益生素制剂和使用方法 |
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| 申请号 | CN201080018134.6 | 申请日 | 2010-02-16 | 公开(公告)号 | CN102404990A | 公开(公告)日 | 2012-04-04 |
| 申请人 | 里特制药股份有限公司; | 发明人 | A·J·瑞特; D·萨瓦诺; D·巴恩斯; T·克莱恩哈默; | ||||
| 摘要 | 本 发明 提供 治疗 乳糖不耐受相关症状和总体上改善胃肠道健康状况的方法和组合物。本发明描述了通过将益生素组合物给予需要的对象，任选与有效量的益生 微 生物 联用，改善总体胃肠道健康状况或减轻乳糖不耐受症状的方法和组合物。 | ||||||
| 权利要求 | 1.一种在经历一种或多种乳糖不耐受症状的对象中提高乳糖耐受性的方法，该方法包括在预定天数中每天将一种包含GOS的组合物给予对象。 |
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| 说明书全文 | 益生素制剂和使用方法[0001] 交叉参考 [0002] 本申请要求2009年2月24日提交的美国临时申请号61/155,150和2009年10月13日提交的美国临时申请号61/272,622的权益，其通过引用全文纳入本文。 [0003] 发明背景 [0004] 根据多种来源，世界上有3千万至5千万人不耐受乳糖。在上世纪六十和七十年代，据报道世界上70％的成年人不耐受乳糖。1995年，据报道世界上75％成年人和美国 25％的成年人被归类为乳糖不耐受。1994年，据报道75％的非洲裔美国人和原住民美国 人，以及90％的亚裔美国人发生乳糖不耐受。也有报道称，30％的成年人(大部分是欧洲人 在北美的后代)在成年后已经适应了高乳糖酶活性。研究表明，这种适应是基因控制的、永 久的并且与世界上这些区域长期使用牛奶和奶制品的传统有关。 [0005] 乳糖不耐受是无法消化大量乳糖，而乳糖是所有哺乳动物的乳汁和乳制品中主要的天然糖。乳糖不耐受是因缺乏乳糖酶所致，这种酶是小肠内壁细胞产生的并且是消化乳 糖所必需的。乳糖酶能将乳糖这种二糖降解成两种更简单的糖形式，称为葡萄糖和半乳糖， 然后将这两种糖跨细胞膜转运并吸收到血流中。如果不存在乳糖酶或含量不足，那么过多 未消化的乳糖会通过小肠进入大肠，并通过结肠中的细菌(“结肠微生物群”、“肠微生物 群”、“肠道微生物群”或“共生肠微生物群”)在大肠中发酵。乳糖在大肠中发酵会产生氢 气和甲烷，进而导致气胀、排气和腹泻。这些症状由肠道内非常低的乳糖酶活性导致且在不 耐受乳糖的对象中出现。并非所有乳糖酶缺陷的对象都会发生与乳糖不耐受相关的常见症 状，但有这些症状说明其不耐受乳糖。 [0006] 如果对象怀疑他或她不耐受乳糖，对他或她而言限制饮食可能有害，因为这种限制可能导致营养缺乏或无法检测更严重的疾病。牛奶和其它乳制品是美国人基本饮食中的 主要营养来源。牛奶中的主要营养是蛋白质、钙、核黄素、维生素A和维生素D。钙是推荐的 日常维生素和矿物质摄入的重要组成部分，其中的任何缺陷都可能导致健康风险，如骨质 疏松、高血压或骨密度低。 [0008] 通常，人们会因为主要或次要原因发生乳糖不耐受。主要原因是开始缺乏乳糖酶，这被认为是永久性的状况。这一状况在断奶期后不同时间段开始出现。主要原因也是遗传 决定的。次要原因通常是由破坏乳糖酶有活性的小肠内壁的另一疾病或事件引起的暂时性 状况。这种暂时性状况可能由急性腹泻、疾病、感染寄生虫、克罗恩病、乳糜泻、胃肠道手术 或摄入某些药物所致。 [0009] 除主要和次要原因以外，某些民族和种族人群更倾向于发生乳糖不耐受。在这些人群中，社会和文化上的习惯和态度会影响乳糖不耐受。在某些民族和种族人群，包括欧洲 起源、非洲平原起源和西伯利亚大草原起源的人群中，乳糖活性也会随年龄降低。最可能具 有或发生乳糖不耐受的人包括亚洲人、中东人、北美人、非洲人和正统拉美人。 [0010] 发明概述 [0011] 在一个方面，提供了一种在经历一种或多种乳糖不耐受症状的对象中提高乳糖耐受性的方法，该方法包括在预定天数中每天将一种包含GOS的组合物给予对象。在一个实 施方式中，所述组合物还包含益生菌。在另一实施方式中，所述组合物不含益生菌。在另一 实施方式中，与给药的最后一天相比，在给药第一天所述组合物包含较低剂量的GOS。在另 一实施方式中，与给药的最后一天相比，在给药第一天所述组合物包含相同剂量的GOS。在 另一实施方式中，所述方法包括每天给予所述组合物一次。在另一实施方式中，所述方法包 括每天给予所述组合物两次。在另一实施方式中，所述方法包括每天给予所述组合物三次。 在另一实施方式中，所述包含GOS的组合物以粉末、片剂或胶囊的形式提供。在另一实施方 式中，在不进食的情况下给予所述包含GOS的组合物。在另一实施方式中，在进食的情况下 给予所述包含GOS的组合物。在另一实施方式中，将所述包含GOS的组合物与早餐和晚餐 一起给予。在另一实施方式中，将所述包含GOS的组合物与早餐、午餐和晚餐一起给予。在 另一实施方式中，所述一种或多种症状包括肠胃气胀、胃灼热、肠胃不适、恶心、气胀、鼓胀、腹泻、腹痛、腹部绞痛或呕吐。在另一实施方式中，该组合物总重的至少约96％是GOS。 [0012] 在另一方面，提供一种提高对象的乳糖耐受性的组合物，其包含约0.1-2克GOS组合物，其中所述GOS组合物含有约96％重量的GOS。在另一实施方式中，所述组合物还包含 药学上可接受的赋形剂。在另一实施方式中，所述组合物包含在胶囊中。在另一实施方式 中，所述胶囊是明胶胶囊。在另一实施方式中，所述明胶胶囊包括含有GOS的粘性糖浆或液 体。在另一实施方式中，所述糖浆不含抗氧化剂或防腐剂。在另一实施方式中，所述组合物 包含在片剂中。在另一个实施方式中，所述组合物还包含益生菌。在另一实施方式中，所述 GOS组合物包含肠溶衣。 [0013] 在另一方面，提供一种包含约0.1-2克GOS组合物的GOS口服剂型，其中所述GOS组合物是包装在明胶胶囊中的粘性糖浆或液体。在一个实施方式中，所述GOS组合物包含 约80％重量的GOS。在另一实施方式中，所述GOS组合物包含约96％重量的GOS。在另一 个实施方式中，所述GOS组合物还包含益生菌。在另一实施方式中，所述GOS组合物包含肠 溶衣。 [0014] 在另一方面，提供一种口服GOS剂型，其包含控释片剂或控释胶囊中的GOS组合物。在一个实施方式中，所述控释发生在肠道内。在另一实施方式中，所述GOS组合物包含 肠溶衣。在另一实施方式中，所述控释发生在低位肠道。在另一个实施方式中，所述组合物 还包含益生菌。在一个实施方式中，所述GOS组合物包含肠溶衣。 [0015] 通过引用纳入本发明 [0019] 图1说明乳果糖的化学结构。 [0020] 图2说明棉子糖的化学结构。 [0021] 图3说明水苏糖的化学结构。 [0022] 图4说明菊糖的化学结构。 [0023] 图5说明采用70％GOS组合物的治疗方案。 [0024] 图6说明采用70％GOS组合物的另一治疗方案。 [0025] 图7说明采用90％GOS组合物的治疗方案。 [0026] 图8说明采用93％GOS组合物的另一治疗方案。 [0027] 图9说明采用95％GOS组合物的治疗方案。 [0028] 图10表示DP为2、3和4的不同GOS的非限制性例子。 [0029] 图11表示含有高纯度GOS的样品的HPLC色谱图。 [0030] 图12表示在2％GOS1(95％)或葡萄糖上嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)NCFM的生长。 [0031] 图13A和13B表示在纯化步骤之前(13A)和之后(13B)，本发明GOS组合物的HPLC谱图。 [0032] 图14表示嗜酸乳杆菌(L.acidophilus)、乳双歧杆菌(Bifidobacteriumlactis)、短双歧杆菌(Bifidobacterium Breve)和长双歧杆菌(Bifidobacterium longum) 在GOS1(95％)上的比较生长。 [0033] 图15表 示 长 双歧 杆 菌(B.longum)、假 长 双 歧 杆菌 (Bifidobacteriumpseudolongum)、动物 双 歧 杆 菌(Bifidobacterium animalis)和 青 春 双 歧 杆 菌 (Bifidobacterium adolescentis)在葡萄糖和GOS1(95％)上的比较生长。 [0034] 图16表示假长双歧杆菌(B.pseudolongum)NCK20383在葡萄糖、乳糖、GOS1(95％)和GOS2(90％)上的比较生长。 [0035] 图17表示四种双歧杆菌菌株在葡萄糖、GOS1(95％)、GOS2(90％)和乳糖上的比较生长。 [0037] 发明详述 [0038] I.概述 [0039] 本文描述了可用于在需要的对象中减轻乳糖不耐受症状和用于改善总体胃肠道(GI)健康状况的方法、组合物、药盒和商业方法。乳糖不耐受症状包括排气、胃灼热、肠胃 不适、气胀、肠胃气胀、腹泻、腹痛、腹部绞痛、恶心或呕吐。与GI有关的较轻微的消化问题 包括偶发性气胀、腹泻、便秘、排气、胃灼热或肠胃不适。本文所述的方法和组合物可用于， 例如，通过结肠适应减轻或消除这些症状中的一种或多种。存在乳糖吸收不良时，也常常出 现果糖和山梨糖醇吸收不良。本文所述的方法和组合物也可用于减轻或消除糖或碳水化合 物，如乳糖、果糖或山梨糖醇的吸收不良。 [0040] 在本文所述方法的一个方面，在病症治疗结束后，持续减轻或消除所述症状。因此，本文所述方法不需要以连续方式使用，而是可以在具体时间段使用，然后停止使用。在 所述方法的另一方面，减轻或消除症状可以是暂时的，并且经过一段时间后，可以在症状重 新出现时给予治疗以维持本文所述方法的效果。在所述方法的另一方面，可以有规律地使 用本文所述方法，以减轻乳糖不耐受症状和改善整体胃肠道(GI)健康状况。 [0041] 另一方面，提供了包含益生素组合物的组合物和方法，它们可用于治疗乳糖不耐受、减轻乳糖不耐受症状和改善整体胃肠道(GI)健康状况。在一个实施方式中，益生素组 合物包含一种或多种人消化系统无法消化的糖(在本文中也可互换地称为碳水化合物或 糖类)。在另一实施方式中，益生素组合物主要由人消化系统无法消化的糖组成。在一个实 施方式中，所述一种或多种糖是聚合度(DP)为2至20的寡糖。在一个实施方式中，聚合度 可以是2(例如，参见图10)、3(例如，参见图10)、4(例如，参见图10)、5、6、7、8、9、10、11、 12、13、14、15、16、17、18、19或20。在另一实施方式中，所述一种或多种糖是聚合度大于10的多糖。在另一实施方式中，所述糖包含无法消化的寡糖或多糖的混合物。在另一实施方式 中，益生素组合物包含一种或多种可消化的糖和一种或多种无法消化的寡糖或多糖。在一 个实施方式中，所述糖是寡糖，如二糖、三糖、四糖、五糖、六糖、七糖、八糖、九糖或十糖。人不可消化的糖包括但不限于：反式半乳糖寡糖、半乳糖寡糖、乳果糖(图1)、棉子糖(图2)、 水苏糖(图3)、低聚乳果糖、果寡糖、异麦芽寡糖、木寡糖、帕拉金糖寡糖、二果糖酐III、山 梨糖醇、麦芽糖醇、乳糖醇、还原型帕拉金糖、纤维素、β-葡萄糖、β-半乳糖、β-果糖、毛蕊花糖、肌醇半乳糖苷以及β-葡聚糖、瓜尔胶、果胶、高藻酸钠和λ角叉聚糖。 [0042] 在一个实施方式中，益生素组合物包含的糖是菊糖(图4)、果寡糖(FOS)、乳果糖、半乳糖寡糖(GOS)、棉子糖或水苏糖。在另一实施方式中，所述糖是人消化系统无法消化的 寡糖，含有至少一个β-糖苷键(如β半乳糖苷键或β葡糖苷键)，喂给需要的对象时能 诱导乳糖消化。在一个实施方式中，所述需要的对象是人。在另一实施方式中，所述糖是人 消化系统无法消化的寡糖，且含有至少一个可被细菌消化的β-糖苷键(如β-半乳糖苷 键或β-葡糖苷键)。在一个实施方式中，所述细菌是益生菌。在一个实施方式中，所述糖 是人消化系统无法消化的寡糖，且含有至少一个α-糖苷键。在一个实施方式中，所述细菌 是乳杆菌或双歧杆菌。在一个实施方式中，所述糖是GOS。 [0043] 在另一实施方式中，所述糖是人消化系统无法消化的寡糖，含有至少一个α-糖苷键(如α-半乳糖苷键或α-葡糖苷键)，喂给需要的对象时能诱导乳糖消化。在一个 实施方式中，所述需要的对象是人。在另一实施方式中，所述糖是人消化系统无法消化的寡 糖，且含有至少一个可被细菌代谢的α-糖苷键(如α-半乳糖苷键或α-葡糖苷键)。在 一个实施方式中，所述细菌是益生菌。在一个实施方式中，所述细菌是乳杆菌或双歧杆菌。 在一个实施方式中，所述糖是GOS。 [0044] 在一个实施方式中，益生素组合物包含至少一种无法消化的糖，且任选含有一种或多种可消化的糖或寡糖。可消化的糖是人消化系统可消化的糖。在一个实施方式中，所 述一种或多种可消化的糖是乳糖、半乳糖或葡萄糖。在另一实施方式中，益生素组合物不含 乳糖。在一个实施方式中，益生素组合物不含任何益生菌。在另一实施方式中，益生素组合 物含有至少一种益生菌菌株。 [0045] 在一个实施方式中，益生素组合物含有能提高大肠内β-半乳糖苷酶活性的寡糖。在一个实施方式中，益生素组合物含有能提高大肠内益生菌活性量的寡糖。 [0046] II.益生素 [0047] 益生素是摄入后能通过选择性刺激有限数量的本土细菌的有益生长或活性，为宿主提供有益生理作用的无法消化的物质(Gibson GR，Roberfroid MB.人结肠微生物群的 饮食调节：引入益生素的概念(Dietary modulation of the human colonic microbiota： introducing the concept of prebiotics).J Nutr.1995年6月，125(6)：1401-12)。益 生素通常是人类无法消化或基本无法消化的糖，它们的作用是刺激肠道内益生菌的生长， 增加益生菌在肠道内的粘附，置换病原体或为益生菌(共生)或选择的共生菌提供可发酵 剂量的糖，以及提高胃肠道内微生物(主要是乳杆菌和双歧杆菌)群体水平。益生素可以 是人类宿主无法消化的糖，并可作为食物中无法消化的纤维起作用。这种不可消化性的原 因是随着一些或全部益生素寡糖通过消化道，人类消化道中缺乏降解它们的酶。当益生素 到达小肠和结肠时，编码能够消化该益生素的一种或几种酶的细菌可将该益生素降解成细 菌可利用的单糖。例如，已有报道称双歧杆菌和乳杆菌能消化益生素糖。 [0048] 合适的益生素可包括糖、糖单体、糖低聚物或糖聚合物中的一种或多种。在一个实施方式中，所述益生素是非-无法消化的糖，包括非-无法消化的单糖、无法消化的寡糖或 非-无法消化的多糖。在一个实施方式中，寡糖或多糖的糖单位可以连接成一条直链，或者 可以形成具有一个或多个支链的链。寡糖或多糖的长度可因来源而异。在一个实施方式中， 链中也可含有少量葡萄糖。在另一实施方式中，所述益生素组合物可部分水解，或者含有作 为主要寡糖的组成部分的单独糖部分。 [0049] 在一个实施方式中，本文所述益生素组合物主要由一种或多种无法消化的糖组成。在另一实施方式中，益生素组合物主要由一种或多种无法消化的寡糖组成。在一个实 施方式中，所述无法消化的寡糖是GOS。在其它实施方式中，本文所述组合物主要由无法消 化的GOS组成且不含益生菌微生物。 [0050] 在一个实施方式中，本发明益生素组合物允许通过摄入益生素组合物规律地维持或补充结肠微生物群，包括已知能提高对象耐受可发酵糖的能力的微生物。在一个实施方 式中，肠道和结肠微生物群的适应能提高肠和结肠利用乳糖而不产生气体的能力。可利用 胃肠道微生物群的适应性改变减轻摄入乳制品或其它含乳糖组合物引起的气胀、腹泻、胃 胀气、疼痛或肠胃气胀。在一个实施方式中，通常可通过规律地摄入益生素组合物改善人对 象对乳制品的耐受。 [0051] 益生素可促进减缓发酵的结肠细菌。例如，FOS、新糖(neosugar)或菊糖促进结肠中成酸菌，如乳杆菌属(Lactobacillus)或双歧杆菌属(Bifidobacterium)细菌的生长。 例如，嗜酸乳杆菌和双歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidus)可能在减少结肠中致病性 细菌的数量方面起到一定作用。其它特性，例如益生素对结肠pH和粪便形成的影响可用于 将其分类为食物纤维。在实验室模型中，益生素可提高必需矿物质的生物利用度。作为纤 维，认为益生素能减慢消化过程。还了解，其它聚合物，例如各种半乳聚糖和糖基胶(如车 前草胶、瓜尔胶、角叉菜胶、结冷胶和魔芋胶)也能改善胃肠道(GI)健康状况。乳果糖也可 改善GI健康状况。 [0052] 在一个实施方式中，益生素组合物包含GOS、乳果糖、棉子糖、水苏糖、低聚乳果糖、FOS(即寡果糖或寡果聚糖)、菊糖、异麦芽寡糖、木寡糖、帕拉金糖寡糖、反式半乳糖基化的寡糖(即反式半乳糖寡糖)、反式半乳糖基化二糖、大豆寡糖(即黄豆寡糖)、龙胆寡糖、葡 糖寡糖、果胶寡糖、帕拉金糖缩聚物、二果糖酐III、山梨糖醇、麦芽糖醇、乳糖醇、多元醇、聚右旋糖、还原型帕拉金糖、纤维素、β-葡萄糖、β-半乳糖、β-果糖、毛蕊花糖、肌醇半乳糖苷和β-葡聚糖、瓜尔胶、果胶、高藻酸钠和λ角叉聚糖中的一种或多种，或其混合物。 [0054] 在一个实施方式中，益生素组合物能在需要的对象中减轻或消除与乳糖不耐受或乳糖消化问题有关的一种或多种症状，包括但不限于：腹部绞痛、肠胃气胀、胃痛、呕吐、气 胀、腹泻、恶心、胃胀气和肠痛。在一个实施方式中，所述对象是病人。在另一实施方式中， 所述对象是人。在另一实施方式中，所述对象是非人动物。 [0055] 术语“约”指所提及数值加减该值的10％。 [0056] 提及组合物中某组分的重量百分数时所用的术语“重量百分数”指该组分的重量占该组合物总干重的百分数。 [0057] A.寡糖结构 [0058] 通常认为，无论还原端的糖实际上是否是还原糖，寡糖都具有还原端和非还原端。按照公认的命名法，本文所示的大部分寡糖的非还原端在左边，还原端在右边。本文所述的 大部分寡糖是用以下方式描述的：非还原糖名称或缩写(如Gal或D-Gal)前接或后接糖苷 键构型(α或β)、环键、参与该键的还原糖的环位置，然后是还原糖的名称或缩写(如Glc 或D-Glc)。两个糖单元之间的连接(如糖苷键、半乳糖苷键、葡糖苷键)可表示为，例如，1， 4、1--＞4或(1-4)。每个糖都是环形式(即吡喃糖或呋喃糖形式)。例如，乳糖是环形式的 半乳糖和葡萄糖通过β(1-4)键连接组成的二糖，其中缩醛氧桥是β取向。乳糖以α-和 β-乳糖的形式存在(结构见下)。β-乳糖可表示为β-D-吡喃半乳糖基-(1-4)β-D-吡 喃葡萄糖、β-D-Gal-(1-4)-β-D-Glc或Galβ(1-4)-Glc。α-乳糖可表示为β-D-吡喃 半乳糖基-(1-4)α-D-吡喃葡萄糖、β-D-Gal-(1-4)-α-D-Glc或Galβ(1-4)-Glc。 [0059] FOS和GOS都是无法消化的糖。糖，例如但不限于FOS和GOS的β糖苷键使得这些益生素基本上在胃和小肠中无法消化和吸收(见下)。另外，α-连接的GOS(α-GOS)无 法被人唾液淀粉酶水解，但可以被双歧双歧杆菌和丁酸梭菌(Clostridium butyricum)利 用(Yamashita A.等(2004)J.Appl.Glycosci.51：115-122)。FOS和GOS可以基本完整地 通过小肠进入大肠(结肠)，除了在益生菌和共生微生物能够代谢这些寡糖的地方。 [0060] [0061] B.GOS [0062] 1.介绍 [0063] GOS(也称为半乳糖寡糖、半乳寡糖、反式寡糖(TOS)、反式半乳糖寡糖(TGOS)和反式半乳寡糖)是半乳糖分子的低聚物或聚合物，末端主要是葡萄糖或有时也可以是半乳糖 分子，具有不同的聚合度(DP通常是2-20)和连接类型。在一个实施方式中，GOS包含半乳 糖和葡萄糖分子。在另一实施方式中，GOS仅包含半乳糖分子。在另一实施方式中，GOS是 [β-D-Gal-(1-6)]n-β-D-Gal-(1-4)-D-Glc形式的含半乳糖的寡糖，其中n是2-20。在另 一实施方式中，GOS是Glcα1-4-[βGal 1-6]n形式的含半乳糖的寡糖，其中n＝2-20。在 另一实施方式中，GOS是α-D-Glc(1-4)-[β-D-Gal-(1-6)-]n的形式，其中n＝2-20。Gal 是吡喃半乳糖单元，Glc(或Glu)是吡喃葡萄糖单元。 [0064] 在一个实施方式中，益生素组合物包含GOS相关化合物。GOS相关化合物可具有以下性质：a)“乳糖”部分；如具有gal-glu部分和任何聚合值或连接类型的的GOS；或b)能 刺激人GI道内的“乳糖发酵”微生物；例如，棉子糖(gal-fru-glu)是能刺激乳杆菌和双歧 杆菌的“相关性”GOS化合物。 [0065] 在一个实施方式中，益生素组合物包含具有低聚合度的GOS。在一个实施方式中，与等量的包含高聚合度GOS的益生素组合物相比，包含低聚合度GOS的益生素组合物能更 好地增加益生菌和选择性共生菌的生长。在一个实施方式中，与等量的包含较低百分数的 低聚合度GOS的益生素组合物相比，包含较高百分数的低聚合度GOS的益生素组合物能更 好地增加益生菌和有益共生菌的生长。在一个实施方式中，益生素组合物包含聚合度小于 20，如小于10、小于9、小于8、小于7、小于6、小于5、小于4或小于3的GOS。在另一实施方 式中，包含具有较低聚合度的GOS的益生素组合物能增加益生菌和/或有益共生微生物在 对象胃肠道内的生长。 [0066] 2.GOS合成 [0067] GOS是在人和牛的母乳中发现的。GOS可利用β-半乳糖苷酶的反式半乳糖酶活性由乳糖糖浆产生(Crittenden，(1999)益生菌：文献评论(Probiotics：A Critical Review).Tannock，G.(编)地平线科学出版社(Horizon Scientific Press)，Wymondham， 第141-156页)。已知β-D-半乳糖苷酶不仅能催化乳糖的β-D-半乳糖苷键水解产生 D-葡萄糖和D-半乳糖，还能进行反式半乳糖基化反应，在该反应中将β-D-半乳糖苷的 D-半乳糖基转移到羟基化受体上。例如，存在β-D-半乳糖苷如乳糖或另一种糖时，可能在 D-半乳糖单元和受体之间获得新的糖苷键连接。在反式半乳糖基化反应之后，GOS混合物 中也可能存在起始半乳糖苷如乳糖。如本文所用，GOS包含由糖苷和β-半乳糖苷酶的反式 半乳糖基化反应产生的一种或多种糖。因此，GOS包含糖，如反式半乳糖基化的寡糖(即反 式半乳糖寡糖)或反式半乳糖基化二糖。所形成寡糖的DP可取决于酶来源而变化，通常是 2-20。在一个实施方式中，GOS组合物是DP范围为2-6的一种或多种糖(即二至六糖)的 混合物。在另一实施方式中，GOS组合物是DP范围为2-8的一种或多种糖(即二至八糖) 的混合物。在另一实施方式中，GOS组合物是DP范围大于8的一种或多种糖的混合物。在 另一实施方式中，GOS组合物是DP范围为9-15的一种或多种糖的混合物。在另一实施方 式中，GOS组合物是DP为1、DP范围为2-6、DP范围为6-8和DP范围大于8的一种或多种 糖的混合物。 [0068] 3.GOS连接 [0069] GOS中发现的单独糖单元之间的连接包括β-(1-6)、β-(1-4)、β-(1-3)和β-(1-2)连接。与β-(1-6)或β-(1-4)连接相比，β-(1-3)连接较不常见。在一个实 施方式中，GOS包含多个通过α-(1-4)糖苷键连接于末端吡喃葡糖基残基的β-(1-6)或 β-(1-4)吡喃半乳糖基单元。在另一实施方式中，GOS包含多个通过β-(1-4)糖苷键连接 于末端吡喃葡糖基残基的β-(1-6)或β-(1-4)吡喃半乳糖基单元。在另一实施方式中， 通过反式半乳糖基化形成的GOS包含β-D-吡喃半乳糖基-(1-3)连接。在一个实施方式 中，GOS是分支糖。支链寡糖可能是反式半乳糖基化反应的人造产物。在另一实施方式中， GOS是直链糖。GOS的非限制性例子包括： [0070] [0071] β-半乳糖苷酶的来源可决定来自反式半乳糖基化反应的GOS终产物。例如，来自嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)的β-半乳糖苷酶可产生许多反式半 乳糖基化的二糖，包括Galβ(1-6)Glc、Galβ(1-3)Glc、Galβ(1-2)Glc和Galβ(1-6) Gal(Matsumoto等，(1992)，第5章：半乳糖寡糖，刊于《日本技术综述》(Japanese Technology Reviews)，Karbe，I.编，Gordon和Breach，NY，第90-160页)。反式半乳糖基 化的寡糖(TOS)可以用来自米曲霉(Aspergillus oryzae)的β-半乳糖苷酶产生(Tanaka 等(1983)Bifidobacteria Microflora，2，17-24)，它由三-、四-、五-和六-GOS组成。