一种强稳定性蜂花粉及其制备方法 |
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| 申请号 | CN201610178514.5 | 申请日 | 2016-03-25 | 公开(公告)号 | CN105768000A | 公开(公告)日 | 2016-07-20 |
| 申请人 | 邵素英; | 发明人 | 邵素英; | ||||
| 摘要 | 本 发明 公开了一种强 稳定性 蜂花粉及其制备方法，以蜂花粉为主要原料，将酶活 力 高、酶系丰富的天然 植物 源酶和含有蜂花粉形成过程最原始、酶系最全的蜂王幼虫和雄蜂蛹唾液和肠道酶系的蛹虫肠道提取物科学复配、并采用 微波 高温瞬时膨化技术和 益生菌 发酵 技术，将特种 生物 酶解、微波高温瞬时低温膨化和益生菌发酵对蜂花粉进行快速、有效和深度破壁，制得破壁蜂花粉，然后与一种或多种功能性辅料科学复配，制得一种最大限度地保持蜂花粉天然 风 味和营养成分，破壁率高、效率高、成本低、功能性强的强稳定性蜂花粉。 | ||||||
| 权利要求 | 1.一种强稳定性蜂花粉，主要有以下重量份数的原料制备：蜂花粉150-180份，植物提取物10-30份，蛹虫肠道提取物10-20份，改性膳食纤维10-20份，低聚糖7-15份，植物乳杆菌粉11-15份，异麦芽糖醇2-6份，芒果粉2-6份； |
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| 说明书全文 | 一种强稳定性蜂花粉及其制备方法技术领域[0001] 本发明涉及蜂花粉，具体涉及一种强稳定性蜂花粉及其制备方法。 背景技术[0002] 蜂花粉是指蜜蜂采蜜时带回的花粉团，在蜂巢内经过储藏和发酵后形成的花粉。蜜蜂在采蜜时，携粉足会收集花粉，形成花粉团，在进入蜂巢后，花粉团会被储藏起来。其主要食疗成分是：蛋白质、氨基酸、维生素、蜂花粉素、微量元素、活性酶、黄酮类化合物、脂类、核酸、芸苔素、植酸等。其中氨基酸含量及比例是最接近联合国粮农组织(FAO)推荐的氨基酸模式，这在天然食品中极其少见。蜂花粉是有营养价值和药效价值的物质所组成的浓缩物，它含蛋白质、碳水化合物、矿物质、维生素和其它活性物质。蜂花粉既是极好的天然营养食品，同时也是一种理想的滋补品，并具有一定的医疗作用。 [0003] 蜂花粉来源于大自然，是蜜蜂从显花植物(蜜源植物和花粉源植物)花蕊内采集的花粉粒，并加入了特殊的腺体分泌物(花蜜和唾液)混合而成了一种不规则扁圆形状物。蜂花粉具有独特的天然保健作用与医疗及美容价值，被越来越多的人所认识，是一种高蛋白低脂肪营养保健食品，被誉为“全能的营养食品”“浓缩的天然药库”“内服的化妆品”等，是人类天然食品中的瑰宝。 [0004] 与其它天然产物相比，花粉的结构比较特殊。花粉粒是由花粉壁、萌发孔和原生质三部分构成。花粉壁又称孢壁，可分为内壁和外壁，内壁是孢壁最里面的一层，光滑、薄而有弹性。外壁较厚，硬而缺乏弹性，是孢壁中结构较复杂的一层，主要成分是孢粉素，该物质具有物理、化学和酶的抗性作用，耐酸、耐碱、耐温、耐压，对胃酸和其它消化系统酶也非常稳定。研究证明：未破壁花粉中的营养物质不易被人体消化吸收，而破壁可以使花粉的活性物质充分释放，从而使其花粉产品的功效和保健功能均大幅度提高。花粉壁既影响了花粉营养成分的吸收利用，也阻止了提取时营养物质的释放，大大限制了花粉的深层开发和利用，因此，蜂花粉的破壁很重要。 [0005] 目前国内外花粉破壁的方法主要分为机械破壁、物理破壁和生物破壁。 [0006] 机械破壁主要是依靠机械的挤压、剪切等作用，使花粉壁和内膜囊破裂，花粉的内容物释放，常见有旋风粉碎法和超微粉碎法。郝晓亮等采用旋风粉碎法研究了松花粉的破壁，曹龙奎等采用超微粉体技术研究了玉米花粉的破壁，使花粉颗粒粒径达到8μm以下，并且粒度均匀合理。中国专利CN 103181511公开了一种超微红花蜂花粉的制备方法，其特征是红花蜂花粉在温度－20～－30℃的冷库中冷冻5～8天后，移到温度为65～75℃的恒温箱或 温室中放置20～30分钟，再移到温度为45～50℃干燥箱干燥3～5小时，干燥冷却后移到水冷式研磨超微粉碎机中粉碎，冷却水出口水温控制在25℃以下，粉碎细度控制在1500～2000目，经过研磨粉碎的超微红花蜂花粉杀菌后，用铝箔密封包装，贮藏在温度为-5～7℃冷库中待用。使用本发明方法制备的超微破壁红花蜂花粉，可以提高红花蜂花粉有效成份的吸收率，充分发挥红花蜂花粉对心脑血管疾病、改善血液循环有预防和治疗的功效。中国专利CN 101449754B公开了一种破壁蜂花粉颗粒的生产方法，属于蜂花粉的加工工艺。目前现有的蜂花粉破壁技术有的破壁率低，有的设备复杂，有的破壁速度慢等等。本发明提供一种破壁效率高，灭菌效果好，使用设备简单的破壁蜂花粉颗粒生产方法，包括灭菌、破壁、造粒和检验工序，其特征在于：所述破壁机为振动研磨破壁机，该振动研磨破壁机的振动频率在1200-1600cpm之间，振动幅度在3.5-5mm之间，所述蜂花粉每批投料量为100kg，破壁时间为2小时。但是，机械破壁破壁率能耗高且强烈的挤压、剪切可能会造成营养成分的损失。 [0007] 物理破壁是借助辐射、溶胀、渗透、超声波、微波、温差变化等物理作用使花粉壁破裂，主要有温差法、辐射法、水合破壁法、超声波法、渗透压破壁法、超低温加微波破壁法和液氮淬冷破壁法。中国专利CN 102114058B用于治疗脂肪肝的蜂花粉片剂的生产方法，涉及产品片剂生产技术，将除杂的蜂花粉经气流粉碎破壁处理后浸泡在常压常温水中，以超声波处理后，经转速为8000～10000转的冷冻离心机离心处理，取上清，再将上清在-5～5℃的环境温度下，过2800D以下的分子筛，分离出分子量小于2800D的蜂花粉水溶物；将分子量小于2800D的蜂花粉水溶物经冷冻真空干燥后，得到含水量低于4％的蜂花冻干粉；将所述蜂花冻干粉与水溶性淀粉混合制片。中国专利CN 101416763B公开了一种蜂花粉饮料及其制备方法，其中包括对蜂花粉进行预处理、温差破壁与机械破壁相结合的破壁处理方法、冷藏静置、离心、过滤、定容、灌装等多道工序制得澄清的蜂花粉料。但是，单一的物理方法破壁率较低且对有些设备要求高。 [0008] 生物破壁因破壁率高、破壁效果显著；作用条件温和，对热敏性营养物质破坏性小；在破壁的同时还可促进蜂花粉消化和吸收，产生功能性代谢产物等诸多优点而被广泛应用于蜂花粉破壁工艺及相关蜂花粉产品中，生物破壁大的发面来讲主要包括发酵破壁和酶解破壁。 [0009] 酶解破壁是利用酶使花粉壁上某些成分分解破坏花粉壁，使萌发孔打开，花粉内容物流出。目前酶解破壁中常用的酶有纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶、蛋白酶、淀粉酶、复合酶等。中国专利CN 102746413B公开了一种蜂花粉多糖酶解破壁结合热水超声浸提方法，包括以下步骤：将蜂花粉干燥、除杂、粉碎、过筛；酶解破壁；加热超声浸提；脱水；高氯酸除蛋白；二乙胺基乙基纤维素柱层析，洗脱；CTAB分离含酸性多糖沉淀和含中性多糖沉淀；溶 解多糖深沉后经脱水、真空冷冻、干燥得到高纯度无杂质的蜂花粉多糖。中国专利CN 101401821B公开了一种将蜂花粉经蛋白酶酶解成多肽，将多肽制成的片剂及其制备方法。 是将经过筛选、去杂、干燥后的蜂花粉进行粉碎，达到要求后加工艺水，搅拌均匀，放置于- 18℃以下冷冻24-48小时。取出后立即加入100℃的工艺水搅拌溶化，用均质机均质20-60分钟，放入酶解罐中加入纤维素酶进行酶解0.5-2小时，后用碱液调整pH值后加入蛋白酶进行酶解3-6小时。酶解后立即将蜂花粉肽液加温进行灭酶。以淀粉为赋形剂，进行造粒、压片即得。特点是1)专一性：蛋白酶、果胶酶、纤维素酶、淀粉酶能专一的酶解花粉壁及萌发孔处的蛋白质、果胶、纤维素、淀粉粒大分子物质；2)高效性：酶解反应破壁效果好；3)反应条件温和，有利于营养活性物质的保存；但是由于蜂花粉孢壁成分复杂和酶的专一特性，现有酶制剂及其复配，不能很好的解决酶解破壁问题，同时，由于酶的产量低，价格较贵，酶解成本高。 [0010] 发酵破壁法主要是利用酵母、曲霉、乳酸菌等有益菌发酵过程中产生的各种酶，以及花粉内部含有的各种酶，利用这些酶的作用打通花粉内外壁的部分通道(萌发孔、沟)，从而使得内壁中的营养成分溶出。目前发酵破壁中常用的菌种有曲霉、酵母、乳酸菌、平菇、香菇等。中国专利CN 101756091B公开了一种花粉纳豆片，包括以下重量份的组分：花粉4～5份，纳豆3～4份，红曲1～2份，低聚糖1～2份。所述花粉是以蜂花粉为原料，经以下制备方法得到的：先用50～100PPM ClO2水溶液喷洒原料蜂花粉密闭灭菌消毒30分钟，然后调整湿度为25％，接种发酵剂进行发酵，温度30～37℃，发酵12小时，检验酸度，当pH＝4.5时，低温干燥，得花粉；所述发酵剂为乳酸链球菌和乳酸杆菌。中国专利CN 104286623A一种蜂花粉及蜂花粉的发酵方法，采用益生菌混合固态发酵蜂花粉，生产成本低，投资的资金较少，在下游处理方便，污染小。生产出的发酵蜂花粉，可以调节人体肠道功能。蜂花粉中含有的蛋白质被分解成小肽和游离氨基酸，有利于肠胃的消化吸收，去除过敏源。所述益生菌采用乳双歧杆菌或植物乳杆菌或嗜酸乳杆菌。所述益生菌的活菌数为1×109-5×109CFU/g。中国专利CN 104059842A一种蜂花粉酒的制造方法,所述的蜂花粉酒的制造方法的步骤如下：取灭菌处理过的蜂花粉0.8-1重量份冷却至30-35℃,加入1.5—2重量份的乌衣曲再加入0.8--1重量份的软化冷开水，放入配料盆搅拌均，放入到灭菌处理过的酒缸内密封发酵40—48小时；再加入10—15重量份的软化冷开水，加入10—15重量份40—41浓度的蜂蜜，加入处理过的桂圆仁1.5—2.5重量份，分别加入料液中，进行搅拌均匀，下料完毕进行密封，调控发酵期间温度，保持在温度20—25℃之间，落酒缸至发酵停止时间为30—35天；提取过滤后的酒液，隔水加热灭菌温度85—90℃，20—30分钟，冷却后封存沉淀15—20天，灌装成品即可待饮。中国专利CN 102389069A公开了一种蜂花粉破壁方法，其特征 在于包括如下步骤：于蜂花粉中加入酵母发酵，使蜂花粉破壁；蜂花粉中所加入的酵母以干重计为蜂花粉重量的0.5～3％；蜂花粉中加入酵母后，再加入蜂花粉体积1.5～2.5倍的水，然后于28～34℃发酵2～ 4天，最后于36～38℃加热4～8h，得到破壁后的蜂花粉溶液。中国专利CN 103598654B公开了一种蜂花粉活性益生菌饮料及其制备方法。该蜂花粉活性益生菌饮料是以蜂花粉为原料，配以一定比例的麦芽糖和/或半乳糖，经乳杆菌BL1和乳杆菌BL2两种益生菌混合发酵，再经调配而成。本发明针对蜂花粉原料酸性较强，不易被微生物利用的特点，优选两个耐酸性强并且有多种优良性状的菌株，通过控制发酵工艺使产品30天内益生菌活菌数保持在 1011cfu/L以上，并能生物转化蜂花粉黄酮苷得到大量黄酮苷元，提高蜂花粉黄酮的生物利用率。同时富含其它蜂花粉和益生菌发酵产物，营养丰富，香味浓郁，酸甜适口，同时具有美容养颜、增强免疫力、降低胆固醇、调节肠道菌群及预防便秘等功能。上述发酵破壁法中曲霉发酵法风味差；平菇发酵法和香菇发酵法接种时容易杂菌感染、菌丝生长缓慢、抗菌能力差、破壁率低；乳酸菌发酵法和酵母发酵法破壁率高、营养成分损失小、破壁后氨基酸含量高、但时间长、速度慢。 [0011] 综上，探求一种最大限度地保持蜂花粉天然风味和营养成分，破壁率高、效率高、成本低的蜂花粉破壁方法，以拓展蜂花粉的深加工领域很有必要。 发明内容[0012] 本发明所解决的技术问题是克服现有蜂花粉破壁技术的缺陷，以蜂花粉为主要原料，将酶活力高、酶系丰富的天然植物源酶和含有蜂花粉形成过程最原始、酶系最全的蜂王幼虫和雄蜂蛹唾液和肠道酶系的蛹虫肠道提取物科学复配、并采用微波高温瞬时膨化技术和益生菌发酵技术，将特种生物酶解、微波高温瞬时低温膨化和益生菌发酵对蜂花粉进行快速、有效和深度破壁，制得破壁蜂花粉，然后与一种或多种功能性辅料科学复配，制得一种最大限度地保持蜂花粉天然风味和营养成分，破壁率高、效率高、成本低、功能性强的强稳定性蜂花粉。 [0013] 为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案： [0014] 一种强稳定性蜂花粉，主要有以下重量份数的原料制备： [0016] 优选地，所述强稳定性蜂花粉，主要有以下重量份数的原料制备： [0017] 蜂花粉160-170份，植物提取物15-25份，蛹虫肠道提取物13-17份，改性膳食纤维13-17份，低聚糖9-13份，植物乳杆菌粉12-14份，异麦芽糖醇3-5份，芒果粉3-5份； [0018] 更优选地，所述强稳定性蜂花粉，主要有以下重量份数的原料制备： [0019] 蜂花粉165份，植物提取物20份，蛹虫肠道提取物15份，改性膳食纤维15份，低聚糖11份，植物乳杆菌粉13份，异麦芽糖醇4份，芒果粉4份； [0020] 进一步地，所述强稳定性蜂花粉还包括以下重量份数的一种或几种辅料； [0021] 藻类0.6-1.2份，玉米低聚肽粉0.5-1份，玛咖粉0.5-1份，鱼油0.2-0.8份，植物甾醇0.2-0.8份，磷酯酰丝氨酸0.1-0.7份，壳寡糖0.1-0.7份，海洋鱼骨胶原低聚肽粉0.1-0.7份，中草药0.1-0.6份，蛹虫草0.1-0.5份；大豆分离蛋白0.1-0.5份； [0022] 优选地，所述强稳定性蜂花粉还包括以下重量份数的一种或几种辅料； [0023] 藻类0.8-1.0份，玉米低聚肽粉0.7-0.9份，玛咖粉0.7-0.9份，鱼油0.4-0.6份，植物甾醇0.4-0.6份，磷酯酰丝氨酸0.3-0.5份，壳寡糖0.3-0.5份，海洋鱼骨胶原低聚肽粉0.3-0.5份，中草药0.2-0.4份，蛹虫草0.2-0.4份；大豆分离蛋白0.2-0.4份； [0024] 更优选地，所述强稳定性蜂花粉还包括以下重量份数的一种或几种辅料； [0025] 藻类0.9份，玉米低聚肽粉0.8份，玛咖粉0.8份，鱼油0.5份，植物甾醇0.5份，磷酯酰丝氨酸0.4份，壳寡糖0.4份，海洋鱼骨胶原低聚肽粉0.4份，中草药0.3份，蛹虫草0.3份；大豆分离蛋白0.3份； [0026] 进一步地，所述蜂花粉为玉米蜂花粉、芝麻蜂花粉、油菜蜂花粉、荞麦蜂花粉中的任意一种； [0027] 进一步地，所述植物提取物中不仅含有丰富的植物蛋白酶、淀粉酶、半纤维素酶、酯酶、氧化还原酶等多种植物酶而且含有植物多糖和单糖、植物淀粉、植物蛋白等营养物质，不仅可为强稳定性蜂花粉提供全面、天然的植物酶，还可为益生菌提供全面、丰富的营养物质，与蛹虫肠道提取物科学复配，破壁率更高，效果更好； [0029] 更优选地，所述植物提取物的制备方法为：将大麦芽和小麦芽按质量比8-10:1-3均匀混合，粉碎至粒度0.5-1mm,得粉碎麦芽；然后将木瓜、菠萝、无花果分别于超声波清洗机中在功率200W、频率30KHz条件下超声清洗5-10min，沥干，室温下破碎至粒度0.5-1mm，并按质量比7-9:1-3:1-2均匀混合，加入混合物质量3-5倍的粉碎麦芽得原料混合物，加入原料混合物质量1-3倍的水，用柠檬酸调节pH值为3-4，在功率150-300W、频率2000Hz条件下进行微波提取，其中，每次微波辐照总时间60-80s,进行间隔式辐照：辐照10s，间隔10s，控制温度20-35℃，如此辐照10次，同时在功率200-300W,频率30-40KHz条件下进行超声波辅助提取；保温1-3h,然后，在功率200-400W、频率2000Hz条件下进行微波提取，其中， 每次微波辐照总时间90-105s,进行间隔式辐照：辐照15s，间隔10s，控制温度40-60℃，如此辐照10次，同时在功率300-500W,频率40-50KHz条件下进行超声波辅助提取，最后自然降温至室温，于电场强度25-35kV/cm，脉冲时间400-600μs,脉冲频率200-300Hz条件下进行高压脉冲电场提取15-20min；提取液过滤得第一滤液，加滤渣4倍的水漂洗、过滤得第二滤液，将第一滤液和第二滤液按质量比1:3-5均匀混合，减压浓缩至固形物含量为20％以上，即得植物提取物； [0030] 优选地，所述超声波清洗机中清洗液为0.3-0.5％的碳酸氢钠溶液。 [0031] 进一步地，所述蛹虫肠道提取物是以2-3日龄的蜂王幼虫肠道和11-12日龄的雄蜂蛹肠道为原料，经抗冻保护、冷冻破碎、生物破乳和离心分离而得到的； [0032] 优选地，所述蛹虫肠道提取物的制备方法，包括如下步骤：将2-3日龄的蜂王幼虫肠道和11-12日龄的雄蜂蛹肠道按质量比3-5:1-3混合，加入混合物质量1-2倍的质量百分比为8-12％的丝胶肽溶液，搅拌均匀，置-18—-22℃冷冻5-10min，破碎，研磨成匀浆，添加其质量0.03-0.05％的生物破乳剂破乳20-40min,在18000-25000g，4℃条件下离心20-30min，收集第一次离心后的中层液体，然后在18000-25000g，4℃条件下离心20-30min，收集第二次离心后的中层液体，得到蛹虫肠道提取物； [0033] 优选地，所述丝胶肽溶液的pH值为6-7； [0034] 优选地，所述生物破乳剂为糖脂类、脂肽类、胞壁结合类生物破乳剂中的一种或几种组合； [0035] 优选地，所述生物破乳剂的质量组成为：糖脂类:脂肽类:胞壁结合类＝5-7:4-6:2-4； [0036] 优选地，所述糖脂类生物破乳剂为鼠李糖脂、烷基糖苷中的一种或两种组合； [0037] 更优选地，所述糖脂类生物破乳剂的质量组成为：鼠李糖脂:烷基糖苷＝3-5:1-2。 [0038] 进一步地，所述改性膳食纤维是将膳食纤维经物理、化学或生物的方法处理而得到的具有强持水性、膨胀性、增稠性、吸附性且网格结构丰富的可溶性纤维素含量高、生物活性强、对人体益生菌群有重要的、积极作用的纤维素，与普通膳食纤维相比，其生物活性作用更强大，还可大大延长强稳定性蜂花粉的保质期； [0039] 优选地，所述改性纤维是由菊粉、苹果纤维、燕麦纤维、小麦纤维中的一种或多种经生物酶酶解而得到的； [0040] 更优选地，所述改性膳食纤维的制备方法，包括以下步骤：将菊粉、小麦纤维、燕麦纤维按质量比5-7:2-4:1-3均匀混合，加入其质量3-7倍的水，室温100-300W、35-40KHz条件超声提取10-15min,然后在电场强度20-40kV/cm，脉冲时间300-500μs,脉冲频率200-400Hz条件下进行高压脉冲电场处理10-15min；用乳酸调节pH值为4.5-6.5，加入混合物质量 0.1-0.3％的生物酶，于45-55℃酶解20-48min；酶解液过滤，滤液减压浓缩、冷冻干燥至水分含量为5-8％即得改性膳食纤维； [0041] 所述生物酶为纤维素酶、木聚糖酶、漆酶、果胶酶按质量比1-3:1-3:1-2:1-2均匀混合。 [0042] 进一步地，所述低聚糖为低聚果糖、水苏糖、棉子糖、低聚木糖、低聚半乳糖、大豆低聚糖、低聚异麦芽糖、低聚麦芽糖中至少一种； [0043] 优选地，所述低聚糖重量份数组成为低聚果糖40-50份，低聚麦芽糖30-40份，棉子糖20-40份，大豆低聚糖16-18份，低聚半乳糖10-15份，低聚木糖10-15份，低聚异麦芽糖10-15份，水苏糖8-12份。 [0044] 进一步地，所述植物乳杆菌粉是以植物乳杆菌CGMCC NO.11763为出发菌株按常规方法制备的，其活菌含量为：7×1012-9×1012cfu/g；其中冷冻干燥工艺采用的冷冻保护剂以含有抗冻蛋白的动物或植物为原料，经高压脉冲电场提取、超声波辅助微波提取和复配酶酶解而制得的，可有效提高植物乳杆菌粉在冷冻干燥过程活菌存活率； [0045] 优选地，所述保护剂的制备方法，包括如下步骤：将冬黑麦、沙冬青、鲨鱼皮胶原蛋白分别清洗、沥干，按质量比8-10:3-5:2-4均匀混合，加入混合物料质量0.1-1倍的pH值为3.8-4.5的乳酸润湿3-8h,于-18--22℃冷冻1-2h后立即进行粉碎，冷冻料层厚度3-5cm，粉碎物粒径0.5-3mm,接着加入粉碎物质量10-20倍的水，用乳酸调节pH值为3.5-5.5，于室温下在电场强度25-35kV/cm，脉冲时间300-500μs,脉冲频率200-300Hz条件下进行高压脉冲电场处理20-30min；然后于室温在功率150-300W条件下进行微波辐照提取15-20min，同时在功率200-300W,频率30-40KHz条件下进行超声波辅助提取；加入提取液质量1-2％的复配酶，于45-55℃酶解30-50min；酶解液过滤、滤液浓缩、低温粉碎至粒径为0.1-0.3mm即得保护剂； [0047] 进一步地，所述藻类为雨生红球藻、盐藻、钝顶螺旋藻中的任意一种。 [0049] 本发明另一目的是提供上述强稳定性蜂花粉的制备方法，包括如下步骤： [0050] 1)按照配方称取各原辅料； [0051] 2)将蜂花粉置装有0.3-0.5％碳酸氢钠溶液的超声波清洗机中，室温下于200W、40KHz 清洗3-5min，漂洗，沥干，在质量百分比为13-18％的丝胶肽溶液中浸泡5-7min，取出，置-18—-22℃冷冻5-10min，破碎，立即在功率3-5Kw,频率2450MHz,温度120-140℃微波加热5-7s,加入原蜂花粉质量3-5倍的水，用乳酸调节pH值为4-6，于电场强度20-40kV/cm，脉冲时间400-600μs,脉冲频率200-400Hz室温条件下进行高压脉冲电场处理10-15min，然后室温400W、40KHz条件超声处理10-15min得蜂花粉预处理液； [0052] 3)将蜂花粉预处理液升温至40-50℃，向其中加入植物提取物和蛹虫肠道提取物，搅拌均匀，保温，酶解10-15min，得蜂花粉酶解液； [0053] 4)向蜂花粉酶解液中加入低聚糖、20-30％的改性膳食纤维，充分溶解5-10min，自然降温至40-45℃，加入植物乳杆菌粉质量的50-60％恒温发酵3-5h，接着以0.8-1.0℃/min的速率升温至50-55℃,加入植物乳杆菌粉质量的40-50％恒温发酵1.5-3.5h，最后以0.6-0.8℃/min的速率降温至40-45℃,继续发酵0.5-1h，发酵液经100-300目筛网过滤，滤液经超滤、减压浓缩、冷冻干燥即得破壁蜂花粉； [0054] 5)将破壁蜂花粉与异麦芽糖醇、芒果粉和辅料加入V型混合罐均匀混合25-35min,搅拌转速20-40r/min,然后加入剩余改性膳食纤维均匀混合12-18min,搅拌转速40-60r/min,无菌灌装、密封、包装即得强稳定性蜂花粉； [0055] 采用上述方法制备的破壁蜂花粉破壁率可达98％以上，强稳定性蜂花粉中植物乳杆菌活菌数可达6×1011-9×1011cfu/g。 [0056] 本发明植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)XH于2015年11月30日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)，保藏号为CGMCC NO.11763，保藏地址为：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所，邮编：100101。 [0057] 植物乳杆菌益生特性如下： [0058] 本发明所提供的植物乳杆菌CGMCC NO.11763经实验发现能够在pH为1.50的条件下存活，在1％胆盐培养4小时后仍处于存活状态；植物乳杆菌CGMCC NO.11763降解亚硝酸盐速度快，分解能力达到10.9mg/h/kg，该菌种在生产泡菜时，整个发酵过程中亚硝酸盐浓度在4.8mg/kg以下；CGMCC NO.11763在发酵60h小时后，对胆固醇降解率可达到64.76％。CGMCC NO.11763黏附能力测定的自凝集率为95.71％。 [0059] 植物乳杆菌CGMCC NO.11763对胆固醇降解能力研究和测定： [0060] 取1ml CGMCC NO.11763母液接种于10mL的MRS胆固醇液体培养基(胆固醇含量0.1mg/ml,pH 6.2)中，37℃的恒温静置分别培养20h、40h、60h备用，以接入1mL无菌水的MRS胆固醇培养基为对照，取以上培养不同时间的菌液样品及对照液各1ml,9000r/min，4℃ 下离心10min，得到发酵上清液，邻苯二甲醛法测定上清液中胆固醇含量(具体为：取各上清液 0.1ml于相应的试管中,加冰醋酸0.3ml,1mg/ml的邻苯二甲醛0.15ml，缓缓加入浓硫酸 1.0ml，混合均匀。