萝卜硫烷的分离和纯化 |
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| 申请号 | CN201380040267.7 | 申请日 | 2013-05-31 | 公开(公告)号 | CN104640573B | 公开(公告)日 | 2017-08-01 |
| 申请人 | 法玛格拉实验室公司; | 发明人 | 萨哈戴瓦·雷迪·达米莱迪; 卡帕卡珀·安布鲁瓦兹·阿库尔; 贾瑞德·K·尼尔森; 阿尔贝托·罗杰·弗里斯比; 彼得·怀亚特·纽瑟姆; | ||||
| 摘要 | 本 发明 涉及分离和纯化萝卜硫烷的方法。更具体地，本发明涉及从天然来源分离和纯化萝卜硫烷的方法。本发明还涉及形成萝卜硫烷与环糊精的高纯度络合物的方法。 | ||||||
| 权利要求 | 1.一种从其天然来源分离萝卜硫烷和/或萝卜硫烷类似物的方法，所述方法包括： |
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| 说明书全文 | 萝卜硫烷的分离和纯化发明领域 [0001] 本发明涉及分离和纯化萝卜硫烷(sulforaphane)或其类似物的方法。更具体地，本发明涉及从天然来源分离和纯化萝卜硫烷或其类似物的方法。本发明还涉及形成萝卜硫烷或其类似物与环糊精的高纯度络合物的方法。 [0002] 发明背景 [0004] 萝卜硫烷被发现在十字花科蔬菜中，比如卷心菜、花椰菜、花椰菜芽、抱子甘蓝、菜花、菜花芽、白菜、甘蓝菜、羽衣甘蓝、芝麻菜、球茎甘蓝、芥末、萝卜、红萝卜和水田芥。在植物中，其以结合形式作为萝卜硫苷、芥子苷存在。事实上，萝卜硫烷常常通过酶促反应在植物细胞损伤之后从萝卜硫苷形成。 [0005] 产生萝卜硫烷的各种合成方法在本领域中是已知的。萝卜硫烷早在1948年由Schmid和Karrer合成(Schmid H.和Karrer,P.；Helvetica Chimica Acta.1948；31；6:1497-1505)。Schmid合成导致外消旋混合物。自1948年以来开发的合成萝卜硫烷的其他方法也导致外消旋混合物。 [0006] 与萝卜硫烷有关的一个主要问题是其物理不稳定性。萝卜硫烷以不稳定的油的形式存在，其在正常条件下快速降解。这使得萝卜硫烷格外难以制造和分配。 [0007] 稳定萝卜硫烷的一种方法包括萝卜硫烷-环糊精络合物的形成。在这点上，其全部内容特此通过引用并入的US 7,879,822B2描述用于制备萝卜硫烷接着其通过萝卜硫烷-环糊精络合物的形成的随后稳定的合成方法。 [0008] 然而，仍然存在着对能够实现从其各种天然来源高效且有效分离和纯化萝卜硫烷的方法的需要。 [0009] 发明概述 [0010] 在一方面中，本发明涉及从其天然来源分离萝卜硫烷和/或萝卜硫烷类似物的方法，所述方法包括： [0011] a)使萝卜硫烷和/或萝卜硫烷类似物的天然来源与环糊精在合适的溶剂中并且在加热或不加热的情况下混合； [0012] b)使混合物的温度冷却或控制至-10℃至+25℃的范围内，以促进萝卜硫烷或萝卜硫烷类似物和环糊精之间的络合物的沉淀物的形成；以及 [0013] c)收集形成的沉淀物。 [0014] 已经惊人发现的是，环糊精可用来以高纯度水平从天然来源有效分离萝卜硫烷或萝卜硫烷类似物。因此，本发明的方法提供分离天然存在的萝卜硫烷或天然存在的萝卜硫烷类似物的简单且有成本效益的手段。 [0015] 在第二方面中，本发明提供从其天然来源纯化萝卜硫烷或萝卜硫烷类似物的方法，所述方法包括通过本文定义的方法分离萝卜硫烷和/或萝卜硫烷类似物，并且然后从所得的萝卜硫烷-环糊精或萝卜硫烷类似物-环糊精络合物释放萝卜硫烷和/或萝卜硫烷类似物。 [0016] 在第三方面中，本发明提供从萝卜硫烷和/或萝卜硫烷类似物的天然来源形成萝卜硫烷和/或萝卜硫烷类似物与环糊精的络合物的方法，所述方法包括： [0017] a)使萝卜硫烷的天然来源与环糊精在合适的溶剂中并且在加热或不加热的情况下混合； [0018] b)使混合物的温度冷却或控制至-10℃至+25℃的范围内，以促进萝卜硫烷和环糊精之间的络合物的沉淀物的形成；以及 [0019] c)收集形成的沉淀物。 [0020] 在第四方面中，本发明涉及通过本文定义的方法的任一种形成的萝卜硫烷和/或萝卜硫烷类似物与环糊精的络合物。 [0021] 在第五方面中，本发明涉及通过本文定义的方法的任一种可获得的、获得的或者直接获得的萝卜硫烷和/或萝卜硫烷类似物与环糊精的络合物。 [0022] 在六方面中，本发明涉及由本文定义的方法的任一种制备的用于治疗和/或预防微生物感染和/或癌症的萝卜硫烷和/或萝卜硫烷类似物与环糊精的络合物。 [0023] 在七方面中，本发明提供治疗和/或预防微生物感染和/或癌症的方法，方法包括对需要这种治疗的个体施用治疗有效量的由本文定义的方法的任一种制备的萝卜硫烷和/或萝卜硫烷类似物与环糊精的络合物。 [0024] 在第八方面中，本发明涉及包括由本文定义的方法的任一种制备的萝卜硫烷和/或萝卜硫烷类似物与环糊精的络合物和一种或更多种另外的药物赋形剂的药物组合物。 [0025] 发明详述 [0026] 如以上指示的，本发明涉及从天然来源分离萝卜硫烷和/或萝卜硫烷类似物的方法，以及涉及从天然来源制备萝卜硫烷和/或萝卜硫烷类似物与环糊精的络合物的方法，所述方法学包括： [0027] a)使萝卜硫烷和/或萝卜硫烷类似物的天然来源与环糊精在合适的溶剂中并且在加热或不加热的情况下混合； [0028] b)使混合物的温度冷却或控制至-10℃至+25℃的范围内，以促进萝卜硫烷和/或萝卜硫烷类似物和环糊精之间的络合物的沉淀物的形成；以及 [0029] c)收集形成的沉淀物。 [0030] 本发明的方法学以萝卜硫烷和/或萝卜硫烷类似物与环糊精的高纯度络合物的形式从天然来源有效分离萝卜硫烷和/或萝卜硫烷类似物。 [0031] 合适地，存在于络合物中的萝卜硫烷和/或萝卜硫烷类似物的纯度大于75％、更合适地大于80％、甚至更合适地大于85％、90％、95％或98％。 [0032] 在某些实施方案中，所得络合物的纯度可通过重结晶来进一步增加。 [0033] 现在将详细参照本发明的实施方案，以下陈述其一个或更多个实例。通过本发明的解释而不是本发明的限制提供每个实例。实际上，本领域技术人员将清楚可以在本发明中进行各种改变和变化，而没有脱离本发明的范围或精神。例如，作为一个实施方案的一部分说明或描述的特征可以用于另一个实施方案以产生又一个实施方案。因此，意图本发明涵盖这些改变和变化，因为它们在所附权利要求及其等效物的范围内。在以下详述中公开了本发明的其他目的、特征和方面，或根据以下详述清楚本发明的其他目的、特征和方面。本领域技术人员应理解本讨论只是示例性实施方案的描述，并且不意图为限制本发明的较宽方面。 [0034] 本发明中使用的萝卜硫烷和/或萝卜硫烷类似物的天然来源可为任何合适的天然来源。例如，萝卜硫烷和/或其类似物可从花椰菜、抱子甘蓝、卷心菜、菜花、白菜、甘蓝菜、羽衣甘蓝、芥兰、西兰花、甘蓝、芥末、萝卜、小萝卜、芝麻菜、水田芥或其他天然来源中提取。因此，在一个实施方案中，天然来源选自这些蔬菜来源中的一种或更多种。萝卜硫烷或萝卜硫烷类似物可从天然物质直接提取或来自从天然来源物质制备的提取物。 [0035] 本文使用术语“类似物”或“萝卜硫烷类似物”来指萝卜硫烷的天然存在的类似物，比如，例如萝卜硫素(sulforaphene)、芥酸精(其中硫未被氧化的萝卜硫烷，即甲基硫基)和糖芥素(其中硫被过度氧化的萝卜硫烷，即甲基砜基)。 [0036] 以下示出芥酸精和糖芥素的结构： [0037] [0038] 其他萝卜硫烷类似物在本领域中是已知的并且在例如美国专利第5411968和7879822号中描述，其全部内容特此通过引用并入。特定的萝卜硫烷类似物包括6-异硫氰酸根-2-己酮、外-2-乙酰基-6-异硫氰酸根降冰片烷、外-2-异硫氰酸根-6-甲磺酰基降冰片烷、6-异硫氰酸根-2-己醇、1-异硫氰酸根-4-二甲基膦酰丁烷、外-2-(1′-羟乙基)-5-异硫氰酸根降冰片烷、外-2-乙酰基-5-异硫氰酸根降冰片烷、1-异硫氰酸根-5-甲磺酰基戊烷、和顺式-3-(甲磺酰基)环己基甲基异硫氰酸酯或反式-3-(甲磺酰基)环己基甲基异硫氰酸酯，或其混合物。 [0039] 任何合适的环糊精可用于本发明的方法中。