[0001] 本申请是母案为中国发明专利申请201180060050.3的分案申请。

[0002] 相关申请案

[0003] 本申请要求提交于2010年11月9日的美国临时专利申请61/411,655的权益和优先权，该专利申请的公开内容全文据此以引用方式并入。

[0004] 发明背景

[0005] MetAP2编码至少部分通过酶法从某些新翻译的蛋白质，例如，甘油醛-3-磷酸脱氢酶移除氨基末端甲硫氨酸残基而发挥作用的蛋白质(Warder et al.(2008)J Proteome Res 7:4807)。过去认为，MetAP2基因表达的增加与各种形式的癌症相关。已鉴定出抑制MetAP2的酶活性的分子，并且探究了它们在各种肿瘤类型(Wang et al.(2003)Cancer Res 63:7861)和传染病，例如，微孢子虫病、利什曼病和疟疾(Zhang et al.(2002)J.Biomed Sci.9:34)治疗中的效用。值得注意的是，肥胖和肥胖-糖尿病动物中MetAP2活性的抑制会导致体重减少，所述体重减少部分通过脂肪氧化增加，部分通过食物消耗量减少进行(Rupnick et al.(2002)Proc Natl Acad Sci USA 99:10730)。

[0006] 6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇是METAP2抑制剂，并且可用于例如肥胖症的治疗。6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇的特征在于具有式I：

[0007]

[0008] 6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇的半草酸盐的非晶态形式已经制备。然而，6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇的游离碱的结晶形式的存在或制备在本领域中的公开未出现。

[0009] 多态性是物质以超过一种晶格排列结晶的能力。结晶或多态性可影响药物的固体状态特性的多个方面。结晶物质明显不同于非晶态形式，并且物质的不同晶体改性在包括溶解度、溶解速率和/或生物利用率在内的多个方面彼此明显不同。一般来讲，预测给定化合物是否形成多种结晶固体状态形式是困难的。而预测这些结晶固体状态形式的物理特性甚至更困难。另外，得到某些制剂，如适于皮下注射使用的制剂的治疗剂的结晶形式可为有利的。发明概要

[0010] 在实施方案中，本文提供了包含6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇的结晶形式的组合物。本文还提供了6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇游离碱的结晶形式，其特征在于粉末X-射线衍射图在约13.3度的2θ处具有特征峰，或例如其特征在于粉末X-射线衍射图在13.3、17.4和19.9度的2θ处具有特征峰，或例如其特征在于粉末X-射线衍射图在7.1、13.3、16.3、17.4、18.6、19.4和19.9度的2θ处具有特征峰，或例如其特征在于粉末X-射线衍射图在5.2、7.1、10.4、13.3、14.2、16.3、17.4、18.6、19.4和19.9度的2θ处具有特征峰，如其特征在于结晶图如图1中所示。在一些实施方案中，粉末X-射线衍射图可使用Cu Kα辐射获得。

[0011] 本文还提供了具有P212121空间群的6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇游离碱的结晶形式。

[0012] 在一个实施方案中，6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇游离碱在溶液中的结晶形式可具有基本上与图6中示出的图一致的1H NMR光谱。

[0013] 本文还提供制备6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇的结晶形式(如，形式A)的方法，其包括：

[0014] a)制备6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇的溶液，如溶于溶剂的非晶态6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇。例如，溶剂可以是仲醚，如二异丙醚，或可以是例如溶剂/反溶剂体系，如甲苯:正庚烷混合物，例如正庚烷与甲苯的比例为约4:1；

[0015] b)加热溶液，如加热至约40℃至约60℃，如加热至约50℃，以基本上或完全溶解6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇；

[0016] c)调节温度以使得固体从溶液中沉淀出来；以及

[0017] d)分离6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇的结晶形式。包括调节温度的这种方法可包括将溶液冷却至约4℃或更低，或冷却至约2℃至约10℃。

[0018] 设想了包含本文提供的结晶形式和可药用赋形剂的药物组合物，例如，作为适用于皮下注射的悬浮液制剂的组合物。在实施方案中，本文提供包含至少可检测量的所提供结晶形式的药物。

[0019] 还提供了治疗需要其的患者的肥胖症的方法，该方法包括给患者施用有效量的本文提供的结晶形式。本文还提供了治疗需要其的患者的肥胖症的方法，其包括皮下施用包含6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇(游离碱)的结晶形式的组合物。

[0020] 本发明的又一个方面提供包含所公开的结晶形式的试剂盒。附图说明

[0021] 图1示出了形式A的X-射线衍射图。

[0022] 图2是形式A的显微图。

[0023] 图3示出了差示扫描量热法(DSC)对形式A的表征。

[0024] 图4示出了热重/差热分析(TG/DTA)对形式A的表征。

[0025] 图5示出了所公开的制备晶体形式1(形式A)的FT-IR光谱。

[0026] 图6示出了实施例1制备的溶解晶体形式的NMR光谱。

[0027] 图7是形式A的X-射线衍射图。

[0028] 图8是形式A的X-射线衍射图。

[0029] 图9是形式A的X-射线衍射图。

[0030] 图10是形式A的显微图。

[0031] 图11是形式A的X-射线衍射图。

[0032] 图12A是形式A晶体的ORTEP图；图12B是形式A在室温下的X-射线衍射图以及从110K下获得的单晶数据计算的图的比较，并且图12C是用于构建图12A的ORTEP图的原子坐标。

[0033] 图13是形式C的显微图。

[0034] 图14是形式C的X-射线衍射图。

[0035] 图15示出了形式C的FT-IR光谱。

[0036] 本公开至少部分涉及6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇(游离碱)的结晶形式。本公开还提供包含结晶6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇(游离碱)和可药用载体的药物组合物。术语“结晶形式”是指可通过分析方法，例如(如)X-射线粉末衍射或拉曼光谱来表征的晶体形式或改性形式。例如，本文提供包含至少可检测量的所公开的6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇的结晶形式的药物。

