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与TALL－1结合的肽和相关分子
申请号 CN02814009.5 申请日 2002-05-13 公开(公告)号 CN1535281A 公开(公告)日 2004-10-06
申请人 安姆根有限公司; 发明人 闵湖盛; 许海琳; 熊非;
摘要 本 发明 涉及能调节TALL－1活性的 治疗 剂。根据本发明，TALL－1的调节剂可以包括 氨 基酸序列Dz2Lz4，其中，z2是氨基酸残基，z4是苏氨酰和异亮氨酰。典型分子包括具有下式的序列,(如右图)，其中，取代基团如 说明书 中定义的。本发明还包括通式(X1)a－V1－(X2)b的组合物，其中，V1是一种媒介物，它与上述TALL－1调节组合物的一种或多种共价连接。所述媒介物和所述TALL－1调节组合物可以通过TALL－1调节部分的N－或C－末端连接。优选的媒介物是Fc结构域，并且优选的Fc结构域是IgG Fc结构域。
权利要求

1.一种含有氨基酸序列Dz2Lz4的TALL-1结合组合物，其中z2 是氨基酸残基，而z4是T或I，并且其中所述组合物不包括TACI、 BCMA或BAFFR片段(SEQ ID NOS：195、196、197)。
2.如权利要求1的组合物，其中z4是T。
3.一种含有氨基酸序列Dz2LI的TALL-1结合组合物，其中z2 是氨基酸残基。
4.如权利要求1的组合物，包括具有下式的氨基酸序列：
            a1a2a3CDa6La8a9a10Ca12a13a14
                 (SEQ.ID.NO：100)
其中：
a1，a2，a3各自独立地是缺失的或者是氨基酸残基；
a6是氨基酸残基；
a8是T或I；
a9是碱性或疏水性残基；
a12是中性极性残基；
a13和a14各自独立地是缺失的或者是氨基酸残基。
5.如权利要求4的组合物，其中a8是T，而a9是碱性残基。
6.如权利要求4的组合物，其中a9是K，而a12是F。
7.如权利要求1的组合物，包括具有下式的氨基酸序列：
           b1b2b3Cb5b6Db8Lb10b11b12b13b14Cb16b17b18
                  (SEQ.ID.NO：104)
其中：
b1和b2各自独立地是缺失的或者是氨基酸残基；
b3是酸性或酰胺残基；
b5是氨基酸残基；
b6是芳族残基；
b8是氨基酸残基；
b10是T或I；
b11是碱性残基；
b12和b13各自独立地是氨基酸残基；
b14是中性极性残基；和
b16，b17和b18各自独立地是缺失的或是氨基酸残基。
8.如权利要求7的组合物，其中：
b3是D，Q或E；
b6是W或Y；
b10是T；
b11是K或R；和
b14是V或L。
9.如权利要求1的组合物，包括具有下式的氨基酸序列：
     c1c2c3Cc5Dc7Lc9c10c11c12c13c14Cc16c17c18
                  (SEQ.ID.NO：105)
其中：
c1，c2和c3各自独立地是缺失的或者是氨基酸残基；
c5是氨基酸残基；
c7是氨基酸残基；
c9是T或I；
c10是碱性残基；
c11和c12各自独立地是氨基酸残基；
c13是中性极性残基；
c14是氨基酸残基；
c16是氨基酸残基；
c17是中性极性残基；和
c18是氨基酸残基或者是缺失的。
10.如权利要求9的组合物，其中：
c9是T；
c10是K或R；
c13是I，L或V；和
c17是A或L。
11.如权利要求1的组合物，包括具有下式的氨基酸序列：
     d1d2d3Cd5d6d7WDd10Ld12d13d14Cd15d16d17
             (SEQ.ID.NO：106)
其中：
d1，d2和d3各自独立地是缺失的或是氨基酸残基；
d5，d6和d7各自独立地是氨基酸残基；
d10是氨基酸残基；
d13是T或I；
d14是氨基酸残基；而
d16，d17和d18各自独立地是缺失的或是氨基酸残基。
12.如权利要求1的组合物，包括具有下式的氨基酸序列：
     e1e2e3Ce5e6e7De9Le11Ke13Ce15e16e17e18
               (SEQ.ID.NO：107)
其中：
e1，e2和e3各自独立地是缺失的或者是氨基酸残基；
e5，e6，e7，e9和e13各自独立地是氨基酸残基；
e11是T或I；和
e15，e16和e17各自独立地是缺失的或者是氨基酸残基。
13.如权利要求1的组合物，包括具有下式的氨基酸序列：
         f1f2f3Kf5Df7Lf9f10Qf12f13f14
              (SEQ.ID NO：109)
其中：
f1，f2和f3是缺失的或者是氨基酸残基；
f5是W，Y或F；
f7是氨基酸残基；
f9是T或I；
f10是K，R或H；
f12是C，中性极性残基，或者碱性残基(优选W，C或R)；
f13是C，中性极性残基，或者是缺失的；和
f14是任何氨基酸残基或者是缺失的；
其前提是，f1，f2和f3中只有一个可以是C，并且f12，f13和f14 中只有一个可以是C。
14.如权利要求13的组合物，其中f5是W。
15.如权利要求13的组合物，其中f7是L。
16.如权利要求13的组合物，其中f9是T。
17.如权利要求13的组合物，其中f10是K。
18.如权利要求13的组合物，其中f12是C，而f1，f2和f3中的 一个是C。
19.如权利要求13的组合物，其中f13是V。
20.如权利要求13的组合物，包括具有下式的氨基酸序列
           f1f2f3KWDf7Lf9KQf12f13f14
              (SEQ ID NO：125)。
21.如权利要求20的组合物，包括选自下列的氨基酸序列：SEQ ID NOS：32，33，58，60，63，66，67，69，114，115，122，123， 124，147-150，152-177，179，180，和187。
22.如权利要求20的组合物，包括具有下式的氨基酸序列
LPGCKWDLLIKQWVCDPL(SEQ ID NO：33)。
23.一种组合物，包括具有下式的氨基酸序列：
       g1g2g3Cg5PFg8Wg10Cg11g12g13
              (SEQ.ID.NO.101)
其中：
g1，g2和g3各自独立地是缺失的或者是氨基酸残基；
g5是中性极性残基；
g8是中性极性残基；
g10是酸性残基；
g12和g13各自独立地是氨基酸残基；和
g14是缺失的或者是氨基酸残基。
24.如权利要求23的组合物，其中：
g2是G；
g5是W；
g8是P；
g10是E；和
g13是碱性残基。
25.一种组合物，包括具有下式的氨基酸序列：
         h1h2h3CWh6h7WGh10Ch12h13h14
            (SEQ.ID.NO：102)
其中：
h1，h2，和h3各自独立地是缺失的或者是氨基酸残基；
h6是疏水性残基；
h7是疏水性残基；
h10是酸性或极性疏水性残基；和
h12，h13和h14各自独立地是缺失或者是氨基酸残基。
26.如权利要求25的组合物，其中：
h1是G；
h6是A；
h7是中性极性残基；和
h10是酸性残基。
27.一种组合物，包括具有下式的氨基酸序列：
       i1i2i3Ci5i6i7i8i9i10Ci12i13i14
             (SEQ.ID.NO：103)
其中：
i1是缺失的或者是氨基酸残基；
i2是中性极性残基；
i3是氨基酸残基；
i5，i6，i7和i8各自独立地是氨基酸残基；
i9是酸性残基；
i10是氨基酸残基；
i12和i13各自独立地是氨基酸残基；和
i14是中性极性残基。
28.如权利要求27的组合物，其中：
i2是W；和
i14是W。
29.一种TALL-1结合组合物，包括式为PFPWE(SEQ ID NO：110) 的氨基酸序列。
30.如权利要求11的组合物，具有下式：
(X1)a-V1-(X2)b
以及它的多聚体，其中：
V1是媒介物；
X1和X2各自独立地选自-(L1)c-P1，-(L1)c-P1-(L2)d-P2，-(L1)c-P1- (L2)d-P2-(L3)e-P3，和-(L1)c-P1-(L2)d-P2-(L3)e-P3-(L4)f-P4
P1，P2，P3和P4中的一个或多个各自独立地包括Dz2Lz4；
L1，L2，L3和L4各自独立是接头；而
a，b，c，d，e和f各自独立地是0或1，其前提是a和b中的 至少一个是1。
31.如权利要求30的组合物，具有下式P1-(L1)c-P2-(L2)d-V1。
32.如权利要求30的组合物，具有下式
V1-(L1)c-P1-(L2)d-P2。
33.如权利要求30的组合物，其中V1是Fc结构域。
34.如权利要求30的组合物，其中V1是IgG Fc结构域。
35.如权利要求30的组合物，其中V1是IgG1 Fc结构域。
36.如权利要求30的组合物，其中V1包括SEQ ID NO：2的序 列。
37.如权利要求30的组合物，其中P1，P2，P3和P4中的一个或 多个各自独立地包括选自下列的序列：
a1a2a3CDa6La8a9a10Ca12a13a14(SEQ.ID.NO：100)
b1b2b3Cb5b6Db8Lb10b11b12b13b14Cb16b17b18(SEQ.ID.NO：104)
c1c2c3Cc5Dc7Lc9c10c11c12c13c14Cc16c17c18(SEQ.ID.NO：105)
d1d2d3Cd5d6d7WDd10Ld13d14d15Cd16d17d18(SEQ.ID.NO：106)
e1e2e3Ce5e6e7De9Le11Ke13Ce15e16e17e18(SEQ.ID.NO：107)
f1f2f3Kf5Df7Lf9f10Qf12f13f14(SEQ.ID NO：109)
g1g2g3Cg5PFg8Wg10Cg11g12g13(SEQ.ID.NO.101)
h1h2h3CWh6h7WGh10Ch12h13h14(SEQ.ID.NO：102)，和
i1i2i3Ci5i6i7i8i9i10Ci12i13i14(SEQ.ID.NO：103)
其中：
a1，a2，a3各自独立地是缺失的或者是氨基酸残基；
a6是氨基酸残基；
a9是碱性或疏水性残基；
a8是苏氨酰或异亮氨酰；
a12是中性极性残基；
a13和a14各自独立地是缺失的或者是氨基酸残基；
b1和b2各自独立地是缺失的或者是氨基酸残基；
b3是酸性或酰胺残基；
b5是氨基酸残基；
b6是芳族残基；
b8是氨基酸残基；
b10是T或I；
b11是碱性残基；
b12和b13各自独立地是氨基酸残基；
b14是中性极性残基；和
b16，b17和b18各自独立地是缺失的或是氨基酸残基；
c1，c2和c3各自独立地是缺失的或者是氨基酸残基；
c5是氨基酸残基；
c7是氨基酸残基；
c9是T或I；
c10是碱性残基；
c11和c12各自独立地是氨基酸残基；
c13是中性极性残基；
c14是氨基酸残基；
c16是氨基酸残基；
c17是中性极性残基；和
c18是氨基酸残基或者是缺失的；
d1，d2和d3各自独立地是缺失的或是氨基酸残基；
d5，d6和d7各自独立地是氨基酸残基；
d10是氨基酸残基；
d12是T或I；
d13是氨基酸残基；而
d15，d16和d17各自独立地是缺失的或是氨基酸残基；
e1，e2和e3各自独立地是缺失的或者是氨基酸残基；
e5，e6，e7，e9和e13各自独立地是氨基酸残基；
e11是T或I；和
e15，e16和e17各自独立地是缺失的或者是氨基酸残基；
f1，f2和f3是缺失的或者是氨基酸残基；
f5是W，Y或F；
f7是氨基酸残基；
f9是T或I；
f10是K，R或H；
f12是C，中性极性残基，或者碱性残基；
f13是C，中性极性残基，或者是缺失的；和
f14是任何氨基酸残基或者是缺失的；
其前提是，f1，f2和f3中的一个可以是C，并且f12，f13和f14中 的一个可以是C；
g1，g2和g3各自独立地是缺失的或者是氨基酸残基；
g5是中性极性残基；
g8是中性极性残基；
g10是酸性残基；
g12和g13各自独立地是氨基酸残基；和
g14是缺失的或者是氨基酸残基；
h1，h2和h3各自独立地是缺失的或者是氨基酸残基；
h6是疏水性残基；
h7是疏水性残基；
h10是酸性或极性疏水性残基；和
h12，h13和h14各自独立地是缺失的或者是氨基酸残基；
i1是缺失的或者是氨基酸残基；
i2是中性极性残基；
i3是氨基酸残基；
i5，i6，i7和i8各自独立地是氨基酸残基；
i9是酸性残基；
i10是氨基酸残基；
i12和i13各自独立地是氨基酸残基；和
i14是中性极性残基。
38.如权利要求37的组合物，其中：
a9是碱性残基；
b3是D，Q，或E；
b6是W或Y；
b11是K或R；和
b14是V或L；
c10是K或R；
c13是I，L，或V；
c17是A或L；
f5是W；
f7是L；
f7是K；和
f10是V。
39.如权利要求37的组合物，其中P1，P2，P3和P4中的一个或 多个各自独立地包括
             f1f2f3KWDf7Lf9KQf12f13f14
                 (SEQ ID NO：125)。
40.如权利要求39的组合物，具有下式
             P1-(L1)c-P2-(L2)d-V1。
41.如权利要求39的组合物，具有下式
             V1-(L1)c-P1-(L2)d-P2。
42.如权利要求39的组合物，具有选自SEQ ID NOS：122，123， 和124的氨基酸序列。
43.如权利要求40的组合物，其中L2大于5个氨基酸。
44.如权利要求43的组合物，其中L2选自 GSGSATGGSGSTASSGSGSATx1x2
(SEQ ID NO：193)和 GSGSATGGSGSTASSGSGSATx1x2GSGSATGGSGSTASSGSGSATx3x4
(SEQ ID NO：194)
其中，x1和x3各自独立地是碱性或疏水性残基，而x2和X4各 自独立地是疏水性残基。
45.如权利要求41的组合物，其中L2选自
          GSGSATGGSGSTASSGSGSATH
              (SEQ ID NO：59)，
          GSGSATGGSGSTASSGSGSATGM
              (SEQ ID NO：190)
          GSGSATGGSGSTASSGSGSATGS
              (SEQ ID NO：191)，和 GSGSATGGSGSTASSGSGSATHMGSGSATGGSGSTASSGSGSATH M
              (SEQ ID NO：192)。
46.如权利要求28的组合物，包括选自表2的序列(SEQ ID NOS： 29-39，60-70和126-188)。
47.如权利要求30的组合物，包括选自表4的序列(SEQ ID NOS： 44-55)。
48.如权利要求46的组合物，其中V1是Fc结构域。
49.如权利要求46的组合物，其中V1是IgG Fc结构域。
50.如权利要求46的组合物，其中V1是IgG1 Fc结构域。
51.一种编码权利要求34的组合物的DNA。
52.一种包括权利要求51的DNA的表达载体。
53.一种包括权利要求52的表达载体的宿主细胞。
54.如权利要求53的细胞，其中所述细胞是大肠杆菌细胞。
55.一种治疗B细胞介导的自身免疫病的方法，它包括施用权 利要求1的组合物。
56.一种治疗B细胞介导的自身免疫病的方法，它包括施用权 利要求13的组合物。
57.一种治疗狼疮的方法，它包括施用权利要求1的组合物。
58.一种治疗狼疮的方法，它包括施用权利要求13的组合物。
59.一种治疗B细胞介导的癌症的方法，它包括施用权利要求1 的组合物。
60.一种治疗B细胞介导的癌症的方法，它包括施用权利要求 13的组合物。
61.一种治疗B细胞淋巴瘤的方法，它包括施用权利要求1的 组合物。
62.一种治疗B细胞淋巴瘤的方法，它包括施用权利要求13的 组合物。
说明书全文

本发明涉及2001年5月11日提交的美国临时申请60/290,196， 该申请被引入本文作为参考。

                     发明背景

在对肿瘤坏死进行若干年的研究之后，最终在1984年克隆了肿 瘤坏死因子(TNFs)α和β。在随后的几年中，发现了TNF细胞因子 超家族，包括fas配体(FasL)、CD27配体(CD27L)、CD30配体 (CD30L)、CD40配体(CD40L)、TNF-相关的细胞程序死亡诱导配体 (TRAIL，又被称为AGP-1)，骨保护素(osteoprotegerin)结合蛋白 (OPG-BP或OPG配体)，4-1BB配体，LIGHT，APRIL，和TALL-1。 Smith等(1994)，Cell 76：959-962；Lacey等(1998)，Cell 93：165-176； Chichepotiche等(1997)，J.Biol.Chem.272：32401-32410；Mauri等 (1998)，Immunity 8：21-30；Hahne等(1998)，J.Exp.Med.188：1185- 90；Shu等(1999)，J.Leukocyte Biology 65：680-3。该家族是通过它的 结构，特别是C-末端而统一化的。另外，迄今为止，已知的大多数 成员是在免疫区室(compartment)中表达的，不过，某些成员也可以在 其他组织或器官中表达。Smith等(1994)，Cell 76：959-62。除了LT- α以外的所有配体都是II型跨膜蛋白，以在C-末端细胞外结构域中 的保守的150个氨基酸区域为特征。尽管局限于仅有20-25％的相同 性，所述保守的150个氨基酸结构域折叠成特有的β-折叠片夹层， 并且三聚体化。所述保守片段可以通过蛋白水解释放，从而产生可溶 性功能形式。Banner等(1993)，Cell 73：431-445。

该配体家族的很多成员都是在富含淋巴的组织中表达的，并且 在免疫系统发育和调节中发挥重要作用。Smith等(1994)。例如，TNF α主要是由巨噬细胞合成的，并且是炎性反应和免疫防御的重要介 体。Tracey & Cerami(1994)，Ann.Rev.Med.45：491-503。Fas-L主要 在激活的T细胞中表达，调节胸腺细胞的TCR介导的细胞程序死亡。 Nagata，S.& Suda，T.(1995)Immunology Today 16：39-43；Castrim 等(1996)，Immunity 5：617-27。CD40L也能通过激活的T细胞表达， 提供了B细胞存活、增殖和免疫球蛋白同种型转变的重要信号。 Noelle(1996)，Immunity4：415-9。

业已鉴定了大多数TNF配体家族成员的关联受体。所述受体在 它们的细胞外结构域内拥有特有的多个富含半胱氨酸的重复序列，并 且在细胞质区内不具有催化性基序。Smith等(1994)。所述受体信号 通过直接与死亡结构域蛋白(例如TRADD，FADD，和RIP)或TRAF 蛋白(例如TRAF2，TRAF3，TRAF5，和TRAF6)相互作用，启动 多样的和重叠的信号传导途径，例如，细胞程序死亡，NF-κB激活， 或JNK激活。Wallach等(1999)，Annual Review of Immunology 17： 331-67。所述信号传导事件导致细胞死亡、增殖、激活或分化。每一 个受体成员的表达方式是不同的。例如，TNFR1是在多种组织和细 胞中表达的，而OPGL的细胞表面受体主要局限于破骨细胞。Hsu等 (1999)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 96：3540-5。

