CDRs，係獲自2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3或6.1.1。在另一個較佳的具體實施例中，輕鏈包括選自序列識別2、6、10、14、18或22號之胺基酸序列。在其他的具體實施例中，輕鏈包括由選自序列識別1、5、9、13、17或21號之核酸序列，或編碼從那裏有1-10個胺基酸插入、刪除或取代之胺基酸序列的核酸序列編碼的胺基酸序列。該胺基酸取代最好是保留性胺基酸置換。在另一個具體實施例中，抗體或其部份包括λ輕鏈。
本發明亦提供抗-IGF-IR抗體或其部份，其包括人類重鏈或衍生自人類重鏈的序列。在一個具體實施例中，重鏈胺基酸序列係衍生自人類VHDP-35、DP-47、DP-70、DP-71或VIV-4/4.35基因家族。在較佳的具體實施例中，重鏈胺基酸序列係衍生自人類VHDP-47基因家族。在更佳的具體實施例中，重鏈包括與生殖種系VHDP-35、DP-47、DP-70、DP-71或VIV-4/4.35有不超過8個的胺基酸改變，較佳的是不超過6個的胺基酸改變，而更佳的是不超過3個的胺基酸改變。
序列識別4、8、12、16、20和24號提供六個抗-IGF-IR重鏈之可變區的胺基酸序列。序列識別30、32、34、36和44號分別提供生殖種系重鏈DP-35、DP-47、DP-70、DP-71或VIV-4之胺基酸序列，而序列識別29、31、33、35和43號則分別提供其核苷酸序列。圖2A-2D顯示這六個抗-IGF-IR抗體之可變區的核苷酸序列，與其相對應之生殖種系序列彼此排成一直線。依據本說明書的教導，熟諳此藝者將能夠決定這六個抗-IGF-IR重鏈和生殖種系重鏈的編碼胺基酸序列，並決定在生殖種系序列與抗體序列之間的差異。
在較佳的具體實施例中，相對於生殖種系的胺基酸序列，抗-IGF-IR抗體的VH含有相同的胺基酸取代，像是任一或多個抗體2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3或6.1.1的VH。與上文討論的類似，抗-IGF-IR抗體的VH可含有一或多個與出現在抗體2.13.2中的那些相同的胺基酸取代，與出現在抗體2.14.3中的相同的其他胺基酸取代，以及與抗體4.9.2相同的其他胺基酸取代。以此方式，可混合並配對抗體結合的不同特徵，以便改變，例如抗體對IGF-IR的親和力，或其與抗原的解離率。在另一個具體實施例中，可在與在任一或多個抗體2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.17.3、4.9.2或6.1.1之VH中找到的那些相同的位置處進行胺基酸取代，但寧可進行保留性胺基酸置換，也不願使用相同的胺基酸。
在另一個較佳的具體實施例中，重鏈包括與2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3或6.1.1之VH的胺基酸序列相同的胺基酸序列。在另一個更佳的具體實施例中，重鏈包括與2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3或6.1.1之重鏈的CDR區域相同的胺基酸序列。在另一個較佳的具體實施例中，重鏈包括得自至少一個2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3或6.1.1之重鏈的CDR區域的胺基酸序列。在另一個較佳的具體實施例中，重鏈包括得自不同重鏈之CDRs的胺基酸序列。在更佳的具體實施例中，該得自不同重鏈之CDRs，係獲自2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3或6.1.1。在另一個較佳的具體實施例中，重鏈包括選自序列識別4、8、12、16、20或24號之胺基酸序列。在其他的具體實施例中，重鏈包括由選自序列識別3、7、11、15、19或23號之核酸序列，或編碼從那裏有1-10個胺基酸插入、刪除或取代之胺基酸序列的核酸序列編碼的胺基酸序列。在其他的具體實施例中，該胺基酸取代最好是保留性胺基酸置換。
藉著抗-IGF-IR抗體抑制IGF-IR
IGF-I與IGF-IR結合的抑制作用
在其他的具體實施例中，本發明提供抗-IGF-IR抗體，其抑制IGF-I與IGF-IR的結合作用，或抑制IGF-II與IGF-IR的結合作用。在較佳的具體實施例中，抗-IGF-IR抗體是人類抗體。在另一個具體實施例中，抗體或其部份以不超過100 nM的IC50抑制在IGF-IR與IGF-I之間的結合作用。在較佳的具體實施例中，IC50不超過10 nM。在更佳的具體實施例中，IC50不超過5 nM。可藉著此項技藝中已知的任何方法來測量IC50。通常，可藉著ELISA或RIA測量IC50。在較佳的具體實施例中，藉著RIA來測量IC50。
在其他的具體實施例中，本發明提供抗-IGF-IR抗體，其在IGF-I的存在下，防止IGF-IR的激活。在較佳的具體實施例中，抗-IGF-IR抗體抑制了IGF-IR-誘導之酪胺酸磷酸化作用，其在受體被佔據時發生。在另一個較佳的具體實施例中，抗-IGF-IR抗體抑制了下游細胞事件的發生。例如，抗-IGF-IR可抑制Shc和胰島素受體受質(IRS)1和2的酪胺酸磷酸化作用，當以IGF-I處理細胞時，其全部正常被磷酸化(Kim等人,J. Biol. Chem. 273:34543-34550, 1998)。藉著經由西方墨點法或免疫沉澱法，定出IGF-IR、Shc、IRS-1或IRS-2之自體磷酸化作用的程度，來決定抗-IGF-IR抗體是否能在IGF-I的存在下，防止IGF-IR的激活作用。在較佳的具體實施例中，將藉著西方墨點法定出IGF-IR之自體磷酸化作用的程度。參見，例如實例VII。
在本發明的另一項觀點中，引起IGF-IR向下調節的抗體係得自以抗體處理的細胞。在一個具體實施例中，將IGF-IR內化到細胞的細胞質內。在抗-IGF-IR抗體與IGF-IR結合之後，內化該抗體，如同由共焦顯微鏡所示的。不希望與任何理論結合，咸相信將抗體-IGF-IR複合物內化到溶酶體內，並降解之。可藉著此項技藝中已知的方法，包括免疫沉澱法、共焦顯微鏡或西方墨點法，來測量IGF-IR的向下調節。參見，例如實例Ⅶ。在較佳的具體實施例中，抗體係選自2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2或6.1.1，或包括其重鏈、輕鏈或抗原-結合區。
藉著抗-IGF-IR抗體激活IGF-IR
本發明的其他觀點係關於激活抗-IGF-IR抗體。激活抗體與抑制抗體不同，因為它擴大或取代IGF-I對IGF-IR的影響。在一個具體實施例中，激活抗體能夠與IGF-IR結合，並在缺乏IGF-I之下使其激活。這類型的激活抗體基本上是IGF-I的模仿物。在另一個具體實施例中，激活抗體擴大IGF-I對IGF-IR的影響。這類型的抗體本身並不能激活IGF-IR，但卻在IGF-I的存在下增加IGF-IR的激活作用。可藉著在活體外，在低量IGF-I的存在或缺乏下，以該抗體處理細胞，輕易地區別模仿的抗-IGF-IR抗體和擴大的抗IGF-IR抗體。如果該抗體能夠在缺乏IGF-I之下引起IGF-IR的激活作用，例如其增加IGF-IR酪胺酸磷酸化作用，此時該抗體為模仿的抗體。如果抗體在缺乏IGF-I之下，不能引起IGF-IR激活作用，但能擴大IGF-IR激活作用的量，則此時該抗體為擴大的抗體。在較佳的具體實施例中，該激活抗體為4.17.3。在另一個較佳的具體實施例中，該抗體包括得自4.17.3的一或多個CDRs。在另一個較佳的具體實施例中，該抗體係衍生自生殖種系序列O12(輕鏈)及/或 D71(重鏈)的任一個或兩者。
藉著抗-IGF-IR抗體，在活體內抑制IGF-IR酪胺酸磷酸化作用、IGF-IR含量和腫瘤細胞生長
本發明的另一個具體實施例提供抗IGF-IR抗體，其在活體內抑制IGF-IR酪胺酸磷酸化作用和受體含量。在一個具體實施例中，對動物投與抗-IGF-IR抗體，在表現IGF-IR的腫瘤中，引起IGF-IR磷酸酪胺酸信號的降低。在較佳的具體實施例中，抗-IGF-IR抗體引起磷酸酪胺酸信號降低至少20%。在更佳的具體實施例中，抗-IGF-IR抗體引起磷酸酪胺酸信號減少至少60%，更佳的是50%。在再更佳的具體實施例中，抗體在磷酸酪胺酸信號上引起的減少為至少40%，較佳的是30%，更佳的是20%。在較佳的具體實施例中，在測量酪胺酸磷酸化作用的程度之前大約24小時投與抗體。可藉著此項技藝中已知的任何方法來測量酪胺酸磷酸化作用的程度，像是在後文中描述的那些。參見，例如實例Ⅲ和圖5。在較佳的具體實施例中，抗體選自2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2或6.1.1，或包括其重鏈、輕鏈或抗原-結合部份。
在其他的具體實施例中，對動物投與抗-IGF-IR抗體，在表現IGF-IR的腫瘤中，引起IGF-IR含量的降低。在較佳的具體實施例中，與未處理的動物相比較，抗-IGF-IR抗體引起受體含量降低至少20%。在更佳的具體實施例中，抗-IGF-IR抗體引起受體含量減少至少60%，更佳的是在未處理動物中之受體含量的50%。在再更佳的具體實施例中，抗體引起受體含量降低至少40%，更佳的是30%。在較佳的具體實施例中，在測量IGF-IR含量之前大約24小時投與抗體。可藉著此項技藝中已知的任何方法測量IGF-IR含量，像是在後文中描述的那些。參見，例如實例Ⅷ和圖6。在較佳的具體實施例中，抗體選自2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2或6.1.1，或包括其重鏈、輕鏈或抗原-結合部份。
在其他的具體實施例中，抗-IGF-IR抗體在活體內抑制腫瘤細胞的生長。腫瘤細胞可衍生自任何的細胞類型，包括但不限於表皮、上皮、內皮、白血病、肉瘤、多發性骨髓瘤或中胚層細胞。腫瘤細胞的實例包括A549(非-小細胞 肺 癌)細胞、MCF-7細胞、Colo 205細胞、3T3/IGF-IR細胞和A431細胞。在較佳的具體實施例中，與在未處理動物中的腫瘤生長相比較，抗體抑制了腫瘤細胞的生長。在更佳的具體實施例中，抗體抑制腫瘤細胞生長達50%。在再更佳的具體實施例中，抗體抑制腫瘤細胞生長達60%、65%、70%或75%。在一個具體實施例中，在以抗體開始處理動物之後至少7天，再測量腫瘤細胞生長的抑制作用。在更佳的具體實施例中，在以抗體開始處理動物之後至少14天，再測量腫瘤細胞生長的抑制作用。在另一個較佳的具體實施例中，與抗-IGF-IR抗體一起將其他的抗贅生物製劑投與動物。在較佳的具體實施例中，該抗贅生物製劑能夠進一步抑制腫瘤細胞的生長。在更佳的具體實施例中，該抗贅生物製劑為亞德里亞黴素、紫杉醇、他莫昔芬、5-氟脫氧尿嘧啶(5-FU)或CP-358,774。在較佳的具體實施例中，抗贅生物製劑與抗-IGF-IR抗體的共同-投藥，在22-24天的期間之後，抑制腫瘤細胞生長至少50%，更佳的是60%、65%、70%或75%，更佳的是80%、85%或90%。參見，例如圖7和實例Ⅸ。在較佳的具體實施例中，抗體選自2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2或6.1.1，或包括其重鏈、輕鏈或抗原-結合部份。
藉著抗-IGF-IR抗體誘導細胞凋零
