低溶出性ピロロキノリンキノン組成物

本発明は、一般式（１）で表される構造のピロロキノリンキノンの塩を含む組成物に関する。

ピロロキノリンキノン（以下、ＰＱＱと記すことがある）は健康補助食品、化粧品などに有用な物質として注目を集めている。 さらには細菌に限らず、真核生物のカビ、酵母に存在し、補酵素として重要な働きを行っている。 また、ＰＱＱについて近年までに細胞の増殖促進作用、抗白内障作用、肝臓疾患予防治療作用、創傷治癒作用、抗アレルギ−作用、逆転写酵素阻害作用およびグリオキサラーゼＩ阻害作用−制癌作用など多くの生理活性が明らかにされている。

一方、シクロデキストリン（以下、CDと略す場合がある）とはデンプンに酵素を作用させて得られる天然環状分子であり、例えばグルコースが６個繋がったαーシクロデキストリン、グルコースが７個繋がったβーシクロデキストリン、及びグルコースが８個繋がったγーシクロデキストリン等が知られている。

シクロデキストリンは、分子内に他の機能性成分を取り込み、包接体と呼ばれる複合体を形成する。 シクロデキストリンの分子内は疎水性であり、一般的に疎水性物質を包接し、包接体として親水性が向上し、疎水性物質の吸収性が向上することが考えられている。
更に、熱や紫外線等の外部環境に対して不安定な機能性成分であっても、シクロデキストリン包接体を構成することにより、化学的に安定性が向上することが一般的に知られ、経口、皮膚に塗布する用途で広く使用されている。

ＰＱＱは還元性物質、カルボニル化合物やアミノ基を有する化合物と反応しやすく、食品や薬のような多成分を混合した際の安定性の確保に懸念があるとされている。 食品にはアスコルビン酸のような還元剤やアミノ酸が含まれることが多く、ＰＱＱとの反応が心配される。 また、ＰＱＱは濃い赤色をしており、嗜好性の高い食品分野ではそれを弱める必要がある。

これまでにシクロデキストリンとＰＱＱを同時に使用することによりＰＱＱを要求する酵素が安定化されるとして多くの報告がある（例えば、特許文献１）。 しかし、これは酵素の安定化を目的とするものである。 ＰＱＱのシクロデキストリン包接体は特許文献２に記載されているが、ＰＱＱのフリー体の形成が必要でありその製造方法は困難であった。 特許文献３にＰＱＱを含む食品にシクロデキストリンを添加することが記載されているが、具体的な安定性に関する記載はない。

ピロロキノリンキノンはアルカリ金属塩で提供されることが多く、すぐに溶解してしまう。 これは他の物質との反応性がある場合には変色する原因となりやすい。 また、その反応性は単純な物質にとどまらず、生体組織への着色を起こしてしまう問題がある。 ゆっくりと溶出してくる組成物が求められている。 本発明は溶解速度を落としたピロロキノリンキノンの提供とその効率的な製造方法を提供することにある。

アスコルビン酸はビタミンＣとして知られ、多くの食品、サプリメントで使用されており、ＰＱＱと併用して使用される可能性が非常に高い。 粉末での混合だけでなく、溶液として接触する可能性が高い。 本発明者がこれらを混合した組成物を作製した際に黒く変色してしまい、経口摂取等の際に口の中が黒くなってしまう等の問題がある。 そのため、アスコルビン酸とＰＱＱを併用した際でも変色しない組成物が求められている。