最近，多个研究小组业已证实TNF家族配体具有相同的或大体 上相似的序列。所述配体拥有各种不同的名称：neutrokineα(WO 98/18921，公开日为1998年5月7日)，63954(WO98/27114，公开 日为1998年6月25日)，TL5(EP869 180，公开日为1998年10月7 日)，NTN-2(WO98/55620和WO98/55621，公开日为1998年12月 10日)，TNRL1-α(WO9911791，公开日为1999年3月11日)，kay 配体(WO99/12964，公开日为1999年3月18日)，和AGP-3(1999年 2月12日提交的美国临时申请60/119,906和1999年11月18日提交 的60/166,271)；和TALL-1(WO00/68378，公开日为2000年11月 16日)。以上每一份文献都被引入本文作为参考。在下文中，上面所 报导的配体被统称为TALL-1。

TALL-1是TNF配体超家族的一个成员，它在功能上与B细胞 存活和增殖相关。超量表达TALL-1的转基因小鼠，具有严重的B 细胞增殖过度和狼疮样自身免疫疾病。Khare等(2000)PNAS 97(7)： 3370-3375)。TACI和BCMA都起着TALL-1细胞表面受体的作用。 Gross等(2000)，Nature 404：995-999；Ware(2000)，J.Exp.Med. 192(11)：F35-F37；Ware(2000)，Nature 404：949-950；Xia等(2000)， J.Exp.Med.192(1)：137-143；Yu等(2000)，Nature Immunology 1(3)： 252-256；Marsters等(2000)，Current Biology 10：785-788；Hatzoglou 等(2000)J.of Immunology 165：1322-1330；Shu等(2000)PNAS 97(16)： 9156-9161；Thompson等(2000)J.Exp.Med.192(1)：129-135； Mukhopadhyay等(1999)J.Biol.Chem.274(23)：15978-81；Shu等(1999) J.Leukocyte Biol.65：680-683；Gruss等(1995)Blood 85(12)：3378- 3404；Smith等(1994)，Cell 76：959-962；美国专利5,969,102，于1999 年10月19日授权；WO00/67034，公开日为2000年11月9日； WO00/40716，公开日为2000年7月13日；WO99/35170，公开日 为1999年7月15日。以上两种受体都是在B细胞上表达的，并且 通过与TRAF蛋白相互作用传导信号。另外，TACI和BCMA还能结 合TNF配体家族的另一个成员APRIL。Yu等(2000)，Nature Immunology 1(3)：252-256。还证实了APRIL能诱导B细胞增殖。

迄今为止，尚未披露采用TALL-1的肽调节剂的重组或修饰蛋 白。重组和修饰蛋白是一类新兴的治疗剂。蛋白治疗剂的有用的修饰 包括与一种抗体的“Fc”结构域结合，以及与诸如聚乙二醇(PEG)和葡 聚糖的聚合物连接。所述修饰在题为“作为治疗剂的修饰肽”的公开 号为WO00/24782专利申请中有详细说明，该专利申请被以全文形 式引入本文参考。

一种开发治疗剂的非常不同的方法是肽文库筛选。蛋白配体与 它的受体的相互作用，通常是在较大的界面上进行的。不过，正如在 人类生长激素及其受体上所证实的，在所述界面上仅有少数的关键残 基提供了大部分的结合能量。Clackson等(1995)，Science 267：383-6。 所述蛋白配体总体上在正确拓扑学上仅仅发挥结合表位的作用，或发 挥与结合无关的功能。因此，仅为“肽”长度(2-40个氨基酸)的 分子能够结合在特定大型蛋白配体的受体蛋白上。所述肽可以模拟所 述大型蛋白配体的生物活性(“肽刺激剂”)或通过竞争结合，抑制 所述大型蛋白配体的生物活性(“肽拮抗剂”)。

噬菌体展示肽文库业已作为鉴定所述肽刺激剂和拮抗剂的有效 方法出现。例如，参见Scott等(1990)，Science 249：386；Devlin等 (1990)，Science 249：404；美国专利5,223,409，于1993年6月29日 授权；美国专利5,733,731，于1998年5月31日授权；美国专利 5,498,530，于1996年3月12日授权；美国专利5,432,018，于1995 年7月11日授权；美国专利5,338,665，于1994年8月16日授权； 美国专利5,922,545，于1999年7月13日授权；WO96/40987，于 1996年12月19日公开；和WO98/15833，公开日为1998年4月16 日(以上每一份文献都被以全文形式引入本文作为参考)。在所述文 库中，通过与丝状噬菌体的外被蛋白融合展示随机的肽序列。通常， 所展示的肽是针对固定的靶蛋白亲和洗脱的。所保留的噬菌体可以通 过连续循环的亲和纯化和再繁殖富集。可以对最佳结合肽进行测序， 以便确定在一个或多个结构上相关的肽家族内的关键残基。例如，参 见Cwirla等(1997)，Science 276：1696-9，其中，鉴定了两个不同的 家族。所述肽序列还可能暗示哪些残基可以通过丙氨酸扫描或通过在 DNA水平上的诱变被安全地取代。可以制备并且筛选诱变文库，以 便进一步优化所述最佳结合物的序列。Lowman(1997)，Ann.Rev. Biophys.Biomol.Struct.26：401-24。

还可利用蛋白-蛋白相互作用的结构分析揭示能模拟大型蛋白 配体的结合活性的肽。在所述分析中，晶体结构可以揭示所述大型蛋 白配体的关键残基的身份和相对取向，通过它可以设计一种肽。例 如，参见Takasaki等(1997)，Nature Biotech.15：1266-70。所述分析 方法还可用于研究受体蛋白和通过噬菌体展示筛选的肽之间的相互 作用，这种研究可以揭示所述肽的其他修饰，以便提高结合亲和力。

其他方法与肽研究中的噬菌体展示进行竞争。可以将一种肽文 库融合在lac抑制子的羧基末端，并且在大肠杆菌中表达。另一种基 于大肠杆菌的方法可以通过与肽聚糖-结合的脂蛋白(PAL)融合展示 在细胞外膜上。在以下说明中，上述和其他方法被统称为“大肠杆菌 展示”。在另一种方法中，在核糖体释放之前终止随机RNA翻译， 得到了仍然与相关的RNA结合的多肽文库。在以下说明中，上述及 相关的方法被统称为“核糖体展示”。其他方法采用与RNA连接的 肽；例如，PRO融合技术，Phylos，Inc.。例如，参见Roberts & Szostak (1997)，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，94：12297-303。在以下说明中， 该方法以及相关方法被统称为“RNA-肽筛选”。业已开发出了化学 衍生的肽文库，其中，将肽固定在诸如聚乙烯棒或溶剂可渗透的树脂 上的稳定的、非生物学材料上。另一种化学衍生的肽文库利用照相平 板印刷技术扫描固定在玻璃载玻片上的肽。在以下说明中，上述和相 关方法被统称为“化学-肽筛选”。化学-肽筛选的优点可能是，它可 以使用D-氨基酸或其他非天然类似物，以及非肽因子。生物学和化 学方法在以下文献中进行过综述：Wells & Lowman(1992)，Curr.Opin. Biotechnol.3：355-62。从理论上讲，人们可以通过噬菌体展示、RNA- 肽筛选和上面提到的其他方法发现任何蛋白的肽模拟物。

                     发明概述

本发明涉及能调节TALL-1活性的治疗剂。根据本发明，TALL-1 的调节剂可以包括一种氨基酸序列Dz2Lz4(SEQ ID NO：108)，其中， z2是氨基酸残基，而z4是苏氨酰或异亮氨酰。TALL-1的所述调节剂 包括具有下式的分子：

I(a)     a1a2a3CDa6La8a9a10Ca12a13a14

              (SEQ.ID.NO：100)

其中：

a1，a2，a3各自独立地是缺失的或者是氨基酸残基；

a6是氨基酸残基；

a9是碱性或疏水性残基；

a8是苏氨酰或异亮氨酰；

a12是中性极性残基；

a13和a14各自独立地是缺失的或者是氨基酸残基。

I(b)     b1b2b3Cb5b6Db8Lb10b11b12b13b14Cb16b17b18

                    (SEQ.ID.NO：104)

其中：

b1和b2各自独立地是缺失的或者是氨基酸残基；

b3是酸性或酰胺残基；

b5是氨基酸残基；

b6是芳族残基；

b8是氨基酸残基；

b10是T或I；

b11是碱性残基；

b12和b13各自独立地是氨基酸残基；

b14是中性极性残基；和

b16，b17和b18各自独立地是缺失的或是氨基酸残基。

I(c)     c1c2c3Cc5Dc7Lc9c10c11c12c13c14Cc16c17c18

                  (SEQ.ID.NO：105)

其中：

c1，c2和c3各自独立地是缺失的或者是氨基酸残基；

c5是氨基酸残基；

c7是氨基酸残基；

c9是T或I；

c10是碱性残基；

c11和c12各自独立地是氨基酸残基；

c13是中性极性残基；

c14是氨基酸残基；

c16是氨基酸残基；

c17是中性极性残基；和

c18是氨基酸残基或者是缺失的。

I(d)     d1d2d3Cd5d6d7WDd10Ld12d13d14Cd15d16d17

                 (SEQ.ID.NO：106)

其中：

d1，d2和d3各自独立地是缺失的或是氨基酸残基；

d5，d6和d7各自独立地是氨基酸残基；

d10是氨基酸残基；

d13是T或I；

d14是氨基酸残基；而

d16，d17和d18各自独立地是缺失的或是氨基酸残基。

I(e)     e1e2e3Ce5e6e7De9Le11Ke13Ce15e16e17e18

                 (SEQ.ID.NO：107)

其中：

e1，e2和e3各自独立地是缺失的或者是氨基酸残基；

e5，e6，e7，e9和e13各自独立地是氨基酸残基；

e11是T或I；和

e15，e16和e17各自独立地是缺失的或者是氨基酸残基。

I(f)     f1f2f3Kf5Df7Lf9f10Qf12f13f14

               (SEQ.ID NO：109)

其中：

f1，f2和f3是缺失的或者是氨基酸残基(当f12，f13，f14之一是C 时，f1，f2和f3中的一个优选是C)；

f5是W，Y或F(优选W)；

f7是氨基酸残基(优选L)；

f9是T或I(优选T)；

f10是K，R或H(优选K)；

f12是C，中性极性残基，或者碱性残基(优选W，C或R)；

f13是C，中性极性残基或者是缺失的(优选V)；和

f14是任何氨基酸残基或者是缺失的；

其前提是，f1，f2和f3中只有一个可以是C，并且f12，f13和f14 中只有一个可以是C。

上面的式I(a)至I(f)的化合物整合了Dz2Lz4以及下面的SEQ ID NO：63。正如在下面的实施例1中所披露的，I(f)的序列是作为共 有序列衍生的。在式I(f)的化合物中，优选下式

I(f)     f1f2f3KWDf7Lf9KQf12f13f14

             (SEQ.ID NO：125)

属于式I(f)的化合物包括SEQ ID NOS：32，58，60，62，63， 66，67，69，70，114，115，122，123，124，147-150，152-177， 179，180，187。

同样符合本发明的是具有以下共有基序的化合物：

                 PFPWE

           (SEQ ID NO：110)

它也能结合TALL-1。

另外，符合本发明的化合物是具有下式的化合物：

I(g)     g1g2g3Cg5PFg8Wg10Cg11g12g13

              (SEQ.ID.NO.101)

其中：

g1，g2和g3各自独立地是缺失的或者是氨基酸残基；

g5是中性极性残基；

g8是中性极性残基；

g10是酸性残基；

g12和g13各自独立地是氨基酸残基；和

g14是缺失的或者是氨基酸残基。

I(h)     h1h2h3CWh6h7WGh10Ch12h13h14

             (SEQ.ID.NO：102)

其中：

h1，h2和h3各自独立地是缺失的或者是氨基酸残基；

h6是疏水性残基；

h7是疏水性残基；

h10是酸性或极性疏水性残基；和

h12，h13和h14各自独立地是缺失的或者是氨基酸残基。

I(i)     i1i2i3Ci5i6i7i8i9i10Ci12i13i14

             (SEQ.ID.NO：103)

其中：

i1是缺失的或者是氨基酸残基；

i2是中性极性残基；

i3是氨基酸残基；

i5，i6，i7和i8各自独立地是氨基酸残基；

i9是酸性残基；

i10是氨基酸残基；

i12和i13各自独立地是氨基酸残基；和

i14是中性极性残基。

由式I(g)-I(i)所定义的化合物也能结合TALL-1。

另外，根据本发明，TALL-1的调节剂包括：

a)TALL-1调节结构域(例如，式I(a)-I(i)的氨基酸序列)，优 选氨基酸序列Dz2Lz4，或者通过噬菌体展示、RNA-肽筛选或上面提 到的其他技术由它所衍生的序列；和

b)一种媒介物(vehicle)，如聚合物(例如，PEG或葡聚糖)或 Fc结构域，它是优选的；

其中，所述媒介物是与TALL-1调节结构域共价连接的。正如 下文所披露的，所述媒介物和TALL-1调节结构域可以通过TALL-1 调节结构域的N-或C-末端连接。优选的是媒介物是Fc结构域，而优 选的Fc结构域是IgG Fc结构域。在本文中，所述Fc-连接的肽被称 为“肽体(peptibodies)”。优选的TALL-1调节结构域包括在下面的 表1和2中所披露的氨基酸序列。其他TALL-1调节结构域，可以通 过本文所提到的噬菌体展示，RNA-肽筛选和其他技术制备。

另外，本发明涉及一种用于生产TALL-1调节剂的方法，该方 法包括：

a.筛选至少一种能结合TALL-1的肽；和

b.让所述肽与一种媒介物共价连接。

优选的媒介物是Fc结构域。步骤(a)优选是通过选自下面的 表2中的肽序列或选自本文所提到的噬菌体展示、RNA-肽筛选或其 他技术完成的。

本发明的化合物可以通过标准合成方法、重组DNA技术或制备 肽和融合蛋白的任何其他方法制备。包括非肽部分的本发明的化合 物，可以通过标准有机化学反应合成，另外，在需要时还可以采用标 准肽化学反应。

与本发明的化合物相关的主要用途是作为治疗剂或预防剂。所 述与媒介物连接的肽，可能具有与所述肽所模拟的天然配体相当-或 者甚至更高-的活性。

通过将本发明的化合物与合适的药用载体材料配制在一起，并 且给需要它的诸如人(或其他哺乳动物)的患者施用有效量，本发明 的化合物可用于治疗和预防目的。本发明还包括其他相关的方面。

通过阅读附图和本发明的详细说明，可以了解本发明的很多其 他特征和优点。

               附图的简要说明

图1表示典型Fc双体，它可能源于IgG1抗体。附图中的“Fc” 表示本发明“Fc结构域”含义内的任何Fc变体。“X1”和“X2”表 示如下文所定义的肽或接头肽组合。具体的双体如下：

A，D：单一二硫键结合的双体。IgG1抗体在该抗体的铰链区通 常具有两个二硫键。图1A和1D中的Fc结构域可以通过在两个二硫 键位点之间截断或通过用非活性残基(例如，丙氨酰)取代半胱氨酰 残基。在图1A中，Fc结构域连接在所述肽的氨基末端；在图1D中， 连接在羧基末端。

B，E：双二硫键双体。该Fc结构域可以通过截短亲代抗体以便 保留Fc结构域链上的两个半胱氨酰残基而形成或者通过用包括编码 所述Fc结构域的序列的构建体表达。在图1B中，Fc结构域连接在 所述肽的氨基末端；在图1E中，连接在羧基末端。

C，F：非共价双体。该Fc结构域可以通过截短或取代消除半胱 氨酰残基而形成。人们可能需要消除半胱氨酰残基，以便避免通过该 半胱氨酰残基与存在于其他宿主细胞中的蛋白的半胱氨酰残基起反 应所形成的杂质。所述Fc结构域的非共价结合由于将所述双体保持 在一起。其他双体可以通过使用源于不同类型抗体(例如，IgG2， IgM)的Fc结构域形成。

图2表示本发明优选化合物的结构，它以药理学活性肽的串联 重复为特征。图2A表示单链分子，并且还可以表示该分子的第一构 建体。图2B表示一种双体，其中，所述接头肽部分仅存在于该双体 的一条链上。图2C表示在两条链上都具有肽部分的双体。图2C所 示的双体是在某些宿主细胞中表达编码图3A所示的单链的DNA构 建体时能自主形成。在其他宿主细胞中，将所述细胞放置在有利于双 体形成的条件下，或者所述双体可以在体外形成。

图3表示可用于本发明中的人IgG1 Fc的典型核酸和氨基酸序列 (分别为SEQ ID NOS：1和2)。

图4A-4F表示编码肽和接头的NdeI-SalI片段的核苷酸和氨基酸 序列(SEQ ID NOS：3-27)。

图5A-5M表示pAMG21-RANK-Fc载体的核苷酸序列(SEQ ID NO：28)，它被用于构建本发明的Fc-连接的分子。以上附图确定了 有关核酸的多种特征，包括：

·启动子区PcopB，PrepA，RNAI，APHII，luxPR，和luxPL；

·编码APHII，luxR的mRNA；

·copB蛋白，copT，repAI，repA4，APHII，luxR，RANK，和 Fc蛋白的编码序列和氨基酸序列；

·蛋白copB，CRP的结合位点；

·发卡T1，T2，T7，和toop；

·lux蛋白的操纵子位点；

·Pfl1108I，BglII，ScaI，BmnI，DrdII，DraIII，BstBI，AceIII， AflII，PflMI，BglI，SfiI，BstEII，BspLullI，NspV，BplI，EagI，BcgI， NsiI，BsaI，Psp1406I，AatII，BsmI，NruI，NdeI，ApaLI，Acc65I， KpnI，SalI，AccI，BspEI，AhdI，BspHI，EconI，BsrGI，BmaI，SmaI， SexAI，BamHI和BlpI的酶限制位点。

图6A和6B表示插入pCFM1656的单一的AatII(pCFM1656上 4364号位置)和SacII(pCFM1656的4585号位置)限制位点之间的 DNA序列(SEQ ID NO：97)，以便形成表达质粒pAMG21(ATCC保藏 号98113)。

图7表示能抑制TALL-1介导的B细胞增殖的TALL-1肽体 (SEQ ID NO：70)。在存在10纳克/毫升TALL-1+2微克/毫升抗IgM 抗体的条件下，将来自B6小鼠的纯化B细胞(105)与标明数量的 TALL-1共有肽体一起在96孔平板上培养，重复3次。培养18小时 之后，通过放射性[3H]胸苷吸收测定增殖。所示出的数据表示平均值 ±SD三个重复的孔。

图8表示TALL-1 N-末端串联双体肽体(参见表5B中的SEQ ID NO：123，124)优选被用于抑制TALL介导的B细胞增殖。在存在10 纳克/毫升TALL-1+2微克/毫升抗IgM抗体的条件下，将来自B6 小鼠的纯化B细胞(105)与标明数量的TALL-1 12-3肽体和TALL共 有肽体(表5B中的SEQ ID NOS：115和122)或相关的双体肽体(SEQ ID NOS：123，124)一起在96孔平板上培养，重复3次。培养18小 时之后，通过放射性[3H]胸苷吸收测定增殖。所示出的数据表示平均 值±SD三个重复的孔。

