一种从金枪鱼骨中提取金枪鱼小分子肽的方法及其应用 |
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| 申请号 | CN201510961838.1 | 申请日 | 2015-12-22 | 公开(公告)号 | CN105558257A | 公开(公告)日 | 2016-05-11 |
| 申请人 | 潘爱国; | 发明人 | 潘爱国; | ||||
| 摘要 | 本 发明 涉及一种从金枪鱼骨中提取金枪鱼小分子活性肽的方法，包括如下步骤：(1)金枪鱼骨处理；(2)低温 粉碎 处理；(3)细胞溶出处理；(4) 生物 酶解处理；(5)后处理，得到的金枪鱼小分子肽的分子量为0-480道尔顿的占比不低于89.2％；金枪鱼小分子肽适用于诊断用肽、肽 疫苗 、抗菌活性肽、细胞因子模拟肽、抗病毒肽或抗 肿瘤 肽，以及肽保健品。 | ||||||
| 权利要求 | 1.一种从金枪鱼骨中提取金枪鱼小分子活性肽的方法，其特征在于，具体包括如下步骤：(1)金枪鱼骨处理：将新鲜的金枪鱼骨清洗干净，破碎，在蒸煮罐中，采用温度为100-120℃的温度，0.10-0.12Mpa的压力蒸煮6-8h，骨渣排出，得到骨汤，速冻后，形成冷冻骨汤油冻块，贮存于-18℃的冷冻库内备用；(2)低温粉碎处理：采用粉碎机在低温对所述的冷冻骨汤油冻块进行低温粉碎，粉碎温度控制在0-4℃之间，将所述的冷冻骨汤油冻块粉碎为颗粒直径在0.02-0.1毫米的冷冻骨汤油冻块颗粒；(3)细胞溶出处理：采用常压下4℃无氧水对粉碎的冷冻骨汤油冻块颗粒进行浸渗水处理，水饱和时间为5-10小时，所述无氧水以完全淹没原料为准；然后快速深度冷冻与融冻处理，其中深冷冻处理时间为1-2h，冷冻温度为零下 |
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| 说明书全文 | 一种从金枪鱼骨中提取金枪鱼小分子肽的方法及其应用技术领域[0001] 本发明涉及到用鱼骨提取肽的技术，具体涉及一种从金枪鱼骨中提取小分子肽的方法以及其应用。 背景技术[0004] 目前的提取主要是从鱼鳞、鱼皮中提取胶原蛋白，例如从罗非鱼鱼鳞中提取，从深海鱼皮例如鳕鱼鱼皮中提取，但是这些提取物产品分子量分布广不易吸收，大分子导致的吸收率低等突出问题的存在，极大的阻止了现代人所追求的营养价值高，安全，吸收好等新保健理念的实现。 [0005] 另一方面，传统的胶原蛋白或蛋白肽提取液体积较大，产品的生产周期较长，酶解液除杂不彻底，影响胶原蛋白品质，所得成品往往具有苦腥味，口感差，如果过滤级别不够的话，产品水溶性就会较差，直接影响消化吸收，对鱼类提取物的含盐量高的问题解决效果不理想，影响产品口感。 [0006] 虽然随着技术进步，人们运用膜分离技术的优势，在一定程度上提高了产品质量，但是还没有从根本上得到小分子活性肽。 发明内容[0007] 本发明为有效解决上述问题，提供一种全新的制备方法，以金枪鱼骨为原料，通过创新手段得到易于吸收，口感好，营养价值高，安全的金枪鱼小分子活性肽，且该方法提取效率高，工艺简单使用。 [0008] 本发明采用改良的生物酶解修饰复配法，制备金枪鱼小分子活性肽，具体技术方案是，一种从金枪鱼骨中提取金枪鱼小分子活性肽的方法，具体包括如下步骤：(1)金枪鱼骨处理：将新鲜的金枪鱼骨清洗干净，破碎，在蒸煮罐中，采用温度为100-120℃的温度，0.10-0.12Mpa的压力蒸煮6-8h，骨渣排出，得到骨汤，速冻后，形成冷冻骨汤油冻块，贮存于-18℃的冷冻库内备用；(2)低温粉碎处理：采用粉碎机在低温对所述的冷冻骨汤油冻块进行低温粉碎，粉碎温度控制在0-4℃之间，将所述的冷冻骨汤油冻块粉碎为颗粒直径在 