一种来源于食用菌\海藻的多糖蛋白复配功能胶囊产品的生产方法 |
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| 申请号 | CN201410489733.6 | 申请日 | 2014-09-19 | 公开(公告)号 | CN104351752A | 公开(公告)日 | 2015-02-18 |
| 申请人 | 南京农业大学; 南京财经大学; 南京老山药业股份有限公司; | 发明人 | 胡秋辉; 马高兴; 裴斐; 杨文建; 赵立艳; 林德祥; 陈坤; 郑惠华; 方勇; 马宁; | ||||
| 摘要 | 本 发明 涉及一种来源于食用菌\海藻的多糖蛋白复配功能胶囊产品的生产方法，属于食用菌、海藻深加工及相关产品开发应用领域。它由 超 声波 辅助提取技术制得的食用菌多糖粉、海藻多糖粉与盐溶技术制得的食用菌蛋白粉、海藻蛋白粉按照一定配比复配，采用胶囊常规制备工艺制备而成。通过分析两种不同来源的多糖及蛋白粉的 生物 功能活性，进行科学的配比，得到营养丰富、生物活性全面及利用率高的胶囊产品。本发明所提供的营养复配胶囊与同类产品相比，可以显著增强 机体 免疫 力 、延缓衰老，是一种极具市场价值的保健食品。 | ||||||
| 权利要求 | 1.一种来源于食用菌\海藻的多糖蛋白复配功能胶囊产品的生产方法，其特征在于按照一定的配比比例将一步提取法制得的食用菌多糖、海藻多糖和食用菌蛋白粉、海藻蛋白粉进行营养复配，用精密胶囊填充板对胶囊进行填充，收集胶囊得到食用菌与海藻多糖和蛋白营养复配胶囊成品。 |
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| 说明书全文 | 一种来源于食用菌\海藻的多糖蛋白复配功能胶囊产品的生产方法 一、技术领域 [0001] 本发明涉及一种来源于食用菌\海藻的多糖蛋白复配功能胶囊产品的生产方法，属于食用菌、海藻深加工及相关产品开发应用领域。二、背景技术 [0002] 随着人类对保健食品以及其营养价值的认识逐渐加深，食用菌作为一种新型的功能保健食品逐渐走进了人们的视野。食用菌中含有较高的蛋白质，碳水化合物和粗纤维，而脂肪含量较低，还含有VB1、VB2、VC等多种维生素，且富含钙、磷、铁等多种矿物质，是一类不可多得的高营养食品。联合国粮农组织(FAO)将食用菌列为十大营养食品之一。国内、外对食用菌的药用及保健功能进行了十分详尽的研究，已经在分子水平上证实了食用菌的特殊营养保健功能及其药用价值。科学提取的食用菌多糖、蛋白等有效成分，加工成药品、保健食品等，在增强人体免疫力、降低血脂等方面拥有极其显著的作用。研究证实，食用菌多糖和蛋白是一种极强的免疫激活剂，能激活巨噬细胞和淋巴细胞，提高巨噬细胞的趋化性和淋巴细胞对Yac-1细胞和P-815细胞的毒性反应水平，拮抗BBN对小鼠的致癌作用。但是有关食用菌中多糖及蛋白的抗氧化作用则相对其他活性物质较弱。 [0003] 海洋生物资源丰富、种类繁多、数量庞大，呈现原始性和多样性特点。海洋生物活性物质结构新颖、功能独特是当今世界科学新药研究开发和现代医药保健品开发研究的活跃领域，迄今海洋生物中已发现3000余种新型活性物质，其中包括生物碱类、菇类、大环聚醋类、肤类、聚醚类、及多糖类等化合物。海藻，作为一类营养丰富的高蛋白、低脂肪的深海食品，具有抗凝血、抗突变、抗肿瘤、抗疲劳等多种生物学功能。海藻多糖是从海藻中提取的大分子糖类，目前研究最多的品种有褐藻胶、琼胶、卡拉胶等，它们在食品、医药、生物工程等领域得到了广泛应用。