图9表示以高亲和力与AGP3结合的AGP3肽体。使用双曲线 单位点均匀结合模型由非线性回归的竞争曲线获得了解离平衡常数 (KD)(KinExTM软件)。对于与人AGP3(SEQ ID NO：123)结合的AGP3 肽体来说，KD大约为4pM。

图10A和10B。在Biacore竞争测定中，AGP3肽体能抑制人类 和鼠类AGP3。将可溶性人TACI蛋白固定在B1芯片上。将1nM重 组人AGP3蛋白(上图)或5nM重组鼠类AGP3蛋白(下图)与标 明数量的AGP3肽体一起培养，然后加注到受体表面上。示出了相对 的人AGP3和鼠AGP3结合反应(SEQ ID NO：123)。

图11A和11B。在Biacore竞争测定中，AGP3肽体抑制了AGP3 与所有三种受体TACI，BCMA和BAFFR的结合。将重组可溶性受 体TACI，BCMA和BAFFR蛋白固定在CM5芯片上。将1nM重组 人AGP3(上图)与标明数量的AGP3肽体一起培养，然后加注到每一 种受体表面上。测定AGP3的相对结合。类似地，将1nM重组APRIL 蛋白与标明数量的AGP3肽体一起培养，然后加注到每一种受体表面 上。AGP3肽不能抑制APRIL与所有三种受体的结合(SEQ ID NO： 123)。

图12A和12B。AGP3能抑制通过人AGP3刺激诱导的小鼠血清 免疫球蛋白含量的提高。每天1次，连续7天给Balb/c小鼠腹膜内 注射1mg/Kg人AGP3蛋白，同时注射标明剂量的盐水、人Fc或AGP3 肽体，并且在第8天放血。通过ELISA测定血清总IgM和IgA含量 (SEQ ID NO：123)。

图13.AGP3肽体治疗减轻了小鼠CIA模型的关节炎严重程度。 通过在尾巴根处经皮注射用完全弗氏佐剂乳化的牛II型胶原(bCII)， 对8-12周大的DBA/1雄性小鼠进行免疫，并且在首次免疫之后三 周，通过用不完全弗氏佐剂乳化的bCII进行强化免疫。从强化免疫 当天开始用标明剂量的AGP3肽体治疗4周时间。正如以前所披露的 (Khare等，J.Immunol..155：3653-9，1995)，采用0-3的评分等级， 分别对所有4只爪子进行关节炎严重性评分(SEQ ID NO：123)。

图14.AGP3肽体治疗抑制了抗胶原抗体在小鼠CIA模型中的产 生。如上文所述，在最后一次处理之后1周(35天)采集血清样品。 通过ELISA分析，测定血清抗胶原II抗体含量(SEQ ID NO：123)。

图15A和15B。AGP3肽体治疗延缓了蛋白尿的发作，并且改善 了NZB/NZW狼疮小鼠的存活。用PBS或标明剂量的AGP3肽体(SEQ ID NO：123)或人Fc蛋白对易感狼疮的5个月大小的NZB×NZBW F1 小鼠进行腹膜内注射治疗，每周3次，共8周时间。在整个实验期间， 用Albustix试剂条(Bayer AG)每月评估尿液中的蛋白。

图16A和16B表示优选的TALL-1结合肽体的核酸和氨基酸序 列(SEQ ID NOS：189和123)。

                     发明详述

术语的定义

除非在特定情况中另有限定，在本说明书中所使用的术语定义 如下：

一般定义

术语“包括(comprising)”表示化合物在特定序列的N-或C-末端 中的一个或两个上可以包括其他氨基酸。当然，所述其他氨基酸不应 当明显干扰该化合物的活性。

另外，本发明还包括本发明化合物的可以药用的盐。术语“生 理学可接受的盐”表示已知的或者后来发现的在药理学上可接受的任 何盐。某些具体例子是：乙酸盐；三氟乙酸盐；氢卤酸盐，如氢氯酸 盐和氢溴酸盐；硫酸盐；柠檬酸盐；酒石酸盐；乙醇酸盐；和草酸盐。

氨基酸

术语“酸性残基”表示具有包括酸性基团的侧链的D-或L-形式 的具有包括酸性基团的侧链的氨基酸残基。典型的酸性残基包括D 和E。

术语“酰胺残基”表示具有包括酸性基团的酰胺衍生物的侧链 的D-或L-形式的氨基酸。典型的残基包括N和Q。

术语“芳族残基”表示具有芳族基团的侧链的D-或L-形式的氨 基酸残基。典型的芳族残基包括F，Y，和W。

术语“碱性残基”表示具有碱性基团的侧链的D-或L-形式的氨 基酸残基。典型的碱性残基包括H，K，和R。

术语“亲水性残基”表示包括极性基团侧链的D-或L-形式的氨 基酸残基。典型的亲水性残基包括C，S，T，N，和Q。

术语“非功能残基”表示具有缺少酸性、碱性或芳族基团的侧 链的D-或L-形式的氨基酸残基。典型的非功能性氨基酸残基包括 M，G，A，V，I，L和正亮氨酸(Nle)。

术语“中性极性残基”表示具有缺少碱性、酸性或极性基团的 侧链的D-或L-形式的氨基酸残基。典型的中性极性氨基酸残基包括 A，V，L，I，P，W，M，和F。

术语“极性疏水性残基”表示具有包括极性基团的侧链的D-或 L-形式的氨基酸残基。典型的极性疏水性氨基酸残基包括T，G，S， Y，C，Q，和N。

术语“疏水性残基”表示具有缺少碱性或酸性基团的侧链的D- 或L-形式的氨基酸残基。典型的疏水性氨基酸残基包括A，V，L，I， P，W，M，F，T，G，S，Y，C，Q，和N。

肽

术语“肽”表示具有1-40个氨基酸的分子，优选具有5-20个氨 基酸的分子。典型的肽可以包括天然存在分子的TALL-1调节结构域 或随机化的序列。

术语“随机化的”在用于表示肽序列时，是指完全随机的序列 (例如，通过噬菌体展示方法或RNA-肽筛选方法选择的)和天然存 在的分子上的一个或多个残基，被天然存在的分子上的某个位置上不 存在的氨基酸残基所取代的序列。用于鉴定肽序列的典型方法，包括 噬菌体展示，大肠杆菌展示，核糖体展示，RNA-肽筛选，和化学筛 选等。

术语“TALL-1调节结构域”表示能结合TALL-1的任何氨基酸 序列，并且包括天然存在的序列或随机化的序列。典型的TALL-1调 节结构域可以通过噬菌体展示或本文提到过的其他方法鉴定或衍 生。

术语“TALL-1拮抗剂”表示能与TALL-1结合，并且增强或减 弱一种或多种特定参数的分子，所述增强或减弱与完整长度天然 TALL-1对所述参数的影响相反。例如，所述活性可以通过披露于以 下文献中的测定方法测定：题为“TNF-相关蛋白”的公开日为2000 年8月17日的WO00/47740的专利申请的材料和方法部分的标题为 “AGP-3的生物学活性”的小部分。

媒介物和肽体

术语“媒介物(vehicle)”表示能抑制治疗性蛋白降解和/或延长 半衰期，减弱毒性，减弱免疫原性或提高其生物学活性的分子。典型 的媒介物包括Fc结构域(它是优选的)以及线性聚合物(例如聚乙 二醇(PEG)，聚赖氨酸，葡聚糖等)；支链聚合物(例如，参见于1981 年9月15日授予Denkenwalter等的美国专利4289872；于1993年7 月20日授予Tam的5229490；于1993年10月28日公开的Frechet 等的WO93/21259)；脂类；胆甾醇类(如类固醇)；糖类或寡聚糖 (例如葡聚糖)；能与挽救受体结合的任何天然或合成蛋白、多肽或 肽；白蛋白，包括人血清白蛋白(HSA)，亮氨酸拉链结构域，和其 他诸如此类的蛋白和蛋白片段。下面将对媒介物作进一步说明。

术语“天然Fc”表示包括通过消化完整抗体而产生的序列的单 体或多聚体形式的分子或序列。天然Fc的原始免疫球蛋白来源优选 人类来源，并且可以是任何免疫球蛋白，不过优选IgG1和IgG2。天 然Fc’s由单聚体多肽组成，所述单聚体多肽可以通过共价(二硫键) 和非共价结合，连接成双体或多聚体形式。天然Fc分子的单体亚基 之间的分子间二硫键的数量，根据类型(例如IgG，IgA，IgE)或亚 型(例如IgG1，IgG2，IgG3，IgA1，IgGA2)在1-4之间变化。天然 Fc的一种例子是通过木瓜蛋白酶消化IgG所产生的二硫键连接的双 体(参见Ellison等(1982)，Nucleic Acids Res.10：4071-9)。本文 所使用的术语“天然Fc”是对单体、双体和多聚体形式的统称。

术语“Fc变体”表示由天然Fc修饰而来的分子或序列，不过， 它仍然包括对挽救受体的结合位点FcRn。国际申请WO97/34631(公 开日为1997年9月25日)和WO96/32478披露了典型的Fc变体，以 及与所述挽救受体的相互作用，以上申请被以全文形式引入本文作为 参考。因此，术语“Fc变体”包括来自非人天然Fc的人源化分子或 序列。另外，天然Fc包括可以除去的位点，因为它们提供了本发明 融合分子所不需要的结构特征或生物学活性。因此，术语“Fc变体” 包括缺少一个或多个天然Fc位点或残基的分子或序列，所述位点或 残基影响或与(1)二硫键形成，(2)与选择的宿主细胞的不兼容性， (3)在选择的宿主细胞中表达时N-末端的不一致性，(4)糖基化， (5)与补体的相互作用，(6)与Fc受体而不是挽救受体结合，或 (7)抗体决定型细胞细胞毒性(ADCC)相关。下面将对Fc变体作更 详细地说明。

术语“Fc结构域”包括如上文所定义的天然Fc和Fc变体分子 和序列。对于Fc变体和天然Fc’s来说，术语“Fc结构域”包括单体 或多聚体形式，无论是通过消化完整抗体而形成的还是通过其他方式 形成的。

用于表示Fc结构域或分子的术语“多聚体(multimer)”包括表示 具有两个或两个以上共价、非共价或同时通过共价和非共价相互作用 结合的多肽链的分子的Fc结构域。IgG分子典型地形成双体；IgM， 五聚体；IgD，双体；和IgA，单体，双体，三体，或四聚体。多聚 体可以通过采用Fc的天然Ig来源的序列和所产生的活性或通过衍生 (如下文所定义的)所述天然Fc而形成。

用于Fc结构域或分子上的术语“双体(dimer)”包括表示具有两 个共价或非共价结合的多肽链的分子的Fc结构域。因此，在图1中 示出了本发明范围内的典型的双体。

术语“衍生化”和“衍生物”或“衍生化的”包括有关过程和 所得到的相应的化合物，其中(1)所述化合物具有一个环状部分， 例如，在所述化合物内半胱氨酰残基之间的交联；(2)所述化合物 是交联的或具有交联位点；例如，所述化合物具有一个半胱氨酸残 基，因此在培养中或在体内形成交联的双体；(3)一个或多个肽键 被非肽键所取代；(4)N-末端被-NRR1，NRC(O)R1，-NRC(O)OR1， -NRS(O)2R1，-NHC(O)NHR琥珀亚胺基或取代过的或未取代过的苄 氧基羰基-NH-所取代，其中R和R1和环状取代基如下文所定义；(5) C-末端被-C(O)R2或-NR3R4所取代，其中，R2，R3和R4如下文所定 义；和(6)其中的单个氨基酸组份通过用能够与特定侧链或末端残 基起反应的试剂处理修饰过的化合物。在下文中将对衍生物作进一步 说明。

术语“肽体”表示包括Fc结构域和至少一种肽的分子。所述肽 体可以是多聚体或它的双体或片段，并且它们可以是衍生化的。在本 发明中，当V1是Fc结构域时，下面的式II-VI的分子是肽体。

化合物的结构

一般说明。本发明人鉴定了能够与TALL-1结合并且调节其生 物学活性的序列。可以通过上面所提到的方法对所述序列进行修饰， 通过所述修饰可以改变一个或多个氨基酸，同时保持或者甚至提高所 述肽的结合亲和力。

在根据本发明制备的物质的组合物中，可以通过肽的N-末端或 C-末端将所述肽与媒介物连接。所述任何肽都可以串联连接(即顺序 连接)，有或没有接头。因此，本发明的媒介物-肽分子可以通过下 式表示：

II

                (X1)a-V1-(X2)b

其中：V1是媒介物(优选是Fc结构域)；

X1和X2各自独立地选自-(L1)c-P1，-(L1)c-P1-(L2)d-P2， -(L1)c-P1-(L2)d-P2-(L3)e-P3，和-(L1)c-P1-(L2)d-P2-(L3)e-P3-(L4)f-P4；

p1，p2，p3和P4各自独立地是TALL-1调节结构域的序列，如式 I(a)-I(i)的序列；

L1，L2，L3和L4各自独立地是接头；和

a，b，c，d，e和f各自独立地是0或1，其前提是，a和b中 的至少一个是1。

因此，化合物II包括下式的优选化合物

III

                 X1-V1

和它的多聚体，其中，V1是Fc结构域，并且连接在A1的C- 末端；

IV

                 V1-X2

以及它的多聚体，其中，V1是Fc结构域，并且与A2的N-末端 连接；

V

                    V1-(L1)c-P1

和它的多聚体，其中，V1是Fc结构域，并且与-(L1)c-P1的N- 末端连接；和

VI

                    V1-(L1)c-P1-(L2)d-P2

和它的多聚体，其中，V1是Fc结构域，并且与-L1-P1-L2-P2的 N-末端连接。

肽。本发明的肽可以用作TALL-1调节肽或用作式II-VI分子中 的TALL-1调节结构域。本发明的分子包括可以通过本领域已知方法 制备的肽序列。

优选的肽序列是具有下文所述取代基的上面的式I(a)的序列。

表1——优选的肽取代基 式I(a) a8是T； a9是碱性残基(最优选K)； a12是中性极性残基(最优选F) 式I(b) b3是D、Q或E； b6是W或Y； b10是T； b11是K或R； b14是V或L 式I(c) c9是T； c10是K或R； c13是I、L或V； c17是A或L 式I(d) d13是T 式I(e) e11是T 式I(f) f6是T； f7是K； f10是V 式I(g) g5是W； g8是P； g10是E； g13是碱性残基 式I(h) h1是G； h6是A； h7是中性极性残基； h10是酸性残基 式I(i) i2是W； i14是W

优选的肽序列如下面的表2所示

表2——优选的TALL-1调节结构域           序列   SEQ   ID NO： PGTCFPFPWECTHA   29 WGACWPFPWECFKE   30 VPFCDLLTKHCFEA   31 GSRCKYKWDVLTKQCFHH   32 LPGCKWDLLIKQWVCDPL   33 SADCYFDILTKSDVCTSS   34 SDDCMYDQLTRMFICSNL   35 DLNCKYDELTYKEWCQFN   36 FHDCKYDLLTRQMVCHGL   37 RNHCFWDHLLKQDICPSP   38 ANQCWWDSLTKKNVCEFF   39 YKGRQMWDILTRSWVVSL   126 QDVGLWWDILTRAWMPNI   127 QNAQRVWDLLIRTWVYPQ   128 GWNEAWWDELTKIWVLEQ   129 RITCDTWDSLIKKCVPQS   130 GAIMQFWDSLTKTWLRQS   131 WLHSGWWDPLTKHWLQKV   132 SEWFFWFDPLTRAQLKFR   133 GVWFWWFDPLTKQWTQAG   134 MQCKGYYDILTKWCVTNG   135 LWSKEVWDILTKSWVSQA   136 KAAGWWFDWLTKVWVPAP   137 AYQTWFWDSLTRLWLSTT   138 SGQHFWWDLLTRSWTPST   139 LGVGQKWDPLTKQWVSRG   140 VGKMCQWDPLIKRTVCVG   141 CRQGAKFDLLTKQCLLGR   142 GQAIRHWDVLTKQWVDSQ   143 RGPCGSWDLLTKHCLDSQ   144 WQWKQQWDLLTKQMVWVG   145 PITICRKDLLTKQVVCLD   146 KTCNGKWDLLTKQCLQQA   147 KCLKGKWDLLTKQCVTEV   148 RCWNGKWDLLTKQCIHPW   149 NRDMRKWDPLIKQWIVRP   150 QAAAATWDLLTKQWLVPP   151 PEGGPKWDPLTKQFLPPV   152 QTPQKKWDLLTKQWFTRN   153 IGSPCKWDLLTKQMICQT   154 CTAAGKWDLLTKQCIQEK   155 VSQCMKWDLLTKQCLOGW   156 VWGTWKWDLLTKQYLPPQ   157 GWWEMKWDLLTKQWYRPQ   158 TAQVSKWDLLTKQWLPLA   159 QLWGTKWDLLTKQYIQIM   160 WATSQKWDLLTKQWVQNM   161 QRQCAKWDLLTKQCVLFY   162  KTTDCKWDLLTKQRICQV   163  LLCQGKWDLLTKQCLKLR   164  LMWFWKWDLLTKQLVPTF   165  QTWAWKWDLLTKQWIGPM   166  NKELLKWDLLTKQCRGRS   167  GQKDLKWDLLTKQYVRQS   168  PKPCQKWDLLTKQCLGSV   169  GQIGWKWDLLTKQWIQTR   170  VWLDWKWDLLTKQWIHPQ   171  QEWEYKWDLLTKQWGWLR   172  HWDSWKWDLLTKQWVVQA   173  TRPLQKWDLLTKQWLRVG   174  SDQWQKWDLLTKQWFWDV   175  QQTFMKWDLLTKQWIRRH   176  QGECRKWDLLTKQCFPGQ   177  GQMGWRWDPLIKMCLGPS   178  QLDGCKWDLLTKQKVCIP   179  HGYWQKWDLLTKQWVSSE   180  HQGQCGWDLLTRIYLPCH   181  LHKACKWDLLTKQCWPMQ   182  GPPGSVWDLLTKIWIQTG   183  ITQDWRFDTLTRLWLPLR   184  QGGFAAWDVLTKMWITVP   185  GHGTPWWDALTRIWILGV   186  VWPWQKWDLLTKQFVFQD   187  WQWSWKWDLLTRQYISSS   188  NQTLWKWDLLTKQFITYM   60  PVYQGWWDTLTKLYIWDG   61  WLDGGWRDPLIKRSVQLG   62  GHQQFKWDLLTKQWVQSN   63  QRVGQFWDVLTKMFITGS   64  QAQGWSYDALIKTWIRWP   65  GWMHWKWDPLTKQALPWM   66  GHPTYKWDLLTKQWILQM   67  WNNWSLWDPLTKLWLQQN   68  WQWGWKWDLLTKQWVQQQ   69  GQMGWRWDPLTKMWLGTS   70