0.02-0.1毫米的冷冻骨汤油冻块颗粒；(3)细胞溶出处理：采用常压下4℃无氧水对粉碎的冷冻骨汤油冻块颗粒进行浸渗水处理，水饱和时间为5-10小时，所述无氧水以完全淹没原料为准；然后快速深度冷冻与融冻处理，其中深冷冻处理时间为1-2h，冷冻温度为零下20- 25℃，紧接着融冻，即以常压下4℃水浴对处于深冷冻的冷冻骨汤油冻块颗粒进行快速融冰，融冰处理时间为3-5h；重复所述的快速深度冷冻与融冻处理过程2-3次，细胞壁结构被破坏，有效物质溶出，形成金枪鱼寡肽骨汤；(4)生物酶解处理：将所述金枪鱼寡肽骨汤导入水解罐中，加入复合酶，所述的复合酶制备方法如下，先将草芽孢杆菌、双歧螺杆菌、鼠李糖乳杆菌、光合菌、地衣芽孢杆菌置于三角瓶中进行培养，培养的温度为28-33℃，在200- 250rpm/min下培养25-35h，使菌体或者孢子浓度达到1×1014个/升(CFU/L)，制得发酵剂，然后向发酵剂中加入营养素，控制营养素的重量是所述发酵剂重量的1/8-1/10，所述的营养素为麦芽汁，即得到所述的复合酶，按照金枪鱼寡肽骨汤与复合酶1000-1200∶1的重量比加入所述的复合酶进行生物酶解处理，在所述生物酶解过程中保持水解罐中pH为6.8-7.0，所述酶解温度为60℃，所述酶解时间为12-20℃，得到初级金枪鱼小分子活性肽；(5)后处理： 将所述的初级金枪鱼小分子活性肽灭酶，快速升温至180-185℃并保持20-25s，然后40-70℃/s降温至60℃使酶失活；然后采用高速离心机将酶解液以60000-80000r/min的速度离心 3-5min，将上层液和中层液合并输入稀释罐体内，即酶解分离液，下层液被分离出去，然后采用热隔膜低温浓缩技术进行浓缩，浓缩温度为40-50℃，真空度为0.4-2.0MPa，将浓缩液输送到195-210℃的离心喷雾干燥塔内干燥成粉沫，即得到所述的金枪鱼小分子活性肽。 [0009] 优选，步骤(1)金枪鱼骨处理：将新鲜的金枪鱼骨清洗干净，破碎，在蒸煮罐中，采用温度为100℃的温度，0.10Mpa的压力蒸煮7h，骨渣排出，得到骨汤，速冻后，形成冷冻骨汤油冻块，贮存于-18℃的冷冻库内备用；(2)低温粉碎处理：采用粉碎机在低温对所述的冷冻骨汤油冻块进行低温粉碎，粉碎温度控制在1℃之间，将所述的冷冻骨汤油冻块粉碎为颗粒直径在0.1毫米的冷冻骨汤油冻块颗粒。 [0010] 优选，步骤(3)细胞溶出处理：采用常压下4℃无氧水对粉碎的冷冻骨汤油冻块颗粒进行浸渗水处理，水饱和时间为10小时，所述无氧水以完全淹没原料为准；然后快速深度冷冻与融冻处理，其中深冷冻处理时间为2h，冷冻温度为零下20℃，紧接着融冻，即以常压下4℃水浴对处于深冷冻的冷冻骨汤油冻块颗粒进行快速融冰，融冰处理时间为5h；重复所述的快速深度冷冻与融冻处理过程3次，细胞壁结构被破坏，有效物质溶出，形成金枪鱼寡肽骨汤。 [0011] 优选，步骤(4)生物酶解处理：将所述金枪鱼寡肽骨汤导入水解罐中，加入复合酶，所述的复合酶制备方法如下，先将草芽孢杆菌、双歧螺杆菌、鼠李糖乳杆菌、光合菌、地衣芽孢杆菌置于三角瓶中进行培养，培养的温度为33℃，在250rpm/min下培养25h，使菌体或者孢子浓度达到1×1014个/升(CFU/L)，制得发酵剂，然后向发酵剂中加入营养素，控制营养素的重量是所述发酵剂重量的1/10，所述的营养素为麦芽汁，即得到所述的复合酶，按照金枪鱼寡肽骨汤与复合酶1000∶1的重量比加入所述的复合酶进行生物酶解处理，在所述生物酶解过程中保持水解罐中pH为6.8，所述酶解温度为60℃，所述酶解时间为20℃，得到初级金枪鱼小分子活性肽。 [0012] 优选，步骤(5)后处理：将所述的初级金枪鱼小分子活性肽灭酶，快速升温至180℃并保持20s，然后40℃/s降温至60℃使酶失活；然后采用高速离心机将酶解液以80000r/min的速度离心3-5min，将上层液和中层液合并输入稀释罐体内，即酶解分离液，下层液被分离出去，然后采用热隔膜低温浓缩技术进行浓缩，浓缩温度为50℃，真空度为0.4MPa，将浓缩液输送到195℃的离心喷雾干燥塔内干燥成粉沫，即得到所述的金枪鱼小分子活性肽。