本發明的其他觀點提供誘導細胞死亡的抗-IGF-IR抗體。在一個具體實施例中，抗體引起細胞凋零。抗體可在活體內或在活體外引起細胞凋零。一般而言，腫瘤細胞對細胞凋零比正常細胞更敏感，使得抗-IGF-IR抗體的投藥優先於正常細胞，引起腫瘤細胞的細胞凋零。在另一個具體實施例中，抗-IGF-IR抗體的投藥降低了酵素akt的含量，其涉及磷脂醯肌醇(PI)激酶的路徑。該PI路徑轉而再涉及細胞增殖，並阻止細胞凋零。因此，抑制akt可能引起細胞凋零。在更佳的具體實施例中，在活體內投與抗體引起表現IGF-IR之細胞的細胞凋零。在較佳的具體實施例中，抗體選自2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、或6.1.1，或包括其重鏈、輕鏈或抗原結合-部份。
產製抗體和產生-抗體之細胞株的方法
免疫作用
在本發明的一個具體實施例中，藉著以IGF-IR抗原免疫包括一些或全部人類免疫球蛋白位點之非人類動物，來產製人類抗體。在較佳的具體實施例中，非-人類動物是XENOMOUSE TM ，牠是經過設計的老鼠品系，包括大片段的人類免疫球蛋白位點，並在老鼠抗體產製上是有缺陷的。參見，例如Green等人,Nature Genetics 7:13-21 (1994)，和美國專利第5,916,771號、5,939,598號、5,985,615號、5,998,209號、6,075,181號、6,091,001號、6,114,598號和6,130,364號。亦參見1991年7月25日公告的WO 91/10741，1994年2月3日公告的WO 94/02602，1996年10月31日公告的WO 96/34096和WO 96/33735，1998年4月23日公告的WO 98/16654，1998年6月11日公告的WO 98/24893，1998年11月12日公告的WO 98/50433，1999年9月10日公告的WO 99/45031，1999年10月21日公告的WO 99/53049，2000年2月24日公告的WO 00/09560和2000年6月29日公告的WO 00/037504。XENOMOUSE TM 產生完整人類抗體的類成人節目，並產生抗原-專一的人類Mabs。經由導入人類重鏈位點和κ輕鏈位點的百萬鹼基(megabase)大小、生殖種系組態之YAC片段，第二代的XENOMOUSE TM 含有大約80%的人類抗體節目。參見Mendez等人Nature Genetics 15:146-156 (1997)，Green和Jakobovits J. Exp. Med. 188:483-495 (1998)，將其揭示內容以引用的方式併入本文中。
本發明亦提供從非-人類、非-老鼠動物中，藉著免疫包括人類免疫球蛋白位點的非-人類基因轉殖動物，來製造抗-IGF-IR抗體的方法。可使用剛才描述的方法，來產製這類動物。可按照在美國專利第5,994,619號中的描述，修改在這些專利中揭示的方法。在較佳的具體實施例中，非-人類動物可能是大鼠、綿羊、豬、山羊、 牛 或馬。
在其他的具體實施例中，包括人類免疫球蛋白基因位點的非-人類動物是具有人類免疫球蛋白之"迷你位點(minilocus)"的動物。以迷你位點的方式，可經由納入得自Ig位點之個別基因，模仿外源的Ig位點。因此，在插入動物內的構築體中，形成一或多個VH基因、一或多個DH基因、一或多個JH基因、mu恆定區和第二個恆定區(最好是γ恆定區)。特別在美國專利第5,545,807號、5,545,806號、5,625,825號、5,625,126號、5,633,425號、5,661,016號、5,770,429號、5,789,650號、5,814,318號、5,591,669號、5,612,205號、5,721,367號、5,789,215號和5,643,763號中描述了該方法，以引用的方式併入本文中。
迷你位點法的優點是迅速，用該方法可產製包括Ig位點之部份的構築體，並將其導入動物內。然而，迷你位點法潛在的缺點是可能沒有充份的免疫球蛋白歧異性，支持完整的B-細胞發育，使得可能有較低的抗體產製。
為了產製人類抗-IGF-IR抗體，以IGF-IR抗原免疫包括一些或全部人類免疫球蛋白位點的非-人類動物，並從該動物中分離抗體或產製抗體的細胞。IGF-IR抗原可以是經過分離及/或純化的IGF-IR，且最好是人類的IGF-IR。在另一個具體實施例中，IGF-IR抗原是IGF-IR的片段，最好是IGF-IR的細胞外功能部位。在另一個具體實施例中，IGF- IR抗原是包括至少一個IGF-IR之抗原決定位的片段。在另一個具體實施例中，IGF-IR抗原是在其細胞表面表現IGF-IR的細胞，最好是在其細胞表面過度表現IGF-IR的細胞。
可藉著此項技藝中已知的任何方法，來進行動物的免疫作用。參見，例如Harlow和Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, New York: Cold Spring Harbor Press, 1990。免疫非-人類動物，像是老鼠、大鼠、綿羊、山羊、豬、牛和馬的方法，為此項技藝中已熟知的。參見，例如Harlow和Lane，以及美國專利第5,994,619號。在較佳的具體實施例中，將IGF-IR抗體與佐劑一起投與，以便刺激免疫反應。這類佐劑包括完全和不完全的福瑞德氏(Freund's)佐劑、RIBI(胞壁醯基二肽)或ISCOM(免疫刺激複合物)。這類佐劑可藉著在局部存放處與其螯合，而保護多肽免於迅速地消散，或其可含有刺激宿主對巨噬細胞和免疫系統之其他組份分泌驅化性因子的物質。如果投與多肽，免疫程序最好將涉及延續數週的二或多次之多肽投藥。
實例I提供以在磷酸-緩衝之生理鹽水中的全長人類IGF-IR，免疫XENOMOUSE TM 的草案。
抗體和產製抗體之細胞株的產製
在以IGF-IR抗原免疫動物之後，可從該動物獲得抗體及/或產製-抗體的細胞。藉著採血或犧牲動物，從動物中獲得含有抗-IGF-IR抗體的血清。可使用該血清，因為它獲自該動物，故可從血清中獲得免疫球蛋白片斷，或可從血清中純化出抗-IGF-IR抗體。以此方式獲得的血清或免疫球蛋白是多株的，這是不利的，因為限制了可獲得之抗體的含量，且多株抗體具有異質陣列的性質。
在其他的具體實施例中，可從經過免疫的動物來製備產製抗體的永存不死融合瘤。在免疫作用之後，犧牲動物，並將B細胞與永存不死的骨髓瘤細胞融合，如同此項技藝中已熟知的。參見，例如Harlow和Lane，在前。在較佳的具體實施例中，骨髓瘤細胞不分泌免疫球蛋白多肽(非-分泌性細胞株)。在融合並以抗生素選擇之後，使用IGF-IR、其部份，或表現IGF-IR的細胞來篩選融合瘤。在較佳的具體實施例中，使用酵素-連結 免疫 吸附 測定(ELISA)或放射性免疫測定(RIA)來進行最初的篩選，最好是ELISA。在WO 00/37504中提供了ELISA篩選的實例，以引用的方式併入本文中。
在其他的具體實施例中，可從罹患自體免疫障礙和表現抗-IGF-IR抗體的人，來製備產製-抗體的細胞。可藉著分離白血球，並使其接受螢光-激活之細胞分類(FACS)，或以塗覆有IGF-IR或其部份的培養盤挑撿，來分離表現抗-IGF-IR抗體的細胞。可將這些細胞與人類非-分泌性骨髓瘤細胞融合，產製表現人類抗-IGF-IR抗體的人類融合瘤。一般而言，這是較差的具體實施例，因為該抗-IGF-IR抗體可能對IGF-IR具有不良的親和力。
選擇、選殖，並就想要的特徵，包括強壯的融合瘤生長、高抗體產生和想要的抗體特徵，進一步篩選產製抗-IGF-IR抗體的融合瘤，如同在下文中進一步討論的。可在活體內，在同基因的動物中，在諸如裸鼠之類缺乏免疫系統的動物中，或在活體外以細胞培養來培養並擴展融合瘤。選擇、選殖和擴展融合瘤的方法為熟諳此藝者已熟知的。
免疫的動物最好是表現人類免疫球蛋白基因的非-人類動物，並將脾臟的B細胞與衍生自與該非-人類動物相同之物種的骨髓瘤融合。更佳的是，免疫的動物是XENOMOUSE TM ，且骨髓瘤細胞株是非-分泌性老鼠骨髓瘤，像是NSO-bcl2之骨髓瘤細胞株。參見，例如實例I。
一方面本發明提供產製人類抗-IGF-IR抗體的融合瘤。在較佳的具體實施例中，融合瘤為老鼠融合瘤，如同上述。在另一個較佳的具體實施例中，在非-人類、非-老鼠的物種中，像是大鼠、綿羊、豬、山羊、牛或馬，產製融合瘤。在其他的具體實施例中，融合瘤是人類融合瘤，其中將人類非-分泌性骨髓瘤與表現抗-IGF-IR抗體的人類細胞融合。
製造抗體的核酸、載體、宿主細胞和重組方法
核酸
提供編碼本發明之抗-IGF-IR抗體的核酸分子。在一個具體實施例中，核酸分子編碼抗-IGF-IR免疫球蛋白的重和/或輕鏈。在較佳的具體實施例中，單一核酸分子編碼抗-IGF-IR免疫球蛋白的重鏈，而另一個核酸分子編碼抗-IGF-IR免疫球蛋白的輕鏈。在更佳的具體實施例中，編碼的免疫球蛋白是人類免疫球蛋白，最好是人類IgG。編碼的輕鏈可以是λ鏈或κ鏈，最好是κ鏈。
核酸分子編碼的輕鏈可變區，可衍生自A30、A27或O12 V κ基因。在較佳的具體實施例中，輕鏈可衍生自A30 V κ基因。在另一個較佳的具體實施例中，核酸分子編碼的輕鏈，包括衍生自J κ 1、J κ 2或J κ 4的接合區。在更佳的具體實施例中，核酸分子編碼的輕鏈，含有對生殖種系A30 V κ基因而言，不超過10個的胺基酸改變，更佳的是不超過6個的胺基酸改變，再更佳的是不超過3個的胺基酸改變。
本發明提供核酸分子，其編碼與生殖種系序列相比較，含有至少三個胺基酸改變的輕鏈(VL)可變區，其中該胺基酸改變，與在抗體2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3或6.1.1之一的VL中，與生殖種系序列不同的胺基酸改變相同。本發明亦提供核酸分子，其包括編碼2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3或6.1.1之輕鏈可變區之胺基酸序列的核酸序列。本發明亦提供核酸分子，其包括編碼2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3或6.1.1中任一個輕鏈的一或多個CDRs之胺基酸序列的核酸序列。在較佳的具體實施例中，核酸分子包括編碼2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3或6.1.1中任一個輕鏈的全部CDRs之胺基酸序列的核酸序列。在另一個具體實施例中，核酸分子包括編碼序列識別2、6、10、14、18或22號之一之胺基酸序列的核酸序列，或包括序列識別1、5、9、13、17或21號之一的核酸序列。在另一個較佳的具體實施例中，核酸分子包括編碼序列識別2、6、10、14、18或22號中任一個的一或多個CDRs之胺基酸序列的核酸序列，或包括序列識別1、5、9、13、17或21號任一個的一或多個CDRs之核酸序列。在更佳的具體實施例中，核酸分子包括編碼序列識別2、6、10、14、18或22號中任一個的全部CDRs之胺基酸序列的核酸序列，或包括序列識別1、5、9、13、17或21號中任一個的全部CDRs之核酸序列。
本發明亦提供編碼VL之胺基酸序列的核酸分子，其具有與上述之VL，特別是包括序列識別2、6、10、14、18或22號之一的胺基酸序列的VL，至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列。本發明亦提供核酸序列，其與序列識別1、5、9、13、17或21號之一的核酸序列，至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%相同。在其他的具體實施例中，本發明提供編碼VL的核酸分子，其在高度嚴格的條件下與編碼上述之VL的核酸分子雜交，特別是包括編碼序列識別2、6、10、14、18或22號之胺基酸序列的核酸序列的核酸分子。本發明亦提供編碼VL之核酸序列，其在高度嚴格的條件下與包括序列識別1、5、9、13、17或21號之一的核酸序列的核酸分子雜交。