应当指出的是，TALL-1的已知受体与优选的肽具有某些序列同 源性：

12-3                          LPGCKWDLLIKQWVCDPL

BAFFR      MRRGPRSLRGRDAPVPTPCVPTECYDLLVRKCVDCRLL

TACI    TICNHQSQRTCAAFCRSLSCRKEQGKFYDHLLRDCISCASI

BCMA    FVSPSQEIRGRFRRMLQMAGQCSQNEYFDSLLHACIPCQLRC

(分别为序列SEQ ID NOS：33，195，196和197)。

任何含有半胱氨酸残基的肽都可以与另一种含有Cys的肽交 联，它们中的一个或两个可以与媒介物连接。任何具有一个以上Cys 残基的肽也都可以形成肽内二硫键。上述任何肽都可以按下文所述方 法衍生化。

其他有用的肽序列可以通过对表2中的氨基酸序列进行保守性 和/或非保守性修饰而形成。

保守性修饰能产生具有类似于对它进行所述修饰的肽的功能和 化学特征的肽。相反，通过在氨基酸序列上进行选择性取代可以获得 对所述肽的功能和/或化学特征的实质性修饰，所述修饰在以下方面 的作用显著不同：维持(a)取代部位的分子主链的结构，例如，作 为折叠或螺旋构象，(b)所述分子对于靶位点的电荷或疏水性；或 (c)所述分子的大小。

例如，“保守性氨基酸取代”可能包括非天然残基对天然氨基 酸残基的取代，以便对该位点上的氨基酸残基的极性或电荷少有或没 有影响。另外，正如以前说明“丙氨酸扫描诱变时”所披露的，所述 多肽上的任何天然残基都可以用丙氨酸取代(例如，参见MacLennan 等，1998，Acta Physiol.Scand.Suppl.643：55-67；Sasaki等，1998， Adv.Biophys.35：1-24，以上文献讨论了丙氨酸扫描诱变)。

理想的氨基酸取代(无论是保守性或非保守性取代)可以由本 领域技术人员在需要进行所述取代时确定。例如，可以用氨基酸取代 鉴定所述肽序列的重要残基，或用于提高或减弱本文所披露的肽或媒 介物-肽分子(参见上式)的亲和力。典型的氨基酸取代如表3所示。

表3-氨基酸取代 原残基 例示取代 优选取代 Ala(A) Val，Leu，Ile  Val Arg(R) Lys，Gln，Asn  Lys Asn(N) Gln  Gln Asp(D) Glu  Glu Cys(C) Ser，Ala  Ser Gln(Q) Asn  Asn Glu(E) Asp  Asp Gly(G) Pro，Ala  Ala  His(H) Asn，Gln，Lys，Arg Arg  Ile(I) Leu，Val，Met， Ala，Phe，正亮氨 酸 Leu  Leu(L) 正亮氨酸，Ile， Val，Met，Ala，Phe Ile  Lys(K) Arg，1，4-二氨基丁 酸，Gln，Asn Arg  Met(M) Leu，Phe，Ile Leu  Phe(F) Leu，Val，Ile，Ala， Tyr Leu  Pro(P) Ala Gly  Ser(S) Thr，Ala，Cys Thr  Thr(T) Ser Ser  Trp(W) Tyr，Phe Tyr  Tyr(Y) Trp，Phe，Thr，Ser Phe  Val(V) Ile，Met，Leu，Phe， Ala，正亮氨酸 Leu

在某些实施方案中，保守性氨基酸取代还包括非天然存在的氨 基酸残基，这些残基是通过化学肽合成整合的，而不是通过在生物学 系统中合成整合的。

正如在上面的“术语的定义”部分所指出的，天然存在的残基 可以根据可用于序列修饰的共同的侧链特性进行分类。例如，非保守 性取代可能涉及一种类型的成员对另一种类型的成员的取代。可以将 所述取代残基导入所述肽的与非人直向同源基因同源的区域，或导入 所述分子的非同源区。另外，人们还可以用P或G进行修饰，以便 影响侧链的方向。

在进行所述修饰时，可以考虑氨基酸的亲水性指数。根据其疏 水性和电荷特征，为每一种氨基酸确定一个亲水指数，所述亲水指数 为：异亮氨酸(+4.5)；缬氨酸(+4.2)；亮氨酸(+3.8)；苯丙氨酸(+2.8)； 半胱氨酸/胱氨酸(+2.5)；甲硫氨酸(+1.9)；丙氨酸(+1.8)；甘氨酸(-0.4)； 苏氨酸(-0.7)；丝氨酸(-0.8)；色氨酸(-0.9)；酪氨酸(-1.3)；脯氨酸(-1.6)； 组氨酸(-3.2)；谷氨酸(-3.5)；谷氨酰胺(-3.5)；天冬氨酸(-3.5)；天 冬酰胺(-3.5)；赖氨酸(-3.9)；和精氨酸(-4.5)。

亲水性氨基酸指数在赋予蛋白的相互作用生物学功能方面的重 要性为本领域所公知。Kyte等，J.Mol.Biol.，157：105-131(1982)。 已知，某些氨基酸可以取代具有类似亲水指数或得分的其他氨基酸， 并且仍然保留类似的生物学活性。在进行基于亲水性指数的改变时， 优选取代其亲水指数在±2以内的氨基酸，特别优选在±1范围内的 氨基酸，更优选±0.5范围内的氨基酸。

本领域还可以理解的是，类似氨基酸的取代还可以根据亲水性 有效进行。一种蛋白的最大局部平均亲水性，是由其相邻氨基酸的亲 水性决定的，这种亲水性与它的免疫原性和抗原性相关，即与该蛋白 的生物学特性相关。

业已为氨基酸确定了以下亲水性值：精氨酸(+3.0)；赖氨酸 (+3.0)；天冬氨酸(+3.0±1)；谷氨酸(+3.0±1)；丝氨酸(+0.3)；天冬 酰胺(+0.2)；谷氨酰胺(+0.2)；甘氨酸(0)；苏氨酸(-0.4)；脯氨酸(-0.5 ±1)；丙氨酸(-0.5)；组氨酸(-0.5)；半胱氨酸(-1.0)；甲硫氨酸(-1.3)； 缬氨酸(-1.5)；亮氨酸(-1.8)；异亮氨酸(-1.8)；酪氨酸(-2.3)；苯丙氨 酸(-2.5)；色氨酸(-3.4)。在基于类似的亲水性值进行取代时，优选取 代其疏水性值在±2以内的氨基酸，特别优选在±1范围内的氨基 酸，更优选±0.5范围内的氨基酸。人们还可以根据亲水性从一级氨 基酸序列上确定表位。所述区域又被称作“表位核心区”。

本领域技术人员可以用众所周知的技术确定在上述序列中所提 供的多肽的合适的变体。为了确定所述分子的可以改变而又不破坏活 性的合适部位，本领域技术人员可以针对被认为是对活性不重要的区 进行。例如，当来自相同物种或来自其他物种的具有相似活性的相似 的多肽是已知的时，本领域技术人员可以将一种肽的氨基酸序列与类 似肽的序列进行比较。通过这种比较，人们可以确定在类似多肽之间 保守的所述分子的残基和部分。还可以理解的是，在一种肽的相对所 述类似肽而言不保守的部位上进行的改变，不大可能对所述肽的活性 和/或结构造成负面影响。本领域技术人员还可以理解的是，即使是 在相对保守的区域，人们也可以用化学上类似的氨基酸取代天然存在 的氨基酸，同时又保留了其活性(保守性氨基酸残基取代)。因此， 即使是对生物学活性或结构重要的部位也可以进行保守性氨基酸取 代，而又不破坏其生物学活性或不会对所述肽的结构产生负面影响。

另外，本领域技术人员可以进行结构-功能研究，以便确定类似 肽上的对活性或结构重要的残基。就所述比较而言，人们可以预测一 种肽上的氨基酸残基的重要性，所述残基相当于对类似肽的活性或结 构重要的氨基酸残基。本领域技术人员可以用化学上类似的氨基酸取 代所述肽的推测的重要氨基酸残基。

人们还可以相对类似多肽的结构，分析三维结构和氨基酸序 列。根据所述信息，本领域技术人员可以推测一种肽的氨基酸残基相 对其三维结构的排列。本领域技术人员可以选择不对推测存在于所述 蛋白表面上的氨基酸残基进行基团改变，因为所述残基可能参与和其 他分子的重要的相互作用。另外，本领域技术人员可以制备在每一个 需要的氨基酸残基上包括单一的氨基酸取代的测验变体。然后，可以 用本领域技术人员所公知的活性测定方法筛选所述变体。可以利用所 述数据收集有关合适变体的信息。例如，如果人们发现对一个特定氨 基酸残基的取代会导致受到破坏的、不希望的减弱的或不合适的活性 的话，具有这种取代的变体就应当避免。换句话说，根据从所述常规 实验所收集到信息，本领域技术人员可以方便地确定应当避免单独的 或与其他突变组合的进一步取代的氨基酸。

大量的科技文献业已披露了对二级结构的预测。参见Moult J.， Curr.Op.in Biotech.，7(4)：422-427(1996)，Chou等，Biochemistry， 13(2)：222-245(1974)；Chou等，Biochemistry，113(2)：211-222 (1974)；Chou等，Adv.Enzymol.Relat.Areas Mol.Biol.，47：45-148 (1978)；Chou等，Ann.Rev.Biochem.，47：251-276和Chou等，Biophys. J.，26：367-384(1979)。另外，目前可以获得用于协助预测二级结构 的计算机程序。预测二级结构的一种方法是基于同源性模拟。例如， 具有超过30％的序列相同性，或超过40％的相似性的两种多肽或蛋 白通常具有类似的结构拓扑关系。蛋白结构数据库(PDB)的最近的增 长，业已提供了增强了的二级结构的可预测性，包括在一种多肽或蛋 白结构内的折叠的潜在数量。参见Holm等，Nucl.Acid.Res.，27(1)： 244-247(1999)。有人业已提出(Brenner等Curr.Op.Struc.Biol.，7 (3)：369-376(1997))，在特定多肽或蛋白内存在有限数量的折叠，并 且一旦分析了关键数量的结构，结构预测将获得极高的精确性。

预测二级结构的其他方法包括“threading”(Jones，D.，Curr.Opin. Struct.Biol.，7(3)：377-87(1997)；Sippl等，Structure，4(1)：15-9 (1996))，“分布分析”(Bowie等，Science，253：164-170(1991)； Gribskov等，Meth.Enzym.，183：146-159(1990)；Gribskov等，Proc. Nat.Acad.Sci.，84(13)：4355-8(1987))，和“进化连锁”(参见Home， 同上，和Brenner，同上)。

媒介物。本发明需要通过N-末端、C-末端或一个氨基酸残基的 侧链与一种肽连接的至少一个媒介物(V1)的存在。还可以使用多个媒 介物，例如，位于每一个末端的Fc′s，或位于一个末端的Fc或位于 另一个末端或侧链上的PEG基团。典型的媒介物包括：

·Fc结构域；

·能够与挽救受体结合的其他蛋白、多肽、或肽；

·人血清白蛋白(HSA)；

·亮氨酸拉链(LZ)结构域；

·聚乙二醇(PEG)，包括5kD，20kD，和30kD PEG，以及其 他聚合物；

·葡聚糖；

以及本领域已知的其他分子，以便提供延长了的半衰期和/或对 蛋白水解降解作用或清除作用的保护作用。

优选的媒介物是Fc结构域。所述Fc结构域可以与所述肽的N 或C末端或同时与N和C末端融合。优选与N末端融合。

正如上文所提到的，在本发明范围内，Fc变体是合适的媒介物。 可以对天然Fc进行深入修饰，以便形成本发明的Fc变体，其前提是 保留了与挽救受体的结合。例如，参见WO97/34631和WO96/32478。 在所述Fc变体中，人们可以去掉天然Fc的一个或多个位点，这些位 点所提供的结构特征或功能活性是本发明的融合分子所不需要的。例 如，人们还可以通过取代或缺失残基，将残基插入所述位点，或截短 含有所述位点的部分除去所述位点。所述插入或取代的残基还可以是 改变了的氨基酸，例如肽模拟物或D-氨基酸。因为多种原因，需要 Fc变体，其中的某些原因将在下面披露。典型的Fc变体包括这样的 分子和序列，其中：

1.消除了参与二硫键形成的位点。所述位点的消除可以避免与存 在于被用来生产本发明分子的宿主细胞中的其他含有半胱氨酸的蛋 白的反应。为此，位于N-末端的含有半胱氨酸的片段可以截短或可 以将半胱氨酸残基缺失或用其他氨基酸(例如丙氨酰、丝氨酰)取代。 具体地讲，人们可以截去SEQ ID NO：2的N-末端20个氨基酸的片 段或缺失或取代位于SEQ ID NO：2的7和10号位置上的半胱氨酸残 基。即使是消除了半胱氨酸残基，单链Fc结构域仍然能形成非共价 结合在一起的双体Fc结构域。

2.对天然Fc进行修饰，以便使它与特定宿主细胞的兼容性提 高。例如，人们可以消除靠近典型的天然Fc的N-末端的PA序列， 该序列可以被大肠杆菌中的消化酶，如脯氨酸亚氨基肽酶识别。人们 还可以增加一个N-末端甲硫氨酸残基，特别是当所述分子是在诸如 大肠杆菌的细菌细胞中重组表达时。SEQ ID NO：2的Fc结构域就是 这样一种Fc变体。

3.去掉天然Fc的N-末端的一部分，以便避免在特定宿主细胞中 表达时N-末端的不一致性。为此，人们可以去掉位于N-末端的前20 个氨基酸残基中的任一个，特别是1，2，3，4和5号位置上的氨基 酸残基。

4.去掉一个或多个糖基化位点。通常被糖基化的残基(例如天冬 酰胺)可以赋予细胞裂解反应。可以去掉所述残基，或者用非糖基化 残基(例如丙氨酸)取代。

5.去掉参与和补体的相互作用的位点，如Clq结合位点。例如， 人们可以去掉或取代人IgG1的EKK序列。对于本发明的分子来说， 补体恢复可能不是有利的，因此，可以避免这种Fc变体。

6.去掉影响与除了挽救受体以外的Fc受体结合的位点。天然Fc 可能具有与某些白血细胞相互作用的位点，这些位点对本发明的融合 分子来说是不需要的，因此可能去掉。

7.去掉了ADCC位点。ADCC位点是本领域所公知的。例如， 有关IgG1的ADCC位点参见Molec.Immunol.29(5)：633-9(1992)。 这些位点同样是本发明的融合分子所不需要的，因此可以去掉。

8.当天然Fc源于非人抗体时，所述天然Fc可以是人源化的。通 常，为了将天然Fc人源化，人们可以用正常情况下存在于人类天然 Fc上的残基取代非人天然Fc上的特定残基。用于抗体人源化的技术 为本领域所熟知。

优选的Fc变体包括以下变体。在SEQ ID NO：2(图3)中，15号 位置上的亮氨酸可以用谷氨酸取代；99号位置上的谷氨酸可以用丙 氨酸取代；而101和103号位置上的赖氨酸可以用丙氨酸取代。另外， 一个或多个酪氨酸残基可以用苯丙氨酸残基取代。

其他媒介物可以是能够与挽救受体结合的蛋白、多肽、肽、抗 体、抗体片段、或小分子(例如，肽模拟化合物)。例如，人们可以 将披露于以下美国专利中的多肽用作媒介物：美国专利5,739,277， 于1998年4月14日授予Presta等。还可以通过噬菌体展示或对与 FcRn挽救受体的结合的RNA-肽筛选选择肽。所述挽救受体-结合化 合物也包括在“媒介物”的含义范围内，并且属于本发明的范围。可 以筛选所述媒介物的延长了的半衰期(例如，通过避免由蛋白酶识别 的序列)和降低了的免疫原性(通过有利于非免疫原性的序列，如在 抗体人源化中所发现的)。

正如上文所指出的，还可将聚合物媒介物用于V1。用于连接被 用作媒介物的化学部分的各种方法目前都可以获得，例如，参见专利 合作条约(PCT)国际公开号WO 96/11953，题为“N-末端化学修饰 的蛋白组合物和方法”，以它的全文形式引入本文作为参考。在该 PCT公开文本中披露了水溶性聚合物与蛋白N-末端的选择性连接。

一种优选的聚合物媒介物是聚乙二醇(PEG)。PEG基团可以具有 任何常见的分子量，并且可以是线性的或分支的。PEG的平均分子 量优选在大约2千道尔顿(″kD″)-大约100kD，更优选大约5kD-大约 50kD，最优选大约5kD-大约10kD。通过可以通过乙酰化或还原性 烷基化连接在本发明的化合物上，通过PEG部分上的活性基团(例 如，醛基、氨基、硫醇基、或酯基)连接在本发明化合物的活性基团 上(例如，醛基、氨基、或酯基)。

用于合成肽的PEG化的有用方法，包括通过在溶液中形成缀合 键(conjugate linkage)结合一个肽和一个PEG部分，它们各自具有能 彼此相互起反应的特殊的官能团。所述肽可以通过常规固相合成方便 地制备。通过位于特定位点上的一个合适的官能团将所述肽“预活 化”在与所述PEG部分反应之前，对所述前体进行纯化和全面表征。 所述肽与PEG的连接通常是在水相中进行的，并且可以通过反相分 析HPLC方便地监测。可以通过制备HPLC，方便地纯化PEG化的 肽，并且通过分析HPLC、氨基酸顺序和激光解吸质谱分析表征。

多糖聚合物是可用于蛋白修饰的另一种类型的水溶性聚合物。 葡聚糖是由主要通过α1-6连键连接的单个葡萄糖亚基组成的多糖聚 合物。葡聚糖本身能够以多种分子量存在，并且可以方便地获得大约 1kD-大约70kD的分子量。葡聚糖是可以单独作为媒介物或与另一 种媒介物(例如Fc)组合用于本发明中的合适的水溶性聚合物，例 如，参见WO 96/11953和WO 96/05309。业已报道了与治疗性或诊 断免疫球蛋白缀合的葡聚糖。例如，参见欧洲专利公开号0 315 456， 该专利以其全文形式引入本文作为参考。当葡聚糖被用作本发明的媒 介物时，优选大约1kD-大约20kD的葡聚糖。

接头。可以选择任何“接头”基团。在存在接头时，其化学结 构并不重要，因为它主要起着间隔基团的作用。所述接头优选是由通 过肽键连接在一起的氨基酸形成。因此，在优选实施方案中，所述接 头是由通过肽键连接的1-30个氨基酸组成，其中，所述氨基酸是从 20种天然存在的氨基酸中选择的。正如本领域技术人员所了解的， 其中的某些氨基酸可以是糖基化的。在一种更优选的实施方案中，所 述1-20个氨基酸是从甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、天冬酰胺、谷氨酰 胺、和赖氨酸中筛选的。更优选的是，主要由空间上非位阻的氨基酸， 如甘氨酸和丙氨酸组成的接头。因此，优选的接头是与甘氨酸(特别 是(Gly)4，(Gly)5)，聚(Gly-Ala)，和聚丙氨酸。接头的其他特定例子 有：

