一种可改善肠道性能的蓝莓复合粉及其制备方法 |
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| 申请号 | CN201610202727.7 | 申请日 | 2016-04-01 | 公开(公告)号 | CN105707772A | 公开(公告)日 | 2016-06-29 |
| 申请人 | 邵素英; | 发明人 | 邵素英; | ||||
| 摘要 | 本 发明 公开了一种可改善肠道性能的 蓝莓 复合粉及其制备方法，将具有天然色泽、 风 味和口感的蓝莓粉与 植物 乳杆菌粉、蜂蜜粉、改性膳食 纤维 、酵素粉、低聚糖等功能性产品科学复配，不仅有效提高了蓝莓复合粉的营养性、 食品安全 性和保健功能，而且显著提高了蓝莓复合粉的益生性和 质量 稳定性 ，与现有蓝莓复合粉相比：其组分简单，色泽、风味和口感天然，营养价值高，保健功能强， 生物 活性物质含量高， 益生菌 活菌数量高、益生性强，益生菌功能性 代谢物 种类全、含量高，食品安全性高，保质期长。 | ||||||
| 权利要求 | 1.一种可改善肠道性能的蓝莓复合粉，主要由以下重量份数的原料制备：蓝莓粉50-70份，蜂蜜粉40-50份，改性膳食纤维8-15份，低聚糖6-12份，植物乳杆菌粉6-12份，酵素粉5- |
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| 说明书全文 | 一种可改善肠道性能的蓝莓复合粉及其制备方法技术领域[0001] 本发明涉及蓝莓深加工产品，具体涉及一种可改善肠道性能的蓝莓复合粉及其制备方法。 背景技术[0002] 蓝莓又称越橘，俗称都市果，为多年生落叶或长绿果树，耐寒性极强，可抵御零下50℃的严寒，原产于北美、苏格兰和俄罗斯，是一种具有极高经济价值的新兴世界性小浆果果树。蓝莓是越橘属植物中营养成分最丰富的种类，其果实为浆果，呈蓝色，近圆形，果肉细腻，甜酸适度。果实除了含有糖、酸和维生素C外，还富含维生素E、维生素A、维生素B1、SOD、熊果甙、花青甙、蛋白质、脂肪等其他果品中少有的特殊成分及丰富的铁、锌、锰等微量元素。据科学研究，蓝莓果实具有防止脑神经衰老、增强心脏功能、明目抗癌等独特功效。 [0003] 蓝莓含有大量对人类健康有益的物质，包括抗菌成分、抗氧化物、鞣酸、叶酸和食用纤维等。目前，研究较多的是蓝莓中的黄酮类化合物。研究发现，黄酮类化合物具有多种生物活性和药物功能，如清除体内自由基、消炎、降低心血管疾病发病率，以及抑制癌细胞生长和促进其凋亡等作用。蔓越莓及蓝莓中的花青苷、黄酮醇、前花青素、桂皮酸及二苯乙烯、三萜类化合物(熊果酸ursolicacid)等可抑制血管硬化、失血性中风、老年神经退化等。因此，蓝莓被誉为“浆果之王”，也是世界粮农组织推荐的五大健康水果之一。 [0004] 随着我国人民生活水平的不断提高，对食品要求越来越高，蓝莓的加工产业必将有着广阔的发展前景，它将成为21世纪的另一个新兴产业。近年来，随着人们对健康的日益重视和人们对蓝莓保健功能认识的深入，蓝莓食品的开发利用引起了人们极大关注。目前国内以蓝莓果实为原料开发的食品种类繁多，主要有蓝莓乳制品、果汁饮料、果啤、果酒、果冻、果酱、软糖、果糕及一些休闲食品等。 [0005] 以蓝莓为原料制备蓝莓纯果粉的较多，如中国专利CN 102273598 A公开了一种利用真空冻干法生产口服蓝莓粉的工艺，将蓝莓果实清洗、沥干后备用；将沥干后的蓝莓果实在-20～-25℃预冻，真空度10～30mTorr，保持恒温2-20小时；在-20～-25℃，进行粉碎得到粗制蓝莓冻干粉。简化工艺路线，本发明不需要长时间高温升华工艺即可得到蓝莓冻干粉，降低生产成本；减少升温步骤，进一步提高对蓝莓内活性物质的保护；加工过程可避免高温高湿、光照、氧化等因素的影响，保护蓝莓全部的活性物质；经过对比测定本发明所提供的口服蓝莓冻干粉的制备方法所生产的蓝莓冻干粉所含花青素含量约为3.0mg/g，常规方法制备的蓝莓冻干粉所含花青素含量约为2.4mg/g，提高花青素含量15～20％。上述公开的专利虽然了采用冻干工艺，但没有良好的保护剂保护，也会造成一些营养成分冷冻变性而损失，同时采用粉碎方式，高剪切力和研磨会造成热敏性活性物质的损失。中国专利CN 102934765 A公开了的蓝莓果酱粉，由白砂糖、葡萄糖、蓝莓粉、黄原胶、魔芋胶、柠檬酸、柠檬酸钠、蓝莓香精、葡萄皮红组成，各组分的重量百分比如下：白砂糖40％～50％、葡萄糖 30％～40％、蓝莓粉10％～20％、黄原胶1.6％～2.0％、魔芋胶0.6％～0.8％、柠檬酸1.5％～2.0％、柠檬酸钠0.8％～1.2％、蓝莓香精0.5％～0.7％、葡萄皮红0.08％～0.1％，经配料、微波杀菌制成。用本发明的蓝莓果酱粉制作蓝莓果酱时简单、方便、快捷、蓝莓果酱粉加定量的60℃～65℃纯净水，溶解并搅拌均匀后即为蓝莓果酱，不需再加热。制得的蓝莓果酱色泽亮丽，酸甜适中，有纯正的蓝莓味，无分层、析水、结晶等现象。由于蓝莓果酱粉是粉状产品，更易于贮存和保管。上述公开的专利食品添加剂较多，存在一定食品安全隐患。 [0006] 也有以蓝莓为原料，添加功能性原料制备复合保健蓝莓粉的：中国专利CN103798665 A公开了一种保健蓝莓粉及其制备方法，其特征在于由下列重量份的原料制成：蓝莓100-110、昆布1-1.2、三七花2-3、小蓟2.5-4、川芎1.8-2、白芍药2-2.2、甘草4-5、倒生根2-2.4、地菍根2.8-3、南瓜10-12、红薯8-9、牛奶3-4、平菇20-22、杨梅原汁20-22、大米10-11、乳酸菌0.2-0.3、核桃粉10-11、营养添加剂8-9。本发明制备工艺简单，生产出的蓝莓粉口感细腻，且在保持住蓝莓的营养的同时，将红薯、大米等其他辅料的营养融入其中，使得本发明营养价高，此外，本发明在加工过程中添加了多种中草药，具有保健功效，经常食用可达到平肝降压、行气活血、清热解毒的功效。中国专利CN 103815396 A公开了一种保健蓝莓粉及其制备方法，其特征在于由下列重量份的原料制成：蓝莓100-110、蒲公英2-3、南瓜根1-2、葛花4-5、知母2-3、枸杞叶2-3、牛尾参1.5-2、梗通草2-3、香菜10-11、倭瓜8-9、豆瓣酱3-4、猪大肠12-13、乌鸡汤50-52、糯米40-45、高粱面粉10-11、大豆油3-4、营养添加剂 4-5。本发明口感细腻，风味独特，营养丰富，其中本发明添加的猪大肠可润燥补虚，乌鸡汤可养肝明目、补血养颜，此外，本发明还添加了多种中草药，其中蒲公英可清热解毒，枸杞叶可补虚益精，牛尾参可健脾去湿、补肺益肾，经常食用本发明可达到强健身体的功效。上述公开的专利添加中药等成分较多，组分复杂，虽然具有一定的功能性，但影响了蓝莓的天然口感和色泽，不适用多数人群消费。 [0007] 还有以蓝莓为原料制备其它类型粉剂的，如：中国专利CN 105248724 A公开了一种蓝莓奶茶粉，按照重量份数计算，包括如下原料：植脂末40-50份、绿茶粉10-20份、冰糖10-20份、蓝莓粉10-20份、番茄粉5-10份、石榴5-10份、羧甲基纤维素钠0.1-0.3份、蔗糖脂肪酸酯0.1-0.3份，本发明奶香浓郁，营养丰富，具有清心明目的功效。上述公开的专利食品添加剂较多，蓝莓含量少，仍然存在食品安全隐患和口感适宜性限制。 [0008] 综上，以蓝莓为主要原料，制备一种口感和色泽天然，营养成分和生物活性物质含量高，组分简单、功能性强的可改善肠道性能的蓝莓复合粉仍是一种必要。 发明内容[0010] 为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案： [0011] 一种可改善肠道性能的蓝莓复合粉，主要由以下重量份数的原料制备： [0012] 蓝莓粉50-70份，蜂蜜粉40-50份，改性膳食纤维8-15份，低聚糖6-12份，植物乳杆菌粉6-12份，酵素粉5-10份，麦芽糊精5-10份； [0013] 优选地，所述可改善肠道性能的蓝莓复合粉，主要由以下重量份数的原料制备： [0014] 蓝莓粉55-65份，蜂蜜粉43-47份，改性膳食纤维11-13份，低聚糖8-10份，植物乳杆菌粉8-10份，酵素粉7-9份，麦芽糊精6-8份； [0015] 更优选地，所述可改善肠道性能的蓝莓复合粉，主要由以下重量份数的原料制备： [0016] 蓝莓粉60份，蜂蜜粉45份，改性膳食纤维12份，低聚糖9份，植物乳杆菌粉9份，酵素粉8份，麦芽糊精7份； [0017] 进一步地，所述蓝莓粉是经微波高温瞬时灭酶、固色和超声波清洗、丝胶肽冷冻保护、高压脉冲电场提取、超声波辅助微波提取、生物酶解等低温提取技术而制得，最大限度地保留了蓝莓果的天然色泽、口感及其生物活性成分； [0018] 优选地，所述蓝莓粉的制备方法，包括以下步骤，将蓝莓放入盛有0.1-0.3％碳酸氢钠溶液的超声波清洗机中，于室温下200-400W、35-45KHz清洗5-10min，沥干，每个蓝莓果任意切分成四份，单层平铺在微波干燥机中于功率3-5kW、温度120-130℃、干燥3-5s，然后浸泡在质量百分比浓度为8-12％的丝胶肽溶液中8-10min,取出，于-18--22℃冷冻30-50min后立即进行粉碎，粉碎物粒径0.3-0.5mm,接着加入粉碎物质量1-3倍的水，用乳酸调节pH值为3.5-5.5，于室温下在电场强度25-35kV/cm，脉冲时间300-500μs,脉冲频率200- 300Hz条件下进行高压脉冲电场处理20-30min；然后于室温在功率150-300W条件下进行微波辐照提取15-20min，同时在功率200-300W,频率30-40KHz条件下进行超声波辅助提取；加入提取液质量1.5-2.5％的混合酶，于40-50℃酶解30-50min，酶解液过滤，滤液减压浓缩、冷冻干燥至水分含量为5-8％即得蓝莓粉； [0020] 进一步地，所述蜂蜜粉是以蜂蜜为主要原料，科学复配助干剂，经超声溶解、胶磨、高压均质和喷雾干燥工艺而制备的，制得的蜂蜜粉跟蜂蜜营养成分变化差异性不显著，收得率高达95％以上，效率高； [0021] 优选地，所述蜂蜜粉的制备方法，包括如下步骤：将蜂蜜、麦芽糊精、β-环糊精按质量比5-7:2-4:0.5-1.5均匀混合，加入50℃的去离子水，充分溶解，使得混合液的固形物含量为32-35％，混合液于功率200-400W,频率30-40KHz、室温条件下进行超声波处理5-10min,然后经胶体磨循环研磨2-4次，均质，均质压力25-30MPa，均质温度50-60℃，均质液经喷雾干燥机于进风温度180-200℃，出风温度70-90℃干燥即得蜂蜜粉，蜂蜜粉粒径为20- 40目。 [0022] 进一步地，所述改性膳食纤维是将膳食纤维经物理、化学或生物的方法处理而得到的具有强持水性、膨胀性、增稠性、吸附性且网格结构丰富的可溶性纤维素含量高、生物活性强、对人体益生菌群有重要的、积极作用的纤维素，与普通膳食纤维相比，其生物活性作用更强大，还可大大延长蓝莓粉的保质期； [0023] 优选地，所述改性纤维是由菊粉、苹果纤维、燕麦纤维、小麦纤维中的一种或多种经生物酶酶解而得到的； [0024] 更优选地，所述改性膳食纤维的制备方法，包括以下步骤：将菊粉、小麦纤维、燕麦纤维按质量比5-7:2-4:1-3均匀混合，加入其质量3-7倍的水，室温100-300W、35-40KHz条件超声提取10-15min,然后在电场强度20-40kV/cm，脉冲时间300-500μs,脉冲频率200-400Hz条件下进行高压脉冲电场处理10-15min；用乳酸调节pH值为4.5-6.5，加入混合物质量0.1-0.3％的生物酶，于45-55℃酶解20-48min；酶解液过滤，滤液减压浓缩、冷冻干燥至水分含量为5-8％即得改性膳食纤维； [0025] 所述生物酶为纤维素酶、木聚糖酶、漆酶、果胶酶按质量比1-3:1-3:1-2:1-2均匀混合。 [0026] 进一步地，所述低聚糖为低聚果糖、水苏糖、棉子糖、低聚木糖、低聚半乳糖、大豆低聚糖、低聚异麦芽糖、低聚麦芽糖中至少一种； [0027] 优选地，所述低聚糖重量份数组成为低聚果糖40-50份，低聚麦芽糖30-40份，棉子糖20-40份，大豆低聚糖16-18份，低聚半乳糖10-15份，低聚木糖10-15份，低聚异麦芽糖10-15份，水苏糖8-12份。 [0028] 进一步地，所述植物乳杆菌粉是以植物乳杆菌CGMCC NO.11763为出发菌株按常规方法制备的，其活菌含量为：7×1012-9×1012cfu/g；其中冷冻干燥工艺采用的冷冻保护剂以含有抗冻蛋白的动物或植物为原料，经高压脉冲电场提取、超声波辅助微波提取和复配酶酶解而制得的，可有效提高植物乳杆菌粉在冷冻干燥过程活菌存活率； [0029] 优选地，所述保护剂的制备方法，包括如下步骤：将冬黑麦、沙冬青、鲨鱼皮胶原蛋白分别清洗、沥干，按质量比8-10:3-5:2-4均匀混合，加入混合物料质量0.1-1倍的pH值为3.8-4.5的乳酸润湿3-8h,于-18--22℃冷冻1-2h后立即进行粉碎，冷冻料层厚度3-5cm，粉碎物粒径0.5-3mm,接着加入粉碎物质量10-20倍的水，用乳酸调节pH值为3.5-5.5，于室温下在电场强度25-35kV/cm，脉冲时间300-500μs,脉冲频率200-300Hz条件下进行高压脉冲电场处理20-30min；然后于室温在功率150-300W条件下进行微波辐照提取15-20min，同时在功率200-300W,频率30-40KHz条件下进行超声波辅助提取；加入提取液质量1-2％的复配酶，于45-55℃酶解30-50min；酶解液过滤、滤液浓缩、低温粉碎至粒径为0.1-0.3mm即得保护剂； [0031] 更优选地，所述微波辐照提取为间歇式提取，即微波辐照10s，间隔20s。 [0032] 进一步地，所述酵素粉制备方法如下：采用泡菜发酵生产末期排放的发酵液为原料，过滤除去发酵液中的菜叶等大粒物质得到发酵液体，发酵液体采用冷冻干燥等干燥方法制备获得酵素粉。冷冻干燥的条件是：-30--40度预冻6小时；然后冻干直到含水量小于5％。泡菜生产方法参照中国专利201110421967.3或201210310308.7制备。 [0033] 本发明另一目的是提供上述可改善肠道性能的蓝莓复合粉的制备方法，包括如下步骤：按照配方比例，称取各原料，依次将酵素粉、植物乳杆菌粉、蓝莓粉、麦芽糊精、蜂蜜粉、低聚糖加入V型混合罐均匀混合25-35min,搅拌转速20-40r/min,然后加入改性膳食纤维均匀混12-18min,搅拌转速40-60r/min,无菌灌装、密封、包装即得可改善肠道性能的蓝莓复合粉； [0034] 优选地，所述无菌灌装采用自动粉状灌装机灌装，同时采用60Co辐照灭菌，辐照剂量4kGy； [0036] 经上述方法制备的可改善肠道性能的蓝莓复合粉植物乳杆菌活菌含量为6.84×1011-9.49×1011cfu/g。 [0037] 本发明植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)XH于2015年11月30日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)，保藏号为CGMCC NO.11763，保藏地址为：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所，邮编：100101。 [0038] 植物乳杆菌益生特性如下： [0039] 本发明所提供的植物乳杆菌CGMCC NO.11763经实验发现能够在pH为1.50的条件下存活，在1％胆盐培养4小时后仍处于存活状态；植物乳杆菌CGMCC NO.11763降解亚硝酸盐速度快，分解能力达到10.9mg/h/kg，该菌种在生产泡菜时，整个发酵过程中亚硝酸盐浓度在4.8mg/kg以下；CGMCC NO.11763在发酵60h小时后，对胆固醇降解率可达到64.76％。CGMCC NO.11763黏附能力测定的自凝集率为95.71％。 [0040] 植物乳杆菌CGMCC NO.11763对胆固醇降解能力研究和测定： [0041] 取1ml CGMCC NO.11763母液接种于10mL的MRS胆固醇液体培养基(胆固醇含量0.1mg/ml,pH 6.2)中，37℃的恒温静置分别培养20h、40h、60h备用，以接入1mL无菌水的MRS胆固醇培养基为对照，取以上培养不同时间的菌液样品及对照液各1ml,9000r/min，4℃下离心10min，得到发酵上清液，邻苯二甲醛法测定上清液中胆固醇含量(具体为：取各上清液 0.1ml于相应的试管中,加冰醋酸0.3ml,1mg/ml的邻苯二甲醛0.15ml，缓缓加入浓硫酸 1.0ml，混合均匀。室温静置10min，于550nm下测吸光值)。每一处理3个重复，以同样方法制作胆固醇标准曲线，计算上清液中胆固醇含量及降解率,结果见表1。可知，CGMCCNO.11763对胆固醇有很好的降解作用，在发酵60h小时后，降解率可达到64.76％。 [0042] 表1 对胆固醇的降解情况。 [0043]降解时间(h) 0 20h 40h 60h 胆固醇含量(mg/ml) 0.2273±0.0058 0.1356±0.0018 0.1011±0.0094 0.801±0.0231胆固醇降解率％ 40.34％ 55.52％ 64.76％ [0044] 植物乳杆菌CGMCC NO.11763菌株的耐胆盐试验： [0045] 取CGMCCNO.11763菌液1mL接种菌种于含有不同胆盐(含量梯度为0.0％、0.2％、0.4％、0.6％、0.8％、1％)的10mL MRS液体培养基(PH＝6.4)，置于37℃下分别培养0、2、4h，每个处理3个重复。各取1ml样品菌液于9ml生理盐水中混匀，制备稀释度溶液，取0.1ml稀释液于MRS中涂布，于37℃生化培养箱中倒置培养48小时(每个稀释度做3个平行)记录计算平板上的菌数个数。结果见表2。可知该菌在胆盐浓度为1％处理4h后菌的生长量依然达到 0.59±0.92×107(cfu/ml)，有很好的耐胆盐能力。 [0046] 表2 耐胆盐能力检测[(±s)×107cfu/ml] [0047] [0048] 植物乳杆菌CGMCC NO.11763菌株的耐酸试验 [0049] 取HLX37母液按1ml接种菌种于不同pH值(pH梯度为1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0)的10mLMRS液体培养基，置于37℃下分别培养0、2、4h，每一处理3个重复。各取1ml样品菌液于 9ml生理盐水中混匀，制备稀释溶液，取0.1ml稀释液于MRS中涂布，于37℃生化培养箱中倒置培养48小时(每个稀释度做3个平行)记录平板上的菌落个数。结果见表3。说明该菌具有很强的耐酸能力。 [0050] 表3 耐酸能力检测[(±s)×107cfu/ml] [0051] [0052] 植物乳杆菌CGMCC NO.11763的黏附能力测定 [0053] 培养CGMCC NO.11763(MRS液体培养基)、大肠杆菌DH5α(LB液体培养基)24h得发酵液，分别置于3000r/min、4℃下离心10min，收集菌泥，分别用pH＝7.0的无菌磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤菌泥2次(即在菌落中加入PBS，震荡混合均匀后，置于3000r/min、4℃下离心10min，收集菌体)。自凝集率(％)：用无菌的PBS将菌泥CGMCC NO.11763制成在波长600nm处的吸光值为0.4±0.1(A 0)的悬浮菌液及菌悬液,静置24h后测定吸光值A 24，自凝集率(％)公式为(A 0—A 24)/A 0。；他凝集率(％)：将CGMCC NO.11763和大肠杆菌DH5α的悬菌液调节成在波长600nm处的吸光值为0.6±0.1(A 0)的混合悬浮菌液。静置24H后测定吸光值A 24，他凝集率(％)公式为(A 0—A 24)/A 0。测定结果见表5，可知CGMCC NO.11763的自凝集率为95.71％，有很强的黏附能力。 [0054] 表4 黏附能力表 [0055] [0056] 植物乳杆菌CGMCC NO.11763的菌株生理特性 [0057] 所述植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)XH于2015年11月30日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)，保藏号为CGMCC NO.11763，保藏地址为：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所，邮编：100101。 [0059] 理化特征为：过氧化氢酶(-)，明胶液化(-)，吲哚实验(+)，运动性(-)，发酵产气(-)，亚硝酸盐还原(-)，发酵产气(-)，产硫化氢气体(-)，pH4.0MRS培养基中生长(+)。经过生理生化鉴定为为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)，命名为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)XH。 [0060] 菌株能够在57℃下生长良好，葡萄糖耐受能力为275g/L。 [0061] 本发明植物乳杆菌由采集人李建树，从新疆维吾尔族老乡家中酸奶中分离得到，采集时间2015年6月2日。 [0062] 本发明植物乳杆菌CGMCC NO.11763经实验发现能够在pH为1.50的条件下存活，在1％胆盐培养4小时后仍处于存活状态；植物乳杆菌CGMCC NO.11763降解亚硝酸盐速度快，分解能力达到10.9mg/h/kg，该菌种在生产泡菜时，整个发酵过程中亚硝酸盐浓度在4.8mg/kg以下；CGMCCNO.11763在发酵60h小时后，对胆固醇降解率可达到64.76％。CGMCC NO.11763黏附能力测定的自凝集率为95.71％，菌株能够在57℃下生长良好，葡萄糖耐受能力为275g/L。 [0063] 有益效果： [0064] 本发明可改善肠道性能的蓝莓复合粉将具有天然色泽、风味和口感的蓝莓粉与植物乳杆菌粉、蜂蜜粉、改性膳食纤维、酵素粉、低聚糖等功能性产品科学复配，不仅有效提高了蓝莓复合粉的营养性、食品安全性和保健功能，而且显著提高了蓝莓复合粉的益生性和质量稳定性，与现有蓝莓复合粉相比：其组分简单，色泽、风味和口感天然，营养价值高，保健功能强，生物活性物质含量高，益生菌活菌数量高、益生性强，益生菌功能性代谢物种类全、含量高，食品安全性高，保质期长。具体试验效果见实施例七-十二，具体组分效果如下： [0065] 1.本发明的植物乳杆菌CGMCC NO.11763经实验发现能够在pH为1.50的条件下存活，在1％胆盐培养4小时后仍处于存活状态；植物乳杆菌CGMCC NO.11763降解亚硝酸盐速度快，分解能力达到10.9mg/h/kg，该菌种在生产泡菜时，整个发酵过程中亚硝酸盐浓度在4.8mg/kg以下；CGMCC NO.11763在发酵60h小时后，对胆固醇降解率可达到64.76％。CGMCC NO.11763黏附能力测定的自凝集率为95.71％。 [0066] 2.本发明在制备植物乳杆菌粉剂时采用的冷冻保护剂将含有抗冻蛋白较高的冬黑麦、沙冬青和鲨鱼皮胶原蛋白科学复配，经高压脉冲电场提取、超声波辅助微波提取和生物酶解而制得，全程低温提取，抗冻蛋白提取率高，损失少，得到的保护剂抗冻多肽含量高、种类全、功能性强、抗冻效果好，提高了植物乳杆菌粉剂中的活菌含量。 [0067] 3.本发明制备的蓝莓粉采用超声清洗对蓝莓进行杀虫灭卵、杀灭微生物、去除农药残留和重金属离子等，大大提高了蓝莓粉的食品安全性；采用微波高温瞬时干燥，在使得蓝莓切片膨化干燥的同时主要是灭酶、固色，最大限度地保留了蓝莓的天然色泽，经微波固色后的蓝莓天然色泽在后续的加工过程中非常稳定，不会变色、褪色，色泽非常鲜艳；在含有丝胶肽的水溶液中浸泡复水，可最大限度地减少经冷冻而造成的蓝莓活性物质的损失，提高了蓝莓有效成分的提取率，同时也为蓝莓复合粉在贮藏过程抗冷冻性奠定了基础；将高压脉冲电场、微波、超声、生物酶解等低温提取技术有机结合，可最大限度地保留蓝莓的生物活性物质和香味成分。制备的蓝莓粉花青素含量在3.5mmg/g以上。 [0068] 4.本发明制备的改性膳食纤维是将膳食纤维经物理、化学或生物的方法处理而得到的，可溶性纤维素含量高、生物活性强、对肠道益生菌群有重要的、积极作用的纤维素，与普通膳食纤维相比，其生物活性作用更强大：1)可溶性纤维素含量高，更容易被益生菌利用，可提高益生菌在肠道的生长及繁殖能力，增加益生菌菌群的种类和数量，降低大肠pH值，改善肠道微生态环境；2)强大的吸附能力，经改性后，纤维素的比表面积增大，网格结构丰富，吸附力增强，螯合、吸附胆固醇和胆汁酸类的有机分子能力更强、抑制人体对它们的吸收；3)离子交换能力增强，对金属元素，特别是重金属元素吸附效果更强；4)持水性、膨胀性、增稠性更强且不受酸、碱、盐的影响，5)调节和维持肠道菌群的定植时间，增强肠道的消化和吸收能力，提高人体免疫力，最终显著提高蓝莓复合粉有效成分的消化和吸收率；6)促进胃肠蠕动，减缓并消除胃胀、腹胀等不良反应；7)包埋作用强，可有效防止外界环境(氧气、温度、光照、湿度等)因素对产品品质的影响，稳定了产品的生物活性，延长了产品的保质期。 [0069] 5.本发明制备的蜂蜜粉是以蜂蜜为主要原料，科学复配助干剂，经超声溶解，可使蜂蜜和助干剂均匀混合，融合充分，在高糖份、固形物含量较高的条件下制备出稳定、均一的蜂蜜溶液，经胶磨、高压均质和喷雾干燥后制得的蜂蜜粉吸湿性小，便于和其他组分原料混合，保质期长，营养成分几乎没有损失，收得率高达95％以上，效率高。 [0070] 6.本发明制备的酵素粉不仅含有醋酸杆菌、双歧杆菌、酵母菌和鼠李糖乳杆菌等纯种益生菌，而且含有更多、更有益的在泡菜发酵过程中参与和产生的多种野生微生物菌株，其生物活性和益生性更加全面和强大，与本发明制备的植物乳杆菌粉科学复配，其效果更加显著。 [0071] 7.本发明蓝莓复合粉的制备方法工艺简单，操作方便，对设备要求低，可工业化和规模化生产，将改性膳食纤维最后混合，发挥了其强大的包埋作用，使得产品的性状更稳定、保质期更长。 [0072] 需要说明的是本发明可改善肠道性能的蓝莓复合粉的技术效果是各组分技术特征和方法特征相互协同、相互作用的结果，并非简单的技术特征(组分功能)的叠加，各组分技术特征的有机结合和协同产生的效果远远超过各单一技术特征功能和效果的叠加，具有较好的先进性和实用性。 具体实施方式[0073] 下面通过具体的实施方案叙述本发明。除非特别说明，本发明中所用的技术手段均为本领域技术人员所公知的方法。另外，实施方案应理解为说明性的，而非限制本发明的范围，本发明的实质和范围仅由权利要求书所限定。对于本领域技术人员而言，在不背离本发明实质和范围的前提下，对这些实施方案中的物料成分和用量进行的各种改变或改动也属于本发明的保护范围。 [0074] 实施例一： [0075] 原料制备: [0076] 1、蜂蜜粉的制备 [0077] 其制备方法包括如下步骤： [0078] 将蜂蜜、麦芽糊精、β-环糊精按质量比6:3:1均匀混合，加入50℃的去离子水，充分溶解，使得混合液的固形物含量为33％，混合液于功率300W,频率35KHz、室温条件下进行超声波处理8min,然后经胶体磨循环研磨3次，均质，均质压力28MPa，均质温度55℃，均质液经喷雾干燥机于进风温度190℃，出风温度80℃干燥即得蜂蜜粉，蜂蜜粉粒径为30目。 [0079] 2、改性膳食纤维的制备 [0080] 其制备方法包括以下步骤： [0081] 将菊粉、小麦纤维、燕麦纤维按质量比6:3:2均匀混合，加入其质量5倍的水，室温200W、38KHz条件超声提取13min,然后在电场强度30kV/cm，脉冲时间400μs,脉冲频率300Hz条件下进行高压脉冲电场处理13min；用乳酸调节pH值为5.5，加入混合物质量0.2％的生物酶，于50℃酶解34min；酶解液过滤，滤液减压浓缩、冷冻干燥至水分含量为6.5％即得改性膳食纤维； [0082] 上述生物酶为纤维素酶、木聚糖酶、漆酶、果胶酶按质量比2:2:1.5:1.5均匀混合。 [0083] 3、植物乳杆菌粉的制备 [0084] 植物乳杆菌粉是以植物乳杆菌CGMCC NO.11763为出发菌株按常规方法制备的，其活菌含量为：8×1012cfu/g；其中冷冻干燥工艺采用的冷冻保护剂以含有抗冻蛋白的动物或植物为原料，经高压脉冲电场提取、超声波辅助微波提取和复配酶酶解而制得的，可有效提高植物乳杆菌粉在冷冻干燥过程活菌存活率； [0085] 上述保护剂的制备方法，包括如下步骤： [0086] 将冬黑麦、沙冬青、鲨鱼皮胶原蛋白分别清洗、沥干，按质量比9:4:3均匀混合，加入混合物料质量0.5倍的pH值为4.2的乳酸润湿5h,于-20℃冷冻1.5h后立即进行粉碎，冷冻料层厚度4cm，粉碎物粒径2mm,接着加入粉碎物质量15倍的水，用乳酸调节pH值为4.5，于室温下在电场强度30kV/cm，脉冲时间400μs,脉冲频率250Hz条件下进行高压脉冲电场处理25min；然后于室温在功率225W条件下进行微波辐照提取18min，其微波辐照10s，间隔20s，同时在功率250W,频率35KHz条件下进行超声波辅助提取；加入提取液质量1.5％的复配酶，于50℃酶解40min；酶解液过滤、滤液浓缩、低温粉碎至粒径为0.2mm即得保护剂； [0087] 上述复配酶为纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶、果胶酶、单宁酶按质量比3:2:2:1.5:1.5均匀混合。 [0088] 4、酵素粉的制备 [0089] 其制备方法包括以下步骤： [0090] 采用泡菜发酵生产末期排放的发酵液为原料，过滤除去发酵液中的菜叶等大粒物质得到发酵液体，发酵液体采用冷冻干燥等干燥方法制备获得酵素粉。冷冻干燥的条件是：-35度预冻6小时；然后冻干直到含水量3％。泡菜生产方法参照中国专利201110421967.3制备。 [0091] 以下实施例二至六所使用的蜂蜜粉、改性膳食纤维、植物乳杆菌粉、酵素粉均由实施例一制备。 [0092] 实施例二： [0093] 一种可改善肠道性能的蓝莓复合粉，主要由以下重量份数的原料制备： [0094] 蓝莓粉60份，蜂蜜粉45份，改性膳食纤维12份，低聚糖9份，植物乳杆菌粉9份，酵素粉8份，麦芽糊精7份； [0095] 其中低聚糖重量份数组成为低聚果糖45份，低聚麦芽糖35份，棉子糖30份，大豆低聚糖17份，低聚半乳糖13份，低聚木糖13份，低聚异麦芽糖13份，水苏糖10份； [0096] 其中蓝莓粉的制备方法，包括以下步骤， [0097] 将蓝莓放入盛有0.2％碳酸氢钠溶液的超声波清洗机中，于室温下300W、40KHz清洗8min，沥干，每个蓝莓果任意切分成四份，单层平铺在微波干燥机中于功率4kW、温度125℃、干燥4s，然后浸泡在质量百分比浓度为10％的丝胶肽溶液中9min,取出，于-20℃冷冻40min后立即进行粉碎，粉碎物粒径0.4mm,接着加入粉碎物质量2倍的水，用乳酸调节pH值为4.5，于室温下在电场强度30kV/cm，脉冲时间400μs,脉冲频率250Hz条件下进行高压脉冲电场处理25min；然后于室温在功率200W条件下进行微波辐照提取18min，同时在功率250W,频率35KHz条件下进行超声波辅助提取；加入提取液质量2.0％的混合酶，于45℃酶解 40min，酶解液过滤，滤液减压浓缩、冷冻干燥至水分含量为7％即得蓝莓粉； [0098] 上述混合酶为纤维素酶、蛋白酶、果胶酶、单宁酶按质量比3:2:2:1.5均匀混合。 [0099] 可改善肠道性能的蓝莓复合粉的制备方法，包括如下步骤： [0100] 按照配方比例，称取各原料，依次将酵素粉、植物乳杆菌粉、蓝莓粉、麦芽糊精、蜂蜜粉、低聚糖加入V型混合罐均匀混合30min,搅拌转速30r/min,然后加入改性膳食纤维均匀混15min,搅拌转速50r/min,无菌灌装、密封、包装即得可改善肠道性能的蓝莓复合粉； [0101] 上述无菌灌装采用自动粉状灌装机灌装，同时采用60Co辐照灭菌，辐照剂量4kGy； [0102] 上述可改善肠道性能的蓝莓复合粉采用铝塑复合袋灌装；所述铝塑复合袋灌装前采用紫外线消毒30min。 [0103] 经上述方法制备的可改善肠道性能的蓝莓复合粉植物乳杆菌活菌含量为9.49×1011cfu/g。 [0104] 实施例三： [0105] 一种可改善肠道性能的蓝莓复合粉，主要由以下重量份数的原料制备： [0106] 蓝莓粉55份，蜂蜜粉43份，改性膳食纤维11份，低聚糖8份，植物乳杆菌粉8份，酵素粉7份，麦芽糊精6份； [0107] 其中低聚糖重量份数组成为低聚果糖40份，低聚麦芽糖30份，棉子糖20份，大豆低聚糖16份，低聚半乳糖10份，低聚木糖10份，低聚异麦芽糖10份，水苏糖8份； [0108] 其中蓝莓粉的制备方法，包括以下步骤： [0109] 将蓝莓放入盛有0.1％碳酸氢钠溶液的超声波清洗机中，于室温下200W、35KHz清洗5min，沥干，每个蓝莓果任意切分成四份，单层平铺在微波干燥机中于功率3kW、温度120℃、干燥3s，然后浸泡在质量百分比浓度为8％的丝胶肽溶液中8min,取出，于-18℃冷冻30min后立即进行粉碎，粉碎物粒径0.3mm,接着加入粉碎物质量1倍的水，用乳酸调节pH值为3.5，于室温下在电场强度25kV/cm，脉冲时间300μs,脉冲频率200Hz条件下进行高压脉冲电场处理20min；然后于室温在功率150W条件下进行微波辐照提取15min，同时在功率200W,频率30KHz条件下进行超声波辅助提取；加入提取液质量1.5％的混合酶，于40℃酶解 30min，酶解液过滤，滤液减压浓缩、冷冻干燥至水分含量为5％即得蓝莓粉； [0110] 上述混合酶为纤维素酶、蛋白酶、果胶酶、单宁酶按质量比2:1:1:1均匀混合。 [0111] 可改善肠道性能的蓝莓复合粉的制备方法，包括如下步骤： [0112] 按照配方比例，称取各原料，依次将酵素粉、植物乳杆菌粉、蓝莓粉、麦芽糊精、蜂蜜粉、低聚糖加入V型混合罐均匀混合25min,搅拌转速20r/min,然后加入改性膳食纤维均匀混12min,搅拌转速40r/min,无菌灌装、密封、包装即得可改善肠道性能的蓝莓复合粉； [0113] 上述无菌灌装采用自动粉状灌装机灌装，同时采用60Co辐照灭菌，辐照剂量4kGy； [0114] 上述可改善肠道性能的蓝莓复合粉采用铝塑复合袋灌装；所述铝塑复合袋灌装前采用紫外线消毒20min。 [0115] 经上述方法制备的可改善肠道性能的蓝莓复合粉植物乳杆菌活菌含量为8.59×1011cfu/g。 [0116] 实施例四： [0117] 一种可改善肠道性能的蓝莓复合粉，主要由以下重量份数的原料制备： [0118] 蓝莓粉65份，蜂蜜粉47份，改性膳食纤维13份，低聚糖10份，植物乳杆菌粉10份，酵素粉9份，麦芽糊精8份； [0119] 其中低聚糖重量份数组成为低聚果糖50份，低聚麦芽糖40份，棉子糖40份，大豆低聚糖18份，低聚半乳糖15份，低聚木糖15份，低聚异麦芽糖15份，水苏糖12份； [0120] 其中蓝莓粉的制备方法，包括以下步骤： [0121] 将蓝莓放入盛有0.3％碳酸氢钠溶液的超声波清洗机中，于室温下400W、45KHz清洗10min，沥干，每个蓝莓果任意切分成四份，单层平铺在微波干燥机中于功率5kW、温度130℃、干燥5s，然后浸泡在质量百分比浓度为12％的丝胶肽溶液中10min,取出，于-22℃冷冻50min后立即进行粉碎，粉碎物粒径0.5mm,接着加入粉碎物质量3倍的水，用乳酸调节pH值为5.5，于室温下在电场强度35kV/cm，脉冲时间500μs,脉冲频率300Hz条件下进行高压脉冲电场处理30min；然后于室温在功率300W条件下进行微波辐照提取20min，同时在功率300W,频率40KHz条件下进行超声波辅助提取；加入提取液质量2.5％的混合酶，于50℃酶解 50min，酶解液过滤，滤液减压浓缩、冷冻干燥至水分含量为8％即得蓝莓粉； [0122] 上述混合酶为纤维素酶、蛋白酶、果胶酶、单宁酶按质量比4:3:3:2均匀混合。 [0123] 可改善肠道性能的蓝莓复合粉的制备方法，包括如下步骤： [0124] 按照配方比例，称取各原料，依次将酵素粉、植物乳杆菌粉、蓝莓粉、麦芽糊精、蜂蜜粉、低聚糖加入V型混合罐均匀混合35min,搅拌转速40r/min,然后加入改性膳食纤维均匀混18min,搅拌转速60r/min,无菌灌装、密封、包装即得可改善肠道性能的蓝莓复合粉； [0125] 上述无菌灌装采用自动粉状灌装机灌装，同时采用60Co辐照灭菌，辐照剂量4kGy； [0126] 上述可改善肠道性能的蓝莓复合粉采用铝塑复合袋灌装；所述铝塑复合袋灌装前采用紫外线消毒40min。 [0127] 经上述方法制备的可改善肠道性能的蓝莓复合粉植物乳杆菌活菌含量为7.52×1011cfu/g。 [0128] 实施例五： [0129] 一种可改善肠道性能的蓝莓复合粉，主要由以下重量份数的原料制备： [0130] 蓝莓粉50份，蜂蜜粉40份，改性膳食纤维8份，低聚糖6份，植物乳杆菌粉6份，酵素粉5份，麦芽糊精5份； [0131] 其中低聚糖为水苏糖； [0132] 其中蓝莓粉的制备方法，包括以下步骤： [0133] 将蓝莓放入盛有0.1％碳酸氢钠溶液的超声波清洗机中，于室温下400W、35KHz清洗10min，沥干，每个蓝莓果任意切分成四份，单层平铺在微波干燥机中于功率3kW、温度130℃、干燥3s，然后浸泡在质量百分比浓度为12％的丝胶肽溶液中8min,取出，于-22℃冷冻30min后立即进行粉碎，粉碎物粒径0.5mm,接着加入粉碎物质量1倍的水，用乳酸调节pH值为5.5，于室温下在电场强度25kV/cm，脉冲时间500μs,脉冲频率200Hz条件下进行高压脉冲电场处理30min；然后于室温在功率150W条件下进行微波辐照提取20min，同时在功率200W,频率40KHz条件下进行超声波辅助提取；加入提取液质量1.5％的混合酶，于50℃酶解 30min，酶解液过滤，滤液减压浓缩、冷冻干燥至水分含量为8％即得蓝莓粉； [0134] 上述混合酶为纤维素酶、蛋白酶、果胶酶、单宁酶按质量比2:3:1:2均匀混合。 [0135] 可改善肠道性能的蓝莓复合粉的制备方法，包括如下步骤： [0136] 按照配方比例，称取各原料，依次将酵素粉、植物乳杆菌粉、蓝莓粉、麦芽糊精、蜂蜜粉、低聚糖加入V型混合罐均匀混合28min,搅拌转速25r/min,然后加入改性膳食纤维均匀混14min,搅拌转速45r/min,无菌灌装、密封、包装即得可改善肠道性能的蓝莓复合粉； [0137] 上述无菌灌装采用自动粉状灌装机灌装，同时采用60Co辐照灭菌，辐照剂量4kGy； [0138] 上述可改善肠道性能的蓝莓复合粉采用铝塑复合袋灌装；所述铝塑复合袋灌装前采用臭氧消毒20min。 [0139] 经上述方法制备的可改善肠道性能的蓝莓复合粉植物乳杆菌活菌含量为6.84×1011cfu/g。 [0140] 实施例六： [0141] 一种可改善肠道性能的蓝莓复合粉，主要由以下重量份数的原料制备： [0142] 蓝莓粉70份，蜂蜜粉50份，改性膳食纤维15份，低聚糖12份，植物乳杆菌粉12份，酵素粉10份，麦芽糊精10份； [0143] 其中低聚糖为低聚半乳糖； [0144] 其中蓝莓粉的制备方法，包括以下步骤： [0145] 将蓝莓放入盛有0.3％碳酸氢钠溶液的超声波清洗机中，于室温下200W、45KHz清洗5min，沥干，每个蓝莓果任意切分成四份，单层平铺在微波干燥机中于功率5kW、温度120℃、干燥5s，然后浸泡在质量百分比浓度为8％的丝胶肽溶液中10min,取出，于-18℃冷冻50min后立即进行粉碎，粉碎物粒径0.3mm,接着加入粉碎物质量3倍的水，用乳酸调节pH值为3.5，于室温下在电场强度35kV/cm，脉冲时间300μs,脉冲频率300Hz条件下进行高压脉冲电场处理20min；然后于室温在功率300W条件下进行微波辐照提取15min，同时在功率300W,频率30KHz条件下进行超声波辅助提取；加入提取液质量2.5％的混合酶，于40℃酶解 50min，酶解液过滤，滤液减压浓缩、冷冻干燥至水分含量为5％即得蓝莓粉； [0146] 上述混合酶为纤维素酶、蛋白酶、果胶酶、单宁酶按质量比4:1:3:1均匀混合。 [0147] 可改善肠道性能的蓝莓复合粉的制备方法，包括如下步骤： [0148] 按照配方比例，称取各原料，依次将酵素粉、植物乳杆菌粉、蓝莓粉、麦芽糊精、蜂蜜粉、低聚糖加入V型混合罐均匀混合33min,搅拌转速35r/min,然后加入改性膳食纤维均匀混17min,搅拌转速55r/min,无菌灌装、密封、包装即得可改善肠道性能的蓝莓复合粉； [0149] 上述无菌灌装采用自动粉状灌装机灌装，同时采用60Co辐照灭菌，辐照剂量4kGy； [0150] 上述可改善肠道性能的蓝莓复合粉采用铝塑复合袋灌装；所述铝塑复合袋灌装前采用臭氧消毒40min。 [0151] 经上述方法制备的可改善肠道性能的蓝莓复合粉植物乳杆菌活菌含量为6.96×1011cfu/g。 [0152] 实验例七食用可改善肠道性能的蓝莓复合粉后总胆固醇的变化 [0153] 选总胆固醇180mg/dl-250mg/dl的成年人48名，男女各半，随机分成三组；第一组每天晚餐饮用150毫升矿泉水；第二组每天晚餐冲饮普通市售蓝莓复合粉150g，第三组每天晚餐冲饮本发明实施例2的蓝莓复合粉150g，期间每天食用同样的食物，食物包括肉、蛋、蔬菜和水果。分别在实验开始的前一天和第20、40、60天采集试验者的血液，测定血液中的总胆固醇含量，结果如表1： [0154] 表1：血液中总胆固醇含量检测结果 [0155]时间 0天 20天 40天 60天 第一组(mg/dl) 202.3 203.8 206.2 209.3 第二组(mg/dl) 207.6 206.5 203.2 202.1 第三组(mg/dl) 210.8 203.9 193.5 171.1 [0156] 由上表可知冲饮本发明实施例2的蓝莓复合粉后，成年人血液中的总胆固醇的含量发生明显变化。与普通市售蓝莓复合粉相比，本发明蓝莓复合粉对成年人血液中的总胆固醇的含量明显的降低，而矿泉水组成年人血液中的总胆固醇的含量明显的增加，市售蓝莓复合粉虽然有所降低，但与本发明产品相比，效果不显著，由此可知，本发明采用具有降低胆固醇特性的特定菌株制备的蓝莓复合粉具有很好的降低胆固醇的保健效果。 [0157] 需要说明的是：本发明实施例3-6所制备的可改善肠道性能的蓝莓复合粉同样具有上述技术效果，各实施例之间差异性不显著。 [0158] 实施例八本发明可改善肠道性能的蓝莓复合粉保质期内植物乳杆菌活菌含量稳定性试验 [0159] 取本发明实施例2制备的蓝莓复合粉于室温22-25℃、通风条件下分别储藏3个月、6个月、12个月、24个月、36个月并测定植物乳杆菌活菌含量，结果如表2： [0160] 表2：保质期内植物乳杆菌活菌含量检测结果 [0161] [0162] 以上结果表明：本发明蓝莓复合粉的储存稳定性较好，抗环境(温度、适度、氧气、光照、水分等)影响因素能力大，保质期植物乳杆菌活菌含量损失率最大(36个月)为15％,比现有的同类产品活菌含量高、损失率低、保质期长，同时反映出蓝莓复合粉的其它生物活性成分具有同样的储存稳定性。 [0163] 需要说明的是：本发明实施例3-6制备的可改善肠道性能的蓝莓复合粉同样具有上述实验效果，各实施例之间及与上述实验效果差异性不大。 [0164] 实施例九本发明可改善肠道性能的蓝莓复合粉的感官品评试验 [0165] 邀请24名人员对本发明实施例2制备的蓝莓复合粉与市售两种同类相同生产日期的蓝莓复合粉进行品评，感官打分，其中专业和非专业人员各12名，专业人员青年、中年、老年各4名，男女各半，非专业人员少年、青年、中年、老年各3名，男女各半；打分包括外观(20分)、质地(25分)、风味(30分)、口感(25分)四个方面，打分人员独立进行，互不影响，以保证品评结果准确。对品评结果进行了统计，均分值取近似值，保留整数，具体见表3： [0166] 表3：感官品评统计结果 [0167] [0168] 注：同一行内标不同小写字母表示差异显著(P＜0.05)，标不同大写字母表示差异极显著(P＜0.01)，标有相同字母表示差异不显著(P＞0.05)。 [0169] 以上结果表明，本发明制备的蓝莓复合粉从外观、质地、风味和口感任何一方面都要明显优于市售蓝莓复合粉，特别是外观、风味和口感极好，同时也适合不同年龄段、不同消费层次的消费者食用。 [0170] 需要说明的是：本发明实施例3-6制备的可改善肠道性能的蓝莓复合粉同样具有上述实验效果，各实施例之间及与上述实验效果差异性不大。 [0171] 实施例十本发明可改善肠道性能的蓝莓复合粉益生性试验 [0172] 将本发明实施例2制备的蓝莓复合粉，用无菌水制备成活菌数为2×1010CFU/mL的植物乳杆菌溶液，于4℃保存备用； [0173] 1、取保存好的10mL植物乳杆菌溶液注入到试管1中，采用十倍逐级稀释至10-8，取1mL稀释液在平板上，将灭菌后冷却至45℃的MRS琼脂培养基倾注在平板(灭菌)上，迅速摇匀。再将装有10mL植物乳杆菌溶液的试管2置于80-90℃水浴锅中加热15-25min，取加热后的植物乳杆菌溶液进行十倍逐级稀释至10-8，取1mL稀释液在平板上，将灭菌后冷却至45℃的MRS琼脂培养基倾注在平板(灭菌)上并迅速摇匀。最后将加热前和加热后的平板均在35℃条件下培养24h，计算加热前后的数量。 [0174] 结果表明，活菌存活率达到了88％以上。 [0175] 2、模拟胃液及肠液的耐受试验：取100g/L的盐酸16.4mL加蒸馏水稀释，使pH值分别为1.5、2.5和3.5，取100mL稀盐酸溶液，分别加入1g胃蛋白酶，使其充分溶解，得模拟胃液，微孔滤膜除菌(0.22μm)备用。取磷酸二氢钾6.8g，加水500mL使溶解，用0.1moL/L氢氧化钠溶液调节pH值至6.8；另取胰蛋白酶10g，加水100mL使溶解，将两液混合后，加水稀释至1000ml，得模拟肠液，微孔滤膜除菌(0.22μm)备用。取1mL保存好的植物乳杆菌溶液加入到 9mL的模拟胃液中(即十倍逐级稀释)，并迅速在振荡器上充分混匀，然后置于30-45℃静置培养2-4h。分别在1h、2h、3h、4h的时候取出培养液并立即计数残存活菌数，与原活菌数进行比较，结果表明，活菌存活率为98％。然后取在人工胃液中消化不同时间的培养液各1mL，分别接种于9mL pH值为6.8的人工肠液中，置于30-45℃静置培养2-4h，并分别在0、3、6、24h取样，测定其活菌数，与原活菌数进行比较，结果表明活菌存活率为99％。 [0176] 3、模拟胆盐的耐受试验：用胰液素制成1g/L的溶液，并在溶液中加入0.8％的猪胆盐，用10％的NaOH调整pH为8.0，然后用0.45μm微滤膜过滤并除菌。将0.5mL保存好的植物乳杆菌溶液接种到4.5mL模拟胆盐中，培养24h后得到培养液，计数残存的活菌数。将培养液在灭菌生理盐水中十倍逐级稀释至10-8，并用MRS倾注，然后置于35℃静置培养24h。结果表明活菌存活率为99％。 [0177] 以上试验结果表明，本发明蓝莓复合粉中的植物乳杆菌益生性(耐热性、耐pH性、耐胆盐)较强，非常适合人体胃肠环境，在模拟胃肠环境中存活率大，可有效改善胃肠功能。 [0178] 需要说明的是：本发明实施例3-6制备的蓝莓复合粉同样具有上述实验效果，各实施例之间及与上述实验效果差异性不大。 [0179] 实施例十一本发明可改善肠道性能的蓝莓复合粉小鼠肠道性能试验 [0180] 将本发明实施例2制备的蓝莓复合粉，用无菌水制备成活菌数为2×1010CFU/mL的植物乳杆菌溶液，于4℃保存备用； [0181] 选取普通昆明小白鼠60只，雌雄各半，18-20g，常规词养。从中随机挑选40只，每天早晨9:00灌胃盐酸林可霉素0.2mL(20mg)/只，其它作为对照组，每天同一时间灌胃等量灭菌生理盐水，连续一周，制备肠道菌群失调的小鼠模型。