本發明亦提供編碼重鏈(VH)可變區的核酸分子，該VH係衍生自DP-35、DP-47、DP-71或VIV-4/4.35 VH基因，最好是DP-35 VH基因。在另一個較佳的具體實施例中，核酸分子編碼VH，包括衍生自JH6或JH5的接合區，更佳的是JH6。在另一個較佳的具體實施例中，D斷片係衍生自3-3、6-19或4-17。在更佳的具體實施例中，核酸分子編碼的VH，含有對生殖種系DP-47基因而言，不超過10個的胺基酸改變，更佳的是不超過6個的胺基酸改變，再更佳的是不超過3個的胺基酸改變。在最佳的具體實施例中，核酸分子編碼的VH，含有與生殖種系序列相比較，至少1個的胺基酸改變，其中該胺基酸改變與在抗體2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3或6.1.1之一的重鏈中，與生殖種系序列不同的胺基酸改變相同。在再更佳的具體實施例中，VH含有與生殖種系序列相比較，至少3個的胺基酸改變，其中該改變與在抗體2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3或6.1.1之一的VH中，與生殖種系序列不同的那些改變相同。
在一個具體實施例中，核酸分子包括編碼2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3或6.1.1之胺基酸序列的核酸序列。在另一個具體實施例中，核酸分子包括編碼2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3或6.1.1之重鏈的一或多個CDRs之胺基酸序列的核酸序列。在較佳的具體實施例中，核酸分子包括編碼2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3或6.1.1之重鏈的全部CDRs之胺基酸序列的核酸序列。在另一個較佳的具體實施例中，核酸分子包括編碼序列識別4、8、12、16、20或24號之一之胺基酸序列的核酸序列，或包括序列識別3、7、11、15、19或23號之一的核酸序列。在另一個較佳的具體實施例中，核酸分子包括編碼序列識別4、8、12、16、20或24號中任一個的一或多個CDRs之胺基酸序列的核酸序列，或包括序列識別3、7、11、15、19或23號任一個的一或多個CDRs之核酸序列。在較佳的具體實施例中，核酸分子包括編碼序列識別4、8、12、16、20或24號中任一個的全部CDRs之胺基酸序列的核酸序列，或包括序列識別3、7、11、15、19或23號中任一個的全部CDRs之核酸序列。
在其他的具體實施例中，核酸分子編碼VH之胺基酸序列，其與編碼上述之VH的胺基酸序列之一，特別是包括序列識別4、8、12、16、20或24號之一的胺基酸序列的VH，至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%相同。本發明亦提供核酸序列，其與序列識別3、7、11、15、19或23號之一的核酸序列，至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%相同。在其他的具體實施例中，編碼VH的核酸分子，是在高度嚴格的條件下與編碼上述VH之核酸分子雜交的，特別是包括編碼序列識別4、8、12、16、20或24號之一的胺基酸序列之VH。本發明亦提供編碼VH之核酸序列，其在高度嚴格的條件下與包括序列識別3、7、11、15、19或23號之一的核酸序列的核酸分子雜交。
可從任何產製抗-IGF-IR抗體的來源，獲得編碼任一個抗-IGF-IR抗體的完整重和輕鏈或兩者，或其可變區的核酸分子。分離編碼抗體之mRNA的方法是此項技藝中已熟知的。參見，例如Sambrook等人。可使用mRNA產製在聚合酶連鎖反應(PCR)中，或抗體基因之cDNA選殖中使用的cDNA。在本發明的一個具體實施例中，可從表現抗-IGF-IR抗體的融合瘤中獲得核酸分子，如同上述，最好是使表現人類免疫球蛋白基因的基因轉殖動物細胞，像是XENOMOUSE TM ，非-人類老鼠之基因轉殖動物，或非-人類非-老鼠之基因轉殖動物成為其融合夥伴之一的融合瘤。在其他的具體實施例中，融合瘤係衍生自非-人類、非-基因轉殖的動物，其可供，例如人類化抗體使用。
可藉著將編碼重鏈可變功能部位或其抗原-結合功能部位的核酸分子與重鏈的恆定功能部位融合，來建構編碼抗-IGF-IR抗體之完整重鏈的核酸分子。同樣的，可藉著將編碼輕鏈可變功能部位或其抗原-結合功能部位的核酸分子與輕鏈的恆定功能部位融合，來建構編碼抗-IGF-IR抗體之輕鏈的核酸分子。可藉著將編碼VH和VL的核酸分子分別插入業已編碼重鏈恆定和輕鏈恆定區的表現載體內，使得VH斷片在該載體內以可操作之方式與重鏈恆定區(CH)斷片(們)連接，且VL斷片在該載體內以可操作之方式與輕鏈恆定區(CL)斷片連接，而將其轉變為全長的抗體基因。或者，可藉著連接，例如使用標準分子生物技術，連接編碼VH鏈的核酸分子與編碼CH鏈的核酸分子，將編碼VH或VL鏈的核酸分子轉變為全長抗體基因。可使用編碼VL和CL鏈的核酸分子完成相同的事。人類重和輕鏈恆定區基因的序列是此項技藝中已知的。參見，例如Kabat等人, Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,NIH Publ.第91-3242期，1991。然後從已經將其導入的細胞中，表現編碼全長重及/或輕鏈的核酸分子，並分離抗-IGF-IR抗體。
在較佳的具體實施例中，編碼重鏈可變區的核酸編碼序列識別4、8、12、16、20或24號之胺基酸序列，而編碼輕鏈可變區的核酸分子則編碼序列識別2、6、10、14、18或22號之胺基酸序列。序列識別28號敘述抗-IGF-IR抗體2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3或6.1.1之重鏈恆定區的胺基酸序列，而序列識別27號則敘述編碼其之核酸序列。序列識別26號敘述抗-IGF-IR抗體2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3或6.1.1之輕鏈恆定區的胺基酸序列，而序列識別25號則敘述編碼其之核酸序列。因此，在較佳的具體實施例中，編碼重鏈恆定區之核酸分子編碼序列識別28號，而編碼輕鏈恆定區之核酸分子則編碼序列識別26號。在更佳的具體實施例中，編碼重鏈恆定功能部位的核酸分子具有序列識別27號之核酸序列，而編碼輕鏈恆定功能部位的核酸分子則具有序列識別25號之核酸序列。
在其他的具體實施例中，可從表現人類免疫球蛋白基因，並已經利用IGF-IR抗原免疫的非-人類、非-老鼠動物中，分離編碼抗-IGF-IR抗體之重鏈或其抗原-結合功能部位，或抗-IGF-IR抗體之輕鏈或其抗原-結合功能部位的核酸分子。在另一個具體實施例中，可從衍生自非-基因轉殖動物，或得自產製抗-IGF-IR抗體之人類患者的產製抗-IGF-IR抗體之細胞中，分離核酸分子。可藉著標準技術，從產製抗-IGF-IR抗體的細胞中分離mRNA，使用PCR和庫建構技術選殖及/或擴大，並使用標準草案篩選，獲得編碼抗-IGF-IR重和輕鏈的核酸分子。
可使用核酸分子重組表現大量的抗-IGF-IR抗體，如同下述。亦可使用核酸分子來產製嵌合型抗體、單鏈抗體、免疫黏附素、完全體、突變抗體和抗體衍生物，如同下文進一步描述的。如果核酸分子衍生自非-人類、非-基因轉殖的動物，則可使用該核酸分子進行抗體的人類化作用，亦如同下述。
在其他的具體實施例中，可使用本發明之核酸分子作為特定抗體序列的探針或PCR引子。例如，可在診斷方法中使用核酸分子探針，或可使用核酸分子PCR引子，擴大將使用的DNA區域，特別是用來分離可用於產製抗-IGF-IR抗體之可變功能部位的核酸序列。在較佳的具體實施例中，核酸分子是寡核苷酸。在更佳的具體實施例中，寡核苷酸係得自感興趣之抗體的重和輕鏈高變區。在再更佳的具體實施例中，寡核苷酸編碼全部或部份的一或多個CDRs。
載體
本發明提供包括本發明之核酸分子(其編碼重鏈或其抗原-結合部份)的載體。本發明亦提供包括本發明之核酸分子(其編碼輕鏈或其抗原-結合部份)的載體。本發明亦提供包括編碼融合蛋白質、經過修改之抗體、抗體片段及其探針之核酸分子的載體。
欲表現本發明之抗體或抗體部份，將按照上述獲得的編碼部份或全長輕和重鏈之DNAs插入表現載體內，使得該基因以可操作之方式與轉錄和轉譯控制序列連接。表現載體包括質體、逆轉錄病毒、黏接質體、YACs、EBV衍生之附加體及其類似物。將抗體基因連接到載體內，使得在載體內的轉錄和轉譯控制序列得以提供其調節抗體基因之轉錄和轉譯想要的功能。選擇可與所使用之表現宿主細胞相容的表現載體和表現控制序列。可將抗體輕鏈基因和抗體重鏈基因插入分開的載體內。在較佳的具體實施例中，將兩個基因插入相同的表現載體內。藉著標準方法(例如在抗體基因片段和載體上的互補限制位置之連接，或是如果沒有出現限制位置，則是鈍端連接作用)，將抗體基因插入表現載體內。
便利的載體是編碼具有完整功能之人類CH或CL免疫球蛋白序列的載體，並帶有適當設計的限制位置，而得以按照上述輕易地插入和表現任何VH或VL序列。在這類載體中，黏接通常發生在插入之J區域中黏接捐贈者位置和在人類C區域之前的黏接接受者位置之間，且亦發生在出現在人類CH表現序列內的黏接區。聚腺苷酸化作用和轉錄終止，發生在位在密碼區下游的天然染色體位置處。重組表現載體亦可編碼信號肽，其有助於從宿主細胞中分泌抗體鏈。可將抗體鏈基因選殖到載體內，使信號肽得以在架構中與抗體鏈基因的胺基終端連接。信號肽可以是免疫球蛋白信號肽，或異種的信號肽(也就是得自非-免疫球蛋 白蛋白 質的信號肽)。
除了抗體鏈基因之外，本發明之重組表現載體亦可攜帶控制抗體鏈基因在宿主細胞中表現的調節序列。熟諳此藝者應瞭解表現載體的設計，包括調節序列的選擇，可依據諸如待轉化之宿主細胞的選擇、想要的蛋白質表現程度等等的因素而定。對哺乳動物宿主細胞表現而言，較佳的調節序列包括在哺乳動物細胞中指揮高量蛋白質表現的病毒元件，像是衍生自逆轉錄病毒LTRs、細胞巨大病毒(CMV)(像是CMV啟動基因/促進子)、猿病毒40(SV40)(像是SV40啟動基因/促進子)、腺病毒(例如腺病毒主要晚期啟動基因(AdMLP))、多瘤病毒的啟動基因及/或促進子，以及有力的哺乳動物啟動基因，像是天然免疫球蛋白和肌動蛋白啟動基因。關於病毒調節元件及其序列的進一步說明，參見，例如Stinski的美國專利第5,168,062號，Bell等人的美國專利第4,510,245號，以及Schaffner等人的美國專利第4,968,615號。
除了抗體鏈基因和調節序列之外，本發明之重組表現載體亦可攜帶額外的序列，像是調節載體在宿主細胞中複製的序列(例如複製起點)和可選擇標記基因。可選擇標記基因有助於選擇已經於其中導入載體的宿主細胞(參見，例如Axel等人的美國專利第4,399,216號、4,634,665號和5,179,017號)。例如，可選擇標記基因通常賦與已經在其中導入該載體之宿主細胞對藥物，像是G418、潮黴素或胺甲碟呤的抵抗力。較佳的可選擇標記基因包括二氫葉酸還原酶(DHFR)基因(可用於dhfr-宿主細胞，以胺甲碟呤選擇/擴大)，以及neo基因(可供G418選擇)。
非-融合瘤宿主細胞和重組產製蛋白質的方法
可使用編碼抗-IGF-IR抗體之重鏈或其抗原-結合部份，及/或輕鏈或其抗原-結合部份的核酸分子，以及包括這些核酸分子的載體，轉化適當的哺乳動物細胞。可藉著任何已知的關於將多核苷酸導入宿主細胞的方法來轉化。將異種多核苷酸導入哺乳動物細胞內的方法是此項技藝中已熟知的，並包括葡聚糖-調節的轉移感染、磷酸鈣沉澱、海美溴銨(polybrene)-調節的轉移感染、原生質體融合、電穿透作用、將多核苷酸(們)包膠在微脂粒內、生物性(biolistic)注射，以及直接將DNA顯微注射至核內。此外，亦可藉著病毒載體將核酸分子導入哺乳動物細胞內。轉化細胞的方法為此項技藝中已熟知的。參見，例如美國專利第4,399,216號、4,912,040號、4,740,461號和4,959,455號(將這些專利以引用的方式併入本文中)。