(Gly)3Lys(Gly)4(SEQ ID NO：40)；

(Gly)3AsnGlySer(Gly)2(SEQ ID NO：41)；

(Gly)3Cys(Gly)4(SEQ ID NO：42)；和

GlyProAsnGlyGly(SEQ ID NO：43)。

为了解释上述命名方法，例如，(Gly)3Lys(Gly)4表示Gly-Gly- Gly-Lys-Gly-Gly-Gly-Gly(SEQ ID NO：40)。Gly和Ala的组合同样是 优选的。这里所提供的接头是举例性的；本发明范围内的接头可以更 长，并且可以包括其他残基。

优选的接头是包括超过5个氨基酸的氨基酸接头，合适的接头 具有高达大约500个选自甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、天冬酰胺、谷氨 酰胺、赖氨酸、苏氨酸、苏氨酸或天冬氨酸的氨基酸。最优选的是大 约20-50个氨基酸的接头。一类优选的接头是具有下式的接头

GSGSATGGSGSTASSGSGSATx1x2

(SEQ ID NO：193)

和

GSGSATGGSGSTASSGSGSATx1x2GSGSATGGSGSTASSGSGSATx3x4

(SEQ ID NO：194)

其中，x1和x3各自独立地是碱性或疏水性残基，而x2和x4各 自独立地是疏水性残基。特别优选的接头是：

GSGSATGGSGSTASSGSGSATHM

(SEQ ID NO：59)

GSGSATGGSGSTASSGSGSATGM

(SEQ ID NO：190)

GSGSATGGSGSTASSGSGSATGS

(SEQ ID NO：191)，和

GSGSATGGSGSTASSGSGSATHMGSGSATGGSGSTASSGSGSATH

M

(SEQ ID NO：192)。

非肽接头也是可行的。例如，可以使用烷基接头，如 -NH-(CH2)s-C(O)-，其中s＝2-20。所述烷基接头还可以通过诸如低级烷基(例如 C1-C6)低级酰基，卤基(例如，Cl，Br)，CN，NH2，苯基等的非 空间位阻基团所取代。一种代表性的非肽接头是PEG接头，

其中，n是这样的，它使得该接头的分子量为100-5000kD，优 选100-500kD。还可以改变所述肽接头，以便形成与上文所述相同 形式的衍生物。

衍生物。本发明人还披露了所述化合物的肽和/或媒介物部分的 衍生化。所述衍生物可以提高所述化合物的溶解度、吸收性、生物学 半衰期等。所述部分还可以消除或减弱所述化合物的任何不希望的副 作用等。代表性衍生物包括以下化合物，其中：

1.所述化合物或它的某些部分是环状的，例如，可以将所述肽部 分修饰成包括两个或两个以上Cys残基(例如在所述接头上)，它 可以通过形成二硫键而环化。

2.将所述化合物交联或者使得它能够在分子间交联。例如，可以 将所述肽部分修饰成包括一个Cys残基，并且因此能够与一种类似 分子形成分子间二硫键。所述化合物还可以通过其C-末端交联，如 下面的分子所示。

在式VIII中，每一个“V1”通常可以表示Fc结构域的一条链。

3.一个或多个肽基[-C(O)NR-]连接(键)被非肽基连接所取代。 典型的非肽基连接是-CH2-氨甲酸[-CH2-OC(O)NR-]，磷酸根，-CH2- 磺酰胺[-CH2-S(O)2NR-]，脲[-NHC(O)NH-]，-CH2-仲胺，和烷基化肽 [-C(O)NR6-其中，R6是低级烷基]。

4.N-末端是衍生化的。通常，N-末端可以酰化或者修饰成取代 胺。典型的N-末端衍生基团包括-NRR1(而不是NH2)，-NRC(O)R1， -NRC(O)OR1，-NRS(O)2R1，-NHC(O)NHR1，琥珀酰亚胺，或苄氧基 羰基-NH-(CBZ-NH-)，其中R和R1分别是氢或低级烷基，并且，其 中所述苯环可以用1-3个选自C1-C4烷基，C1-C4烷氧基，氯和溴的 取代基取代。

5.游离的C-末端是衍生化的。通常，C-末端是酯化或酰胺化的。 举例来说，典型的C-末端衍生基团包括例如-C(O)R2，其中，R2是 低级烷氧基，或-NR3R4，其中R3和R4独立地是氢或C1-C8烷基(C1-C4 烷基)。

6.二硫键被另一种键，优选更稳定的交联部分(例如亚烷基)所 取代。例如，参见Bhatnagar等(1996)，J.Med.Chem.39：3814-9； Alberts等(1993)Thirteenth Am.Pep.Symp.，357-9。

7.一种或多个独立的氨基酸残基是修饰过的。正如在下面详细 披露的，已知各种衍生剂能够与各种特定的侧链或末端残基专一性起 反应。

赖氨酰残基和氨基末端残基可以与琥珀酸或其他羧酸酸酐起反 应，它能颠倒赖氨酰残基的电荷。适合衍生含有α氨基的残基的其他 合适的试剂包括亚胺基酯，如甲基吡啶亚胺(picolinimidate)；磷酸吡 多醛；吡多醛；氯溴氢酸；三硝基苯磺酸；O-甲基异脲；2，4-戊二 酮；和转氨酶催化的与乙醛酸的反应。

精氨酰残基可以通过与任一种常规试剂或若干种常规试剂的组 合起反应进行修饰，所述试剂包括苯基吡多醛，2，3-丁二酮，1，2- 环己二酮，和茚三酮。精氨酰残基的衍生化，需要该反应在碱性条件 下进行，因为胍官能团具有高的pKa。另外，所述试剂还可以与赖氨 酸的基团和精氨酰胺ε-氨基起反应。

业已对酪氨酰残基的特殊修饰进行过深入研究，特别感兴趣的 是通过与芳族重氮化合物或四硝基甲烷起反应将光谱标记导入酪氨 酰残基。最常见的是，利用N-酰基咪唑和四硝基甲烷分别形成o-乙 酰酪氨酰类和3-硝基衍生物。

可以通过与碳二亚胺(R′-N＝C＝N-R’)起反应，选择性地修饰羧 基侧链基团(天冬氨酰和谷氨酰)，如1-环己基-3-(2-吗啉基-(4-乙 基)碳二亚胺或1-乙基-3-(4-氮翁-4，4-二甲基戊基)碳二亚胺。另外， 可以通过与铵离子起反应，将天冬氨酰和谷氨酰残基转化成天冬酰胺 和谷安酰胺残基。

可以对谷氨酰胺和天冬酰胺残基进行脱酰胺化，形成相应的谷 氨酰和天冬氨酰残基，另外，所述残基是在温和的酸性条件下脱酰氨 化的。所述残基的任一种形式都属于本发明的范围。

半胱酰胺残基可以被氨基酸残基或其他部分所取代，以便消除 二硫键，或者相反，使交联稳定。例如，参见Bhatnagar等(1996)，J. Med.Chem.39：3814-9。

通过双功能试剂的衍生化，可用于将肽或它们的功能衍生物交 联在水不溶性支持基质上或交联在其他大分子媒介物上。常用的交联 剂包括，例如，1，2-二(重氮乙酰)-2-苯基乙烷，戊二醛，N-羟基 琥珀酰亚氨酯，例如，与4-重氮水杨酸形成的酯，高双功能亚胺酸 酯，包括二琥珀酰亚胺酯，包括3，3′-二硫二(琥珀酰亚胺丙酸)， 和双功能马来酰胺，如2-N-马来酰-1，8-辛烷。诸如甲基-3-[(p-重 氮苯基)二硫]丙酸亚胺酸酯的衍生剂能产生可以光活化的中间物， 所述中间物能够在存在光线的条件下形成交联键。另外，将披露于美 国专利3,969,287；3,691,016；4,195,128；4,247,642；4,229,537；和 4,330,440中的诸如氰溴酸活化的碳水化合物和活性底物的活性水不 溶性基质用于蛋白固定化。

可以将碳水化合物(寡糖)基团方便地连接在蛋白上的已知是 糖基化位点的位点上。一般，当它们是Asn-X-Ser/Thr序列的一部分 时，o-连接的寡糖连接在丝氨酸(Ser)或苏氨酸(Thr)残基上，而N-连 接的寡糖连接在天冬酰胺(Asn)残基上，其中，X可以是除了脯氨酸 以外的任何氨基酸。X是除了脯氨酸以外的19种天然存在的氨基酸 中的一种。出现在每一种类型中的N-连接的和O-连接的寡糖和糖残 基的结构是不同的。通常在两种类型上常见的一类糖是N-乙酰神经 氨酸(被称为唾液酸)。唾液酸通常是N-连接的和O-连接的寡糖的 末端残基，并且通过它的负电荷，可赋予所述糖基化化合物酸性特 性。所述位点可以整合到本发明化合物的接头上，并且优选是在所述 多肽化合物的重组生产期间由细胞糖基化的(例如，在哺乳动物细胞 内，如CHO，BHK，COS)。不过，所述位点还可以通过本领域已 知的合成或半合成方法糖基化。

其他可行的修饰包括脯氨酸和赖氨酸的羟基化，丝氨酰和苏氨 酰残基的羟基基团的磷酸化，Cys中的硫原子的氧化，赖氨酸、精氨 酸和组氨酸侧链的α氨基的甲基化。Creighton，Proteins：Structure and Molecule Properties(W.H.Freeman & Co.，San Francisco)，pp.79- 86(1983)。

本发明的化合物还可以在DNA水平上改变。所述化合物的任何 部分的DNA序列都可以改变成与所选择的宿主细胞更兼容的密码 子。对于大肠杆菌(它是优选的宿主细胞)来说，优化密码子在本领 域是公知的。可以取代密码子，以便消除限制位点或包括沉默的限制 位点，这将有助于在特定的宿主细胞中加工所述DNA。可以将所述 媒介物、接头和肽DNA序列修饰成包括上述任何序列变化。

生产方法

本发明的化合物在很大程度上可以通过重组DNA技术在转化 过的宿主细胞中生产。为此，制备了编码所述肽的重组DNA分子。 制备所述DNA分子的方法为本领域所熟知。例如，可以利用合适的 限制酶将编码所述肽的序列从DNA上切除。另外，可以通过化学合 成技术合成所述DNA分子，如氨基磷酸酯方法。另外，还可以使用 所述技术的组合。

本发明还包括能够在合适的宿主中表达所述肽的载体。所述载 体包括可操作地与合适的表达控制序列连接的编码所述肽的DNA分 子。在将DNA分子插入所述载体之前或之后，进行该操作性连接的 方法是众所周知的。表达控制序列包括启动子、激活子、增强子、操 纵子、核糖体结合位点、起始信号、终止信号、加帽信号、聚腺苷酸 化信号、和与转录或翻译控制相关的其他信号。

将所得到的在它上面具有所述DNA分子的载体用于转化合适 的宿主。该转化可以通过本领域众所周知的方法进行。

大量现有的和众所周知的宿主细胞中的任一种，都可用于实施 本发明。特定宿主的选择取决于本领域所认可的多种因素。其中包 括，例如，与所选择的表达载体的兼容性，由所述DNA分子所编码 的肽的毒性，转化速度，肽回收的难易程度，表达特征，生物安全性 和成本。所述因素的平衡必须符合以下理解，即并非所有的宿主在表 达特定DNA序列时都同样有效。在这种一般性指导下，有用的微生 物宿主包括细菌(如大肠杆菌)，酵母(如酵母菌)和其他培养中的 真菌，昆虫，植物，哺乳动物(包括人类)细胞，或本领域已知的其 他宿主。

然后，培养并且纯化转化过的宿主，宿主细胞可以在常规发酵 条件下培养，以便表达所需要的化合物。所述发酵条件是本领域所熟 知的。最后，通过本领域所熟知的方法从培养物中纯化所述肽。

所述化合物还可以通过合成方法制备。例如，可以使用固相合 成技术。合适的技术为本领域所熟知，并且包括披露于以下文献中的 技术：Merrifield(1973)，Chem.Polypeptides，pp.335-61(Katsoyannis 和Panayotis eds.)；Merrifield(1963)，J.Am.Chem.Soc.85：2149； Davis等(1985)，Biochem.Intl.10：394-414；Stewart和Young (1969)，Solid Phase Peptide Synthesis；美国专利3,941,763；Finn等 (1976)，The Proteins(3rd ed.)2：105-253；和Erickson等(1976)，The Proteins(3rd ed.)2：257-527。固相合成是生产单一肽的优选技术，因 为它是生产小型肽的最经济的方法。

可以通过众所周知的有机化学技术合成含有衍生化的肽或含有 非肽基团的化合物。

化合物的用途

本发明的化合物特别适用于治疗B-细胞介导的自身免疫病。具 体地讲，本发明的化合物可用于治疗、预防、缓解、诊断或预测狼疮， 包括系统性红斑狼疮(SLE)，和狼疮相关的疾病和症状。其他优选 的疾病包括B-细胞介导的癌症，包括B-细胞淋巴瘤。

本发明的化合物还可用于治疗关节的炎性症状。关节的炎性症 状包括能以不同程度使世界范围内的数百万人痛苦和致残的慢性关 节疾病。类风湿关节炎是一种关节疾病，其中，软骨和骨骼被称为血 管翳的增殖的、侵入性结缔组织缓慢侵蚀，所述组织来自关节滑液 膜。所述疾病可能涉及外周关节疾病，如滑囊，腱鞘和腱，以及关节 外组织，如皮下组织，心血管系统，肺，脾，淋巴结，骨骼肌，神经 系统(中枢和外周神经)和眼睛(Silberberg(1985)，Anderson′s Pathology，Kissane(ed.)，II：1828)。骨关节炎是一种常见的关节疾病， 其特征是关节软骨的退化改变和关节周围的骨头和软骨的活跃增 殖。骨关节炎是一种细胞介导的活性过程，它有可能是因为软骨细胞 对代谢和合成刺激作出的不适当的反应所导致的。据报导，关节软骨 的某些基质分子的改变出现在早期骨关节炎中(Thonar等(1993)， Rheumatic disease clinics of North America，Moskowitz(ed.)，19： 635-657和Shinmei等(1992)，Arthritis Rheum.，35：1304-1308)。 TALL-1，TALL-1R和它的调节剂被认为可用于治疗所述症状和相关 的症状。

本发明的化合物还可用于治疗多种其他疾病和失调，包括：

·急性胰腺炎；

·ALS；

·Alzheimer′s病

·哮喘

·动脉硬化；

·自身免疫溶血性贫血；

·癌症，特别是与B细胞相关的癌症；

·恶病质/厌食；

·慢性疲劳综合症；

·硬变(例如，原发性胆汁肝硬变)

·糖尿病(例如，胰岛素糖尿病)；

·发热；

·肾小球肾炎，包括IgA肾小球肾炎和原发性肾小球肾炎；

·Goodpasture′s综合症；

·Guillain-Barre综合症；

·移植物抗宿主病；

·Hashimoto′s甲状腺炎；

·出血性休克；

·痛觉过敏；

·炎性肠炎；

·关节的炎性症状，包括骨关节炎，牛皮癣关节炎和类风湿关 节炎；

·由拉伤，扭伤，软骨损伤，创伤，整形手术，感染或其他病 变过程导致的炎性症状；

·胰岛素依赖型糖尿病；

·缺血性损伤，包括大脑缺血(例如，由创伤、癫痫、出血或 中风所导致的大脑损伤，上述每一种疾病都可能导致神经变性)；

·认知障碍；

·肺病(例如，ARDS)；

·多发性骨髓瘤；

·多发性硬化；

·重症肌无力；

·骨髓性(例如，AML和CML)和其他白血病；

·肌病(例如，肌肉蛋白代谢，特别是败血症)；

·神经毒性(例如，通过HIV诱导的神经毒性)；

·骨质疏松；

·疼痛；

·帕金森病；

·天疱疮；

·多发性肌炎/皮肤肌炎；

·肺炎，包括自身免疫肺炎；

·pre-term labor；

·牛皮癣

·Reiter′s病

·再灌注损伤；

·脓毒性休克；

·由放射治疗产生的副作用；

·Sjogren′s综合症；

·睡眠紊乱；

·临时性下颌骨关节病；

·血小板减少症，包括特发性血小板减少症和自身免疫新生儿 血小板减少症；

·肿瘤转移；

·眼色素层炎；和

·脉管炎。

本发明的化合物可以单独施用，或者与治疗有效量的其他药物 组合施用，包括止痛剂，疾病修饰抗风湿病药物(DMARDs)，非甾醇 抗炎性药物(NSAIDs)，和任何免疫和/或炎症调节剂。因此，本发明 的化合物还可以与以下药物一起施用；

·TNF/TNF受体家族其他成员的调节剂，包括TNF拮抗剂，如 etanercept(EnbrelTM)，sTNF-RI，onercept，D2E7，和RemicadeTM。

·神经生长因子(NGF)调节剂。

·IL-1抑制剂，包括IL-lra分子，如anakinra和最近发现的IL-lra- 样分子，如IL-1Hyl和IL-1Hy2；披露于1998年12月1日授权的美 国专利5,844,099中的IL-1 IL-1“trap”；IL-1抗体，溶解的IL-1受 体等。

·IL-6抑制剂(例如，IL-6的抗体)。

·IL-8抑制剂(例如，IL-8的抗体)。

·IL-18抑制剂(例如，IL-18结合蛋白，溶解的IL-18受体，或 IL-18抗体。

·白介素-1转化酶(ICE)调节剂。

·胰岛素样生长因子(IGF-1，IGF-2)和它的调节剂。

·转化生长因子-β(TGF-β)，TGF-β家族成员，和TGF-β 调节剂。

·成纤维细胞生长因子FGF-1-FGF-10，和FGF调节剂。

·骨保护素(OPG)，OPG类似物，骨保护剂，和OPG配体的抗 体(OPG-L)。

·骨合成剂，如甲状旁腺素(PTH)，PTH片段，和结合了PTH 片段的分子(例如，PTH(1-34)-Fc)。

·PAF拮抗剂。

·角质形成细胞生长因子(KGF)，KGF-相关分子(例如KGF-2)， 和KGF调节剂。

·COX-2抑制剂，如CelebrexTM和VioxxTM。

·前列腺素类似物(例如，E系列前列腺素)。

·基质金属蛋白酶(MMP)调节剂。

·氧化氮合成酶(NOS)调节剂，包括诱导型NOS的调节剂。

·糖皮质素受体的调节剂。

·谷氨酸受体的调节剂。

·脂多糖(LPS)含量的调节剂。

·抗癌制剂，包括致癌基因(例如，fos，jun)的抑制剂和干扰 素。

·去甲肾上腺素和它的调节剂和模拟物。

药用组合物

一般说明。本发明还提供了使用本发明化合物的药用组合物的 方法。所述药用组合物可以注射施用，或口服，经肺、鼻腔、经皮施 用，或以其他形式施用。一般，本发明包括含有有效数量的本发明化 合物的药用组合物，同时还含有可以药用的稀释剂，防腐剂，稳定剂， 乳化剂，佐剂和/或载体。所述组合物包括各种缓冲成分的稀释剂(例 如，Tris-HCl，乙酸，磷酸)，pH和离子强度；添加剂，如洗涤剂 和稳定剂(例如，Tween 80，Polysorbate 80)，抗氧化剂(例如，抗 坏血酸，偏亚硫酸氢钠)，防腐剂(例如，Thimersol，苄醇)和填 充物质(例如，乳糖，甘露糖醇)；将所述材料结合到诸如聚乳酸， 聚乙醇酸的聚合物的颗粒状制剂中的材料，或结合到脂质体。还可以 使用透明质酸，并且这种材料具有改善在循环系统中的持续时间的作 用。所述组合物可以影响本发明蛋白和衍生物的物理状态，稳定性， 体内释放速度和体内清除速度。例如，参见Remington′s Pharmaceutical Sciences，18th Ed.(1990，Mack Publishing Co.， Easton，PA18042)pages 1435-1712，该文献被以全文形式引入本文作 为参考。所述组合物可以以液体形式制备，或者以干燥粉末形式制 备，如冷冻干燥形式。置入式缓释制剂也是可行的，如经皮制剂。