更优选高速离心机将酶解液以60000r/min的速度离心4min。 [0013] 本发明还提供上述方法制备的所述的金枪鱼小分子活性肽，所述的金枪鱼小分子肽的分子量为0-480道尔顿的占比不少于89.2％，具体所述的金枪鱼小分子肽的分子量为0-480道尔顿的占比为89.61％，480-1000道尔顿的占比为9.43％，大于1000道尔顿的占比为0.96％，色泽为淡黄色。 [0015] 本发明的积极效果： [0016] 首先本发明制备的金枪鱼小分子活性多肽成分纯，优于现有技术中制备的多肽，本发明制备的金枪鱼小分子活性多肽含量接近100％，所述的金枪鱼小分子肽的分子量为0-480道尔顿的占比不少于89.2％，具体所述的金枪鱼小分子肽的分子量为0-480道尔顿的占比为89.61％，480-1000道尔顿的占比为9.43％，大于1000道尔顿的占比为0.96％，色泽为淡黄色。 [0017] 其次采用生物蛋白酶解技术将金枪鱼骨头原料降解成胶原螺旋肽；采用超微膜和低温浓缩技术分离金枪鱼小分子活性肽，产品具有稳定性、抗氧化性、易保存，易被人体吸收，得到的金枪鱼小分子活性肽粉沫既可以冲水可，又可以做出胶囊，使人们在日常生活过程得到保健功效，既有药用价值，又有营养价值。采用生物技术，综合使用了细胞溶出处理，生物酶解处理以及分离纯化、浓缩成肽生物保健品，为金枪鱼骨提供了新的途径。本发明制备的金枪鱼小分子肽，可以应用于肽类药物和肽类保健品，应用范围比较广泛，例如用于诊断用肽、肽疫苗、抗菌活性肽、细胞因子模拟肽、抗病毒肽和/或抗肿瘤肽等。本发明制备的金枪鱼小分子肽满足了日益增长的药品和保健品的使用需要，可以安全大规模制备使用。 具体实施方式[0018] 下面结合实施例对本发明做进一步详细说明。 [0019] 实施例1 [0020] 一种从金枪鱼骨中提取金枪鱼小分子活性肽的方法，具体包括如下步骤：(1)金枪鱼骨处理：将新鲜的金枪鱼骨清洗干净，破碎，在蒸煮罐中，采用温度为100℃的温度，0.10Mpa的压力蒸煮6h，骨渣排出，得到骨汤，速冻后，形成冷冻骨汤油冻块，贮存于-18℃的冷冻库内备用；(2)低温粉碎处理：采用粉碎机在低温对所述的冷冻骨汤油冻块进行低温粉碎，粉碎温度控制在1℃之间，将所述的冷冻骨汤油冻块粉碎为颗粒直径在0.02毫米的冷冻骨汤油冻块颗粒；(3)细胞溶出处理：采用常压下4℃无氧水对粉碎的冷冻骨汤油冻块颗粒进行浸渗水处理，水饱和时间为5小时，所述无氧水以完全淹没原料为准；然后快速深度冷冻与融冻处理，其中深冷冻处理时间为1h，冷冻温度为零下20℃，紧接着融冻，即以常压下4℃水浴对处于深冷冻的冷冻骨汤油冻块颗粒进行快速融冰，融冰处理时间为3h；重复所述的快速深度冷冻与融冻处理过程2次，细胞壁结构被破坏，有效物质溶出，形成金枪鱼寡肽骨汤；(4)生物酶解处理：将所述金枪鱼寡肽骨汤导入水解罐中，加入复合酶，所述的复合酶制备方法如下，先将草芽孢杆菌、双歧螺杆菌、鼠李糖乳杆菌、光合菌、地衣芽孢杆菌置于三角瓶中进行培养，培养的温度为28℃，在200rpm/min下培养25h，使菌体或者孢子浓度达到1×1014个/升(CFU/L)，制得发酵剂，然后向发酵剂中加入营养素，控制营养素的重量是所述发酵剂重量的1/8，所述的营养素为麦芽汁，即得到所述的复合酶，按照金枪鱼寡肽骨汤与复合酶1000∶1的重量比加入所述的复合酶进行生物酶解处理，在所述生物酶解过程中保持水解罐中pH为7.0，所述酶解温度为60℃，所述酶解时间为12℃，得到初级金枪鱼小分子活性肽；(5)后处理：将所述的初级金枪鱼小分子活性肽灭酶，快速升温至185℃并保持20s，然后40℃/s降温至60℃使酶失活；然后采用高速离心机将酶解液以60000r/min的速度离心 3min，将上层液和中层液合并输入稀释罐体内，即酶解分离液，下层液被分离出去，然后采用热隔膜低温浓缩技术进行浓缩，浓缩温度为40℃，真空度为0.4MPa，将浓缩液输送到195℃的离心喷雾干燥塔内干燥成粉沫，即得到所述的金枪鱼小分子活性肽。 [0021] 实施例2 [0022] 一种从金枪鱼骨中提取金枪鱼小分子活性肽的方法，具体包括如下步骤：(1)金枪鱼骨处理：将新鲜的金枪鱼骨清洗干净，破碎，在蒸煮罐中，采用温度为120℃的温度，0.12Mpa的压力蒸煮8h，骨渣排出，得到骨汤，速冻后，形成冷冻骨汤油冻块，贮存于-18℃的冷冻库内备用；(2)低温粉碎处理：采用粉碎机在低温对所述的冷冻骨汤油冻块进行低温粉碎，粉碎温度控制在4℃之间，将所述的冷冻骨汤油冻块粉碎为颗粒直径在0.1毫米的冷冻骨汤油冻块颗粒；(3)细胞溶出处理：采用常压下4℃无氧水对粉碎的冷冻骨汤油冻块颗粒进行浸渗水处理，水饱和时间为10小时，所述无氧水以完全淹没原料为准；然后快速深度冷冻与融冻处理，其中深冷冻处理时间为2h，冷冻温度为零下25℃，紧接着融冻，即以常压下4℃水浴对处于深冷冻的冷冻骨汤油冻块颗粒进行快速融冰，融冰处理时间为5h；重复所述的快速深度冷冻与融冻处理过程3次，细胞壁结构被破坏，有效物质溶出，形成金枪鱼寡肽骨汤；(4)生物酶解处理：将所述金枪鱼寡肽骨汤导入水解罐中，加入复合酶，所述的复合酶制备方法如下，先将草芽孢杆菌、双歧螺杆菌、鼠李糖乳杆菌、光合菌、地衣芽孢杆菌置于三角瓶中进行培养，培养的温度为33℃，在250rpm/min下培养25-35h，使菌体或者孢子浓度达到1×1011个/升(CFU/L)，制得发酵剂，然后向发酵剂中加入营养素，控制营养素的重量是所述发酵剂重量的1/10，所述的营养素为麦芽汁，即得到所述的复合酶，按照金枪鱼寡肽骨汤与复合酶1200∶1的重量比加入所述的复合酶进行生物酶解处理，在所述生物酶解过程中保持水解罐中pH为7.0，所述酶解温度为60℃，所述酶解时间为20℃，得到初级金枪鱼小分子活性肽；(5)后处理：将所述的初级金枪鱼小分子活性肽灭酶，快速升温至185℃并保持25s，然后70℃/s降温至60℃使酶失活；然后采用高速离心机将酶解液以80000r/min的速度离心 5min，将上层液和中层液合并输入稀释罐体内，即酶解分离液，下层液被分离出去，然后采用热隔膜低温浓缩技术进行浓缩，浓缩温度为50℃，真空度为2.0MPa，将浓缩液输送到210℃的离心喷雾干燥塔内干燥成粉沫，即得到所述的金枪鱼小分子活性肽。 [0023] 实施例3 [0024] 一种从金枪鱼骨中提取金枪鱼小分子活性肽的方法，具体包括如下步骤：(1)金枪鱼骨处理：将新鲜的金枪鱼骨清洗干净，破碎，在蒸煮罐中，采用温度为110℃的温度，0.11Mpa的压力蒸煮7h，骨渣排出，得到骨汤，速冻后，形成冷冻骨汤油冻块，贮存于-18℃的冷冻库内备用；(2)低温粉碎处理：采用粉碎机在低温对所述的冷冻骨汤油冻块进行低温粉碎，粉碎温度控制在2℃之间，将所述的冷冻骨汤油冻块粉碎为颗粒直径在0.08毫米的冷冻骨汤油冻块颗粒；(3)细胞溶出处理：采用常压下4℃无氧水对粉碎的冷冻骨汤油冻块颗粒进行浸渗水处理，水饱和时间为6小时，所述无氧水以完全淹没原料为准；然后快速深度冷冻与融冻处理，其中深冷冻处理时间为2h，冷冻温度为零下21℃，紧接着融冻，即以常压下4℃水浴对处于深冷冻的冷冻骨汤油冻块颗粒进行快速融冰，融冰处理时间为4h；重复所述的快速深度冷冻与融冻处理过程3次，细胞壁结构被破坏，有效物质溶出，形成金枪鱼寡肽骨汤；(4)生物酶解处理：将所述金枪鱼寡肽骨汤导入水解罐中，加入复合酶，所述的复合酶 |
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