例如，用于本发明的方法的环糊精可选自W6(α)环糊精(六个糖环分子)、W7(β)环糊精(七个糖环分子)、W8(γ)环糊精(八个糖环分子)、其衍生物(比如羟基烷基衍生物，例如羟丙基环糊精)及其混合物中的一种或更多种。本领域已知的其他环糊精也被考虑为在本发明组合物中有用，并且本发明不应限于列举的特定的环糊精。 [0040] 在本发明的实施方案中，分离萝卜硫烷和/或萝卜硫烷类似物的方法以及形成萝卜硫烷-环糊精络合物和/或萝卜硫烷类似物-环糊精络合物的方法包括使萝卜硫烷/萝卜硫烷类似物的天然来源与环糊精在合适的溶剂中混合以形成沉淀物。在与萝卜硫烷/萝卜硫烷类似物的天然来源混合之前，在本方法中使用的环糊精可溶解在溶剂中。 [0041] 本领域已知的任何合适的溶剂可在本发明中使用。合适地，溶剂是包括水和任选地一种或更多种可与水混溶的溶剂比如乙醇的含水溶剂。合适地，溶剂是水。 [0042] 环糊精在溶剂中的溶解可通过本领域已知的任何溶解方法来完成。例如，在某些实施方案中，环糊精可通过使环糊精放置在溶剂中并且加热混合物而完全或部分溶解在溶剂中。在另外的实施方案中，可使用超声来使环糊精完全或部分溶解在溶剂中。在另外的实施方案中，可使用多种溶解方法来达到使用者期望的溶解水平，例如，通过使用超声结合加热溶剂。 [0043] 一旦萝卜硫烷和/或萝卜硫烷类似物与环糊精已经一起添加并且准备混合，可使用混合的任何方法。例如，组分可通过搅拌、超声、搅动或本领域已知的其他方法来混合。在某些实施方案中，不止一种混合方法可一起被使用。 [0044] 混合的持续时间可基于使用的特定的混合方法而改变。例如，如果使用搅拌或超声，则萝卜硫烷和/或萝卜硫烷类似物与环糊精可混合持续从约2小时至约48小时。在其他实施方案中，萝卜硫烷和/或萝卜硫烷类似物与环糊精可通过搅拌器或超声混合持续约6小时至约15小时。 [0045] 如以上讨论的，可使用多种混合方法来混合萝卜硫烷或其类似物和环糊精。例如，在某些实施方案中，可使用超声结合搅拌。在这类实施方案中，在用搅拌器混合从约2小时至约48小时的期间，可使用超声持续从约0.01小时至约1.5小时的持续时间。在其他实施方案中，在用搅拌器混合从约6小时至约15小时的期间，可使用超声持续从约0.1小时至约1.5小时的持续时间。 [0046] 在萝卜硫烷或其类似物与环糊精已经在合适的溶剂中混合之后，混合物被冷却以稳定形成的沉淀物。使用的特定萝卜硫烷或萝卜硫烷类似物和环糊精可决定冷却需要的持续时间和严重程度。例如，混合物可被冷却至约-10℃至约20℃的范围内、更合适地在约-10℃至约15℃之间、甚至更合适地在约-5℃至约5℃之间的温度。冷却的持续时间可改变并且可例如从约0.1小时至约5小时。在特定实施方案中，混合物可在维持在从约2℃至约6℃的温度下的冷却装置中被冷却任选地持续约1小时至约2小时的持续时间。然后可过滤沉淀物，以获得增加的纯度的萝卜硫烷-环糊精络合物或萝卜硫烷类似物-环糊精络合物。 [0047] 本文使用的方法导致纯度增加的萝卜硫烷或其类似物。在某些实施方案中，本方法导致在环糊精络合物内的萝卜硫烷或萝卜硫烷类似物为大于75％纯度的萝卜硫烷和/或萝卜硫烷类似物。在另外的实施方案中，本方法导致在萝卜硫烷/萝卜硫烷类似物-环糊精络合物内的萝卜硫烷和/或萝卜硫烷类似物为大于90％纯度的萝卜硫烷和/或萝卜硫烷类似物。在另外的实施方案中，本方法导致在萝卜硫烷/萝卜硫烷类似物-环糊精络合物内的萝卜硫烷/萝卜硫烷类似物为大于99％纯度的萝卜硫烷和/或萝卜硫烷类似物。 [0048] 合适地，所得络合物中萝卜硫烷对环糊精的摩尔比的比在0.4:1至1:1、合适地0.8:1至1:1、以及更合适地0.9:1至1:1、0.95:1至1:1或0.98:1至1:1的范围内。 [0049] 合适地，充分摩尔过量的环糊精用于本发明的方法学中。 [0050] 如以上讨论的，在另外的实施方案中，所得络合物可被重结晶以获得具有甚至更大纯度水平的萝卜硫烷和/或萝卜硫烷类似物的络合物。在这类实施方案中，可使用本领域中已知的重结晶的任何方法。例如，在某些实施方案中，重结晶可通过冷却所得混合物、通过在第二溶剂中溶解所得混合物、通过化学反应、通过改变混合物的pH或通过蒸发溶剂来完成。