[0037] 本文提供6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇游离碱的结晶形式，其特征在于粉末X-射线衍射图在约13.3度的2θ处具有特征峰(本文称为“形式A”)。在一个实施方案中，6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇(游离碱)的结晶形式的特征在于粉末X-射线衍射图在约5.2度的2θ处具有特征峰，或其特征在于粉末X-射线衍射图在约7.1度的2θ处具有特征峰，或其特征在于粉末X-射线衍射图在约10.4度的2θ处具有特征峰，或其特征在于粉末X-射线衍射图在约14.2度的2θ处具有特征峰，或其特征在于粉末X-射线衍射图在约15.5度的2θ处具有特征峰，或其特征在于粉末X-射线衍射图在约16.3度的2θ处具有特征峰，或其特征在于粉末X-射线衍射图在约17.4度的2θ处具有特征峰，或其特征在于粉末X-射线衍射图在约18.6度的2θ处具有特征峰，或其特征在于粉末X-射线衍射图在约19.4度的2θ处具有特征峰，或其特征在于粉末X-射线衍射图在约19.9度的2θ处具有特征峰，或其特征在于粉末X-射线衍射图在约20.9度的2θ处具有特征峰，或其特征在于粉末X-射线衍射图在约22.6度的2θ处具有特征峰，或其特征在于粉末X-射线衍射图在约24.6度的2θ处具有特征峰。在另一个实施方案中，结晶形式的特征在于粉末X-射线衍射图在约13.3、17.4和19.9度的2θ处具有至少一个或多个特征峰。在其他实施方案中，结晶形式的特征在于粉末X-射线衍射图在约7.1、13.3、16.3、17.4、18.6、19.4和19.9度的2θ处具有至少一个或多个特征峰。在又一个实施方案中，结晶形式的特征在于粉末X-射线衍射图在约5.2、7.1、10.4、
13.3、14.2、16.3、17.4、18.6、19.4和19.9度的2θ处具有至少一个或多个特征峰。在一些实施方案中，结晶形式的特征在于粉末X-射线衍射图在约5.2、7.1、10.4、13.3、14.2、15.5、
16.3、17.4、18.6、19.4、19.9、20.9、22.6和24.6度的2θ处具有至少一个或多个特征峰。在该语境中的术语“约”意指2θ的度量存在±0.5的不确定性(以2θ表示)，或2θ的度量存在±0.2的不确定性(以2θ表示)。例如，设想的结晶形式具有图1中所示出的粉末X-射线衍射图。在一个实施方案中，结晶形式的粉末X-射线衍射图使用Cu Kα辐射获得。在其他例子中，设想的结晶形式具有基本上与图6中所示出的图一致的1H NMR光谱，其中结晶形式在溶液中。

[0038] 本文还提供了具有P212121空间群的6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇游离碱的结晶形式。

[0039] 形式A 6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇的结晶形式具有在约2971、2938、2817、2762、1163、1103、832cm-1处具有至少一个或多个特征峰的IR吸收光谱。在该语境中，术语“约”意指cm-1值可以是变化的，如最多±5cm-1。设想的结晶形式的特征在于IR吸收光谱如图5中所示。设想的6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇的结晶形式的特征可在于例如熔点为约83℃，并且其特征可在于差示扫描量热特征图在约83.1℃处具有吸热。例如，形式A在室温(大约20℃)下在二异丙醚中具有约25mg/mL的溶解度，并且在50℃下具有约102mg/mL的溶解度。形式A在大约20℃下在pH大于或等于约8.0的溶剂(如，可包含缓冲剂的水溶液)中的溶解度可以小于约0.2mg/mL。本文所公开的设想结晶形式例如与6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇的非晶态游离碱和/或非晶态半草酸盐相比可以是基本上更稳定的。

[0040] 本文还提供制备结晶形式的6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇(游离碱)，如形式A的方法，其包括：

[0041] a)制备6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇的溶液，如溶于溶剂的非晶态6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇。此类设想的溶剂可包括，如仲醚、甲苯、正庚烷或两种或更多种溶剂的组合和/或溶剂/反溶剂体系；

[0042] b)加热溶液以完全溶解6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇；

[0043] c)调节温度以使得固体从溶液中沉淀出来；以及

[0044] d)分离6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇的结晶形式。在示例性实施方案中，仲醚是二异丙醚。其他设想的溶剂包括醇，例如甲醇和/或异丙醇，以及例如丙酮、乙腈、环己烷、乙酸乙酯、正庚烷、甲基乙基酮、甲基异丁基酮、四氢呋喃、甲苯和/或两种或更多种它们的组合的溶剂。例如，在一个实施方案中，溶剂可以是甲苯:正庚烷混合物，其中正庚烷与甲苯的比例为例如约10:1、约9:1、约8:1、约7:1、约6:1、约5:1、约4:1、约3:1、约2:1或约1:1。在另一个例子中，溶剂或溶剂/反溶剂体系选自乙酸乙酯:正庚烷、丙酮:正庚烷或甲基乙基酮:正庚烷。反溶剂与溶剂的设想比例包括，例如约15:1、约14:1、约13:1、约12:1、约11:1、约10:1、约9:1、约8:1、约7:1、约6:1、约5:1、约4:1、约3:1、约2:1或约1:1。在一些实施方案中，加热溶液包括将溶液加热至约40℃至约60℃，如加热至约50℃。在另一个实施方案中，调节温度包括将溶液冷却至约0℃至约10℃，如冷却至约4℃。在一个实施方案中，调节温度包括将溶液冷却至约4℃或更低，或冷却至约2℃至约10℃。此类体系的使用可以含有或不含种晶。例如，设想的方法也可以包括将现有的6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇晶体掺入或种入溶液。

[0045] 在另一个实施方案中，提供了不同结晶形式的6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇(游离碱)，其特征在于粉末X-射线衍射图在约6.1和18.4或约6.1、12.2、12.8、12.9、18.4、18.6、19.7、20.2、24.1和24.7度的一个或多个2θ位置处具有特征峰(本文称为“形式C”)。在该语境中的术语“约”意指例如2θ的度量存在±0.5的不确定性(以2θ表示)，或甚至2θ的度量存在±0.2的不确定性(以2θ表示)。例如，设想的结晶形式具有图14中所示出的粉末X-射线衍射图。

[0046] 6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇的形式C具有在约831、894、1106、1159、1249、1287、1512、1602、1631和1707cm-1中的至少一者处具有特征峰的IR吸收光谱。在该语境中，术语“约”意指cm-1值可以是变化的，如最多±5cm-1。例如，设想的结晶形式的特征在于IR吸收光谱如图15中所示。6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇的设想结晶形式C表现出板状形态。在一个实施方案中，形式C在例如5℃或环境温度下储存约三天后转变或恢复为形式A。

[0047] 方法

[0048] 在某些实施方案中，本公开提供治疗和/或改善需要其的患者的肥胖症的方法，该方法通过施用有效量所公开的结晶化合物，如形式A来进行。本文还提供引起需要其的患者体重减轻的方法，其包括施用所公开的结晶化合物。

[0049] 其他设想的治疗方法包括治疗或改善肥胖症相关病症或共病的方法，该方法通过给患者施用本文所公开的结晶化合物来进行。例如，本文设想了治疗需要其的患者的2型糖尿病的方法和/或治疗患有糖尿病的患者的其他设想疾病或病症的方法。

