一种枸杞、红枣酵素及其制备方法 |
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| 申请号 | CN201510316281.6 | 申请日 | 2015-06-11 | 公开(公告)号 | CN104872674A | 公开(公告)日 | 2015-09-02 |
| 申请人 | 宁夏金尚琦生物科技有限公司; | 发明人 | 周学义; 党俊翔; 朱文昭; | ||||
| 摘要 | 本 发明 公开了一种枸杞、红枣酵素及其制备方法，属于酵素制备技术领域。以多菌种复合菌粉为 发酵 剂，以枸杞、红枣为主要原料，科学复配改性膳食 纤维 、果胶分解物、调味料提取液、中草药提取液和酵素稳定剂等多功能辅助原料，全程主要采用 超 声波 清洗、冷冻 粉碎 、 微波 辅助高压脉冲 电场 处理、超声催熟等低温加工技术，最大限度地保持了枸杞、红枣的天然色泽、 风 味和口感及活性物质的含量，显著增强了枸杞、红枣酵素的 生物 稳定性 、非生物稳定性和生物活性，减少了化学添加剂的引入，提高了枸杞、红枣的榨汁率和酵素的 食品安全 性。最终制得一种生物活性高、稳定性强、口感和风味及食欲性强、保质期长、食用安全的枸杞、红枣酵素。 | ||||||
| 权利要求 | 1.一种枸杞、红枣酵素，主要由以下重量份数的原料制备：枸杞25-45份，红枣20-40份，改性膳食纤维5-10份，果胶分解物3-8份，调味料提取液3-8份，中草药提取液2-6份，稳定剂0.5-1.5份； |
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| 说明书全文 | 一种枸杞、红枣酵素及其制备方法技术领域[0001] 本发明涉及酵素，特别涉及一种枸杞、红枣酵素及其制备方法。 背景技术[0002] 酵素又称为“酶”，酵素是比细胞单位更小的一种蛋白质，是一种带有生物催化作用的特殊蛋白质。它承担人体内新陈代谢中各种生化变化的媒介体，凡细胞的代谢、新生、分解、消化等等，都少不了它。有酵素才有生命；没有酵素则意味着生命即将步向死亡。也正因为酵素在身体内部扮演着不可或缺的角色，几乎负责调理生物体内所有用以维持生命的生理活动，包括：思考问题、运动、睡眠、呼吸、愤怒、哭泣或者分泌荷尔蒙等都是以酵素为中心的活动结果，与人类生命息息相关，它催化机体的系列反应，催动着生命现象的进行，让免疫细胞快速地繁殖，从而增强人体的免疫力，帮助体内毒素排出，实现净化血液功效。很多时候将它称为“活着的物质”、“掌握所有生命活动的物质”。酵素的活性因年龄而异，由出生的婴儿到幼儿期之间，酵素的活性是增加并不断增进；进入中年之后，由于生活方式和环境污染等问题，酵素的活性下降、代谢功能也因年龄增长不断衰退。本来人体中所需的酵素是完全可以从日常的果蔬植物食物中摄取到，然而酵素是非常脆弱的，它在60℃以上就会完全失去活性。喜欢加热烹调的中国人，之所以严重缺乏酵素主要是这个原因。 [0003] IUB(国际生化联合会)将酵素归纳为六大类(氧化与还原酵素、转移酵素、异构酵素、裂合酵素、连结酵素)，总计在人体约有2000-3000种之多，每一种酵素只负责单一功能、各司其职。例如：消化食物、维持皮肤组织、生成能量、促进所有生化反应及新陈代谢。而维素、矿物质及荷尔蒙也都需要酵素才能正常运作，以维持各项生理机能，生命得以延续。 [0004] 酵素采用多种植物、蔬果、种子、草药、海藻等纯植物为原料制备。酵素的主要成分除多种食用酵素外，还有微量元素、矿物质、维生素、氨基酸、蛋白质、碳水化合物等，具有纯天然特点。但是，选用的植物、蔬果、种子、草药等植物原料不相同，具体的制备方法因厂家各异，其主要成分也有差异。 [0005] 枸杞、红枣是一种药食同源的植物原料，是我国重要的药用植物资源和药食同源的名贵中药材。枸杞的主要化学成分有枸杞多糖、枸杞黄酮、甜菜碱、类胡萝卜素及类胡萝卜素酯、维生素C、多种氨基酸，还包括隐黄质、玉米黄质、酸浆果黄素、甾醇类、酚类、有机酸、多种酵素和SOD等活性物质，据监测分析，枸杞原汁中平均枸杞多糖含量1.2％,SOD活性≥73.14nu/ml,总黄酮2504.83mg/L；药理学研究证实，枸杞子可调节机体免疫功能、能有效抑制肿瘤生长和细胞突变、具有延缓衰老、抗脂肪肝、调节血脂和血糖等方面的作用。红枣富含蛋白质、脂肪、糖类、胡萝卜素、B族维生素、维生素C、维生素P以及钙、磷、铁和环磷酸腺苷等营养成分，其中维生素C的含量在果品中名列前茅，有维生素王之美称；红枣所含有的环磷酸腺苷，是人体细胞能量代谢的必需成分，能够增强肌力、消除疲劳、扩张血管、增加心肌收缩力、改善心肌营养，对防治心血管系统疾病有良好的作用；中医中药理论认为，红枣具有多种药理作用，红枣对慢性肝炎、肝硬化、贫血、过敏性紫癜等病症有较好疗效；红枣含有三萜类化合物及环磷酸腺苷，有较强的抗癌、抗过敏作用。 [0006] 目前，以枸杞、红枣为原料制备酵素类产品的公开专利文献较多，比如：申请号为201410326646.9的中国专利公开了一种枸杞酵素的制备方法，以枸杞残次品为原料，经分离取汁、酶解、降糖发酵、乳酸菌发酵、超声低温浓缩、调配、干燥、粉碎而制得，添加剂少，无残留，实现了枸杞酵素产品中活性物质含量的提升。申请号为201010624400.1的中国专利公开了一种金丝小枣酵素的制备方法，以金丝小枣为原料经枣泥制备、一次酶解、二次酶解、调配消毒、发酵、冷冻干燥而制得，制备的金丝小枣酵素含有丰富的蛋白酶、脂肪酶、超氧化歧化酶、淀粉酶、维生素、矿物质及酚类、黄酮类等次生代谢产物。申请号为201410432581.6的中国专利公开了一种环保酵素的制作方法，采用原料为：苹果、香菇、胡萝卜、山楂、枸杞子、柠檬和白砂糖；经原料清洗、密闭自然发酵、取滤液、纯种发酵、后熟制得，该环保酵素的制作方法，改变了传统的酵素生产使用诸多添加剂等，制取的酵素不仅对于人体吸收有益，而且在养生保健等方面有明显作用。申请号为201210406990.X的中国专利公开了一种苹果酵素，以质量份数计，其组成为：党参40-60份，北芪15-25份，红枣30-60份，枸杞子30-80份，青苹果400-600份，寡糖粉80-100份，花蜜200-300份； 制备方法是利用纯天然的植物和水果通过自然发酵产生酵素，具有补益强身、提升免疫系统功能，促进血液循环，清血整肠，加速新陈代谢，保持机体健壮等显著功效。申请号为 201110038192.1的中国专利公开了一种具有滋补气血功效的醋饮料及其生产方法，各材料的质量组成比为：中药固体颗粒1～5，红枣果肉5～15，枸杞子5～15，糖10～20、食醋10～20；人参、党参、山药经过浸泡、熬煮、过滤、蒸发提取得到中药固体颗粒，再和切块的红枣果肉、枸杞子、糖、食醋进行发酵提取而得到，具有滋补气血的功效，有效率在85％以上。该发明没有苦、涩、臭的中药气味，而具有水果醋酸甜可口的特点，好喝又治病，特别适合儿童饮用。而且可较长时间保留，随时按需要倒出适量来喝，十分方便。 [0007] 上述已经公开的专利主要研究方向集中在原料及发酵方式的变化上，主要存在以下几点缺陷：1)原料处理方面：传统清洗方式，农药及重金属残留量高，食品安全性差；高糖腌渍后酵素含糖量较高，不适合糖尿病患者食用且酵素提取率较低；破碎、酶解加工过程容易感染杂菌造成二次污染，高剪切力会造成酵素活性物质损失大；原料不处理直接发酵利用率低，酵素活性物质提取率低。2)发酵工艺方面：自然发酵周期长、发酵污染风险大；纯种发酵菌种代谢产物功能单一，无特性；发酵方式采用传统自然菌群发酵、现代复配纯种发酵或二者的结合，过于传统，无创新；3)酵素生物活性及稳定性差，保质期短：对酵素的生物活性(稳定性和活性)和保质期方面的研究较少，几乎没有；4)口感和风味适应性差、食欲性低。 [0008] 酵素作为一种具有生物活性的蛋白质，从宏观角度出发，其生物活性对温度、压力、氧气、水分、酸碱性、光照等外界环境条件非常敏感；从微观角度出发，其活性与蛋白质分子中心及外围结构、金属离子浓度等因素有关，非常复杂。