可用來作為進行表現之宿主的哺乳動物細胞株是此項技藝中已熟知的，並包括許多獲自American Type Culture Collection (ATCC)的永存不死之細胞株。這些包括，特別是中國倉鼠卵巢(CHO)細胞、NSO細胞、SP2細胞、HeLa細胞、幼倉鼠腎臟(BHK)細胞、猴子腎臟細胞(COS)、人類肝細胞癌細胞(例如Hep G2)、A549細胞、3T3細胞和許多其他的細胞株。哺乳動物宿主細胞包括人類、老鼠、大鼠、狗、猴子、豬、山羊、牛、馬和倉鼠細胞。經由決定那一種細胞株具有高表現程度，來選擇特優的細胞株。其他可使用的細胞株是昆蟲細胞株，像是Sf9細胞、兩棲類細胞、細菌細胞、 植物 細胞和 真菌 細胞。當重組表現載體編碼重鏈或其抗原-結合部份時，將輕鏈及/或其抗原-結合部份導入哺乳動物宿主細胞內，藉著培養該宿主細胞一段足以容許該抗體在宿主細胞中表現的期間，而產生該抗體，或更佳的是將抗體分泌至宿主細胞在其中生長的培養基內。可使用標準蛋白質純化方法，從培養基中回收抗體。
此外，亦可使用許多已知的技術，促進從產製細胞株中表現本發明之抗體(或其其他部份)的作用。例如，穀胺醯胺合成酶基因表現系統(GS系統)，是在某些條件下促進表現的常用方法。在關於歐洲專利第0 216 846號、0 256 055號和0 323 997號，和歐洲專利申請案第89303964.4號中，全部或部份地討論了GS系統。
可能藉著不同的細胞株或在具有彼此不同之糖基化作用的基因轉殖動物中表現抗體。然而，不管抗體的糖基化作用，所有由在本文中提供之核酸分子編碼，或包括在本文中提供之胺基酸序列的抗體，均為本發明的一部份。
基因轉殖的動物
本發明亦提供包括一或多個本發明之核酸分子的基因轉殖之非-人類動物，其可用來產製本發明之抗體。可在山羊、牛、馬、豬、大鼠、老鼠、兔子、倉鼠或其他動物中產製抗體，並從其組織或體液，像是乳汁、血液或尿液中回收。參見，例如美國專利第5,827,690號、5,756,687號、5,750,172號和5,741,957號。如同上述，可藉著以IGF-IR或其一部份免疫，產製包括人類免疫球蛋白位點的非-人類之基因轉殖動物。
在其他的具體實施例中，藉著將一或多個本發明之核酸分子，藉著標準基因轉殖技術，導入動物內，來產製非-人類的基因轉殖動物。參見Hogan，在前。用來製造基因轉殖動物的基因轉殖細胞可以是胚胎幹細胞或體細胞。基因轉殖的非-人類生物可以是嵌合型、非嵌合型的異種接合子，以及非嵌合型的同種接合子。參見，例如Hogan等人,Manipulating the Mouse Embryo: A Laboratory Manual第2版，Cold Spring Harbor Press (1999);Jackson等人,Mose Genetics and Transgenics: A Practical Approach, Oxford University Press (2000)；以及Pinkert, Transgenic Animal Technology: A Laboratory Handbook, Academic Press (1999)。在其他的具體實施例中，基因轉殖的非-人類生物可具有已瞄準的破裂和置換，其編碼感興趣的重鏈及/或輕鏈。在較佳的具體實施例中，基因轉殖動物包括並表現編碼專一地與IGF-IR，最好是人類IGF-IR結合之重和輕鏈的核酸分子。在另一個具體實施例中，基因轉殖動物包括編碼經過修改之抗體，像是單鏈抗體、嵌合型抗體或人類化抗體的核酸分子。可在任何基因轉殖的動物中製造抗-IGF-IR抗體。在較佳的具體實施例中，非-人類動物為老鼠、大鼠、綿羊、豬、山羊、牛或馬。非-人類的基因轉殖動物在血液、乳汁、尿液、唾液、淚水、黏液和其他體液中表現該編碼多肽。
噬菌體展示庫
本發明提供產製抗-IGF-IR抗體或其抗原-結合部份的方法，包括在噬菌體上合成人類抗體庫，以IGF-IR或其一部份篩選該庫，分離與IGF-IR結合的噬菌體，並從該噬菌體中分離抗體的步驟。一種製備抗體庫的方法，包括以IGF-IR或其抗原性部份免疫包括人類免疫球蛋白位點之非-人類宿主動物，產生免疫反應，從宿主動物中萃取負責產製抗體的細胞；從已萃取出的細胞中分離RNA，逆向轉錄該RNA而產生cDNA，使用引子擴大cDNA，並將該cDNA插入噬菌體展示載體內，而得以在噬菌體上表現抗體的步驟。以此方式可獲得本發明的重組抗-IGF-IR抗體。
除了在本文中揭示的抗-IGF-IR抗體之外，可藉著篩選使用由衍生自人類淋巴細胞的mRNA製備之人類VL和VH cDNAs來製備的重組綜合抗體庫，最好是scFv噬菌體展示庫，分離本發明的重組抗-IGF-IR人類抗體。製備和篩選這類庫的方法學，是此項技藝中已知的。有產製噬菌體展示庫的市售套組(例如Pharmacia重組噬菌體抗體系統，目錄第27-9400-01號；以及Stratagene SurfZAP TM 噬菌體展示套組，目錄第240612號)。亦有其他的方法和試劑，可用來產製和篩選抗體展示庫(參見，例如Ladner等人美國專利第5,223,409號；Kang等人PCT出版物第WO 92/18619號；Dower等人PCT出版物第WO 91/17271號；Winter等人PCT出版物第WO 92/20791號；Markland等人PCT出版物第WO 92/15679號；Breitling等人PCT出版物第WO 93/01288號；McCafferty等人PCT出版物第WO 92/01047號；Garrard等人PCT出版物第WO 92/09690號；Fuchs等人(1991)Bio/Technology 9:1370-1372;Hay等人(1992)Hum. Antibod, Hybridomas 3:81-85;Huse等人(1989)Science 246:1275-1281;McCafferty等人,Nature (1990)348:552-554; Griffiths等人(1993)EMBO J 12:725-734;Hawkins等人(1992)J. Mol. Biol. 226:889-896;Clackson等人(1991)Nature 352:624-628;Gram等人(1992)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:3576-3580;Garrad等人(1991)Bio/Technology 9:1373-1377;Hoogenboom等人(1991)Nuc Acid Res 19:4133-4137；以及Barbas等人(1991)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:7978-7982。
在較佳的具體實施例中，欲分離具有想要特徵的人類抗-IGF-IR抗體，首先使用如同在本文中描述之人類抗-IGF-IR抗體，來選擇對IGF-IR具有類似之結合活性的人類重和輕鏈序列，使用在Hoogenboom等人，PCT出版物第WO 93/06213號中描述的抗原決定位印刷法。在該方法中使用的抗體庫，最好是按照在McCafferty等人，PCT出版物第WO 92/01047號，McCafferty等人,Nature(1990)348:552-554；和Griffiths等人(1993)EMBO J 12:725-734中的描述，製備和篩選的scFv庫。最好是使用人類IGF-IR作為抗原來篩選的scFv抗體庫。
一旦選出最初的人類VL和VH斷片，便進行"混合和配對"實驗，其中就與IGF-IR的結合來篩選最初選出之VL和VH斷片的不同配對，選出較佳的VL/VH對組合。此外，欲進一步改善抗體的品質，可利用類似在活體內之體細胞突變法的方法，其在自然的免疫反應期間，負責抗體之親和力成熟，使較佳的VL/VH對(們)之VL和VH斷片隨機突變，最好是在VH及/或VL的CDR3區域內。可藉著擴大VH和VL區，使用分別與VH CDR3或VL CDR3互補的PCR引子，完成在活體外的親和力成熟，已經利用四種核苷酸鹼基的隨機混合物，在某些位置"釘住"這些引子，使得所得的PCR產物編碼已經將隨機突變導入VH及/或VL CDR3區的VH和VL斷片。可就與IGF-IR的結合作用，再度篩選這些隨機突變的VH和VL斷片。
在從重組的免疫球蛋白展示庫中篩選和分離本發明之抗-IGF-IR抗體之後，可從展示包裝(例如從噬菌體基因組)中回收編碼所選出之抗體的核酸，並藉著標準重組DNA技術，繼代選殖到其他的表現載體內。若需要，可進一步操縱核酸，產生本發明的其他抗體形式，如同下述。欲表現藉著篩選綜合庫而分離出的重組人類抗體，將編碼該抗體的DNA選殖到重組表現載體內，並將其導入哺乳動物宿主細胞內，如同上述。
類別轉變
本發明的其他方面是提供藉以將一類抗-IGF-IR抗體轉變為另一類的機制。在本發明的一項觀點中，使用此項技藝中已熟知的方法分離編碼VL或VH之核酸分子，使其不含任何編碼CL或CH的核酸序列。然後以可操作之方式，將編碼VL或VH之核酸分子與編碼得自不同類別之免疫球蛋白分子的CL或CH之核酸序列連接。這可按照上述，使用包括CL或CH鏈的載體或核酸分子完成。例如，可將起源於IgM的抗-IGF-IR抗體轉變為IgG的類別。此外，可使用類別轉變將一個IgG亞類轉變為另一個亞類，例如從IgG1至IgG2。產製包括想要同型物之本發明抗體的較佳方法，包括下列步驟：分離編碼抗-IGF-IR抗體之重鏈的核酸，以及編碼抗-IGF-IR抗體之輕鏈的核酸，獲得重鏈的可變區，將重鏈可變區與想要同型物之重鏈的恆定功能部位連接，在細胞中表現輕鏈和已連接之重鏈，並收集帶有想要同型物的抗-IGF-IR抗體。
抗體衍生物
可使用熟諳此藝者已知的技術和方法，使用上述的核酸分子來產製抗體衍生物。
人類化抗體
如同在上文中有關於人類抗體產製的討論，產製具有降低之免疫原性的抗體是有益的。這可使用人類化的技術，以及使用適當庫的展示技術，而達到某種程度。應瞭解可使用此項技藝中已熟知的技術，將老鼠抗體或得自其他物種的抗體人類化或靈長類化。參見，例如Winter和Harris Immunol Today 14:43-46 (1993)，以及Wright等人Crit. Reviews in Immunol. 12125-168 (1992)。可藉著重組DNA技術設計感興趣的抗體，以相對應的人類序列取代CH1、CH2、CH3、絞鏈功能部位及/或架構功能部位(參見WO 92/02190和美國專利第5,530,101號、5,585,089號、5,693,761號、5,693,792號、5,714,350號和5,777,085號)。在較佳的具體實施例中，可藉著以相對應的人類序列取代CH1、CH2、CH3、絞鏈功能部位及/或架構功能部位，同時維持所有的重鏈、輕鏈或重和輕鏈兩者的CDRs，將抗-IGF-IR抗體人類化。
突變抗體