口服剂型。本发明涉及口服固体剂型，这种剂型一般披露于 Remington′s Pharmaceutical Sciences(1990)，18th Ed.，Mack Publishing Co.Easton PA18042的第89章，该文献以全文形式引入本文作为参 考。固定剂型包括片剂、胶囊、丸剂、药片或锭剂、扁胶囊或小药丸。 还可将脂质体或蛋白类胶囊用于制备本发明组合物(例如，在美国专 利4,925,673中所报导的蛋白类微球)。还可以使用脂质体胶囊化， 并且可以用各种聚合物对脂质体进行衍生化(例如美国专利5,013, 556)。在以下文献的第10章披露了用于治疗的可行的固体剂型： Marshall，K.，Modern Pharmaceutics(1979)，edited by G.S.Banker and C.T.Rhodes，第10章，该文献被以全文形式引入本文作为参考。一 般，所述制剂可以包括本发明的化合物，和惰性成分，这些惰性成分 可以对抗肠胃环境，并且在小肠中释放生物学活性材料。

另外，还具体涉及上述本发明化合物的口服剂型。如果必要的 话，可以对所述化合物进行化学修饰，以便口服输送更为有效。一般， 所涉及到的化学修饰是将至少一种成分连接在化合物分子本身上，其 中，所述部分可以(a)抑制蛋白水解作用；和(b)从胃或小肠中吸收到 血液中。另外还希望所述化合物的总体稳定性提高，以及在体内的循 环时间延长。可用作本发明的共价连接媒介物的部分也可用于这一目 的。所述分子的例子包括：PEG，乙二醇和丙二醇的共聚物，羧甲基 纤维素，葡聚糖，聚乙烯基醇，聚乙烯吡咯烷酮和聚脯氨酸。例如， 参见Abuchowski和Davis，Soluble Polymer-Enzyme Adducts， Enzymes as Drugs(1981)，Hocenberg和Roberts，eds.，Wiley- Interscience，New York，NY，pp.36783；Newmark，等(1982)，J.Appl. Biochem.4：185-9。可以使用的其他聚合物是聚-1，3-二氧戊环和聚 1，3，6-tioxocane。优选的用于药物用途的，如上文所述，是PEG成分。

对于口服输送剂型来说，还可以使用修饰过的脂族氨基酸的 盐，如N-(8-[2-羟基苯甲酰基]氨基)辛酸钠(SNAC)，作为一种载体以 便增强本发明治疗性化合物的吸收。业已在通过Emisphere Technologies进行的II期实验中，证实了使用SNAC的肝素制剂的临 床效力。参见美国专利5,792,451，“口服药物输送组合物和方法”。

本发明的化合物可以作为粒度为大约1毫米的颗粒小团形式的 细的多颗粒添加在所述制剂中。用于胶囊施用的所述材料的制剂还可 以作为粉末、略微压缩的栓剂，甚至是作为片剂。所述治疗剂可以通 过压缩制备。

还可以添加着色剂和香味剂。例如，可以制备所述蛋白(或衍 生物)(如通过脂质体或小球胶囊)，然后，进一步包含在食品中， 如含有着色剂和香味剂的冰镇饮料。

人们可以用一种惰性材料稀释或增加本发明化合物的体积。所 述稀释剂可以包括碳水化合物，特别是甘露糖醇，α-乳糖，无水乳 糖，纤维素，蔗糖，改性葡聚糖和淀粉。某些无机盐也可用作填充材 料，包括三磷酸钙，碳酸镁和氯化钠。某些可以从商业渠道获得的稀 释剂包括Fast-Flo，Emdex，STA-Rx 1500，Emcompress和Avicell。

在所述治疗剂的制剂中还可以添加分散剂，以便制成固体剂 型。用作分散剂的材料包括，但不局限于淀粉，包括基于淀粉的商业 化分散剂，Explotab。淀粉乙醇酸钠，Amberlite，羧甲基纤维素钠， 超级支链淀粉，藻酸钠，明胶，橙皮，酸性羧甲基纤维素，天然海绵 和膨润土都可以使用。另一种形式的分散剂是不溶性阳离子交换树 脂。粉末状的树胶可以用作分散剂以及用作粘接剂，并且所述树胶可 以包括粉状树胶，如琼脂，Karaya或黄耆胶。

可以使用粘接剂将所述治疗剂保持在一起，以便形成硬的片 剂，并且包括来自天然产品的材料，如合欢胶，黄耆胶，淀粉和明胶。 其他材料包括甲基纤维素(MC)，乙基纤维素(EC)和羧甲基纤维素 (CMC)。聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和羟丙基甲基纤维素(HPMC)都可用于 醇溶液中，以便使所述治疗剂颗粒化。

在所述治疗剂的配方中还可以添加抗摩擦剂，以便防止在制备 过程发生粘连。可以将润滑剂用作治疗剂和模具壁之间的一个层，所 述润滑剂可以包括，但不局限于硬脂酸，包括它的镁和钙盐，聚四氟 乙烯(PTFE)，液体石蜡，植物油和蜡。还可以使用可溶性润滑剂，如 十二烷基硫酸钠，十二烷基硫酸镁，各种分子量的聚乙二醇， Carbowax 4000和6000。

可以添加能够在制备期间改善药物的流动特性，并且在压缩期 间有助于重新排列的滑动剂。所述滑动剂包括淀粉、滑石、火成硅和 水合硅铝酸盐。

为了帮助将本发明的化合物溶解在含水环境中，可以添加作为 湿润剂的表面活性剂。表面活性剂可以包括阴离子洗涤剂，如十二烷 基硫酸钠，二辛基硫代琥珀酸钠，和二辛基磺酸钠。可以使用阳离子 洗涤剂，并且包括benzalkonium chloride或benzethonium chloride。 在所述制剂中可以作为表面活性剂使用的非离子洗涤剂包括 lauromacrogol 400，polyoxyl 40硬脂酸，聚氧乙烯氢化蓖麻油10，50 和60，硬脂酸单甘油酯，polysorbate 40，60，65和80，蔗糖脂肪酸 酯，甲基纤维素和羧甲基纤维素。所述表面活性剂可以单独或作为不 同比例的混合物存在于所述蛋白或衍生物的制剂中。

在所述制剂中还可以添加增强所述化合物吸收的添加剂。例 如，可能具有这种特性的添加剂有脂肪酸油酸，亚油酸和亚麻酸。

可能需要控制释放制剂。可以将本发明的化合物结合在惰性基 质中。该基质可以通过扩散或溶出机制释放；例如，树胶。还可以将 缓慢降解的基质整合在所述制剂中，例如，藻酸，多糖。本发明化合 物的另一种形式的控制释放是一种基于Oros治疗系统的方法(Alza Corp.)，即，将所述药物包在半透膜中，由于渗透作用，这种膜使得 水能够进入并且通过单一的小孔将药物从里面推出。某些肠包衣也具 有缓释效果。

可以将其他包衣剂用于所述制剂。其中包括多种可用于包衣锅 (pan)的多种糖类。所述治疗剂还能够以薄膜包衣的片剂形式提供， 并且用于这种场合的材料被分成两类。第一类是非肠衣材料，并且包 括甲基纤维素，乙基纤维素，羟乙基纤维素，甲基羟基-乙基纤维素， 羟丙基纤维素，羟丙基-甲基纤维素，羧甲基纤维素钠，providone和 聚乙二醇。第二类包括糖衣材料，它通常是苯二甲酸的酯。

可以将材料的混合物用于提供最佳膜包衣。膜包衣可以在锅包 衣器或流化床或通过压缩包衣进行。

肺输送形式。本发明还涉及本发明蛋白(或其衍生物的肺输 送)。所述蛋白(或衍生物)是通过吸入输送到哺乳动物肺中的，并 且通过肺上皮衬里细胞到达血液系统(包括这一方面内容的其他报导 包括Adjei等，Pharma.Res.(1990)7：565-9；Adjei等(1990)，Internatl. J.Pharmaceutics 63：135-44(leuprolide acetate)；Braquet等(1989)，J. Cardiovasc.Pharmacol.13(suppl.5)：s.143-146(内皮肽1)；Hubbard 等(1989)，Annals Int.Med.3：206-12(α1-抗胰蛋白酶)；Smith等 (1989)，J.Clin.Invest.84：1145-6(α1-蛋白酶)；Oswein等(March 1990)，“蛋白的气溶胶化”，Proc.Symp.Resp.Drug Delivery II， Keystone，Colorado(重组人生长激素)；Debs等(1988)，J.Immunol. 140：3482-8(干扰素γ和肿瘤坏死因子α)和Platz等，美国专利 5,284,656(粒细胞集落刺激因子)。

在实施本发明时，可以使用多种为了肺输送治疗制品而设计的 机械装置，包括，但不局限于雾化器，计量剂量的吸入器，和粉末吸 入器，所有这些装置都是本领域技术人员所熟悉的。适用于实施本发 明的市售装置的某些具体例子包括Ultravent雾化器，由 Mallinckrodt，Inc.生产，St.Louis，Missouri；Acorn II喷雾器，由 Marquest Medical Products生产，Englewood，Colorado；Ventolin计 量剂量吸入器，由Glaxo Inc.生产，Research Triangle Park，North Carolina；和Spinhaler粉末吸入器，由Fisons Corp.生产，Bedford， Massachusetts。

所有上述装置都需要使用适合分配本发明化合物的制剂。通 常，每一种制剂对所使用的装置的类型是专一的，并且除了用于治疗 的稀释剂、佐剂和/或载体之外可以使用合适的推进剂材料。

本发明的化合物最优选以颗粒形式制备，平均粒度小于10微 米，最优选0.5-5微米，以便最有效地输送到肺的远端。

可以药用的载体包括碳水化合物，如海藻糖，甘露糖醇，木糖 醇，蔗糖，乳糖和山梨糖醇。用于制剂中的其他成分可以包括DPPC， DOPE，DSPC和DOPC。可以使用天然或表面合成表面活性剂。可 以使用PEG(可以不是用于对所述蛋白或类似物进行衍生化)。可 以使用葡聚糖，如环葡聚糖。可以使用胆酸盐和其他相关的强化剂。 可以使用纤维素和纤维素衍生物。可以使用氨基酸，如用于缓冲液制 备。

另外，还可以使用脂质体，微胶囊或微球体，包含体复合物或 其他类型的载体。

适用于喷射型或超声波型的喷雾器的制剂通常包括溶解在水中 的本发明的化合物，每毫升溶液中生物学活性蛋白的浓度大约0.1-25 毫克。所述制剂还可以含有缓冲剂和一种简单的糖(例如，用于蛋白 稳定和调节渗透压)。喷雾器制剂还可以包括表面活性剂，以便降低 或防止由表面诱导的形成气溶胶的溶液的雾化所导致的蛋白的聚 集。

用于计量剂量吸入器装置的制剂通常包括细碎的粉末，它含有 借助于表面活性剂而悬浮在推进剂中的本发明的化合物。所述推进剂 可以是任何用于这一目的的常规材料，如氯氟烃、氢氯氟烃、氢氟烃、 或烃，包括三氯氟甲烷，二氯二氟甲烷，二氯四氟乙醇，和1，1，1， 2-四氟乙烷，或它们的组合。合适的表面活性剂包括山梨聚糖三油酸 酯和大豆卵磷脂。还可以将油酸用作表面活性剂。

用于从粉末吸入器中分配的制剂可以包括含有本发明化合物的 细碎的干燥粉末并且还可以包括填充剂，如乳糖、山梨糖醇，蔗糖， 甘露糖醇，海藻糖，或木糖醇，其用量有利于所述粉末从该装置中分 散，例如占该制剂重量的50-90％。

鼻腔输送形式。还涉及本发明化合物的鼻腔输送。鼻腔输送可 以使在将所述治疗产品施用到鼻腔之后使所述蛋白直接输送到血液 中，而不需要使所述产品沉积在肺里。适合鼻腔输送的制剂包括含有 葡聚糖或环葡聚糖的制剂。通过其他黏膜的输送也是可行的。

剂量。与用于治疗上述症状的方法相关的剂量方案可以由主治 医生确定，要考虑多种可能改变药物作用的因素，例如患者的年龄、 症状、体重、性别和饮食，任何感染的严重程度、施用时间和其他临 床因素。一般，每天的方案应当在每千克体重0.1-1000微克本发明 化合物的范围内，优选每千克体重0.1-150微克。

特别优选的实施方案

本发明人业已确定了在下面的表4中列举的优选肽的优选结 构。符号“A”可以是本文所披露的任何接头，或者可能简单地表示 一种普通的肽键(即不存在接头)。为了清楚起见，串联重复和接头 是分开示出的。

表4-优选实施方案                序列/结构   SEQ ID     NO：  LPGCKWDLLIKQWVCDPL-A-V1     44  V1-Λ-LPGCKWDLLIKQWVCDPL     45  LPGCKWDLLIKQWVCDPL-Λ-  LPGCKWDLLIKQWVCDPL-A-V1     46  V1-Λ-LPGCKWDLLIKQWVCDPL-Λ-  LPGCKWDLLIKQWVCDPL     47  SADCYFDILTKSDVCTSS-Λ-V1     48  V1-Λ-SADCYFDILTKSDVCTSS     49  SADCYFDILTKSDVTSS-Λ-SADCYFDILTKSDVTSS  -A-V1     50  V1-Λ-SADCYFDILTKSDVTSS-Λ-  SADCYFDILTKSDVTSS     51  FHDCKWDLLTKQWVCHGL-Λ-V1     52  V1-Λ-FHDCKWDLLTKQWVCHGL     53  FHDCKWDLLTKQWVCHGL-Λ-  FHDCKWDLLTKQWVCHGL-Λ-V1     54  V1-Λ-FHDCKWDLLTKQWVCHGL-Λ-  FHDCKWDLLTKQWVCHGL     55

“V1”是如本文前面所定义的Fc结构域。除了在表4中所列举 的之外，本发明人还提出了异源双体，其中，Fc双体的每一条链与 一种不同的肽序列连接；例如，其中每一种Fc与选自表2的一种不 同的序列连接。

本发明的所有化合物都可以通过在PCT申请WO 99/25044中所 披露的方法制备。

下面将通过实际例子对本发明作进一步说明，这些例子是说明 性的而不是限制性的。

                      实施例1

                        肽

肽噬菌体展示

1.磁性珠制备

A.固定在磁性珠上的Fc-TALL-1

将重组Fc-TALL-1蛋白固定在蛋白A Dynabeads(Dynal)上，浓 度为每100微升从生产商那里购买的磁性珠原料中使用8微克的 Fc-TALL-1。通过使用磁铁将所述珠吸到试管的一侧，并且将液体移 出，用磷酸缓冲的盐溶液(PBS)洗涤所述珠两次，并且重新悬浮在 PBS中。以上述浓度将Fc-TALL-1蛋白添加到洗涤过的磁性珠中， 并且在室温下旋转培养1小时。然后通过以1％的最终浓度添加牛血 清白蛋白(BSA)并且在4℃下旋转培养过夜，对Fc-TALL-1包衣的 珠进行封闭。然后用PBST(含有0.05％Tween-20)的PBS洗涤所得 到的Fc-TALL-1包衣的珠，然后进行所述筛选方法。

B.阴性筛选珠制备

为了进行阴性筛选，还制备了另外的珠。对每一种淘选条件来 说，对从生产商那里购买的250微升的珠原料进行上述方法的处理 (1A部分)，所不同的是，去掉了用FTALL-1培养的步骤。在最后 的洗涤步骤中，将所述珠分成5个50微升的等份。

2.TALL-1结合噬菌体的筛选

A.总体方法

将两种丝状噬菌体文库TN8-IX(5×109独立转化体)和TN12-I (1.4×109独立转化体)(Dyax Corp.)用于筛选TALL-1结合噬菌体。对 每一个文库进行pH 2洗脱或‘珠洗脱’(2E部分)。因此，对于 TALL-1项目来说，采用了四种不同的淘选条件(TN8-IX使用pH2洗 脱方法，TN8-IX使用珠洗脱方法，TN12-I使用pH2洗脱方法，而 TN12-I使用珠洗脱方法)。对每一种条件来说进行三轮选择。

B.阴性筛选

对每一种淘选条件来说，从所述文库母液中等分出大约100个 随机的文库等分体(对于TN8-IX来说为5×1011pfu，而对于TN12-I 来说为1.4×1011pfu)，并且用PBST稀释到300微升。在最后一次洗 涤之后，将液体从为了进行阴性筛选而制备的珠的第一个50微升等 份样品中吸出(1B部分)。将300微升稀释过的文库的母液添加所 述珠中。所得到的混合物在室温下旋转培养10分钟。利用磁力将噬 菌体上清液吸出，并且添加到第二个50微升的等份样品中，进行另 一个阴性筛选步骤。通过这种方式，进行了5个阴性筛选步骤。

C.利用Fc-TALL-1蛋白包衣的珠进行筛选

在最后的阴性筛选步骤之后(1A部分)将噬菌体上清液添加到 最后的洗涤步骤之后的Fc-TALL-1包衣的珠中。在室温下旋转培养 该混合物2小时，使特定噬菌体与所述靶蛋白结合。在将上清液去掉 之后，用PBST洗涤所述珠7次。

D.结合噬菌体的pH2洗脱

在最后的洗涤步骤之后(2C部分)。通过添加200微升的CBST (50mM柠檬酸钠，150mM氯化钠，0.05％Tween-20，pH2)将结合的 噬菌体从磁性珠上洗脱。在室温下培养5分钟之后，将含有洗脱的噬 菌体的液体吸出，并且转移到另一只试管中。通过添加200微升CBST 并且培养5分钟再次重复所述洗脱步骤。将来自两个洗涤步骤的液体 混合在一起，并且添加100微升2M Tris溶液(pH8)，以便中和pH。 添加500微升Min A Salts溶液(60mM K2HPO4，33mM KH2PO4，7.6 mM(NH4)SO4，和1.7mM柠檬酸钠)，将最终体积调整为1毫升。

E.‘珠洗脱’