使用者的具体要求可决定使用的特定方法。 [0051] 在某些实施方案中，重结晶的方法可包括在溶剂中溶解形成的固体颗粒。这种溶解可通过本领域已知的任何方法来完成。例如，在某些实施方案中，溶解可通过超声来完成。超声可在升高的温度(即从约50℃至约100℃)下来完成，并且可继续直到没有固体颗粒残余为止。此外，可使用本领域中已知的任何溶剂，包括可用于与溶解环糊精结合的以上指示的那些溶剂。 [0052] 在溶解已经被基本上完成之后，混合物可被保持在室温下以允许固体自溶液沉淀出。取决于使用的材料，其中混合物保持在室温下的时间可改变。例如，如果萝卜硫烷被分离，则固体可完全在被保持在室温下的一个小时内自溶液沉淀出。在其他实施方案中，溶液可花费多于或少于一小时来充分允许络合物固体自溶液沉淀出。 [0053] 如以上讨论的，固体然后可被冷却以帮助稳定已络合的产物。使用的特定络合物可决定冷却必需的量。例如，在某些实施方案中，混合物可在冷却装置中被冷却任选地持续从约0.1小时至约2小时的时间，所述冷却装置为比如例如维持在从约-10℃至约25℃的温度下的冰箱。在其他实施方案中，混合物可在维持在从约-5℃至约5℃的温度下的冷却装置中被冷却持续在约0.5小时至24小时之间的时间。在络合物已经充分重结晶之后，其可然后被过滤以产生甚至更大纯度的萝卜硫烷/萝卜硫烷类似物-环糊精络合物。 [0054] 本发明还提供从其天然来源纯化萝卜硫烷和/或萝卜硫烷类似物的方法，所述方法包括通过本文之前定义的方法分离萝卜硫烷或其类似物，并且然后从所得萝卜硫烷-环糊精络合物或者萝卜硫烷类似物-环糊精络合物释放萝卜硫烷或其类似物。 [0055] 用于从环糊精释放螯合化合物的技术在本领域中是众所周知的，并且任何合适的技术可用于本发明的方法中。在实施方案中，方法包括使络合物在有机溶剂中混合或通过使用本领域已知的其他方法混合。 [0056] 在另一方面中，本发明涉及对需要这种治疗的受试者提供抗癌和/或抗微生物治疗的方法。方法包括对需要这种治疗的受试者施用有效量的本文定义的纯度增加的萝卜硫烷-环糊精络合物。 [0057] 如本文定义的，“有效量”意指待向受试者施用的本发明的剂量或量以及向受试者施用的频率，有效量由本领域普通技术人员通过使用已知技术以及通过观察类似情况下获得的结果来容易确定并且具有某种治疗作用。待向受试者施用的剂量或有效量以及向受试者施用的频率可由本领域普通技术人员通过使用已知技术以及通过观察类似情况下获得的结果来容易确定。 [0058] 为了便于参考，本发明将参考向人受试者施用来描述。然而，将理解的是，这种描述不限于向人施用，但还将包括向其他动物施用，比如哺乳动物，除非另外明确规定。例如，除了对人治疗有用以外，这些组合也对治疗哺乳动物有用，包括马、狗、猫、大鼠、小鼠、羊、猪等。 [0059] 治疗方法的第一组分为根据以上讨论的方法纯化的萝卜硫烷和/或其类似物。在本发明中有用的组分可为任何纯度或级别，只要制剂具有适合于药物使用的品质和稳定性并且不影响所得制剂的生理活性或安全性。 [0060] 方法还可包括施用其他药学上可接受的组分。本文形容词般地使用术语“药学上可接受”来意指修饰名词适合用于药物产品。 [0061] 当由本方法产生的纯化的萝卜硫烷-环糊精络合物和/或萝卜硫烷类似物-环糊精络合物连同药学上可接受的载体或药学上可接受的赋形剂(所述术语可在本文可互换地使用)被供应时，可形成药物组合物。本发明的药物组合物可通过药剂学任何众所周知的技术，例如通过混合组分来制备。 [0062] 本发明的药物组合物涉及适合于预防或治疗本文描述的紊乱的组合物。 [0063] 选择药学上可接受的载体和赋形剂，使得来自药物化合物的副作用最小化并且化合物的性能不被抵消或抑制至治疗无效的这种程度。药学上可接受的载体包括但不限于生理盐水、林格氏液(Ringer's)、磷酸盐溶液或缓冲液、缓冲盐水和本领域已知的其他载体。药物组合物还可包括稳定剂、抗氧化剂、着色剂和稀释剂。 [0064] 载体在与组合物的其他成分相容的意义上应为可接受的并且不对接受者有毒。载体可为固体或液体或两者，并且可与化合物一起被配制为单位剂量的组合物，例如片剂，其可包含从按重量计约0.01％至约95％的活性化合物。 [0065] 药学上可接受的载体还可基于化合物的期望施用途径来选择。期望施用途径可为口服、肠内、肠胃外、可注射、口腔和局部中的一种或更多种。例如，在实施方案中，载体适合于口服施用。在某些实施方案中，组合物包含适合于促进化合物递送至胃肠道或肠道的载体或另外的剂。 [0066] 特别地，本发明的药物组合物或它们被包括在其中的组合物可例如作为片剂、包衣片、糖衣丸、含片、锭剂、水性或油性悬浮液、可分散的粉末或颗粒、乳剂、硬或软胶囊、或糖浆剂或酏剂经口施用。意图口服使用的组合物可根据本领域已知的用于制造药物组合物的任何方法来制备，并且这类组合物可包含选自由甜味剂、调味剂、着色剂和防腐剂组成的组的一种或更多种剂，以便提供药学上可接受的且美味的制剂。片剂可包含与适合于制造片剂的无毒的药学上可接受的赋形剂混合的活性成分。例如，这些赋形剂可为惰性稀释剂，比如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；造粒剂和崩解剂，例如玉米淀粉或海藻酸；粘结剂，例如淀粉、明胶或阿拉伯树胶以及润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。片剂可为无涂层的或它们可通过已知技术涂布以延迟胃肠道中的崩解和吸收，并且从而提供较长时期内的持续作用。例如，可采用时间延迟材料，比如单硬脂酸甘油酯或双硬脂酸甘油酯。 [0067] 用于口服使用的制剂还可作为其中活性成分与惰性固体稀释剂混合的硬明胶胶囊或作为其中存在活性成分或活性成分与水或油介质混合的软明胶胶囊存在，所述惰性固体稀释剂为比如例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土，所述油介质为比如例如花生油、液体石蜡、多种药草提取物中的任一种、牛奶或橄榄油。 [0068] 可产生包含与适合于制造水悬浮液的赋形剂混合的活性材料的水悬浮液。这类赋形剂包括悬浮剂，比如例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮黄蓍胶和阿拉伯树胶；分散剂或润湿剂可为天然存在的磷脂，比如例如卵磷脂或环氧烷与脂肪酸的缩合产物，比如例如硬脂酸聚氧乙烯酯，或环氧乙烷与长链脂肪醇(比如例如十七乙氧基鲸蜡醇)的缩合产物，或环氧乙烷与源自脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产物，比如例如聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯，或环氧乙烷与源自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物，比如例如聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯。 [0071] 甜味剂比如以上陈述的那些甜味剂、和调味剂可被添加以提供美味的口服制剂。这些组合物可通过添加抗氧化剂比如抗坏血酸来保存。 [0072] 适合于通过添加水制备水悬浮液的可分散的粉末和颗粒提供与分散剂或润湿剂、悬浮剂和一种或更多种防腐剂混合的活性成分。合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂通过以上已经提到的那些来举例说明。另外的赋形剂例如甜味剂、调味剂和着色剂也可存在。 [0073] 包含萝卜硫烷-环糊精络合物的糖浆剂和酏剂可与甜味剂比如例如，甘油、山梨糖醇或蔗糖一起配制。这类制剂还可包含缓和剂、防腐剂和/或调味剂和着色剂。用于口服施用的液体剂型可包括包含本领域通常使用的惰性稀释剂比如水的药学上可接受的乳剂、溶液、悬浮液、糖浆剂和/或酏剂。这类组合物还可包括佐剂，比如润湿剂、乳化剂和/或悬浮剂，和甜味剂、调味剂和/或芳香剂。 [0074] 适合于口服施用的药物组合物可以离散单元(每个单元包含预先确定量的在本发明中有用的至少一种治疗化合物)；作为粉末或颗粒；作为水液体或非水液体中的溶液或悬浮液；或作为水包油乳剂或油包水乳剂存在。