在其他的具體實施例中，可使用核酸分子、載體和宿主細胞，製造突變的抗-IGF-IR抗體。抗體可以在重及/或輕鏈的可變功能部位發生突變，改變該抗體的結合特性。例如，可在一或多個CDR區進行突變，以便增加或減少該抗體對IGF-IR的Kd、增加或減少Koff，或改變該抗體的結合專一性。指定-位置之突變生成作用的技術，是此項技藝中已熟知的。參見，例如Sambrook等人和Ausubel等人，在前。在較佳的具體實施例中，在與生殖種系相比較，已知在抗-IGF-IR抗體之可變區已經改變的胺基酸殘基處進行突變。在更佳的具體實施例中，在與生殖種系相比較，已知在抗-IGF-IR抗體2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3或6.1.1之一的可變區或CDR區域已經改變的胺基酸殘基處進行一或多個突變。在另一個具體實施例中，在與生殖種系相比較，已知在其胺基酸序列出現在序列識別2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22或24號中，或其核酸序列出現在序列識別1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21或23號的可變區或CDR區域已經改變的胺基酸殘基處進行一或多個突變。在另一個具體實施例中，使核酸分子在一或多個架構區中發生突變。可在架構區或在恆定功能部位進行突變，以便增加抗-IGF-IR抗體的半衰期。參見，例如2000年2月24日公告的WO 00/09560，以引用的方式併入本文中。在一個具體實施例中，可能有一、三或五個點突變，且不超過10個點突變。亦可在架構區或恆定功能部位進行突變，以便改變抗體的免疫原性，提供與其他分子共價或非-共價結合的位置，或改變諸如補體結合之類的特性。在單一突變的抗體中，可分別在架構區、恆定功能部位和可變區進行突變。或者，在單一突變的抗體中，可僅在架構區、可變區或恆定功能部位之一中進行突變。
在一個具體實施例中，與在突變之前的抗-IGF-IR抗體相比較，在突變的抗-IGF-IR抗體之VH或VL區中，有不超過10個的胺基酸改變。在更佳的具體實施例中，在突變的抗-IGF-IR抗體之VH或VL區中，有不超過5個的胺基酸改變，更佳的是不超過3個的胺基酸改變。在另一個具體實施例中，在恆定功能部位中有不超過15個的胺基酸改變，較佳的是不超過10個的胺基酸改變，更佳的是不超過5個的胺基酸改變。
經過修改的抗體
在其他的具體實施例中，可製造融合抗體或免疫黏附素，其包括與其他多肽連接的全部或部份的抗-IGF-IR抗體。在較佳的具體實施例中，僅有抗-IGF-IR抗體的可變區與多肽連接。在另一個較佳的具體實施例中，抗-IGF-IR抗體的VH功能部位與第一個多肽連接，而抗-IGF-IR抗體的VL功能部位與第二個多肽連接，其以其中VH和VL功能部位可彼此產生交互作用，形成抗體結合位置的方式，與第一個多肽連結。在另一個較佳的具體實施例中，藉著交聯劑將VH功能部位與VL功能部位分開，使VH和VL功能部位得以與另一個產生交互作用(參見下文的單鏈抗體)。然後將VH-交聯劑-VL抗體與感興趣的多肽連接。可使用該融合抗體，指揮多肽至表現IGF-IR的細胞或組織。多肽可以是治療劑，像是毒素、生長因子或其他的調節蛋白質，或可以是診斷製劑，像是可輕易顯色的酵素，像是辣根過氧化酶。此外，可創造其中二(或多個)單鏈抗體彼此連接的融合抗體。如果想要在單一多肽鏈上創造二價或多價的抗體時，或如果想要創造雙重專一性抗體時，這將是有用的。
欲創造單鏈抗體(scFv)，將編碼VH-和VL-的DNA片段以可操作之方式與編碼有彈性之交聯劑，例如編碼胺基酸序列(Gly4-Ser)3(序列識別60號)的其他片段連接，而得以以連續的單鏈蛋白質之形式表現VH和VL序列，其中藉著有彈性的交聯劑連接VL和VH區(參見，例如Bird等人(1988)Science 242:423-426;Huston等人(1988)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883;McCafferty等人Nature (1990)348:552-554)。單鏈抗體可以是單價的(如果僅使用一個VH和VL)，二價的(如果使用兩個VH和VL)，或多價的(如果使用兩個以上的VH和VL)。
在其他的具體實施例中，可使用編碼抗-IGF-IR之核酸分子製備其他經過修改的抗體。例如，可使用標準分子生物學技術，依據說明書的教導，製備"κ體"(Ill等人,Protein Eng 10:949-57 (1997))、"迷你體(minibodies)"(Martin等人,EMBO J 13:5303-9 (1994))、"完全體"(Holliger等人,PNAS USA 90:6444-6448 (1993))，或"傑紐辛(Janusin)"(Traunecker等人,EMBO J 10:3655-3659 (1991)，和Traunecker等人"Janusin: new molecular design for bispecific reagents" Int J Cancer Suppl 7:51-52 (1992))。
在其他方面，可產製嵌合型和雙重專一的抗體。可製造嵌合型抗體，其包括得自不同抗體的CDRs和架構區。在較佳的具體實施例中，嵌合型抗體的CDRs包括抗-IGF-IR抗體之輕或重鏈可變區的全部CDRs，而架構區則衍生自一或多個不同的抗體。在更佳的具體實施例中，嵌合型抗體的CDRs包括抗-IGF-IR抗體之輕和重鏈可變區的全部CDRs。架構區可得自另一個物種，且在較佳的具體實施例中，可以是人類化的。或者，架構區可得自其他的人類抗體。
可產製雙重專一的抗體，其經由一個結合功能部位專一地與IGF-IR結合，並經由第二個結合部位與第二個分子結合。可經由重組分子生物學技術，產製雙重專一的抗體，或可以物理方式將其共軛在一起。此外，亦可產製含有一個以上VH和VL的單鏈抗體，其專一地與IGF-IR和其他分子結合。可使用已知的技術，來產製這類雙重專一的抗體，例如關於(i)和(ii)，參見，例如Fanger等人Immunol Methods 4:72-81 (1994)，以及Wright和Harris，在前，而關於(iii)，參見，例如Traunecker等人Int. J. Cancer(附錄)7:51-52 (1992)。在較佳的具體實施例中，雙重專一的抗體與IGF-IR結合，並與在癌症或腫瘤細胞中以高程度表現的其他分子結合。在更佳的具體實施例中，其他分子為erbB2受體、VEGF、CD20或EGF-R。
在一個具體實施例中，使用得自一個選自2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3或6.1.1之抗體的一或多個可變區或一或多個CDR區，製備上述經過修改的抗體。在另一個具體實施例中，使用其胺基酸序列出現在序列識別2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22或24號中，或其核酸序列出現在序列識別1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21或23號中的一或多個可變區或一或多個CDR區，製備經過修改的抗體。
經過衍生和標示的抗體
本發明之抗體或抗體部份可經過衍生或與其他分子(例如其他的肽或蛋白質)連接。一般而言，衍生抗體或其部份，使得該IGF-IR結合作用不受該衍生作用或標示的不利影響。因此，本發明之抗體和抗體部份企圖包括在本文中描述之人類抗-IGF-IR抗體的完整和經過修改之形式。例如，本發明之抗體或抗體部份可在功能上與一或多個其他分子實體連接(藉著化學偶聯、遺傳融合、非共價結合或其他)，像是其他抗體(例如雙重專一的抗體或完全體)、檢測劑、細胞毒性製劑、藥學製劑，及/或可調節抗體或抗體部份與其他分子之結合的蛋白質或肽(像是鏈黴菌抗生物素蛋白核區或聚組胺酸標籤)。
藉著將二或多個抗體(相同類型或不同類型的，例如產生雙重專一的抗體)交聯，產生一型經過衍生的抗體。適當的交聯劑包括屬於異種雙功能的那些，具有兩個不同反應性的基團，由適當的間隔基分開(例如間-順丁烯二醯亞胺苯甲醯基-N-羥基琥珀醯亞胺酯)或同種雙功能的(例如二琥珀醯亞胺基辛二酸酯)。這類交聯劑可購自Pierce Chemical Company, Rockford, Ill。
其他類型的經過衍生之抗體是經過標示的抗體。可用來衍生本發明之抗體或抗體部份的有用檢測劑，包括螢光化合物，包括螢光素、螢光素異硫代氰酸酯、若丹明、5-二甲胺基-1-萘磺醯氯、藻紅蛋白、鑭系元素磷光體及其類似物。亦可利用可用來檢測之酵素標示抗體，像是辣根過氧化酶、β-半乳糖苷酶、蟲螢光素酶、鹼性磷酸酶、 葡萄糖 氧化酶及其類似物。當利用可檢測酵素標示抗體時，可藉著加入酵素可用來產生可辨別之反應產物的額外試劑來檢測。例如，當出現的製劑為辣根過氧化酶時，加入過氧化氫和二胺基聯苯胺，導致有顏色的反應產物，其為可檢測的。亦可利用生物素標示抗體，並經由抗生物素蛋白或鏈黴菌抗生物素蛋白的間接測量來檢測之。可利用磁性製劑來標示抗體，像是釓。亦可利用可由二級抗體認出的預定之多肽抗原決定位(例如亮胺酸拉鍊對序列、二級抗體的結合位置、金屬結合功能部位、抗原決定位標籤)來標示抗體。在一些具體實施例中，藉著各種長度的間隔臂附接標示，降低可能的空間位阻。
亦可利用放射性標示的胺基酸標示抗-IGF-IR抗體。可為了診斷和治療目的而使用放射性標示。例如，可使用放射性標示，藉著x-射線或其他診斷技術，檢測表現IGF-IR的腫瘤。此外，可在治療上使用放射性標示，作為對癌性細胞或腫瘤的毒素。多肽之標示的實例，包括但不限於下列的放射性同位素或放射性核素-- 3 H、 14 C、 15 N、 35 S、 90 Y、 99 Tc、 111 In、 125 I、 131 I。
亦可利用化學基團，像是聚乙二醇(PEG)、甲基或乙基，或 碳 水化合物基團來衍生抗-IGF-IR抗體。可使用這些基團來改良抗體的生物學特徵，例如增加血清半衰期，或增加組織結合作用。
醫藥組合物和套組
本發明亦關於用來治療哺乳動物之過度增殖性障礙的醫藥組合物，其包括在治療上有效含量的本發明組合物和在藥學上可接受的載劑。在一個具體實施例中，該醫藥組合物可用來治療諸如腦、肺臟、鱗狀細胞、膀胱、胃、胰臟、乳房、頭、頸、腎的、腎臟、卵巢、前列腺、結直腸、食道、婦科學的或甲狀腺癌之類的癌症。在其他的具體實施例中，該醫藥組合物係關於非-癌性過度增殖性障礙，像是但不限於在血管造形術之後的再狹窄和牛皮癬。在另一個具體實施例中，本發明係關於用來治療需要IGF-IR之激活作用的哺乳動物的醫藥組合物，其中該醫藥組合物包括在治療上有效含量的本發明之激活抗體，以及在藥學上可接受的載劑。可使用包括激活抗體的醫藥組合物來治療缺乏足夠IGF-I或IGF-II的動物，或用來治療骨質疏鬆症、虛弱，或其中哺乳動物分泌太少的活性生長荷爾蒙，或不能對生長荷爾蒙起反應的障礙。
可將本發明之抗-IGF-IR抗體併入適合投與個體的醫藥組合物內。通常，醫藥組合物包括本發明之抗體和在藥學上可接受的載劑。當在本文中使用"在藥學上可接受的載劑"時，包括任何或所有的溶劑、分散介質、塗料、抗細菌劑和抗真菌劑、等張和吸收延遲劑，及其類似物，其為在生理學上可相容的。在藥學上可接受之載劑的實例包括一或多個水、生理鹽水、磷酸緩衝之生理鹽水、右旋糖、甘油、 乙醇 及其類似物，及其組合。在許多案例中，最好在組合物中包括等張劑，例如糖、聚醇，像是甘露糖醇、山梨糖醇或氯化鈉。在藥學上可接受的物質，像是濕潤劑，或少量的輔助物質，像是濕潤或乳化劑、防腐劑或緩衝溶液，其提高抗體或抗體部份的儲存期限或效力。
本發明之組合物可以是各種形式的。這些包括例如液態、半-固態和固態劑量形式，像是液態溶液(例如注射用和輸液用的溶液)、分散體或懸浮液、錠劑、藥丸、散劑、微脂粒和栓劑。較佳的形式依據想要的投藥模式和治療應用而定。通常較佳的組合物是以注射用或輸液用溶液的形式，像是類似以其他抗體被動免疫人類所使用的那些組合物。較佳的投藥模式為非經腸(例如靜脈內、皮下、 腹腔 內、肌肉內)。在較佳的具體實施例中，藉著靜脈內輸液或注射投與抗體。在另一個較佳的具體實施例中，藉著肌肉內或皮下注射投與抗體。