[0050] 可通过本发明所公开的化合物治疗的示例性共病或其他病症可包括心脏疾病、内分泌失调、呼吸障碍、肝脏疾病、骨骼疾病、精神障碍、代谢障碍、代谢障碍和生殖障碍。

[0051] 示例性心脏疾病包括高血压、血脂异常、缺血性心脏病、心肌病、心肌梗塞、中风、静脉血栓栓塞性疾病和肺性高血压症。示例性内分泌失调包括2型糖尿病和成人潜伏性自身免疫性糖尿病。示例性呼吸障碍包括肥胖症-肺换气不足综合征、哮喘和阻塞性睡眠呼吸暂停。示例性肝脏疾病为非酒精性脂肪性肝病。示例性骨骼疾病包括背痛和承重关节的骨关节炎。示例性代谢障碍包括普瑞德-威利综合征和多囊卵巢综合征。示例性生殖障碍包括性功能障碍、勃起功能障碍、不育症、产科并发症和胎儿畸形。示例性精神障碍包括体重相关抑郁症和焦躁不安。

[0052] 具体地讲，在某些实施方案中，本公开提供治疗上述医学指征的方法，其包括给需要其的患者施用治疗有效量的本文所述化合物。在某些其他实施方案中，提供了治疗需要其的患者的肥胖症的方法，其包括皮下施用包含6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇的结晶形式的组合物。

[0053] 肥胖症或提到的“超重”是指与瘦体重成比例的过量脂肪。过量脂肪积聚与脂肪组织细胞的大小(肥大)以及数量(数量性肥大)的增加相关。肥胖症用绝对体重、体重:身高比、皮下脂肪分布以及社会和审美标准来不同地度量。身体脂肪的通用量度是身体质量指数(BMI)。BMI是指体重(以千克表示)与身高(以米表示)的平方的比例。身体质量指数可使用下式中的一者准确计算：体重(kg)/身高2(m2)(SI)或703×体重(lb)/身高2(英寸2)(US)。

[0054] 根据美国疾病控制与预防中心(U.S.Centers for Disease Control and Prevention,CDC)，超重成人具有25kg/m2至29.9kg/m2的BMI，并且肥胖成人具有30kg/m2或更高的BMI。40kg/m2或更高的BMI是病态肥胖或极度肥胖的指示。肥胖症也可指男性腰围为约102cm、女性为约88cm的患者。对于儿童，超重和肥胖的定义考虑到年龄和性别对身体脂肪的影响。具有不同遗传背景的患者可在不同于上述一般准则的水平上考虑“肥胖”。

[0055] 本文所公开的结晶化合物可用作药物或可药用组合物，如用于肠内、肠胃外或局部给药的药物制剂的形式，并且本文所公开的设想方法可包括肠内、肠胃外或局部施用所公开的结晶化合物，或包含此类公开结晶化合物或由其形成的组合物。例如，当通过某些途径(如，皮下注射)施用时或在某些制剂中，与不同途径(如，静脉注射)或其他制剂，如具有非晶态形式的制剂相比较，所公开的结晶形式A能够控制一种或多种药代动力学特性(如，更长或更短的释放曲线)。在一个实施方案中，所公开的结晶形式，如形式A可提供一种制剂与另一种之间的基本再现性。

[0056] 组合物

[0057] 本公开的另一个方面提供包含本文所公开的化合物与可药用载体一起配制的药物组合物。具体地讲，本发明提供包含本文所公开的化合物与一种或多种可药用载体一起配制的药物组合物。这些制剂包括适用于口服、直肠、局部、颊面、眼、肠胃外(如，皮下、肌内、真皮内或静脉内)直肠、阴道或气溶胶施用的那些制剂，虽然大多数合适的施用形式在任何指定情况下取决于待治疗病症的程度和严重性，以及所使用的特定化合物的性质。例如，所公开的组合物可以单位剂量配制，和/或可配制用于口服或皮下施用。

[0058] 本发明的示例性药物组合物可以药物制剂的形式，例如以固体、半固体或液体形式使用，该制剂包含一种或多种本发明的化合物作为活性成分，与适用于外部、肠内或肠胃外施用的有机或无机载体或赋形剂混合。活性成分可以例如，与通常用于片剂、球剂、胶囊、栓剂、溶液、乳剂、悬浮液和任何其他适用形式的无毒可药用载体配混。活性目的化合物在疾病进行或状态时以足以产生所需效果的量包含在药物组合物中。

[0059] 为了制备固体组合物，例如片剂，主要活性成分可与药物载体，如常规制片成分例如玉米淀粉、乳糖、蔗糖、山梨糖醇、滑石粉、硬脂酸、硬脂酸镁、磷酸二钙或树胶以及其他药物稀释剂，如水混合，以形成包含本发明化合物或它们的无毒可药用盐的均匀混合物的固体预制剂组合物。当把这些预制剂组合物称为均匀的时，意指活性成分均匀分散在整个组合物中，以使得组合物可轻松地细分为等效的单位剂型，例如片剂、丸剂和胶囊。

[0060] 在用于口服的固体剂型(胶囊、片剂、丸剂、糖衣丸、粉末、颗粒剂等等)中，主题组合物与一种或多种可药用载体，例如柠檬酸钠或磷酸二钙和/或任何以下成分混合：(1)填料或扩充剂，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和/或硅酸；(2)粘结剂，例如羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和/或金合欢胶；(3)湿润剂，例如甘油；(4)崩解剂，例如琼脂-琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠；(5)溶液阻滞剂，例如石蜡；(6)吸收促进剂，例如季铵化合物；(7)润湿剂，例如乙酰基醇和单硬脂酸甘油酯；(8)吸收剂，例如高岭土和膨润土；(9)润滑剂，例如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠以及它们的混合物；以及(10)染色剂。就胶囊、片剂和丸剂而言，组合物也可包含缓冲剂。相似类型的固体组合物也可用作软和硬填充明胶胶囊中的填料，该胶囊使用的赋形剂例如乳糖或牛奶糖，以及高分子量聚乙二醇等等。

[0061] 片剂可通过压缩或模制制备，任选地含有一种或多种副成分。压缩片剂可使用粘结剂(例如，明胶或羟丙基甲基纤维素)、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、崩解剂(例如，羟基乙酸淀粉钠或交联羧甲基纤维素钠)、表面活性剂或分散剂制备。模制的片剂可通过在合适的机械中模制惰性液体稀释剂润湿的主题组合物的混合物来制备。片剂和其他固体剂型，例如糖衣丸、胶囊、丸剂和颗粒剂可任选地使用涂层和外壳，例如肠溶涂层和其他制药领域熟知的涂层获得或制备。