室温静置10min，于550nm下测吸光值)。每一处理3个重复，以同样方法制作胆固醇标准曲线，计算上清液中胆固醇含量及降解率,结果见表1。可知，CGMCCNO.11763对胆固醇有很好的降解作用，在发酵60h小时后，降解率可达到64.76％。 [0061] 表1对胆固醇的降解情况。 [0062]降解时间(h) 0 20h 40h 60h 胆固醇含量(mg/ml) 0.2273±0.0058 0.1356±0.0018 0.1011±0.0094 0.801±0.0231 胆固醇降解率％ 40.34％ 55.52％ 64.76％ [0063] 植物乳杆菌CGMCC NO.11763菌株的耐胆盐试验： [0064] 取CGMCCNO.11763菌液1mL接种菌种于含有不同胆盐(含量梯度为0.0％、0.2％、0.4％、0.6％、0.8％、1％)的10mL MRS液体培养基(PH＝6.4)，置于37℃下分别培养0、2、4h，每个处理3个重复。各取1ml样品菌液于9ml生理盐水中混匀，制备稀释度溶液，取0.1ml稀释液于MRS中涂布，于37℃生化培养箱中倒置培养48小时(每个稀释度做3个平行)记录计算平板上的菌数个数。结果见表2。可知该菌在胆盐浓度为1％处理4h后菌的生长量依然[0065] 达到0.59±0.92×107(cfu/ml)，有很好的耐胆盐能力。 [0066] 表2耐胆盐能力检测[(±s)×107cfu/ml] [0067] [0068] 植物乳杆菌CGMCC NO.11763菌株的耐酸试验 [0069] 取HLX37母液按1ml接种菌种于不同pH值(pH梯度为1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0)的10mLMRS液体培养基，置于37℃下分别培养0、2、4h，每一处理3个重复。各取1ml样品菌液于 9ml生理盐水中混匀，制备稀释溶液，取0.1ml稀释液于MRS中涂布，于37℃生化培养箱中倒置培养48小时(每个稀释度做3个平行)记录平板上的菌落个数。结果见表3。说明该菌具有很强的耐酸能力。 [0070] 表3耐酸能力检测[(±s)×107cfu/ml] [0071] [0072] [0073] 植物乳杆菌CGMCC NO.11763的黏附能力测定 [0074] 培养CGMCC NO.11763(MRS液体培养基)、大肠杆菌DH5α(LB液体培养基)24h得发酵液，分别置于3000r/min、4℃下离心10min，收集菌泥，分别用pH＝7.0的无菌磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤菌泥2次(即在菌落中加入PBS，震荡混合均匀后，置于3000r/min、4℃下离心10min，收集菌体)。自凝集率(％)：用无菌的PBS将菌泥CGMCC NO.11763制成在波长600nm处的吸光值为0.4±0.1(A 0)的悬浮菌液及菌悬液,静置24h后测定吸光值A 24，自凝集率(％)公式为(A 0—A 24)/A 0。；他凝集率(％)：将CGMCC NO.11763和大肠杆菌DH5α的悬菌液调节成在波长600nm处的吸光值为0.6±0.1(A 0)的混合悬浮菌液。静置24H后测定吸光值A 24，他凝集率(％)公式为(A 0—A 24)/A 0。测定结果见表4，可知CGMCC NO.11763的自凝集率为95.71％，有很强的黏附能力。 [0075] 表4黏附能力表 [0076] [0077] 植物乳杆菌CGMCC NO.11763的菌株生理特性 [0078] 所述植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)XH于2015年11月30日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)，保藏号为CGMCC NO.11763，保藏地址为：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所，邮编：100101。 [0080] 理化特征为：过氧化氢酶(-)，明胶液化(-)，吲哚实验(+)，运动性(-)，发酵产气(-)，亚硝酸盐还原(-)，发酵产气(-)，产硫化氢气体(-)，pH4.0MRS培养基中生长(+)。经过生理生化鉴定为为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)，命名为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)XH。 [0081] 菌株能够在57℃下生长良好，葡萄糖耐受能力为275g/L。 [0082] 本发明植物乳杆菌由采集人李建树，从新疆维吾尔族老乡家中酸奶中分离得到，采集时间2015年6月2日。 [0083] 本发明植物乳杆菌CGMCC NO.11763经实验发现能够在pH为1.50的条件下存活，在1％ 胆盐培养4小时后仍处于存活状态；植物乳杆菌CGMCC NO.11763降解亚硝酸盐速度快，分解能力达到10.9mg/h/kg，该菌种在生产泡菜时，整个发酵过程中亚硝酸盐浓度在4.8mg/kg以下；CGMCCNO.11763在发酵60h小时后，对胆固醇降解率可达到64.76％。CGMCC NO.11763黏附能力测定的自凝集率为95.71％，菌株能够在57℃下生长良好，葡萄糖耐受能力为275g/L。 [0084] 有益效果： [0085] 本发明以蜂花粉为主要原料，将酶活力高、酶系丰富的天然植物源酶和含有蜂花粉形成过程最原始、酶系最全的蜂王幼虫和雄蜂蛹唾液和肠道酶系的蛹虫肠道提取物科学复配、并采用微波高温瞬时膨化技术和益生菌发酵技术，将特种生物酶解、微波高温瞬时低温膨化和益生菌发酵对蜂花粉进行快速、有效和深度破壁，制得破壁蜂花粉，然后与一种或多种功能性辅料科学复配，制得一种最大限度地保持蜂花粉天然风味和营养成分，破壁率高、效率高、成本低、功能性强的强稳定性蜂花粉。具体试验效果见实施例七至十二，具体组分技术原理如下： [0086] 1.本发明制备的破壁蜂花粉以蜂花粉为原料，首先采用超声清洗对蜂花粉进行杀虫灭卵、杀灭微生物、去除农药残留和重金属离子等，大大提高了强稳定性蜂花粉的食品安全性；在含有丝胶肽的水溶液中浸泡，可最大限度地减少经冷冻而造成的蜂花粉活性物质的损失，提高了蜂花粉有效成分的提取率，同时也为后续变温益生菌发酵奠定了坚实基础；采用微波高温瞬时膨化可使经冷冻的蜂花粉适度膨化，增强了蜂花粉内、外壁及内含物之间和本身物质结构的分离、蓬松，促进了网状结果的形成，增强了内外物质交换的通透性，可是后续酶分子、乳酸菌渗透至内部而发挥作用，以达到蜂花粉有效成分的最大化积累；将高压脉冲电场、超声、生物酶解等低温提取技术有机结合，可最大限度地保留蜂花粉的功能性物质和有效成分；将含有多种酶活力高、酶系丰富的植物酶和蜂花粉形成的动物酶源科学复配，可有效降解蜂花粉中各种大分子物质，其丰富的酶系是市售复合酶无法比拟的，更符合蜂花粉物质形成和降解的“取之于自然，用之于自然”的原始天然法则；以功能性植物乳杆菌粉为发酵剂，采用变温发酵和分次接种方式在对蜂花粉进行进一步深度破壁的同时可最大限度地获取益生菌增殖和功能性代谢产物的最大积累。采用上述方法制备的破壁蜂花粉破壁率可达98％以上。 [0087] 2.本发明制备的蛹虫肠道提取物科学复配2-3日龄的蜂王幼虫肠道和11-12日龄的雄蜂蛹肠道为原料，在含有丝胶肽的水溶液中浸泡，可最大限度地减少经冷冻而造成的蛹虫活性物质的损失，提高了蛹虫有效成分的提取率；采用用生物破乳剂破乳，可促进蛹虫肠道中的脂肪等混溶性物质与含有丰富肠道酶的水解液的分离，可获取肠道酶的最大化提取，相对于现有的直接离心分离或加入缓冲液、生化药剂等分离方法，肠道酶提取率高、工艺简单，食品安全性高，对环境友好。