植物酵素从原料到产品整个加工过程本身已经损失较大，因此，研究如何降低酵素成品的生物活性损失和使酵素经人体摄取后发挥其最大活性显得十分重要，是研制酵素产品的最终目的，也是拓展我国酵素产品商业化、市场化道路的关键。 [0009] 综上，以枸杞、红枣为原料制备一种生物活性高、稳定性强、口感和风味及食欲性强、保质期长的枸杞、红枣酵素是本领域技术人员的长期追求。 发明内容[0010] 本发明所解决的技术问题是克服现有枸杞、红枣酵素及其制备方法存在的缺陷，以枸杞和红枣干果为主要原料，首先在碱性条件下超声清洗，然后经复水、冷冻、粉碎、微波辅助高压脉冲电场提取得到提取液，接种复合菌种经追加接种、变温发酵得到发酵液，最后经调配、超声催熟得到一种生物活性高、稳定性强、口感和风味及食欲性强、保质期长的枸杞、红枣酵素。 [0011] 为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案： [0012] 一种枸杞、红枣酵素，主要由以下重量份数的原料制备： [0014] 进一步地，所述枸杞、红枣为干果，取材方便，不受季节约束。 [0015] 进一步地，所述改性膳食纤维是将膳食纤维经物理、化学或生物的方法处理而得到的可溶性纤维素含量高、生物活性强、对人体肠道益生菌群有重要的、积极作用的纤维素，与普通膳食纤维相比，其生物活性作用更强大； [0016] 优选地，所述改性纤维是由菊粉、苹果纤维、燕麦纤维、小麦纤维中的一种或多种经生物酶酶解而得到的； [0017] 更优选地，所述改性膳食纤维的制备方法，包括以下步骤：将菊粉、苹果纤维、燕麦纤维、小麦纤维按质量比4-6:2-4:1-3:1-2均匀混合，加入其质量3-7倍的水，室温200-300W、35-40KHz条件超声提取10-15min,然后在电场强度20-40kV/cm，脉冲时间400-500μs,脉冲频率200-300Hz条件下进行高压脉冲电场提取；用乳酸调节pH值为4.5-6.5，加入混合物质量0.1-0.3％的混合酶，于45-55℃酶解20-48min；酶解液减压浓缩至固形物含量为20％以上，即得改性膳食纤维； [0019] 进一步地，所述果胶分解物是以柠檬、橙、柚、柑桔、葡萄等果皮或山楂、甜菜、苹果等废渣经超声清洗、高压脉冲提取、热水浸提、醇沉获得果胶，然后经果胶酶酶解而制得的； [0020] 优选地，所述果胶分解物的制备方法，包括如下步骤：将新鲜的山楂果渣、葡萄皮、苹果渣、甜菜渣分别放入装有1.2％碳酸氢钠溶液的超声波清洗机中于200W、40KHz清洗5-10min，沥干，切分成相等规格,长、宽为5-10mm，厚度3-5mm的片或丁，按质量比5-7:4-6:2-4:2-4均匀混合，然后于-21--25℃冷冻10-30min；立即进行粉碎，粒径为0.1-1mm；加入粉碎物质量3-5倍的去离子水，混合均匀，用柠檬酸调节pH值为2-3，室温下在电场强度35-45kV/cm，脉冲时间400-600μs,脉冲频率200-300Hz条件下进行高压脉冲电场处理，接着常压煮沸30-50min，布袋过滤，滤渣用其质量1-3倍的滤液常压煮沸 40-60min,布袋过滤，合并滤液，硅藻土过滤，使滤液澄清，在75℃下减压浓缩至固形物含量为6-10％，迅速冷却至室温，加入浓缩液1.5倍体积的pH值为2-3的95％乙醇，静置 20-30min,使果胶沉淀出来，4000r/min离心5-10min，回收沉淀，用2倍体积的无水乙醇洗脱，离心，回收沉淀，如此洗脱操作2次，得到的沉淀于40-60℃真空干燥2-3h,获得果胶，加入果胶质量4-5倍的40-50℃水，搅拌，均匀混合，保温，用乳酸调节pH值为4.5-5.5，加入 0.3-0.8U/mL的果胶酶酶解2-4h,酶解液过滤，滤液于沸水中灭酶10-15min，冷却至室温，减压浓缩至固形物含量为20％以上，即得果胶分解物。 [0021] 进一步地，所述调味料提取液是以调味料为原料，经冷冻、粉碎、高压脉冲电场提取、超声波辅助微波提取和自然发酵而制备的； [0022] 优选地，所述调味料提取液的制备方法，包括如下步骤：以重量份数计，准确称取生姜10-15份，大蒜8-10份，丁香6-8份，花椒3-5份，香叶3-5份，八角茴香1-3份，豆蔻1-3份，分别清洗、沥干，均匀混合，加入混合调味料质量0.1-1倍的pH值为3.8-4.5的果醋润湿3-8h,于-18--22℃冷冻1-2h后立即进行粉碎，冷冻料层厚度3-5cm，粉碎物粒径0.5-3mm,接着加入粉碎物质量1-3倍的水，用乳酸调节pH值为3.5-5.5，于室温下在电场强度25-35kV/cm，脉冲时间300-500μs,脉冲频率200-300Hz条件下进行高压脉冲电场处理；然后于室温在功率150-300W条件下进行微波辐照提取15-20min，同时在功率200-300W,频率30-40KHz条件下进行超声波辅助提取；充分搅拌提取液，均匀混合，密封，自然发酵24-68h，过滤，得滤液，滤渣用1-3倍重量40-50℃水漂洗3次，漂洗液与滤液合并，即得调味料提取液； [0023] 更优选地，所述生姜和大蒜无需润湿，切片后直接进行冷冻处理，切片厚度0.5-3mm； [0024] 更优选地，所述微波辐照提取为间歇式提取，即微波辐照10s，间隔20s。 [0025] 进一步地，所述中草药提取液是以显著提高机体抗冷、热应激性、抗病性和免疫力的中草药为原料而制备； [0026] 优选地，所述中草药提取液的制备方法，包括如下步骤：按重量份数计，称取党参15-20份，黄芪15-20份，鱼腥草15-20份，淫羊藿13-18份，山楂12-15份，金银花12-15份，川芎8-12份，葛根6-10份，当归6-10份，胖大海5-8份，女贞子3-7份，薏苡仁2-4份；置盛有0.1-0.3％碳酸氢钠溶液的超声波清洗机中于200W、30KHz清洗10-15min，沥干，将上述中草药粉碎至粒径为2mm以下，置容器中均匀混合并添加3-6倍重量的水，得混合物料，控制温度70℃-90℃保持2-4h，接着降温至40-50℃，用乳酸调节pH值为3.5-4.5，在功率 150-300W条件下进行微波提取10-15min，同时在功率200-300W,频率30-40KHz条件下进行超声波辅助提取；然后加入混合物料总重量0.5-1.5％的复合酶进行酶解，用乳酸调节pH值为5.5-6.8，酶解2-4h，最后添加混合物料0.5-3倍重量乙醇和丙醇的混合物，乙醇和丙醇混合的质量比为1:1-3，控制温度至60℃-78℃保持3-4h，过滤，得第一滤液；添加滤渣 1-3倍重量的水，控制温度85℃-95℃保持1-3h，然后降温至25-35℃，过滤，得第二滤液； 将第一滤液和第二滤液按照质量比2-4:1-3合并,均匀混合即得中草药提取液； [0027] 所述复合酶为葡聚糖酶、木聚糖酶、戊聚糖酶、果胶酶按质量比2-4:1-3:1-2:1-2均匀混合。 [0028] 进一步地，所述稳定剂为可有效防止酵素蛋白分子结构受到外界条件，比如温度、压力、氧气、水分、酸碱性、离子浓度、光照等影响而改变的物质，在常规贮存条件下可较长时间地有效维持酵素蛋白分子结构稳定，显著降低酵素活力损失，并且经人体摄取、吸收后可最大限度地发挥酵素本身的活力； [0030] 更优选地，所述稳定剂由以下重量份数的原料组成：海藻糖5-10份，葡萄籽原花青素3-5份，β-环糊精2-5份，谷胱甘肽2-4份，金属氯化物1-2份，半胱氨酸0.1-0.3份，牛血清白蛋白0.1-0.3份； [0032] 更优选地，所述金属氯化物为氯化锌、氯化钙、氯化钠、氯化镁、氯化铁按质量比2-4:1-3:0.3-0.5:0.1-0.3:0.1-0.3均匀混合。 [0033] 进一步地，所述枸杞、红枣酵素按常规方法还可制备为酵素浸膏。 [0034] 进一步地，所述枸杞、红枣酵素按常规方法还可制备为片剂、颗粒剂、粉剂或胶囊剂酵素。 [0036] 本发明另一目的是提供上述枸杞、红枣酵素的制备方法，包括如下步骤： [0037] 1)枸杞、红枣提取液的制备：按照配方比例准确称取各原料，将枸杞、红枣分别放入盛有0.8-1.2％碳酸氢钠溶液的超声波清洗机中，于25-35℃进行超声清洗5-10min，漂洗、沥干，红枣去核得果肉，与枸杞均匀混合得混合料，然后加入混合料质量12-15％的质量百分比浓度为3-5％的淀粉溶液，搅拌均匀，密封，室温复水3-5h，于-18--22℃冷冻10-20min，立即进行粉碎，粉碎物粒径为0.5-1mm,加入粉碎物质量2-4倍的水，均匀混合，调整混合物pH值为3.5-4.5，最后于室温下高压脉冲电场提取20-30min，同时于200W微波辅助提取，得枸杞、红枣提取液； [0038] 进一步地，所述超声清洗参数为：功率200-400W、频率35-45KHz； [0040] 进一步地，所述高压脉冲电场处理参数为：电场强度35-45kV/cm、脉冲时间400-600μs、脉冲频率200-400Hz； [0041] 2)复合菌种活化种子液的制备：按重量份计，取枸杞、红枣提取液80-100份，120BX麦芽汁30-50份，蜂蜜10-15份，均匀混合，升温至35-40℃，边搅拌边溶解10-15min，保温，加入5-10份的复合菌粉，活化30-50min，然后降温至28-32℃，保温，继续活化20-40min,10 10 即得复合菌种活化种子液，其活菌含量为5x10 -7x10 cfu/ml； [0042] 进一步地，所述复合菌粉活菌含量为：3x1012-5x1012cfu/g； [0045] 优选地，所述酵母菌粉重量份数组成为：葡萄酒酵母5-10份，啤酒酵母4-6份，面包酵母2-4份，鲁氏接合酵母2-4份，异常汉逊酵母1-3份； [0046] 进一步地，所述益生菌粉包括以下益生菌粉剂中的任意一种或多种：例如：植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、两岐双岐杆菌(Bifidobacterium bifidum)、婴儿双岐杆菌(B.infantis)、长双岐杆菌(B.longum)、短双岐杆菌(B.breve)、青春双岐杆菌(B.adolescentis)、乳双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)、保加利亚乳杆菌(Lactobacillus.Bulgaricus)、嗜酸乳杆菌(L.acidophilus)、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)、嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)； [0047] 优选地，所述益生菌粉由以下重量份数的粉剂均匀混合而成：植物乳杆菌25-35份，两岐双岐杆菌25-35份，乳双歧杆菌15-25份，嗜热链球菌15-25份，长双歧杆菌15-20份，婴儿双岐杆菌15-20份，青春双岐杆菌13-18份，保加利亚乳杆菌12-15份，嗜酸乳杆菌10-15份，干酪乳杆菌8-10份，鼠李糖乳杆菌5-8份； [0048] 优选地，所述植物乳杆菌粉剂是以中国专利CN 101974467A中所公开的植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)QZ-5为出发菌按常规方法制备的，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.4200。该菌种可以产生对多种病原菌和腐败菌具有抑制作用的细菌素，并且该细菌素具有很好的热稳定性和酸稳定性，并且对蛋白酶敏感，抑菌谱广； [0049] 优选地，所述植物乳杆菌粉剂是以中国专利CN 104531578A中所公开的植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)FM-LP1-1为出发菌按常规方法制备的，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC NO.9488。该菌株不仅具有高效降解亚硝酸盐能力、强产酸能力、较高的耐胆盐能力，并且该菌具有优良的发酵性能和耐渗透压性能，在含有200mg/L NaN02的MRS培养液中，接种该菌的菌体密度为7 7 1.01×10-1.54×10cfu/ml，25℃条件下培养24h，NaN02的降解率达到97.5％以上，培养 48h，NaN02的降解率达到99.1％以上；在MRS培养液中培养24h，培养液的pH值达到3.51； [0050] 更优选地，所述植物乳杆菌粉剂是由植物乳杆菌CGMCC No.4200和植物乳杆菌CGMCCNO.9488按常规方法制备的粉剂以任意比例混合； [0051] 更优选地，所述植物乳杆菌粉剂是由植物乳杆菌CGMCC No.4200和植物乳杆菌CGMCCNO.9488按常规方法制备的粉剂按质量比3-5:1-3均匀混合； [0052] 3)主发酵：取中草药提取液质量的40-50％、改性膳食纤维质量的10-20％依次加入步骤1)制得的提取液中，于气升式发酵罐混合均匀得混合液，将步骤2)得到的复合菌种活化种子液按质量比以5％接种量接种于混合液，于28-32℃、通气量2-4L/min恒温敞口发酵4-6d,然后以0.6-0.8℃/h的速率升温至35-40℃，继续将步骤2)得到的复合菌种活化种子液按质量比以3％接种量接种，闭罐发酵8-10d，保持罐压0.02-0.04MPa，最后以0.8-1.0℃/h的速率降温至28-32℃，通气量1-3L/min恒温敞口发酵2-4d,得发酵初液； [0053] 4)后发酵：将步骤3)得到的发酵初液、剩余的改性膳食纤维和中草药提取液及果胶分解物、调味料提取液、稳定剂混合，充分搅拌、均匀混合，静置5-10min,然后于室温密闭、避光发酵8-10d，发酵液依次经40目、80目双联过滤器过滤，减压浓缩至固形物含量为20％以上即得枸杞、红枣酵素； [0054] 进一步地，所述发酵液经超声催熟、高压脉冲电场催熟或微波催熟后生物活性更高、稳定性更强、口感更协调、香味更足、更柔和； [0055] 优选地，所述发酵液于室温200-400W、20-30KHz条件超声催熟20-40min,[0056] 优选地，所述发酵液于室温电场强度20-30kV/cm，脉冲时间200-400μs,脉冲频率200-300Hz条件下进行高压脉冲电场催熟20-30min； [0057] 优选地，所述发酵液于功率3-5kW、频率2450MHz、温度30-40℃条件下催熟10-15min。 [0058] 进一步地，步骤5)制得的枸杞、红枣酵素按常规方法制备为酵素浸膏。 [0059] 进一步地，步骤5)制得的枸杞、红枣酵素按常规方法制备为片剂、颗粒剂、粉剂或胶囊剂酵素。 [0060] 进一步地，步骤5)制得的枸杞、红枣酵素经均质、脱气、灌装、杀菌制得定量包装酵素饮料。 [0061] 有益效果： [0062] 本发明枸杞、红枣酵素以多菌种复合菌粉为发酵剂，以枸杞、红枣为主要原料，科学复配改性膳食纤维、果胶分解物、调味料提取液、中草药提取液和酵素稳定剂等多功能辅助原料，全程主要采用超声波清洗、冷冻粉碎、微波辅助高压脉冲电场处理、超声催熟等低温加工技术，克服了现有枸杞、红枣酵素及其制备方法的缺陷，最大限度地保持了枸杞、红枣的天然色泽、风味和口感及活性物质的含量，显著增强了枸杞、红枣酵素的生物稳定性、非生物稳定性和生物活性，减少了化学添加剂的引入，提高了枸杞、红枣的榨汁率和酵素的食品安全性；特别是在发酵液中添加了可提高菌种抗冷、热应激性、免疫性和抗菌性的中草药提取液和多功能改性膳食纤维，增强了复合菌种抗高温及低温应激能力，提高了复合菌种产生生物酶、活性多糖、氨基酸、黄酮类、抗氧化类等多种生物活性物质的能力，同时采用追加接种和分段变温发酵的方式，缩短了菌种菌龄及增殖代数差距，激发了其增殖能力和增殖密度，缩短了萌发时间，提高了酵素生物活性物质的产量和益生菌含量及酵素的益生性，提高了复合菌种对外界环境的适应性，同时功能性植物乳杆菌菌种的选择和科学复配，提高了酵素的抑制有害杂菌的能力和降低了代谢有害物质亚硝酸盐的含量，提高了酵素的食品安全性；更为重要的是在后酵过程添加了可高效维持酵素蛋白分子结构稳定、显著降低酵素活力损失和最大限度地发挥酵素本身活力的稳定剂，与其它功能性原料(改性膳食纤维、果胶分解物、调味料提取液、中草药提取液)科学复配，并经超声催熟缩短了发酵周期(30天左右)，显著提高了酵素的生物活性、生物稳定性、非生物稳定性、口感协调性和食欲性，延长了产品的保质期，最终制得一种生物活性高、稳定性强、口感和风味及食欲性强、保质期长、食用安全的枸杞、红枣酵素。