治療性組合物通常必須是無菌的，並在製造和儲存條件下是穩定的。可以溶液、微乳劑、分散體、微脂粒或其他適用於高藥物濃度之有秩序結構的形式調配組合物。可藉著以所需之含量，將抗-IGF-IR抗體併入按照需要帶有一種上文列舉之成份或其組合的適當溶劑中，接著過濾滅菌，來製備無菌注射用溶液。通常，藉著將活性化合物併入無菌的媒劑中，其可含有基本的分散介質，以及在上文列舉的那些之中，所需的其他成份，來製備分散體。在用來製備無菌注射用溶液之無菌散劑的案例中，較佳的製備方法是 真空 脫水和冷凍乾燥，從其先前經過無菌-過濾的溶液中，產生活性成份的散劑，加上任何額外的想要成份。可藉著例如使用諸如卵磷脂之類的塗料，在分散體的案例中藉著維持所需的顆粒尺寸，並藉著使用表面活性劑，來維持適當的溶液流動性。可藉著在組合物中含有延遲吸收的製劑，例如單 硬脂酸 鹽類和明膠，而導致注射用組合物的延長吸收。
可藉著此項技藝中已知的各種方法，投與本發明之抗體，雖然對許多治療應用而言，較佳的投藥途徑/模式為腹腔內、皮下、肌肉內、靜脈內或輸液。熟諳此藝者應瞭解投藥的途徑及/或模式將依據想要的結果而改變。在一個具體實施例中，可以單一劑量的方式投與本發明之抗體，或以多次劑量的方式投與。
在某些具體實施例中，可利用保護活性化合物對抗迅速釋放的載劑來製備該化合物，像是控制釋放的調配物，包括 植入物 、經皮貼片和微量包膠的遞送系統。可使用生物可降解的、生物可相容的 聚合物 ，像是乙烯乙酸乙烯酯、聚酐類、聚乙醇酸、膠原蛋白、聚原酸酯和聚乳酸。許多製備這類調配物的方法已取得專利，或通常為熟諳此藝者已知的。參見，例如Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson編輯,Marcel Dekker, Inc., New York, 1978。
在某些具體實施例中，可口服投與本發明之抗-IGF-IR，例如，利用惰性稀釋劑或可吸收食用之載劑。亦可將化合物(如果想要，和其他成份)包封在硬或軟殼的明膠膠囊中、壓製成錠劑，或直接併入個體的飲食中。關於口服的治療性投藥，可將化合物與賦形劑合併，並以可攝食之錠劑、口含片、糖錠、膠囊、酏劑、懸浮液、糖漿、糯米紙囊劑，及其類似物的形式使用。欲藉著非經腸投藥以外的其他方法投與本發明之化合物，可能必須以保護其免於失活的材料塗覆該化合物，或與該化合物共同-投與。
亦可將補充的活性化合物併入組合物中。在某些具體實施例中，將本發明之抗-IGF-IR與一或多種額外的治療劑共同調配，並/或共同投與，像是化學治療劑、抗贅生物劑或抗-腫瘤製劑。例如，可將抗-IGF-IR抗體與一或多種額外的治療劑共同調配並/或共同投與。這些製劑包括但不限於與其他標靶結合的抗體(例如與一或多個生長因子或細胞激素，其細胞表面受體或IGF-I結合的抗體)、IGF-I結合蛋白質、抗贅生物劑、化學治療劑、抗-腫瘤劑、對抗IGF-IR或IGF-I的反義寡核苷酸、阻斷IGF-IR激活的肽類似物、可溶性IGF-IR，及/或一或多個抑制IGF-I產製或活性的化學製劑，其為此項技藝中已知的，例如奧曲肽。關於包括激活抗體的醫藥組合物，可將抗-IGF-IR抗體與增加細胞增殖或預防細胞凋零的因子一起調配。這類因子包括生長因子，像是IGF-I，及/或激活IGF-IR的IGF-I之類似物。這類組合治療可能需要較低劑量的抗-IGF-IR抗體，以及共同投與之製劑，因此避免了可能的毒性或與各種單一治療有關的併發症。在一個具體實施例中，抗體和一或多個額外的治療劑。
本發明之醫藥組合物可含有"在治療上有效之含量"或"在預防上有效之含量"的本發明之抗體或抗體部份。"在治療上有效之含量"意指在所需的劑量和期間內，達到想要之治療結果的有效含量。可根據諸如疾病狀態、個體的年齡、性別和體重，以及抗體或抗體部份在個體中誘發想要之反應的能力，來改變抗體或抗體部份在治療上的有效含量。在治療上有效之含量亦是在治療上有利之影響勝過抗體或抗體部份之任何毒性或有害影響的含量。"在預防上有效之含量"意指在所需的劑量和期間內，達到想要之預防結果的有效含量。通常，因為在疾病之前或其較早的階段，對個體使用預防劑量，故在預防上有效之含量將低於在治療上有效之含量。
可調整劑量攝生法，以便提供最適切的想要反應(例如治療或預防的反應)。例如，可投與單一團塊，可在一段時間內投與數個分開的劑量，或可按照緊急治療狀況的指示，按比例降低或增加劑量。可為了單一或多次給藥，調配包括抗體或包括組合治療(包括抗體和一或多個額外之治療劑)的醫藥組合物。為了易於投藥和劑量的均等，以劑量單位形式調配非經腸組合物是特別有利的。當在本文中使用劑量單位時，意指物理上的個別單位，適合待處理之哺乳動物個體的單一劑量；每個單位含有預定含量的活性成份，經過計算其可產生想要的治療效果，連同所需的藥學載劑。藉著並直接依據(a)活性成份的獨特特徵和待達成的特殊治療或預防性效果，以及(b)在個體中為了敏感性的處理，在混合這類活性化合物之技藝中的固有限制，來指示本發明之劑量單位形式的說明書。特別有用的調配物是在20 mM檸檬酸鈉，pH 5.5, 140 mM NaCl和0.2毫克/毫升多乙氧基醚80之緩衝溶液中的5毫克/毫升抗-IGF-IR抗體。
在治療上或在預防上有效含量之本發明抗體或抗體部份的代表性、非-限制範圍是0.1-100毫克/公斤，較佳的是0.5-50毫克/公斤，更佳的是1-20毫克/公斤，而再更佳的是1-10毫克/公斤。應注意的是劑量值可隨著待緩和之病況的類型和嚴重性而改變。更瞭解為了任何特定的目標，應該在一段時間內根據個別的需要，以及投與或監督該組合物之投藥者的專業判斷，調整特定的劑量攝生法，且在本文中陳述的劑量範圍僅是代表性的，並非企圖限制提出申請之組合物的範圍或實行。在一個具體實施例中，連同一或多個額外的治療劑一起投與在治療上或在預防上有效之含量的抗體或其抗原-結合部份。
另一方面，本發明係關於以低於每個月300毫克之劑量投與抗-IGF-IR抗體，來治療癌症。
本發明的其他觀點提供包括抗-IGF-IR抗體，以及包括這些抗體之醫藥組合物的套組。除了抗體或醫藥組合物之外，套組可包括診斷或治療劑。套組亦包括在診斷或治療方法中使用的設備。在較佳的具體實施例中，套組包括抗體或其醫藥組合物，以及可在上文描述之方法中使用的診斷劑。在另一個較佳的具體實施例中，套組包括抗體或其醫藥組合物，以及一或多個治療劑，像是額外的抗贅生物劑、抗-腫瘤劑或化學治療劑，可在下文描述的方法中使用它們。
本發明亦關於在哺乳動物中抑制異常細胞生長的醫藥組合物，包括將某一含量的本發明化合物與某一含量的化學治療劑混合，其中該化合物、鹽、媒合物或前藥，以及化學治療劑之含量一起可有效地抑制異常細胞的生長。許多化學治療劑是目前此項技藝中已知的。在一個具體實施例中，化學治療劑係選自包括有絲分裂抑制劑、烷基化製劑、抗-代謝物、嵌入抗生素、生長因子抑制劑、細胞週期抑制劑、酵素、拓樸異構酶抑制劑、抗-存活製劑、生物學反應修改劑、抗-荷爾蒙，例如抗-雄激素和抗-血管生成製劑。
抗-血管生成製劑，像是MMP-2(基質-金屬蛋白酶2)抑制劑、MMP-9(基質-金屬蛋白酶9)抑制劑和COX-II(環氧化酶II)抑制劑，可連同本發明化合物一起使用。有用的COX-II抑制劑之實例包括CELEBREX TM (奧雷寇克司(alecoxib))、凡德寇克司(valdecoxib)和洛福寇克司(rofecoxib)。有用的基質金屬蛋白酶抑制劑之實例，描述在WO 96/33172(1996年10月24日公告)、WO 96/27583(1996年3月7日公告)、歐洲專利申請案第97304971.1號(1997年7月8日建檔)、歐洲專利申請案第99308617.2號(1999年月10日29建檔)、WO 98/07697(1998年2月26日公告)、WO 98/03516(1998年1月29日公告)、WO 98/34918(1998年8月13日公告)、WO 98/34915(1998年8月13日公告)、WO 98/33768(1998年8月6日公告)、WO 98/30566(1998年7月16日公告)、歐洲專利申請案第606,046號(1994年7月13日建檔)、歐洲專利申請案第931,788號(1999年7月28日建檔)、WO 90/05719(1990年5月31日公告)、WO 99/52910(1999年10月21日公告)、WO 99/52889(1999年10月21日公告)、WO 99/29667(1999年6月17日公告)、PCT國際申請案第PCT/IB98/01113(1998年7月21日建檔)、歐洲專利申請案第99302232.1號(1999年3月25日建檔)、英國專利申請案第9912961.1號(1999年6月3日建檔)、美國專利第5,863,949號(1999年1月26日頒予)、美國專利第5,861,510號(1999年1月19日頒予)，和歐洲專利公告780,386號(1997年6月25日公告)中，將其全部以引用的方式併入本文中。較佳的MMP抑制劑是未證實關節痛的那些。更佳的是相對於其他基質-金屬蛋白酶(也就是MMP-1、MMP-3、MMP-4、MMP-5、MMP-6、MMP-7、MMP-8、MMP-10、MMP-11、MMP-12和MMP-13)，選擇性抑制MMP-2及/或MMP-9的那些。在本發明中有用的MMP抑制劑之某些特定實例，為AG-3340、RO 32-3555、RS 13-0830和下列提及的化合物：3-[[4-(4-氟-苯氧基)-苯磺醯基]-(1-羥基胺甲醯基-環戊基)-胺基]-丙酸；3-外-3-[4-(4-氟-苯氧基)-苯磺醯胺基]-8--二環[3.2.1]辛烷-3- 羧酸 羥基醯胺；(2R,3R)1-[4-(2-氯-4-氟-苄氧基)-苯磺醯基]-3-羥基-3-甲基-六氫吡啶-2-羧酸羥基醯胺；4-[4-(4-氟-苯氧基)-苯磺醯胺基]-四氫哌喃-4-羧酸羥基醯胺；3-[[4-(4-氟-苯氧基)-苯磺醯基]-(1-羥基胺甲醯基-環丁基)-胺基]-丙酸；4-[4-(4-氯-苯氧基)-苯磺醯胺基]-四氫-哌喃-4-羧酸羥基醯胺；(R)3-[4-(4-氯-苯氧基)-苯磺醯胺基]-四氫-哌喃-3-羧酸羥基醯胺；(2R,3R)1-[4-(4-氟-2-甲基-苄氧基)-苯磺醯基]-3-羥基-3-甲基-六氫吡啶-2-羧酸羥基醯胺；3-[[4-(4-氟-苯氧基)-苯磺醯基]-(1-羥基胺甲醯基-1-甲基-乙基)-胺基]-丙酸；3-[[4-(4-氟-苯氧基)-苯磺醯基]-(4-羥基胺甲醯基-四氫-哌喃-4-基)-胺基]-丙酸；3-外-3-[4-(4-氯-苯氧基)-苯磺醯胺基]-8--二環[3.2.1]辛烷-3-羧酸羥基醯胺；3-內-3-[4-(4-氟-苯氧基)-苯磺醯胺基]-8--二環[3.2.1]辛烷-3-羧酸羥基醯胺；和(R)3-[4-(4-氟-苯氧基)-苯磺醯胺基]-四氫-呋喃-3-羧酸羥基醯胺；以及該化合物在藥學上可接受的鹽類和媒合物。