在另 一实施方式中，用来自米曲霉(A.oryzae)和嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus) 的β-半乳糖苷酶制备GOS(Ito等，1990)，Microbial Ecology in Health and Disease，3， 285-292)，它含有36％三-、四-、五-和六-GOS，16％的半乳糖基-葡萄糖和半乳糖基-半 乳糖二糖，38％单糖和10％乳糖。 [0072] 在一个实施方式中，双歧双歧杆菌菌株(例如，登录号NCIMB 41171)产生将乳糖转化成GOS混合物的半乳糖苷酶活性，所述GOS混合物含有二糖Galα(1-6)Gal、至少一种 选自Galβ(1-6)-Galβ(1-4)-Glc和Galβ(1-3)-Galβ(1-4)-Glc的三糖、四糖Galβ(1- 6)-Galβ(1-6)-Galβ(1-4)-Glc和五糖Galβ(1-6)-Galβ(1-6)-Galβ(1-6)-Galβ(1-4 )-Glc。在一个实施方式中，GOS组合物是10-45％w/v二糖、10-45％w/v三糖、10-45％w/v 四糖和10-45％w/v五糖的混合物。 [0073] 在另一实施方式中，GOS组合物是含有20-28％重量β(1-3)连接、20-25％重量β(1-4)连接和45-55％重量β(1-6)连接的寡糖的混合物。在一个实施方式中，GOS组合 物是含有26％重量β(1-3)连接、23％重量β(1-4)连接和51％重量β(1-6)连接的寡糖 的混合物。 [0074] α-GOS(也称为α-键GOS或α-连接的GOS)是具有α-吡喃半乳糖基的寡糖。α-GOS在糖单元之间包含至少一个α糖苷键。α-GOS通常表示为α-(Gal)n(n通常是2-10 的整数)或α-(Gal)nGlc(n通常是1-9的整数)。例子包括α-半乳糖基葡萄糖、α-半 乳二糖、α-半乳三糖、α-半乳四糖和更高级寡糖的混合物。其它非限制性例子包括蜜二 糖、甘露三糖、棉子糖、水苏糖等，它们可由甜菜、大豆寡糖等产生。 [0075] 市售和酶合成的α-GOS产物也可用于本文所述的组合物。可以使用半乳糖、含半乳糖物质或葡萄糖作底物，通过α-半乳糖苷酶的脱水缩合反应，用酶合成α-GOS。含半乳 糖的物质包括含半乳糖的物质的水解产物，例如，通过使β-半乳糖苷酶作用于乳糖等获 得半乳糖和葡萄糖的混合物。葡萄糖可以与半乳糖单独混合，并可用作α-半乳糖苷酶的 底物(参见例如，WO 02/18614)。α-GOS的制备方法已有描述(参见例如，EP1514551和 EP2027863)。 [0076] 在一个实施方式中，GOS组合物包含的糖混合物是α-GOS和利用β-半乳糖苷酶通过反式半乳糖基化产生的糖。在另一实施方式中，GOS包含α-GOS。在另一实施方式中， α-GOS包含10-100％重量的α-(Gal)2。在一个实施方式中，GOS仅包含利用β-半乳糖 苷酶通过反式半乳糖基化产生的糖。 [0077] 在一个实施方式中，GOS组合物可包含具有α连接和β连接的GOS。 [0078] 4.GOS糖单元组合物 [0079] 在一个实施方式中，GOS组合物是包含1-20％重量的二糖、1-20％重量的三糖、1-20％重量的四糖和1-20％重量的五糖的寡糖混合物。在另一实施方式中，GOS组合物是 主要由1-20％重量的二糖、1-20％重量的三糖、1-20％重量的四糖和1-20％重量的五糖组 成的寡糖混合物。在一个实施方式中，GOS组合物是包含1-20％重量DP为1-3的糖、1-20％ 重量DP为4-6的糖、1-20％重量DP为7-9的糖和1-20％重量DP为10-12的糖、1-20％重 量DP为13-15的糖的寡糖混合物。 [0080] 在另一实施方式中，GOS组合物中DP为2∶3∶4∶5∶6的糖的比例为1∶1∶1∶1∶1。在另一实施方式中，GOS组合物中DP为1∶2∶3∶4∶5∶6的糖 的比例为1∶2∶3∶2∶1∶1。在另一实施方式中，GOS组合物中DP为3∶4∶5的 糖的比例为(12-13)∶(4-5)∶1。在一个实施方式中，GOS组合物中DP为3∶4∶5的 糖的比例为12.3∶4.8∶1。在一个实施方式中，GOS组合物中DP为2∶3∶4∶5的糖 的比例为(8-10)∶(10-15)∶(4-6)∶(1-3)。 [0081] 在另一实施方式中，GOS组合物是包含50-55％重量的二糖、20-30％重量的三糖、10-20％重量的四糖和1-10％重量的五糖的寡糖混合物。在一个实施方式中，GOS组合物是 包含85％重量的二糖、59％重量的三糖、14％重量的四糖和5％重量的五糖的寡糖混合物。 [0082] 在另一实施方式中，GOS组合物是包含45-55％重量的三糖、15-25％重量的四糖、1-10％重量的五糖的寡糖混合物。在另一实施方式中，GOS组合物是包含49.3％重量的三 糖、19％重量的四糖、4％重量的五糖的寡糖混合物。 [0083] 在另一实施方式中，GOS组合物是包含2-5％重量的三至六糖的混合物、25-35％重量的Galβ(1-6)Glc、5-15％重量的Galβ(1-3)Glc、5-15％重量的Galβ(1-2)Glc、 25-30％重量的Galβ(1-6)Gal和1-5％重量的Galβ(1-3)Gal的寡糖混合物，任选还包含 一种或多种可消化的糖或寡糖。在另一实施方式中，GOS组合物是包含3.9％重量的三至 六糖的混合物、32.6％重量的Galβ(1-6)Glc、7.6％重量的Galβ(1-3)Glc、9.4％重量的 Galβ(1-2)Glc、27.2％重量的Galβ(1-6)Gal和2.5％重量的Galβ(1-3)Gal的寡糖混合 物，任选还包含一种或多种可消化的糖或寡糖。可消化的糖或寡糖是可被人消化系统消化 的糖，包括但不限于乳糖、半乳糖或葡萄糖。在一个实施方式中，GOS组合物中发现的可消 化的糖包括乳糖、半乳糖或葡萄糖。在另一实施方式中，GOS组合物是无法消化的寡糖和乳 糖、葡萄糖或半乳糖的混合物。在另一实施方式中，GOS组合物由62％重量的寡糖和38％ 可消化的糖组成。 [0084] 5.GOS和糖量测定 [0085] 在另一实施方式中，GOS组合物包含寡糖的混合物，其中该组合物的糖量测定值为至少约50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100白利糖度。在另一实施方式中，GOS组合物包含寡糖的混合物，其中该组合物的糖量测定值为约50-100、50-80、60-80或70-80白利 糖度。在另一实施方式中，GOS组合物的糖量测定值为约72至78白利糖度。例如，GOS组 合物可包含大于约93％GOS，其糖量测定值为75白利糖度。在另一实施方式中，GOS组合 物可包含大于约93％GOS、小于约5％可消化的糖(如乳糖、葡萄糖和半乳糖)，其糖量测定 值为75±白利糖度。在又一实施方式中，GOS组合物可包含大于约93％GOS、小于约5％可 消化的糖、小于约10ppm重金属、小于0.1％硫酸化灰分，其糖量测定值为75白利糖度。 [0086] 6.益生素组合物中GOS的百分数和含量 [0087] 在另一实施方式中，益生素组合物包含GOS组合物，其中该GOS组合物包含1-100％重量的GOS。GOS的重量百分数指相对于GOS组合物总干重的GOS重量。在另一实 施方式中，益生素组合物包含GOS组合物，其中该GOS组合物包含约1％重量的GOS。在另一 实施方式中，益生素组合物包含GOS组合物，其中该GOS组合物包含约5％重量的GOS。在另 一实施方式中，益生素组合物包含GOS组合物，其中该GOS组合物包含约10％重量的GOS。 在另一实施方式中，益生素组合物包含GOS组合物，其中该GOS组合物包含约20％重量的 GOS。在另一实施方式中，益生素组合物包含GOS组合物，其中该GOS组合物包含约30％重量 的GOS。在另一实施方式中，益生素组合物包含GOS组合物，其中该GOS组合物包含约40％ 重量的GOS。在另一实施方式中，益生素组合物包含GOS组合物，其中该GOS组合物包含约 50％重量的GOS。在另一实施方式中，益生素组合物包含GOS组合物，其中该GOS组合物包 含约60％重量的GOS。在另一实施方式中，益生素组合物包含GOS组合物，其中该GOS组合 物包含约70％重量的GOS。在另一实施方式中，益生素组合物包含GOS组合物，其中该GOS 组合物包含72.3％重量的GOS。在另一实施方式中，益生素组合物包含GOS组合物，其中该 GOS组合物包含约80％重量的GOS。在另一实施方式中，益生素组合物包含GOS组合物，其 中该GOS组合物包含约85％重量的GOS。在另一实施方式中，益生素组合物包含GOS组合 物，其中该GOS组合物包含约90％重量的GOS。在另一实施方式中，益生素组合物包含GOS 组合物，其中该GOS组合物包含约91％重量的GOS。在另一实施方式中，益生素组合物包含 GOS组合物，其中该GOS组合物包含约92％重量的GOS。在另一实施方式中，益生素组合物 包含GOS组合物，其中该GOS组合物包含约93％重量的GOS。在另一实施方式中，益生素组 合物包含GOS组合物，其中该GOS组合物包含约94％重量的GOS。在另一实施方式中，益生 素组合物包含GOS组合物，其中该GOS组合物包含约95％重量的GOS。在另一实施方式中， 益生素组合物包含GOS组合物，其中该GOS组合物包含约96％重量的GOS。在另一实施方 式中，益生素组合物包含GOS组合物，其中该GOS组合物包含约97％重量的GOS。在另一实 施方式中，益生素组合物包含GOS组合物，其中该GOS组合物包含约98％重量的GOS。在另 一实施方式中，益生素组合物包含GOS组合物，其中该GOS组合物包含约99％重量的GOS。 在另一实施方式中，益生素组合物包含GOS组合物，其中该GOS组合物包含约100％重量的 GOS。在另一实施方式中，益生素组合物包含GOS组合物，其中该GOS组合物包含0.1-100％ 的GOS。在另一实施方式中，益生素组合物包含GOS组合物，其中该GOS组合物包含约1％、 2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、 19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、 34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、 49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、 64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、 79％80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、 94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或100％重量的GOS。GOS的重量百分数指相对于益生素或GOS组合物总干重的GOS重量。 [0088] 在另一实施方式中，益生素组合物包含GOS组合物，其中该GOS组合物包含约90％、90.1％、90.2％、90.3％、90.4％、90.5％、90.6％、90.7％、90.8％、90.9％、91％、 91.1％、91.2％、91.3％、91.4％、91.5％、91.6％、91.7％、91.8％、91.9％、92％、92.1％、 92.2％、92.3％、92.4％、92.5％、92.6％、92.7％、92.8％、92.9％、93％、93.1％、93.2％、 93.3％、93.4％、93.5％、93.6％、93.7％、93.8％、93.9％、94％、94.1％、94.2％、94.3％、 94.4％、94.5％、94.6％、94.7％、94.8％、94.9％、95％、95.1％、95.2％、95.3％、95.4％、 95.5％、95.6％、95.7％、95.8％、95.9％、96％、96.1％、96.2％、96.3％、96.4％、96.5％、 96.6％、96.7％、96.8％、96.9％、97％、97.1％、97.2％、97.3％、97.4％、97.5％、97.6％、 97.7％、97.8％、97.9％、98％、98.1％、98.2％、98.3％、98.4％、98.5％、98.6％、98.7％、 98.8％、98.9％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、 99.9％、100％重量的GOS。GOS的重量百分数指相对于益生素或GOS组合物总干重的GOS 重量。 [0089] 在另一实施方式中，益生素组合物包含GOS组合物，其中该GOS组合物包含约1-90％、约10-90％、约20-90％、约30-90％、约40-90％、约40-80％、约40-70％、 约40-60％、约40-50％、约50-90％、约50-80％、约50-70％、约50-60％、约60-90％、 约60-80％、约60-70％、约70-90％、约70-80％、约70-90％、约70-80％、约80-90％、约 90-96％、约93-96％、约93-95％、约94-98％、约93-99％或约90-100％重量的GOS。GOS的 重量百分数指相对于益生素或GOS组合物总干重的GOS重量。 [0090] 在另一实施方式中，益生素组合物包含0.01-20g GOS组合物，如约0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.5、 2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、 13.5、14、14.5、15、15.5、16、16.5、17、17.5、18、18.5、19、19.5或约20g GOS组合物。在另一实施方式中，益生素组合物包含约0.1-2g GOS组合物。 [0091] 益生素产品可包含GOS以通过促进双歧杆菌在肠道内的生长来改善肠道健康状况。在一个实施方式中，乳杆菌和双歧杆菌对GOS组合物的代谢产生有机酸和抑制肠道病 原体的其它物质。在另一实施方式中，GOS组合物为肠道内可利用它们的生物体提供选择 优势。在另一实施方式中，GOS组合物用作肠道内细菌抗粘剂。在另一实施方式中，寡糖混 合物可用于制备防止病原体或病原体产生的毒素粘附在肠道壁上的药物。 [0092] 在一个实施方式中，提供一种组合物，其包含能有效促进益生菌生长以便减缓肠道内的发酵或改善胃肠道健康状况的合适量的益生素组合物。在一个实施方式中，益生素 的给予量为每份约1mg至约20g、或约1mg至约15g、或约1mg至约10g、或约1mg至约5g、或 约2mg至约1000mg、或约2mg至约500mg、或约2mg至约200mg、或约2mg至约100mg、或约 2mg至约50mg、或约2mg至约20mg、或约5mg至约10mg、或者约5、6、7、7.5、8、9或10mg或约 0.25g至约1.7g。在另一实施方式中，益生素的给予量为每份约1g、约2g、约3g、约4g、约 5g、约6g、约7g、约8g、约9g、约10g、约11g、约12g、约13g、约14g、约15g、约16g、约17g、约18g、约19g或约20g。在另一实施方式中，益生素的用量可以是每份约0.1g至约15g、或 约0.1g至约1g、或约0.1g至约0.5g或约0.1g至约2g、或约0.5g至约1g、或约0.2g至约 1g、或约1g至约5g、或约1g至约15g。在一个实施方式中，采用益生素的最小有效量。益 生素可以是约0.5％至约100％重量的益生素组合物。 [0093] 在一个实施方式中，益生素组合物(如GOS)的给予剂量是约1mg至约25g、或约1mg至约5g、或约1mg至约1000mg、或约1mg至约500mg、或约1mg至约200mg、或约1mg至 约100mg、或约1mg至约50mg、或约2mg至约20mg、或约5mg至约10mg、或约5、6、7、7.5、8、 9或10mg。在另一实施方式中，益生素组合物的使用剂量为约7.5mg。在一个实施方式中， 给予对象的益生素组合物的剂量可以随时间从约1g增加到约10g。在一个实施方式中，益 生素组合物的初始剂量可以是1-3克。可以在随时间(如数天或一周)提高该剂量，以使 最终剂量为约10g GOS。 [0094] 7.GOS组合物的GOS和其它组分 [0095] 表1包含来自96.8％GOS组合物的化验证书的数据，描述了可用于含GOS组合物的益生素组合物的其它组分。 [0096] 表1.化验证书 [0097] [0098] 在一个实施方式中，益生素组合物包含GOS组合物，其中所述GOS组合物包含约70％重量的GOS、约3％重量的水分、约30％重量的其它糖，约0.1％重量的灰分、约1ppm重 金属(如Pb)和约1ppm砷(As2O3)。在另一实施方式中，益生素组合物包含GOS组合物，其 中所述GOS组合物包含约70-75％重量的GOS、约1-3％重量的水分、约20％重量的乳糖、小 于1％重量的葡萄糖、小于1％重量的半乳糖、约0.1％重量的灰分、约1ppm重金属(如Pb) 和约1ppm砷(As2O3)。 [0099] 在另一实施方式中，GOS组合物包含GOS以及一种或多种水或可消化的糖。在一个实施方式中，GOS组合物包含小于约10ppm重金属(如砷或铅)，包括但不限于：小于约 10、9、8、7、6、5、4、3、2或1ppm的重金属。在另一实施方式中，GOS组合物包含小于约0.10％硫酸化灰分，包括但不限于：小于约0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2或0.1％硫酸化灰分。在另一实施方式中，GOS组合物可包含大于约90％GOS、小于约5％可消化的糖、小于 约10ppm重金属和小于约0.10％硫酸化灰分。在另一实施方式中，GOS组合物包含小于约 5000ppm乙醇和小于约3000ppm甲醇。在另一实施方式中，GOS组合物包含的细菌计数小于 约100cfu/g，霉菌计数小于约10cfu/g。 [0100] 在一个实施方式中，GOS组合物包含约1-90％、约10-90％、约20-90％、约30-90％、约40-90％、约40-80％、约40-70％、约40-60％、约40-50％、约50-90％、约 50-80％、约50-70％、约50-60％、约60-90％、约60-80％、约60-70％、约70-90％、约 70-80％、约70-90％、约70-80％、约80-90％、约92-100％、约93-99％、约94-98％、约 92-96％、约93-96％或约93-95％重量的GOS和小于约10ppm的重金属和小于约0.10％的 硫酸化灰分。可采用标准分析方法确定益生素或GOS组合物中各种组分的含量，例如但不 限于：HPLC、比色法(如硫化钠比色法)或光谱法(如原子吸收光谱法)。 [0101] 在另一实施方式中，GOS组合物在约A420时的吸光度可以是约0.3AU至约0.6AU。在另一实施方式中，GOS组合物的pH可以是约3至约7。在一个实施方式中，GOS组合物的 电导率可以小于约100μS/cm。 [0102] 图11描述一个高纯度GOS组合物实施方式的样品的HPLC色谱图。 [0103] 8.GOS和可消化的糖 [0104] 在一个实施方式中，GOS组合物可包含约1-5％可消化的糖，如乳糖、葡萄糖或半乳糖。在另一实施方式中，GOS组合物可包含约0.001至约1％葡萄糖或约0.01至约0.1％ 葡萄糖。在另一实施方式中，GOS组合物可包含约0.1％半乳糖至约2％半乳糖。在另一实 施方式中，GOS组合物的密度可以为约1200至约1500g/mL。 [0105] 在一个实施方式中，GOS组合物包含约1-90％、约1-80％、约1-70％、约1-60％、约1-50％、约1-40％、约40-90％、约40-80％、约40-70％、约40-60％、约40-50％、 约50-90％、约50-80％、约50-70％、约50-60％、约60-90％、约60-80％、约60-70％、 约70-90％、约70-80％、约70-90％、约70-80％、约80-90％、约90-96％、约93-96％、约 93-95％、约94-98％、约93-99％或约92-100％重量的GOS且不含可消化的糖。在另一实施 方式中，益生素组合物包含GOS组合物，其中所述GOS组合物包含约1-90％、约1-80％、约 1-70％、约1-60％、约1-50％、约1-40％、约40-90％、约40-80％、约40-70％、约40-60％、 约40-50％、约50-90％、约50-80％、约50-70％、约50-60％、约60-90％、约60-80％、约 60-70％、约70-90％、约70-80％、约70-90％、约70-80％、约80-90％、约92-100％、约 93-99％、约94-98％、约92-96％、约93-96％或约93-95％重量的GOS和小于约6％(如约 5、4、3、2或1％)可消化的糖。 [0106] 在一个实施方式中，GOS组合物包含约70％GOS和约20％可消化的糖。在另一实施方式中，GOS组合物包含约70-75％GOS和约5-30％可消化的糖。 [0107] 在另一实施方式中，GOS组合物包含约1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％或95％重量的GOS和约1-10％重量的可消化糖。在一个实施方式中，这些可消化的糖是GOS合成过 程中的副产物。 [0108] 在一个实施方式中，GOS组合物包含约92％GOS。在另一实施方式中，GOS组合物包含约92％GOS和可消化的糖。在另一实施方式中，GOS组合物包含约92％GOS和约8％可 消化的糖。在另一实施方式中，GOS组合物包含约92％GOS且不含可消化的糖。在另一实 施方式中，GOS组合物包含约92％GOS且不含乳糖、葡萄糖或半乳糖。在另一实施方式中， GOS组合物包含约92％GOS和约1-8％可消化的糖。在另一实施方式中，GOS组合物包含约 92％重量的GOS和约8％重量的可消化糖。在另一实施方式中，GOS组合物包含约92％重 量的GOS和约5％重量的可消化糖。 [0109] 在一个实施方式中，GOS组合物包含约93％GOS。在另一实施方式中，GOS组合物包含约93％GOS和可消化的糖。在另一实施方式中，GOS组合物包含约93％GOS和约7％ 可消化的糖。在另一实施方式中，GOS组合物包含约93％GOS且不含乳糖。在另一实施方 式中，GOS组合物包含约93％GOS且不含乳糖、葡萄糖或半乳糖。在另一实施方式中，GOS组 合物包含约93％GOS和约1-7％可消化的糖。在另一实施方式中，GOS组合物包含约93％ 重量的GOS和约1-7％重量的可消化糖。在另一实施方式中，GOS组合物包含约93％重量的 GOS和约7％重量的可消化糖。在另一实施方式中，GOS组合物包含约93％重量的GOS和约 5％重量的可消化糖。 [0110] 在一个实施方式中，GOS组合物包含约94％GOS。在另一实施方式中，GOS组合物包含约94％GOS和可消化的糖。在另一实施方式中，GOS组合物包含约94％GOS和约6％ 可消化的糖。在另一实施方式中，GOS组合物包含约94％GOS且不含乳糖。在另一实施方 式中，GOS组合物包含约94％GOS且不含乳糖、葡萄糖或半乳糖。在另一实施方式中，GOS组 合物包含约94％GOS和约1-6％可消化的糖。在另一实施方式中，GOS组合物包含约94％ 重量的GOS和约5％重量的可消化糖。 [0111] 在一个实施方式中，GOS组合物包含约95％GOS。在另一实施方式中，GOS组合物包含约95％GOS和可消化的糖。在另一实施方式中，GOS组合物包含约95％重量的GOS和 约5％重量的可消化糖。在另一实施方式中，GOS组合物包含约95％GOS且不含乳糖。在 另一实施方式中，GOS组合物包含约95％GOS且不含乳糖、葡萄糖或半乳糖。在另一实施方 式中，GOS组合物包含约95％GOS和约1-5％可消化的糖。在另一实施方式中，GOS组合物 包含约95％重量的GOS和约1-5％重量的可消化糖，如可消化的糖。 [0112] 在一个实施方式中，GOS组合物包含约96％GOS。在另一实施方式中，GOS组合物包含约96％GOS和可消化的糖。在另一实施方式中，GOS组合物包含约96％重量的GOS和 约4％重量的可消化糖。在另一实施方式中，GOS组合物包含约96％GOS且不含乳糖。在 另一实施方式中，GOS组合物包含约96％GOS且不含乳糖、葡萄糖或半乳糖。在另一实施方 式中，GOS组合物包含约96％GOS和约1-4％可消化的糖。在另一实施方式中，GOS组合物 包含约96％重量的GOS和约1-4％重量的可消化糖。 [0113] 在一个实施方式中，GOS组合物包含约97％GOS。在另一实施方式中，GOS组合物包含约97％GOS和可消化的糖。