技术效果详见实施例7-11，具体技术原理如下： [0063] 1.本发明的稳定剂是经多年潜心研究，通过大量的科学实验，将海藻糖、葡萄籽原花青素、β-环糊精、谷胱甘肽、金属氯化物、半胱氨酸、牛血清白蛋白科学复配而得到的，可有效防止酵素蛋白分子结构受到外界条件(如温度、压力、氧气、水分、酸碱性、离子浓度、光照)等影响而改变，在常规贮存条件下可较长时间地有效维持酵素蛋白分子结构稳定，显著降低酵素活力损失，并且经人体摄取、吸收后可最大限度地发挥酵素本身的活力，具体技术原理为：其中的海藻糖可有效防止高温和冷冻条件下酵素蛋白中心及外围结构改变而变性；β-环糊精与改性膳食纤维的科学复配，包埋酵素蛋白的作用更加强大，使其免受外界环境因素的影响和侵害；金属氯化物可激活酵素蛋白生物活性经人体吸收后的最大化；将葡萄籽原花青素与谷胱甘肽科学复配于液体酵素中，不仅起到了较强的抗氧化作用，避免了液体酵素中的溶解氧对酵素分子蛋白和其它组分的氧化，更重要的是葡萄籽原花青素有效抑制了酵素蛋白的硝基化反应和非酶糖基化反应，显著提高了酵素蛋白的活力稳定性；牛血清白蛋白是牛血清中的一种球蛋白，包含583个氨基酸残基，可有效防止酵素的分解和非特异性吸附，与其它组分如：半胱氨酸、谷胱甘肽、金属氯化物等科学复配，大大提高了液体酵素活力稳定性。本发明稳定剂的技术效果是科学复配和各组分协同作用效果的综合体现，并非单一组分功能性的简单叠加。 [0064] 2.本发明制备的改性膳食纤维将超声提取、高压脉冲电场提取和生物酶解科学结合，所得改性膳食纤维可溶性纤维素含量高可：1)更容易被益生菌利用，提高了益生菌在人体肠道的生长及繁殖能力，增加了益生菌菌群的种类和数量，降低了人体肠道pH值，改善了人体肠道微生态环境；2)经改性后，纤维素的比表面积增大，网格结构丰富，吸附力增强，螯合、吸附胆固醇和胆汁酸类的有机分子能力更强、有效抑制了人体对他们的吸收；3)离子交换能力增强，对金属元素，特别是重金属元素吸附效果更强，有效防止了人体重金属中毒；4)持水性、膨胀性、增稠性更强且不受酸、碱、盐的影响，增强了枸杞、红枣酵素的液相稳定性；5)调节和维持肠道菌群的定植时间，增强肠道的消化和吸收能力，提高机体免疫力；6)有效促进胃肠蠕动，减缓并消除胃胀、腹胀等不良反应；7)强大的包埋作用可将枸杞、红枣酵素中的活性益生菌、活性酶、抗氧化等营养物质包埋、吸附，防止环境(氧气、温度、光照、水分活度等)因素对产品品质的影响，稳定了枸杞红枣酵素的生物活性，延长了产品的保质期。 [0065] 3.本发明制备的果胶分解物具有天然、柔和适口的酸味和显著的抑菌特性，尤其对大肠杆菌抑制作用最强，同时还具有较强的抗氧化性，浓度达到0.01％时即可作用，对超氧自由基、羟自由基和DPPH自由基都表现出很强的消除作用，当浓度达到1.0％时，消除效果达到100％，所述果胶分解物的科学复配，可有效提高枸杞、红枣酵素的适口性，最主要的是其显著的抑菌特性和抗氧化性避免了酵素中有效成分的氧化和微生物侵害，稳定和提高了枸杞、红枣酵素的生物活性，延长了产品的保质期。 [0066] 4.本发明制备的调味料提取液以天然植物调味料为原料，将微波提取、超声提取和高压脉冲提取等低温技术相结合，最大限度地保留了天然植物调味料的香味物质、抑菌物质、抗氧化物质及其它营养物质，调味料提取液有效成分含量高，香味优雅、柔和协调，无大蒜臭味和生姜味，抑菌性极强，可显著增强食欲，提高人体免疫力，稳定和提高了枸杞、红枣酵素的生物活性，延长产品的保质期。 [0067] 5.本发明制备的中草药提取液科学复配显著提高机体抗冷、热应激性、抗病性和免疫力的中草药为原料，经超声清洗、低温酶解、水提醇提和超声波辅助微波提取而制备的，提取液有效成分含量高，成本低，可有效防止各种炎症的发生，增强机体的免疫力和抗病性，全面促进机体健康，同时可防止枸杞、红枣酵素杂菌侵害，延长产品的保质期。 [0068] 6.本发明枸杞、红枣酵素的制备方法工艺简单、操作方便、生产周期短(30天左右)、对设备要求低，可规模化生产。全程采用低温加工技术，优化了发酵菌种和工艺、采用超声催熟，制备的枸杞、红枣酵素生物活性高、稳定性强、口感和风味及食欲性强、食品安全性高，可提高人体免疫力、抗病能力、耐力和抗疲劳能力、改善肠胃功能、保质期更长，需要说明的是该枸杞、红枣酵素的食用效果是各组分相互协同、相互作用的结果，并非简单的原料功能的叠加，各原料组分的科学复配和提取，产生的效果远远超过各单一组份功能和效果的叠加，具有较好的先进性和实用性。 具体实施方式[0069] 下面通过具体的实施方案叙述本发明。除非特别说明，本发明中所用的技术手段均为本领域技术人员所公知的方法。另外，实施方案应理解为说明性的，而非限制本发明的范围，本发明的实质和范围仅由权利要求书所限定。对于本领域技术人员而言，在不背离本发明实质和范围的前提下，对这些实施方案中的物料成分和用量进行的各种改变或改动也属于本发明的保护范围。 [0070] 主要原料来源如下，其它均为市购： [0071] 1.海藻糖、β-环糊精、半胱氨酸均购自上海权旺生物科技有限公司。 [0072] 2.葡萄籽原花青素购买于河南安阳晶森生物科技有限公司，固体粉末，有效成分：OPC/Polyphenol，Assay OPC95％/polyphenol 90％； [0073] 3..谷胱甘肽购自西安融升生物科技有限公司，为食品用谷胱甘肽，谷胱甘肽含量99％，产品编号：P0200375。 [0074] 4.牛血清白蛋白购自上海如吉生物科技发展有限公司，1g国产cas:9048-46-8。 [0075] 实施例1原料制备 [0076] 1.改性膳食纤维的制备： [0077] 所述改性膳食纤维的制备方法，包括以下步骤：将菊粉、苹果纤维、燕麦纤维、小麦纤维按质量比5:3:2:1.5均匀混合，加入其质量5倍的水，室温300W、40KHz条件超声提取12min,然后在电场强度30kV/cm，脉冲时间400μs,脉冲频率300Hz条件下进行高压脉冲电场提取；用乳酸调节pH值为5.5，加入混合物质量0.2％的混合酶，于50℃酶解35min；酶解液减压浓缩至固形物含量为20％以上，即得改性膳食纤维； [0078] 所述混合酶为木聚糖酶、纤维素酶、漆酶、果胶酶、单宁酶按质量比4:3:3:2:1.5均匀混合。 [0079] 2.果胶分解物的制备： [0080] 所述果胶分解物的制备方法，包括如下步骤：将新鲜的山楂果渣、葡萄皮、苹果渣、甜菜渣分别放入装有1.2％碳酸氢钠溶液的超声波清洗机中于200W、40KHz清洗8min，沥干，切分成相等规格,长、宽为8mm，厚度4mm的片或丁，按质量比6:5:3:3均匀混合，然后于-23℃冷冻20min；立即进行粉碎，粒径为0.5mm；加入粉碎物质量4倍的去离子水，混合均匀，用柠檬酸调节pH值为2.5，室温下在电场强度40kV/cm，脉冲时间500μs,脉冲频率300Hz条件下进行高压脉冲电场处理，接着常压煮沸40min，布袋过滤，滤渣用其质量2倍的滤液常压煮沸50min,布袋过滤，合并滤液，硅藻土过滤，使滤液澄清，在75℃下减压浓缩至固形物含量为8％，迅速冷却至室温，加入浓缩液1.5倍体积的pH值为2.5的95％乙醇，静置25min,使果胶沉淀出来，4000r/min离心8min，回收沉淀，用2倍体积的无水乙醇洗脱，离心，回收沉淀，如此洗脱操作2次，得到的沉淀于50℃真空干燥2.5h,获得果胶，加入果胶质量4.5倍的45℃水，搅拌，均匀混合，保温，用乳酸调节pH值为5，加入0.5U/mL的果胶酶酶解3h,酶解液过滤，滤液于沸水中灭酶12min，冷却至室温，减压浓缩至固形物含量为 20％以上，即得果胶分解物。 [0081] 3.