海藻中的藻胆蛋白是藻类吸收光能进行光合作用的一种重要捕光色素蛋白。藻胆蛋白用途广泛，由于其显著的抗氧化生物活性，可用作天然色素广泛应用于食品、化妆品、染料等工业，又可制成荧光试剂，用于临床医学诊断和免疫化学及生物工程领域。 [0004] 在多糖及蛋白的开发利用中，分离提取是关键的步骤之一，它不仅影响着产品的得率、企业的生产效益，还与产品的活性价值密切相关。由于多糖能溶于水，不溶于醇、醚、酮等有机溶剂的特性，其传统提取方法主要有热水浸提法、酸碱浸提法、酶法等。而大部分蛋白质都可溶于水、稀盐、稀酸或碱溶液，少数与脂类结合的蛋白质则溶于乙醇、丙酮、丁醇等有机溶剂中，因此，可采用不同溶剂提取分离和纯化蛋白质。 [0005] 利用超微粉碎、超声辅助提取、酶法辅助提取、超滤膜分离、冷冻干燥、喷雾干燥等技术对食用菌和海藻中的活性多糖和蛋白进行工艺简单、提取效率高的分离和纯化，并按照一定的一定配比混合，按常规胶囊制备工艺制备食用菌与海藻多糖和蛋白的营养复配胶囊，既可以补充食用菌多糖和蛋白的抗氧化等活性较弱缺点，又可以消除海藻多糖与蛋白在免疫活性方面的不足，从而可以使各种多糖与蛋白的生物效应相互配合，满足现代人群对功能保健产品多方面的需求。三、发明内容 [0006] 技术问题 [0007] 本发明所要解决的技术问题在于通过优化食用菌与海藻多糖与蛋白的复配比例，研制出具有提高机体免疫力、抗氧化、抗肿瘤活性功能的营养复配胶囊。本发明既可以在安全无毒的基础上，简单有效的提取食用菌和海藻中的功能活性多糖和蛋白，又由于两种来源的多糖和蛋白各自的生物活性优势，基于营养复配，克服了目前市场上一些保健品的活性微弱且单一的研制现状，可大大提高食用菌和海藻的开发前景，增强我国保健品的国际竞争力。 [0008] 技术方案 [0009] 一种来源于食用菌\海藻的多糖蛋白复配功能胶囊产品的生产方法，其特征在于按照一定的配比比例将一步提取法制得的食用菌及海藻多糖、蛋白粉进行营养复配，用精密胶囊填充板对胶囊进行填充，收集胶囊得到食用菌与海藻多糖和蛋白营养复配胶囊成品。提取工艺包括： [0010] (1)食用菌与海藻超微粉的制备：新鲜食用菌或海藻经除杂、清洗、晾晒至半干后，放于烘箱中60℃鼓风烘干，然后经粉碎机粉碎，双辊破碎机破碎，80目筛分，气流粉碎机粉碎，300目筛分，制得食用菌超微粉和海藻超微粉。 [0011] (2)食用菌多糖及蛋白粉的制备：称取食用菌超微粉，按每1g超微粉加15～25mL85％乙醇的比例室温下浸泡过夜，离心取沉淀，向沉淀中加入20mL由0.05M Na2HPO4、0.05M NaH2PO4和0.03M NaCl组成的缓冲液，室温搅拌4h，离心沉淀用于食用菌多糖粉的制备，上清液经孔径为100kDa的超滤膜超滤，截留液4℃备用，透过液低温浓缩，喷雾干燥得食用菌蛋白粉产品；向上述离心沉淀中加入去离子水使溶液浓度达到0.04g/mL，450W下超声提取 10min，离心取上清；上清液与上述食用菌蛋白粉制备过程中经孔径为100kDa超滤膜超滤截留液混合，低温浓缩，浓缩液加其4倍体积的无水乙醇，沉淀过夜，离心取沉淀，置60℃烘干得到食用菌多糖粉产品； [0012] (3)海藻多糖及蛋白粉的制备：秤取海藻超微粉，用超临界CO2萃取的方法，对原料进行脱脂预处理，取20g脱脂粉末加800mL去离子水胀融后，加入占脱脂粉末质量0.4％的木瓜蛋白酶70℃浸提13h，然后沸水浴15min灭酶，4000r/min离心20min，上清液60℃旋转蒸发浓缩至原来的1/4体积。