本発明者は、上記課題を解決すべく鋭意研究した結果、以下に示す項目によって解決できることを見出した。
［１］シクロデキストリン、アガロースまたはデンプンの１種以上とピロロキノリンキノン塩とを含む組成物。
［２］ピロロキノリンキノン塩がジアルカリ金属塩である［１］記載の組成物。
［３］シクロデキストリンがβーシクロデキストリン又はγーシクロデキストリンのいずれかである［１］又は［２］に記載の組成物。
［４］ピロロキノリンキノン1に対してシクロデキストリン、アガロースまたはデンプンが１から５０倍である［１］から［３］いずれかに記載の組成物。
［５］水を含むことを特徴とする［１］から［４］いずれかに記載の組成物。
［６］ピロロキノリンキノン塩とシクロデキストリン、アガロースまたはデンプンの１種以上とを水の存在下で混合した後、乾燥して水を除去することを特徴とするピロロキノリンキノン組成物の製造方法。

本発明により、溶出性の改善したピロロキノリンキノン組成物の提供とその効率的な製造方法も提供することを可能とした。 これによりアスコルビン酸と併用した際の変色を抑えることも可能になる。

本発明は、シクロデキストリン、アガロースまたはデンプンいずれか１種以上とピロロキノリンキノン塩とを含む組成物である。

ＰＱＱの塩は下記式（１）で表される構造式の塩である。

ＰＱＱの塩としては、金属塩、とくにジアルカリ金属塩が好ましい。 使用できる物質はモノナトリウム塩、ジナトリウム塩、トリナトリウム塩、モノカリウム塩、ジカリウム塩、トリカリウム塩、モノリチウム塩、ジリチウム塩、トリリチウム塩等が挙げられる。 特に入手しやすい、ジナトリウム体、ジカリウム体が使用しやすい。
フリー体をアルカリ金属化合物と混合して塩を形成させて使用することもできる。

シクロデキストリンはα、β、γーシクロデキストリンのどれでも特に制限はない。 より好ましくは本発明の効果が高いことからγーシクロデキストリンである。
デンプンはどの種類のデンプンでも使用できる。 デンプンの由来はトウモロコシ、じゃがいも、小麦、コメ、サツマイモ、タピオカ等、どれでも問題がない。
アガロースは精製したものだけでなく棒寒天等も使用できる。

本発明の組成物は、溶出速度の観点より、ＰＱＱの塩１に対してシクロデキストリン、アガロースまたはデンプンのいずれか１種以上を重量比で１から５０倍で含むことが好ましい。 より好ましくは５倍から３０倍である。

本発明の組成物は水を含んでも効果を有する。 溶液状態においても効果的であり、水の存在量に特に制限はないが、粉末状態の場合は５０重量％以下であることが好ましい。

本発明の組成物は、ＰＱＱの塩とシクロデキストリン、アガロースまたはデンプンのいずれか１種以上を混合することにより製造することが出来る。 混合方法としては湿式混合で行うことで混合性が高い状態となり好ましい。 湿式混合の際は、水の存在が必要であり、ＰＱＱの塩とシクロデキストリン、アガロースまたはデンプンのいずれか１種以上をより混合性が高い状態を作ることができる。 水存在下でＰＱＱの塩とシクロデキストリンを２分〜数時間攪拌混合して、続いて、乾燥させて水を蒸発させることで、当該組成物を得ることが出来る。
若しくはＰＱＱの塩とシクロデキストリン、アガロースまたはデンプンのいずれか１種以上との混合物に水を少量加えてペースト状にして、よく攪拌し、続いて乾燥させて水を蒸発させる方法でも可能である。 乾燥には、減圧乾燥、噴霧乾燥、凍結乾燥法等の一般的な乾燥方法を用いることができる。

本発明の組成物を製造する方法について具体的に説明する。
ＰＱＱの金属塩、例えばＰＱＱのアルカリ金属塩を原料として用いた場合、ＰＱＱのアルカリ金属塩の水溶液とγーシクロデキストリンを混合させ、エバポレーター等の乾燥器で水分を蒸発させることで得ることができる。

本発明の組成物は、溶解性を制御された組成物である。 溶解性が制御されるのは包接作用だけではなく、糖鎖による網目の中に閉じ込められ、溶解速度が下がるためと考えられる。