调味料提取液的制备： [0082] 所述调味料提取液的制备方法，包括如下步骤：以重量份数计，准确称取生姜12份，大蒜9份，丁香7份，花椒4份，香叶4份，八角茴香2份，豆蔻2份，分别清洗、沥干，均匀混合，加入混合调味料质量0.5倍的pH值为4.2的果醋润湿5h,于-20℃冷冻1.5h后立即进行粉碎，冷冻料层厚度4cm，粉碎物粒径1.8mm,接着加入粉碎物质量2倍的水，用乳酸调节pH值为4.5，于室温下在电场强度30kV/cm，脉冲时间400μs,脉冲频率250Hz条件下进行高压脉冲电场处理；然后于室温在功率250W条件下进行微波辐照提取18min，其中，微波辐照10s，间隔20s，同时在功率250W,频率35KHz条件下进行超声波辅助提取；充分搅拌提取液，均匀混合，密封，自然发酵45h，过滤，得滤液，滤渣用2倍重量45℃水漂洗3次，漂洗液与滤液合并，即得调味料提取液； [0083] 所述生姜和大蒜无需润湿，切片后直接进行冷冻处理，切片厚度1.8mm。 [0084] 4.中草药提取液的制备： [0085] 所述中草药提取液的制备方法，包括如下步骤：按重量份数计，称取党参18份，黄芪18份，鱼腥草17份，淫羊藿15份，山楂14份，金银花13份，川芎10份，葛根8份，当归8份，胖大海6份，女贞子5份，薏苡仁3份；置盛有0.2％碳酸氢钠溶液的超声波清洗机中于200W、30KHz清洗12min，沥干，将上述中草药粉碎至粒径为2mm以下，置容器中均匀混合并添加5倍重量的水，得混合物料，控制温度80℃保持3h，接着降温至45℃，用乳酸调节pH值为4.0，在功率200W条件下进行微波提取12min，同时在功率250W,频率35KHz条件下进行超声波辅助提取；然后加入混合物料总重量1.0％的复合酶进行酶解，用乳酸调节pH值为 6.2，酶解3h，最后添加混合物料1.7倍重量乙醇和丙醇的混合物，乙醇和丙醇混合的质量比为1:2，控制温度至70℃保持3.5h，过滤，得第一滤液；添加滤渣2倍重量的水，控制温度 90℃保持2h，然后降温至30℃，过滤，得第二滤液；将第一滤液和第二滤液按照质量比3:2合并,均匀混合即得中草药提取液； [0086] 所述复合酶为葡聚糖酶、木聚糖酶、戊聚糖酶、果胶酶按质量比2:2:1.5:1.5均匀混合。 [0087] 以下实施例2-6所使用的改性膳食纤维、果胶分解物、调味料提取液、中草药提取液均为实施例1制备。 [0088] 实施例2 [0089] 一种枸杞、红枣酵素，主要由以下重量份数的原料制备： [0090] 枸杞35份，红枣30份，改性膳食纤维8份，果胶分解物5份，调味料提取液5份，中草药提取液4份，稳定剂1份； [0091] 所述稳定剂由以下重量份数的原料组成：海藻糖8份，葡萄籽原花青素4份，β-环糊精3份，谷胱甘肽3份，金属氯化物1.5份，半胱氨酸0.2份，牛血清白蛋白0.2份； [0092] 所述金属氯化物为氯化锌、氯化钙、氯化钠、氯化镁、氯化铁按质量比3:2:0.4:0.2:0.2均匀混合。 [0093] 制备方法，包括如下步骤： [0094] 1)枸杞、红枣提取液的制备：按照配方比例准确称取各原料，将枸杞、红枣分别放入盛有1.0％碳酸氢钠溶液的超声波清洗机中，于30℃、功率300W、频率40KHz进行超声清洗8min，漂洗、沥干，红枣去核得果肉，与枸杞均匀混合得混合料，然后加入混合料质量13％的质量百分比浓度为4％的淀粉溶液，搅拌均匀，密封，室温复水4h，于-20℃冷冻15min，立即进行粉碎，粉碎物粒径为0.8mm,加入粉碎物质量3倍的水，均匀混合，调整混合物pH值为4.0，最后于室温下电场强度40kV/cm、脉冲时间500μs、脉冲频率300Hz；高压脉冲电场提取25min，同时于200W微波辅助提取，得枸杞、红枣提取液； [0095] 所述淀粉由玉米淀粉、糯玉米淀粉和马铃薯淀粉按质量比1.5:0.4:0.2均匀混合； [0096] 2)复合菌种活化种子液的制备：按重量份计，取枸杞、红枣提取液90份，120BX麦芽汁40份，蜂蜜12份，均匀混合，升温至37℃，边搅拌边溶解12min，保温，加入8份的复合菌粉，活化40min，然后降温至30℃，保温，继续活化30min,即得复合菌种活化种子液，其活菌10 含量为6x10 cfu/ml； [0097] 所述复合菌粉活菌含量为：4x1012cfu/g； [0098] 所述复合菌粉的质量百分比组成为：酵母菌粉20％，益生菌粉：80％； [0099] 所述酵母菌粉重量份数组成为：葡萄酒酵母8份，啤酒酵母5份，面包酵母3份，鲁氏接合酵母3份，异常汉逊酵母2份； [0100] 所述益生菌粉由以下重量份数的粉剂均匀混合而成：植物乳杆菌30份，两岐双岐杆菌30份，乳双歧杆菌20份，嗜热链球菌20份，长双歧杆菌18份，婴儿双岐杆菌18份，青春双岐杆菌15份，保加利亚乳杆菌14份，嗜酸乳杆菌12份，干酪乳杆菌9份，鼠李糖乳杆菌6份； [0101] 所述植物乳杆菌粉剂是由植物乳杆菌CGMCC No.4200和植物乳杆菌CGMCC NO.9488按常规方法制备的粉剂按质量比4:2均匀混合； [0102] 3)主发酵：取中草药提取液质量的45％、改性膳食纤维质量的15％依次加入步骤1)制得的提取液中，于气升式发酵罐混合均匀得混合液，将步骤2)得到的复合菌种活化种子液按质量比以5％接种量接种于混合液，于30℃、通气量3L/min恒温敞口发酵5d,然后以0.7℃/h的速率升温至37℃，继续将步骤2)得到的复合菌种活化种子液按质量比以3％接种量接种，闭罐发酵9d，保持罐压0.03MPa，最后以0.9℃/h的速率降温至30℃，通气量 2L/min恒温敞口发酵3d,得发酵初液； [0103] 4)后发酵：将步骤3)得到的发酵初液、剩余的改性膳食纤维和中草药提取液及果胶分解物、调味料提取液、稳定剂混合，充分搅拌、均匀混合，静置8min,然后于室温密闭、避光发酵9d，发酵液依次经40目、80目双联过滤器过滤，减压浓缩至固形物含量为20％以上即得枸杞、红枣酵素。 [0104] 经上述方法制备的枸杞、红枣酵素活菌含量为：9x1011cfu/ml。 [0105] 实施例3 [0106] 一种枸杞、红枣酵素，主要由以下重量份数的原料制备： [0107] 枸杞25份，红枣20份，改性膳食纤维5份，果胶分解物3份，调味料提取液3份，中草药提取液2份，稳定剂0.5份； [0108] 所述稳定剂由以下重量份数的原料组成：海藻糖5份，葡萄籽原花青素3份，β-环糊精2份，谷胱甘肽2份，金属氯化物1份，半胱氨酸0.1份，牛血清白蛋白0.1份； [0109] 所述金属氯化物为氯化锌、氯化钙、氯化钠、氯化镁、氯化铁按质量比2:1:0.3:0.1:0.1均匀混合。 [0110] 制备方法，包括如下步骤： [0111] 1)枸杞、红枣提取液的制备：按照配方比例准确称取各原料，将枸杞、红枣分别放入盛有0.8％碳酸氢钠溶液的超声波清洗机中，于25℃、功率200W、频率35KHz进行超声清洗5min，漂洗、沥干，红枣去核得果肉，与枸杞均匀混合得混合料，然后加入混合料质量12％的质量百分比浓度为3％的淀粉溶液，搅拌均匀，密封，室温复水3h，于-18℃冷冻10min，立即进行粉碎，粉碎物粒径为0.5mm,加入粉碎物质量2倍的水，均匀混合，调整混合物pH值为3.5，最后于室温下电场强度35kV/cm、脉冲时间400μs、脉冲频率200Hz高压脉冲电场提取20min，同时于200W微波辅助提取，得枸杞、红枣提取液； [0112] 所述淀粉由玉米淀粉、糯玉米淀粉和马铃薯淀粉按质量比1:0.2:0.1均匀混合； [0113] 2)复合菌种活化种子液的制备：按重量份计，取枸杞、红枣提取液80份，120BX麦芽汁30份，蜂蜜10份，均匀混合，升温至35℃，边搅拌边溶解10min，保温，加入5份的复合菌粉，活化30min，然后降温至28℃，保温，继续活化20min,即得复合菌种活化种子液，其活菌10 含量为5x10 cfu/ml； [0114] 所述复合菌粉活菌含量为：3x1012cfu/g； [0115] 所述复合菌粉的质量百分比组成为：酵母菌粉15％，益生菌粉：85％； [0116] 所述酵母菌粉重量份数组成为：葡萄酒酵母5份，啤酒酵母4份，面包酵母2份，鲁氏接合酵母2份，异常汉逊酵母1份； [0117] 