[0062] 用于吸入或吹入的组合物包括溶于可药用水性或有机溶剂的溶液和悬浮液，或它们的混合物以及粉末。口服液体剂型包括可药用乳液、微乳液、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂。除主题组合物之外，液体剂型可包含本领域常用的惰性稀释剂，例如水或其他溶剂、增溶剂和乳化剂，例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、油(具体地讲，棉籽、落花生、玉米、胚芽、橄榄、蓖麻和芝麻油)、甘油、四氢呋喃醇、聚乙二醇和脱水山梨糖醇的脂肪酸酯、环糊精以及它们的混合物。

[0063] 悬浮液除主题组合物之外，可包含悬浮剂，例如乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇和脱水山梨糖醇酯、微晶纤维素、氢氧化铝氧化物、膨润土、琼脂-琼脂和黄蓍胶以及它们的混合物。

[0064] 用于直肠或阴道施用的制剂可以栓剂呈现，所述栓剂可通过主题组合物与一种或多种合适的非刺激性赋形剂或载体混合制备，所述赋形剂或载体包括(例如)可可油、聚乙二醇、栓剂蜡或水杨酸，并且在室温下为固体，但在体温下为液体，因此将在体腔内融化并且释放活性剂。

[0065] 主题组合物的透皮施用剂型包括粉末、喷剂、膏剂、糊剂、霜剂、洗剂、凝胶、溶液、贴剂和吸入剂。活性组分可在无菌条件下与可药用载体，并且与任何必须的防腐剂、缓冲剂或推进剂混合。

[0066] 除主题组合物之外，膏剂、糊剂、霜剂和凝胶可包含赋形剂，例如动物和植物脂肪、油、蜡、石蜡、淀粉、黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、有机硅、膨润土、硅酸、滑石粉和氧化锌或它们的混合物。

[0067] 除主题组合物之外，粉末和喷剂可包含赋形剂，例如乳糖、滑石粉、硅酸、氢氧化铝、硅酸钙和聚酰胺粉末或这些物质的混合物。喷剂可另外包含常规的推进剂，例如氯氟烃和挥发性未取代烃，如丁烷和丙烷。

[0068] 或者，本发明的组合物和化合物可通过气溶胶施用。这通过制备包含化合物的水性气溶胶、脂质体制剂或固体颗粒实现。可使用非水性(如，氟烃推进剂)悬浮液。可使用声波喷雾器，因为它们使暴露于剪切力的试剂最小化，所述剪切力可导致包含于主题组合物中的化合物降解。通常，水性气溶胶通过将主题组合物的水溶液或悬浮液与常规可药用载体和稳定剂一起配制而制备。载体和稳定剂根据特定主题组合物的要求而有差别，但通常包括非离子表面活性剂(Tweens、Pluronics或聚乙二醇)、无毒蛋白质如血清白蛋白、脱水山梨糖醇酯、油酸、卵磷脂、氨基酸例如甘氨酸、缓冲剂、盐、糖或糖醇。气溶胶通常由等渗溶液制备。

[0069] 适用于肠胃外施用的本发明药物组合物包含主题组合物与一种或多种可药用无菌等渗水溶液或非水性溶液、分散体、悬浮液或乳液或无菌粉末的组合，所述无菌粉末可在使用前复溶为无菌可注射溶液或分散体，该溶液或分散体可包含抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂、溶质，所述溶质提供与预期受试者血液等渗的制剂或悬浮剂或增稠剂。

[0070] 可用于本发明的药物组合物的合适水性和非水性载体的例子包括水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、聚乙二醇等等)及其合适的混合物、植物油例如橄榄油和可注射有机酯例如油酸乙酯和环糊精。可以例如通过使用涂层材料，例如卵磷脂，就分散体而言通过维持所需的粒度，以及通过使用表面活性剂来保持适当的流动性。例如，可碾磨本文提供的结晶形式，以获得特定粒度，在至少一些实施方案中，此类结晶形式在碾磨时可保持基本上稳定。

[0071] 例如，本文提供适用于皮下施用的组合物，其包含所公开的结晶形式的悬浮液。皮下施用优于静脉注射，因为静脉注射通常需要医生探访，并且更疼更具侵略性。给患者施用时，结晶化合物的通常剂量可为约1mg至约8mg化合物。在实施方案中，本文公开了从所公开的结晶形式形成，如通过结晶形式与赋形剂和/或溶剂的混合形成的可药用组合物。

[0072] 试剂盒

[0073] 在一个实施方案中，提供了治疗肥胖症或其他设想疾病的试剂盒。例如，所公开的试剂盒包含所公开的结晶化合物，如6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇游离碱的结晶形式，如形式A，例如其设置于(如)第一容器中。在一些实施方案中，试剂盒还可包括可药用赋形剂，其设置于(如)第二容器中。此类设想的试剂盒可包括描述从结晶形式制备适用于给患者施用的药物组合物的书面说明。例如，书面说明可描述适于患者施用的可药用形式的制备，所述制备通过例如混合赋形剂和本文所公开的结晶化合物来进行。所公开的试剂盒还可包括书面说明，其描述了给患者施用所得组合物的方式。

[0074] 实施例

[0075] 本文所述的化合物可基于本文包括的教导和本领域已知的合成步骤使用多种方式制备。以下非限制性实施例示出了所公开的本发明。

[0076] 实施例1

[0077] 6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇的结晶形式A物质按如下步骤制备：

[0078] 将大约423mg非晶态树胶/油样6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇游离碱化合物溶解于大约6mL二异丙醚(IPE)中。使溶液在环境温度(18-22℃)下搅拌大约24小时，期间固体沉淀。所得的固体通过过滤分离，并且在环境真空下干燥大约4小时(收率35.8％)。

[0079] 对固体晶体(形式A)进行X-射线粉末衍射(XRPD)分析。XRPD分析在Siemens D5000上进行，在3和30或50°2θ之间扫描样品。对于样品<100mg，将大约5mg样品轻轻压缩到玻璃基板上面，所述基板插入塑料样品夹持器。对于样品>100mg，将大约100mg样品轻轻压缩到塑料样品夹持器中，使得样品表面为平滑的，并且刚好高于样品夹持器的水平。然后，将样品加载到衍射仪，衍射仪以反射模式运行，并且使用以下实验条件分析，参见下表1。

[0080] 表1

[0081]

[0082] XRPD在图1中示出。特征峰包括下表2中示出的一个或多个峰。

[0083] 表2

[0084]

[0085] 双折射的存在通过偏振光显微镜(PLM)使用配备有Motic照相机和图像捕集软件(Motic Images Plus 2.0)的Olympus BX50F4偏振显微镜确定。图像使用20×物镜记录。在每种情况下，将大约1mg样品置于显微镜载玻片上，如图2中所示出。