采用三氯乙酸对浓缩液除蛋白，4倍体积无水乙醇沉淀多糖，冷冻干燥，得海藻多糖粉产品；对上清液用饱和度为45％的硫酸铵沉淀，50℃烘干得到海藻蛋白粉产品； [0013] (4)将步骤(2)和步骤(3)中得到的食用菌与海藻多糖及蛋白粉用小型胶囊填充机混合按照一定比例：食用菌多糖粉：20wt％，食用菌蛋白粉：25wt％，海藻多糖粉：20wt％，海藻蛋白粉：35wt％混合均匀制成复配粉，将复配粉用精密胶囊填充板对胶囊进行填充，收集胶囊，置于立式压力蒸汽灭菌器灭菌，设置条件90℃，0.11MPa，灭菌20min收集成品。 [0014] 有益效果 [0015] (1)本发明在分离提取工艺上与传统的分步提取多糖与蛋白相比，分离过程中无有毒有机试剂参与，所得产品无毒，安全；同时超滤膜分离技术具有设备简单，操作容易，适用范围广，生产效率高，能量损耗小等优点，所得多糖与蛋白纯度皆可达到85％以上，产品可广泛应用于功能食品和医药等领域。 [0016] (2)由于两种来源的多糖和蛋白各自的生物活性优势，基于营养复配，将来源不同的多糖与蛋白按一定比例混合，具有比单一来源的多糖与蛋白更高的生物活性优势，克服了目前市场上一些保健品的活性微弱且单一的研制现状，可大大提高食用菌和海藻的开发前景，增强我国保健品的国际竞争力。四、附图说明 [0017] 图1是实施例1中制得的金针菇多糖粉、金针菇蛋白粉、复配功能胶囊清除羟自由基能力比较；图2是实施例2中制得的条斑紫菜多糖粉、条斑紫菜蛋白粉、复配功能胶囊对巨噬细胞增殖能力的影响的比较；图3是实施例3中制得的金针菇多糖粉、金针菇蛋白粉、条斑紫菜多糖粉、条斑紫菜蛋白粉、复配功能胶囊清除羟自由基能力比较；图4是实施例3中制得的金针菇多糖粉、金针菇蛋白粉、条斑紫菜多糖粉、条斑紫菜蛋白粉、复配功能胶囊对巨噬细胞增殖能力的影响；图5是实施例4中制得的金针菇多糖粉、金针菇蛋白粉、条斑紫菜多糖粉、条斑紫菜蛋白粉、复配功能胶囊清除羟自由基能力比较；图6是实施例4中制得的金针菇多糖粉、金针菇蛋白粉、条斑紫菜多糖粉、条斑紫菜蛋白粉、复配功能胶囊对巨噬细胞增殖能力的影响。五、具体实施方式 [0018] 下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。 [0019] 实施例1 [0020] 1.金针菇多糖和蛋白粉的制备 [0021] (1)金针菇超微粉的制备：新鲜金针菇经除杂、清洗、晾晒至半干后，放于烘箱中60℃鼓风烘干，然后经粉碎机粉碎，双辊破碎机破碎，80目筛分，气流粉碎机粉碎，300目筛分，制得金针菇超微粉。 [0022] (2)金针菇多糖及蛋白粉的制备：称取金针菇超微粉，按每1g超微粉加20mL 85％乙醇的比例室温下浸泡过夜，离心取沉淀，向沉淀中加入20mL由0.05M Na2HPO4、0.05M NaH2PO4和0.03M NaCl组成的缓冲液，室温搅拌4h，离心沉淀用于金针菇多糖粉的制备，上清液经孔径为100kDa的超滤膜超滤，截留液4℃备用，透过液低温浓缩，喷雾干燥得金针菇蛋白粉产品；向上述离心沉淀中加入去离子水使溶液浓度达到0.04g/mL，450W下超声提取10min，离心取上清；上清液与上述金针菇蛋白粉制备过程中经孔径为100kDa超滤膜超滤截留液混合，低温浓缩，浓缩液加其4倍体积的无水乙醇，沉淀过夜，离心取沉淀，置60℃烘干得到金针菇多糖粉产品； [0023] 2.