同时，蛹虫肠道提取物经后续酶解，还含有蜂王幼虫多肽和雄蜂 蛹多肽，为强稳定性蜂花粉增添了更多的功能性生物活性物质。 [0088] 3.本发明的植物乳杆菌CGMCC NO.11763经实验发现能够在pH为1.50的条件下存活，在1％胆盐培养4小时后仍处于存活状态；植物乳杆菌CGMCC NO.11763降解亚硝酸盐速度快，分解能力达到10.9mg/h/kg，该菌种在生产泡菜时，整个发酵过程中亚硝酸盐浓度在4.8mg/kg以下；CGMCC NO.11763在发酵60h小时后，对胆固醇降解率可达到64.76％。CGMCC NO.11763黏附能力测定的自凝集率为95.71％。 [0089] 4.本发明在制备植物乳杆菌粉剂时采用的冷冻保护剂将含有抗冻蛋白较高的冬黑麦、沙冬青和鲨鱼皮胶原蛋白科学复配，经高压脉冲电场提取、超声波辅助微波提取和生物酶解而制得，全程低温提取，抗冻蛋白提取率高，损失少，得到的保护剂抗冻多肽含量高、种类全、功能性强、抗冻效果好，提高了植物乳杆菌粉剂中的活菌含量。 [0090] 5.本发明制备的植物提取物中不仅含有丰富的植物蛋白酶、淀粉酶、半纤维素酶、酯酶、氧化还原酶等多种植物酶而且含有植物多糖和单糖、植物淀粉、植物蛋白、可溶性纤维等营养物质，不仅可为强稳定性蜂花粉提供全面、天然的植物酶，还可为植物乳杆菌提供全面、丰富的营养物质；经超声清洗、微波辅助超声提取和高压脉冲电场提取、减压浓缩等低温提取后，其效果更加显著，并且有效提高了原料利用率、植物酶活性和产率；有效保证了植物提取物的食品安全性。 [0091] 6.本发明制备的改性膳食纤维将超声提取、高压脉冲电场提取和生物酶解科学结合，所得改性膳食纤维持水性、膨胀性、增稠性更强且不受酸、碱、盐的影响，可溶性纤维素含量高，更容易被乳酸菌利用，提高乳酸菌在人体肠道的生长及繁殖能力，增加益生菌菌群的种类和数量，降低人体肠道pH值，改善人体肠道微生态环境；吸附能力强，经改性后，纤维素的比表面积增大，网格结构丰富，吸附力增强，螯合、吸附胆固醇和胆汁酸类的有机分子能力更强、抑制人体对他们的吸收；离子交换能力增强，对金属元素，特别是重金属元素吸附效果更强，有效防止了人体重金属中毒；调节和维持肠道菌群的定植时间，增强肠道的消化和吸收能力，提高机体免疫力；有效促进胃肠蠕动，减缓并消除胃胀、腹胀等不良反应；强大的包埋作用可防止环境(氧气、温度、光照、水分活度等)因素对产品品质的影响，稳定了强稳定性蜂花粉的生物活性，延长了强稳定性蜂花粉的保质期。 [0092] 7.本发明将低聚糖和改性膳食纤维科学复配，给益生菌提供了全面、丰富的营养物质，不仅实现了益生菌的最大化增殖和功能性代谢产物的最大化积累，而且有效改善了成品强稳定性蜂花粉的口感和稳定性。 [0093] 8.本发明的制备方法制备方法工艺简单，操作方便，对设备要求低，可工业化和规模化生产，将改性膳食纤维最后混合，发挥了其强大的包埋作用，使得产品的性状更稳定、保质期 更长。 [0094] 需要说明的是本发明强稳定性蜂花粉的技术效果是各组分技术特征和方法特征相互协同、相互作用的结果，并非简单的技术特征(组分功能)的叠加，各组分技术特征的有机结合和协同产生的效果远远超过各单一技术特征功能和效果的叠加，具有较好的先进性和实用性。 具体实施方式[0095] 下面通过具体的实施方案叙述本发明。除非特别说明，本发明中所用的技术手段均为本领域技术人员所公知的方法。另外，实施方案应理解为说明性的，而非限制本发明的范围，本发明的实质和范围仅由权利要求书所限定。对于本领域技术人员而言，在不背离本发明实质和范围的前提下，对这些实施方案中的物料成分和用量进行的各种改变或改动也属于本发明的保护范围。 [0096] 实施例一： [0097] 原料制备 [0098] 1、植物提取物的制备 [0099] 其制备方法为： [0100] 将大麦芽和小麦芽按质量比9:2均匀混合，粉碎至粒度0.8mm,得粉碎麦芽；然后将木瓜、菠萝、无花果分别于超声波清洗机中在功率200W、频率30KHz条件下超声清洗8min，沥干，室温下破碎至粒度0.8mm，并按质量比8:2:1.5均匀混合，加入混合物质量4倍的粉碎麦芽得原料混合物，加入原料混合物质量2倍的水，用柠檬酸调节pH值为3.5，在功率225W、频率2000Hz条件下进行微波提取，其中，每次微波辐照总时间70s,进行间隔式辐照：辐照10s，间隔10s，控制温度30℃，如此辐照10次，同时在功率250W,频率35KHz条件下进行超声波辅助提取；保温2h,然后，在功率300W、频率2000Hz条件下进行微波提取，其中，每次微波辐照总时间100s,进行间隔式辐照：辐照15s，间隔10s，控制温度50℃，如此辐照10次，同时在功率400W,频率45KHz条件下进行超声波辅助提取，最后自然降温至室温，于电场强度30kV/cm，脉冲时间500μs,脉冲频率250Hz条件下进行高压脉冲电场提取18min；提取液过滤得第一滤液，加滤渣4倍的水漂洗、过滤得第二滤液，将第一滤液和第二滤液按质量比1:4均匀混合，减压浓缩至固形物含量为30％，即得植物提取物； [0101] 上述超声波清洗机中清洗液为0.4％的碳酸氢钠溶液。 [0102] 2、蛹虫肠道提取物的制备 [0103] 其制备方法包括如下步骤： [0104] 将3日龄的蜂王幼虫肠道和12日龄的雄蜂蛹肠道按质量比4:2混合，加入混合物质量 1.5倍的质量百分比为10％的丝胶肽溶液，搅拌均匀，置-20℃冷冻8min，破碎，研磨成匀浆，添加其质量0.04％的生物破乳剂破乳30min,在22000g，4℃条件下离心25min，收集第一次离心后的中层液体，然后在22000g，4℃条件下离心25min，收集第二次离心后的中层液体，得到蛹虫肠道提取物； [0105] 上述丝胶肽溶液的pH值为6.5； [0106] 上述生物破乳剂的质量组成为：糖脂类:脂肽类:胞壁结合类＝6:5:3； [0107] 其中糖脂类生物破乳剂的质量组成为：鼠李糖脂:烷基糖苷＝4:1.5。 [0108] 3、改性膳食纤维的制备 [0109] 改性膳食纤维的制备方法，包括以下步骤： [0110] 将菊粉、小麦纤维、燕麦纤维按质量比6:3:2均匀混合，加入其质量5倍的水，室温200W、38KHz条件超声提取13min,然后在电场强度30kV/cm，脉冲时间400μs,脉冲频率300Hz条件下进行高压脉冲电场处理13min；用乳酸调节pH值为5.5，加入混合物质量0.2％的生物酶，于50℃酶解34min；酶解液过滤，滤液减压浓缩、冷冻干燥至水分含量为6.5％即得改性膳食纤维； [0111] 上述生物酶为纤维素酶、木聚糖酶、漆酶、果胶酶按质量比2:2:1.5:1.5均匀混合。 [0112] 4、植物乳杆菌粉的制备 [0113] 植物乳杆菌粉是以植物乳杆菌CGMCC NO.11763为出发菌株按常规方法制备的，其12 活菌含量为：9×10 cfu/g；其中冷冻干燥工艺采用的冷冻保护剂以含有抗冻蛋白的动物或植物为原料，经高压脉冲电场提取、超声波辅助微波提取和复配酶酶解而制得的，可有效提高植物乳杆菌粉在冷冻干燥过程活菌存活率； [0114] 保护剂的制备方法，包括如下步骤： [0115] 将冬黑麦、沙冬青、鲨鱼皮胶原蛋白分别清洗、沥干，按质量比9:4:3均匀混合，加入混合物料质量0.5倍的pH值为4.2的乳酸润湿5h,于-20℃冷冻1.5h后立即进行粉碎，冷冻料层厚度4cm，粉碎物粒径2mm,接着加入粉碎物质量15倍的水，用乳酸调节pH值为4.5，于室温下在电场强度30kV/cm，脉冲时间400μs,脉冲频率250Hz条件下进行高压脉冲电场处理25min；然后于室温在功率225W条件下进行微波辐照提取18min，同时在功率250W,频率 35KHz条件下进行超声波辅助提取；加入提取液质量1.5％的复配酶，于50℃酶解40min；酶解液过滤、滤液浓缩、低温粉碎至粒径为0.2mm即得保护剂； [0116] 上述复配酶为纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶、果胶酶、单宁酶按质量比3:2:2:1.5:1.5均匀混合。 [0117] 以下实施例二至六所用植物提取物、蛹虫肠道提取物、改性膳食纤维、植物乳杆菌粉均 由实施例一制备。 [0118] 实施例二： [0119] 一种强稳定性雨生红球藻蜂花粉，主要有以下重量份数的原料制备： [0120] 蜂花粉165份，植物提取物20份，蛹虫肠道提取物15份，改性膳食纤维15份，低聚糖11份，植物乳杆菌粉13份，异麦芽糖醇4份，芒果粉4份，雨生红球藻0.9份； [0121] 其中蜂花粉为芝麻蜂花粉； [0122] 一种强稳定性雨生红球藻蜂花粉的制备方法，包括如下步骤： [0123] 1)按照配方称取各原辅料； [0124] 2)将蜂花粉置装有0.4％碳酸氢钠溶液的超声波清洗机中，室温下于200W、40KHz清洗4min，漂洗，沥干，在质量百分比为16％的丝胶肽溶液中浸泡6min，取出，置-20℃冷冻8min，破碎，立即在功率4Kw,频率2450MHz,温度130℃微波加热6s,加入原蜂花粉质量4倍的水，用乳酸调节pH值为5，于电场强度30kV/cm，脉冲时间500μs,脉冲频率300Hz室温条件下进行高压脉冲电场处理13min，然后室温400W、40KHz条件超声处理13min得蜂花粉预处理液； [0125] 3)将蜂花粉预处理液升温至45℃，向其中加入植物提取物和蛹虫肠道提取物，搅拌均匀，保温，酶解13min，得蜂花粉酶解液； [0126] 4)向蜂花粉酶解液中加入低聚糖、25％的改性膳食纤维，充分溶解8min，自然降温至43℃，加入植物乳杆菌粉质量的55％恒温发酵4h，接着以0.9℃/min的速率升温至53℃,加入植物乳杆菌粉质量的45％恒温发酵2.5h，最后以0.7℃/min的速率降温至43℃,继续发酵0.8h，发酵液经200目筛网过滤，滤液经超滤、减压浓缩、冷冻干燥即得破壁蜂花粉； [0127] 5)将破壁蜂花粉与异麦芽糖醇、芒果粉和雨生红球藻加入V型混合罐均匀混合30min,搅拌转速30r/min,然后加入剩余改性膳食纤维均匀混合15min,搅拌转速50r/min,无菌灌装、密封、包装即得强稳定性雨生红球藻蜂花粉； [0128] 采用上述方法制备的破壁蜂花粉破壁率可达99％，雨生红球藻蜂花粉中植物乳杆菌活菌数可达7.5×1011cfu/g。 [0129] 实施例三： [0130] 一种强稳定性鱼油蜂花粉，主要有以下重量份数的原料制备： [0131] 蜂花粉160份，植物提取物15份，蛹虫肠道提取物13份，改性膳食纤维13份，低聚糖9份，植物乳杆菌粉12份，异麦芽糖醇3份，芒果粉3份，鱼油0.5份； [0132] 其中蜂花粉为玉米蜂花粉； [0133] 一种强稳定性鱼油蜂花粉的制备方法，包括如下步骤： [0134] 1)按照配方称取各原辅料； [0135] 2)将蜂花粉置装有0.3％碳酸氢钠溶液的超声波清洗机中，室温下于200W、40KHz清洗3min，漂洗，沥干，在质量百分比为13％的丝胶肽溶液中浸泡5min，取出，置-18℃冷冻5min，破碎，立即在功率3Kw,频率2450MHz,温度120℃微波加热5s,加入原蜂花粉质量3倍的水，用乳酸调节pH值为4，于电场强度20kV/cm，脉冲时间400μs,脉冲频率200Hz室温条件下进行高压脉冲电场处理10min，然后室温400W、40KHz条件超声处理10min得蜂花粉预处理液； [0136] 3)将蜂花粉预处理液升温至40℃，向其中加入植物提取物和蛹虫肠道提取物，搅拌均匀，保温，酶解10min，得蜂花粉酶解液； [0137] 4)向蜂花粉酶解液中加入低聚糖、20％的改性膳食纤维，充分溶解5min，自然降温至40℃，加入植物乳杆菌粉质量的50％恒温发酵3h，接着以0.8℃/min的速率升温至50℃,加入植物乳杆菌粉质量的40％恒温发酵1.5h，最后以0.6℃/min的速率降温至40℃,继续发酵0.5h，发酵液经100目筛网过滤，滤液经超滤、减压浓缩、冷冻干燥即得破壁蜂花粉； [0138] 5)将破壁蜂花粉与异麦芽糖醇、芒果粉和鱼油加入V型混合罐均匀混合25min,搅拌转速20r/min,然后加入剩余改性膳食纤维均匀混合12min,搅拌转速40r/min,无菌灌装、密封、包装即得强稳定性鱼油蜂花粉； [0139] 采用上述方法制备的破壁蜂花粉破壁率可达98.5％，鱼油蜂花粉中植物乳杆菌活菌数可达8.5×1011cfu/g。 [0140] 实施例四： [0141] 一种强稳定性玛咖蜂花粉，主要有以下重量份数的原料制备： [0142] 蜂花粉170份，植物提取物25份，蛹虫肠道提取物17份，改性膳食纤维17份，低聚糖13份，植物乳杆菌粉14份，异麦芽糖醇5份，芒果粉5份，玛咖粉0.8份； [0143] 其中蜂花粉为油菜蜂花粉； [0144] 一种强稳定性玛咖蜂花粉的制备方法，包括如下步骤： [0145] 1)按照配方称取各原辅料； [0146] 2)将蜂花粉置装有0.5％碳酸氢钠溶液的超声波清洗机中，室温下于200W、40KHz清洗5min，漂洗，沥干，在质量百分比为18％的丝胶肽溶液中浸泡7min，取出，置-22℃冷冻10min，破碎，立即在功率5Kw,频率2450MHz,温度140℃微波加热7s,加入原蜂花粉质量5倍的水，用乳酸调节pH值为6，于电场强度40kV/cm，脉冲时间600μs,脉冲频率400Hz室温条件下进行高压脉冲电场处理15min，然后室温400W、40KHz条件超声处理15min得蜂花粉预处理液； [0147] 3)将蜂花粉预处理液升温至50℃，向其中加入植物提取物和蛹虫肠道提取物，搅拌均匀，保温，酶解15min，得蜂花粉酶解液； [0148] 4)向蜂花粉酶解液中加入低聚糖、30％的改性膳食纤维，充分溶解10min，自然降温至 45℃，加入植物乳杆菌粉质量的60％恒温发酵5h，接着以1.0℃/min的速率升温至55℃,加入植物乳杆菌粉质量的50％恒温发酵3.5h，最后以0.8℃/min的速率降温至45℃,继续发酵1h，发酵液经300目筛网过滤，滤液经超滤、减压浓缩、冷冻干燥即得破壁蜂花粉； [0149] 5)将破壁蜂花粉与异麦芽糖醇、芒果粉和玛咖粉加入V型混合罐均匀混合35min,搅拌转速40r/min,然后加入剩余改性膳食纤维均匀混合18min,搅拌转速60r/min,无菌灌装、密封、包装即得强稳定性玛咖蜂花粉； [0150] 采用上述方法制备的破壁蜂花粉破壁率可达99.5％，玛咖蜂花粉中植物乳杆菌活11 菌数可达6×10 cfu/g。 [0151] 实施例五： [0152] 一种强稳定性植物甾醇蜂花粉，主要有以下重量份数的原料制备： [0153] 蜂花粉150份，植物提取物10份，蛹虫肠道提取物10份，改性膳食纤维10份，低聚糖7份，植物乳杆菌粉11份，异麦芽糖醇2份，芒果粉2份，植物甾醇0.5份； [0154] 其中蜂花粉为玉米蜂花粉； [0155] 一种强稳定性植物甾醇蜂花粉的制备方法，包括如下步骤： [0156] 1)按照配方称取各原辅料； [0157] 2)将蜂花粉置装有0.3％碳酸氢钠溶液的超声波清洗机中，室温下于200W、40KHz清洗5min，漂洗，沥干，在质量百分比为13％的丝胶肽溶液中浸泡7min，取出，置-18℃冷冻10min，破碎，立即在功率3Kw,频率2450MHz,温度140℃微波加热5s,加入原蜂花粉质量5倍的水，用乳酸调节pH值为4，于电场强度40kV/cm，脉冲时间400μs,脉冲频率400Hz室温条件下进行高压脉冲电场处理10min，然后室温400W、40KHz条件超声处理15min得蜂花粉预处理液； [0158] 3)将蜂花粉预处理液升温至40℃，向其中加入植物提取物和蛹虫肠道提取物，搅拌均匀，保温，酶解15min，得蜂花粉酶解液； [0159] 4)向蜂花粉酶解液中加入低聚糖、20％的改性膳食纤维，充分溶解10min，自然降温至40℃，加入植物乳杆菌粉质量的60％恒温发酵3h，接着以1.0℃/min的速率升温至50℃,加入植物乳杆菌粉质量的50％恒温发酵1.5h，最后以0.8℃/min的速率降温至40℃,继续发酵1h，发酵液经100目筛网过滤，滤液经超滤、减压浓缩、冷冻干燥即得破壁蜂花粉； [0160] 5)将破壁蜂花粉与异麦芽糖醇、芒果粉和植物甾醇加入V型混合罐均匀混合35min,搅拌转速20r/min,然后加入剩余改性膳食纤维均匀混合18min,搅拌转速40r/min,无菌灌装、密封、包装即得强稳定性植物甾醇蜂花粉； [0161] 采用上述方法制备的破壁蜂花粉破壁率可达99％，植物甾醇蜂花粉中植物乳杆菌活菌数可达9×1011cfu/g。 [0162] 实施例六： [0163] 一种强稳定性蛹虫草蜂花粉，主要有以下重量份数的原料制备： [0164] 蜂花粉180份，植物提取物30份，蛹虫肠道提取物20份，改性膳食纤维20份，低聚糖15份，植物乳杆菌粉15份，异麦芽糖醇6份，芒果粉6份，蛹虫草0.3份； [0165] 其中蜂花粉为油菜蜂花粉； [0166] 一种强稳定性蛹虫草蜂花粉的制备方法，包括如下步骤： [0167] 1)按照配方称取各原辅料； [0168] 2)将蜂花粉置装有0.5％碳酸氢钠溶液的超声波清洗机中，室温下于200W、40KHz清洗3min，漂洗，沥干，在质量百分比为18％的丝胶肽溶液中浸泡5min，取出，置-22℃冷冻5min，破碎，立即在功率5Kw,频率2450MHz,温度120℃微波加热7s,加入原蜂花粉质量3倍的水，用乳酸调节pH值为6，于电场强度20kV/cm，脉冲时间600μs,脉冲频率200Hz室温条件下进行高压脉冲电场处理15min，然后室温400W、40KHz条件超声处理10min得蜂花粉预处理液； [0169] 3)将蜂花粉预处理液升温至50℃，向其中加入植物提取物和蛹虫肠道提取物，搅拌均匀，保温，酶解10min，得蜂花粉酶解液； [0170] 4)向蜂花粉酶解液中加入低聚糖、30％的改性膳食纤维，充分溶解5min，自然降温至45℃，加入植物乳杆菌粉质量的50％恒温发酵5h，接着以0.8℃/min的速率升温至55℃,加入植物乳杆菌粉质量的40％恒温发酵3.5h，最后以0.6℃/min的速率降温至45℃,继续发酵0.5h，发酵液经300目筛网过滤，滤液经超滤、减压浓缩、冷冻干燥即得破壁蜂花粉； [0171] 5)将破壁蜂花粉与异麦芽糖醇、芒果粉和蛹虫草加入V型混合罐均匀混合25min,搅拌转速40r/min,然后加入剩余改性膳食纤维均匀混合12min,搅拌转速60r/min,无菌灌装、密封、包装即得强稳定性蛹虫草蜂花粉； [0172] 采用上述方法制备的破壁蜂花粉破壁率可达99.5％，蛹虫草蜂花粉中植物乳杆菌活菌数可达8×1011cfu/g。 [0173] 实验例七食用雨生红球藻蜂花粉后总胆固醇的变化 [0174] 选总胆固醇180mg/dl-250mg/dl的成年人48名，男女各半，随机分成三组；第一组每天晚餐饮用150毫升矿泉水；第二组每天晚餐冲饮普通市售雨生红球藻蜂花粉150g，第三组每天晚餐冲饮本发明实施例2的雨生红球藻蜂花粉150g，期间每天食用同样的食物，食物包括肉、蛋、蔬菜和水果。分别在实验开始的前一天和第20、40、60天采集试验者的血液，测定血液中的总胆固醇含量，结果如表5： [0175] 表5：血液中总胆固醇含量检测结果 [0176] [0177] [0178] 由上表可知冲饮本发明实施例2的雨生红球藻蜂花粉后，成年人血液中的总胆固醇的含量发生明显变化。与普通市售雨生红球藻蜂花粉相比，本发明雨生红球藻蜂花粉对成年人血液中的总胆固醇的含量明显的降低，而矿泉水组成年人血液中的总胆固醇的含量明显的增加，市售雨生红球藻蜂花粉虽然有所降低，但与本发明产品相比，效果不显著，由此可知，本发明采用具有降低胆固醇特性的特定菌株制备的雨生红球藻蜂花粉具有很好的降低胆固醇的保健效果。 [0179] 需要说明的是：本发明实施例3-6所制备的强稳定性蜂花粉同样具有上述技术效果，各实施例之间差异性不显著。 [0180] 实施例八本发明雨生红球藻蜂花粉保质期内植物乳杆菌活菌含量稳定性试验[0181] 取本发明实施例2制备的雨生红球藻蜂花粉于室温22-25℃、通风条件下分别储藏3个月、6个月、12个月、24个月、36个月并测定植物乳杆菌活菌含量，结果如表6： [0182] 表6：保质期内植物乳杆菌活菌含量检测结果 [0183] [0184] 以上结果表明：本发明雨生红球藻蜂花粉的储存稳定性较好，抗环境(温度、适度、氧气、光照、水分等)影响因素能力大，保质期植物乳杆菌活菌含量损失率最大(36个月)为15％,比现有的同类产品活菌含量高、损失率低、保质期长，同时反映出雨生红球藻蜂花粉的其它生物活性成分具有同样的储存稳定性。 [0185] 需要说明的是：本发明实施例3-6同样具有上述实验效果，各实施例之间及与上述实验效果差异性不大。 [0186] 实施例九本发明雨生红球藻蜂花粉的感官品评试验 [0187] 邀请24名人员对本发明实施例2制备的雨生红球藻蜂花粉与市售两种同类相同生产日期的雨生红球藻蜂花粉进行品评，感官打分，其中专业和非专业人员各12名，专业人员青年、中年、老年各4名，男女各半，非专业人员少年、青年、中年、老年各3名，男女各半；打 分包括外观(20分)、质地(25分)、风味(30分)、口感(25分)四个方面，打分人员独立进行，互不影响，以保证品评结果准确。对品评结果进行了统计，均分值取近似值，保留整数，具体见表7： [0188] 表7：感官品评统计结果 [0189] [0190] 注：同一行内标不同小写字母表示差异显著(P＜0.05)，标不同大写字母表示差异极显著(P＜0.01)，标有相同字母表示差异不显著(P＞0.05)。 [0191] 以上结果表明，本发明制备的雨生红球藻蜂花粉从外观、质地、风味和口感任何一方面都要明显优于市售雨生红球藻蜂花粉，特别是外观、风味和口感极好，同时也适合不同年龄段、不同消费层次的消费者食用。 [0192] 需要说明的是：本发明实施例3-6制备的强稳定性蜂花粉同样具有上述实验效果，各实施例之间及与上述实验效果差异性不大。 [0193] 实施例十本发明雨生红球藻蜂花粉益生性试验 [0194] 将本发明实施例2制备的雨生红球藻蜂花粉，用无菌水制备成活菌数为2×1010CFU/mL的植物乳杆菌溶液，于4℃保存备用； [0195] 1、取保存好的10mL植物乳杆菌溶液注入到试管1中，采用十倍逐级稀释至10-8，取1mL稀释液在平板上，将灭菌后冷却至45℃的MRS琼脂培养基倾注在平板(灭菌)上，迅速摇匀。再将装有10mL植物乳杆菌溶液的试管2置于80-90℃水浴锅中加热15-25min，取加热后的植物乳杆菌溶液进行十倍逐级稀释至10-8，取1mL稀释液在平板上，将灭菌后冷却至45℃的MRS琼脂培养基倾注在平板(灭菌)上并迅速摇匀。最后将加热前和加热后的平板均在35℃条件下培养24h，计算加热前后的数量。 [0196] 结果表明，活菌存活率达到了88％以上。 [0197] 2、模拟胃液及肠液的耐受试验：取100g/L的盐酸16.4mL加蒸馏水稀释，使pH值分别为1.5、2.5和3.5，取100mL稀盐酸溶液，分别加入1g胃蛋白酶，使其充分溶解，得模拟胃液，微孔滤膜除菌(0.22μm)备用。取磷酸二氢钾6.8g，加水500mL使溶解，用0.1moL/L氢氧化 钠溶液调节pH值至6.8；另取胰蛋白酶10g，加水100mL使溶解，将两液混合后，加水稀释至1000ml，得模拟肠液，微孔滤膜除菌(0.22μm)备用。取1mL保存好的植物乳杆菌溶液加入到 9mL的模拟胃液中(即十倍逐级稀释)，并迅速在振荡器上充分混匀，然后置于30-45℃静置培养2-4h。分别在1h、2h、3h、4h的时候取出培养液并立即计数残存活菌数，与原活菌数进行比较，结果表明，活菌存活率为98％。然后取在人工胃液中消化不同时间的培养液各1mL，分别接种于9mL pH值为6.8的人工肠液中，置于30-45℃静置培养2-4h，并分别在0、3、6、24h取样，测定其活菌数，与原活菌数进行比较，结果表明活菌存活率为99％。 [0198] 3、模拟胆盐的耐受试验：用胰液素制成1g/L的溶液，并在溶液中加入0.8％的猪胆盐，用10％的NaOH调整pH为8.0，然后用0.45μm微滤膜过滤并除菌。