[0086] 结晶化合物也通过差示扫描量热法来表征。将大约5-10mg样品称入铝DSC盘，用穿孔铝盖封闭(非密封)，除非另外指明。然后将样品盘加载入Seiko DSC6200(配备有冷却器)，冷却并且保持在25℃。一旦获得稳定的热流响应，则将样品和参照以10℃/min的扫描速率加热至大约280℃，并且监测所得的热流响应。氮用作150cm3/min流速的吹扫气体。每周使用铟参照标准校准仪器的温度和热流。样品分析使用Muse Measurement软件(版本5.4U)进行，其中热事件的温度引用为根据制造商说明测量的起始温度。结果在图3中示出。
存在于DSC迹线中的所有吸热指向朝下方向。

[0087] 同时进行热重/差热分析(TG/DTA)。将大约5-10mg样品称入铝盘，并且加载到同步热重/差热分析仪(TG/DTA)，保持在室温下。然后将样品以10℃/min的速率从25℃加热至280℃，记录期间样品重量变化以及任何差热事件(DTA)。氮用作吹扫气体，流速为150cm3/min。每月分别使用100mg参照重量和铟参照标准校准仪器的重量和温度。样品分析使用Muse Measurement软件(版本5.4U)进行。结果在图4中示出。

[0088] 在Bruker Alpha FT-IR光谱仪上进行红外光谱测定。将大约2-20mg物质用于分析，样品为液体或固体。光谱使用以下参数获得：分辨率：4cm-1；背景扫描时间：16次扫描；样-1品扫描时间：16次扫描；数据收集：4000至400cm ；结果光谱：透射；软件：OPUS版本6.5。图5示出了所制备结晶化合物的IR光谱。

[0089] 1H NMR在Bruker DPX400NMR光谱仪上进行。样品在氘代DMSO中制备，所制备的浓度在10-20mg/mL之间，光谱在图6中示出。

[0090] 实施例2

[0091] 6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇(游离碱)的结晶形式A物质按如下步骤浓缩：

[0092] 将二异丙醚(90mL)加入包含11.14g非晶态树胶/油样物质的圆底烧瓶(250mL)。然后将烧瓶加热至50℃，其中冷凝器连接到烧瓶的颈部。这使非晶态物质得以溶解。以大约300rpm搅拌溶液。保持在50℃下五分钟后，以大约1℃/分钟的速率冷却溶液，同时以大约
300rpm搅拌。一旦温度冷却至46℃，将68.2mg结晶物质加入烧瓶用于接种。在冷却至大约24℃后，固体开始沉淀出溶液，并且沉淀随着实验冷却至4℃而继续。在达到4℃后，保持该温度大约5分钟。然后过滤物质并且在过滤器上放置5分钟干燥。然后将物质转移到烧杯，置于真空炉(大约600mbar)中，在环境温度(大约20℃)下进一步干燥。在真空炉中保留24小时后，对样品称重。

[0093] NMR分析表明干燥24小时后存在大约2％的残余溶剂。因此，将样品在真空(大约600mbar)环境温度(大约20℃)下再干燥24小时(即总共干燥48小时)。在进一步干燥进行后，NMR分析未鉴定出残余溶剂的迹线。收率为80％，HPLC分析表明纯度大于99.5％。XPRD在图7中示出。

[0094] 实施例3

[0095] 按如下步骤进行500mg 6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇结晶形式A物质的研磨：

[0096] 将来自实施例2结晶化合物浓缩的样品(大约500mg)置于研钵(玛瑙材料，H:35mm、L:77mm)上。然后使用研杵(长度：80mm；研磨直径：17mm)研磨样品大约5分钟。在整个研磨步骤中，使样品放置大约10秒间歇，以确保不产生大量热量。PLM表明双折射物质具有约20μm和80μm之间的粒度。XRPD分析表明，物质保持高度结晶，峰位置与未研磨的结晶物质(图8)一致。

[0097] 实施例4

[0098] 6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇(游离碱)的结晶形式A物质按如下步骤浓缩：

[0099] 20mL圆底烧瓶配备有搅拌棒或机械搅拌器和回流冷凝器(不需要连接至冷水供给的冷凝器；空气冷却通常足以用于结晶目的)。在单独的小瓶中，将6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇(1g)溶解于乙酸乙酯(1mL)。所得的溶液通过PTFE 0.2um过滤器使用氮气压过滤到前述20mL圆底烧瓶中。小瓶用乙酸乙酯(0.25mL)洗涤，所得的溶液通过相同的PTFE 0.2um过滤器使用氮气压过滤到包含滤液的烧瓶中。正庚烷(10mL)通过相同的PTFE 0.2um过滤器使用氮气压过滤到包含滤液的烧瓶中(注：正庚烷加入乙酸乙酯溶液期间观察到大量沉淀)。所得的混合物缓慢加热至约50-55℃(注：完全溶解通常见于35-40℃之间)。
溶液缓缓冷却至35℃，在该点处停止搅拌并且加入种晶(1mg、粉末状)。溶液的内温保持在约35℃3h，无需搅拌(注：如果观察到大量晶体在烧瓶表面上形成，则施加偶尔短暂(约15分钟)而强烈的搅拌，以破坏烧瓶表面上的晶体)。使混合物以1℃/小时的速率缓缓冷却至20℃，而不搅拌或很少搅拌。混合物的内温保持在约20℃下10-18h。白色针状晶体产物通过过滤收集，用正庚烷(0.5mL)洗涤，并且在过滤真空条件下干燥约2h。固体收集于预称重的培养皿上，覆盖培养皿并且置于真空炉(21-25℃、20mmHg)中超过18h以得到结晶形式A(75-
80％)。

[0100] XRPD分析表明物质为具有与形式A一致的图的结晶。

[0101] 实施例5

[0102] 6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇(游离碱)的结晶形式A物质按如下步骤浓缩：

[0103] 20mL圆底烧瓶配备有搅拌棒或机械搅拌器和回流冷凝器(不需要连接至冷水供给的冷凝器；空气冷却通常足以用于结晶目的)。在单独的小瓶中，将6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇(1g)溶解于乙酸乙酯(1mL)。所得的溶液通过PTFE 0.2um过滤器使用氮气压过滤到前述20mL圆底烧瓶中。小瓶用乙酸乙酯(0.25mL)洗涤，所得的溶液通过相同的PTFE 0.2um过滤器使用氮气压过滤到包含滤液的烧瓶中。正庚烷(10mL)通过相同的PTFE 0.2um过滤器使用氮气压过滤到包含滤液的烧瓶中(注：正庚烷加入乙酸乙酯溶液期间观察到大量沉淀)。所得的混合物缓慢加热至约50-55℃(注：完全溶解通常见于35-40℃之间)。
溶液缓缓冷却至25℃，缓缓搅拌保持该温度3h(注：白色沉淀崩解，可能需要调节搅拌速度，以充分混合)。混合物缓缓冷却至20℃，混合物的内温保持在该温度下10-18h。白色蓬松固体产物通过过滤收集，用正庚烷(0.5mL)洗涤，并且在过滤真空条件下干燥约2h。固体收集于预称重的培养皿上，覆盖培养皿并且置于真空炉(21-25℃、20mmHg)中超过18h以得到结晶形式A(75-80％)。