金针菇多糖粉、金针菇蛋白粉、复配功能胶囊的生物活性(抗氧化)比较[0024] (1)清除羟自由基能力比较 [0025] 清除羟基自由基能力的测定采用Fenton体系： [0026] a.取3支具塞试管，分别加入0.2mL的FeSO4-EDTA混合液(10mmol/L)； [0027] b.加入0.2mL的α-脱氧核糖溶液DR(20mmol/L)，然后再加入测试样品，并用磷酸缓冲液PBS(pH为7.4)补充至1.8mL，最后加入0.2mL的H2O2(10mmol/L)，37℃水浴1h；以PBS缓冲溶液为对照。 [0028] c.加入1mL10％的三氯乙酸(TCA)终止反应，再加入1mL 1％的硫代巴比妥酸(TBA)，混匀后沸水浴中加热10min，冷却后离心取上清，于532nm处测光吸收As。 [0029] 实施例2 [0030] 1.条斑紫菜多糖和蛋白粉的制备 [0031] (1)条斑紫菜超微粉的制备：新鲜条斑紫菜经除杂、清洗、晾晒至半干后，放于烘箱中60℃鼓风烘干，然后经粉碎机粉碎，双辊破碎机破碎，80目筛分，气流粉碎机粉碎，300目筛分，制得条斑紫菜超微粉。 [0032] (2)条斑紫菜多糖及蛋白粉的制备：秤取条斑紫菜超微粉，用超临界CO2萃取的方法，对原料进行脱脂预处理，取20g脱脂粉末加800mL去离子水胀融后，加入占脱脂粉末质量0.4％的木瓜蛋白酶70℃浸提3h，然后沸水浴15min灭酶，4000r/min离心20min，上清液60℃旋转蒸发浓缩至原来的1/4体积。采用三氯乙酸对浓缩液除蛋白，4倍体积无水乙醇沉淀多糖，冷冻干燥，得条斑紫菜多糖粉产品；对上清液用饱和度为45％的硫酸铵沉淀，50℃烘干得到条斑紫菜蛋白粉产品； [0033] 2.条斑紫菜多糖粉、条斑紫菜蛋白粉、复配功能胶囊的生物活性(免疫增强活性)比较 [0034] (1)免疫增强活性研究 [0035] 小鼠单核巨噬细胞RAW264.7用同时含有10％胎牛血清及50U/mL青霉素和5 50μg/mL庆大霉素的DMEM培养液培养，用DMEM培养接配制成(终浓度为2×10/mL)细胞悬液。将细胞悬液接种于96孔板中，每空加入100μL对数生长期的细胞悬液，置于5％CO2，37℃培养箱中培养3h后，弃去培养液，加入用DMEM培养液配制的不同浓度的测试样品溶液100μL/孔，对照孔中加入100μL培养基，同时设置空白调零孔，每个处理设置4个重复。将培养板置于5％CO2，37℃培养箱中培养20h后每孔加入10μL MTT继续培养4h后弃上清，每孔加入150μL二甲亚枫(DMSO)，室温震摇10min，在酶标仪下测570nm波长下的吸光值。 [0036] 实施例3 [0037] 1.金针菇与条斑紫菜多糖和蛋白粉的制备 [0038] (1)金针菇与条斑紫菜超微粉的制备：新鲜金针菇或条斑紫菜经除杂、清洗、晾晒至半干后，放于烘箱中60℃鼓风烘干，然后经粉碎机粉碎，双辊破碎机破碎，80目筛分，气流粉碎机粉碎，300目筛分，制得金针菇超微粉和条斑紫菜超微粉。 [0039] (2)金针菇多糖及蛋白粉的制备：称取金针菇超微粉，按每1g超微粉加15mL 85％乙醇的比例室温下浸泡过夜，离心取沉淀，向沉淀中加入15mL由0.05M Na2HPO4、0.05M NaH2PO4和0.03M