如指示的，这类组合物可通过药剂学的任何合适的方法来制备，其可包括使活性化合物与载体(其可构成一种或更多种辅助成分)开始结合的步骤。一般来说，组合物通过使活性化合物与液体载体或细碎的固体载体或两者混合并且然后必要时使产品成形来制备。 [0075] 例如，片剂可通过使化合物的粉末或颗粒，任选地与一种或更多种辅助成分一起压制或模制来制备。压制片可通过在合适的机器中压制呈自由-流动形式的化合物，比如与粘结剂、润滑剂、惰性稀释剂和/或表面活性剂/分散剂任选地混合的粉末或颗粒来制备。模制片可通过在合适的机器中模制由惰性液体稀释剂湿润的粉末状化合物来制造。 [0076] 本发明的组合的口服递送可包括通过许多机理提供将药物延长或持续传递至胃肠道和/或肠道的如本领域众所周知的制剂。这些包括但不限于：从基于小肠的改变pH的剂型的pH敏感释放，片剂或胶囊的缓慢溶蚀，基于制剂的物理特性在胃中的保留，剂型对肠道粘膜内表面的生物粘附，或活性药物从剂型中的酶促释放。对于用于本发明的方法、组合和组合物的某些治疗化合物来说，预期的效果是通过剂型的控制延长活性药物分子传递至作用部位的时间段。因此，肠衣制剂和肠衣控释制剂均在本发明范围内。合适的肠包衣包括邻苯二甲酸乙酸纤维素、聚乙烯基乙酸邻苯二甲酸酯、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯以及异丁烯酸和异丁烯酸甲酯的阴离子聚合物。 [0077] 在某些实施方案中，药物组合物可包括可为无涂层的或其可通过已知技术涂布以延迟胃肠道中的崩解和吸收并且从而提供在较长时期内的延迟的作用的片剂。例如，可采用时间延迟材料比如单硬脂酸甘油酯或双硬脂酸甘油酯。 [0078] 在另外的实施方案中，由主题方法产生的组合物可以无菌注射水悬浮液或油性悬浮液的形式经肠胃外，比如例如皮下、静脉内、肌内、膜内或通过注射技术施用。无菌注射制剂还可为非毒性的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌注射溶液或悬浮液，比如例如1,3-丁二醇中的溶液。可采用的可接受的溶媒和溶剂中，有水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。此外，无菌的固定油通常用作溶剂或悬浮介质。为此目的，可采用任何温和的固定油，包括合成的单酸甘油酯或甘油二酯。另外，n-3多不饱和脂肪酸可应用于注射剂的制备。 [0079] 适合于肠胃外施用的药物组合物可包括本发明化合物的无菌含水制剂。这些制剂可经静脉内施用，虽然也可通过皮下、肌内或皮内注射或者通过输注来实施施用。这些制剂可通过将化合物与水混合，并且致使得到的溶液无菌以及与血液等渗来制备。根据本发明的注射组合物将通常包含从0.01％至10％w/w的本文公开的化合物。 [0080] 活性成分也可作为组合物通过注射施用，其中，例如，盐水、右旋糖或水可被用作合适的载体。每种活性治疗化合物的合适的日剂量为达到如上所述通过口服施用所产生的相对而言相同血清水平的量。 [0081] 本发明还包括的是口腔施用或“舌下”施用，其包括包含本文陈述的化合物的锭剂或咀嚼树胶。化合物可在调味基质和阿拉伯树胶或黄蓍胶中储存，或者化合物可在包括在惰性基质比如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯树胶中的化合物的糖锭剂中储存。 [0082] 本发明的药物组合物还适合于局部应用于皮肤，并且可采取软膏、霜剂、洗剂、糊剂、凝胶剂、喷雾剂、粉末、胶冻剂、洗眼剂、溶液、悬浮剂、气溶胶或油的形式。载体可被使用并且包括凡士林(例如 )、羊毛脂、聚乙二醇、醇及其两种或更多种的组合。一种或更多种活性化合物通常以组合物的从0.01％至50％(w/w)，比如例如从约0.01％至约2％的浓度存在。 [0083] 本发明还可包括安全且有效量的等渗剂(包括盐，比如氯化钠)和/或非电解质等渗剂(比如山梨糖醇和甘露醇)。 [0084] 本组合物的组分的溶解度可通过组合物中的表面活性剂或其他恰当的共溶剂来增强。这类共溶剂包括聚山梨醇酯20、60和80，聚氧化乙烯/聚氧化丙烯表面活性剂(例如，从 购买的Pluronic F-68、F-84和P-103)，环糊精，或本领域技术人员已知的其他剂。