本発明の組成物は、薬剤学的に許容されている他の製剤素材を常法により適宜添加混合してもよい。 添加しうる製剤素材としては特に限定されず、例えば、乳化剤、緊張化剤、緩衝剤、溶解補助剤、矯臭剤、防腐剤、安定化剤、抗酸化剤などが挙げられる。

本発明の組成物の保存方法としては、特に限定されず、低温保存、密閉容器による嫌気的保存、遮光保存などを用いることができる。 これにより、析出物なく安定に保存できる。

本発明の組成物は、医療用、化粧用、食品用、園芸用、酪農用など広い範囲で使用できる。 具体的な形態としては注射剤、輸液、液剤、点眼剤、内服用液剤、ローション剤、ヘヤートニック、化粧用乳液、スプレー液、エアロゾル、ドリンク液、液体肥料、保存用溶液などが挙げられる。

以下に実施例及び比較例を挙げて本発明を更に詳しく説明するが、本発明はこれら実施例及び比較例のみに限定されるものではない。
ＰＱＱジナトリウムは三菱ガス化学製を使用した。

実施例１ ２０倍量γ―シクロデキストリン組成物の製造２ｇ／Ｌ ＰＱＱジナトリウム水溶液: ＰＱＱジナトリウム１ｇを水５００ｍｌに溶かす。
ナスフラスコに２ｇ／ＬＰＱＱジナトリウム水溶液５０ｇ加える。 ここにγ―シクロデキストリン２ｇを混合する。 エバポレーターで水を除去した。 さらに減圧乾燥した。 ピンク色の粉末２.1ｇを得た。

実施例２ー５ ＰＱＱ含有湿式混合組成物の製造実施例1と同様に２ｇ／Ｌ ＰＱＱジナトリウム水溶液５０ｍｌと表１に示す粉末状の各糖類を混合してエバポレーターで水を除去した。 さらに減圧乾燥した。
サンプル名と混合比率等を以下の表１に示す。

実施例６、比較例１ ＰＱＱ含有乾式混合組成物の製造ＰＱＱジナトリウム粉末と表２に示す粉末状の各糖類をポリ袋に入れ、手でよくふって混合した。 塊がある場合、手で押しつぶし、混合を均一になるように行った。 混合物は容易に製造することができた。

溶出速度測定上記の調製した各サンプル２０ｍｇを水２ｍｌに加え、混合した後に1時間後にサンプリングして遠心分離し、固形分を除去した後に濾過してリン酸バッファーで１００倍から２００００倍に希釈して溶解量（２４時間後の吸光度を１００として算出）をＵＶスペクトルメーターで吸光度が０−２に範囲に入る波長（おもに２５０nm）で測定した。 その結果を以下の表３に示す。

アスコルビン酸との反応性試験 実施例１２
Ｌ−アスコルビン酸（和光純薬製）を水にとかし、２０重量％の水溶液を作製した。 実施例1で得られた湿式２０倍γ−CD粉末１０ｍｇと２０重量％アスコルビン酸水溶液１００μＬを混合し、室温で色の変化を観察した。 ３０分後、溶けだした溶液の色は赤色であった。 1時間後も変化がなく、安定な組成物であった。

比較例５
ピロロキノリンキノンジナトリウム粉末１０ｍｇと２０重量％アスコルビン酸水溶液１００μＬを混合し、室温で色の変化を観察した。 混合してすぐ黒く変化し始め、３０分後、黒色の混合物になった。 1時間後も黒色の混合物で析出物があった。

実施例１３、１４
実施例２の湿式２０倍デンプン、実施例５の湿式２０倍アガロースについても実施例１２と同様にそれぞれ試験した。 ３０分後、上澄みはやや黄色く、黒い析出物等は存在しなかった。
本発明の組成物は変質を抑える効果があることが分かった。

本発明は、ヒト用または動物用として、医薬品、医薬部外品、食品、機能性食品又は飼料等として幅広く利用することができる。