NaCl组成的缓冲液，室温搅拌3h，离心沉淀用于金针菇多糖粉的制备，上清液经孔径为100kDa的超滤膜超滤，截留液4℃备用，透过液低温浓缩，喷雾干燥得金针菇蛋白粉产品；向上述离心沉淀中加入去离子水使溶液浓度达到0.05g/mL，350W下超声提取10min，离心取上清；上清液与上述金针菇蛋白粉制备过程中经孔径为100kDa超滤膜超滤截留液混合，低温浓缩，浓缩液加其4倍体积的无水乙醇，沉淀过夜，离心取沉淀，置60℃烘干得到金针菇多糖粉产品； [0040] (3)条斑紫菜多糖及蛋白粉的制备：秤取条斑紫菜超微粉，用超临界CO2萃取的方法，对原料进行脱脂预处理，取20g脱脂粉末加1000mL去离子水胀融后，加入占脱脂粉末质量0.6％的木瓜蛋白酶70℃浸提4h，然后沸水浴15min灭酶，4000r/min离心20min，上清液60℃旋转蒸发浓缩至原来的1/4体积。采用三氯乙酸对浓缩液除蛋白，4倍体积无水乙醇沉淀多糖，冷冻干燥，得条斑紫菜多糖粉产品；对上清液用饱和度为45％的硫酸铵沉淀，50℃烘干得到条斑紫菜蛋白粉产品； [0041] 2.金针菇与条斑紫菜多糖和蛋白复配功能胶囊的制备 [0042] (1)将上述步骤中得到的金针菇与条斑紫菜多糖及蛋白粉用小型胶囊填充机混合按照一定比例：金针菇多糖粉：15wt％，金针菇蛋白粉：20wt％，条斑紫菜多糖粉：30wt％，条斑紫菜蛋白粉：35wt％混合均匀制成复配粉，将复配粉用精密胶囊填充板对胶囊进行填充，收集胶囊，置于立式压力蒸汽灭菌器灭菌，设置条件85℃，0.1MPa，灭菌15min收集成品。 [0043] 3.金针菇多糖粉、金针菇蛋白粉、条斑紫菜多糖粉、条斑紫菜蛋白粉、复配功能胶囊的生物活性(抗氧化，免疫增强活性)比较 [0044] (1)清除羟自由基能力比较 [0045] 清除羟基自由基能力的测定采用Fenton体系： [0046] a.取3支具塞试管，分别加入0.2mL的FeSO4-EDTA混合液(10mmol/L)； [0047] b.加入0.2mL的α-脱氧核糖溶液DR(20mmol/L)，然后再加入测试样品，并用磷酸缓冲液PBS(pH为7.4)补充至1.8mL，最后加入0.2mL的H2O2(10mmol/L)，37℃水浴1h；以PBS缓冲溶液为对照。 [0048] c.加入1mL10％的三氯乙酸(TCA)终止反应，再加入1mL 1％的硫代巴比妥酸(TBA)，混匀后沸水浴中加热10min，冷却后离心取上清，于532nm处测光吸收As。 [0049] (2)免疫增强活性研究 [0050] 小鼠单核巨噬细胞RAW264.7用同时含有10％胎牛血清及50U/mL青霉素和5 50μg/mL庆大霉素的DMEM培养液培养，用DMEM培养接配制成(终浓度为2×10/mL)细胞悬液。将细胞悬液接种于96孔板中，每空加入100μL对数生长期的细胞悬液，置于5％CO2，37℃培养箱中培养3h后，弃去培养液，加入用DMEM培养液配制的不同浓度的测试样品溶液100μL/孔，对照孔中加入100μL培养基，同时设置空白调零孔，每个处理设置4个重复。将培养板置于5％CO2，37℃培养箱中培养20h后每孔加入10μL MTT继续培养4h后弃上清，每孔加入150μL二甲亚枫(DMSO)，室温震摇10min，在酶标仪下测570nm波长下的吸光值。 [0051] 实施例4 [0052] 1.金针菇与条斑紫菜多糖和蛋白粉的制备 [0053] (1)金针菇与条斑紫菜超微粉的制备：新鲜金针菇或条斑紫菜经除杂、清洗、晾晒至半干后，放于烘箱中60℃鼓风烘干，然后经粉碎机粉碎，双辊破碎机破碎，80目筛分，气流粉碎机粉碎，300目筛分，制得金针菇超微粉和条斑紫菜超微粉。 [0054] (2)金针菇多糖及蛋白粉的制备：称取金针菇超微粉，按每1g超微粉加20mL 85％乙醇的比例室温下浸泡过夜，离心取沉淀，向沉淀中加入20mL由0.05M Na2HPO4、0.05M NaH2PO4和0.03M NaCl组成的缓冲液，室温搅拌4h，离心沉淀用于金针菇多糖粉的制备，上清液经孔径为100kDa的超滤膜超滤，截留液4℃备用，透过液低温浓缩，喷雾干燥得金针菇蛋白粉产品；向上述离心沉淀中加入去离子水使溶液浓度达到0.04g/mL，450W下超声提取10min，离心取上清；上清液与上述金针菇蛋白粉制备过程中经孔径为100kDa超滤膜超滤截留液混合，低温浓缩，浓缩液加其4倍体积的无水乙醇，沉淀过夜，离心取沉淀，置60℃烘干得到金针菇多糖粉产品； [0055] (3)条斑紫菜多糖及蛋白粉的制备：秤取条斑紫菜超微粉，用超临界CO2萃取的方法，对原料进行脱脂预处理，取20g脱脂粉末加800mL去离子水胀融后，加入占脱脂粉末质量0.4％的木瓜蛋白酶70℃浸提3h，然后沸水浴15min灭酶，4000r/min离心20min，上清液60℃旋转蒸发浓缩至原来的1/4体积。采用三氯乙酸对浓缩液除蛋白，4倍体积无水乙醇沉淀多糖，冷冻干燥，得条斑紫菜多糖粉产品；对上清液用饱和度为45％的硫酸铵沉淀，50℃烘干得到条斑紫菜蛋白粉产品； [0056] 2.金针菇与条斑紫菜多糖和蛋白复配功能胶囊的制备 [0057] (1)将上述步骤中得到的金针菇与条斑紫菜多糖及蛋白粉用小型胶囊填充机混合按照一定比例：食用菌多糖粉：20wt％，食用菌蛋白粉：25wt％，海藻多糖粉：20wt％，海藻蛋白粉：35wt％混合均匀制成复配粉，将复配粉用精密胶囊填充板对胶囊进行填充，收集胶囊，置于立式压力蒸汽灭菌器灭菌，设置条件90℃，0.11MPa，灭菌20min收集成品。 [0058] 3.金针菇多糖粉、金针菇蛋白粉、条斑紫菜多糖粉、条斑紫菜蛋白粉、复配功能胶囊的生物活性(抗氧化，免疫增强活性)比较 [0059] (1)清除羟自由基能力比较 [0060] 清除羟基自由基能力的测定采用Fenton体系： [0061] a.取3支具塞试管，分别加入0.2mL的FeSO4-EDTA混合液(10mmol/L)； [0062] b.加入0.2mL的α-脱氧核糖溶液DR(20mmol/L)，然后再加入测试样品，并用磷酸缓冲液PBS(pH为7.4)补充至1.8mL，最后加入0.2mL的H2O2(10mmol/L)，37℃水浴1h；以PBS缓冲溶液为对照。 [0063] c.加入1mL10％的三氯乙酸(TCA)终止反应，再加入1mL 1％的硫代巴比妥酸(TBA)，混匀后沸水浴中加热10min，冷却后离心取上清，于532nm处测光吸收As。 [0064] (2)免疫增强活性研究 [0065] 小鼠单核巨噬细胞RAW264.7用同时含有10％胎牛血清及50U/mL青霉素和5 50μg/mL庆大霉素的DMEM培养液培养，用DMEM培养接配制成(终浓度为2×10/mL)细胞悬液。将细胞悬液接种于96孔板中，每空加入100μL对数生长期的细胞悬液，置于5％CO2，37℃培养箱中培养3h后，弃去培养液，加入用DMEM培养液配制的不同浓度的多糖溶液 100μL/孔，对照孔中加入100μL培养基，同时设置空白调零孔，每个处理设置4个重复。 将培养板置于5％CO2，37℃培养箱中培养20h后每孔加入10μL MTT继续培养4h后弃上清，每孔加入150μL二甲亚枫(DMSO)，室温震摇10min，在酶标仪下测570nm波长下的吸光值。 |
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