可以从按重量计约0.01％至约2％的水平来使用这类共溶剂。 [0085] 药学上可接受的赋形剂和载体包括所有前述赋形剂和载体以及类似物。有效的制剂和施用程序在本领域中是众所周知的并且在标准教科书中描述。参见例如Gennaro,A.R.,Remington:The Science and Practice of Pharmacy,第20版,(Lippincott,Williams andWilkins),2000；Hoover,John E.,Remington’s Pharmaceutical Sciences,Mack Publishing Co.,Easton,Pennsylvania,1975；Liberman等人编辑,Pharmaceutical Dosage Forms,Marcel Decker,New York,N.Y.,1980；以及Kibbe等人编辑,Handbook of Pharmaceutical Excipients(第三版),American Pharmaceutical Association,Washington,1999。 [0086] 在本方法中，需要本文描述的紊乱和/或相关状况的治疗和/或预防的受试者可用适量的目前发明的纯化的萝卜硫烷或其类似物来治疗，其中个别组分的量提供足以构成治疗或预防有效量的剂量或量。 [0087] 纯化的萝卜硫烷-环糊精络合物或萝卜硫烷类似物-环糊精络合物的有效量当然取决于许多因素，比如选择的特定化合物、其预期的用途、施用方式、待治疗的宿主以及接受者的临床状况。 [0088] 如果实现任何益处，不管多么轻微，则认为致癌症状、致瘤症状、或抗菌症状被改善或改良。 [0089] 本组合物的剂量和本文提供的方法可基于提供化学防护或化学预防结果中表明的功效来确定和调整。此外，本领域普通技术人员将了解如何测量和定量癌变症状或肿瘤症状的存在或不存在。 [0090] 本组合物的剂量为对提供化学防护、化学预防和/或抗菌效果有效的那些剂量。 [0091] 本领域技术人员将理解剂量还可使用根据Goodman&Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics,第九版(1996),附录II,第1707-1711页的指导来确定。 [0092] 以下实施例描述本发明的各种实施方案。从如本文公开的发明的说明书或实践考虑，在本文权利要求范围内的其他实施方案将对本领域技术人员是明显的。意图说明书连同实施例仅作示例考虑，且本发明的范围和精神由实施例之后的权利要求指出。实施例 [0093] 一般材料和方法 [0094] 使用TMS作为内标物在Oxford 400MHz分光仪上记录1H和13C NMR光谱并且以ppm报告化学位移。 [0095] 在HP 1050模块，柱：Phenomenex Gemini C18,5μ,110A°,250x4.6mm上进行HPLC。总运行时间：40分钟。在H2O中的MeCN+0.1％TFA。流速：1.5mL/分钟。检测器：244nm(VWD)。 [0096] 实施例1 [0097] 此实施例涉及表明用于纯化萝卜硫烷的改良的方法的本发明实施方案。 [0098] 使萝卜硫烷样品(生产部：Beijing Hunda Qunxing Science and Technology Co.；批次#20091101)(8.23g，11.3mmol的萝卜硫烷，24.3％纯度)装载到配备有磁力搅拌器的250mL圆底烧瓶中并且添加43.9mL的0.257M环糊精溶液(生产部：Wacker；批次#60F212；11.3mmol的环糊精)。环糊精溶液通过在70℃下使用超声加热在1L水中的288.9g环糊精，以在环糊精完全溶解之后给出1155mL的总体积来制备。 [0099] 混合物在室温下搅拌一小时，超声10分钟，并且然后搅拌另外两个小时。形成少量的沉淀物。继续搅拌过夜，这导致沉淀物的量增加。混合物在冰箱中在4℃下被冷却持续一小时并且过滤以给出3.95g(30.5％收率，97％的HPLC纯度)的灰白色固体。