一种大豆球蛋白的分离提纯方法 |
|||||||
| 申请号 | CN201610789900.8 | 申请日 | 2016-08-31 | 公开(公告)号 | CN106561970A | 公开(公告)日 | 2017-04-19 |
| 申请人 | 安徽珍味奇调味食品有限公司; | 发明人 | 魏志刚; 魏巍; 赵彦杰; | ||||
| 摘要 | 本 发明 公开了一种大豆球蛋白分离提纯方法，包括如下具体步骤：取 大豆粉 碎至粒径为5.5‑7.5mm，加入石油醚溶液中，静置至溶液分层，倾倒上层清液离心后取沉淀用正己烷溶液洗涤后烘干， 粉碎 过筛后加入蒸馏 水 中配置成大豆蛋白提取液，并加入30U/g 植酸酶 ，调节pH至6.8，离心取上清液备用，沉淀为大豆11S球蛋白；于上清液中加入MgCl2，调节pH至5.0，取上清液加入蒸馏水稀释，体积比为1:1调节pH至4.8，取沉淀即为大豆7S球蛋白。本发明通过在大豆蛋白提取液中加入植酸酶，切断连接大豆7S球蛋白与大豆11S球蛋白之间的植酸，整个分离过程于常温条件进行，避免了因加入还原剂导致的球蛋白分离过程时间较长的问题，分离的大豆11S球蛋白及大豆7S球蛋白产率及纯度较高。 | ||||||
| 权利要求 | 1.一种大豆球蛋白分离提纯方法，其特征在于，包括如下具体步骤： |
||||||
| 说明书全文 | 一种大豆球蛋白的分离提纯方法技术领域[0001] 本发明属于蛋白提取技术领域，特别是涉及一种大豆球蛋白分离提纯方法。 背景技术[0002] 7S蛋白和11S蛋白是大豆蛋白的主要成分，共占总蛋白的70％左右。11S蛋白分子质量为302-375kDa，由6个酸性亚基(A1、A2、A3、A5、A6)和6个碱性亚基(B1、B2、B3、B4、B5、B6)构成，酸、碱亚基之间以二硫键连接。A1、A2、A4分子质量为34.8kDa，A3为45kDa，A5为10kDa。B1、B2、B3、B4分子质量为21kDa。7S蛋白分子质量为141-170kDa，由α’、α、β三个亚基通过疏水相互作用缔合。 [0003] 大豆11S蛋白被认为是一种单一蛋白，不含糖基。其空间构象是同一层面上酸性亚基和碱性亚基交替排列，通过疏水相互作用和二硫键连接在一起。其二聚体中含有12个亚基，由两个相同的六元环状单聚体形成了通过头-头结合的中空椭圆柱体。11S蛋白的氨基酸组成中含量最多的是谷氨酸残基和天冬氨酸残基，其二级结构中主要是β-折叠、β-转角和无规卷曲。 [0004] 与11S蛋白不同，大豆7S蛋白含有3.8％甘露糖和1.2％氨基葡萄糖。7S中糖基部分与天冬氨酸结合，1分子7S蛋白结合有5或6个糖基。根据其理化性质的差异，7S蛋白可以分为β-伴球蛋白、γ-伴球蛋白和碱性7S蛋白。其由四个亚基组成，每个亚基由一个高分子质量多肽(26kDa)和一条低分子质量多肽(16kDa)通过二硫键构成，结构与11S蛋白类似。 发明内容[0005] 本发明的目的在于提供一种大豆球蛋白分离提纯方法，通过在大豆蛋白提取液中加入植酸酶，避免了因加入还原剂导致的球蛋白分离过程时间较长的问题，分离的大豆11S球蛋白及大豆7S球蛋白产率及纯度较高。 [0006] 本发明是通过以下技术方案实现的： [0007] 一种大豆球蛋白分离提纯方法，包括如下具体步骤： [0008] S1、取大豆粉碎至粒径为5.5-7.5mm，以固液比为1:5加入石油醚溶液中机械搅拌一段时间，静置至溶液分层，倾倒上层清液离心后取沉淀用正己烷溶液洗涤2-3次后烘干，放入粉碎机中粉碎后过60-80目筛得到脱脂大豆粉； [0009] S2、将S1中得到脱脂大豆粉加入蒸馏水中配置成大豆蛋白提取液，固液比为1:5，于大豆蛋白提取液中加入30U/g植酸酶，调节pH至5-6，于30℃水浴条件下磁力搅拌2-3小时； [0010] S3、将S2中得到的酶解液用1-5mol/L NaOH溶液调节pH至6.8，离心取上清液备用，沉淀为大豆11S球蛋白； [0011] S4、将S3中得到的上清液中加入MgCl2，调节pH至5.0，取上清液； [0012] S5、取S4中得到的上清液中加入蒸馏水稀释，体积比为1:1调节pH至4.8，取沉淀即为大豆7S球蛋白。 [0013] 进一步地，所述S1中机械搅拌速率为300r/min，机械搅拌时间为10min。 [0014] 进一步地，所述S1中离心速率为3000r/min，离心时间为30min。 [0015] 进一步地，所述S3中离心速率为6500r/min，离心时间为30min。 [0016] 进一步地，S4中所述上清液中加入MgCl2至MgCl2浓度为0.1mol/L。 [0017] 进一步地，所述S5中离心速率为5800r/min，离心时间为20min。 [0018] 进一步地，所述S5中离心速率为6500r/min，离心时间为30min。 [0019] 本发明具有以下有益效果： [0020] 本发明通过在大豆蛋白提取液中加入植酸酶，切断连接大豆7S球蛋白与大豆11S球蛋白之间的植酸，整个分离过程于常温条件进行，避免了因加入还原剂导致的球蛋白分离过程时间较长的问题，分离的大豆11S球蛋白及大豆7S球蛋白产率及纯度较高。 [0021] 当然，实施本发明的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的所有优点。 具体实施方式[0022] 本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。 [0023] 实施例1 [0024] S1、取大豆粉碎至粒径为5.5mm，以固液比为1:5加入石油醚溶液中，300r/min机械搅拌10min，静置60min后溶液分层，倾倒上层清液并于3000r/min离心30min，取沉淀用正己烷溶液洗涤2次后置于90℃烘箱中烘干，放入粉碎机中粉碎后过60目筛得到脱脂大豆粉； [0025] S2、将S1中得到脱脂大豆粉加入蒸馏水中配置成大豆蛋白提取液，固液比为1:5，于大豆蛋白提取液中加入30U/g植酸酶，用1mol/L HCl溶液调节pH至5，于30℃水浴条件下磁力搅拌2小时； [0026] S3、将S2中得到的酶解液用1mol/L NaOH溶液调节pH至6.8，6500r/min离心30min，沉淀为大豆11S球蛋白，取上清液备用； [0027] S4、将S3中得到的上清液中加入MgCl2溶液至MgCl2浓度为0.1mol/L，用1mol/L HCl溶液调节pH至5.0，5800r/min离心20min，取上清液； [0028] S5、取S4中得到的上清液中加入蒸馏水稀释，体积比为1:1，用1mol/L HCl 溶液调节pH至4.8，于6500r/min离心30min，取沉淀即为大豆7S球蛋白。 [0029] 实施例2 [0030] S1、取大豆粉碎至粒径为7.5mm，以固液比为1:5加入石油醚溶液中，300r/min机械搅拌10min，静置60min后溶液分层，倾倒上层清液并于3000r/min离心30min，取沉淀用正己烷溶液洗涤3次后置于90℃烘箱中烘干，放入粉碎机中粉碎后过80目筛得到脱脂大豆粉； [0031] S2、将S1中得到脱脂大豆粉加入蒸馏水中配置成大豆蛋白提取液，固液比为1:5，于大豆蛋白提取液中加入30U/g植酸酶，用5mol/L HCl溶液调节pH至6，于30℃水浴条件下磁力搅拌3小时； [0032] S3、将S2中得到的酶解液用5mol/L NaOH溶液调节pH至6.8，6500r/min离心30min，沉淀为大豆11S球蛋白，取上清液备用； [0033] S4、将S3中得到的上清液中加入MgCl2溶液至MgCl2浓度为0.1mol/L，用5mol/L HCl溶液调节pH至5.0，5800r/min离心20min，取上清液； [0034] S5、取S4中得到的上清液中加入蒸馏水稀释，体积比为1:1，用5mol/L HCl溶液调节pH至4.8，于6500r/min离心30min，取沉淀即为大豆7S球蛋白。 [0035] 实施例3 [0036] S1、取大豆粉碎至粒径为6.5mm，以固液比为1:5加入石油醚溶液中，300r/min机械搅拌10min，静置60min后溶液分层，倾倒上层清液并于3000r/min离心30min，取沉淀用正己烷溶液洗涤2次后置于90℃烘箱中烘干，放入粉碎机中粉碎后过70目筛得到脱脂大豆粉； [0037] S2、将S1中得到脱脂大豆粉加入蒸馏水中配置成大豆蛋白提取液，固液比为1:5，于大豆蛋白提取液中加入30U/g植酸酶，用3mol/L HCl溶液调节pH至5.5，于30℃水浴条件下磁力搅拌2.5小时； [0038] S3、将S2中得到的酶解液用3mol/L NaOH溶液调节pH至6.8，6500r/min离心30min，沉淀为大豆11S球蛋白，取上清液备用； [0039] S4、将S3中得到的上清液中加入MgCl2溶液至MgCl2浓度为0.1mol/L，用3mol/L HCl溶液调节pH至5.0，5800r/min离心20min，取上清液； [0040] S5、取S4中得到的上清液中加入蒸馏水稀释，体积比为1:1，用3mol/L HCl溶液调节pH至4.8，于6500r/min离心30min，取沉淀即为大豆7S球蛋白。 [0041] 本发明通过在大豆蛋白提取液中加入植酸酶，切断连接大豆7S球蛋白与大豆11S球蛋白之间的植酸，整个分离过程于常温条件进行，避免了因加入还原剂导致的球蛋白分离过程时间较长的问题，分离的大豆11S球蛋白及大豆7S球蛋白产率及纯度较高。 [0042] 以上内容仅仅是对本发明所作的举例和说明，所属本技术领域的技术人员对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，只要不偏离发明或者超越本权利要求书所定义的范围，均应属于本发明的保护范围。 |
||||||
QQ群二维码
意见反馈
意见反馈