[0104] XRPD分析表明物质为具有与形式A一致的图的结晶。

[0105] 实施例6

[0106] 6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇(游离碱)的结晶形式A物质按如下步骤浓缩：

[0107] 20mL圆底烧瓶配备有搅拌棒或机械搅拌器和回流冷凝器(不需要连接至冷水供给的冷凝器；空气冷却通常足以用于结晶目的)。在单独的小瓶中，将6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇(1g)溶解于甲苯(约1mL)。所得的溶液通过PTFE 0.2um过滤器使用氮气压过滤到前述20mL圆底烧瓶中。小瓶用甲苯(温暖或室温，0.25mL)洗涤，所得的溶液通过相同的PTFE 0.2um过滤器使用氮气压过滤到包含滤液的烧瓶中。正庚烷(5mL)通过相同的PTFE 0.2um过滤器使用氮气压过滤到包含滤液的烧瓶中(注：正庚烷加入甲苯溶液期间观察到大量沉淀)。所得的混合物缓慢加热至约50-55℃(注：完全溶解通常见于35-40℃之间)。溶液缓缓冷却至28℃，期间加入种晶(1mg、粉末状)。溶液的内温保持在约28℃3h，无需搅拌(注：如果观察到大量晶体在烧瓶表面上形成，则施加偶尔短暂(约15分钟)而强烈的搅拌，以破坏烧瓶表面上的晶体)。使混合物以1℃/小时的速率缓缓冷却至20℃，而不搅拌或很少搅拌。混合物的内温保持在约20℃下10-18h。白色棒状晶体产物通过过滤收集，用正庚烷(0.5mL)洗涤，并且在过滤真空条件下干燥约2h。固体收集于预称重的培养皿上，覆盖培养皿并且置于真空炉(21-25℃、20mmHg)中超过18h以得到结晶形式A(65-75％)。

[0108] XRPD分析表明物质为具有与形式A一致的图的结晶。

[0109] 实施例7

[0110] 将6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇(游离碱)的结晶形式按如下步骤浓缩：将来自三个不同容器的非晶态树胶/油样游离碱物质合并到500mL圆底烧瓶中，如表3中所示：

[0111] 表3

[0112]

[0113] 在每个容器中初始加入二异丙醚后，将三个小瓶加热至50℃，同时以大约300rpm搅拌，保持在该温度下直到所出现的大量物质溶解。任何将每个容器的溶液转移到500mL圆底烧瓶中。然后向每个容器中第二次加入二异丙醚，以溶解剩余物质，并且洗涤容器，收集至500mL圆底烧瓶中。在来自三个容器的物质合并后，500mL圆底烧瓶包含大约28.56g物质，溶解于大约185mL二异丙醚中。然后将烧瓶加热至50℃，同时以大约300rpm搅拌，并且保持在该温度下大约10分钟。这使得所有物质完全溶解。保持在50℃下10分钟后，将溶液以大约1℃/分钟的速率冷却，同时以大约300rpm搅拌。一旦温度冷却至30℃，则将例如实施例1中制备14.8mg结晶物质加入烧瓶接种(晶种物质在加入烧瓶作为晶种前，使用玛瑙研钵和研杵研磨大约1分钟)。继续冷却至4℃，固体沉淀出溶液，得到稠浆液。将烧瓶再保持在4℃下一小时，同时以大约300rpm搅拌。然后过滤物质并且在过滤器上放置大约10分钟干燥。然后将物质转移到烧杯，置于真空炉(大约600mbar)中，在环境温度(大约20℃)下进一步干燥。
保留在真空炉中48小时后，对样品称重。1H NMR分析表明干燥48小时后存在大约2.4％的残余溶剂。因此，将样品在真空(大约600mbar)、室温(大约20℃)下再干燥3天(即总共干燥5天)。在进一步干燥进行后，1H NMR分析表明存在1.13％的残余溶剂。然后，将样品在真空(大约600mbar)、30℃下再干燥3.5天(即总共干燥8.5天)。

[0114] 然后进行1H NMR分析，未鉴定出残余溶剂的迹线。HPLC分析表明纯度大于99.5％。XPRD在图9中示出。

[0115] 实施例8

[0116] 6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇游离碱的结晶形式按如下步骤从烟曲霉醇浓缩：

[0117] 在5L玻璃反应器中，室温下将甲苯(1.5L)、烟曲霉醇(300g)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亚胺(EDC；375g(87.9％))、N,N-二甲基氨基吡啶(DMAP；261g)和4-[(2-N,N-二甲基氨基)乙氧基]肉桂酸(501g)按该顺序加入反应器。混合物从20℃加热至约45-58℃达30分钟，在该温度下再搅拌1-3h直到反应完成。反应完成通过薄层色谱法(二氯甲烷:甲醇(4:1)、二氧化硅底片、茴香醛显像)监测，结果存在的烟曲霉醇少于1％(注：反应通常需要2-3h完成)。

[0118] 在反应确认完成后，将混合物冷却至20-25℃达35分钟，加入甲苯(1.5L)。所得的混合物通过硅藻土片(300g)过滤移除所有未溶解的物质，并且用甲苯(3.0L)洗涤硅藻土片。通过HPLC定量分析合并的滤液(6.85L)(预计520g(97％)所需产物存在于过滤溶液中)。

[0119] 甲苯滤液用pH4.0-4.5、250mM乙酸铵缓冲溶液洗涤(2次洗涤、每次洗涤4.5L)。乙酸铵缓冲溶液通过将乙酸铵(174g)溶解于纯净水(9L)中，加入乙酸(283g)调节pH来制备。确认移除大多数DMAP和肉桂酸后(薄层色谱分析(二氯甲烷:甲醇(4:1)、茴香醛显像))，用
5％NaHCO3(1.5L)和纯净水(1.5L)洗涤有机相。进行HPLC分析，未检测到DMAP。