在最后的洗涤之后，将液体吸出(2C部分)，将1ml Min A盐 溶液添加到所述珠中。将该珠混合物直接添加到浓缩细菌样品中进行 感染(3A和3B部分)。

3.扩增

A.铺平板细胞的制备

在含有12.5μg/ml四环素的LB培养基中，将新鲜大肠杆菌(XL-1 Blue MRF′)培养物生长到OD600＝0.5。对每一种淘选(panning)条件来 说，在冰上冷却20毫升的该培养物，并且离心。将细菌沉淀物重新 悬浮在1毫升的Min A盐溶液中。

B.转导

将来自不同洗脱方法的每一种混合物(2D和2E部分)添加到 浓缩细菌样品(3A部分)中，并且在37℃下培养15分钟。将2毫 升NZCYM培养基(2×NZCYM，50μg/ml氨苄青霉素)添加到每一种 混合物中，并且在室温下培养15分钟。将所得到的4毫升溶液铺在 50μg/ml氨苄青霉素的大型NZCYM琼脂平板上，并且在37℃下培 养过夜。

C.噬菌体收获

将在大型NZCYM琼脂平板(3B部分)上生长过夜的每一种细 菌/噬菌体混合物刮取到35毫升LB培养基中，并且再用35毫升的 LB培养基进一步漂洗所述琼脂平板。对所得到的存在于LB培养基 中的细菌/噬菌体混合物进行离心，以便使细菌沉淀。将50毫升的噬 菌体上清液转移到新的试管中，并且添加12.5毫升的PEG溶液(20％ PEG8000，3.5M乙酸铵)，并且在冰上培养2小时，以便使噬菌体沉 淀。通过离心使沉淀的噬菌体下落，并且重新悬浮在6毫升的噬菌体 再悬浮缓冲液中(250mM NaCl，100mM Tris，pH8，1mM EDTA)。 通过离心再次纯化该噬菌体溶液，除去其余的细菌，并且通过添加 1.5毫升PEG溶液再次沉淀噬菌体。在离心步骤之后，将噬菌体沉淀 重新悬浮在400微升PBS中。对该溶液进行最后的离心，以便消除 其余的细菌碎片。通过标准噬斑形成测定对所得到的噬菌体制剂进行 滴定(Molecular Cloning，Maniatis等3rd Edition)。

4.另两轮筛选和扩增

在第二轮中，将来自第一轮(3C部分)的扩增噬菌体(1010pfu) 用作输入噬菌体，进行筛选和扩增步骤(2和3部分)。将来自第二 轮的扩增噬菌体(1010pfu)再用作输入噬菌体进行第三轮筛选和扩增 (2和3部分)。在第三轮的洗脱步骤之后(2D和2E部分)，向在 噬菌体形成测定(3C部分)那样对少量的洗脱噬菌体进行铺平板。 挑选单独的噬斑，并且放入在每一个孔中含有100微升TE缓冲液的 96孔微量滴定板上。将所述主平板放入37℃的培养箱中培养1小时， 以便将噬菌体洗脱到TE缓冲液中。

5.克隆分析(噬菌体ELISA和测序)

通过噬菌体ELISA和测序方法分析噬菌体克隆。根据来自这两 种分析的组合结果对序列进行分级。

A.噬菌体ELISA

将XL-1 BlueMRF′培养物生长到OD600达到0.5。将30微升的 该培养物等分到96孔微量滴定板的每一个孔中。将10微升洗脱噬菌 体(第四部分)添加到每一个孔中，并且在室温下感染细菌15分钟。 向每一个孔中添加130微升含有12.5μg/ml四环素和50μg/ml氨苄 青霉素的LB培养基。然后在37℃下培养所述微量滴定板过夜。在4 ℃下，让重组TALL-1蛋白(1μg/ml，溶解在PBS中)对96孔Maxisorp 平板(NUNC)进行包衣过夜。作为对照，以与TALL-1蛋白相同的摩 尔浓度将重组Fc-Trail蛋白包衣在另一个Maxisorp平板上。

在次日，将蛋白包衣的Maxisorp平板中的液体倒掉，并且每一 个孔用300微升的2％BSA溶液在37℃下封闭1小时。倒掉BSA溶 液，并且用PBST溶液洗涤所述孔3次。在最后的洗涤步骤之后，将 50微升PBST添加到蛋白包衣的Maxisorp平板的每一个孔中。将96 孔微量滴定板上的每一种50微升的过夜培养物转移到TALL-1包衣 的平板以及对照Fc-Trail包衣平板的相应的孔中。在室温下培养这两 种类型平板上的100微升混合物1小时。将液体从Maxisorp平板上 倒掉，并且用PBST洗涤孔5次。将HRP-缀合的抗-M13抗体 (Pharmacia)稀释1∶7500倍，并且将100微升稀释液添加到Maxisorp 平板上的每一个孔中，在室温下培养1小时。再次倒掉液体，并且用 PBST洗涤所述孔7次。将100微升四甲基联苯胺(TMB)底物(Sigma) 添加到每一个孔中，以便进行显色反应，并且用50微升的5N H2SO4溶液终止该反应。在平板读数器(Molecular Devices)上读出OD450。

B.噬菌体克隆的测序

对每一种噬菌体克隆来说，测序模板是通过PCR方法制备的。 利用以下寡核苷酸的扩增大约500个核苷酸片段：

引物  1(5′-CGGCGCAACTATCGGTATCAAGCTG-3′)(SEQ ID NO：56)和

引物  2(5′-CATGTACCGTAACACTGAGTTTCGTC-3′(SEQ ID NO：57)。

为每一种克隆制备以下混合物            试剂    体积(μL)/管 dH2O     26.25 50％甘油     10 10B PCR缓冲液(w/o MgCl2)     5 25mM MgCl2     4  10mM dNTP混合物     1  100μM引物1     0.25  100μM引物2     0.25  Taq聚合酶     0.25  TE中的噬菌体(第4部分)     3  最终反应体积     50

用热循环仪(GeneAmp PCR System 9700，Applied Biosystems)执 行以下程序：94℃，5分钟；[94℃，30秒，55℃，30秒，72℃，45 秒]×30轮；72℃，7分钟；冷却到4℃。通过将每一个PCR反应的5 微升样品在1％琼脂糖凝胶上电泳，检查所述PCR产物。使用 QIAquick Multiwell PCR纯化试剂盒(Qiagen)，按照生产商的方法对 来自每一种反应的45微升的PCR产物进行纯化。然后用ABI 377测 序仪(Perkin-Elmer)，按照生产商推荐的方法对所得到的产物进行测 序。

6.序列分级和共有序列测定

A.序列分级

将由可变核苷酸序列(5B部分)翻译的肽序列与ELISA数据相 关联。将与TALL-1包衣的孔中表现出高的OD450，并且在Fc-Trail 包衣的孔中表现出低的OD450的克隆被认为更重要一些。多次出现 的序列也被认为是重要的。根据以上标准选择候选序列作为肽或肽体 进行进一步分析。分别从TN8-IX和TN12-I文库中选择5个和9个 候选肽序列。

B.共有序列确定

从TN12-I文库中选择的大部分序列包括一个非常保守的DBL 基序。该基序在从TN8-IB文库中选择的序列中同样是保守的。在从 TN8-IB文库中获得的序列中也观察到了另一种基序PFPWE(SEQ ID NO：110)。

根据DBL基序确定了一种共有肽FHDC KWDLLTKQWVCHGL (SEQ ID NO：58)。由于来自TN12-I文库的肽是活性最高的肽，通过 DBL基序对基于上述分类标准(5A部分)上面26种肽序列进行排 比。通过确定在每一个位置上出现次数最多的氨基酸获得了加下划线 的“核心氨基酸序列”。靠近所述核心序列的两个半胱氨酸是TN12-I 文库中的固定氨基酸。所有共有肽上的其余的氨基酸序列来自候选肽 之一TALL-1-12-10(表2，SEQID NO：37)。在B细胞增殖测定中， 来自该共有序列的肽和肽体是最活跃的。

                      实施例2

                       肽体

构建一套12 TALL-1抑制肽体(表5)，其中，将每一种肽的 一个单体融合在人IgG1的Fc区的框内。每一种TALL-1抑制肽体是 通过以下方法构建的，对表6所示的寡核苷酸对进行退火，以便产生 编码所述肽和接头的双链体，它包括5个甘氨酸残基和一个缬氨酸残 基，是作为NdeI-SalI片段形式出现的。将该双链分子连接到同样用 NdeI和SalI消化过的含有人Fc基因的载体上(pAMG21 RANK-Fc， 如本文所披露的)。通过电穿孔将所得到的连接混合物转入大肠杆菌 菌株2596细胞中(GM221，如本文所披露的)。筛选克隆产生重组 蛋白产物和拥有具备正确核苷酸序列的基因融合体的能力。对每一种 肽体选择一个这样的克隆。所述融合蛋白的核苷酸和氨基酸序列如图 4A-4F所示。

表5.用于制备TALL-1抑制肽体的肽序列和寡核苷酸 肽体  肽体  SEQ  ID NO 肽序列  正义寡  核苷酸  反义寡  核苷酸 TALL-1-8-1-a  29 PGTCFPFPWECTHA  2517-  24  2517-25 TALL-1-8-2-a  30 WGACWPFPWECFKE  2517-  26  2517-27 TALL-1-8-4-a  31 VPFCDLLTKHCFEA  2517-  28  2517-29 TALL-1-12-4-a  32 GSRCKYKWDVLTKQCFHH  2517-  30  2517-31  TALL-1-12-3-a  33  LPGCKWDLLIKQWVCDPL  2517-  32   2517-33  TALL-1-12-5-a  34  SADCYFDILTKSDVCTSS  2517-  34   2517-35  TALL-1-12-8-a  35  SDDCMYDQLTRMFICSNL  2517-  36   2517-37  TALL-1-12-9-a  36  DLNCKYDELTYKEWCQFN  2521-  92   2521-93  TALL-1-12-10-a  37  FHDCKYDLLTRQMVCHGL  2521-  94   2521-95  TALL-1-12-11-a  38  RNHCFWDHLLKQDICPSP  2521-  96   2521-97  TALL-1-12-14-a  39  ANQCWWDSLTKKNVCEFF  2521-  98   2521-99  TALL-1共有序列  58  FHDCKWDLLTKQWVCHGL  2551-  48   2551-49

表5B TALL-1抑制性肽体       肽体    肽体   SEQ ID     NO                        肽序列 TALL-1-8- 1-a     111   MPGTCFPFPW ECTHAGGGGG VDKTHTCPPC PAPELLGGPS   VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVVVDVSHE DPEVKFNWYV   DGVEVHNAKT KPREEQYNST YRVVSVLTVL HQDWLNGKEY   KCKVSNKALP APIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPSRDELT   KNQVSLTCLV KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD   SDGSFFLYSK LTVDKSRWQQ GNVFSCSVMH EALHNHYTQK   SLSLSPGK TALL-1-8- 2-a     112   MWGACWPFPW ECFKEGGGGG VDKTHTCPPC PAPELLGGPS   VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVVVDVSHE DPEVKFNWYV   DGVEVHNAKT KPREEQYNST YRVVSVLTVL HQDWLNGKEY   KCKVSNKALP APIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPSRDELT   KNQVSLTCLV KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD   SDGSFFLYSK LTVDKSRWQQ GNVFSCSVMH EALHNHYTQK   SLSLSPGK TALL-1-8- 4-a     113   MVPFCDLLTK HCFEAGGGGG VDKTHTCPPC PAPELLGGPS   VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVVVDVSHE DPEVKFNWYV   DGVEVHNAKT KPREEQYNST YRVVSVLTVL HQDWLNGKEY   KCKVSNKALP APIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPSRDELT   KNQVSLTCLV KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD   SDGSFFLYSK LTVDKSRWQQ GNVFSCSVMH EALHNHYTQK   SLSLSPGK TALL-1-12- 4-a     114   MGSRCKYKWD VLTKQCFHHG GGGGVDKTHT CPPCPAPELL   GGPSVFLFPP KPKDTLMISR TPEVTCVVVD VSHEDPEVKF   NWYVDGVEVH NAKTKPREEQ YNSTYRVVSV LTVLHQDWLN   GKEYKCKVSN KALPAPIEKT ISKAKGQPRE PQVYTLPPSR   DELTKNQVSL TCLVKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYKTTP   PVLDSDGSFF LYSKLTVDKS RWQQGNVFSC SVMHEALHNH   YTQKSLSLSP GK TALL-1-12- 3-a     115   MLPGCKWDLL IKQWVCDPLG GGGGVDKTHT CPPCPAPELL   GGPSVFLFPP KPKDTLMISR TPEVTCVVVD VSHEDPEVKF   NWYVDGVEVH NAKTKPREEQ YNSTYRVVSV LTVLHQDWLN   GKEYKCKVSN KALPAPIEKT ISKAKGQPRE PQVYTLPPSR   DELTKNQVSL TCLVKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYKTTP   PVLDSDGSFF LYSKLTVDKS RWQQGNVFSC SVMHEALHNH   YTQKSLSLSP GK TALL-1-12- 5-a     116   MSADCYFDIL TKSDVCTSSG GGGG VDKTHT CPPCPAPELL   GGPSVFLFPP KPKDTLMISR TPEVTCVVVD VSHEDPEVKF   NWYVDGVEVH NAKTKPREEQ YNSTYRVVSV LTVLHQDWLN   GKEYKCKVSN KALPAPIEKT ISKAKGQPRE PQVYTLPPSR   DELTKNQVSL TCLVKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYKTTP   PVLDSDGSFF LYSKLTVDKS RWQQGNVFSC SVMHEALHNH   YTQKSLSLSP GK TALL-1-12- 8-a     117   MSDDCMYDQL TRMFICSNLG GGGGVDKTHT CPPCPAPELL   GGPSVFLFPP KPKDTLMISR TPEVTCVVVD VSHEDPEVKF   NWYVDGVEVH NAKTKPREEQ YNSTYRVVSV LTVLHQDWLN   GKEYKCKVSN KALPAPIEKT ISKAKGQPRE PQVYTLPPSR   DELTKNQVSL TCLVKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYKTTP  PVLDSDGSFF LYSKLTVDKS RWQQGNVFSC SVMHEALHNH  YTQKSLSLSP GK  TALL-1-12-  9-a   118  MDLNCKYDEL TYKEWCQFNG GGGGVDKTHT CPPCPAPELL  GGPSVFLFPP KPKDTLMISR TPEVTCVVVD VSHEDPEVKF  NWYVDGVEVH NAKTKPREEQ YNSTYRVVSV LTVLHQDWLN  GKEYKCKVSN KALPAPIEKT ISKAKGQPRE PQVYTLPPSR  DELTKNQVSL TCLVKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYKTTP  PVLDSDGSFF LYSKLTVDKS RWQQGNVFSC SVMHEALHNH  YTQKSLSLSP GK  TALL-1-12-  10-a   119  MFHDCKYDLL TRQMVCHGLG GGGGVDKTHT CPPCPAPELL  GGPSVFLFPP KPKDTLMISR TPEVTCVVVD VSHEDPEVKF  NWYVDGVEVH NAKTKPREEQ YNSTYRVVSV LTVLHQDWLN  GKEYKCKVSN KALPAPIEKT ISKAKGQPRE PQVYTLPPSR  DELTKNQVSL TCLVKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYKTTP  PVLDSDGSFF LYSKLTVDKS RWQQGNVFSC SVMHEALHNH  YTQKSLSLSP GK  TALL-1-12-  11-a   120  MRNHCFWDHL LKQDICPSPG GGGGVDKTHT CPPCPAPELL  GGPSVFLFPP KPKDTLMISR TPEVTCVVVD VSHEDPEVKF  NWYVDGVEVH NAKTKPREEQ YNSTYRVVSV LTVLHQDWLN  GKEYKCKVSN KALPAPIEKT ISKAKGQPRE PQVYTLPPSR  DELTKNQVSL TCLVKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYKTTP  PVLDSDGSFF LYSKLTVDKS RWQQGNVFSC SVMHEALHNH  YTQKSLSLSP GK  TALL-1-12-  14-a   121  MANQCWWDSL TKKNVCEFFG GGGGVDKTHT CPPCPAPELL  GGPSVFLFPP KPKDTLMISR TPEVTCVVVD VSHEDPEVKF  NWYVDGVEVH NAKTKPREEQ YNSTYRVVSV LTVLHQDWLN  GKEYKCKVSN KALPAPIEKT ISKAKGQPRE PQVYTLPPSR  DELTKNQVSL TCLVKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYKTTP  PVLDSDGSFF LYSKLTVDKS RWQQGNVFSC SVMHEALHNH  YTQKSLSLSP GK  TALL-1-  共有序列   122  MFHDCKWDLL TKQWVCHGLG GGGGVDKTHT CPPCPAPELL  GGPSVFLFPP KPKDTLMISR TPEVTCVVVD VSHEDPEVKF  NWYVDGVEVH NAKTKPREEQ YNSTYRVVSV LTVLHQDWLN  GKEYKCKVSN KALPAPIEKT ISKAKGQPRE PQVYTLPPSR  DELTKNQVSL TCLVKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYKTTP  PVLDSDGSFF LYSKLTVDKS RWQQGNVFSC SVMHEALHNH  YTQKSLSLSP GK  TALL-1 12-  3  串联双体   123  MLPGCKWDLL IKQWVCDPLG SGSATGGSGS TASSGSGSAT  HMLPGCKWDL LIKQWVCDPL GGGGGVDKTH TCPPCPAPEL  LGGPSVFLFP PKPKDTLMIS RTPEVTCVVV DVSHEDPEVK  FNWYVDGVEV HNAKTKPREE QYNSTYRVVS VLTVLHQDWL  NGKEYKCKVS NKALPAPIEK TISKAKGQPR EPQVYTLPPS  RDELTKNQVS LTCLVKGFYP SDIAVEWESN GQPEMNYKTT  PPVLDSDGSF FLYSKLTVDK SRWQQGNVFS CSVMHEALHN  HYTQKSLSLS PGK  TALL-1  共有串联  双体   124  MFHDCKWDLL TKQWVCHGLG SGSATGGSGS TASSGSGSAT  HMFHDCKWDL LTKQWVCHGL GGGGGVDKTH TCPPCPAPEL  LGGPSVFLFP PKPKDTLMIS RTPEVTCVVV DVSHEDPEVK  FNWYVDGVEV HNAKTKPREE QYNSTYRVVS VLTVLHQDWL  NGKEYKCKVS NKALPAPIEK TISKAKGQPR EPQVYTLPPS  RDELTKNQVS LTCLVKGFYP SDIAVEWESN GQPENNYKTT  PPVLDSDGSF FLYSKLTVDK SRWQQGNVFS CSVMHEALHN  HYTQKSLSLS PGK