在另一实施方式中，GOS组合物包含约97％GOS和约3％ 可消化的糖。在另一实施方式中，GOS组合物包含约97％GOS且不含乳糖。在另一实施方 式中，GOS组合物包含约97％GOS且不含乳糖、葡萄糖或半乳糖。在另一实施方式中，GOS组 合物包含约97％GOS和约1-3％可消化的糖。在另一实施方式中，GOS组合物包含约97％ 重量的GOS和约1-3％重量的可消化糖。在另一实施方式中，GOS组合物包含约97％重量 的GOS和约3％重量的可消化糖。 [0114] 在一个实施方式中，GOS组合物包含约98％GOS。在另一实施方式中，GOS组合物包含约98％GOS和可消化的糖。在另一实施方式中，GOS组合物包含约98％重量的GOS和 约2％重量的可消化糖。在另一实施方式中，GOS组合物包含约98％GOS且不含乳糖。在 另一实施方式中，GOS组合物包含约98％GOS且不含乳糖、葡萄糖或半乳糖。在另一实施方 式中，GOS组合物包含约98％GOS和约0.1-2％可消化的糖。 [0115] 在一个实施方式中，GOS组合物包含约99％GOS。在另一实施方式中，GOS组合物包含约99％GOS和可消化的糖。在另一实施方式中，GOS组合物包含约99％GOS以及乳糖、 葡萄糖、半乳糖或其组合。在另一实施方式中，GOS组合物包含约99％重量的GOS和约1％ 重量的可消化糖。在另一实施方式中，GOS组合物包含约99％GOS且不含乳糖。在另一实 施方式中，GOS组合物包含约99％GOS且不含乳糖、葡萄糖或半乳糖。在另一实施方式中， GOS组合物包含约99％GOS和约0.1-1％可消化的糖。 [0116] 在一个实施方式中，GOS组合物包含约100％GOS。 [0117] 在一些实施方式中，GOS组合物包含约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约8％、约9％、约10％、约15％或约20％重量的可消化的糖。在另一实施方 式中，GOS组合物包含约99.9％、99.5％、99％、98.5％、98％、97.5％、97％、96.5％、96％、 95.5％、95％、94.5％、94％、93.5％、93％、92.5％、92％、91.5％、91％、90.5％、90％、80％、 75％、70％、65％、60％、55％、50％、45％、40％、35％、30％、25％、20％、15％、10％、5％或 1％重量的GOS和一种或多种可消化的糖。 [0118] 在一个实施方式中，益生素组合物包含GOS。在一个实施方式中，益生素组合物基本由GOS组成。在一个实施方式中，益生素组合物基本由GOS组成，并且在没有任何乳糖的 情况下制备或给予。在另一实施方式中，益生素组合物基本由GOS组成，且包含一种或多种 可消化的糖，如乳糖、半乳糖或葡萄糖。这些可消化的糖可以痕量存在(如小于组合物重量 的5％)，并且可以是GOS合成的副产物。 [0119] 在一个实施方式中，以重量计，含有GOS的益生素组合物包含约70％GOS和约30％可消化的糖。例如，8g含有GOS的益生素组合物可包含5.6g GOS、1.6g乳糖和0.8g其 它可消化的糖。 [0120] 在一个实施方式中，包含GOS且任选包含可消化糖的益生素组合物可在设计用于减轻乳糖不耐受症状的适应方法中用于刺激人胃肠道的乳糖发酵共生微生物。在一个实施 方式中，在确定时间框上以递增剂量逐步喂食包含GOS的益生素组合物可使乳糖发酵共生 微生物适应在乳糖不耐受个体中有效代谢乳糖。在一个实施方式中，这种适应是永久的。 [0121] 9.GOS和无法消化的糖 [0122] 在一个实施方式中，益生素组合物包含有效量的GOS和任选的另一种无法消化的糖。在一个实施方式中，益生素组合物能提高乳杆菌属和/或双歧杆菌属种类的β-半乳 糖苷酶活性。在另一实施方式中，益生素组合物包含有效量的GOS或另一无法消化的糖，以 提高肠道细菌(如乳杆菌属和/或双歧杆菌属)的乳糖酶活性，从而降解无法被乳糖不耐 受的人消化的乳糖。 [0123] 在一个实施方式中，提供一种治疗方法，使用GOS和任选的另一种无法消化的糖提高乳杆菌或双歧杆菌的β-半乳糖苷酶活性。在另一实施方式中，提供一种治疗方法，使 用GOS和任选的另一种无法消化的糖提高肠道细菌(如乳杆菌和/或双歧杆菌)的乳糖酶 活性。在另一实施方式中，提供一种治疗方法，使用GOS和任选的另一种无法消化的糖预 防、治疗或减轻人的乳糖不耐受症状。在另一实施方式中，通过给予包含GOS和任选的另一 种无法消化的糖的组合物来治疗、预防或减轻人的乳糖不耐受症状。 [0124] 在一个实施方式中，益生素组合物包含80-99.9％GOS且不含乳糖。在另一实施方式中，益生素组合物包含80-99.9％GOS和20％-0.1％可消化的糖。在另一实施方式中，益 生素组合物包含80-99.9％GOS、0.1-20％可消化的糖和0.1-20％除GOS外的无法消化的 糖。 [0125] 在一个实施方式中，含有GOS的益生素组合物包含约90％GOS且不含乳糖。例如，8g含有GOS的益生素组合物可包含约7.2g GOS。在另一实施方式中，益生素组合物包含约 90％GOS和约5％可消化的糖。例如，8g含有GOS的益生素组合物可包含7.2g GOS和约 0.4g可消化的糖。在另一实施方式中，益生素组合物包含约90％GOS、约5％可消化的糖和 约2％除GOS以外的无法消化的糖。例如，8g含有GOS的益生素组合物可包含约7.2gGOS、 约0.4g可消化的糖和约0.16g其它无法消化的糖。 [0126] 在一个实施方式中，含有GOS的益生素组合物包含约91％GOS且不含乳糖。例如，8g含有GOS的益生素组合物可包含约7.28g GOS。在另一实施方式中，益生素组合物包含 约91％GOS和约5％可消化的糖。例如，8g含有GOS的益生素组合物可包含7.28g GOS和 约0.4g可消化的糖。在另一实施方式中，益生素组合物包含约91％GOS、约5％可消化的糖 和约2％除GOS以外的无法消化的糖。例如，8g含有GOS的益生素组合物可包含约7.28g GOS、约0.4g可消化的糖和约0.16g其它无法消化的糖。 [0127] 在一个实施方式中，含有GOS的益生素组合物包含约92％GOS且不含乳糖。例如，8g含有GOS的益生素组合物可包含约7.36g GOS。在另一实施方式中，益生素组合物包含 约92％GOS和约5％可消化的糖。例如，8g含有GOS的益生素组合物可包含7.36g GOS和 约0.4g可消化的糖。在另一实施方式中，益生素组合物包含约92％GOS、约5％可消化的糖 和约2％除GOS以外的无法消化的糖。例如，8g含有GOS的益生素组合物可包含约7.36g GOS、约0.4g可消化的糖和约0.16g其它无法消化的糖。 [0128] 在一个实施方式中，益生素组合物包含约93％GOS且不含乳糖。例如，8g含有GOS的益生素组合物可包含约7.44g GOS。在另一实施方式中，益生素组合物包含约93％GOS 和约5％可消化的糖。例如，8g含有GOS的益生素组合物可包含7.44g GOS和约0.4g可消 化的糖。在另一实施方式中，益生素组合物包含约93％GOS、约5％可消化的糖和约2％除 GOS以外的无法消化的糖。例如，8g含有GOS的益生素组合物可包含约7.44g GOS、约0.4g 可消化的糖和约0.16g其它无法消化的糖。 [0129] 在一个实施方式中，益生素组合物包含约94％GOS且不含乳糖。例如，8g含有GOS的益生素组合物可包含约7.52g GOS。在另一实施方式中，益生素组合物包含约94％GOS 和约5％可消化的糖。例如，8g含有GOS的益生素组合物可包含7.52g GOS和约0.4g可消 化的糖。在另一实施方式中，益生素组合物包含约94％GOS、约5％可消化的糖和约1％除 GOS以外的无法消化的糖。例如，8g含有GOS的益生素组合物可包含约7.52g GOS、约0.4g 可消化的糖和约0.08g其它无法消化的糖。 [0130] 在一个实施方式中，益生素组合物包含约95％GOS且不含乳糖。例如，8g含有GOS的益生素组合物可包含约7.6g GOS。在另一实施方式中，益生素组合物包含约95％GOS和 约5％可消化的糖。例如，8g含有GOS的益生素组合物可包含7.6g GOS和约0.4g可消化 的糖。 [0131] 在一个实施方式中，益生素组合物包含约96％GOS且不含乳糖。例如，8g含有GOS的益生素组合物可包含约7.68g GOS。在其它实施方式中，含有约96％GOS的益生素组合 物包含约4％可消化的糖。例如，8g含有GOS的益生素组合物可包含7.68g GOS和约0.32g 可消化的糖。 [0132] 在一个实施方式中，益生素组合物包含约97％GOS且不含乳糖。例如，8g含有GOS的益生素组合物可包含约7.76g GOS。在其它实施方式中，含有约97％GOS的益生素组合 物包含约3％可消化的糖。例如，8g含有GOS的益生素组合物可包含7.76g GOS和约0.24g 可消化的糖。 [0133] 在一个实施方式中，益生素组合物包含约98％GOS且不含乳糖。例如，8g含有GOS的益生素组合物可包含约7.84g GOS。在其它实施方式中，含有约96％GOS的益生素组合 物包含约2％可消化的糖。例如，8g含有GOS的益生素组合物可包含7.84g GOS和约0.16g 可消化的糖。 [0134] 在一个实施方式中，益生素组合物包含约99％GOS且不含乳糖。例如，8g含有GOS的益生素组合物可包含约7.92g GOS。在其它实施方式中，含有约99％GOS的益生素组合 物包含约1％可消化的糖。例如，8g含有GOS的益生素组合物可包含7.92g GOS和约0.08g 可消化的糖。 [0135] 在一个实施方式中，益生素组合物包含约100％GOS且不含乳糖。例如，8g含有GOS的益生素组合物可包含约8.0g GOS。在其它实施方式中，含有约99.9％GOS的益生素 组合物包含少于约1％可消化的糖。例如，8g含有GOS的益生素组合物可包含8.0g GOS和 约0.1g可消化的糖。 [0136] 10.GOS效应 [0137] 在一个实施方式中，GOS组合物能在需要的对象中减轻或消除与乳糖不耐受或乳糖消化问题有关的一种或多种症状，包括但不限于：腹部绞痛、肠胃气胀、胃痛、呕吐、气胀、腹泻、恶心、胃胀气和肠痛。在一个实施方式中，所述对象是病人。在另一实施方式中，所述 对象是人。在另一实施方式中，所述对象是非人动物。 [0138] B.FOS [0139] FOS是在各种食物中发现的果糖的低聚物或聚合物链。所述糖单元可以连接成一条直链，或者可以是具有侧链的链。在许多情况下，链中还含有少量葡萄糖。果糖链的长度 可能因来源而不同。FOS主要是聚合度(DP)通常在2至20(寡果糖)或大于20(菊糖)的 果聚糖。通常，FOS中的D-果糖部分通过β-(2-1)键连接，所述低聚物或聚合物的末端是 通过α-(1-2)键连接于果糖的D-葡萄糖分子。 [0140] 在一个实施方式中，益生素组合物包含FOS组合物，其中所述FOS组合物包含占所述组合物约1％或更多重量，如约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、 19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、 44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、 69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、 94、95、96、97、98、99或100％的FOS。在其它实施方式中，所述FOS组合物包含约0.5％或 更多重量的FOS，例如约0.5％、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％或35％FOS。在另一实施方式中，所述益生素或FOS组合物包含0.01-20gFOS，如约0.01、0.03、0.05、0.1、0.2、 0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或 20gFOS。在另一实施方式中，所述益生素或FOS组合物包含FOS和水，以及一种或多种可消 化的糖。在一个实施方式中，益生素组合物包含小于约10pm的重金属(如砷或铅)，包括但 不限于小于约10、9、8、7、6、5、4、3、2或1ppm的重金属。 [0141] 在另一实施方式中，益生素组合物包含FOS和GOS的混合物。在一个实施方式中，约90％重量的益生素组分是GOS，约10％重量的益生素组分是FOS。在一个实施方式中， 约50％重量的益生素组分是GOS，约50％重量的益生素组分是FOS。在一个实施方式中， 1-90％重量的益生素组分是GOS，10-60％重量的益生素组分是FOS。在另一实施方式中，益 生素组合物的益生素组分是90-100％重量的GOS。 [0142] C.菊糖 [0143] 菊糖是被视作FOS的链较长化合物的例子。较短(分子量较低)的化合物倾向于具有甜味。FOS分子的大小和复杂程度使其具有理想特性。虽然简单糖果糖和葡萄糖可通 过小肠迅速吸收到体内，但大部分FOS无法消化并因此起到膳食纤维的作用。这是因为随 着FOS通过消化道，人没有降解FOS的酶。当FOS到达大肠和结肠时，该处发现的细菌开始 降解FOS。这些细菌具有降解FOS所需的酶。据报道，双歧杆菌属和乳杆菌属的某些种类能 够利用FOS。据信，促进双歧杆菌生长的食物有利于胃肠道健康。 [0144] 在一个实施方式中，益生素组合物包含菊糖，其中菊糖包含占所述组合物重量1％或更多重量，如约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、 24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、 49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、 74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99 或 100％的菊糖。在另一实施方式中，益生素组合物包含1-20g菊糖，如约1、2、3、4、5、6、7、8、 9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20g菊糖。在另一实施方式中，益生素组合物包含菊糖、水、或一种或多种可消化的糖。在一个实施方式中，益生素组合物包含小于约10ppm的 重金属(如砷或铅)，包括但不限于小于约10、9、8、7、6、5、4、3、2或1ppm的重金属。 [0145] D.乳果糖 [0146] 乳果糖是由一分子的果糖和半乳糖形成的二糖。它可通过乳糖异构化产生。在一个实施方式中，益生素组合物包含乳果糖(4-O-β-D-吡喃半乳糖基-β-D-呋喃果糖)， 其中乳果糖包含占所述组合物约1％或更多重量，如约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、 14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、 39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、 64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、89、 90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％的乳果糖。在另一实施方式中，益生素组合物包含1-20g乳果糖，如约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20g乳果糖。在另一实施方式中，益生素组合物包含乳果糖、水、或一种或多种可消化的糖。在一个实 施方式中，所述组合物包含小于约10ppm的重金属(如砷或铅)，包括但不限于小于约10、 9、8、7、6、5、4、3、2或1ppm的重金属。 [0147] E.棉子糖 [0148] 棉子糖(蜜里糖、蜜里三糖、密三糖、α-D-半乳糖基蔗糖)是由半乳糖、果糖和葡萄糖组成的三糖。人消化道中不存在的α-半乳糖苷酶可水解棉子糖。因此，在人体中，棉 子糖通过胃和高位肠道，并且被低位肠道中含有α-半乳糖苷酶的细菌消化。在一个实施 方式中，益生素组合物包含棉子糖，其中所述棉子糖包含占所述组合物1％或更多重量，如 约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、 29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、 54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、 79、80、81、82、83、84、85、86、87、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％的棉子糖。 在另一实施方式中，益生素组合物包含1-20g棉子糖，如约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、 13、14、15、16、17、18、19或20g棉子糖。在另一实施方式中，益生素组合物包含棉子糖或者一种或多种可消化的糖。在一个实施方式中，益生素组合物包含小于约10ppm的重金属(如 砷或铅)，包括但不限于小于约10、9、8、7、6、5、4、3、2或1ppm的重金属。 [0149] F.水苏糖 [0150] 水苏糖是由两个α-D-半乳糖单元、一个α-D-葡萄糖单元和一个β-D-果糖单元组成的四糖。它连接成 水苏糖无法被人完全消 化。在一个实施方式中，益生素组合物包含水苏糖，其中水苏糖包含占所述组合物1％或更 多重量，如约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、 26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、 51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、 76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99 或100 ％的水苏糖。在另一实施方式中，益生素组合物包含1-20g水苏糖，如约1、2、3、4、5、6、7、8、9、 10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20g水苏糖。在另一实施方式中，益生素组合物包含水苏糖、水、或一种或多种可消化的糖。在一个实施方式中，益生素组合物包含小于约10ppm 的重金属(如砷)，包括但不限于小于约10、9、8、7、6、5、4、3、2或1ppm的重金属。 [0151] G.GOS和菊糖 [0152] 在一个实施方式中，益生素组合物包含GOS和菊糖。在另一实施方式中，GOS∶菊糖的比例是约99∶1、约95∶1、约90∶1、约85∶1、约80∶1、约75∶1、约70∶1、 约65∶1、约60∶1、约55∶1、约50∶1、约45∶1、约40∶1、约35∶1、约30∶1、约 25∶1、约20∶1、约15∶1、约10∶1、约9∶1、约8∶1、约22∶3、约7∶1、约6∶1、 约5∶1、约4∶1、约3∶1、约2∶1或约1∶1。含有GOS和菊糖的益生素组合物可包 含0.4g至20g GOS和菊糖。含有GOS和菊糖的益生素组合物可包含约0.4、0.5、0.6、0.7、 0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、 2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、 4.8、4.9、5、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、 6.8、6.9、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、14.5、15、15.5、16、 16.5、17、17.5、18、18.5、19、19.5或20g GOS和菊糖。 [0153] III.益生菌 [0154] A.介绍 [0155] 益生菌(或益生细菌)通常指胃肠道中发现的有益的活微生物，如细菌，当足量给予时在宿主(或需要的对象)中产生健康益处。有报道称，益生菌微生物有利地改变肠道 微生物群平衡、抑制有害细菌的生长、促进良好消化、调节免疫功能，并且提高对病毒和细 菌感染的耐受性。通常认为安全(GRAS)的细菌培养物或已知的共生菌或益生菌微生物可 用于帮助减轻或消除乳糖不耐受样症状或者改善总体GI健康状况，例如通过结肠适应，它 们可应用于本文所述的方法和组合物。 [0156] B.细菌 [0157] 益生菌的例子包括但不限于：使结肠酸化的细菌，如来自乳杆菌属或双歧杆菌属的细菌，认为它们通过产生有机酸(乳酸和乙酸)、过氧化氢和据报道能抑制肠道病 原体的细菌素来维持肠道微生物群的健康平衡。细菌素是小的抗微生物肽，它可以杀 死紧密相关的细菌，或对大部分革兰氏阳性病原体(如利斯特菌(Listeria)、葡萄球菌 (Staphylococcus)和梭菌(Clostridium))具有广谱活性(如尼生素)。 [0158] 可用于本文所述方法和组合物的益生菌的非限制性例子包括嗜酸乳杆菌，作为益生菌微生物，它是胃肠道微生物群的重要成员，并且已经广泛和成功地以益生菌培 养物的形式用于饮食补充剂、食物和乳制品。据报道，这些有益菌能调节免疫功能、抑 制癌发生、促进胆固醇代谢和帮助消化。有关许多乳杆菌种类的众多报道称其能促进健 康微生物群、减少腐败和减轻内毒素血症。可以利用的其他乳杆菌包括但不限于：卷曲 乳杆菌(L.crispatus)、干酪乳杆菌(L.casei)、鼠李糖乳杆菌(L.rhamnosus)、路氏乳 杆菌(L.reuteri)、发酵乳杆菌(L.fermentum)、植物乳杆菌(L.plantarum)、生孢乳杆 菌(L.sporogenes)和保加利亚乳杆菌(L.bulgaricus)。适合所述组合物的其他益生菌 包括乳双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)、动物双歧杆菌(B.animalis)、短双歧杆菌 (B.bifidum)、长双歧杆菌(B.longum)、青春双歧杆菌(B.adolescentis)和婴儿双歧杆菌 (B.infantis)。酵母如布拉酵母(Saccharomyces boulardii)也适合用作益生菌，并可用 于恢复肠道微生物群。可采用一种或多种细菌种类或菌株的混合物。例如，酸奶是含有用 于发酵的多种细菌种类(如保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌)的产品。可向酸奶中补充益生 素和视作益生菌培养物的其他细菌种类。 [0159] 可用于本文所述方法和组合物的其他益生菌菌株包括例如：凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)GBI-30，6086；动物双歧杆菌乳亚种(Bifidobacterium animalis subsp.lactis)BB-12；短双歧杆菌Yakult；婴儿双歧杆菌35624；动物双歧杆菌乳亚种 HN019(DR10)；长双歧杆菌BB536；大肠杆菌(Escherichia coli)M-17；大肠杆菌Nissle 1917；嗜酸乳杆菌DDS-1；嗜酸乳杆菌LA-5；嗜酸乳杆菌NCFM；干酪乳杆菌DN114-001(免疫 /防御干酪乳杆菌)；干酪乳杆菌CRL431；干酪乳杆菌F19；类干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)St11(或NCC2461)；约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii)La1(乳杆菌LC1， 约氏乳杆菌NCC533)；乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)L1A；植物乳杆菌299V；路氏乳杆 菌ATTC 55730(路氏乳杆菌SD2112)；鼠李糖乳杆菌ATCC 53013；鼠李糖乳杆菌LB21；酿酒 酵母(布拉酵母)lyo；鼠李糖乳杆菌GR-1和路氏乳杆菌RC-14的混合物；嗜酸乳杆菌NCFM 和乳双歧杆菌BB-12或BL-04的混合物；嗜酸乳杆菌CL1285和干酪乳杆菌的混合物；和瑞 士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)R0052和鼠李糖乳杆菌R0011的混合物。 [0160] 在一个实施方式中，组合物包含益生素和益生菌。在一个实施方式中，益生素组合物包含GOS或基本由其组成。在一个实施方式中，在治疗期间，益生素组合物与递增剂量的 益生菌一起给予。在一个实施方式中，在治疗期间，益生素组合物与恒定剂量(剂量不变) 的益生菌一起给予。在另一实施方式中，在一部分治疗期间，益生素组合物与递增剂量的益 生菌一起给予；在另一部分治疗期间，益生素组合物与恒定剂量的益生菌一起给予。 [0161] C.益生菌的给药时间和大小 [0162] 在一个实施方式中，在开始用益生素治疗之前给予益生菌，如嗜酸乳杆菌(L.acidophilus)。在一个实施方式中，益生菌(如嗜酸乳杆菌)与益生素治疗(如包含 GOS或基本由其组成)联合用于部分或全部益生素治疗。因此，在一个实施方式中，一些或 所有剂量的益生素(如包含GOS或基本由其组成)都伴随给予一剂细菌，如培养的活细菌， 例如嗜酸乳杆菌。在一个实施方式中，细菌如嗜酸乳杆菌最初与益生素(如包含GOS或基 本由其组成)一起给予，但随后停止使用该细菌。例如，最初用益生素(如包含GOS或基本 由其组成)治疗的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或大于10天可包括细菌剂量，在该时间之后停止使用细菌。在一个实施方式中，在治疗的前两天，可给予细菌如酸奶中的细菌，或单独给 予细菌本身；然后停止给予细菌。在另一实施方式中，益生素(包含GOS或基本由其组成) 治疗结束后，单独使用益生菌或与其他物质或治疗联用。可以在益生素治疗结束后的任何 合适时间摄入细菌，并且可以每天摄入或者以规律或不规律间隔摄入。剂量如下所述。 [0163] 可采用每份任意合适量的益生菌，以便在胃肠道中产生有效的微生物群。通常，益生菌以培养的活细菌形式给予。剂量可以是每份约0.001mg至约1mg、或约0.5mg至约 5mg、或约1mg至约1000mg、或约2mg至约200mg、或约2mg至约100mg、或约2mg至约50mg、 或约4mg至约25mg、或约5mg至约20mg、或约10mg至约15mg、或约50mg至约200mg、或约 200mg至约1000mg，或约10、11、12、12.5、13、14或15mg。在一个实施方式中，嗜酸乳杆菌的使用剂量是每份约12.5mg。益生菌也可以占最终组合物的约0.5％重量至约20％重量。益 生菌剂量可与一种或多种益生素联合给予。限定益生菌量的另一常见方式是菌落形成单位 (cfu)。1个cfu是能够自我克隆形成相同细胞完整菌落的单个细胞。在一个实施方式中，一 6 9 6 9 种或多种益生菌菌株的摄入量是每份约1x10 至约1x10cfu、或约1x10cfu至约1x10cfu、 6 9 5 6 5 或约10x10cfu至约0.5x10cfu、或约113x10cfu至约113x10cfu、或约240x10cfu至约 6 9 240x10cfu、或约0.3x10cfu。在另一实施方式中，一种或多种益生菌菌株作为乳制品的一 部分给予。在一个实施方式中，每份乳制品如液态奶的典型大小是约240g。在其它实施方 式中，每份大小约245g，或约240g至约245g，或约227至约300g。在一个实施方式中，所述 乳制品是酸奶。酸奶的每份大小可以是约4oz、或约6oz、或约8oz、或约4oz至10oz、或约半 杯、或约1杯、或约113g、或约170g、或约227g、或约245g或约277g、或约100g至约350g。 [0164] 在一个实施方式中，益生菌以培养的活细菌形式给予，例如与益生素(如包含GOS或基本由其组成)和任选的其它物质联合给予。所述剂量可以是约1mg至约1000mg、或约 2mg至约200mg、或约2mg至约100mg、或约2mg至约50mg、或约4mg至约25mg、或约5mg至 约20mg、或约10mg至约15mg、或约10、11、12、12.5、13、14、或15mg益生菌。在一个实施方 式中，嗜酸乳杆菌的使用剂量是约12.5mg。在一个实施方式中，随着给予对象的益生素(如 包含GOS或基本由其组成)剂量增加，细菌剂量也增加。例如，与约10-15mg，如约12.5mg 嗜酸乳杆菌联合给予的益生素(如包含GOS或基本由其组成)初始剂量可以是约0.6g至 1.0g，如0.8g。益生素(如包含GOS或基本由其组成)剂量可逐步增加约0.6g至1.0g，如 0.8g，伴随的嗜酸乳杆菌剂量可增加约10-15mg，如约12.5mg嗜酸乳杆菌。 [0165] IV.GOS制剂 [0166] A.制剂介绍 [0167] 一方面，提供用于治疗乳糖不耐受症状的益生素组合物。在一个实施方式中，益生素组合物包含菊糖、FOS、乳果糖、GOS、棉子糖、水苏糖或其组合。在一个实施方式中，益生素组合物包含GOS或基本由其组成。在另一实施方式中，益生素组合物包含GOS和一种或多 种可消化的糖。可消化的糖是人可消化的糖，包括但不限于乳糖、葡萄糖和半乳糖。在一个 实施方式中，益生素组合物包含GOS和小于20％的一种或多种可消化的糖。在一个实施方 式中，益生素组合物包含GOS和小于10％的一种或多种可消化的糖。在一个实施方式中，益 生素组合物包含GOS和小于5％的一种或多种可消化的糖。在另一实施方式中，益生素组合 物含有小于5％的乳糖。在另一实施方式中，益生素组合物含有小于4％的乳糖。在另一实 施方式中，益生素组合物含有小于3％的乳糖。在另一实施方式中，益生素组合物含有小于 2％的乳糖。在另一实施方式中，益生素组合物含有小于1％的乳糖。在另一实施方式中， 益生素组合物含有小于0.5％的乳糖。在另一实施方式中，益生素组合物含有小于0.4％的 乳糖。在另一实施方式中，益生素组合物含有小于0.3％的乳糖。在另一实施方式中，益生 素组合物含有小于0.2％的乳糖。在另一实施方式中，益生素组合物含有小于0.1％的乳 糖。在另一实施方式中，益生素组合物含有小于0.05％的乳糖。在另一实施方式中，益生素 组合物含有小于0.01％的乳糖。在另一实施方式中，益生素组合物含有小于0.005％的乳 糖。在一个实施方式中，益生素组合物包含GOS且基本不含乳糖。在一个实施方式中，益生 素组合物不含任何乳糖。在另一实施方式中，益生素组合物含有GOS和至少一种益生菌菌 株。在另一实施方式中，益生素组合物包含GOS和乳糖、至少一种益生菌菌株或缓冲剂中任 选的一种或多种。其他成分包括改进操作的成分、防腐剂、抗氧化剂、调味剂等。 [0168] 在一个实施方式中，益生素组合物包含GOS或益生菌。在其它实施方式中，益生素组合物是粉末、片剂、胶囊或液体的形式。在一个实施方式中，益生素组合物可与乳制品一 起给予，其给予形式是牛奶或其它常见的乳制品，如酸奶、奶昔(shake)、果昔(smoothie)、 乳酪等。 [0169] 在益生素组合物包含小于100％重量的GOS的实施方式中，其余成分可以是任何适合需要对象(例如人)摄入的成分，包括但不限于：其它益生素(如FOS)、缓冲剂、一种 或多种可消化的糖、用于抑制聚结和提高多孔性的成分如二氧化硅和微晶纤维素，或者本 领域熟知的相似成分。其余成分也可包括改进操作的成分、防腐剂、抗氧化剂、调味剂等。 [0170] B.缓冲剂组分 [0171] 在本文所述的方法和组合物中，也可给予任选具有钙抗衡离子的一种或多种缓冲剂。适合所治疗对象(例如人)摄入的任何缓冲剂均可用于本文所述组合物。所述缓冲剂 中和胃酸，可例如使得活细菌能到达肠道。缓冲剂包含柠檬酸盐、磷酸盐等。一种实施方式 利用具有钙抗衡离子的缓冲剂，如三元磷酸钙。钙可用于恢复许多乳糖不耐受对象饮食中 缺乏的钙。近期一项研究表明，磷酸钙能够保护嗜酸乳杆菌不受胆汁影响。磷酸钙可帮助 中和胃酸。 [0172] 在一个实施方式中，在用益生素组合物(如包含GOS或基本由其组成的组合物)开始治疗之前给予缓冲剂如磷酸钙，其任选与细菌联合给予。在一个实施方式中，缓冲剂如 磷酸钙与益生素组合物(如包含GOS或基本由其组成的组合物)联用于部分或全部乳糖治 疗。因此，在一个实施方式中，益生素组合物的一些或所有剂量都伴随给予一剂缓冲剂如磷 酸钙。在一个实施方式中，缓冲剂如磷酸钙最初与益生素组合物(如包含GOS或基本由其 组成的组合物)一起给予，然后停止使用该缓冲剂。例如，用益生素组合物治疗的前1、2、 3、4、5、6、7、8、9、10或大于10天可包括若干剂缓冲剂如磷酸钙，在这段时间之后停止使用缓冲剂。在一个实施方式中，可以在治疗的前两天给予缓冲剂如磷酸钙，然后停止给予缓冲 剂。在一个实施方式中，用益生素组合物治疗终止后，单独使用缓冲剂如磷酸钙或者与其它 物质或治疗联合使用。可以在乳糖治疗结束后的任何合适时间摄入缓冲剂如磷酸钙，并且 可以每天摄入或者以规律或不规律间隔摄入。剂量如下所述。 [0173] 本领域已知许多适合人用的缓冲剂，任何合适缓冲剂均可用于本文所述的方法和组合物。三磷酸钙是示范性缓冲剂，其抗衡离子供给乳糖不耐受对象通常缺乏的营养素，即 钙。在一个实施方式中，缓冲剂的使用剂量可以是约2mg至约2000mg，或约4mg至约400mg， 或约4mg至约200mg，或约4mg至约100mg，或约8mg至约50mg，或约10mg至约40mg，或约 20mg至约30mg，或约20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30mg。在另一实施方式中，益生素组合物还包含1-50mg的缓冲剂量，如约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、 17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、 42、43、44、45、46、47、48、49或50mg。在一个实施方式中，缓冲剂的使用剂量为约25mg。在一个实施方式中，磷酸钙的使用剂量为约25mg。该剂量可与益生素组合物(如包含GOS或 基本由其组成的组合物)联合给予。在一个实施方式中，随着益生素组合物剂量增加，缓冲 剂的剂量也随之增加。例如，益生素组合物的初始剂量可以是约0.6g至1.0g，如0.8g，与 约20-30mg(如约25mg)的缓冲剂如磷酸钙联合给予。益生素组合物的剂量可逐步增加约 0.6g至1.0g，如0.8g，伴随给予的缓冲剂如磷酸钙的剂量可增加约20-30mg，例如约25mg 缓冲剂如磷酸钙。 [0174] C.包含GOS和至少一种益生菌菌株的组合物 [0175] 在一个实施方式中，益生素组合物包含GOS和至少一种益生菌菌株。GOS可包含大于1％重量的组合物，而至少一种益生菌菌株通常包含小于约10％、5％、4％、3％或2％重 量的组合物(除非另有说明，本文中的所有百分数均为重量百分数)。例如，GOS的含量可 以是约1-99.75％重量，且至少一种益生菌菌株的含量为约0.25-2％重量，或者GOS的含量 可以是约89-96％重量，且细菌含量为约1.2-3.7％重量。在一个实施方式中，GOS的含量 为约92％重量和至少一种益生菌菌株(如嗜酸乳杆菌或乳双歧杆菌)的含量为约1.5％重 量。在一个实施方式中，GOS的含量为约92％重量和至少一种益生菌菌株(如嗜酸乳杆菌 或乳双歧杆菌)的含量为约1.5％重量。在另一实施方式中，GOS的含量为约93％重量且 至少一种益生菌菌株(如嗜酸乳杆菌或乳双歧杆菌)的含量为约1.5％重量。在另一实施 方式中，GOS的含量为约94％重量且至少一种益生菌菌株(如嗜酸乳杆菌或乳双歧杆菌) 的含量为约1.5％重量。在另一实施方式中，GOS的含量为约95％重量且至少一种益生菌 菌株(如嗜酸乳杆菌或乳双歧杆菌)的含量为约1.5％重量。在另一实施方式中，GOS的含 量为约96％重量且至少一种益生菌菌株(如嗜酸乳杆菌或乳双歧杆菌)的含量为约1.5％ 重量。在另一实施方式中，GOS的含量为约97％重量和至少一种益生菌菌株(如嗜酸乳杆 菌或乳双歧杆菌)的含量为约1.5％重量。在另一实施方式中，GOS的含量为约98％重量 和至少一种益生菌菌株(如嗜酸乳杆菌或乳双歧杆菌)的含量为约1.5％重量。在另一实 施方式中，GOS的含量为约98.5％重量和至少一种益生菌菌株(如嗜酸乳杆菌或乳双歧杆 菌)的含量为约1.5％重量。如果至少一种益生菌菌株和GOS不构成益生素组合物重量的 100％，则其余成分可以是需要的对象如人可摄入的任何合适成分，包括但不限于：其它益 生素(如FOS)、一种或多种缓冲剂、可消化的糖成分、用于抑制凝集和提高多孔性的成分如 二氧化硅和微晶纤维素，或本领域熟知的相似成分。其余成分也可包括改进操作的成分、防 腐剂、抗氧化剂、调味剂等。 [0176] D.包含GOS和缓冲剂的组合物 [0177] 在另一实施方式中，益生素组合物包含GOS和缓冲剂(如三元磷酸钙)。例如，GOS的含量可以是约1-100％重量，且缓冲剂的含量是约0.50-4％重量，或者GOS的含量可以是 约1-96％重量，且缓冲剂的含量是约1至约3.75％重量。在一个实施方式中，GOS的含量是 约1％重量，且缓冲剂的含量是约3％重量。在一个实施方式中，GOS的含量是约5％重量，且 缓冲剂的含量是约3％重量。在一个实施方式中，GOS的含量是约10％重量，且缓冲剂的含 量是约3％重量。在一个实施方式中，GOS的含量是约15％重量，且缓冲剂的含量是约15％ 重量。在一个实施方式中，GOS的含量是约20％重量，且缓冲剂的含量是约3％重量。在一 个实施方式中，GOS的含量是约25％重量，且缓冲剂的含量是约3％重量。在一个实施方式 中，GOS的含量是约30％重量，且缓冲剂的含量是约3％重量。在一个实施方式中，GOS的含 量是约35％重量，且缓冲剂的含量是约3％重量。在一个实施方式中，GOS的含量是约40％ 重量，且缓冲剂的含量是约3％重量。在一个实施方式中，GOS的含量是约50％重量，且缓冲 剂的含量是约3％重量。在一个实施方式中，GOS的含量是约60％重量，且缓冲剂的含量是 约3％重量。在一个实施方式中，GOS的含量是约70％重量，且缓冲剂的含量是约3％重量。 在另一实施方式中，GOS的含量是约90％重量，且缓冲剂的含量是约3％重量。在另一实施 方式中，GOS的含量是约92％重量，且缓冲剂的含量是约3％重量。在另一实施方式中，GOS 的含量是约93％重量，且缓冲剂的含量是约3％重量。在另一实施方式中，GOS的含量是约 94％重量，且缓冲剂的含量是约3％重量。在另一实施方式中，GOS的含量是约95％重量，且 缓冲剂的含量是约3％重量。在另一实施方式中，GOS的含量是约96％重量，且缓冲剂的含 量是约3％重量。在另一实施方式中，GOS的含量是约97％重量，且缓冲剂的含量是约2％ 重量。在另一实施方式中，GOS的含量是约98％重量，且缓冲剂的含量是约1％重量。在另 一实施方式中，GOS的含量是约99％重量，且缓冲剂的含量是约1％重量。在另一实施方式 中，GOS的含量是约100％重量，且缓冲剂的含量小于约1％重量。如果缓冲剂和GOS不构 成该组合物重量的100％，则其余成分可以是对象(如人)可摄入的任何合适成分，包括但 不限于：益生菌(如有益细菌)或其它益生素(如FOS)，还包含用于抑制凝集和提高多孔 性的成分如二氧化硅和微晶纤维素，或本领域熟知的相似成分。其余成分也可包括改进操 作的成分、防腐剂、抗氧化剂、调味剂等。 [0178] E.包含可消化的糖、益生菌和GOS的组合物 [0179] 在一个实施方式中，益生素组合物包含可消化的糖、益生菌(如嗜酸乳杆菌或双歧杆菌)和GOS。在一个实施方式中，乳糖的含量可以是约1-20％重量，细菌含量是约 0.25-2.10％重量，且GOS的含量是约1-98.75％重量。在另一实施方式中，乳糖的含量可以 是约5-20％重量，细菌含量是约0.91-1.95％重量，且GOS的含量是约1％至约96％重量。 在另一实施方式中，乳糖的含量是约20％重量，细菌的含量是约1.5％重量且GOS的含量是 约1％重量。在另一实施方式中，乳糖的含量是约20％重量，细菌的含量是约1.5％重量且 GOS的含量是约50％重量。在另一实施方式中，乳糖的含量是约20％重量，细菌的含量是约 1.5％重量且GOS的含量是约60％重量。在另一实施方式中，乳糖的含量是约20％重量，细 菌的含量是约1.5％重量且GOS的含量是约70％重量。在另一实施方式中，乳糖的含量是 约5％重量，细菌的含量是约1.5％重量且GOS的含量是约90％重量。在另一实施方式中， 乳糖的含量是约5％重量，细菌的含量是约1.5％重量且GOS的含量是约92％重量。在另一 实施方式中，乳糖的含量是约5％重量，细菌的含量是约1.5％重量且GOS的含量是约93％ 重量。在另一实施方式中，乳糖的含量是约5％重量，细菌的含量是约1％重量且GOS的含量 是约94％重量。在另一实施方式中，乳糖的含量是约4.5％重量，细菌的含量是约1.5％重 量且GOS的含量是约94％重量。在另一实施方式中，乳糖的含量是约4.5％重量，细菌的含 量是约0.5％重量且GOS的含量是约95％重量。在另一实施方式中，乳糖的含量是约3.5％ 重量，细菌的含量是约0.5％重量且GOS的含量是约96％重量。在另一实施方式中，乳糖的 含量是约2.5％重量，细菌的含量是约0.5％重量且GOS的含量是约97％重量。在另一实施 方式中，乳糖的含量是约1.5％重量，细菌的含量是约0.5％重量且GOS的含量是约98％重 量。在另一实施方式中，乳糖的含量是约0.5％重量，细菌的含量是约0.5％重量且GOS的 含量是约99％重量。如果细菌、GOS和乳糖不构成该组合物的100％，则其余成分可以是对 象(如人)可摄入的任何合适成分，包括但不限于：缓冲剂、可消化的糖(如乳糖、葡萄糖或 半乳糖)，用于抑制凝集和提高多孔性的成分如二氧化硅和微晶纤维素，或本领域熟知的相 似成分。其余成分也可包括改进操作的成分、防腐剂、抗氧化剂、调味剂等。 [0180] F.包含GOS、益生菌和缓冲剂的组合物 [0181] 在一个实施方式中，益生素组合物包含GOS、益生菌菌株和缓冲剂。在一个实施方式中，GOS的含量可以是约1-100％重量，益生菌菌株的含量可以是约0.25-2％重量，缓冲 剂的含量可以是约0.50-4％重量。在另一实施方式中，GOS的含量可以是约1-95％重量，益 生菌菌株的含量可以是约0.91-1.95％重量，且缓冲剂的含量可以是约1.2至3.75％重量。 在另一实施方式中，GOS的含量是约1％重量，益生菌菌株的含量是约1.5％重量，且缓冲剂 的含量是约3％重量。在另一实施方式中，GOS的含量是约5％重量，益生菌菌株的含量是 约1.5％重量，且缓冲剂的含量是约3％重量。在另一实施方式中，GOS的含量是约10％重 量，益生菌菌株的含量是约1.5％重量，且缓冲剂的含量是约3％重量。在另一实施方式中， GOS的含量是约15％重量，益生菌菌株的含量是约1.5％重量，且缓冲剂的含量是约3％重 量。在另一实施方式中，GOS的含量是约20％重量，益生菌菌株的含量是约1.5％重量，且 缓冲剂的含量是约3％重量。在另一实施方式中，GOS的含量是约25％重量，益生菌菌株的 含量是约1.5％重量，且缓冲剂的含量是约3％重量。在另一实施方式中，GOS的含量是约 30％重量，益生菌菌株的含量是约1.5％重量，且缓冲剂的含量是约3％重量。在另一实施 方式中，GOS的含量是约35％重量，益生菌菌株的含量是约1.5％重量，且缓冲剂的含量是 约3％重量。在另一实施方式中，GOS的含量是约40％重量，益生菌菌株的含量是约1.5％ 重量，且缓冲剂的含量是约3％重量。在另一实施方式中，GOS的含量是约50％重量，益生 菌菌株的含量是约1.5％重量，且缓冲剂的含量是约3％重量。在另一实施方式中，GOS的 含量是约60％重量，益生菌菌株的含量是约1.5％重量，且缓冲剂的含量是约3％重量。在 另一实施方式中，GOS的含量是约70％重量，益生菌菌株的含量是约1.5％重量，且缓冲剂 的含量是约3％重量。在另一实施方式中，GOS的含量是约90％重量，益生菌菌株的含量是 约1.5％重量，且缓冲剂的含量是约3％重量。在另一实施方式中，GOS的含量是约92％重 量，益生菌菌株的含量是约1.5％重量，且缓冲剂的含量是约3％重量。在另一实施方式中， GOS的含量是约93％重量，益生菌菌株的含量是约1.5％重量，且缓冲剂的含量是约3％重 量。在另一实施方式中，GOS的含量是约94％重量，益生菌菌株的含量是约1.5％重量，且 缓冲剂的含量是约3％重量。在另一实施方式中，GOS的含量是约95％重量，益生菌菌株的 含量是约1.5％重量，且缓冲剂的含量是约3％重量。在另一实施方式中，GOS的含量是约 96％重量，益生菌菌株的含量是约1.5％重量，且缓冲剂的含量是约2％重量。在另一实施 方式中，GOS的含量是约97％重量，益生菌菌株的含量是约1.5％重量，且缓冲剂的含量是 约1.5％重量。在另一实施方式中，GOS的含量是约99％重量，益生菌菌株的含量是约0.5％ 重量，且缓冲剂的含量是约0.5％重量。在另一实施方式中，GOS的含量是约100％重量，益 生菌菌株的含量小于约0.5％重量，且缓冲剂的含量小于约0.5％重量。如果益生菌菌株、 缓冲剂和GOS不构成该组合物的100％，则其余成分可以是对象(如人)可摄入的任何合适 成分，包括但不限于：其它益生素(如FOS)、可消化的糖(如乳糖、葡萄糖或半乳糖)、用于 抑制凝集和提高多孔性的成分如二氧化硅和微晶纤维素，或本领域熟知的相似成分。其余 成分也可包括改进操作的成分、防腐剂、抗氧化剂、调味剂等。 [0182] G.包含可消化的糖、GOS和缓冲剂的组合物 [0183] 在一个实施方式中，益生素组合物包含可消化的糖、GOS和缓冲剂。例如，乳糖的含量可以是约1-20％重量，GOS的含量可以是约1-100％重量，且缓冲剂的含量可以是约 0.50-4％重量，或者乳糖的含量可以是约5-20％重量，GOS的含量可以是约1-96％重量，且 缓冲剂的含量可以是约1.2-3.75％重量。在一个实施方式中，乳糖的含量是约20％重量， GOS的含量是约1％重量，且缓冲剂的含量是约3％重量。在一个实施方式中，乳糖的含量是 约5％重量，GOS的含量是约1％重量，且缓冲剂的含量是约3％重量。在一个实施方式中， 乳糖的含量是约20％重量，GOS的含量是约10％重量，且缓冲剂的含量是约3％重量。在一 个实施方式中，乳糖的含量是约20％重量，GOS的含量是约15％重量，且缓冲剂的含量是约 3％重量。在一个实施方式中，乳糖的含量是约20％重量，GOS的含量是约20％重量，且缓 冲剂的含量是约3％重量。在一个实施方式中，乳糖的含量是约20％重量，GOS的含量是约 25％重量，且缓冲剂的含量是约3％重量。在一个实施方式中，乳糖的含量是约20％重量， GOS的含量是约30％重量，且缓冲剂的含量是约3％重量。在一个实施方式中，乳糖的含量 是约20％重量，GOS的含量是约35％重量，且缓冲剂的含量是约3％重量。在一个实施方式 中，乳糖的含量是约20％重量，GOS的含量是约40％重量，且缓冲剂的含量是约3％重量。 在一个实施方式中，乳糖的含量是约20％重量，GOS的含量是约50％重量，且缓冲剂的含量 是约3％重量。在一个实施方式中，乳糖的含量是约20％重量，GOS的含量是约60％重量， 且缓冲剂的含量是约3％重量。在一个实施方式中，乳糖的含量是约20％重量，GOS的含量 是约70％重量，且缓冲剂的含量是约3％重量。在另一实施方式中，乳糖的含量是约5％重 量，GOS的含量是约90％重量，且缓冲剂的含量是约3％重量。 [0184] 在另一实施方式中，乳糖的含量是约5％重量，GOS的含量是约92％重量，且缓冲剂的含量是约3％重量。 [0185] 在另一实施方式中，乳糖的含量是约4％重量，GOS的含量是约93％重量，且缓冲剂的含量是约3％重量。在另一实施方式中，乳糖的含量是约3％重量，GOS的含量是约94％ 重量，且缓冲剂的含量是约3％重量。在另一实施方式中，乳糖的含量是约2％重量，GOS的 含量是约95％重量，且缓冲剂的含量是约3％重量。在另一实施方式中，乳糖的含量是约 1％重量，GOS的含量是约96％重量，且缓冲剂的含量是约3％重量。如果GOS、缓冲剂和乳 糖不构成该组合物重量的100％，则其余成分可以是对象(如人)可摄入的任何合适成分， 包括但不限于：细菌、用于抑制凝集和提高多孔性的成分如二氧化硅和微晶纤维素，或本领 域熟知的相似成分。其余成分也可包括改进操作的成分、防腐剂、抗氧化剂、调味剂等。 [0186] H.包含可消化的糖、细菌、GOS和缓冲剂的组合物 [0187] 在一个实施方式中，益生素组合物包含可消化的糖、细菌、GOS和缓冲剂。例如，乳糖的含量可以是约1-20％重量，细菌的含量可以是约0.25-2.10％重量，GOS的含量可 以是约1-100％重量，且缓冲剂的含量可以是约0.50-4％重量，或者乳糖的含量可以是约 5-20％重量，细菌的含量可以是约0.91-1.95％重量，GOS的含量可以是约70-95％重量，且 缓冲剂的含量可以是约1.2-3.75％重量。在一个实施方式中，乳糖的含量是约20％重量， 细菌的含量是约1.47％重量，GOS的含量是约1％重量，且缓冲剂的含量是约3％重量。