模型组小鼠饮食下降，未出现死亡和明显的腹泻现象，排软粪，外形正常含水分较多，垫料潮湿。将40只肠道菌群失调小鼠，随机分为2组，一组20只作为治疗组，每天灌胃保存好的植物乳杆菌溶液0.5ml(2×1010cfu/ml)/只，另20只作为自然恢复组，每天同一时间灌胃等量灭菌生理盐水，连续两周。整个试验期21天，每天观察小白鼠的生长和排便情况，于第8、21天对蓝莓复合粉治疗组和自然恢复组的小鼠进行称重，计算各组体重平均增长率，结果如表4；每5天测各组小鼠粪便大肠杆菌数量，计算平均数，结果如表5。取小鼠粪便约0.1g，于无菌操作台内加入3粒玻璃珠(以0.1g粪样加0.5mL稀释液)，稀释并接种麦康凯琼脂培养基，计算每克湿便中的大肠杆菌数。 [0182] 表4：小鼠增重情况 [0183]分组 平均始重(g/只) 平均末重(g/只) 平均增长率(％) 自然恢复组 20.69±1.33 27.34±1.59 32.14a 治疗组 20.41±1.45 34.28±1.62 67.96b [0184] 表5：小鼠粪便中大肠杆菌数的情况 [0185] [0186] 蓝莓复合粉治疗组小鼠体重平均增长率(67.96％)显著高于自然恢复组(32.14％)；饲喂溶液后肠道大肠杆菌数量显著下降，降低97.07％，显著低于自然恢复组(24.78％)，表明本发明蓝莓复合粉中的植物乳杆菌在小白鼠肠道内迅速定植，形成优势菌群，并有效抑制大肠杆菌等病原菌的生长繁殖，并且定植时间长，持续、有效改善了肠道性能。 [0187] 需要说明的是：本发明实施例3-6制备的可改善肠道性能的蓝莓复合粉同样具有上述实验效果，各实施例之间及与上述实验效果差异性不大。 [0190] 通过运动耐力测试(小鼠游泳试验)，验证本发明蓝莓复合粉的提高免疫力、抗疲劳作用。 [0191] 2实验材料与试剂 [0192] 2.1供试药物： [0193] 市售蓝莓复合粉(G1)；市售蓝莓复合粉(G2)；本发明实施例2-6制备的蓝莓复合粉(G3-G7)。 [0194] 2.2试剂： [0195] 肝/肌糖原测试盒，购自南京建成生物制品研究所；浓硫酸(AR)，南京化学试剂有限公司；生理盐水，山东长富洁晶药业有限公司。 [0196] 3.实验动物 [0197] ICR小鼠，♂，清洁级，体重18-22g，由宁夏医科大学比较医学中心提供，实验期间小鼠自由饮食。 [0198] 4.主要仪器 [0199] 铝制游泳箱(50cm×50cm×40cm)，铅丝，低温高速离心机：5804R型，Eppendrof公司；水浴锅：DK-S26型，上海精宏实验设备有限公司；电子称：BS224S型，Sartorius公司；秒表，温度计 [0200] 5.实验分组 [0201] 5.1剂量分组及受试样品给予时间随机将小鼠分为8组，每组10只，第1组至第7组分别给G1～G7的药物，第8组为空白对照组，给予等体积的双蒸水，每组每日均灌胃1次，灌胃体积为0.2ml/10g，连续给予受试样品30天。 [0202] 5.2样品配制第1组至第7组：称取2.25g药物样品，用蒸馏水配至150ml；空白对照组：双蒸水150ml。 [0203] 6.实验方法 [0204] 6.1负重游泳实验末次给药30min后，置小鼠于游泳箱中，水深不少于30cm，水温25±1℃，鼠尾根部负荷5％体重的铅皮，记录小鼠游泳开始至死亡的时间，作为小鼠游泳时间。 [0205] 6.2小鼠血清尿素测定末次给药30min后，在温度为30℃的水中不负重游泳90min,休息60min后摘眼球采血0.5mL(不加抗凝剂),置4℃冰箱3h,血凝固后2000r/min离心15min,取血清送宁夏医科大学附属医院检验科检测。 [0206] 6.3肝糖原的测定末次给药30min后，在温度为25±1℃的水中不负重游泳90min，颈椎脱臼处死小鼠，用生理盐水洗净，并用滤纸吸干水分后，准确称取肝脏100mg，肝糖原检测试剂盒检测小鼠肝糖原含量。 [0207] 6.4血乳酸的测定末次给药30min后采血，然后不负重在温度为30℃的水中游泳10min后停止。乳酸仪测定方法：分别在游泳前、游泳后、游泳后休息20min后各采血20μL加入40μL破膜液中，立即充分振荡破碎细胞用乳酸仪测定。(血乳酸曲线下面积＝5×(游泳前血乳酸值+3×游泳后0min的血乳酸值+2×游泳后20min的血乳酸值) [0208] 7.观察指标负重游泳时间，血乳酸、尿素、肝糖原值 [0209] 8.统计方法实验数据用 表示，采用t检验进行组间比较 [0210] 9.实验结果 [0211] 9.1本发明蓝莓复合粉对小鼠体重的影响 [0212] 各组小鼠在给予G1～G9药物后，前、中，后期体重分别见下表所示,各组小鼠的初始体重和增重体重与对照组比较均无统计学差异(P＞0.05)，表明G1～G9药物均无明显的毒性。实验结果详见表6。 [0213] 表6负重游泳实验小鼠的初始体重、中期体重和结束体重 [0214] [0215] 9.2本发明蓝莓复合粉对小鼠负重游泳时间的影响 [0216] 经口给予小鼠G1～G7药物后，G1～G2药物与空白对照组比较，可以明显延长小鼠负重游泳时间，具有显著性差异(P＜0.05)，本发明蓝莓复合粉G3～G7药物与空白对照组比较，可以显著延长小鼠负重游泳时间，具有极显著性差异(P＜0.01)，且明显优于G1～G2药物。结果详见表7。 [0217] 表7蓝莓复合粉对小鼠负重游泳时间的影响 [0218] [0219] “*”p<0.05vs空白对照； [0220] “**”p<0.01vs空白对照； [0221] 9.3本发明蓝莓复合粉对小鼠运动前后血乳酸的影响 [0222] 经口给予小鼠本发明的蓝莓复合粉后，本发明蓝莓复合粉G3～G7药物对小鼠运动后血乳酸曲线下面积与对照组比较有统计学差异(P＜0.05)，G1～G2药物组小鼠血乳酸曲线下面积与对照组比较虽有所降低，但并无统计学差异(P＞0.05)。结果见表8。 [0223] 表8本发明蓝莓复合粉对小鼠运动前后血乳酸水平的影响 [0224] [0225] “*”p<0.05vs空白对照； [0226] 9.4本发明蓝莓复合粉对小鼠肝糖原的影响 [0227] 经口给予小鼠G1～G7药物后，G1～G2药物与空白对照组比较，小鼠肝糖原含量均有明显的升高，具有显著性差异(P＜0.05)，本发明蓝莓复合粉G3～G7药物与与空白对照组比较，小鼠肝糖原含量均有明显的升高，具有极显著性差异(P＜0.01)，且明显优于G1～G2药物。结果详见表9。 [0228] 表9本发明蓝莓复合粉对小鼠肝糖原含量的影响 [0229] [0230] “*”p<0.05vs空白对照； [0231] “**”p<0.01vs空白对照； |
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