本發明之化合物亦可與信號轉導抑制劑一起使用，像是可抑制EGF-R(表皮生長因子受體)反應之製劑，像是EGF-R抗體、EGF抗體和屬於EGF-R抑制劑之分子；VEGF(血管內皮生長因子)抑制劑，像是VEGF受體和可抑制VEGF的分子；以及erbB2受體受體抑制劑，像是與erbB2受體結合的有機分子或抗體，例如HERCEPTIN TM (Genentech, Inc.)。在例如WO 95/19970(1995年7月27日公告)、WO 98/14451(1998年4月9日)、WO 98/02434(1998年1月22日)，和美國專利第5,747,498號(1998年5月5日頒予)中描述了EGFR-抑制劑，而這類物質均可使用在本發明中，如同在本文中的描述。EGFR-抑制劑包括但不限於單株抗體C225和抗-EGFR 22Mab (ImClone Systems Incorporated)、ABX-EGF (Abgenix/Cell Genesys)、EMD-7200 (Merck KgaA)、EMD-5590 (Merck KgaA)、MDX-447/H-477(Medarex Inc.和Merck KgaA)，以及化合物ZD-1834、ZD-1838和ZD-1839 (AstraZeneca)、PKI-166 (Novartis)、PKI-166/CGP-75166 (Novartis)、PTK787 (Novartis)、CP701 (Cephalon)、樂服諾邁(leflunomide)(Pharmacia/Sugen)、CI-1033 (Warner Lambert Parke Devis)、CI-1033/PD 183,805 (Warner Lambert Parke Davis)、CL-387,785 (Wyeth-Ayerst)、BBR-1611 (Boehringer Mannheim GmbH/Roche)、Naamidine A (Bristol Myers Squibb)、RC-3940-II (Pharmacia)、BIBX-1382 (Boehringer Ingelheim)、OLX-103 (Merck & Co.)、VRCTC-310 (Ventech Research)、EGF融合毒素(Seragen Inc.)、DAB-389 (Seragen/Lilgand)、ZM-252808 (Imperial Cancer Research Fund)、RG-50864 (INSERM)、LEM-A12 (Parker Hughes Cancer Center)、WHI-P97 (Parker Hughes Cancer Center)、GW-282974 (Glaxo)、KT-8391 (Kyowa Hakko)和EGF-R 疫苗 (York Medical/Centro de Immunologia Molecular (CIM))。可在本發明中使用這些和其他的EGF-R-抑制劑。
VEGF抑制劑，例如SU-5416和SU-6668(Sugen Inc.)、SH-268 (Schering)和NX-1838 (NeXstar)，亦可與本發明之化合物混合。在例如WO 99/24440(1999年5月20日公告)、PCT國際申請案PCT/IB99/00797(1999年5月3日建檔)、WO 95/21613(1995年8月17日)、WO 99/61422(1999年12月2日)、美國專利第5,834,504號(1998年11月10日頒予)、WO 98/50356(1998年11月12日公告)、美國專利第5,883,113號(1999年3月16日頒予)、美國專利第5,886,020號(1999年3月23日頒予)、美國專利第5,792,783號(1998年8月11日頒予)、WO 99/10349(1999年3月4日公告)、WO 97/32856(1997年9月12日公告)、WO 97/22596(1997年6月26日公告)、WO 98/54093(1998年12月3日公告)、WO 98/02438(1998年1月22日公告)、WO 99/16755(1999年4月8日公告)，和WO 98/02437(1998年1月22日公告)中描述VEGF抑制劑，將其全部以引用的方式併入本文中。一些可用於本發明之特定VEGF抑制劑的其他實例，是IM862 (Cytran Inc.); Genentech Inc.的抗-VEGF單株抗體；以及血管酵素(angiozyme)，一種得自Ribozyme和Chiron的合成核糖酶。可在本發明中使用這些及其他VEGF抑制劑，如同在本文中的描述。
ErbB2受體抑制劑，像是GW-282974 (Glaxo Wellcome plc)，以及單株抗體AR-209 (Aronex Pharmaceuticals Inc.)和2B-1(Chiron)，亦可與本發明之化合物混合，例如在WO 98/02434(1998年1月22日公告)、WO 99/35146(1999年7月15日公告)、WO 99/35132(1999年7月15日公告)、WO 98/02437(1998年1月22日公告)、WO 97/13760(1997年4月17日公告)、WO 95/19970(1995年7月27日公告)、美國專利第5,587,458號(1996年12月24日頒予)和美國專利第5,877,305號(1999年3月2日頒予)中指示的那些，將其全部以引用的方式併入本文中。亦在1999年1月27日建檔之美國臨時申請案第60/117,341號和1999年1月27日建檔之美國臨時申請案第60/117,346號中描述了可用於本發明中的erbB2受體抑制劑，兩者均全部以引用的方式併入本文中。根據本發明，在上述之PCT申請案、美國專利和美國臨時申請案中描述的erbB2受體抑制劑化合物和物質，以及其他抑制erbB2受體的化合物和物質，均可與本發明之化合物一起使用。
抗-存活製劑包括抗-IGF-IR抗體和抗-整合素(integrin)製劑，像是抗-整合素抗體。
診斷方法的用途
可在活體外或在活體內，使用抗-IGF-IR抗體來檢測在生物試樣中的IGF-IR。抗-IGF-IR抗體可用於傳統的免疫測定，包括但不限於ELISA、RIA、FACS、組織免疫組織化學法、西方墨點法或免疫沉澱法。可使用本發明之抗-IGF-IR抗體來檢測得自人類的IGF-IR。在另一個具體實施例中，可使用抗-IGF-IR抗體來檢測得自舊世界靈長類的IGF-IR，像是獼猴和恆河猴、黑猩猩和猿類。本發明提供在生物試樣中檢測抗-IGF-IR的方法，包括使該生物試樣與本發明之抗-IGF-IR抗體接觸，並檢測與抗-IGF-IR結合的結合抗體，來檢測在該生物試樣中的IGF-IR。在一個具體實施例中，直接利用可檢測標記標示抗-IGF-IR抗體。在另一個具體實施例中，該抗-IGF-IR抗體(第一個抗體)是未標示的，而標示可與該抗-IGF-IR抗體結合的二級抗體或其他分子。如同熟諳此藝者已熟知的，選擇能夠專一地與特定物種或種類的第一個抗體專一地結合的二級抗體。例如，如果抗-IGF-IR抗體是人類的IgG，此時二級抗體可以是抗-人類-IgG。其他可與抗體結合的分子，包括但不限於蛋白質A和蛋白質G，兩者皆是市售的，例如得自Pierce Chemical Co.。
已經在前揭示了抗體或二級抗體的適當標示，並包括各種酵素、輔基、螢光物質、發光物質、磁性製劑和放射性物質。適當之酵素的實例包括辣根過氧化酶、鹼性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或乙醯膽鹼酯酶；適當之輔基複合物的實例包括鏈黴菌抗生物素蛋白/生物素和抗生物素蛋白/生物素；適當之螢光物質的實例包括繖形酮、螢光素、螢光素異硫代氰酸酯、若丹明、二氯三胺螢光素、丹磺醯氯或藻紅蛋白；發光物質的實例包括魯米諾；磁性製劑的實例包括釓；且適當之放射性物質的實例包括 125 I、 131 I、 35 S或 3 H。
在另一種選擇的具體實施例中，可在生物試樣中藉著競爭免疫測定，利用以可檢測物質標示的IGF-IR標準物和未標示的抗-IGF-IR抗體，來測定IGF-IR。在該測定中，混合生物試樣、已標示之IGF-IR標準物和抗-IGF-IR抗體，並定出已標示之IGF-IR標準物與未標示之抗體結合的量。在該生物試樣中IGF-IR的含量，與已標示之IGF-IR標準物與抗-IGF-IR抗體結合的量成反比。
為了許多目的，可使用上文揭示的免疫測定。在一個具體實施例中，可在細胞培養中使用抗-IGF-IR抗體檢測在細胞中的IGF-IR。在較佳的具體實施例中，可在以各種化合物處理細胞之後，使用抗IGF-IR抗體檢測在細胞表面上IGF-IR的酪胺酸磷酸化作用、酪胺酸自體磷酸化作用，及/或IGF-IR的含量。可使用該方法測試可用來激活或抑制IGF-IR的化合物。在該方法中，以受試化合物處理一種細胞試樣一段時間，同時保持其他試樣仍是未處理的。如果欲測量酪胺酸自體磷酸化作用，則將細胞溶解，並使用上述的免疫測定，或按照在實例III中的描述，其使用ELISA，來測量IGF-IR的酪胺酸磷酸化作用。如果欲測量IGF-IR的總量，則將細胞溶解，並使用上述的免疫測定之一，來測量總IGF-IR含量。
為了定出IGF-IR酪胺酸磷酸化作用，或為了測量總IGF-IR含量，較佳的免疫測定為ELISA或西方墨點法。如果僅測量細胞表面的IGF-IR含量，則不溶解細胞，並使用上述的免疫測定之一來測量細胞表面的IGF-IR含量。定出細胞表面之IGF-IR含量的較佳免疫測定包括以可檢測標記標示細胞表面的蛋白質，像是生物素或 125 I，利用抗-IGF-IR抗體使IGF-IR免疫沉澱，然後檢測已標示的IGF-IR。為了定出IGF-IR的局部化，例如細胞表面的含量，其他較佳的免疫測定為藉著使用免疫組織化學法。諸如ELISA、RIA、西方墨點法、免疫組織化學法、嵌入膜之蛋白質的細胞表面標示，以及免疫沉澱法之類的方法，為此項技藝中已熟知的。參見，例如Harlow和Lane，在前。此外，亦可為了高輸貫量篩選按比例擴大免疫測定，以便就IGF-IR的激活或抑制作用，測試大量的化合物。
亦可使用本發明之抗-IGF-IR抗體，定出在組織中或在衍生自該組織之細胞中的IGF-IR含量。在較佳的具體實施例中，該組織為腫瘤或其生檢試樣。在該方法的較佳具體實施例中，從患者中 切除 該組織或其生檢試樣。然後在免疫測定中使用該組織或生檢試樣，藉著上文討論的方法，決定例如IGF-IR含量、IGF-IR的細胞表面含量、IGF-IR的酪胺酸磷酸化作用程度，或IGF-IR的局部化。可使用該方法決定腫瘤是否以高程度表現IGF-IR。
可使用上述的診斷方法決定腫瘤是否表現高程度的IGF-IR，這可表示該腫瘤將對利用抗-IGF-IR抗體的處理有良好的反應。亦可使用該診斷方法決定腫瘤是否可能是癌性的(如果其表現高程度的IGF-IR)，或是良性的(如果其表現低程度的IGF-IR)。此外，亦可使用該診斷方法，決定利用抗-IGF-IR抗體的處理(參見下文)，是否引起腫瘤表現較低程度的IGF-IR，及/或表現較低程度的酪胺酸自體磷酸化作用，並因此可用來決定該處理是否是成功的。一般而言，決定抗-IGF-IR抗體是否降低酪胺酸磷酸化作用的方法，包括在改興趣的細胞或組織中，測量酪胺酸磷酸化作用的程度，將該細胞或組織與抗-IGF-IR抗體或其抗原-結合部份一起培養，然後再度-測量在該細胞或組織中酪胺酸磷酸化作用之程度的步驟。可測量IGF-IR或其他蛋白質(們)的酪胺酸磷酸化作用。亦可使用該診斷方法，決定組織或細胞是否不表現足夠高之含量的IGF-IR，或足夠高之含量的已激活IGF-IR，這可能是罹患矮小、骨質疏鬆症或糖尿病之個體的案例。IGF-IR或活性IGF-IR之含量太低的診斷，可使用激活抗-IGF-IR抗體、IGF-I或其他增加IGF-IR含量或活性的治療劑來治療之。
亦可在活體內使用本發明之抗體，使表現IGF-IR的組織和器官局限化。在較佳的具體實施例中，可使用抗-IGF-IR抗體使表現IGF-IR的腫瘤局限化。本發明之抗-IGF-IR抗體的優點是在投與它時，將不產生免疫反應。該方法包括對需要這類診斷試驗的患者投與抗-IGF-IR抗體或其醫藥組合物，並使該患者接受影像分析，定出表現IGF-IR之組織的位置之步驟。影像分析是在醫學技藝中已熟知的，並包括但不限於x-射線分析、 核磁共振 光譜法(MRI)或電腦斷層攝影(CE)。在該方法的其他具體實施例中，從患者中獲得生檢試樣，決定感興趣的組織是否表現IGF-IR，而非使患者接受影像分析。在較佳的具體實施例中，可利用可檢測之製劑標示抗-IGF-IR抗體，其可在患者中顯影。例如，可利用諸如鋇之類的照影劑(其可用於x-射線分析)，或諸如釓螯合物之類的磁性照影劑(其可用於MRI或CE)，來標示抗體。其他的標示劑，包括但不限於放射性同位素，像是 99 Tc。在其他的具體實施例中，抗-IGF-IR抗體將是未標示的，並將藉著投與二級抗體或其他可檢測，並可與抗-IGF-IR抗體結合的分子，而使其顯影。