在一 个实施方式中，乳糖的含量是约20％重量，细菌的含量可以是约1.47％重量，GOS的含量可 以是约10％重量，且缓冲剂的含量可以是约3％重量。在一个实施方式中，乳糖的含量可以 是约20％重量，细菌的含量可以是约1.47％重量，GOS的含量可以是约15％重量，且缓冲剂 的含量可以是约3％重量。在一个实施方式中，乳糖的含量可以是约20％重量，细菌的含量 可以是约1.47％重量，GOS的含量可以是约20％重量，且缓冲剂的含量可以是约3％重量。 在一个实施方式中，乳糖的含量可以是约20％重量，细菌的含量可以是约1.47％重量，GOS 的含量可以是约25％重量，且缓冲剂的含量可以是约3％重量。在一个实施方式中，乳糖的 含量可以是约20％重量，细菌的含量可以是约1.47％重量，GOS的含量可以是约30％重量， 且缓冲剂的含量可以是约3％重量。在一个实施方式中，乳糖的含量可以是约20％重量，细 菌的含量可以是约1.47％重量，GOS的含量可以是约35％重量，且缓冲剂的含量可以是约 3％重量。在一个实施方式中，乳糖的含量可以是约20％重量，细菌的含量可以是约1.47％ 重量，GOS的含量可以是约40％重量，且缓冲剂的含量可以是约3％重量。在一个实施方 式中，乳糖的含量可以是约20％重量，细菌的含量可以是约1.47％重量，GOS的含量可以是 约50％重量，且缓冲剂的含量可以是约3％重量。在一个实施方式中，乳糖的含量可以是约 20％重量，细菌的含量可以是约1.47％重量，GOS的含量可以是约60％重量，且缓冲剂的含 量可以是约3％重量。在一个实施方式中，乳糖的含量可以是约20％重量，细菌的含量可以 是约1.47％重量，GOS的含量可以是约70％重量，且缓冲剂的含量可以是约3％重量。在一 个实施方式中，乳糖的含量可以是约5％重量，细菌的含量可以是约1.47％重量，GOS的含 量可以是约90％重量，且缓冲剂的含量可以是约3％重量。在一个实施方式中，乳糖的含量 可以是约3％重量，细菌的含量可以是约1.47％重量，GOS的含量可以是约92％重量，且缓 冲剂的含量可以是约3％重量。在一个实施方式中，乳糖的含量可以是约2％重量，细菌的 含量可以是约1.47％重量，GOS的含量可以是约93％重量，且缓冲剂的含量可以是约3％重 量。在一个实施方式中，乳糖的含量可以是约1％重量，细菌的含量可以是约1.47％重量， GOS的含量可以是约94％重量，且缓冲剂的含量可以是约3％重量。在一个实施方式中，乳 糖的含量可以是约0.5％重量，细菌的含量可以是约1.47％重量，GOS的含量可以是约95％ 重量，且缓冲剂的含量可以是约3％重量。如果细菌、GOS、缓冲剂和乳糖不构成该组合物重 量的100％，则其余成分可以是对象(如人)可摄入的任何合适成分，包括但不限于：用于 抑制凝集和提高多孔性的成分如二氧化硅和微晶纤维素，或本领域熟知的相似成分。其余 成分也可包括改进操作的成分、防腐剂、抗氧化剂、调味剂等。 [0188] I.其它成分 [0189] 其它成分包括改进操作的成分、防腐剂、抗氧化剂、调味剂等。例如，在一个实施方式中，粉末形式的益生素组合物可包含调味剂，以便在液体(如水)中混合时，该粉末可以 使所述液体带有不同味道，如葡萄味、草莓味、酸橙味、柠檬味、巧克力味等。在一个实施方 式中，所述组合物包含微晶纤维素或二氧化硅。防腐剂可包括，例如，苯甲酸、醇如乙醇，和 羟基苯甲酸酯。抗氧化剂可包括，例如，丁基化羟基茴香醚(BHA)、丁基化羟基甲苯(BHT)、 生育酚(如维生素E)和抗坏血酸(维生素C)。 [0190] V.剂型 [0191] A.概览 [0192] 本文所述的组合物包括任何合适形式，包括液体或粉末。粉末状组合物可以是纯粉末，或者可以是胶囊、片剂等形式。粉末可以散装(如装在含有足量益生素或其它物质的 容器中，以使对象能够坚持遵循整个益生素剂量递增疗程或疗程的一部分)，或可以形成单 独包装(如含有一剂益生素和其它组分的包装，或者含有益生素治疗方案中某特定日需要 的益生素和其它成分的剂量的包装)。如果散装，那么粉末可以装入任何合适容器，如小包 装、药囊、筒、安瓿、小模具或小瓶中。该容器也可包括尺寸适合测量和供应包含在粉末中的 一剂或多剂益生素和任选的其它成分的一个或多个小匙或类似供应装置。液体组合物在合 适液体如水或缓冲液中含有益生素和任选的其它成分。液体组合物可以散装形式提供(如 装在含有足量益生素或其它物质的容器中，以使一个需要的对象能够坚持遵循整个益生素 剂量递增疗程或疗程的一部分)，或可以形成单独容器如罐、小瓶、软包装等(如在合适液 体中含有一剂益生素和其它组分的容器，或者含有益生素治疗方案中某特定日需要的益生 素和其它成分的剂量的容器)。该容器也可包括尺寸适合测量和供应包含在液体中的一剂 或多剂益生素和任选的其它成分的一个或多个量杯或类似供应装置。 [0193] B.口服剂型和组分 [0194] 本发明的一方面提供用于口服递送给需要的对象的方法和组合物。在一个实施方式中，配制组合物以便将包含益生素的组合物递送给需要的对象。在另一实施方式中，配制 组合物以便将包含益生素和益生菌的组合物递送给需要的对象。 [0195] 1.形式 [0196] 在一个实施方式中，给予固体、半固体、微乳剂、凝胶或液体形式的组合物。这类剂型的例子包括美国专利号3048526、3108046、4786505、4919939，和4950484公开的片剂 形式；美国专利号4904479、6482435、6572871和5013726公开的凝胶形式；美国专利号 4800083、4532126、4935243和6258380公开的胶囊形式；或美国专利号4625494、4478822 和5610184公开的液体形式；上述各篇文献通过引用全文纳入本文。 [0197] 可口服使用的组合物形式包括片剂、明胶制成的推入契合型胶囊，以及明胶和增塑剂(如甘油或山梨糖醇)制成的密封软胶囊。片剂可以通过与任选的一种或多种辅助成 份压制或模塑来制作。压制片剂的制作方法可以是在合适的机器中将任选与粘合剂(如， 聚维酮，明胶，羟丙基甲基纤维素)、惰性稀释剂、防腐剂、抗氧化剂、崩解剂(如淀粉乙醇酸 钠、交联聚维酮、交联羧甲基纤维素钠)或润滑剂、表面活性或分散剂混合的诸如粉末或颗 粒等自由流动形式的活性成分进行压制。模塑片剂的制作方法可以是在合适的机器中将用 惰性液态稀释剂湿润的粉末状化合物的混合物进行模塑。片剂可任选地包衣或刻痕，并可 配制成能够缓释或控释其中活性成分的形式。片剂可任选具有肠溶衣，以便在除胃以外的 肠道某部分(如结肠、低位肠道)释放。所有的口服制剂可以适合该给药方式的剂量给药。 推入配合胶囊可含有活性成分，该活性成分可与填充剂如乳糖、粘合剂如淀粉、和/或润滑 剂如滑石粉或硬脂酸镁以及任选的稳定剂混合。在软胶囊中，活性化合物(益生素或益生 菌)可溶解或悬浮于合适液体，如脂肪油、液体石蜡或液体聚乙二醇中。此外，可加入稳定 剂。糖衣剂芯体具有合适包衣。出于这种目的，可使用浓缩糖溶液，其中可任选地含有阿拉 伯胶、滑石粉、聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆凝胶、聚乙二醇和/或二氧化钛、漆溶液和合适的有 机溶剂或溶剂混合物。可将染料或颜料加入片剂或糖衣剂包衣中，用于标示或表征活性化 合物剂量的不同组合。 [0198] 口服使用的制剂也可制备成其中混有活性成分与惰性固体稀释剂如碳酸钙、磷酸钙或高岭土的硬明胶胶囊，或其中混有活性成分与水溶性载体如聚乙二醇或油性介质(如 花生油、液体石蜡或橄榄油)的软明胶胶囊。 [0199] 口服液体制剂可以是(例如)水性或油性混悬剂、溶液剂、乳剂、糖浆或酏剂的形式，或者可以是临用前用水或其他合适载体重建的干燥产品。这类液体制剂可含有常用添 加剂，例如助悬剂，如山梨糖醇、甲基纤维素、葡萄糖糖浆、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶或氢化食用油；乳化剂，如卵磷脂、去水山梨糖醇单油酸酯、阿拉伯胶；非 水性运载体(可包括食用油)，如杏仁油；油酯如甘油、丙二醇或乙醇；防腐剂，如对羟基苯 甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或者山梨酸，如果需要还含有常用调味剂或着色剂。 [0200] 在一个实施方式中，提供的益生素组合物包括软凝胶制剂。软凝胶剂可含有包裹液体内容物的明胶基外壳。该外壳可由明胶、增塑剂(如甘油和/或山梨糖醇)、改性剂、 水、颜料、抗氧化剂或调味剂制成。该外壳可用淀粉或角叉聚糖制成。外层可以是肠溶衣。 在一个实施方式中，软凝胶制剂可包含被明胶层覆盖的水或油溶性组合物(例如益生素组 合物)填充溶液或悬液。 [0201] 肠溶衣可控制益生素组合物在消化系统中吸收的位置。例如，可设计肠溶衣，以使益生素组合物在胃中不溶出，而在到达小肠后溶出。肠溶衣可以在低pH下(如胃中)稳 定，并且可以在较高pH下(例如小肠中)溶出。可用于制备肠溶衣的物质包括，例如，藻 酸、醋酸邻苯二甲酸纤维素、塑料、蜡、紫胶和脂肪酸(如硬脂酸、棕榈酸)。肠溶衣的描述参 见例如，美国专利号5,225,202、5,733,575、6139875、6420473、6455052和6569457，其通过 引用全文纳入本文。肠溶衣可以是水性肠溶衣。可用于肠溶衣的聚合物的例子包括例如， 紫胶(商品名艾姆包衣(EmCoat)120N、马耳包衣(Marcoat)125)；醋酸邻苯二甲酸纤维素 TM (商品名水性包衣(aquacoat)CPD 斯皮菲林(Sepifilm) LP、克鲁斯(Klucel) 水性 包衣(Aquacoat) ECD和麦塔糖(Metolose) )；邻苯二甲酸聚乙烯乙酸酯(商品名速雷 太(Sureteric) )；和甲基丙烯酸(商品名尤特奇(Eudragit) )。 [0202] 在一个实施方式中，将有肠溶衣的益生素组合物给予对象。在另一实施方式中，将有肠溶衣的益生菌组合物给予对象。在另一实施方式中，将有肠溶衣的益生菌和益生素组 合物给予对象。在一个实施方式中，可用肠溶衣将益生菌给予对象。胃具有可杀死益生菌 的酸性环境。在益生菌通过胃和小肠时，肠溶衣可保护益生菌。 [0203] 肠溶衣可用于(1)防止胃液与活性物质反应或破坏活性物质，(2)防止活性物质在抵达肠道前被稀释，(3)保证活性物质在制剂通过胃之后才释放，和(4)防止制剂中所含 的活细菌不被胃中的低pH值杀死。 [0204] 肠溶衣也可用于避免口服制剂中所含物质引起的胃粘膜刺激或损伤，以及抵消或防止在胃中形成或释放具有不良气味或味道的物质。最后，这类包衣可用于防止摄入口服 制剂时恶心或呕吐。 [0205] 在一个实施方式中，以具有肠溶衣的片剂、胶囊、或囊片的形式提供益生素组合物。在一个实施方式中，设计肠溶衣，以使片剂、胶囊或囊片在胃中保持完整。设计肠溶衣， 以使该制剂在胃的酸性条件下保持完整，并且在肠道的非酸性条件中降解，从而释放药物。 [0206] 软凝胶递送系统也可掺入磷脂或聚合物或天然胶，以将组合物例如益生素组合物包裹在具有外包衣的明胶层中，从而产生所需的延迟/控制释放效果，如肠溶衣。 [0207] 软凝胶填充制剂的pH可以是2.5-7.5。 [0208] 软凝胶制剂可通过自动化方式紧密密封。软凝胶制剂可容易被吞咽，能够用颜色和若干形状进行产品标示，能够实现剂量的统一、精确性和准确性，能够安全地防止掺假， 提供良好的可利用性能和快速吸收性能，并提供抵御污染、光照和氧化的性能。而且，软凝 胶制剂可避免内容物封装引起的不良味道。 [0209] 包含软凝胶制剂的组合物可以是任何不同的尺寸，包括例如，圆形、长方形、椭圆形、筒状、液滴状或栓剂。 [0210] 在一个实施方式中，以包含有效量的益生素和一种或多种本文所述控释赋形剂的剂型提供组合物。合适的改良释放剂型载体包括但不限于：亲水性或疏水性基质装置、水 溶性分离层包衣、肠溶衣、渗透装置、多颗粒装置(multi-particulate devices)和其组合。 在一个实施方式中，剂型是片剂、囊片、胶囊或棒棒糖。在另一实施方式中，剂型是液体、口 服混悬剂、口服溶液剂或口服糖浆剂。在又一实施方式中，剂型是明胶胶囊、软明胶胶囊或 硬明胶胶囊。 [0211] 在另一实施方式中，以泡腾剂型提供包含益生素的组合物。该组合物也可包含非控释的赋形剂。 [0212] 在另一实施方式中，以具有至少一种可促进益生素释放的组分的剂型提供包含益生素的组合物。在另一个实施方式中，所述剂型能够实现以间隔0.1至24小时的至少连续 两次脉冲释放形式不连续地释放化合物。该组合物可包含一种或多种控释和非控释的赋形 剂，如适合可破坏半透膜的赋形剂以及可溶胀物质。 [0213] 在另一实施方式中，以肠溶衣剂型提供包含益生素的组合物。该组合物也可包含非控释的赋形剂。 [0214] 在另一实施方式中，以用于口服给予需要对象的剂型提供包含益生素的组合物，所述剂型包含一种或多种药学上可接受的赋形剂或载体，其包封在中间反应层(含有用碱 部分中和的胃液耐受性聚合物层材料并具有阳离子交换量)和胃液耐受性外层中。 [0215] 在一个实施方式中，以用于口服给予的肠溶衣颗粒形式提供包含益生素的组合物。该组合物还可包含纤维素、磷酸氢二钠、羟丙基纤维素、羟丙甲纤维素、乳糖、甘露醇和 月桂基硫酸钠。 [0216] 在另一实施方式中，以用于口服给予的肠溶衣小丸形式提供包含益生素的组合物。该组合物还可包含单硬脂酸甘油酯40-50、羟丙基纤维素、羟丙甲纤维素、硬脂酸镁、C 型甲基丙烯酸共聚物，聚山梨酯80、糖丸、滑石粉和柠檬酸三乙酯。 [0217] 在一个实施方式中，以用于口服给予的肠溶衣颗粒形式提供包含益生素的组合物。该组合物还可包含巴西棕榈蜡、交聚维酮、二乙酰化甘油一酯、乙基纤维素、羟丙基纤维 素、邻苯二甲酸羟丙甲纤维素、硬脂酸镁、甘露醇、氢氧化钠、硬脂酰醇富马酸钠、滑石粉、二氧化钛和黄色氧化铁。 [0218] 在另一实施方式中，包含益生素的组合物还可包含硬脂酸钙、交聚维酮、羟丙基甲基纤维素、氧化铁、甘露醇、甲基丙烯酸共聚物、聚山梨酯80、聚维酮、丙二醇、碳酸钠、月桂基硫酸钠、二氧化钛和柠檬酸三乙酯。 [0219] 本文提供的组合物可以是单位剂型或多剂量形式。如本文所用的单位剂型指物理上分离且单独包装的适合给予需要的人或非人动物对象的单位。各单位剂量可含有足以产 生所需疗效的预定量的活性成分，以及其它药物载体或赋形剂。单位剂型的例子包括但不 限于：安瓿、注射器和单独包装的片剂和胶囊。单位剂型可以部分形式或其多重形式给予。 多剂量形式是包装在一个容器中的多个相同的单位剂型，它们可以分开的单位剂型形式给 予。多剂量形式的例子包括但不限于：片剂或胶囊的小瓶、药瓶，或者数品脱或数加仑的药 瓶。在另一实施方式中，多剂量形式包含不同的药物活性剂。例如，可提供包含第一剂量元 件和第二剂量元件的多剂量形式，所述第一剂量元件包括含有益生素的组合物，所述第二 剂量元件包括乳糖或益生菌，它们可以是调释形式。 [0220] 在本例中，一对剂量元件可构成一个单位剂量。在一个实施方式中，提供包括多个单位剂量的药盒，其中各单位包括第一剂量元件和第二剂量元件，所述第一剂量元件包括 含有益生素的组合物，所述第二剂量元件包括益生菌、乳糖或二者，它们可以是调释形式。 在另一实施方式中，所述药盒还包括一组说明。 [0221] 在一个实施方式中，可将组合物配制成用于口服给药的各种剂型。该组合物也可配制成调释剂型，包括立即、延迟、延长、长期、持续、脉冲、控制、延长、加速、快速、靶向、程序性释放，以及胃滞留剂型。这些剂型可按照已知的方法和技术制备(参见《雷明顿药剂科 学和实践》(Remington：The Science and Practice of Pharmacy)，同上；《调释药物递送 技术》(Modified-Release Drug Deliver Technology)，Rathbone等编，《药物和制药科学》 (Drugs and the Pharmaceutical Science)，MD公司(Marcel Dekker，Inc.)：纽约州的纽 约，2002；第126卷，通过引用全文纳入本文)。 [0222] 在一个实施方式中，组合物是一种或多种剂型。例如，组合物可以固体或液体形式给予。固体剂型的例子包括但不限于：胶囊或片剂中的独立单位，作为粉末或颗粒，或者存 在于通过模压常规形成的片剂中。可通过在合适机器中压制三种或更多种试剂以及药学上 可接受的载体制备这类压制片剂。模塑片剂可任选包衣或刻痕，上面刻上标记，并可通配制 成引起包含益生素的组合物立即、几乎立即、缓慢、控制或延长释放。而且，本发明剂型可包 含本领域已知的可接受载体或盐，例如美国制药联合会的《药物赋形剂手册》(Handbook of Pharmaceutical Excipients，American Pharmaceutical Association)(1986)所述，其通 过引用全文纳入本文。 [0223] 在一个实施方式中，将有效量的包含益生素的组合物与药物赋形剂混合形成包含本文所述化合物的均匀混合物的固体预配制组合物。当这些组合物称作“均匀”时，指试剂 均匀分散在整个组合物中，从而该组合物可再细分成单位剂型如片剂、囊片或胶囊。然后， 可将此种固体预配制组合物细分成包含(例如)约1g至约20mg益生素组合物的上述类型 的单位剂量形式。在囊片、胶囊或片剂的情况下，可配制益生素组合物以完整吞下(例如用 水)。 [0224] 本文所述的组合物可以是液体形式。该液体制剂可包含例如，溶液包水和/或混悬液形式的试剂；和包含聚乙氧基化蓖麻油、醇和/或聚氧乙烯化去水山梨糖醇单油酸酯 且具有或没有调味剂的载体。各剂型包含有效量的活性剂，并且可任选包含药学上惰性物 质，如常规赋形剂、运载体、填充剂、粘合剂、崩解剂、pH调节剂、缓冲剂、溶剂、增溶剂、甜味剂、着色剂和口服给予药物剂型中可包含的任何其它非活性物质。这类运载体和添加剂 的例子可参见《雷明顿药物科学》(Remington′s Pharmaceutical Sciences)，第17版 (1985)。 [0225] 2.生产 [0226] 本文所述剂型可采用本领域技术人员熟知的方法制备。例如，在生产片剂时，可将有效量的益生素均匀地分散到一种或多种赋形剂中，例如，利用高剪切造粒、低剪切造粒、 流化床造粒或混合直接压制进行。赋形剂包括稀释剂、粘合剂、崩解剂、分散剂、润滑剂、助 流剂、稳定剂、表面活性剂和着色剂。稀释剂也称为“填充剂”，可用于提高片剂的体量，以便为压制提供可操作的大小。稀释剂的非限制性例子包括乳糖、纤维素、微晶纤维素、甘露醇、 干淀粉、水解的淀粉、糖粉、滑石粉、氯化钠、二氧化硅、二氧化钛、二水合磷酸二钙、硫酸钙、碳酸钙、氧化铝和高岭土。粘合剂可使片剂具有粘合特性，并可用于帮助片剂在压制后保持 完整。合适粘合剂的非限制性例子包括淀粉(包括玉米淀粉和预胶化淀粉)、明胶、糖(如 葡萄糖、右旋糖、蔗糖、乳糖和山梨糖醇)、纤维素、聚乙二醇、蜡，天然和合成胶如阿拉伯胶、黄芪胶、藻酸钠，以及合成聚合物如聚甲基丙烯酸酯和聚乙烯吡咯烷酮。润滑剂也可有利于 片剂生产；其非限制性例子包括硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸、甘油山嵛酸酯和聚乙二醇。崩 解剂可促进片剂在给药后崩解，其非限制性例子包括淀粉、藻酸、交联聚合物，如交联聚乙 烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠、淀粉乙醇酸钾或钠、粘土、纤维素、淀粉、天然胶等。合适助流剂的非限制性例子包括二氧化硅、滑石粉等。稳定剂可抑制或阻滞药物降解反应，包括 氧化反应。表面活性剂也可包括且可以是阴离子型、阳离子型、两性或非离子型。如果需要， 片剂也可包含无毒辅助物质，如pH缓冲剂、防腐剂如抗氧化剂、湿润剂或乳化剂、增溶剂、 包衣剂、调味剂等。 [0227] 在一个实施方式中，软凝胶制剂用明胶物质制成外壳，并用包含一种或多种物质(例如益生素和/或益生菌)的组合物制成胶囊填充物。为了制备明胶物质，可将明胶粉末 与水和甘油混合，加热，并在真空下搅拌。可利用汽轮混合机向熔融的明胶中加入添加剂， 例如调味剂或着色剂，并转移到移动容器中。可将明胶物质保存在温度恒定的有蒸汽夹套 的储存容器中。 [0228] 当熔融凝胶泵入机器和在机器的任一侧上形成两条薄凝胶带时，可开始包封过程。然后，这些带可通过一系列辊筒和一组模具，确定胶囊的大小和形状。可将填充组合物 例如益生素和/或益生菌填充组合物送入容积式泵，该泵可以将填充物分剂并注射到两条 明胶带之间，然后通过加热和加压将其密封在一起。为了除去多余水分，可通过传送器将该 胶囊送入转筒式干燥机，在此处除去一部分水。然后，可将胶囊放置在(例如)托盘上，可 层叠并转移到干燥室中。在干燥室中，使干燥空气通过胶囊，以除去任何多余的水分。 [0229] 3.释放制剂 [0230] 有效量的益生素组合物的立即释放制剂可包含一种或多种能够快速释放药学上活性剂(例如，给药后1分钟至1小时)的赋形剂组合。在一个实施方式中，赋形剂可以是微 晶纤维素、羧甲基纤维素钠、淀粉乙醇酸钠、玉米淀粉、胶体二氧化硅、月桂硫酸钠(Sodium Laurel Sulphate)、硬脂酸镁、Prosolve SMCC(HD90)、交联羧甲基纤维素钠、交聚维酮NF、 微晶纤维素(Avicel)PH200和这类赋形剂的组合。 [0231] “控制释放”制剂(也称为持续释放(SR)、延长释放(ER、XR或XL)、时间释放或定时释放、控制释放(CR)、或连续释放)指在将剂型给予对象后的特定所需时间点从该 剂型释放益生素组合物。控制释放制剂可包含一种或多种赋形剂，包括但不限于：微晶纤 维素、羧甲基纤维素钠、淀粉乙醇酸钠、玉米淀粉、胶体二氧化硅、月桂硫酸钠、硬脂酸镁、 Prosolve SMCC(HD90)、交联羧甲基纤维素钠、交聚维酮NF或微晶纤维素PH200。通常，控 制释放包括持续而完全的释放。在所需和指定的时间在大肠中突然完全释放或者例如通过 使用肠溶衣进行释放都被认为是控制释放。控制释放可以在预定的时间或在消化道内预定 的位置进行。不应包括在吞咽普通片剂时的被动、无控制过程。例子包括但不限于美国专 利 号 3,845,770；3,916,899；3,536,809；3,598,123；4,008,719；5,674,533；5,059,595； 5,591,767；5,120,548；5,073,543；5,639,476；5,354,556；5,733,556；5,871,776； 5,902,632；和5,837,284所述，上述各篇文献通过引用全文纳入本文。 [0232] 在一个实施方式中，控释剂型开始释放并在延长时间段内继续释放。释放可以几乎立即开始，或可持续进行。释放可以是恒定的，可随时间增加或减少，可以是脉冲式，可以 是连续或间歇式等。然而，从控释剂型释放至少一种药学上活性剂通常会超过作为普通被 动释放片剂摄入药物的释放时间。因此，例如，虽然未包衣阿司匹林片剂的至少一种药学上 活性剂的全部剂量应该在(例如)4小时内释放，但控释剂型可在6小时、12小时或更长时 间上释放较少量的阿司匹林。本文所述的组合物和方法涉及的控制释放通常指释放进行6 小时或更长时间，例如12小时或更长。 [0233] 在另一实施方式中，控释剂型指从组合物或剂型释放药剂时，该药剂按照所需曲线在延长时间上释放。在一个实施方式中，控制释放导致药剂在进入胃后20-720分钟内溶 出。在另一实施方式中，如果在吞服后20-720分钟内药剂溶出，则说明发生控制释放。在 另一实施方式中，如果在进入肠道后20-720分钟内药剂溶出，则说明发生控制释放。在另 一实施方式中，控制释放导致给药至少1小时后，药剂基本完全溶出。在另一实施方式中， 控制释放导致口服给药至少1小时后，药剂基本完全溶出。例如，控制释放组合物能够在延 长时间上，按照预定曲线将药剂递送给需要的对象。与常规快速释放剂型相比，这种释放速 率可在延长时间上提供有效治疗水平的药剂，从而提供较长的药理学或诊断学反应。这种 较长的反应时间能提供许多立即释放剂型无法获得的内在益处。与本文所述的溶出曲线联 用时，术语“控制释放”指按照本文所述方法和组合物制成的剂型总量的全部或不足全部在 大于1小时的时间段递送活性剂。 [0234] 在一个方面，控制释放指从组合物或剂型延迟释放药剂，其中所述药剂按照所需曲线在一段时间后进行释放。 [0235] 在控释口服剂型中存在时，本文所述组合物可以明显低于立即释放形式的每日剂量水平给予。 [0236] 在一个实施方式中，控制释放层能够在口服给药后约5-10分钟内，在需要的对象的胃中释放约30-40％其所含的一种或多种活性剂(如益生素或益生菌)。在另一实施方 式中，控制释放层能够在口服给药后约40分钟内，释放约90％的一种或多种活性剂(如益 生素或益生菌)。 [0237] 在一些实施方式中，所述控制释放层包含一种或多种赋形剂，包括但不限于硅化微晶纤维素(如HD90)、交联羧甲基纤维素钠(AC-Di-Sol)、羟甲基丙基纤维素、硬脂酸镁或 硬脂酸。在一个实施方式中，控释制剂的重量约为100mg至3g。 [0238] 适合给予本文所述化合物的药物载体或运载体包括本领域技术人员已知适合所述特定给药方式的所有载体。此外，该组合物可包含不破坏所需作用的一种或多种组分，或 者能补充所需作用或具有另一种作用的组分。 [0239] 在另一实施方式中，将有效量的益生素配制成立即释放形式。在该实施方式中，所述立即释放形式的含量可以有效缩短达到最大血液浓度的时间。例如，某些立即释放药物 制剂可参见题为“粉末压实和包裹”(Powder Compaction and Enrobing)的美国专利公开 US 2005/0147710A1，通过引用全文纳入本文。 [0240] 本文所述剂型也可以采用通过各种方法生产的药物颗粒形式，这些方法包括但不限于：高压匀化、湿法和干法球磨或小颗粒沉淀(纳米喷雾)。制备合适粉末制剂的其它方 法是制备活性成分和赋形剂的溶液，然后沉淀、过滤和粉碎，或接着通过冻干除去溶剂，然 后将粉末粉碎至所需粒度。 [0241] 另一方面，该剂型可以是泡腾剂型。泡腾剂指与液体(包括水和唾液)混合时产生气体的剂型。一些泡腾剂(或泡腾对)通过所述泡腾崩解剂接触口中的水或唾液时发生 的化学反应产生气体。该反应可以是可溶性酸源和碱金属单碳酸盐或碳酸盐源的反应结 果。与水或唾液接触后，这两种普通化合物的反应产生二氧化碳气体。泡腾对(或单独的酸 和碱)可包有溶剂保护剂或肠溶衣，以防止发生不成熟的反应。此对物质也可与先前冻干 的颗粒(如益生素)混合。所述酸源可以是对人摄入安全的任何酸源，并且通常可以包括 食物酸、酸和沸石蚁酸，例如：柠檬酸、酒石酸、柔和酸、富马酸、己二酸和琥珀酸。碳酸盐源包括干的固体碳酸盐和碳酸氢盐，例如，优选碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸氢钾和碳酸钾、碳酸镁 等。也可包括能够产生氧气或其它气体并且对人摄入安全的反应物。在一个实施方式中， 采用柠檬酸和碳酸氢钠。 [0242] 另一方面，所述剂型可以是糖果形式(如基质)，如棒棒糖或锭剂。在一个实施方式中，将有效量的益生素分散到糖果基质中。在一个实施方式中，糖果基质包含一种或多种 糖(如右旋糖或蔗糖)。在另一实施方式中，糖果基质是无糖基质。具体糖果基质的选择会 有很多变化。可采用传统的甜味剂如蔗糖，或者可利用适用于糖尿病患者的糖醇，如山梨糖 醇或甘露醇。也可以将其它甜味剂如阿斯巴甜掺入本文所述的组合物。糖果基料可以非常 软且快速溶解，或者可以是坚硬而缓慢溶解的。各种形式在不同情况下具有优势。 [0243] 可将包含有效量益生素的糖果料组合物口服给予需要的对象，以便有效量的益生素可随着糖果料溶解和被吞咽而释放到对象口中。需要的对象包括成人或儿童。 [0244] 在一个实施方式中，制备包含一层或多层的糖果料，所述层可包含不同含量或溶出速率的益生素。在一个实施方式中，多层糖果料(如棒棒糖)包含益生素浓度不同于一 个或多个内层的外层。这种药物递送系统具有各种应用。 [0245] 基质和基质中药物浓度的选择可能是与药物摄入速率有关的重要因素。快速溶解的基质可将药物递送到对象口中，其吸收快于缓慢溶解的基质。相似地，与含有低浓度 益生素的糖果相比，在给定时间中含有高浓度益生素的糖果基质可释放更多益生素。在 一个实施方式中，采用糖果基质递送益生素，如美国专利号4671953或美国申请公开号 2004/0213828(通过引用全文纳入本文)所述。 [0246] 本文所述剂型也可以采用通过各种方法生产的药物颗粒形式，这些方法包括但不限于：高压匀化、湿法和干法球磨或小颗粒沉淀(如恩吉马纳米喷雾(nGimat′s NanoSpray))。用于制备合适粉末制剂的其它方法是制备活性成分和赋形剂的溶液，然 后沉淀、过滤和粉碎，或接着通过冻干除去溶剂，然后将粉末粉碎至所需粒度。在一个实 施方式中，药物颗粒的最终大小为3-1000μM，如至多3、4、5、6、7、8、9，10、20、30、40、50、 60、70、80、90、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、 900、950、1000μM。在另一实施方式中，药物颗粒的最终大小为10-500μM。在另一实施 方式中，药物颗粒的最终大小为50-600μM。在另一实施方式中，药物颗粒的最终大小为 100-800μM。 [0247] 在一个实施方式中，提供包含益生素组合物的口服剂型(如粉末剂、片剂或胶囊剂)，所述益生素组合物包含约0.7gGOS、约0.2g乳糖、约0.01g葡萄糖、约0.01g半乳糖、 约0.1-0.2g粘合剂、约0.1-0.2g分散剂、约0.1-0.2g增溶剂，其中GOS由约1-25％二糖、 约1-25％三糖、约1-25％四糖和约1-25％五糖构成。所述口服剂型可以是粉末剂、胶囊剂 或片剂形式。适量的本领域已知的粘合剂、分散剂和增溶剂可用于制备口服片剂或胶囊剂。 [0248] 在另一实施方式中，提供包含益生素组合物的口服剂型(如粉末剂、片剂或胶囊剂)，所述益生素组合物包含约1-99.9％重量的GOS、约0.5-20％重量的乳糖、约0.1-2％重 量的葡萄糖、约0.1-2％重量的半乳糖、约0.05-2％重量的粘合剂、约0.05-2％重量的分散 剂、约0.05-2％重量的增溶剂，其中GOS由约1-25％重量的二糖、约1-25％重量的三糖、约 1-25％重量的四糖和约1-25％重量的五糖构成。 [0249] 在另一实施方式中，提供包含益生素组合物的口服剂型(如粉末剂、片剂或胶囊剂)，所述益生素组合物包含约1、10、20、30、40、50、60、70、80、90、95、99.5、100％重量的GOS，约0、5、10、15或20％重量的乳糖，约0.1、0.5、1或2％重量的葡萄糖，约0.1、0.5、1或 2％重量的半乳糖，约0.05、0.1、0.5、1或2％重量的粘合剂，约0.05、0.1、0.5、1或2％重量的分散剂，约0.05、0.1、0.5、1或2％重量的增溶剂，其中GOS由约1、5、10、15、20或25％重量的二糖，约1、5、10、15、20或25％重量的三糖，约1、5、10、15、20、或25％重量的四糖和约 1、5、10、15、20或25％重量的五糖构成。 [0250] 在另一实施方式中，提供包含益生素组合物的口服剂型，其中所述口服剂型是糖浆剂。所述糖浆剂可包含约1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、 55％、60％、65％、70％、75％、80％或85％固体。所述糖浆剂可包含约15％、20％、25％、 30％、35％、40％、45％或50％液体，例如液体水。所述固体可包含益生素组合物。所述固体 可以是例如，约1-96％、10-96％、20-96％、30-96％、40-96％、50-96％、60-96％、70-96％、 80-96％或90-96％的益生素组合物。所述固体可以是例如，约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、 12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、 37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、 62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、 87、88、89、90、91、92、93、94、95或96％的益生素组合物。在一个实施方式中，益生素组合物包含GOS。在另一实施方式中，益生素组合物包含GOS和另一种益生素。在另一实施方式 中，益生素组合物包含GOS和菊糖或GOS和FOS。 [0251] 在一个实施方式中，软凝胶胶囊为约0.25mL、0.5mL、1.0mL、1.25mL、1.5mL、1.75mL或2.0mL。在另一实施方式中，软凝胶胶囊包含约0.1g至2.0g益生素组合物。在另一实施方式中，软凝胶胶囊包含约0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、 1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9或2.0g益生素组合物。在一个实施方式中，所述益生素组合物 包含GOS。在另一实施方式中，软凝胶胶囊包含GOS和菊糖或FOS。 [0252] 在另一实施方式中，提供不含防腐剂的益生素组合物。在另一实施方式中，提供不含抗氧化剂的益生素组合物。在另一实施方式中，提供不含防腐剂或抗氧化剂的益生素组 合物。在一个实施方式中，包含GOS的益生素组合物不含防腐剂或抗氧化剂。 [0253] 在另一实施方式中，将益生素组合物配制成粘稠液体。在另一实施方式中，配制益生素组合物，以使其水含量低到足以不支持微生物生长。在另一实施方式中，将益生素组合 物配制成凝胶胶囊中不含防腐剂的粘稠液体。在另一实施方式中，包含GOS的益生素组合 物是粘稠液体。在另一实施方式中，益生素组合物包含不支持微生物生长的高百分比GOS。 在另一实施方式中，益生素组合物包含GOS和菊糖或FOS。 [0254] 在另一实施方式中，提供包含益生素组合物的口服剂型，其中所述口服剂型是软凝胶剂。在一个实施方式中，所述软凝胶剂包括糖浆剂。在一个实施方式中，所述糖浆剂包 含益生素组合物。在一个实施方式中，所述益生素组合物包含GOS。在另一实施方式中，所述 益生素组合物包含大于80％的GOS。在另一实施方式中，所述益生素组合物包含80-99.9％ GOS。在另一实施方式中，所述益生素组合物包含大于80％的GOS。在另一实施方式中，所 述益生素组合物包含约80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、 99或99.9％GOS。 [0255] 在一个实施方式中，配制GOS组合物以便用软凝胶胶囊递送。在一个实施方式中，配制成用软凝胶胶囊递送的GOS组合物是高百分比的GOS组合物，如90-100％GOS组合物 (如90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％重量的GOS组合物)。在另一实施方式中，配制成用软凝胶胶囊递送的GOS组合物包含约95％GOS。在另一实施方式中，配制成用软 凝胶胶囊递送的GOS组合物包含约96％GOS。在另一实施方式中，配制GOS组合物，以使其 水含量低到足以不支持微生物生长。在另一实施方式中，将GOS组合物配制成凝胶胶囊中 不含防腐剂的粘稠液体。在另一实施方式中，将GOS组合物配制成凝胶胶囊中不含抗氧化 剂的粘稠液体。在另一实施方式中，所述软凝胶胶囊包含约0.1-2g GOS组合物。 [0256] 在另一实施方式中，可以如美国专利号6,750,331(通过引用全文纳入本文)所述配制益生素组合物。可配制益生素组合物，使其包含寡糖、发泡组分、不溶于水的膳食纤维 或中和组分。在一个实施方式中，益生素组合物可以是咀嚼片的形式。 [0257] 在一个实施方式中，发泡组分可以是选自下组的至少一种成分：碳酸氢钠、碳酸钠和碳酸钙。在一个实施方式中，中和组分可以是选自下组的至少一种成分：柠檬酸、L-酒石 酸、延胡索酸、L-抗坏血酸、DL-苹果酸、乙酸、乳酸和无水柠檬酸。在一个实施方式中，不溶于水的膳食纤维可以是选自下组的至少一种成分：结晶纤维素、小麦麸皮、燕麦麸皮、锥纤 维、大豆纤维和甜菜纤维。所述制剂可包含蔗糖脂肪酸酯、糖粉、果汁粉和/或调味物质。 [0258] 本发明提供的制剂可包含选自各种已知添加剂的添加剂组分。这种添加剂包括例如，糖(除寡糖外)、糖醇、甜味剂等赋形剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、增稠剂、表面活性剂、电解质、调味剂、着色剂、pH调节剂、流动性改进剂等。所述添加剂的具体例子包括小麦淀 粉、马铃薯淀粉、玉米淀粉、糊精等淀粉；蔗糖、葡萄糖、果糖、麦芽糖、木糖、乳糖等糖(除寡糖外)；山梨糖醇、甘露醇、麦芽糖醇、木糖醇等糖醇；磷酸钙、硫酸钙等赋形剂；淀粉、糖、明胶、阿拉伯胶、糊精、甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、羟丙基纤维素、黄原胶、果胶、黄芪树胶、酪蛋白、藻酸等粘合剂和增稠剂；亮氨酸、异亮氨酸、L-缬氨酸、糖酯、硬化油、硬脂酸、硬脂酸镁、滑石粉、聚乙二醇等润滑剂；CMC、CMC-Na、CMC-Ca等崩解剂；聚山梨酯、卵磷脂等表面活性剂；阿斯巴甜、阿力甜(alitame)等二肽；二氧化硅等流动性改进剂；和甜 叶菊(stevia)、糖精等甜味剂。这些添加剂的含量可根据与其它组分的关系和制剂特性、生 产方法等因素适当选择。 [0259] 在一个实施方式中，GOS组合物是可咀嚼口服制剂。在一个实施方式中，所述可咀嚼制剂可包含约1-99.9％GOS。在一个实施方式中，GOS组合物包含约80％GOS、约5％ L-抗坏血酸、约2％无水柠檬酸、约3％碳酸氢钠、约3％碳酸钙、约2％蔗糖脂肪酸、约3％ 果汁粉末和约2％碳酸钾。 [0260] 在另一实施方式中，GOS组合物包含约85％GOS、约5％L-抗坏血酸、约3％碳酸氢钠、约2％碳酸钠、约2％蔗糖脂肪酸酯、约2％果汁粉末和约1％碳酸钾。 [0261] 在另一实施方式中，GOS组合物包含约90％GOS、约2％L-抗坏血酸、约1％无水柠檬酸、约2％碳酸氢钠、约2％碳酸钠、约2％蔗糖脂肪酸酯和约1％碳酸钾。 [0262] 在另一实施方式中，GOS组合物包含约95％GOS、约2％L-抗坏血酸、约1％碳酸氢钠和约2％果汁粉末。在另一实施方式中，GOS组合物包含约95％GOS和约5％L-抗坏 血酸、无水柠檬酸、碳酸氢钠、碳酸钙、蔗糖脂肪酸、果汁粉末或碳酸钾。 [0263] 在另一实施方式中，GOS组合物包含约95％GOS和约5％L-抗坏血酸、无水柠檬酸、碳酸氢钠、碳酸钙、蔗糖脂肪酸、果汁粉末和碳酸钾。 [0264] VI.治疗 [0265] A.乳糖不耐受 [0266] 本发明提供可用于减轻乳糖不耐受症状和改善整体胃肠道(GI)健康状况的方法和益生素组合物。乳糖不耐受症状包括排气、气胀、腹泻、腹痛、腹部绞痛和呕吐。与GI有 关的较轻微的消化问题包括偶发性气胀、腹泻、便秘、排气、胃灼热或肠胃不适。本文所述的 方法和组合物可用于，例如，通过结肠适应减轻或消除这些症状中的一种或多种。预计这些 组合物能调节结肠微生物群，使得对乳糖和其它可发酵糖的耐受性提高。而且，这些组合物 可以使结肠微生物群(包括已知可提高个体对可发酵糖的耐受能力的微生物)通过摄入该 组合物得到规律性补充。肠道和结肠微生物群的适应能改善肠道微生物群的组成，并且可 提高对含乳糖食品的摄入能力。例如，通过有规律地摄入益生素组合物可提高个体对乳制 品的总体耐受程度。此种结肠微生物群改变可用于减轻因摄入乳制品或其它含乳糖食品造 成的气胀、腹泻、胃胀气和疼痛，和/或肠胃气胀。在一个实施方式中，公开了一种治疗乳糖 不耐受的方法。在另一实施方式中，公开了一种治疗至少一种乳糖不耐受症状的方法。 [0267] 至少存在三种类型的乳糖不耐受。第一种乳糖不耐受是由乳糖酶生成随对象年龄增长而降低造成。第二种乳糖不耐受可能由疾病、手术或小肠损伤后对象小肠的乳糖酶生 成降低引起。第二种乳糖不耐受可能由克罗恩病、乳糜泻或胃肠炎引起。此种类型的乳糖 不耐受可以是暂时或是永久的。第三种类型的乳糖不耐受是先天性乳糖不耐受，其中对象 生来不耐受乳糖。使人更倾向于发生乳糖不耐受的风险因素包括例如，年龄(乳糖不耐受 通常在5岁后发病)、种族(乳糖不耐受在黑人、亚洲人、西班牙人和美洲印第安人群中更常 见)和早产(在怀孕28-32周出生的婴儿)。 [0268] B.测试乳糖不耐受 [0269] 可间接或直接检测乳糖不耐受。间接检测方法包括但不限于：呼吸氢气测试、粪便酸度检测、血糖检测或牛奶刺激检测。在呼吸氢气测试中，在摄入一定量乳糖(通常是15g) 后，测量呼吸以确定产生的氢气量。通过饮用乳糖混合物给予乳糖，以三个一小时时间间 隔，让所述对象呼入真空密封的收集管中。呼吸中高水平的氢气表明乳糖消化不良。在粪 便检测中，测试粪便中的酸含量。在血糖检测中，将预定量的含乳糖产品给予对象后，测试 血液中的葡萄糖(糖)含量。所述直接方法检测粘膜生物活检样品中的乳糖酶活性。 [0270] 通常用粪便酸度检测测试婴儿和幼儿的乳糖不耐受。所述呼吸氢气检测通常不推荐用于幼儿，因为摄入含乳糖饮料后腹泻可能会引起脱水。 [0271] 可用多种方式测试治疗的有效性。可以在治疗之前和之后使用前述的常规检测。或者或另外，可以在治疗之前和之后检测或评估能在一种或多种症状出现之前给予的含乳 糖产品的量。因此，例如，如果治疗后用含乳糖食品(如乳制品)刺激之后对象平均产氢降 低，则认为该治疗完全或部分有效。 [0272] 更通常，对象不能精确测试氢气量或者采用血糖检测来确定有效性。相反，对象可主观地确定他们可以摄入的含乳糖产品的量，以及这种摄入后发生的症状的类型和程度。 “部分”消除乳糖不耐受症状包括在症状发生之前可以消耗乳糖量的主观增加或测量值增 加。如本文所用，“基本”消除乳糖不耐受症状包括治疗后及出现症状之前可摄入的乳糖或 含乳糖食品的量是治疗前可摄入量的至少约2倍的效果。如本文所用，“完全”或“基本完 全”消除乳糖不耐受症状指治疗后可摄入正常量的乳糖(即对象正常生活所在区域或文化 中普通饮食的乳糖含量)，而不出现症状，或者症状很少发生。 [0273] 在一个实施方式中，需要的对象可摄入半杯(4盎司；约120mL)牛奶而不出现或很少出现乳糖不耐受症状。然而，摄入1杯或更多(约240mL)牛奶引起乳糖不耐受症状，如 排气或腹泻。用本文所述的组合物和/或剂量方案治疗后，对象可在单次给药中摄入1杯 半(约360mL)牛奶，而不发生任何乳糖不耐受症状。该对象基本消除了乳糖不耐受症状。 在另一实施方式中，对象可发现在用本文所述的组合物和/或剂量方案治疗后能摄入其地 理区域或文化区域的正常饮食，而不出现或很少出现乳糖不耐受症状。 [0274] 在另一实施方式中，可通过一种或多种乳糖不耐受症状的减轻百分数确定有效性。在该检测中，用前和后Likert量度测量特定症状或某组症状在治疗之前和之后的严重 程度。示范性症状包括排气、肠胃气胀、腹泻、腹部绞痛、腹痛和呕吐。测定任何一种或一种 以上症状。例如，可请对象按照严重程度递增的顺序用1到5对一种或多种症状分级。在 一个实施方式中，对一组症状分级，并将评级相加；例如，可对排气、肠胃气胀、腹泻、腹痛、腹胀、呕吐、恶心或腹部绞痛分级。在另一实施方式中，可根据对象在用本文所述组合物或 方法治疗前后的评级，计算一种或多种乳糖不耐受症状的变化百分数。在一个实施方式中， 所述组合物是益生素组合物。在一个实施方式中，所述益生素组合物包含GOS。在一个实施 方式中，通过对象报告用含乳糖食品刺激后一种或多种特定症状减少，可认为乳糖不耐受 症状减轻(例如，如果症状减少50％，则乳糖不耐受症状减轻50％)。 [0275] 在另一实施方式中，利用牛奶刺激检测确定对象是否为乳糖不耐受。在牛奶刺激检测中，对象禁食过夜，然后在早晨饮用一杯牛奶。饮用牛奶后3-5小时，不摄入或饮用任 何东西。如果对象在摄入牛奶若干小时内发生一种或多种乳糖不耐受症状，则该对象为乳 糖不耐受。 [0276] 在另一实施方式中，通过进行肠道内膜活检并测定该内膜中的乳糖酶水平来直接检测对象的乳糖不耐受。 [0277] C.乳糖不耐受类型和治疗 [0278] 人们可能具有不同程度的乳糖不耐受。乳糖不耐受也可能是精神作用诱发的。在不同对象中也存在乳糖不耐受的许多不同变化形式。例如，一些对象在摄入奶酪、融化的奶 酪、原味牛奶或温热乳制品如牛奶咖啡时会发生一种或多种乳糖不耐受症状。在另一实施 方式中，对象摄入任何乳制品时都会发生一种或多种乳糖不耐受症状。在一些实施方式中， 不耐受乳糖的对象仅限于摄入生产时不含乳糖的特殊“无乳糖”食品。这类“无乳糖”食品 的一些例子是：MOCHA MIX 冰淇凌、TOFUTTI 冰淇凌和冰淇凌三明治、LACTAID 牌牛奶、 TM FORMAGG 奶酪、TOFUTTI “大豆奶油乳酪”和人造奶油。 [0279] 在一个实施方式中，对象摄入乳糖酶片以帮助消化牛奶或乳制品中的乳糖。各乳糖酶片通常能在24小时内水解至多99％摄入的乳糖，且可设计成与含乳糖食品一起摄入。 用于处理乳糖消化不良的其它可能技术是使用含有生物活性化合物或微生物的微粒(参 见例如，美国专利号5,952,021，其通过引用全文纳入本文)。使用活性乳糖酶组合物治疗 乳糖酶缺陷描述于美国专利号3,718,739，其通过引用全文纳入本文。也可采用消化优势 TM (Digestive Advantage) 乳糖不耐受疗法对乳糖消化不良进行饮食控制，该疗法包括益生 菌和消化酶。 [0280] D.给予益生素组合物 [0281] 在一个实施方式中，益生素组合物用于一种方法，该方法将剂量递增的所述组合物给予患有乳糖不耐受、经历乳糖不耐受症状或需要改善整体胃肠道(GI)健康状况的对 象。在一个实施方式中，在给予所述益生素组合物后，所述对象的一种或多种乳糖不耐受症 状减轻或消除，或者总体胃肠道健康状况改善。在一个实施方式中，所述益生素组合物包含 GOS。在一个实施方式中，GOS组合物任选包含可消化的糖。在一个实施方式中，在一段时 间中将剂量大约相同的GOS组合物给予有乳糖不耐受或乳糖不耐受症状的对象或需要改 善胃肠道健康状况的对象。在一个实施方式中，在一段时间中将剂量递增的GOS组合物给 予有乳糖不耐受或乳糖不耐受症状的对象或需要改善胃肠道健康状况的对象。在一个实施 方式中，提供适合口服摄入的任何形式的GOS组合物，例如液体、片剂、胶囊或粉末形式。在 一个实施方式中，只用GOS组合物治疗对象，而不补充益生菌。 [0282] 在另一实施方式中，可将其它物质与GOS组合物联合给予。在一个实施方式中，乳糖与GOS组合物同时给予。在一个实施方式中，乳糖在GOS组合物之前(例如，在剂量递增 的GOS组合物方案开始前，或在该方案中的GOS组合物剂量之前)给予。在另一实施方式 中，可消化的糖在GOS组合物剂量之后(如，在剂量递增的GOS组合物方案开始后，或在该 方案中GOS组合物剂量之后)给予。在另一实施方式中，可消化的糖可以在给予GOS组合 物的同时、之前或之后或以其任何组合方式给予。 [0283] 在另一实施方式中，GOS组合物中补充有一种或多种其它无法消化的糖，如菊糖、FOS、乳果糖、棉子糖、水苏糖或其组合。在另一实施方式中，GOS组合物补充有一种或多种 益生菌菌株。在另一实施方式中，GOS组合物补充有一种或多种可消化的糖、盐或缓冲剂， 如磷酸盐。 [0284] 在另一实施方式中，GOS组合物与乳糖酶，或与含预先消化乳糖的产品联合给予。在另一实施方式中，递增剂量的GOS组合物与乳糖酶，或与含预先消化乳糖的产品联合给 予。在另一实施方式中，将随时间剂量大约相同的GOS组合物与乳糖酶，或与含预先消化乳 糖的产品联合给予。 [0285] 在另一实施方式中，通过在一段时间中将GOS组合物给予出现乳糖不耐受症状的对象，减轻或消除该对象的一种或多种乳糖不耐受症状。在一个实施方式中，给药包括随时 间提高给予对象的GOS组合物的量。在另一实施方式中，给药包括随时间将大约相同量的 GOS组合物给予对象。在一个实施方式中，对象的乳糖不耐受症状的严重程度能在停止治 疗后保持部分、基本或完全消除或减轻至少约1天、1周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个 月、6个月、9个月、1年、18个月、2年、3年、4年或5年。在另一实施方式中，对象的乳糖不 耐受症状的严重程度能保持部分、基本或完全消除或减轻5年以上。在另一实施方式中，对 象的乳糖不耐受症状的严重程度在停止治疗后得以永久消除或减轻。在另一实施方式中， 本文所述方法通过在一段时间内将递增量的GOS组合物给予出现乳糖不耐受症状的对象 能减轻该对象的乳糖不耐受症状，其中在停止治疗后乳糖不耐受症状被基本消除至少一个 月。 [0286] 在另一实施方式中，通过在一段时间中将递增量的益生素组合物给予出现乳糖不耐受症状的对象，减轻或消除该对象的乳糖不耐受症状，其中所述乳糖不耐受症状(如本 文所述进行测定)与给予益生素组合物之前症状相比平均减轻约10％、20％、30％、40％、 50％、60％、70％、80％、90％、95％或约100％。“平均”减轻是在出现乳糖不耐受症状的一组对象，如大于约2、3、4、5、10、20或30个对象中测定的减轻。在一个实施方式中，乳糖不耐 受症状的减轻或消除持续至少约1天、1周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、9 个月、1年、18个月、2年、3年、4年或5年。在另一实施方式中，对象的乳糖不耐受症状的严 重程度在停止治疗后保持部分、基本或完全消除或减轻5年以上。在一个实施方式中，症状 的减轻或消除是永久性的。