由HPLC获得的读数与萝卜硫烷对环糊精的0.95:1的比一致。 [0100] 1HNMR(D2O,400MHz)；δ1.99(br,4H),2.75(s,3H),3.01(br,2H),3.60(m,12H),3.75(br,2H),3.90(m,24H),5.12(d,6H)。 [0101] 13CNMR(D2O,100MHz)；δ130.07,101.81,81.39,74.04,71.96,71.85,60.32,52.02,44.99,37.08,29.40,20.11。 [0102] 13C NMR分析和1HNMR分析两者与萝卜硫烷对环糊精的1:0.95的比一致。 [0103] 实施例2 [0104] 此实施例涉及表明用于纯化萝卜硫烷的改良的方法的本发明另外的实施方案。 [0105] 使萝卜硫烷样品(生产部：Beijing Hunda Qunxing Science and Technology Co.；批次#20091101)(3.2g，11.3mmol的萝卜硫烷，62.9％纯度)装载到配备有磁力搅拌器的250mL圆底烧瓶中并且将43.9mL的在水中的0.257M环糊精添加至烧瓶。环糊精溶液通过在 70℃下使用超声加热在1L水中的288.9g环糊精，以在环糊精完全溶解之后给出1155mL的总体积来制备。 [0106] 溶液在室温下搅拌1小时，超声10分钟，并且然后再搅拌2小时。在沉淀物形成之后，混合物在冰箱中在4℃下被冷却过夜。在更多固体沉淀之后，混合物被过滤以给出11.9g(92％收率，96％的HPLC纯度)的淡黄色固体。HPLC分析指示萝卜硫烷对环糊精的0.93:1的比。 [0107] 1HNMR(D2O,400MHz)；δ1.99(m,4H),2.75(s,3H),3.01(t,2H),3.60(m,12H),3.76(br,2H),3.91(m,24H),5.05(d,6H)。 [0108] 13CNMR(D2O,100MHz)；δ129.94,101.79,81.40,73.99,71.96,71.84,60.34,52.02,44.94,37.03,29.29,20.08。 [0109] 13C NMR分析和1HNMR分析两者与萝卜硫烷对环糊精的1:1.04的比一致。 [0110] 实施例3 [0111] 实施例2中获得的萝卜硫烷-环糊精络合物(2.2g，1.9mmol)被装载到20mL闪烁管中并且添加6mL的水。混合物在约70℃下超声，直到固体颗粒的溶解完成。然后将管从超声浴移除并且保持在室温下持续一小时。固体开始自溶液沉淀出。管被移到在4℃下的冰箱中，持续30分钟并且过滤给出灰白色固体，将其在30℃的真空烘箱干燥过夜。重结晶产出1.5g的灰白色固体(68％收率，98％HPLC纯度)。 [0112] 1HNMR(D2O,400MHz)；δ2.01(br,4H),2.78(s,3H),3.01(br,2H),3.65(m,12H),3.75(br,2H),3.91(m,24H),5.15(d,6H)。 [0113] 13CNMR(D2O,100MHz)；δ129.98,101.79,81.39,74.01,71.95,71.83,60.31,52.01,44.95,37.04,29.33,20.08。 [0114] 13C NMR分析和1H NMR分析(图8和图9)两者与萝卜硫烷对环糊精的1:1.02的比一致。 [0115] 这些实施例表明本方法用于提供纯度增加的萝卜硫烷的功效。 [0116] 本说明书中引用的所有参考文献，包括但不限于所有论文、出版物、专利、专利申请、展示、教科书、报告、手稿、小册子、书本、互联网记录、期刊论文、杂志以及类似参考文献，在此以其整体通过引用并入本说明书中。 [0118] 尽管本发明的实施方案已经使用特定术语、装置和方法来描述，但这种描述仅为了说明性的目的。使用的词语是描述的词语而不是限制的词语。应理解，可由本领域普通技术人员作出改变和变化，而不偏离本发明的精神或范围，其在以下权利要求中陈述。此外，应理解，各种实施方案的方面可以整体或以部分两方面互换。 |
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