所述益生菌粉由以下重量份数的粉剂均匀混合而成：植物乳杆菌25份，两岐双岐杆菌25份，乳双歧杆菌15份，嗜热链球菌15份，长双歧杆菌15份，婴儿双岐杆菌15份，青春双岐杆菌13份，保加利亚乳杆菌12份，嗜酸乳杆菌10份，干酪乳杆菌8份，鼠李糖乳杆菌5份； [0118] 所述植物乳杆菌粉剂是由植物乳杆菌CGMCC No.4200和植物乳杆菌CGMCC NO.9488按常规方法制备的粉剂按质量比3:1均匀混合； [0119] 3)主发酵：取中草药提取液质量的40％、改性膳食纤维质量的10％依次加入步骤1)制得的提取液中，于气升式发酵罐混合均匀得混合液，将步骤2)得到的复合菌种活化种子液按质量比以5％接种量接种于混合液，于28℃、通气量2L/min恒温敞口发酵4d,然后以0.6℃/h的速率升温至35℃，继续将步骤2)得到的复合菌种活化种子液按质量比以3％接种量接种，闭罐发酵8d，保持罐压0.02MPa，最后以0.8℃/h的速率降温至28℃，通气量 1L/min恒温敞口发酵2d,得发酵初液； [0120] 4)后发酵：将步骤3)得到的发酵初液、剩余的改性膳食纤维和中草药提取液及果胶分解物、调味料提取液、稳定剂混合，充分搅拌、均匀混合，静置5min,然后于室温密闭、避光发酵8d，发酵液依次经40目、80目双联过滤器过滤，减压浓缩至固形物含量为20％以上即得枸杞、红枣酵素。 [0121] 经上述方法制备的枸杞、红枣酵素活菌含量为：7x1011cfu/ml。 [0122] 实施例4 [0123] 一种枸杞、红枣酵素，主要由以下重量份数的原料制备： [0124] 枸杞45份，红枣40份，改性膳食纤维10份，果胶分解物8份，调味料提取液8份，中草药提取液6份，稳定剂1.5份； [0125] 所述稳定剂由以下重量份数的原料组成：海藻糖10份，葡萄籽原花青素5份，β-环糊精5份，谷胱甘肽4份，金属氯化物2份，半胱氨酸0.3份，牛血清白蛋白0.3份； [0126] 所述金属氯化物为氯化锌、氯化钙、氯化钠、氯化镁、氯化铁按质量比4:3:0.5:0.3:0.3均匀混合。 [0127] 制备方法，包括如下步骤： [0128] 1)枸杞、红枣提取液的制备：按照配方比例准确称取各原料，将枸杞、红枣分别放入盛有1.2％碳酸氢钠溶液的超声波清洗机中，于35℃、功率400W、频率45KHz进行超声清洗10min，漂洗、沥干，红枣去核得果肉，与枸杞均匀混合得混合料，然后加入混合料质量15％的质量百分比浓度为5％的淀粉溶液，搅拌均匀，密封，室温复水5h，于-22℃冷冻20min，立即进行粉碎，粉碎物粒径为1mm,加入粉碎物质量4倍的水，均匀混合，调整混合物pH值为4.5，最后于室温下电场强度45kV/cm、脉冲时间600μs、脉冲频率400Hz高压脉冲电场提取30min，同时于200W微波辅助提取，得枸杞、红枣提取液； [0129] 所述淀粉由玉米淀粉、糯玉米淀粉和马铃薯淀粉按质量比2:0.6:0.3均匀混合； [0130] 2)复合菌种活化种子液的制备：按重量份计，取枸杞、红枣提取液100份，120BX麦芽汁50份，蜂蜜15份，均匀混合，升温至40℃，边搅拌边溶解15min，保温，加入10份的复合菌粉，活化50min，然后降温至32℃，保温，继续活化40min,即得复合菌种活化种子液，其10 活菌含量为7x10 cfu/ml； [0131] 所述复合菌粉活菌含量为：5x1012cfu/g； [0132] 所述复合菌粉的质量百分比组成为：酵母菌粉25％，益生菌粉：75％； [0133] 所述酵母菌粉重量份数组成为：葡萄酒酵母10份，啤酒酵母6份，面包酵母4份，鲁氏接合酵母4份，异常汉逊酵母3份； [0134] 所述益生菌粉由以下重量份数的粉剂均匀混合而成：植物乳杆菌35份，两岐双岐杆菌35份，乳双歧杆菌25份，嗜热链球菌25份，长双歧杆菌20份，婴儿双岐杆菌20份，青春双岐杆菌18份，保加利亚乳杆菌15份，嗜酸乳杆菌15份，干酪乳杆菌10份，鼠李糖乳杆菌8份； [0135] 所述植物乳杆菌粉剂是由植物乳杆菌CGMCC No.4200和植物乳杆菌CGMCC NO.9488按常规方法制备的粉剂按质量比5:3均匀混合； [0136] 3)主发酵：取中草药提取液质量的50％、改性膳食纤维质量的20％依次加入步骤1)制得的提取液中，于气升式发酵罐混合均匀得混合液，将步骤2)得到的复合菌种活化种子液按质量比以5％接种量接种于混合液，于32℃、通气量4L/min恒温敞口发酵6d,然后以0.8℃/h的速率升温至40℃，继续将步骤2)得到的复合菌种活化种子液按质量比以3％接种量接种，闭罐发酵10d，保持罐压0.04MPa，最后以1.0℃/h的速率降温至32℃，通气量 3L/min恒温敞口发酵4d,得发酵初液； [0137] 4)后发酵：将步骤3)得到的发酵初液、剩余的改性膳食纤维和中草药提取液及果胶分解物、调味料提取液、稳定剂混合，充分搅拌、均匀混合，静置10min,然后于室温密闭、避光发酵10d，发酵液于室温300W、25KHz条件超声催熟30min,依次经40目、80目双联过滤器过滤，减压浓缩至固形物含量为20％以上即得枸杞、红枣酵素。 [0138] 经上述方法制备的枸杞、红枣酵素活菌含量为：8x1010cfu/ml。 [0139] 实施例5 [0140] 一种枸杞、红枣酵素片，主要由以下重量份数的原料制备： [0141] 枸杞25份，红枣40份，改性膳食纤维5份，果胶分解物8份，调味料提取液3份，中草药提取液6份，稳定剂0.5份； [0142] 所述稳定剂由以下重量份数的原料组成：海藻糖5份，葡萄籽原花青素5份，β-环糊精2份，谷胱甘肽4份，氯化锌1份，半胱氨酸0.3份，牛血清白蛋白0.1份； [0143] 制备方法，包括如下步骤： [0144] 1)枸杞、红枣提取液的制备：按照配方比例准确称取各原料，将枸杞、红枣分别放入盛有0.8％碳酸氢钠溶液的超声波清洗机中，于35℃、200W、频率45KHz进行超声清洗5min，漂洗、沥干，红枣去核得果肉，与枸杞均匀混合得混合料，然后加入混合料质量15％的质量百分比浓度为3％的淀粉溶液，搅拌均匀，密封，室温复水5h，于-18℃冷冻20min，立即进行粉碎，粉碎物粒径为0.5mm,加入粉碎物质量4倍的水，均匀混合，调整混合物pH值为 3.5，最后于室温下电场强度35kV/cm、脉冲时间600μs、脉冲频率200Hz高压脉冲电场提取 30min，同时于200W微波辅助提取，得枸杞、红枣提取液； [0145] 所述淀粉由玉米淀粉、糯玉米淀粉和马铃薯淀粉按质量比1:0.6:0.1均匀混合； [0146] 2)复合菌种活化种子液的制备：按重量份计，取枸杞、红枣提取液80份，120BX麦芽汁50份，蜂蜜10份，均匀混合，升温至40℃，边搅拌边溶解10min，保温，加入10份的复合菌粉，活化30min，然后降温至32℃，保温，继续活化20min,即得复合菌种活化种子液，其活10 菌含量为5x10 cfu/ml； [0147] 所述复合菌粉活菌含量为：3x1012cfu/g； [0148] 所述复合菌粉的质量百分比组成为：葡萄酒酵母菌粉20％，植物乳杆菌(CGMCC No.4200)粉80％； [0149] 3)主发酵：取中草药提取液质量的40％、改性膳食纤维质量的20％依次加入步骤1)制得的提取液中，于气升式发酵罐混合均匀得混合液，将步骤2)得到的复合菌种活化种子液按质量比以5％接种量接种于混合液，于28℃、通气量4L/min恒温敞口发酵4d,然后以0.8℃/h的速率升温至35℃，继续将步骤2)得到的复合菌种活化种子液按质量比以3％接种量接种，闭罐发酵10d，保持罐压0.02MPa，最后以1.0℃/h的速率降温至28℃，通气量 3L/min恒温敞口发酵2d,得发酵初液； [0150] 4)后发酵：将步骤3)得到的发酵初液、剩余的改性膳食纤维和中草药提取液及果胶分解物、调味料提取液、稳定剂混合，充分搅拌、均匀混合，静置5min,然后于室温密闭、避光发酵10d，发酵液依次经40目、80目双联过滤器过滤，然后经减压浓缩至固形物含量30％以上，真空冷冻干燥、干法造粒，收集15-50目的颗粒，加入硬脂酸镁混合后得到可直接压片的原料，投入压片机压片，调节压力为30kn，即得枸杞、红枣酵素片。 [0151] 经上述方法制备的枸杞、红枣酵素片活菌含量为8x1012cfu/g。 [0152] 实施例6 [0153] 一种瓶装枸杞、红枣酵素饮料，主要由以下重量份数的原料制备： [0154] 枸杞45份，红枣20份，改性膳食纤维10份，果胶分解物3份，调味料提取液8份，中草药提取液2份，稳定剂1.5份； [0155] 所述稳定剂由以下重量份数的原料组成：海藻糖10份，葡萄籽原花青素3份，β-环糊精5份，谷胱甘肽2份，氯化钙2份，半胱氨酸0.1份，牛血清白蛋白0.3份； [0156] 制备方法，包括如下步骤： [0157] 1)枸杞、红枣提取液的制备：按照配方比例准确称取各原料，将枸杞、红枣分别放入盛有1.2％碳酸氢钠溶液的超声波清洗机中，于25℃、功率400W、频率35KHz进行超声清洗10min，漂洗、沥干，红枣去核得果肉，与枸杞均匀混合得混合料，然后加入混合料质量12％的质量百分比浓度为5％的淀粉溶液，搅拌均匀，密封，室温复水3h，于-22℃冷冻10min，立即进行粉碎，粉碎物粒径为1mm,加入粉碎物质量2倍的水，均匀混合，调整混合物pH值为4.5，最后于室温下电场强45kV/cm、脉冲时间400μs、脉冲频率400Hz高压脉冲电场提取20min，同时于200W微波辅助提取，得枸杞、红枣提取液； [0158] 所述淀粉由玉米淀粉、糯玉米淀粉和马铃薯淀粉按质量比2:0.2:0.3均匀混合； [0159] 2)复合菌种活化种子液的制备：按重量份计，取枸杞、红枣提取液100份，120BX麦芽汁30份，蜂蜜15份，均匀混合，升温至35℃，边搅拌边溶解15min，保温，加入5份的复合菌粉，活化50min，然后降温至28℃，保温，继续活化40min,即得复合菌种活化种子液，其活10 菌含量为7x10 cfu/ml； [0160] 所述复合菌粉活菌含量为：5x1012cfu/g； [0161] 所述复合菌粉的质量百分比组成为：啤酒酵母菌粉15％，植物乳杆菌(CGMCC NO.9488)粉85％； [0162] 3)主发酵：取中草药提取液质量的50％、改性膳食纤维质量的10％依次加入步骤1)制得的提取液中，于气升式发酵罐混合均匀得混合液，将步骤2)得到的复合菌种活化种子液按质量比以5％接种量接种于混合液，于32℃、通气量2L/min恒温敞口发酵6d,然后以0.6℃/h的速率升温至40℃，继续将步骤2)得到的复合菌种活化种子液按质量比以3％接种量接种，闭罐发酵8d，保持罐压0.04MPa，最后以0.8℃/h的速率降温至32℃，通气量 1L/min恒温敞口发酵4d,得发酵初液； [0163] 4)后发酵：将步骤3)得到的发酵初液、剩余的改性膳食纤维和中草药提取液及果胶分解物、调味料提取液、稳定剂混合，充分搅拌、均匀混合，静置10min,然后于室温密闭、避光发酵8d，发酵液于功率4kW、频率2450MHz、温度35℃条件下催熟12min依次经40目、80目双联过滤器过滤，最后经均质、真空脱气、定量灌装、封盖、杀菌、检验即得瓶装枸杞、红枣酵素饮料。 [0164] 实施例7本发明枸杞、红枣酵素的稳定性试验 [0165] 以本发明实施例2制备的枸杞、红枣酵素与市售相同生产日期的同规格枸杞、红枣酵素液200mL为试验对象，无菌操作，分别加入已知酶活力的糖化酶15mL,于0℃和40℃条件下储存12个月，采用《GB8726-2006食品添加剂糖化酶制剂》中检测方法测定枸杞、红枣酵素液的糖化酶酶活力，计算酶活损失率，酶活损失率是指实际检测的酶活力与已知酶活力的差值占已知酶活力的百分率，结果如表1 [0166] 表1 储存期酶活力损失率 [0167] [0168] 以上结果显示：在0℃和40℃条件下储存12个月，本发明枸杞、红枣酵素比市售枸杞、红枣酵素液糖化酶酶活损失分别降低24％和98％，具有优良的温度储存性，酶活力非常稳定。同时也说明本发明的枸杞、红枣酵素与市售同类产品相比其生物活性损失低、活力更高、更加稳定，保质期更长，具有优良的环境适应性和贮存性。 [0169] 需要说明的是：本发明实施例3-6制备的枸杞、红枣酵素同样具有上述实验效果，各实施例之间及与上述实验效果差异性不大。 [0170] 实施例8本发明枸杞、红枣酵素益生性试验 [0171] 将本发明实施例2制备的枸杞、红枣酵素，用无菌水制备成活菌数为2×1010CFU/mL的益生菌溶液，于4℃保存备用； [0172] 1、取保存好的10mL益生菌溶液注入到试管1中，采用十倍逐级稀释至10-8，取1mL稀释液在平板上，将灭菌后冷却至45℃的MRS琼脂培养基倾注在平板(灭菌)上，迅速摇匀。再将装有10mL益生菌溶液的试管2置于70-80℃水浴锅中加热15-25min，取加热后的-8益生菌溶液进行十倍逐级稀释至10 ，取1mL稀释液在平板上，将灭菌后冷却至45℃的MRS琼脂培养基倾注在平板(灭菌)上并迅速摇匀。最后将加热前和加热后的平板均在35℃条件下培养24h，计算加热前后的数量。 [0173] 结果表明，活菌存活率达到了88％。 [0174] 2、模拟胃液及肠液的耐受试验：取100g/L的盐酸16.4mL加蒸馏水稀释，使pH值分别为1.5、2.5和3.5，取100mL稀盐酸溶液，分别加入1g胃蛋白酶，使其充分溶解，得模拟胃液，微孔滤膜除菌(0.22μm)备用。取磷酸二氢钾6.8g，加水500mL使溶解，用0.1moL/L氢氧化钠溶液调节pH值至6.8；另取胰蛋白酶10g，加水100mL使溶解，将两液混合后，加水稀释至1000ml，得模拟肠液，微孔滤膜除菌(0.22μm)备用。取1mL保存好的益生菌溶液加入到9mL的模拟胃液中(即十倍逐级稀释)，并迅速在振荡器上充分混匀，然后置于30-45℃静置培养2-4h。分别在1h、2h、3h、4h的时候取出培养液并立即计数残存活菌数，与原活菌数进行比较，结果表明，活菌存活率为98％。然后取在人工胃液中消化不同时间的培养液各1mL，分别接种于9mL pH值为6.8的人工肠液中，置于30-45℃静置培养2-4h，并分别在0、3、6、24h取样，测定其活菌数，与原活菌数进行比较，结果表明活菌存活率为99％。 [0175] 3、模拟胆盐的耐受试验：用胰液素制成1g/L的溶液，并在溶液中加入0.8％的猪胆盐，用10％的NaOH调整pH为8.0，然后用0.45μm微滤膜过滤并除菌。将0.5mL保存好的益生菌溶液接种到4.5mL模拟胆盐中，培养24h后得到培养液，计数残存的活菌数。将培-8养液在灭菌生理盐水中十倍逐级稀释至10 ，并用MRS倾注，然后置于35℃静置培养24h。 结果表明活菌存活率为99％。 [0176] 以上试验结果表明，本发明枸杞、红枣酵素中的益生菌益生性(耐热性、耐pH性、耐胆盐)较强，非常适合人体胃肠环境，在模拟胃肠环境中存活率大，可有效改善胃肠功能。 [0177] 需要说明的是：本发明实施例3-5制备的枸杞、红枣酵素及其固体同样具有上述实验效果，各实施例之间及与上述实验效果差异性不大。 [0178] 实施例9本发明枸杞、红枣酵素小鼠肠道性能试验 [0179] 将本发明实施例2制备的枸杞、红枣酵素，用无菌水制备成活菌数为2×1010cfu/mL的益生菌溶液，于4℃保存备用； [0180] 选取普通昆明小白鼠60只，雌雄各半，18-20g，常规词养。从中随机挑选40只，每天早晨9:00灌胃盐酸林可霉素0.2mL(20mg)/只，其它作为对照组，每天同一时间灌胃等量灭菌生理盐水，连续一周，制备肠道菌群失调的小鼠模型。模型组小鼠饮食下降，未出现死亡和明显的腹泻现象，排软粪，外形正常含水分较多，垫料潮湿。将40只肠道菌群失调小10 鼠，随机分为2组，一组20只作为治疗组，每天灌胃保存好的益生菌溶液0.5ml(2×10 cfu/ml)/只，另20只作为自然恢复组，每天同一时间灌胃等量灭菌生理盐水，连续两周。整个试验期21天，每天观察小白鼠的生长和排便情况，于第8、21天对枸杞、红枣酵素治疗组和自然恢复组的小鼠进行称重，计算各组体重平均增长率，结果如表2；每5天测各组小鼠粪便大肠杆菌数量，计算平均数，结果如表3。取小鼠粪便约0.1g，于无菌操作台内加入3粒玻璃珠(以0.1g粪样加0.5mL稀释液)，稀释并接种麦康凯琼脂培养基，计算每克湿便中的大肠杆菌数。 [0181] 表2 小鼠增重情况 [0182]分组 平均始重(g/只) 平均末重(g/只) 平均增长率(％) 自然恢复组 20.69±1.33 27.34±1.59 32.14a 治疗组 20.41±1.45 35.68±1.62 74.82b [0183] 表3 小鼠粪便中大肠杆菌数的情况 [0184] [0185] 枸杞、红枣酵素治疗组小鼠体重平均增长率(74.82％)显著高于自然恢复组(32.14％)；饲喂溶液后肠道大肠杆菌数量显著下降，降低86.06％，显著低于自然恢复组(24.78％)，表明本发明枸杞、红枣酵素中的益生菌在小白鼠肠道内迅速定植，形成优势菌群，并有效抑制大肠杆菌等病原菌的生长繁殖，并且定植时间长，持续、有效改善了肠道性能。 [0186] 需要说明的是：本发明实施例3-5制备的枸杞、红枣酵素及固体饮料同样具有上述实验效果，各实施例之间及与上述实验效果差异性不大。 [0187] 实施例10本发明瓶装枸杞、红枣酵素的感官品评试验 [0188] 邀请24名人员对本发明实施例6制备的瓶装枸杞、红枣酵素饮料与市售两种瓶装枸杞、红枣酵素饮料进行品评，感官打分，其中专业和非专业人员各12名，专业人员青年、中年、老年各4名，男女各半，非专业人员少年、青年、中年、老年各3名，男女各半；打分包括外观(20分)、质地(25分)、风味(30分)、口感(25分)四个方面，打分人员独立进行，互不影响，以保证品评结果准确。对品评结果进行了统计，均分值取近似值，保留整数，具体见表4： [0189] 表4 感官品评统计结果 [0190] [0191] 注：同一行内标不同小写字母表示差异显著(P＜0.05)，标不同大写字母表示差异极显著(P＜0.01)，标有相同字母表示差异不显著(P＞0.05)。 [0192] 以上结果表明，本发明制备的瓶装枸杞、红枣酵素饮料从外观、质地、风味和口感任何一方面都要明显优于市售瓶装枸杞、红枣酵素，特别是外观、风味和口感极好，同时也适合不同年龄段、不同消费层次的消费者食用。 [0193] 需要说明的是：本发明实施例2-5制备的枸杞、红枣酵素产品同样具有上述实验效果，各实施例之间及与上述实验效果差异性不大。 [0194] 实施例11本发明枸杞、红枣酵素对机体免疫力的影响 [0195] 1实验目的 [0196] 通过运动耐力测试(小鼠游泳试验)，验证本发明枸杞、红枣酵素的提高免疫力、抗疲劳作用。 [0197] 2实验材料与试剂 [0198] 2.1供试药物： [0199] 市售枸杞、红枣酵素(G1)；市售枸杞、红枣酵素(G2)；本发明实施例2-6制备的枸杞、红枣酵素(G3-G7)。 [0200] 2.2试剂： [0201] 肝/肌糖原测试盒，购自南京建成生物制品研究所；浓硫酸(AR)，南京化学试剂有限公司；生理盐水，山东长富洁晶药业有限公司。 [0202] 3.实验动物 [0203] ICR小鼠，♂，清洁级，体重18-22g，由宁夏医科大学比较医学中心提供，实验期间小鼠自由饮食。 [0204] 4.主要仪器 [0205] 铝制游泳箱(50cm×50cm×40cm)，铅丝，低温高速离心机：5804R型，Eppendrof公司；水浴锅：DK-S26型，上海精宏实验设备有限公司；电子称：BS224S型，Sartorius公司；秒表，温度计 [0206] 5.实验分组 [0207] 5.1剂量分组及受试样品给予时间：随机将小鼠分为8组，每组10只，第1组至第7组分别给G1～G7的药物，第8组为空白对照组，给予等体积的双蒸水，每组每日均灌胃1次，灌胃体积为0.2ml/10g，连续给予受试样品30天。 [0208] 5.2样品配制：第1组至第7组：称取2.25g药物样品，用蒸馏水配至150ml；空白对照组(第8组)：双蒸水150ml。 [0209] 6.实验方法 [0210] 6.1负重游泳实验末次给药30min后，置小鼠于游泳箱中，水深不少于30cm，水温25±1℃，鼠尾根部负荷5％体重的铅皮，记录小鼠游泳开始至死亡的时间，作为小鼠游泳时间。 [0211] 6.2小鼠血清尿素测定末次给药30min后，在温度为30℃的水中不负重游泳90min,休息60min后摘眼球采血0.5mL(不加抗凝剂),置4℃冰箱3h,血凝固后2000r/min离心15min,取血清送宁夏医科大学附属医院检验科检测。 [0212] 6.3肝糖原的测定末次给药30min后，在温度为25±1℃的水中不负重游泳90min，颈椎脱臼处死小鼠，用生理盐水洗净，并用滤纸吸干水分后，准确称取肝脏100mg，肝糖原检测试剂盒检测小鼠肝糖原含量。 [0213] 6.4血乳酸的测定末次给药30min后采血，然后不负重在温度为30℃的水中游泳10min后停止。乳酸仪测定方法：分别在游泳前、游泳后、游泳后休息20min后各采血20μL加入40μL破膜液中，立即充分振荡破碎细胞用乳酸仪测定。(血乳酸曲线下面积＝5×(游泳前血乳酸值+3×游泳后0min的血乳酸值+2×游泳后20min的血乳酸值) [0214] 7.观察指标负重游泳时间，血乳酸、尿素、肝糖原值 [0215] 8.统计方法实验数据用 表示，采用t检验进行组间比较 [0216] 9.实验结果 [0217] 9.1本发明枸杞、红枣酵素对小鼠体重的影响 [0218] 各组小鼠在给予G1～G7药物后，前、中，后期体重分别见下表所示,各组小鼠的初始体重和增重体重与对照组比较均无统计学差异(P＞0.05)，表明G1～G7药物均无明显的毒性。实验结果详见表5。 [0219] 表5 负重游泳实验小鼠的初始体重、中期体重和结束体重 [0220] [0221] 9.2本发明枸杞、红枣酵素对小鼠负重游泳时间的影响 [0222] 经口给予小鼠G1～G7药物后，G1～G2药物与空白对照组比较，可以明显延长小鼠负重游泳时间，具有显著性差异(P＜0.05)，本发明枸杞、红枣酵素G3～G7药物与空白对照组比较，可以显著延长小鼠负重游泳时间，具有极显著性差异(P＜0.01)，且明显优于G1～G2药物。结果详见表6。 [0223] 表6 枸杞、红枣酵素对小鼠负重游泳时间的影响 [0224] [0225] “*”p<0.05vs空白对照； [0226] “**”p<0.01vs空白对照； [0227] 9.3本发明枸杞、红枣酵素对小鼠运动前后血乳酸的影响 [0228] 经口给予小鼠本发明的枸杞、红枣酵素后，本发明枸杞、红枣酵素G3～G7药物对小鼠运动后血乳酸曲线下面积与对照组比较有统计学差异(P＜0.05)，G1～G2药物组小鼠血乳酸曲线下面积与对照组比较虽有所降低，但并无统计学差异(P＞0.05)。结果见表7。 [0229] 表7 本发明枸杞、红枣酵素对小鼠运动前后血乳酸水平的影响 [0230] [0231] “*”p<0.05vs空白对照； [0232] 9.4本发明枸杞、红枣酵素对小鼠肝糖原的影响 [0233] 经口给予小鼠G1～G7药物后，G1～G2药物与空白对照组比较，小鼠肝糖原含量均有明显的升高，具有显著性差异(P＜0.05)，本发明枸杞、红枣酵素G3～G7药物与与空白对照组比较，小鼠肝糖原含量均有明显的升高，具有极显著性差异(P＜0.01)，且明显优于G1～G2药物。结果详见表8。 [0234] 表8 本发明枸杞、红枣酵素对小鼠肝糖原含量的影响 [0235] [0236] [0237] “*”p<0.05vs空白对照； [0238] “**”p<0.01vs空白对照； [0239] 9.5本发明枸杞、红枣酵素对小鼠血清尿素的影响 [0240] 经口给予小鼠G1～G7药物后，G1～G2药物组与空白对照组比较，小鼠运动后血清尿素含量均有明显的降低，具有显著性差异(P＜0.05)，本发明枸杞、红枣酵素G3～G7药物与与空白对照组比较，小鼠运动后血清尿素含量均有明显的降低，具有极显著性差异(P＜0.01)，且明显优于G1～G2药物。结果详见表9。 [0241] 表9 本发明枸杞、红枣酵素对小鼠血清尿素含量的影响 [0242] |
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