治療方法的用途
在其他的具體實施例中，本發明藉著對需要其之患者投與抗-IGF-IR抗體，提供抑制IGF-IR活性的方法。可在治療上使用在本文中描述的任何類型之抗體。在較佳的具體實施例中，抗-IGF-IR抗體是人類、嵌合型或人類化的抗體。在另一個較佳的具體實施例中，IGF-IR是人類的，且患者是人類患者。或者，患者可以是表現IGF-IR的哺乳動物，且抗-IGF-IR抗體與其產生交叉-反應。可為了獸醫的目的，或作為人類疾病的動物模式，對非-人類的、表現與該抗體產生交叉-反應之IGF-IR的哺乳動物(也就是靈長類，或獼猴或恆河猴)投與該抗體。這類動物模式可用來評估本發明之抗體的治療效力。
當在本文中使用"其中IGF-IR活性是有害的障礙"一詞時，企圖包括某種疾病或其他的障礙，其中已經顯示在受該障礙所苦的個體中，高含量IGF-IR的出現，是或懷疑是引起該障礙之病理生理學的原因，或是促使該障礙惡化的因素。因此，其中高含量之IGF-IR活性是有害的障礙，是其中預期抑制IGF-IR活性將可改善其症狀及/或進行的障礙。例如，可藉著在受該障礙所苦之個體受影響的細胞或組織中，增加在細胞表面上的IGF-IR含量，或增加IGF-IR之酪胺酸自體磷酸化作用，來證實這類障礙。例如，可使用如同上述的抗-IGF-IR抗體，檢測在IGF-IR含量上的增加。
在較佳的具體實施例中，可對罹患表現IGF-IR之腫瘤的患者投與抗-IGF-IR抗體。腫瘤可以是固體腫瘤或可以是非-固體的腫瘤，像是淋巴瘤。在更佳的具體實施例中，可對罹患為癌性之表現IGF-IR的腫瘤的患者投與抗-IGF-IR抗體。在再更佳的具體實施例中，對罹患肺癌、乳癌、 前列腺癌 或結腸癌的患者投與抗-IGF-IR抗體。在更佳的具體實施例中，該方法導致腫瘤不增加重量或體積，或減少重量或體積。在其他的具體實施例中，該方法導致在腫瘤上的IGF-IR被內化。在較佳的具體實施例中，該抗體選自2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2或6.1.1，或包括其重鏈、輕鏈或抗原-結合區。
在另一個較佳的具體實施例中，可對表現不適當之高含量IGF-I的患者，投與抗-IGF-IR抗體。在此項技藝中，已知IGF-I的高程度表現可能導致各種常見的癌症。在更佳的具體實施例中，對患有前列腺癌、神經膠質瘤或纖維肉瘤的患者投與抗-IGF-IR抗體。在再更佳的具體實施例中，該方法導致癌症中止異常的增殖，或不再增加重量或體積，或減少重量或體積。
在一個具體實施例中，該方法係關於諸如腦、鱗狀細胞、膀胱、胃、胰臟、乳房、頭、頸、食道、前列腺、結直腸、肺、腎的、腎、卵巢、婦科學的或甲狀腺癌之類癌症的治療。可利用本發明之化合物，根據本發明之方法來處理的患者，包括例如已經診斷為罹患肺癌、骨癌、胰臟癌、皮膚癌、頭和頸的癌症、皮膚或眼內的黑色素瘤、子宮癌、卵巢癌、直腸癌、肛門區域的癌症、胃癌、結腸癌、乳癌、婦科學的腫瘤(例如子宮肉瘤、輸卵管的癌症、子宮內膜癌、子宮頸癌、陰道的癌症或陰戶的癌症)、霍奇金氏(Hodgkin's)症、食道癌、小腸的癌症、內分泌系統的癌症(例如甲狀腺、副甲狀腺或腎上腺的癌症)、軟組織的肉瘤、尿道癌、陰莖癌、前列腺癌、慢性或急性的白血病、小孩的固體腫瘤、淋巴細胞的淋巴瘤、膀胱癌腎臟和輸尿管的癌症(例如腎細胞癌、腎盂的癌症)，或中樞神經系統的贅生物(例如原發性CNS淋巴瘤、脊髓軸腫瘤、腦幹神經膠質瘤、或腦下垂體腺瘤)的患者。
可投與抗體一次，但較佳的是多次投藥。可從每日3次到每6個月一次投與抗體。可按照諸如每日3次、每日2次、每日1次、每2日1次、每3日1次、每週1次、每2週1次、每月1次、每2個月1次、每3個月1次和每6個月1次之類的計劃投藥。抗體可經由口服、黏膜、頰部、鼻內、可吸入、靜脈內、皮下、肌肉內、非經腸、腫瘤內或局部的路徑投與。可在遠離腫瘤部位之處投與抗體。亦可經由迷你幫浦連續投與抗體。可投與抗體一次、至少兩次，或持續至少一段時間，直到該病況被治療、減輕或治癒為止。通常將投與抗體像腫瘤出現一樣長的時間，其限制條件為該抗體引起腫瘤或癌症中止生長，或減少重量或體積。通常將投與抗體，成為如同前述之醫藥組合物的一部份。抗體的劑量通常將是在0.1-100毫克/公斤的範圍內，較佳的是0.5-50毫克/公斤，更佳的是1-20毫克/公斤，而再更佳的是1-10毫克/公斤。可藉著此項技藝中已知的任何方法來測量抗體的血清濃度。參見，例如下文的實例XVII。亦可在預防上投與抗體，以便預防癌症或腫瘤發生。這在具有"高正常"值之IGF-I的患者中是特別有用的，因為這些患者已經顯示有發展出常見癌症的較高風險。參見Rosen等人，在前。
在其他方面，可將抗-IGF-IR抗體與其他治療劑，像是抗贅生物藥物或分子共同-投與罹患過度增殖性障礙，像是癌症或腫瘤的患者。一方面，本發明係關於在哺乳動物中治療過度增殖性障礙的方法，包括對該哺乳動物投與與抗-腫瘤製劑混合之在治療上有效含量的本發明化合物，該抗-腫瘤製劑係選自包括，但不限於有絲分裂抑制劑、烷基化製劑、抗-代謝物、嵌入劑、生長因子抑制劑、細胞週期抑制劑、酵素、拓樸異構酶抑制劑、生物反應修改劑、抗-荷爾蒙、激酶抑制劑、基質金屬蛋白酶抑制劑、遺傳治療劑和抗-雄激素。在較佳的具體實施例中，可與抗贅生物製劑，像是亞德里亞黴素或紫杉醇一起投與抗體。在另一個較佳的具體實施例中，連同放射性治療、化學治療、光動力治療、外科或其他的免疫治療，一起投與抗體或組合治療。在另一個更佳的具體實施例中，將與其他的抗體一起投與抗體。例如，可將抗-IGF-IR抗體與已知可抑制腫瘤或癌症細胞增殖之抗體或其他製劑一起投與，例如抑制erbB2受體、EGF-R、CD20或VEGF的抗體或製劑。
抗體與額外之治療劑的共同投藥(組合治療)，包括投與包括抗-IGF-IR抗體之醫藥組合物，以及額外的治療劑，並投與二或多種分開的醫藥組合物，一種包括抗-IGF-IR抗體，而其他種(們)包括額外的治療劑(們)。此外，雖然共同-投藥或組合治療通常意指抗體和額外的治療劑在彼此相同的時間投藥，但亦包括其中在不同時間投與抗體和額外之治療劑的例子。例如，可每3天一次投與抗體，而每天一次投與額外之治療劑。或者，可在利用額外的治療劑治療該障礙之前或之後，投與抗體。同樣地，可在其他治療，像是放射性治療、化學治療、光動力治療、外科或其他免疫治療之前或之後，投與抗-IGF-IR抗體。
可投與抗體和一或多種額外之治療劑(組合治療)一次、兩次或至少一段時間，直到該病況被治療、減輕或治癒為止。最好多次投與組合治療。可從每天3次到每6個月一次，投與組合治療。可按照諸如每日3次、每日2次、每日1次、每2日1次、每3日1次、每週1次、每2週1次、每月1次、每2個月1次、每3個月1次和每6個月1次之類的計劃投藥，或可經由迷你幫浦連續投藥。可經由口服、黏膜、頰部、鼻內、可吸入、靜脈內、皮下、肌肉內、非經腸、腫瘤內或局部的路徑投與組合治療。可在遠離腫瘤部位之處投與組合治療。通常將投與組合治療像腫瘤出現一樣長的時間，其限制條件為該抗體引起腫或癌症中止生長，或減少重量或體積。
在更進一步的具體實施例中，以放射性標記、免疫毒素或毒素標示抗-IGF-IR抗體，或其為包括毒性肽的融合蛋白質。該抗-IGF-IR抗體或抗-IGF-IR抗體融合多肽，指揮放射性標記、免疫毒素、毒素或毒性肽到達表現IGF-IR的腫瘤或癌症細胞處。在較佳的具體實施例中，在抗-IGF-IR抗體與在腫瘤或癌症細胞表面上的IGF-IR結合之後，將放射性標記、免疫毒素、毒素或毒性肽內化。
另一方面，可在治療上使用抗-IGF-IR抗體，在需要其之患者中，誘導特定細胞的細胞凋零。在許多案例中，為了細胞凋零而瞄準的細胞是癌性或腫瘤細胞。因此，在較佳的具體實施例中，本發明提供藉著對需要其之患者投與在治療上有效含量的抗-IGF-IR抗體，而誘導細胞凋零的方法。在較佳的具體實施例中，該抗體選自2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2或6.1.1，或包括其重鏈、輕鏈或抗原-結合區。
另一方面，可使用抗-IGF-IR抗體來治療非癌症的狀態，其中高含量的IGF-I及/或IGF-IR已經與該非癌症之狀態或疾病有關。在一個具體實施例中，該方法包括對罹患非癌症之病理學狀態的患者投與抗-IGF-IR抗體，該非癌症之病理學狀態係由高含量的IGF-I及/或IGF-IR含量或活性所引起或使其惡化。在較佳的具體實施例中，非癌症的病理學狀態是肢端肥大症、巨人症、牛皮癬、粥樣硬化、血管的平滑肌再狹窄或不適當的微血管增殖，像是在糖尿病之併發症中發現的，特別是衍睛的併發症。在更佳的具體實施例中，抗-IGF-IR抗體減慢了非癌症之病理學狀態的進行。在更佳的具體實施例中，抗-IGF-IR抗體至少部份地中止或逆轉了該非癌症的病理學狀態。
另一方面，本發明提供對需要其之患者投與激活抗-IGF-IR抗體的方法。在一個具體實施例中，以有效增加IGF-IR活性之含量，對需要其之患者投與激活抗體或醫藥組合物。在更佳的具體實施例中，該激活抗體能夠重建正常的IGF-IR活性。在另一個較佳的具體實施例中，可對罹患矮小、神經病變、減少肌肉質量或骨質疏鬆症的患者投與激活抗體。在另一個較佳的具體實施例中，可與一或多種其他增加細胞增殖的因子一起投與激活抗體，預防細胞凋零或增加IGF-IR活性。這類因子包括生長因子，像是IGF-I及/或激活IGF-IR的IGF-I之類似物。在較佳的具體實施例中，該抗體係選自4.17.3，或包括其重鏈、輕鏈或抗原-結合部份。
基因治療
可經由基因治療將本發明之核酸分子投與需要其之患者。該治療可以是在活體內或在活體外的。在較佳的具體實施例中，將編碼重鏈和輕鏈兩者的核酸分子投與患者。在較佳的具體實施例中，投與核酸分子，使得其穩定地整合到B細胞的染色體內，因為這些細胞特化而產生抗體。在較佳的具體實施例中，在活體外轉移感染或感染前驅物B細胞，並再度-移植到需要其之患者內。在另一個具體實施例中，使用已知感染感興趣之細胞類型的病毒，在活體內感染前驅物B細胞或其他細胞。用於基因治療的代表性載體包括微脂粒、質體或病毒載體，像是逆轉錄病毒、腺病毒和與腺有關的病毒。在活體內或在活體外感染之後，藉著從進行處理之患者中取得試樣，並使用任何此項技藝中已知和在本文中討論的免疫測定，來監視抗體表現的程度。
在較佳的具體實施例中，基因療法包括投與有效含量之經過分離的核酸分子，其編碼人類抗體或其一部份的重鏈或其抗原-結合部份，並表現該核酸分子的步驟。在另一個具體實施例中，基因療法包括投與有效含量之經過分離的核酸分子，其編碼人類抗體或其一部份的輕鏈或其抗原-結合部份，並表現該核酸分子的步驟。在更佳的方法中，基因療法包括投與有效含量之經過分離的核酸分子，其編碼人類抗體或其一部份的重鏈或其抗原-結合部份，以及有效含量之經過分離的核酸分子，其編碼人類抗體或其一部份的輕鏈或其抗原-結合部份，並表現該核酸分子的步驟。基因療法亦可包括投與其他抗-癌製劑，像是紫杉醇、他莫昔芬、5-FU、亞德里亞黴素或CP-358,774的步驟。
為了更徹底地瞭解本發明，陳述下列的實例。這些實例僅為了解釋之目的，而不可以任何方式解釋為限制本發明之範圍。，下面是對似胰島素生長因子Ｉ受體專一之抗體 ANTIBODIES TO INSULIN-LIKE GROWTH FACTOR I RECEPTOR专利的具体信息内容。