将0.5mL保存好的植物乳杆菌溶液接种到4.5mL模拟胆盐中，培养24h后得到培养液，计数残存的活菌数。将培养液在灭菌生理盐水中十倍逐级稀释至10-8，并用MRS倾注，然后置于35℃静置培养24h。结果表明活菌存活率为99％。 [0199] 以上试验结果表明，本发明雨生红球藻蜂花粉中的植物乳杆菌益生性(耐热性、耐pH性、耐胆盐)较强，非常适合人体胃肠环境，在模拟胃肠环境中存活率大，可有效改善胃肠功能。 [0200] 需要说明的是：本发明实施例3-6制备的强稳定性蜂花粉同样具有上述实验效果，各实施例之间及与上述实验效果差异性不大。 [0201] 实施例十一本发明雨生红球藻蜂花粉小鼠肠道性能试验 [0202] 将本发明实施例2制备的雨生红球藻蜂花粉，用无菌水制备成活菌数为2×1010CFU/mL的植物乳杆菌溶液，于4℃保存备用； [0203] 选取普通昆明小白鼠60只，雌雄各半，18-20g，常规词养。从中随机挑选40只，每天早晨9:00灌胃盐酸林可霉素0.2mL(20mg)/只，其它作为对照组，每天同一时间灌胃等量灭菌生理盐水，连续一周，制备肠道菌群失调的小鼠模型。模型组小鼠饮食下降，未出现死亡和明显的腹泻现象，排软粪，外形正常含水分较多，垫料潮湿。将40只肠道菌群失调小鼠，随10 机分为2组，一组20只作为治疗组，每天灌胃保存好的植物乳杆菌溶液0.5ml(2×10 cfu/ml)/只，另20只作为自然恢复组，每天同一时间灌胃等量灭菌生理盐水，连续两周。整个试验期21天，每天观察小白鼠的生长和排便情况，于第8、21天对雨生红球藻蜂花粉治疗组和自然恢复组的小鼠进行称重，计算各组体重平均增长率，结果如表8；每5天测各组小鼠粪便大肠杆菌数量，计算平均数，结果如表9。取小鼠粪便约0.1g，于无菌操作台内加入3粒玻璃珠(以0.1g粪样加0.5mL稀释液)，稀释并接种麦康凯琼脂培养基，计算每克湿便中的大肠杆菌数。 [0204] 表8：小鼠增重情况 [0205]分组 平均始重(g/只) 平均末重(g/只) 平均增长率(％) 自然恢复组 20.69±1.33 27.34±1.59 32.14a 治疗组 20.41±1.45 34.28±1.62 67.96b [0206] 表9：小鼠粪便中大肠杆菌数的情况 [0207] [0208] 雨生红球藻蜂花粉治疗组小鼠体重平均增长率(67.96％)显著高于自然恢复组(32.14％)；饲喂溶液后肠道大肠杆菌数量显著下降，降低97.07％，显著低于自然恢复组(24.78％)，表明本发明雨生红球藻蜂花粉中的植物乳杆菌在小白鼠肠道内迅速定植，形成优势菌群，并有效抑制大肠杆菌等病原菌的生长繁殖，并且定植时间长，持续、有效改善了肠道性能。 [0209] 需要说明的是：本发明实施例3-6制备的强稳定性蜂花粉同样具有上述实验效果，各实施例之间及与上述实验效果差异性不大。 [0210] 实施例十二本发明强稳定性蜂花粉对机体免疫力的影响 [0211] 1实验目的 [0212] 通过运动耐力测试(小鼠游泳试验)，验证本发明强稳定性蜂花粉的提高免疫力、抗疲劳作用。 [0213] 2实验材料与试剂 [0214] 2.1供试药物： [0215] 市售强稳定性蜂花粉(G1)；市售强稳定性蜂花粉(G2)；本发明实施例2-6制备的强稳定性蜂花粉(G3-G7)。 [0216] 2.2试剂： [0217] 肝/肌糖原测试盒，购自南京建成生物制品研究所；浓硫酸(AR)，南京化学试剂有限公司；生理盐水，山东长富洁晶药业有限公司。 [0218] 3.实验动物 [0219] ICR小鼠，♂，清洁级，体重18-22g，由宁夏医科大学比较医学中心提供，实验期间小鼠自由饮食。 [0220] 4.主要仪器 [0221] 铝制游泳箱(50cm×50cm×40cm)，铅丝，低温高速离心机：5804R型，Eppendrof公司；水浴锅：DK-S26型，上海精宏实验设备有限公司；电子称：BS224S型，Sartorius 公司；秒表，温度计 [0222] 5.实验分组 [0223] 5.1剂量分组及受试样品给予时间随机将小鼠分为8组，每组10只，第1组至第7组分别给G1～G7的药物，第8组为空白对照组，给予等体积的双蒸水，每组每日均灌胃1次，灌胃体积为0.2ml/10g，连续给予受试样品30天。 [0224] 5.2样品配制第1组至第7组：称取2.25g药物样品，用蒸馏水配至150ml；空白对照组：双蒸水150ml。 [0225] 6.实验方法 [0226] 6.1负重游泳实验末次给药30min后，置小鼠于游泳箱中，水深不少于30cm，水温25±1℃，鼠尾根部负荷5％体重的铅皮，记录小鼠游泳开始至死亡的时间，作为小鼠游泳时间。 [0227] 6.2小鼠血清尿素测定末次给药30min后，在温度为30℃的水中不负重游泳90min,休息60min后摘眼球采血0.5mL(不加抗凝剂),置4℃冰箱3h,血凝固后2000r/min离心15min,取血清送宁夏医科大学附属医院检验科检测。 [0228] 6.3肝糖原的测定末次给药30min后，在温度为25±1℃的水中不负重游泳90min，颈椎脱臼处死小鼠，用生理盐水洗净，并用滤纸吸干水分后，准确称取肝脏100mg，肝糖原检测试剂盒检测小鼠肝糖原含量。 [0229] 6.4血乳酸的测定末次给药30min后采血，然后不负重在温度为30℃的水中游泳10min后停止。乳酸仪测定方法：分别在游泳前、游泳后、游泳后休息20min后各采血20μL加入40μL破膜液中，立即充分振荡破碎细胞用乳酸仪测定。(血乳酸曲线下面积＝5×(游泳前血乳酸值+3×游泳后0min的血乳酸值+2×游泳后20min的血乳酸值) [0230] 7.观察指标负重游泳时间，血乳酸、尿素、肝糖原值 [0231] 8.统计方法实验数据用 表示，采用t检验进行组间比较 [0232] 9.实验结果 [0233] 9.1本发明强稳定性蜂花粉对小鼠体重的影响 [0234] 各组小鼠在给予G1～G9药物后，前、中，后期体重分别见下表所示,各组小鼠的初始体重和增重体重与对照组比较均无统计学差异(P＞0.05)，表明G1～G9药物均无明显的毒性。实验结果详见表10。 [0235] 表10负重游泳实验小鼠的初始体重、中期体重和结束体重 [0236] [0237] 9.2本发明强稳定性蜂花粉对小鼠负重游泳时间的影响 [0238] 经口给予小鼠G1～G7药物后，G1～G2药物与空白对照组比较，可以明显延长小鼠负重游泳时间，具有显著性差异(P＜0.05)，本发明强稳定性蜂花粉G3～G7药物与空白对照组比较，可以显著延长小鼠负重游泳时间，具有极显著性差异(P＜0.01)，且明显优于G1～G2药物。结果详见表11。 [0239] 表11强稳定性蜂花粉对小鼠负重游泳时间的影响 [0240] [0241] “*”p<0.05vs空白对照； [0242] “**”p<0.01vs空白对照； [0243] 9.3本发明强稳定性蜂花粉对小鼠运动前后血乳酸的影响 [0244] 经口给予小鼠本发明的强稳定性蜂花粉后，本发明强稳定性蜂花粉G3～G7药物对小鼠运动后血乳酸曲线下面积与对照组比较有统计学差异(P＜0.05)，G1～G2药物组小鼠血乳酸曲线下面积与对照组比较虽有所降低，但并无统计学差异(P＞0.05)。结果见表12。 [0245] 表12本发明强稳定性蜂花粉对小鼠运动前后血乳酸水平的影响 [0246] [0247] “*”p<0.05vs空白对照； [0248] 9.4本发明强稳定性蜂花粉对小鼠肝糖原的影响 [0249] 经口给予小鼠G1～G7药物后，G1～G2药物与空白对照组比较，小鼠肝糖原含量均有明显的升高，具有显著性差异(P＜0.05)，本发明强稳定性蜂花粉G3～G7药物与与空白对照组比较，小鼠肝糖原含量均有明显的升高，具有极显著性差异(P＜0.01)，且明显优于G1～G2药物。结果详见表13。 [0250] 表13本发明强稳定性蜂花粉对小鼠肝糖原含量的影响 [0251] |
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