[0120] 将活性炭(30g，Nuchar SA-20)加入甲苯溶液，并且搅拌混合物20分钟。通过硅藻土垫(300g)过滤悬浮液20分钟移除活性炭，过滤溶液通过0.2um过滤器(Waters，目录No.186003524)再过滤20分钟。甲苯溶液使用旋转蒸发器真空(浴温＝35-40℃，15-25mbar)浓缩，对浓缩物进行1H NMR确定残余的甲苯为15.3％。

[0121] 向浓缩物加入正庚烷(1.0L)，将所得的混合物再次真空(浴温＝35-40℃，15-25mbar)浓缩25分钟(产物变为块状固体)。1H NMR分析确定浓缩物中残余的甲苯为0％。

[0122] 向该浓缩物加入甲苯(0.3L，通过0.2um过滤器过滤)和正庚烷(1.2L，通过0.2um过滤器过滤)，所得的混合物缓缓加热至40-51℃达40分钟，使固体完全溶解。混合物缓缓冷却至25-36℃，加入45mg形式A种晶。混合物保持在室温下10-25小时，无需搅拌。

[0123] 产物通过过滤收集，滤饼用正庚烷(300mL，0.2um过滤)洗涤，在28-30℃之间真空(0.2-0.3英寸Hg柱)下干燥24小时，得到6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇游离碱的结晶形式(375g、70.6％)，HPLC纯度为98-99％(浓缩滤液得到过滤浓缩物(117g)，HPLC分析表明具有80.9％的纯度)。

[0124] XRPD分析表明物质为具有与形式A一致的图的结晶。

[0125] 实施例9

[0126] 6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇(游离碱)结晶形式的重晶体按如下步骤进行：

[0127] 将结晶6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇(游离碱；19g)加入250mL圆底烧瓶。加入甲苯(大约19mL)，反应在电炉磁力搅拌器(含加热套膜)上缓缓加热(大约1℃/分钟)至大约55℃，同时在大约150rpm下搅拌(椭圆磁力搅拌棒，长度：2.5cm)。在溶解完成后，缓缓加入庚烷(大约171mL，预热至大约55℃)，固体物质开始立即沉淀出溶液。在10分钟搅拌后，沉淀的固体溶解，但存在少量黄色树胶。溶液转移到不同的圆底烧瓶(250mL，预热至大约55℃)中，以便除去树胶。使转移的溶液在新烧瓶中缓缓搅拌(大约150rpm)大约5分钟，然后关闭电炉，让反应从55℃自然冷却到环境(大约22℃)。固体物质在大约28℃下从溶液结晶。冷却至环境(大约22℃)后，继续缓缓搅拌(大约150rpm)浆液3小时。3小时后，固体使用布氏漏斗(直径：7.7cm)和连接到小隔膜泵的布氏过滤烧瓶(500mL)过滤。过滤器中使用双层滤纸(滤纸直径5.5cm)。使物质在过滤器上干燥大约10分钟。然后将固体物质置于大表面积(直径14cm)结晶盘上，在Gallenkamp真空炉中，真空(压力大约25mbar，绝对压力读数)环境温度(大约22℃)下干燥大约七天，得到6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇游离碱的结晶形式(大约15.1g、79.4％)。

[0128] XRPD分析表明物质为具有与形式A一致的图的结晶。

[0129] 实施例10

[0130] 适用于X-射线测定的6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇(形式A)结晶物质利用溶剂-反溶剂通过如下蒸气扩散法制备：

[0131] 浓度为100mg/mL的形式A过滤溶液通过如下步骤制备：在适量甲基叔丁基醚中环境温度下搅拌形式A(参见图10和11)的样品，然后将溶液通过0.7μm玻璃纤维过滤器过滤至1.2mL镶嵌小瓶。此时，过滤溶液暴露于戊烷蒸气中，形成结晶物质，将该物质用于单晶结构测定。单晶结构测定步骤按如下进行：

[0132] 将形式A的单晶样品载入Mitegen聚酰亚胺显微载片，其中具有少量Paratone N油。所有X-射线测量在Bruker-Nonius Kappa Axis X8Apex2衍射仪上-163℃的温度下进行。单位晶胞尺寸从9994次反射的对称约束拟合确定，其中4.76°<2θ<55.5°。数据收集策略为多次ω和 扫描，其收集最多59.34°(2θ)的数据。框架整合使用SAINT(Bruker-Nonius，SAINT版本2009.9，2009年，Bruker-Nonius,Madison,WI 53711,USA)进行。所得的原始数据使用SADABS(Bruker-Nonius，SADABS版本2009.9，2009年，Bruker-Nonius,Madison,WI)通过对称等效数据的多次扫描平均进行换算和吸收纠正。

[0133] 晶体结构使用XS程序(Bruker-AXS，XS版本2009.9，2009年，Bruker-AXS,Madison,WI 53711,USA))通过直接法解析。所有非氢原子从初始溶液获得。氢原子在理想位置引入，置于母原子上。C3原子位点在2个位置上是无序的。供选择的位置指定为C3'。初期位置的归一化占有精炼为0.698(10)的值。衍射数据不能确定绝对结构。设置C14的绝对构型为绝对构型(R)，对应的原子(C6)在烟曲霉素的结构中报告(Halász,J.et.al.Tetrahedron,2000,2
56，10081)。所有其他立构中心相对于其分配设置。结构模型使用基于F的全矩阵最小二乘法与数据进行拟合。计算结构因子包括在常规制表的不规则分散纠正内。结构使用得自SHELXTL(Bruker-AXS，XL版本2009.9，2009年，Bruker-AXS,Madison,WI 53711,USA)的XL程序精炼，图形使用NRCVAX晶体图像程序套件生成。

[0134] 单晶测定的ORTEP图在图12A中示出。晶体数据的汇总在下表5中示出。

[0135] 表5

[0136]

[0137]

[0138] 图12A的ORETP图的晶体结构数据在图12C中示出。形式A在室温下的X-射线衍射图以及从110K下获得的单晶数据计算的图的比较在图12B中示出。

[0139] 实施例11

[0140] 6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇的结晶形式C物质按如下步骤制备：

[0141] 非晶态物质通过将6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇(20mg)溶解于甲醇(0.5mL)中，并且使所得的溶液置于离心蒸发器中4h来制备。可使用拉曼光谱检测非晶相，其中非晶态物质在1633和1707cm-1处显示出特征峰，而形式A在1627和1700cm-1处显示出相关峰。

[0142] 6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇非晶态物质的样品暴露于环境温度下的纯三氯乙烷蒸气中。非晶态形式容易潮解。潮解的样品保存于冷冻环境中，并且使用Genevac离心蒸发器蒸发至干燥。然后密封样品，浸入干冰中大约15分钟，并且保存于冷冻机中(大约25℃)。在保存于冷冻机期间(-20℃，9天)样品仍为玻璃态，然后保存于5℃下(9天)，得到结晶形式C(参见图13的显微图)。部分形式C样品的留在环境温度下。环境温度下的样品以及保存在5℃下的样品三天后转化为形式A。观察到形式C相对于形式A呈亚稳态。