在另一实施方式中，本发明提供一种通过在一段时间内将递增 量的益生素组合物给予出现乳糖不耐受症状的对象来减轻该对象乳糖不耐受症状的方法， 其中如本文所述测定的一种或多种乳糖不耐受症状在治疗结束后平均减轻至少约20％，并 保持至少约一个月的至少约20％降低。 [0287] 在另一实施方式中，本文所述方法能通过在一段时间将递增量的益生素组合物给予出现乳糖不耐受症状的对象来减轻该对象的乳糖不耐受症状，其中如本文所述方法测定 的一种或多种乳糖不耐受症状在治疗结束后平均减轻至少约50％，并保持至少约一个月的 至少约50％减轻。 [0288] 在另一实施方式中，本文所述方法能通过在一段时间将递增量的益生素组合物给予出现乳糖不耐受症状的对象来减轻该对象的乳糖不耐受症状，其中如本文所述方法测定 的一种或多种乳糖不耐受症状在治疗结束后平均减轻至少约75％，并保持至少约一个月的 至少约75％减轻。 [0289] 在一个实施方式中，治疗乳糖不耐受的总治疗持续时间可以是约1周至约12周，或约4周至约10周，或约4周至约8周，或约6周。在这段时间，对象开始接受递增量的本 文所述益生素组合物(如包含GOS或基本由其组成的组合物)的方案，任选还摄入含乳糖 的食品。在一个实施方式中，益生素组合物也可与另一物质(如益生菌)联合给予，如本文 所述。在一个实施方式中，总治疗持续时间是约5天至约35天。在一个实施方式中，总治 疗持续时间是约7天至约90天，或约7天至约60天，或约14天至约50天，或约14天至约 40天，或约5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、 29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、 54、55、56、57、58、59或60天。在另一实施方式中，总治疗持续时间是约30天。在另一实 施方式中，总治疗持续时间是约34天。在另一实施方式中，总治疗持续时间是约36天。在 另一实施方式中，总治疗持续时间是约38天。在另一实施方式中，总治疗持续时间是约42 天。在另一实施方式中，总治疗持续时间是约60天。在另一实施方式中，总治疗持续时间 是约90天。 [0290] 在另一实施方式中，总治疗持续时间是基于对象对治疗的反应。例如，用益生素组合物治疗14天后，个体可能出现乳糖不耐受症状减轻。在另一个例子中，用益生素组合物 治疗30天后，个体可能出现乳糖不耐受症状减轻。因此，治疗持续时间是由个体对象对益 生素组合物的反应和一种或多种乳糖不耐受症状开始缓解而决定的。 [0291] 在一个实施方式中，治疗连续进行。在一个实施方式中，治疗持续时间基于对象的乳糖不耐受症状。因此，在给定益生素组合物(如包含GOS或基本由其组成的组合物)剂 量时对象可能出现症状，并且可能需要所述对象保持该剂量或更低剂量，直到症状减轻。因 此，在一个实施方式中，在开始治疗时不确定治疗持续时间，治疗继续进行直到达到益生素 组合物(如包含GOS或基本由其组成的组合物)的每日最大剂量，或直到达到所需的乳糖 耐受水平。在一个实施方式中，每天给予的益生素组合物(如包含GOS或基本由其组成的组 合物)的最大量是每天0.4g至20g，如约0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.5、2、2.5、3、3.5、 4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、14.5、 15、15.5、16、16.5、17、17.5、18、18.5、19、19.5，或20g。在另一实施方式中，剂量可以是约 0.4g至6g。 [0292] 在一个实施方式中，在治疗方案中的一段时间给予对象一个剂量，在治疗方案中的第二段时间给予第二剂量。例如，可在一周或两周期间给予对象一剂益生素组合物，并在 随后的一周或两周期间给予第二剂量。在一个实施方式中，所述益生素组合物包含GOS。 [0293] 在一个实施方式中，可通过增加每天给予组合物的剂量数、增加每剂量给予的益生素组合物量、或二者来实现益生素组合物(如包含GOS或基本由其组成的组合物)的剂 量递增。在一个实施方式中，同时采用两种策略。因此，在一个实施方式中，益生素组合物 (如包含GOS或基本由其组成的组合物)最初每天给予一次，以递增剂量给药预定天数。随 后一段时间益生素组合物每天以第一剂量和第二剂量给予两次。在预定天数中，第一剂量 的益生素组合物可以恒定剂量给予，而第二剂量可以递增剂量给予。在一个实施方式中，所 述益生素组合物包含GOS。在一个实施方式中，该剂量可以每天一次、每天两次或每天三次 的频率给予对象。给药天数可以持续约1至90天，如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、 14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、 39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、 64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89或90天。 [0294] 在另一实施方式中，益生素组合物可以每天给予两次。益生素组合物(如包含GOS或基本由其组成的组合物)的第一剂量可保持恒定，而第二剂量随时间增加。在另一实施 方式中，益生素组合物(如包含GOS或基本由其组成的组合物)可以平均约每天给予一 次，每天给予两次，每天给予三次、四次、五次、六次或更多次，或其任何组合。可以在大约1至90天期间，如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、 25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、 50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、 75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89或90天中给予该益生素组合物。 [0295] 在另一实施方式中，每次给予时以相同的剂量水平给予所述益生素组合物。因此，在一个实施方式中，益生素组合物(如包含GOS或基本由其组成的组合物)最初每天以相 同剂量水平给予一次至六次。可以在大约1至90天期间，如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、 12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、 37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、 62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、 87、88、89或90天中给予该益生素组合物。 [0296] 在一个实施方式中，完成治疗方案的对象仍然以每4-5天至少一次的频率摄入乳制品，以维持乳糖不耐受症状的减轻。 [0297] 在另一实施方式中，对象自己给予益生素组合物(如包含GOS或基本由其组成的组合物)。在一个实施方式中，该益生素组合物(如包含GOS或基本由其组成的组合物)由 健康专业人士，如饮食专家、营养学家、护士、医生或其他有资格的健康专业人士提供或推 荐。在另一实施方式中，该益生素组合物(如包含GOS或基本由其组成的组合物)由健康 专业人士给予，或者由健康专业人士监测该方案的结果。在一个实施方式中，将益生素组合 物(如包含GOS或基本由其组成的组合物)标为医疗食品。 [0298] 在一个实施方式中，需要的对象可重复用益生素组合物治疗的过程。乳糖不耐受症状再次出现或加重至不理想水平时可重复该治疗过程。或者，可以规律或预定的间隔重 复该治疗过程。因此，可以在约1个月、2个月、3个月、4个月、6个月、8个月、10个月、1年、 18个月、2年、3年、4年、5年、或超过5年后重复治疗，或实施其任何组合(例如，可以在一年 后重复治疗，然后每2-5年重复一次)。可以与第一次治疗所用相同的形式(如持续时间、 剂量、给药时间、额外物质等)重复该治疗，或者可进行改动。例如，可以缩短或延长治疗持 续时间，可以较快或较慢地增加剂量，或者可采用更高或更低的益生素组合物起始剂量、不 同益生素组合物(例如，包含菊糖、FOS、乳果糖、棉子糖、水苏糖或其组合的组合物)(例如， 除GOS或可消化的糖外，包含或多或少的其他物质，或更少或更多的物质)等。 [0299] 在一个实施方式中，作为剂量方案的一部分，将初始剂量的益生素组合物给予需要的对象，益生素组合物的剂量随时间逐步增加。益生素组合物剂量的逐步增加可以是任 何合适剂量大小。在一个实施方式中，益生素组合物的初始剂量是约0.05g至4.0g，或约 0.1g至约3g，或约0.2g至约3.0g，或约0.2g至约2g，或约0.4g至约1.6g，或约0.4g至 约1.4g，或约0.6g至约1.2g，或约0.6g至约1.0g，或约0.7g至约0.9g，或约0.8g。在另 一实施方式中，益生素组合物的初始剂量是约0.2g至约4.7g，约0.5g至约8.0g，或约0.4g 至约6.8g。在一个实施方式中，益生素或GOS组合物的逐步递增剂量可能不同，或者每次 增加相同剂量，或其任何组合。在另一实施方式中，给予需要对象的益生素组合物的量可逐 步增加约0.05g至4.0g，或约0.1g至约3g，或约0.2g至约3.0g，或约0.2g至约2g，或约 0.4g至约1.6g，或约0.4g至约1.4g，或约0.6g至约1.2g，或约0.6g至约1.0g，或约0.7g 至约0.9g，或约0.8g。在另一实施方式中，给予需要对象的益生素组合物的量可逐步增加 约0.5g、约0.29g、约0.30g、或约0.42g、约0.43g。在另一实施方式中，给予需要对象的益 生素组合物的量可逐步增加0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9或1g/剂。治疗中达到的最大剂量可以是任何合适的剂量大小，这取决于治疗的对象和需要的结果。在一个实 施方式中，在一剂中给予的最大剂量益生素组合物可以是约1g至约2g、约3g至约4g、约5g 至约6g、约6g至约60g、或约12g至约48g、或约14g至约36g、或约16g至约36g、或约18g 至约34g、或约20g至约32g、或约22g至约30g、或约23g至约29g、或约24g至约28g、或约 25至约27g、或约25.5g至约26.5g、或约25.5g、25.6g或25.7g/剂。在一个实施方式中， 给予益生素组合物的最大剂量是约12g/剂。 [0300] 在本发明的一个实施方式中，益生素组合物的初始剂量是约0.4g，该剂量随时间例如每天增加0.4g，直到达到20g至25g的益生素组合物最大剂量。在另一实施方式中，益 生素组合物的初始剂量为约0.5g，该剂量随时间例如每天增加0.5g，直到达到每天8.0g至 15g的益生素组合物最大剂量。 [0301] 益生素组合物可以任何合适形式给予，例如粉末、胶囊、片剂、可在摄入前溶解于液体的粉末、或液体形式(如预先溶解于液体的GOS)。可利用适合治疗对象如人摄入的任 何等级或形式的益生素。 [0302] 其它物质可与益生素组合物或GOS组合物联合给予。这些物质可提高剂量递增的益生素的作用，通过例如促进肠道中缓解乳糖不耐受症状的细菌的生长，提高益生菌或有 益共生菌的粘附，或者使益生菌剂量更容易地通过胃部而不被破坏。这些物质可以在用益 生素治疗之前、用益生素治疗期间或用益生素治疗之后，或其任何组合方式给予。如果在益 生素治疗期间给予，它们可与所给益生素剂量一起、或在益生素剂量之前或之后，或其任何 组合方式给予。 [0303] 在一个实施方式中，本发明中与益生素组合物联用的物质包括益生菌微生物、乳糖酶或其它乳糖消化酶、或缓冲剂(如磷酸盐)。可以在治疗之前、期间、之后的任何合适时 间或以一些组合方式，将一种或多种这些物质与益生素组合物联用。在一个实施方式中，在 一些或全部治疗的过程中，将益生素组合物与活细菌联合给予。在另一实施方式中，在一些 或全部治疗的过程中，将益生素组合物与乳糖酶或其它乳糖消化酶联合给予。在另一实施 方式中，在一些或全部治疗的过程中，将益生素组合物与缓冲剂(如磷酸盐)联合给予。在 另一实施方式中，在一些或全部治疗的过程中，益生素组合物(如GOS)包含痕量的可消化 的糖，如乳糖、葡萄糖或半乳糖。在一个实施方式中，痕量的可消化糖占益生素组合物重量 的5％(如4％、3％、2％、1％、0.5％、或0.1％)或更少。在另一实施方式中，痕量的可消 化糖占益生素组合物重量的约20％(如约20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、 12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％或0.1％)或更少。 [0304] E.治疗方案 [0305] 在一个实施方式中，任选与益生菌组合物、一种或多种可消化的糖、缓冲剂或其组合相结合的益生素组合物(如包含GOS或基本由其组成的组合物)治疗可与其它治疗联 用，以减轻乳糖不耐受症状。可采用能减轻乳糖不耐受症状的任何合适治疗，例如使用乳糖 酶。在另一实施方式中，乳糖酶可以在益生素组合物治疗之前、期间或之后或其任何组合方 式给予。在一个实施方式中，益生素组合物治疗不能完全或基本完全地消除乳糖不耐受症 状时，可以在益生素组合物治疗终止后给予乳糖酶。乳糖酶可按需使用。 [0306] 待治疗的对象可包括，例如人，如早产新生儿、足月新生儿、至多一岁的婴儿、幼儿(如1-2岁)、青少年(如13-19岁)、成人(如20-64岁)、孕期妇女和老年人(65岁或更 大)。 [0307] 治疗方案可持续，例如约1-20天、约1-25天、约1-30天、约1-35天、约1-40天、约1-45天、约1-50天、约5-30天、约5-35天、约5-40天、约5-45天、约5-50天、约5-55天、 约5-60天、或约5-90天。治疗方案可精确或大约持续1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、 14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、 39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、 64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89或90天。治疗方案中的每个剂量可保持恒定。例如，在上述治疗方案持续期间，可每天将 恒定剂量的益生素给予对象。给药方案可以是，例如，每天恒定的0.1-20g益生素，或给药 方案可以是递增方案，如第一天给予2g益生素且第20天给予20g益生素。该剂量可每天 递增，例如，约0.1g、0.2g、0.3g、0.4g、0.5g、0.6g、0.7g、0.8g、0.9g、1.0g、1.1g、1.2g、1.3g、 1.4g、1.5g、1.6g、1.7g、1.8g、1.9g、2.0g、2.1g、2.2g、2.3g、2.4g、2.5g、2.6g、2.7g、2.8g、 2.9g、3.0g、3.1g、3.2g、3.3g、3.4g、3.5g、3.6g、3.7g、3.8g、3.9g、4.0g、4.1g、4.2g、4.3g、 4.4g、4.5g、4.6g、4.7g、4.8g、4.9g、或5.0g。所述给药方案可以包括每天0.1至20g益生 素。该方案也可包括逐步增加每天的剂量数，例如每天1剂、每天2剂、每天3剂、每天4剂、 每天5剂、每天5剂、每天7剂、每天8剂、每天9剂或每天10剂。例如，可以在治疗方案的 第一天每天给予1剂，在第10天每天给予2剂，在第20天每天给予3剂。 [0308] 在一个实施方式中，所述治疗分阶段进行。一个阶段每天给予益生素组合物一次，一般通过(但不一定是)食物如晚餐给予。益生素组合物的剂量随时间增加。例如，益生 素组合物的剂量可每天增加。另一阶段(通常在第一阶段之后)每天给予益生素组合物两 次，同样，一般通过食物如早餐和晚餐给予。同样，此阶段中包含益生素的组合物的剂量随 时间增加，例如每天增加。在一个实施方式中，所述治疗包括每天给予一次含益生素组合物 的组合物并与益生菌(如活细菌)联用的一个阶段。如果使用，此阶段通常是该方法的第 一阶段。 [0309] 任选地，可以在整个治疗过程的某部分或全部期间给予益生菌微生物。例如，在一个实施方式中，益生菌可包含在给予对象的含益生素的产品中。通常，在前一阶段中，不 摄入乳制品。该方案的最后一阶段可包括向饮食中逐步再次引入乳制品，其间继续使用或 停止使用第一阶段治疗中采用的益生素组合物。最后，治疗结束，不需要再摄入益生素组合 物。 [0310] 在另一实施方式中，给药方案包括五个阶段。第一阶段包括给予益生素组合物两天，任选与益生菌一起给予。在第二阶段，益生素组合物随食物一起每天摄入一次(如早 餐、午餐或晚餐)，持续约10至30天，或约14至24天，或约16至20天，或约18天。在第 三阶段，益生素组合物随食物一起每天摄入两次(如早餐和晚餐)，再持续约6至18天，或 约8至16天，或约10至14天，或约12天。在再持续2、3、4、5或6天(如约4天)的第四 阶段中，益生素组合物与晚餐和早餐一起给予，还加入含乳糖产品(如乳制品)。在这段时 间之前，在第一阶段例如所述方案的前约30-34天没有给予乳制品。这整个期间，如大约38 天期间可构成给予益生素组合物的全部期间，但更重要的是基本在这些时间中给药。在一 个实施方式中，实际给予益生素组合物后，该方案任选包括第五期：每几天实际摄入乳制品 一次，以维持和增加对乳糖的耐受，但不给予益生素组合物(以测试乳糖耐受的建立)。如 果未建立乳糖耐受，则可重复该方案。在第一个时间段，在最初的大约18天，晚餐时间给予 的益生素组合物的量每天规律地增加。然后，在第三阶段，每天益生素组合物与早餐一起规 律地给予。此外，对于最后几天例如最后四天，含乳糖的食品如牛奶也在这4天规律地增 加。 [0311] 如果初始治疗方案能在不耐受乳糖的人中成功产生乳糖耐受且乳糖不耐受复发，则可重复一种或多种治疗方案。 [0312] 在一个实施方式中，在6周期间以递增量给予第一剂益生素组合物。在该期间的第一天和第二天，含有一种或多种细菌菌株的益生菌(如在包含产品的食品中，该产品也 具有活培养细菌)与益生素组合物一起给予。含有活培养细菌的一种这类食品是酸奶。另 外，在该6周期间的第三阶段中，给予第二剂益生素组合物(如包含GOS或基本由其组成的 组合物)，通常在早餐时间给予。 [0313] 在一个实施方式中，将益生素组合物和益生菌组合物给予需要的对象。在一个实施方式中，在该方案的第一天，对象在晚餐时摄入8盎司(约226.4g)或更少的益生菌组 合物以及1汤匙(约14.8mL)益生素组合物。在一个实施方式中，需要的对象在第一天随 晚餐一起摄入8盎司(约226.4g)或更少的益生菌组合物，以及1汤匙(约14.8mL)益生 素组合物。在第二天，摄入的酸奶量减少一半，至4盎司(约113.2g)或更少的益生菌组合 物，但益生素组合物的给予保持相同。第三天，停止给予益生菌组合物，但益生素组合物的 给予量保持在1汤匙(约14.8mL)。在第4-18天，每天随晚餐摄入的益生素组合物(如包 含GOS或基本由其组成的组合物)的量增加1汤匙(约14.8mL)，直到在第18天达到16汤 匙(约237mL)。 [0314] 在该方案的第三阶段，既在早晨随早餐一起摄入1汤匙(约14.8mL)益生素组合物(如包含GOS或基本由其组成的组合物)，又随晚餐摄入16汤匙(约237mL)益生素组合 物(如包含GOS或基本由其组成的组合物)。从第16天到第34天，维持相同比例的随晚 餐一起摄入的益生素组合物(如包含GOS或基本由其组成的组合物)，但早晨剂量以每天1 汤匙(约14.8mL)的速度增加。依此方式，到第34天，需要的对象摄入32汤匙(约474mL) 益生素组合物(如包含GOS或基本由其组成的组合物)。 [0315] 第35天，停止摄入益生素组合物(如包含GOS或基本由其组成的组合物)，取而代之的是摄入乳制品如牛奶(不含益生素组合物)，早晨摄入9盎司(约255g)牛奶、晚上 再摄入9盎司(约255g)。牛奶量以每天1盎司(约28.3g)的速度逐步增加，以便到第38 天，对象随早餐摄入12盎司(约340g)牛奶且晚餐时再摄入12盎司(约340g)牛奶。任 选地，在第39至42天，用奶酪代替牛奶。 [0316] 在另一实施方式中，给予益生素或益生菌组合物的天数可变，相似地，可根据具体对象的需要和对象的症状而改变剂量。尽管时间段和剂量率都可变，但本文所述方法保持 和涵盖了在特定时间段提高益生素组合物剂量的构思。 [0317] 在另一实施方式中，需要的对象到第7天可摄入大于5汤匙(约74mL)益生素组合物。因此，到第7天摄入的益生素组合物用量可能在第8天增加到6汤匙(约89mL)。确 定对象能否提高剂量或持续时间取决于对象是否出现任何不良反应。 [0318] 可以在给予益生素组合物和含乳糖食品之间的时间间隔中进行相同改变。因此，如果需要，需要的对象可能每12小时改变益生素组合物用量。以类似方式，该时间段可变 化至36或甚至48小时。如前所述，本发明益生素组合物可通过益生素组合物(如包含GOS 或基本由其组成的组合物)的粉末制剂给予，后者可与水混合并通过与软饮料相同的方式 给予。也可将益生素组合物掺入一种或多种胶囊、胶囊或凝胶中(如本文所述)。另外，可 以用于口服给药的液体制剂形式提供益生素组合物。 [0319] 在一个实施方式中，通过采用益生素组合物粉末的方案治疗需要的对象，所用给药方案如图5、6或7所示。在图5和6中，70％GOS指包含70％重量的GOS、约20％重量 的乳糖和10％重量的可消化糖的GOS组合物。在图5中，益生素组合物含有GOS组合物 (从0.5g开始且34天后增加到8.00g)和0％重量的其它乳糖。例如，70％GOS组合物 的给予量可以是约0.5g、1g、1.5g、2g、2.5g、3g、3.5g、4g、4.5g、5g、5.5g、6g、6.5g、7g、7.5g或8.0g。在图6中，益生素组合物含有70％GOS组合物(从0.29g开始且34天后增加到 4.69g)和其它乳糖(从0.33g开始且34天后增加到5.3g)。例如，70％GOS组合物的给予 量可以是约0.29g、0.59g、0.88g、1.17g、1.46g、1.76g、2.05g、2.34g、2.64g、2.93g、3.22g、 3.52g、3.81g、4.10g、4.39g或4.69g。在图7中，90％GOS是包含90％重量的GOS和10％ 重量的可消化糖的GOS组合物。在该图中，益生素组合物含有GOS组合物(从0.42g开 始且34天后增加到6.74g)和0％重量的其它乳糖。例如，90％GOS组合物的给予量可以 是约 0.42g、0.84g、1.26g、1.68g、2.11g、2.53g、2.95g、3.37g、3.79g、4.21g、4.63g、5.05g、 5.47g、5.89g、6.32g或6.74g。在图8中，93％GOS组合物是包含90％重量GOS的GOS组 合物(从0.42g开始且34天后增加到6.74g)。例如，93％GOS组合物的给予量可以是 约 0.42g、0.84g、1.26g、1.68g、2.11g、2.53g、2.95g、3.37g、3.79g、4.21g、4.63g、5.05g、 5.47g、5.89g、6.32g或6.74g。在图9中，95％GOS组合物是包含95％重量GOS的GOS组 合物。例如，95％GOS组合物的给予量可以是约0.42g、0.84g、1.26g、1.68g、2.11g、2.53g、 2.95g、3.37g、3.79g、4.21g、4.63g、5.05g、5.47g、5.89g、6.32g或6.74g。在另一实施方式中，益生素组合物含有GOS组合物(从一定量开始且34天后增加到最大量)和其它乳糖 (从一定量开始且34天后增加到最大量)。在一个实施方式中，将含有GOS组合物粉末的 胶囊给予需要的对象。第34天，需要的对象已完成该方案，并且现在可以无痛苦地享用乳 制品。在一个实施方式中，需要的对象不要求接受进一步的方案、补充物或药物治疗就能摄 入乳制品。在另一实施方式中，可按需重复给予该方案。 [0320] 在一个实施方式中，可以通过16日方案给予益生素组合物。16日方案的实施例可参见表2、3和4。完成该16日方案后，可将牛奶提供给对象。 [0321] 表2.16日治疗方案的两个实施例。 [0322] [0323] 表3.16日治疗方案的两个实施例子。 [0324] [0325] 表4.16日治疗方案的实施例。 [0326] [0327] 在另一实施方式中，可以在30或34日治疗方案中给予益生素组合物。30日和34日方案的实施例可参见表5、6和7。可以在所述治疗方案之后提供牛奶。 [0328] 表5.30日治疗方案的两个实施例。 [0329] [0330] [0331] 表6.30和34日治疗方案的实施例。 [0332] [0333] 表7.30日治疗方案的实施例。 [0334] [0335] 可以用明胶盖“00”、明胶盖“0”和明胶盖“#1”将益生素剂量给予对象，该明胶盖“00”可装有0.546-1.092g(如粉末)；明胶盖“0”可装有0.408-0.816g(如粉末)；明胶盖“#1”可装有0.300-0.600g(如粉末)。例如，可用三个明胶盖00药丸将大约3g益生素组 合物给予对象。可通过两个明胶盖“00”或两个明胶盖“0”给予大约1.5g益生素组合物。 益生素组合物可用勺量。 [0336] 给予益生素组合物的剂量和时间的变化可产生有效治疗，以提高对含乳糖产品的耐受。例如，可以在需要的对象上检测提出的剂量。因此，将本发明方案施用于需要的年轻 对象时，应考虑对象体重。例如，对体重为50磅(约22.5kg)的对象给予的益生素组合物 剂量可低于成年人。在另一实施方式中，益生素组合物给予儿科对象的时机可能不同(例 如，每天一次持续4周)，或者其给药持续时间可短于或长于成人给药持续时间。在一个实 施方式中，益生素组合物给予儿科对象的持续时间短于成人给药持续时间。在一个实施方 式中，益生素组合物给予儿科对象的持续时间长于成人给药持续时间。 [0337] 在一个实施方式中，可根据对象体重，按比例调整给予对象的益生素组合物用量。虽然公开的剂量是随早餐和晚餐给予的剂量，但可交换剂量顺序，或者可以在一天的其它 时间随食物如午餐或零食一起给予(或可以构想不与食物一起给予)。该方案也可简化成 缩短或延长的方案。在一个实施方式中，将益生素组合物给予需要对象的方案可以是简化 的1周方案，或者可以延长成10周方案。虽然本文所述的方法和组合物都用于人，但它们 也能够给予其它哺乳动物。 [0338] VI.药盒 [0339] 在另一方面，本发明提供用于治疗乳糖不耐受症状的药盒。所述药盒包括用于治疗需要的对象的一种或多种乳糖不耐受症状的适当包装中的益生素组合物。本文所述的任 何组合物均可包装成药盒形式。药盒可包含足够整个疗程或一部分疗程使用的一定量益生 素组合物和任选的本文所述其它成分。因此，在一个实施方式中，药盒可包括足够的益生 素组合物，用于治疗的第一周、第二周、第三周、第四周、第五周和第六周，或额外的治疗周 (如果有)或其任何组合。益生素组合物剂量可单独包装，或者益生素组合物可以散装提 供，或者以其组合形式提供。在一个实施方式中，单独包装的益生素组合物以片剂、囊片、胶 囊或粉末容器形式提供。在另一实施方式中，益生素组合物在控释制剂中提供。在另一实 施方式中，益生素组合物以具有肠溶衣的制剂形式提供。因此，在一个实施方式中，药盒以 合适包装提供对应于治疗方案中给药时间点的单独剂量益生素组合物，其中所述剂量包装 在准备用于治疗乳糖不耐受症状的一个或多个包装中。例如，药盒可包含本文所述益生素 组合物剂量用于治疗方案，其中以递增剂量摄入所述益生素组合物，以使益生素组合物的 单个小包装中所含益生素组合物的量增加，从方案开始时使用的较低剂量随着方案进展增 加到较高剂量。由于为该方案的后期时间点提供剂量，每天可提供各自有单独小包装的两 剂或更多剂。可标记各小包装以指示准备摄入的日期和时间，或者可标记含有该小包装的 包装，或二者皆有。本文所用的“小包装”是含有益生素组合物的任何单独容器，无论益生 素组合物是固体或液体形式，这种容器可包括含有粉末、片剂或丸剂的小包装，或者含有液 体的小包装。 [0340] 在一个实施方式中，益生素组合物可以散装形式在一个或者两个、三个、四个、五个或五个以上容器中提供(例如，每个容器含有足够治疗方案中特定周使用的益生素组合 物)。如果提供一个以上散装容器，可将散装容器适当地包装在一起，以提供足够所有或一 部分治疗方案使用的益生素组合物。该容器可标有标签，指示需要的对象进行该治疗方案 的有用信息，例如给药方案。 [0341] 益生素组合物可与其它适当物质如益生菌、FOS或缓冲剂包装在一起，如本文所述。其它物质可与益生素组合物分开包装，或与益生素组合物混合包装，或采用其组合。因 此，在一个实施方式中，本发明药盒包括的粉末或液体含有疗程或一部分疗程使用的所有 成分，例如益生素组合物和任选的益生菌、FOS或缓冲剂。在一个实施方式中，将益生素组 合物包装到一个包装或一组包装中，将额外成分如细菌、FOS或缓冲剂与益生素组合物分开 包装。 [0342] 药盒还可包括书面材料，例如说明书、预计效果、证明书、解释、警告、临床数据、健康专业人员信息等。在一个实施方式中，药盒包含标签或其它信息，指示该药盒只能在健康专业人员，如饮食专家、营养学家、护士、医生或其它合适的健康专业人员指导下使用。在另 一实施方式中，该药盒包含或包括信息如标签，指明内装物质为医疗食品。 [0343] 在一个实施方式中，本发明提供包括粉末容器和容器上标签的药盒，其中所述粉末包含益生素组合物和任选的FOS、细菌或缓冲剂，所述标签指示使用该粉末的合适剂量和 方案。该容器还可包括勺或其它测量装置或供应装置。在一个实施方式中，本发明提供包 括液体容器和容器上标签的药盒，其中所述液体包含益生素组合物和额外的FOS、细菌或缓 冲剂，所述标签指示使用该液体的合适剂量和方案。所述容器还可包括测量装置或供应装 置。 [0344] VII.商业方法 [0345] 本发明也提供商业方法，用来销售治疗乳糖不耐受症状或改善胃肠道总体健康状况的组合物和方法。在一个实施方式中，本发明提供一种经商的方法，包括销售用于治疗乳 糖不耐受症状的组合物，其中所述治疗是按照本文所述任何方法给予剂量递增的益生素组 合物，任选与其它物质如FOS、乳糖、细菌和缓冲剂联用。在一个实施方式中，该组合物如本 文所述是药盒的一部分。该方法还可包括生产这种组合物或药盒。销售可以直接面向消费 者或合适的健康专业人员或其组合。本发明这些实施方式中所用的销售方法包括但不限 于：印刷品、电视或电台广告，电视导购，互联网广告，证明书，口碑营销，电话销售等。 [0346] 本文也提供一种开展业务的方法，例如向另一个生产公众可以获得的现有品牌或现有产品(如饮料或乳制品)的实体提供本文所述的益生素组合物。所述方法包括一种做 生意的方法，其包括销售与现有品牌或产品(饮料或乳制品)一起使用的益生素组合物，其 中所述益生素组合物与现有品牌或产品联用时可使后者具有附加的治疗乳糖不耐受或提 高GI总体健康状况的有益效果。 实施例 [0347] 实施例1：临床试验概要 [0348] 在呼吸氢气测试、牛奶刺激和粪便细菌分析中显示具有中度至重度乳糖不耐受相关症状的对象中，进行RP-G28-(96％重量的GOS组合物)相对安慰剂的2b期、多中心、有安 慰剂对照的随机试验。 [0349] 该临床研究有两个主要研究目的： [0350] 1.第一个主要目的是在60个对象中评估30日RP-G28治疗与安慰剂(n＝30)相比提高乳糖消化和耐受程度的能力，确定其呼吸氢气测试(HBT)中乳糖刺激造成的症状是 否在治疗结束后90天减轻，并证明在30天结束时观察到的效果在治疗结束后持续至少90 天。 [0351] 2.第二个主要目的是通过评估整个RP-G28或安慰剂阶段的不良事件和耐药能力，评价RP-G28在该人群中的安全性。这可通过30天治疗期间每周电话访问，或者治疗结 束后三个月期间每隔一周电话访问采集的数据进行评估。 [0352] 有五个次要研究目的： [0354] 2.在摄入乳制品(第35至90天)的情况下比较RP-G28和安慰剂组的症状评分与其初始基线(历史)评分。 [0355] 3.通过比较活性治疗组和安慰剂组中治疗结束时的症状评分与3个月后HBT期间获得的症状评分，评估治疗结束时(第30天)观察到的HBT中所报告的症状改善持续时 间。 [0356] 4.采用两个HBT中乳糖刺激后获得的评分，通过比较治疗组与安慰剂组的评分降低，评估治疗结束时(第30天)观察到的相对基线的效果。 [0357] 5.该试验将通过测量对象完成的饮食调查表，比较两组中第35至90天期间相对基线摄入的乳制品量。 [0358] 研究设计：这是按照向各对象提供的给药方案，用RP-G28(总计n＝60个对象)或安慰剂(n＝30个对象)进行的30天平行组试验。基线HBT期间，乳糖刺激测试时症状 超过预定水平的对象被编入。在治疗结束时和大约三个月后，重复这一测试。每小时分别 评估三种乳糖不耐受症状(参见下一自然段)：0(无症状)；1(轻微症状)；2(中度症状)； 3(强烈症状)；和4(严重症状)。通过在六周中每周进行电话访问和在随后三个月中隔周 进行电话访问，以及在每次来诊所进行HBT时采集不良事件。指导患者在第35-90天食用 固定量的乳制品(每周3-7份乳制品，在给予各对象的说明上确定一份的定义)。 [0359] 所用剂量的理论依据：本研究的目的是使不耐受乳糖的对象产生耐受性，产生耐受性的主要原理是逐步增加药物的剂量。RP-G28剂量(用药囊每天给予一次)从第1天 至第19天逐步增加，以达到相当于8盎司(约226g)牛奶(一份乳制品)的乳糖水平。在 剂量滴定的后半程期间，在PM中所述药囊含有8盎司(约226g)牛奶当量，而在AM中重复 在第3-19天采用的第二组相同递增剂量。一旦对象每天接受两次8盎司(约226g)牛奶 当量，则进一步提高剂量，以达到早晨和下午都给予12盎司(约340g)牛奶当量。选择此 种12盎司(约340g)牛奶的水平，以便对每天总共三份乳制品产生耐受性，这一水平是美 国饮食指南中满足钙和其它营养需求的推荐水平。此前，该方法已经成功用于成千上万的 患者。在本临床试验中，每日剂量在药囊中单独标记并印有如何用水送服的说明书。 [0360] 主要临床终点：评估HBT期间摄入20克乳糖溶液引起的三种乳糖不耐受症状的严重程度：排气、腹泻和“胃痛”(任何肠胃气胀、腹部绞痛或胃痛)。 [0361] 编入的对象可在基线测试中出现以下三种评分之一： [0362] a.在6小时HBT期间的至少两个时间点上一个症状出现至少一个强烈或严重评分(即3或4)； [0363] b.在6小时HBT期间的至少两个时间点上一个症状出现至少两个中度评分(即各为2)； [0364] c.在6小时HBT期间的至少两个时间点上两个症状各自出现至少一次中度或更高的评分(即2或更高)； [0365] 然而，通过计算RP-G28组对象相对安慰剂组的平均评分来评估RP-G28的功效。分数基于以下评分系统：0(无症状)；1(轻微症状)；2(中度症状)；3(强烈症状)；和4(严 重症状)。因此，最大评分是3(症状)乘以6个每小时报告乘以4个点，最大或为72。在 基线水平、完成30日方案的一周内和三个月后，在三个HBT评估中分别评价此分数。这三 种症状的重要性没有分别，特定症状的评分之间没有任何权重分配。通过比较接受RP-G28 的对象与接受安慰剂的对象中平均评分的降低(基线评分减去治疗结束后90天的评分) 来确定主要功效评估。(其它详情参见统计学部分)。基线评分减去治疗结束时的评分将 作为功效的第二衡量标尺。 [0366] 次要临床终点： [0367] 1.在基线时分发给对象的问卷中采集的乳糖不耐受症状评分和第38至90天期间每隔周电话访问采集的评分。(应注意在HBT期间不获得这些评分)。 [0368] 2.与基线量相比，在试验结束时和3个月后，HBT中的氢气量评分(每百万分之份数)。在6小时测试中每小时测定氢气，将6小时产量之和与基线测试作比较。 [0369] 3.在30日治疗结束时与基线时，在HBT过程中测定的乳糖刺激后的症状评分。 [0370] 4.治疗完成三个月后HBT期间乳糖刺激后的症状评分，相比30日治疗结束时的症状评分。 [0371] 对象数量：总共编入90个对象，其中60个在活性治疗组，30个在安慰剂组。预计采用三个临床试验地点。利用每组患者数不平衡来刺激患者征募并鼓励患者加入试验。在 统计学部分讨论该试验的功效。未完成初始治疗后HBT的对象将被代替，以在两组中获得 60个和30个完成者。 [0372] 乳糖不耐受的诊断：就患者可以具有的乳糖不耐受症状而言，在HBT期间用14g乳糖溶液刺激时三种症状中任何一种的总评分至少为8，或者所评价三种症状的总评分为 16，无论氢气HBT数据是否为阳性。HBT在研究人员的诊所或其它场所进行，由14g乳糖溶 液构成，阳性评分定义为在6小时治疗期间的任何时间氢气在对象基线以上10ppm。阳性 HBT的患者被定义为乳糖消化不良者。由于文献报道HBT中假阳性和假阴性数量相对较大 (尽管它是乳糖不耐受可利用的诊断工具)，从科学角度不应仅仅编入具有阳性HBT和乳糖 不耐受症状的患者。因此，HBT主要用于评价乳糖不耐受症状而不是氢气产量，但后者将用 作第二终点。 [0373] 主要编入标准： [0374] 1.两种性别的对象，年龄12岁及以上。 [0375] 2.对牛奶或其它乳制品不耐受史持续至少三个月。 [0376] 3.乳糖刺激期间(HBT期间)，对象可具有以下症状分级之一： [0377] a.任何一种症状的至少一个评分为强烈或严重。 [0378] b.一种症状的至少两个评分为中度。 [0379] c.两种症状各有至少一个评分为中度。 [0380] 4.也给予HBT以评估氢气产量。应注意，在编入时对HBT中测定的氢气量没有具体评分要求，但氢气在基线水平以上10ppm是可用于将患者确定为乳糖消化不良者的量。 [0381] 5.在试验中，对象可能同意不使用用于乳糖不耐受的所有其它治疗和产品。 [0382] 治疗持续时间：30天研究性治疗，然后进行HBT，用三个月评估任何益处的持续时间。 [0383] 退出：退出或停止的对象不会被代替。 [0385] 对比治疗：采用相同给药方案给予等量的安慰剂(右旋糖)，其包装与RP-G28相同。 [0386] 通过每周或每两周的电话访问询问对象的症状以及摄入的乳制品量。 [0387] 评价标准： [0388] 功效度量： [0389] 采用五点Likert量度(严重(4)、强烈(3)、中度(2)、轻微(1)或无(0))对乳糖不耐受的三个重要指标(即排气、腹泻和腹部绞痛)分别评分。治疗完成后三个月(第35 至90天)，在HBT之后和每两周电话访问期间使用该量度。应注意，腹部绞痛形式向该对象 表明它包括腹痛和肠胃气胀，其维持了三个重要指标。本领域专家认为许多(如果不是大 多数)患者不能区分这三种重叠的症状(即腹部绞痛、肠胃气胀和腹痛)，涉及三个重要指 标(即排气、腹泻和腹部绞痛)最有意义。 [0390] 安全性评价： [0391] 在三个HBT过程中评估不良事件的发生率和严重程度、血压和心率，在每周(第1-30天)和每两周(第35-90天)电话访问对象期间通过向对象读出标准问卷询问不良事 件。 [0392] 统计学计划： [0393] 按照Hertzler和Savaiano(1996)所述的方法评估HBT期间的氢气产量和症状比较。 [0394] 功效衡量： [0395] 通过比较乳糖刺激后HBT期间各组报告的症状改变，进行主要功效评估。在三个月随访期间通过两周间隔的电话访问获得的症状问卷调查反馈来评估次要功效。最后，比 较第35-90天各组对象报告的乳制品摄入量。 [0396] 本研究中的主要功效衡量是基线时、治疗后和治疗后90天HBT乳糖刺激期间的总症状评分(最大评分＝72)。通过2组(治疗组和对照)X 2个时间点(基线和30日治疗 后90天)的方差分析(ANOVA)评估主要功效，其中α为.05。利用Landon等(2006)的结 果，该研究的效力(60个治疗对象相比30个对照对象)是95％。应注意，功效的主要评估 是30日治疗结束后的90天，这证明了效果在治疗时间后持续至少三个月。 [0397] 次要功效衡量是比较治疗后三个月进行的HBT刺激期间获得的乳糖不耐受症状评分与在基线和治疗结束时获得的评分。利用2组X 3个时间点的ANOVA进行此分析。 [0398] 将每两周对象报告的另一次要功效衡量输入计算机并列入患者列表，但不进行分析，因为它们是基于非标准条件下的自我症状报告。 [0399] 最后，在三个HBT评价中，将各HBT期间乳糖刺激后第1至6小时的呼吸氢气浓度相加。也用2组X 3个时间点的ANOVA比较这些评分的平均呼吸氢气浓度的显著性差异。 [0400] 安全措施： [0401] 计算对象性格、人口统计学和基线特征、患者顺应性、血压和心率的摘要统计量。记录和报告治疗组和对照组中对象的所有不良事件。将它们示于列表、合适附图和总结表 中。所有严重的不良事件均向管理和指导的管理机构报告。 [0402] 对象在基线时来诊所一次，以便进行筛选和基线评估。签署知情同意书并通过HBT期间给予的乳糖刺激测试和其它筛选评价的对象被随机分组，并按照附表标记的治疗日期 和时间给予RP-G28或安慰剂药囊。还提供一页说明书。对象在完成30日治疗的一周内， 返回诊所(携带其未使用的药物)进行随访HBT。第二次HBT后大约三个月进行随访，以便 进行乳糖刺激和最后一次HBT。 [0403] 时间和事件表： [0404] 每次就诊时，评估对象的不良事件、血压和心率。在30日治疗期间每周评估摄入RP-G28或安慰剂的安全性，在第35-90天每两周的电话访问中评估不良事件。 [0405] 剂量方案： [0406] RP-G28是按照对象编入后提供的基线方案口服摄入30天的粉末。 [0407] 除了说明书中所列内容外，对象在第1-30天不摄入任何乳制品。在第35-90天，指导对象每周摄入3-7份乳制品。整体方案中列出所有具体细节。 [0408] 实施例2：研究对象的GOS治疗 [0409] 按照表8所列方案，对象将摄入90％纯度水平的GOS化合物。指导该对象每天用提供的勺精确量取表8所列剂量，并将粉末混入6至8盎司(约170至226g)室温水中。 将该混合物搅拌2分钟，然后饮用。或者，对象摄入含GOS的凝胶胶囊。指导对象不跳过任 何剂量；如果某一天忘记服药，指导对象在方案中补充一天，但不要将剂量加倍。在给药方 案之前、之后和之后30天，对象自己报告症状评分。采用Likert量度评分系统：对对象报 告的摄入乳制品引起的排气、腹部绞痛、肠胃气胀和/或腹泻进行1-5症状评级：[(1)无症 状，(2)轻微症状，(3)中度症状，(4)强烈症状，(5)严重症状)]。 [0410] 表8.用GOS治疗对象的小规模研究的给药方案. [0411] [0412] 剂量以克计算；PM-与晚餐一起摄入；AM-与早餐一起摄入 [0413] 实施例3：在GOS溶液中培养乳杆菌和双歧杆菌菌株 [0414] 在补充2％葡萄糖或2％GOS的从头(scratch)MRS(表9)中评价乳杆菌和双歧杆菌菌株的生长，并利用FLUOStar OPTIMA微量滴定板读板仪测定吸光度(A600)随时间的改 变从而进行自动监测。该菌株在37℃有氧培养。结果见图12。在37℃的厌氧条件下，某些 菌株能够生长，在所示时间人工读出OD值。 [0415] 表9：从头MRS配方： [0416] [0417] 实施例4：纯化GOS组合物 [0418] 图13A和B表示在纯化步骤之前(13A)和之后(13B)，本发明GOS组合物的HPLC色谱图。 [0419] 实施例5：双歧杆菌在半乳寡糖上的比较生长. [0420] 本研究目的是确定不同双歧杆菌种类和菌株在半乳寡糖上生长的能力。 [0421] 在补充有2％糖溶液的从头MRS(表10)中评估乳杆菌和双歧杆菌菌株的生长。实验所用的糖是：葡萄糖-费氏公司(Fisher)；乳糖-费氏公司(Fisher)；GOS1-95％GOS纯 度，来自宜纳克(Inalco)SPA-里特制药公司(Ritter Pharmaceuticals)提供；GOS2-90％ GOS纯度，来自GTC-里特制药公司提供。 [0422] 将糖原液过滤除菌，然后加入从头MRS制剂(表1)或半合成培养基(表11)中。 [0423] 表10：从头MRS组合物 [0424] [0425] 表11：用于大肠杆菌的半合成培养基(Barrangou，R.，E.Altermann，R.Hutkins，R.Cano和T.Klaenhammer，参与嗜酸乳杆菌的果寡糖利用的操纵子的功能和比较基因组 分 析(Functional and comparative genomic analyses of an operon involved in fructooligosaccharide utilization by Lactobacillus acidophilus)，Proc.Nat.Acad. Sci.USA.100：8957-8962)。 [0426] [0427] 培养方法： [0428] 将乳杆菌和双歧杆菌培养物在MRS肉汤中增殖过夜，然后用测试培养基传代一次。在生长实验中，将培养物接种到含有待测四种糖之一的MRS从头培养基中。监测生长 如下：**自动方式，采用FLUOStar OPTIMA微量滴定板读板仪监测吸光度(A600)随时间的 改变。在这些实验中，在37℃有氧培养这些菌株；或者**手动方式，采用标准分光光度计 监测5ml液体培养管中OD600nm随时间的变化。在充入无氧气体的COY无氧室中，37℃无 氧培养这些培养物。 [0429] 种类鉴别： [0430] 使用16S rRNA测序的标准方法通过分类学鉴定证实这些实验中采用的所有双歧杆菌培养物(Kullen，M.J.，R.B.Sanozky Dawes，D.C.Crowell和T.R.Klaenhammer(2000) 使用16SrRNA基因的DNA可变区序列快速和精确地鉴定嗜酸乳杆菌复合物中的细菌(Use of DNA sequence of variable regions of the 16SrRNA gene for rapid and accurate identification of bacteria in the Lactobacillus acidophilus complex).J.Appl. Microbiol.89：511-518。 [0431] 结果： [0432] 图14-19说明嗜酸乳杆菌NCFM以及各种双歧杆菌和大肠杆菌菌株随时间的生长。这些数据的关键结论如下详述。 [0433] 首先，嗜酸乳杆菌NCFM在GOS1(95％)上的生长与在葡萄糖上的生长一样好，这表明该微生物能有效代谢GOS1(95％)(图14)。 [0434] 其次，检测六种不同双歧杆菌在GOS1(95％)上的生长能力(图15和16)。结果表明，大多数菌株能在GOS1(95％)上生长，但其生长速率低于葡萄糖。例外是假长双歧杆 菌(B.pseudolongum)和青春双歧杆菌(B.adolescentis)，假长双歧杆菌在GOS1(95％) 上的生长与葡萄糖一样好(图15)，青春双歧杆菌在GOS1(95％)上的生长情况优于葡萄 糖。青春双歧杆菌和长双歧杆菌是成人粪便中的主要菌种。(Hoover，DG.《双歧杆菌》 (Bifidobacterium)，第210-217页，刊于《食品微生物学百科全书》(The Encyclopedia of Food Microbiology)；Carl Batt和P.D.Patel(编)，学术出版社(Academic Press)，圣地 亚哥。 [0435] 第三，还检测五种不同双歧杆菌在四种不同糖源葡萄糖、乳糖、GOS1(95％)和GOS2(90％)上的比较生长(图17和18)。从这些结果可以明显看出，所有四种种类在GOS 上的生长相当良好，但在每种情况中GOS2(90％)上的生长略优于GOS1(95％)上的生长。 这种差异归因于GOS2样品中存在的单糖百分比更高。预计这些污染糖是半乳糖、乳糖和葡 萄糖，它们都能刺激从GOS2底物生长略多。实验中所用的双歧双歧杆菌菌株在所有糖上生 长较差。令人惊讶的是，这些实验所用的双歧杆菌菌株都不能在乳糖上生长，除了假长双歧 杆菌。推测这些实验过程中来自标准MRS肉汤中初始增殖培养物的污染葡萄糖可能足以引 发乳糖代谢通路的分解代谢抑制。 [0436] 第四，检测三种不同的大肠杆菌菌株在GOS1(95％)和GOS2(90％)上的生长能力(图19)。结果表明，这些大肠杆菌菌株无法在GOS1(95％)上或在不加糖(对照)的情况 下生长。相反，所有三种菌株均能在GOS2(90％)上良好生长，其生长速率与在葡萄糖上的 生长速率相当。这些结果表明，GOS2(90％)样品中10％污染糖(如葡萄糖、半乳糖、乳糖) 足以将大肠杆菌菌株的生长刺激到与游离葡萄糖相同的水平。这些结果论证了GOS化合物 纯度对于促进靶向有益微生物(如乳杆菌和双歧杆菌)在胃肠道中生长而不刺激大肠杆菌 和其它潜在大肠型细菌在胃肠道中生长的重要性。 [0437] 虽然本文介绍和描述了本发明的优选实施方式，但本领域技术人员可明显看出，这些实施方式仅以实例的方式提供。本领域技术人员在不背离本发明的情况下可以作出多 种改变、变化和取代。应理解，本文所述的本发明实施方式的各种替代形式可用于实施本发 明。所附权利要求书确定了本发明范围，这些权利要求范围内的方法和结构以及其等同形 式均为本发明所覆盖。 |
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