[0143] 对固体晶体(形式C)进行X-射线粉末衍射(XRPD)分析。XRPD分析在具有HI-STAR GADDS检测器的Bruker D8Discovery衍射仪上或Si零背景晶片上的PANalytical X’Pert Pro衍射仪上进行。所有衍射图使用单色Cu Kα(45kV/40mA)辐射收集，步长为0.02°2θ。XRPD在图14中示出。形式C的XRPD图不显示出任何形式A特征峰，被认为是纯相。

[0144] XRPD特征峰包括下表4中示出的一个或多个峰。

[0145] 表4

[0146]

[0147] 红外光谱测定在配备有DTGS检测器和Durascope的Nicolet6700光谱仪(Thermo -1Electron)上进行。光谱使用以下参数获得：4cm 分辨率、64次扫描，使用Happ-Genzel切趾功能和2级零填充。

[0148] 图15示出了所制备的结晶形式C化合物的IR光谱。如图15中所示出，形式C的IR光谱示出了相对于形式A的峰漂移。例如，在羰基区域中，形式C示出了1707cm-1处的峰，而形式A示出了1700cm-1处的对应峰。在另一个例子中，形式C示出了894cm-1处的峰，而形式A在指纹区域中未显示出类似峰。

[0149] IR特征峰包括下表5中示出的一个或多个峰。

[0150] 表5

[0151]FT-IR吸收带，cm-1
1159
1602
1707
1512
1249
831
1287
1106
1631
894

[0152] 拉曼光谱利用配备有1064nm Nd：YVO4激发激光器、InGaAs和液态-N2冷却Ge检测器和MicroStage的Nicolet NXR9650或NXR 960光谱仪(Thermo Electron)进行。所有光谱在4cm-1分辨率下，64-128次扫描，使用Happ-Genzel切趾功能和2级零填充获得。

[0153] 以引用的方式并入

[0154] 本文涉及的所有公开和专利，包括下文列出的那些条目，据此出于所有目的全文以引用方式并入，正如每个单独公开或专利具体地和单独地以引用方式并入。如发生矛盾，本发明包括其中所有定义将处于支配地位。

[0155] 等同物

[0156] 虽然讨论了主题发明的具体实施方案，但上述说明书是示例性的而非限制性的。本领域的技术人员在查看本说明书时，本发明的多个变型形式将显而易见。本发明的全部领域应通过参考连同它们等同物的全部领域的权利要求书，以及连同此类变型形式的说明书确定。

[0157] 除非另外指明，说明书和权利要求书中所用的表示成分、反应条件等等数量的所有数字应理解为在所有情况下以术语“约”修饰。因此，除非有相反的说明，本说明书和所附权利要求中示出的数值参数为近似值，可根据试图通过本发明获得的所需特性而变化。

[0158] 1.一种6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇游离碱的结晶形式，其特征在于粉末X-射线衍射图在约13.3度的2θ处具有特征峰。

[0159] 2.根据段落1所述的结晶形式，其特征在于粉末X-射线衍射图在约13.3、17.4和19.9的2θ角处具有特征峰。

[0160] 3.根据段落2所述的结晶形式，其特征在于粉末X-射线衍射图在约7.1、13.3、16.3、17.4、18.6、19.4和19.9度的2θ处具有特征峰。

[0161] 4.根据段落3所述的结晶形式，其特征在于粉末X-射线衍射图在5.2、7.1、10.4、13.3、14.2、16.3、17.4、18.6、19.4和19.9度的2θ处具有特征峰。

[0162] 5.根据段落1-4中任一项所述的结晶形式，包括图1中示出的粉末X-射线衍射图。

[0163] 6.根据段落1-5中任一项所述的结晶形式，其中所述粉末X-射线衍射图使用Cu Kα辐射获得。

[0164] 7.一种6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇游离碱的结晶形式，具有P212121空间群。

[0165] 8.根据段落1-7中任一项所述的结晶形式，具有基本上与图6中所示出的图一致的1H NMR光谱，其中所述结晶形式在溶液中。

[0166] 9.一种制备根据段落1-8中任一项所述的结晶形式的方法，所述方法包括：

[0167] a)制备溶于溶剂的6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇溶液；

[0168] b)加热所述溶液以完全溶解所述6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇；

[0169] c)调节温度以使得固体从所述溶液中沉淀出来；以及

[0170] d)分离6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇的所述结晶形式。

[0171] 10.根据段落9所述的方法，其中所述溶剂是二异丙醚。

[0172] 11.根据段落9所述的方法，其中所述溶剂包含甲苯。

[0173] 12.根据段落9或11所述的方法，其中所述溶剂包含正庚烷。

[0174] 13.根据段落9所述的方法，其中所述溶剂包含甲苯:正庚烷混合物。

[0175] 14.根据段落13所述的方法，其中正庚烷与甲苯的比例为约4:1。

[0176] 15.根据段落9-14中任一项所述的方法，其中加热所述溶液包括将所述溶液加热至约40℃至约60℃。

[0177] 16.根据段落9-15中任一项所述的方法，其中加热所述溶液包括将所述溶液加热至约50℃。

[0178] 17.根据段落9-16中任一项所述的方法，其中调节温度包括将所述溶液冷却至约4℃或更低，或冷却至约2℃至约10℃。

[0179] 18.一种包含根据段落1-8中任一项所述的结晶形式和可药用赋形剂的药物组合物。

[0180] 19.根据段落18所述的药物组合物，其中所述组合物为用于皮下注射的悬浮液制剂。

[0181] 20.一种包含至少可检测量的根据段落1-8中任一项所述的结晶形式的药物。

[0182] 21.一种治疗需要其的患者的肥胖症的方法，所述方法包括给所述患者施用有效量的根据段落1-8中任一项所述的结晶形式。

[0183] 22.一种治疗需要其的患者的肥胖症的方法，所述方法包括：皮下施用包含6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇的结晶形式的组合物。

[0184] 23.一种包含根据段落1所述的结晶形式的试剂盒。

[0185] 24.根据段落23所述的试剂盒，还包括描述从所述结晶形式制备适用于给患者施用的药物组合物的书面说明。

[0186] 25.根据段落23所述的试剂盒，还包括描述给所述患者施用所得组合物的方式的书面说明。

[0187] 26.根据段落23-25中任一项所述的试剂盒，还包括可药用赋形剂。

[0188] 27.一种由根据段落1所述的结晶形式形成的可药用组合物。