表6用于肽体构建的寡核苷酸   寡核苷酸   识别号    SEQ   ID NO                          序列   2517-24     71  TAT GCC GGG TAC TTG TTT CCC GTT CCC GTG GGA ATG CAC  TCA CGC TGG TGG AGG CGG TGG GG   2517-25     72  TCG ACC CCA CCG CCT CCT GGA GCG TGA GTG CAT TCC CAC  GGG AAG CCG AAA CAA GTA CCC GGC A   2517-26     73  TAT GTG GGG TGC TTG TTG GCC GTT CCC GTG GGA ATG TTT  CAA AGA AGG TGG AGG CGG TGG GG   2517-27     74  TCG ACC CCA CCG CCT CCA CCT TCT TTG AAA CAT TCC  CACGGG AAC GGC CAA CAAGCA CCC CAC A   2517-28     75  TAT GGT TCC GTT CTG TGA CCT GCT GAC TAA ACA CTG TTT  CGA AGC TGG TGG AGG CGG TGG GG   2517-29     76  TCG ACC CCA CCG CCT CCA CCA GCT TCG AAA CAG TGT TTA  GTC AGC AGG TCA CAGAAC GGA ACC A   2517-30     77  TAT GGG TTC TCG TTG TAA ATA CAA ATG GGA CGT TCT GAC  TAA ACA GTG TTT CCA CCA CGG TGG AGG CGG TGG GG   2517-31     78  TCG ACC CCA CCG CCT CCA CCG TGG TGG AAA CAC TGT TTA  GTC AGA ACG TCC CAT TTG TAT TTA CAA CGA GAA CCC A   2517-32     79  TAT GCT GCC GGG TTG TAA ATG GGA CCT GCT GAT CAA ACA  GTG GGT TTG TGA CCC GCT GGG TGG AGG CGG TGG GG   2517-33     80  TCG ACC CCA CCG CCT CCA CCC AGC GGG TCA CAA ACC CAC  TGT TTG ATC AGC AGG TCC CAT TTA CAA CCC GGC AGC A   2517-34     81  TAT GTC TGC TGA CTG TTA CTT CGA CAT CCT GAC TAA ATC  TGA CGT TTG TAC TTC TTC TGG TGG AGG CGG TGG GG   2517-35     82  TCG ACC CCA CCG CCT CCA CCA GAA GAA GTA CAA ACG TCA  GAT TTA GTC AGG ATG TCG AAG TAA CAG TCA GCA GAC A   2517-36     83  TAT GTC TGA CGA CTG TAT GTA CGA CCA GCT GAC TCG TAT  GTT CAT CTG TTC TAA CCT GGG TGG AGG CGG TGG GG   2517-37     84  TCG ACC CCA CCG CCT CCA CCC AGG TTA GAA CAG ATG AAC  ATA CGA GTC AGC TGG TCG TAC ATA CAG TCG TCA GAC A   2521-92     85  TAT GGA CCT GAA CTG TAA ATA CGA CGA ACT GAC TTA CAA  AGA ATG GTG TCA GTT CAA CGG TGG AGG CGG TGG GG   25221-93     86  TCG ACC CCA CCG CCT CCA CCG TTG AAC TGA CAC CAT TCT  TTG TAA GTC AGTTCG TCG TAT TTA CAG TTC AGG TCC A   2521-94     87  TAT GTT CCA CGA CTG TAA ATA CGA CCT GCT GAC TCG TCA  GAT GGT TTG TCA CGG TCT GGG TGG AGG CGG TGG GG   2521-95     88  TCG ACC CCA CCG CCT CCA CCC AGA CCG TGA CAA ACC ATC  TGA CGA GTC AGC AGG TCG TAT TTA CAG TCG TCG AAC A   2521-96     89  TAT GCG TAA CCA CTG TTT CTG GGA CCA CCT GCT GAA ACA  GGA CAT CTG TCC GTC TCC GGG TGG AGG CGG TGG GG  2521-97     90  TCG ACC CCA CCG CCT CCA CCC GGA GAC GGA CAG ATG TCC  TGT TTC AGC AGG TGG TCC CAG AAA CAG TGG TTA CGC A  2521-98     91  TAT GGC TAA CCA GTG TTG GTG GGA CTC TCT GCT GAA AAA  AAA CGT TTG TGA ATT CTT CGG TGG AGG CGG TGG GG  2521-99     92  TCG ACC CCA CCG CCT CCA CCG AAG AAT TCA CAA ACG TTT  TTT TTC AGC AGA GAG TCC CAC CAA CAC TGG TTA GCC A  2551-48     93  TAT GTT CCA CGA CTG CAA ATG GGA CCT GCT GAC CAA ACA  GTG GGT TTG CCA CGG TCT GGG TGG AGG CGG TGG GG  2551-49     94  TCG ACC CCA CCG CCT CCA CCC AGA CCG TGG CAA ACC CAC  TGT TTG GTC AGC AGG TCC CAT TTG CAG TCG TGG AAC A

pAMG21-RANK-Fc载体

pAMG21。表达质粒pAMG21(ATCC保藏号98113)可源于 Amgen表达载体pCFM1656(ATCC保藏号69576)，而后者又源于在 美国专利4,710,473中所披露的Amgen表达载体系统。pCFM1656 质粒pCFM836质粒通过以下方式源于(美国专利4,710,473)：

·通过用T4聚合物补平末端，随后进行平端连接破坏两个内源 NdeI限制位点；

·用从pCFM636(专利号4,710,473)中获得的含有PL启动子(参 见下面的SEQ ID NO：95)的类似片段取代单一的AatII和Clal限制 位点之间的含有合成PL启动子的DNA序列；和

·用具有SEQ ID NO：96序列的寡核苷酸取代位于单一Clal和 Kpnl限制位点之间的小DNA序列。

SEQ ID NO：95：

Aat II

5′CTAATTCCGCTCTCACCTACCAAACAATGCCCCCCTGCAAAAAATAAATTCATAT-

3′TGCAGATTAAGGCGAGAGTGGATGGTTTGTTACGGGGGGACGTTTTTTATTTAAGTATA-

   -AAAAAACATACAGATAACCATCTGCGGTGATAAATTATCTCTGGCGGTGTTGACATAAA-

   -TTTTTTGTATGTCTATTGGTAGACGCCACTATTTAATAGAGACCGCCACAACTGTATTT-

   -TACCACTGGCGGTGATACTGAGCACAT 3′

   -ATGGTGACCCCCACTATGACTCGTGTAGC    5′

                               ClaI

SEQ ID NO：96：

5′CGATTTGATTCTAGAAGGAGGAATAACATATGGTTAACGCGTTGGAATTCGGTAC

   3′

3′TAAACTAAGATCTTCCTCCTTATTGTATACCAATTGCGCAACCTTAAGC  5′

  ClaI                                         KpnI

然后可以通过PCR重叠寡核苷酸诱变和DNA序列取代进行一 系列的定点碱基改变由CFM1656制备表达质量pAMG21。从紧靠质 粒复制启动子PcopB的5’末端的BglII位点(质粒bp 180)开始，并 且向质粒复制基因方向进行，进行下面的表7中所示出的碱基对改 变。

表7-产生pAMG21的碱基对改变

pAMG21  bp  #     pCFM1656中的bp   改变成pAMG21中的bp

# 204                     T/A                 C/G

# 428                     A/T                 G/C

# 509                     G/C                 A/T

# 617                     --             插入2个G/C bp

# 679                     G/C                 T/A

# 980                     T/A                 C/G

# 994                     G/C                 A/T

# 1004                    A/T                 C/G

# 1007                    C/G                 T/A

# 1028                    A/T                 T/A

# 1047                    C/G                 T/A

# 1178                    G/C                 T/A

# 1466                    G/C                 T/A

# 2028                    G/C                 bp缺失

# 2187                    C/G                 T/A

# 2480                    A/T                 T/A

# 2499-2502               AGTG               GTCA

                          TCAC                CAGT

# 2642                    TCCGAGC           7bp缺失

                          AGGCTCG

# 3435                    G/C                 A/T

# 3446                    G/C                 A/T

# 3643                    A/T                 T/A

用下面的DNA序列(SEQ ID NO：97)取代位于单一AatII (pCFM1656上的4364号位置)和SacII(pCFM1656上的4585号位 置)限制位点之间的DNA序列。

[AatII粘性末端]                 5′    GCGTAACGTATGCATGGTCTCC-

(pANG21中的4358号位置)          3′TGCACGCATTGCATACGTACCAGAGG-

-CCATGCGAGAGTAGGGAACTGCCAGGCATCAAATAAAACGAAAGGCTCAGTCGAAAGACT-

-GGTACGCTCTCATCCCTTGACGGTCCGTAGTTTATTTTGCTTTCCGAGTCAGCTTTCTGA-

-GGGCCTTTCGTTTTATCTGTTGTTTGTCGGTGAACGCTCTCCTGAGTAGGACAAATCCGC-

-CCCGGAAAGCAAAATAGACAACAAACAGCCACTTGCGAGAGGACTCATCCTGTTTAGGCG-

-CGGGAGCGGATTTGAACGTTGCGAAGCAACGGCCCGGAGGGTGGCGGGCAGGACGCCCGC-

-GCCCTCGCCTAAACTTGCAACGCTTCGTTGCCGGGCCTCCCACCGCCCGTCCTGCGGGCG-

-CATAAACTGCCAGGCATCAAATTAAGCAGAAGGCCATCCTGACGGATGGCCTTTTTGCGT-

-GTATTTGACGGTCCGTAGTTTAATTCGTCTTCCGGTAGGACTGCCTACCGGAAAAACGCA-

                                              AatII

-TTCTACAAACTCTTTTGTTTATTTTTCTAAATACATTCAAATATGGACGTCGTACTTAAC-

-AAGATGTTTGAGAAAACAAATAAAAAGATTTATGTAAGTTTATACCTGCAGCATGAATTG-

-TTTTAAAGTATGGGCAATCAATTGCTCCTGTTAAAATTGCTTTAGAAATACTTTGGCAGC-

-AAAATTTCATACCCGTTAGTTAACGAGGACAATTTTAACGAAATCTTTATGAAACCGTCG-

-GGTTTGTTGTATTGAGTTTCATTTGCGCATTGGTTAAATGGAAAGTGACCGTGCGCTTAC-

-CCAAACAACATAACTCAAAGTAAACGCGTAACCAATTTACCTTTCACTGGCACGCGAATG-

-TACAGCCTAATATTTTTGAAATATCCCAAGAGCTTTTTCCTTCGCATGCCCACGCTAAAC-

-ATGTCGGATTATAAAAACTTTATAGGGTTCTCGAAAAAGGAAGCGTACGGGTGCGATTTG-

-ATTCTTTTTCTCTTTTGGTTAAATCGTTGTTTGATTTATTATTTGCTATATTTATTTTTC-

-TAAGAAAAAGAGAAAACCAATTTAGCAACAAACTAAATAATAAACGATATAAATAAAAAG-

-GATAATTATCAACTAGAGAAGGAACAATTAATGGTATGTTCATACACGCATGTAAAAATA-

-CTATTAATAGTTGATCTCTTCCTTGTTAATTACCATACAAGTATGTGCGTACATTTTTAT-

-AACTATCTATATAGTTGTCTTTCTCTGAATGTGCAAAACTAAGCATTCCGAAGCCATTAT-

-TTGATAGATATATCAACAGAAAGAGACTTACACGTTTTGATTCGTAAGGCTTCGGTAATA-

-TAGCAGTATGAATAGGGAAACTAAACCCAGTGATAAGACCTGATGATTTCGCTTCTTTAA-

-ATCGTCATACTTATCCCTTTGATTTGGGTCACTATTCTGGACTACTAAAGCGAAGAAATT-

-TTACATTTGGAGATTTTTTATTTACAGCATTGTTTTCAAATATATTCCAATTAATCGGTG-

-AATGTAAACCTCTAAAAAATAAATGTCGTAACAAAAGTTTATATAAGGTTAATTAGCCAC-

-AATGATTGGAGTTAGAATAATCTACTATAGGATCATATTTTATTAAATTAGCGTCATCAT-

-TTACTAACCTCAATCTTATTAGATGATATCCTAGTATAAAATAATTTAATCGCAGTAGTA-

-AATATTGCCTCCATTTTTTAGGGTAATTATCCAGAATTGAAATATCAGATTTAACCATAG-

-TTATAACGGAGGTAAAAAATCCCATTAATAGGTCTTAACTTTATAGTCTAAATTGGTATC-

-AATGAGGATAAATGATCGCGAGTAAATAATATTCACAATGTACCATTTTAGTCATATCAG-

-TTACTCCTATTTACTAGCGCTCATTTATTATAAGTGTTACATGGTAAAATCAGTATAGTC-

-ATAAGCATTGATTAATATCATTATTGCTTCTACAGGCTTTAATTTTATTAATTATTCTGT-

-TATTCGTAACTAATTATAGTAATAACGAAGATGTCCGAAATTAAAATAATTAATAAGACA-

-AAGTGTCGTCGGCATTTATGTCTTTCATACCCATCTCTTTATCCTTACCTATTGTTTGTC-

-TTCACAGCAGCCGTAAATACAGAAAGTATGGGTAGAGAAATAGGAATGGATAACAAACAG-

-GCAAGTTTTGCGTGTTATATATCATTAAAACGGTAATAGATTGACATTTGATTCTAATAA-

-CGTTCAAAACGCACAATATATAGTAATTTTGCCATTATCTAACTGTAAACTAAGATTATT-

-ATTGGATTTTTGTCACACTATTATATCGCTTGAAATACAATTGTTTAACATAAGTACCTG-

-TAACCTAAAAACAGTGTGATAATATAGCGAACTTTATGTTAACAAATTGTATTCATGGAC-

-TAGGATCGTACAGGTTTACGCAAGAAAATGGTTTGTTATAGTCGATTAATCGATTTGATT-

-ATCCTAGCATGTCCAAATGCGTTCTTTTACCAAACAATATCAGCTAATTAGCTAAACTAA-

-CTAGATTTGTTTTAACTAATTAAAGGAGGAATAACATATGGTTAACGCGTTGGAATTCGA-

-GATCTAAACAAAATTGATTAATTTCCTCCTTATTGTATACCAATTGCGCAACCTTAAGCT-

                                                 SacII

-GCTCACTAGTGTCGACCTGCAGGGTACCATGGAAGCTTACTCGAGGATCCGCGGAAAGAA-

-CGAGTGATCACAGCTGGACGTCCCATGGTACCTTCGAATGAGCTCCTAGGCGCCTTTCTT-

-GAAGAAGAAGAAGAAAGCCCGAAAGGAAGCTGAGTTGGCTGCTGCCACCGCTGAGCAATA-

-CTTCTTCTTCTTCTTTCGGGCTTTCCTTCGACTCAACCGACGACGGTGGCGACTCGTTAT-

-ACTAGCATAACCCCTTGGGGCCTCTAAACGGGTCTTGAGGGGTTTTTTGCTGAAAGGAGG-

-TGATCGTATTGGGGAACCCCGGAGATTTGCCCAGAACTCCCCAAAAAACGACTTTCCTCC-

-AACCGCTCTTCACGCTCTTCACGC 3′    [SacII粘性末端]

-TTGGCGAGAAGTGCGAGAAGTG   5′    (pAMG21中的5904号位置)

在连接该取代DNA序列的粘性末端之间，破坏了外侧的AatII 和SacII位点。在取代的DNA上具有单一的AatII和SacII位点。

将编码与Fc的N-末端融合的人RANK的基因以NdeI-BamHI 片段形式连接在pAMG21上，以便制备Amgen菌株#4125。对该构 建体进行修饰，以便在RANK和Fc的结合部分插入一个缬氨酸密码 子。相邻的缬氨酸和天冬氨酸密码子形成了一个单一的SalI位点。 这使得所述肽可以融合在Fc3的N-末端的NdeI和SalI位点之间。在 插入一个新的NdeI和SalI片段之后，破坏了RANK序列。在图5A-5M 中提供了所述载体的序列。

GM221(Amgen#2596)。Amgen宿主菌株#2596是源于Amgen 菌株#393的大肠杆菌K-12菌株，后者是大肠杆菌W1485的衍生物， 它是从耶鲁大学的大肠杆菌遗传学资源中心获得的，New Haver， Connecticut(CGSC菌株6159)。业已将它修饰在早期 ebg区含有温 度敏感型λ抑制子cI857s7，在晚期 ebg区含有lacIQ抑制子(68分 钟)。这两个抑制基因的存在，使得该宿主能够使用多种表达系统， 不过，这两种抑制子与luxPR的表达无关。未转化过的宿主没有抗生 素抗性。

业已对cI857s7基因的核糖体结合位点进行了修饰，以便包括强 化的RBS。业已将它插入1170和1411号核苷酸位置之间的 ebg操 纵子，所述编号是按照Genbank保藏号M64441Gb_Ba进行的，缺失 了插入的 ebg序列。下面示出了插入片段的序列，用小写字母表示位 于下面所示插入序列旁侧的 ebg序列(SEQ ID NO：98)：

ttattttcgtGCGGCCGCACCATTATCACCGCCAGAGGTAAACTAGTCAACACGCACGGTGTTAGATAT

TTATCCCTTGCGGTGATAGATTGAGCACATCGATTTGATTCTAGAAGGAGGGATAATATATGAG

CACAAAAAAGAAACCATTAACACAAGAGCAGCTTGAGGACGCACGTCGCCTTAAAGCAATTTA

TGAAAAAAAGAAAAATGAACTTGGCTTATCCCAGGAATCTGTCGCAGACAAGATGGGGATGGG

GCAGTCAGGCGTTGGTGCTTTATTTAATGGCATCAATGCATTAAATGCTTATAACGCCGCATTGC

TTACAAAAATTCTCAAAGTTAGCGTTGAAGAATTTAGCCCTTCAATCGCCAGAGAATCTACGAG

ATGTATGAAGCGGTTAGTATGCAGCCGTCACTTAGAAGTGAGTATGAGTACCCTGTTTTTTCTCA

TGTTCAGGCAGGGATGTTCTCACCTAAGCTTAGAACCTTTACCAAAGGTGATGCGGAGAGATGG

GTAAGCACAACCAAAAAAGCCAGTGATTCTGCATTCTGGCTTGAGGTTGAAGGTAATTCCATGA

CCGCACCAACAGGCTCCAAGCCAAGCTTTCCTGACGGAATGTTAATTCTCGTTGACCCTGAGCA

GGCTGTTGAGCCAGGTGATTTCTGCATAGCCAGACTTGGGGGTGATGAGTTTACCTTCAAGAAA

CTGATCAGGGATAGCGGTCAGGTGTTTTTACAACCACTAAACCCACAGTACCCAATGATCCCAT

GCAATGAGAGTTGTTCCGTTGTGGGGAAAGTTATCGCTAGTCAGTGGCCTGAAGAGACGTTTGG

CTGATAGACTAGTGGATCCACTAGTgtttctgccc

利用被称为Mmebg-cI857s7基因强化RBS#4的重组噬菌体将所 述构建体输送到F’tet/393的染色体中。在重组和分离之后，只有上 述染色体插入片段还保留在所述细胞内。将它重新命名为 F’tet/GM101。然后通过将lacIQ构建体输送到2493和2937号核苷酸 之间的 ebg操纵子上将F’tet/GM101进行修饰，所述编号是按照 Genbank保藏号M64441Gb_Ba进行的，缺失了插入的 ebg序列。下 面示出了插入片段的序列，用小写字母表示位于下面所示插入序列旁 侧的 ebg序列(SEQ ID NO：99)：

ggcgganaccGACGTCCATCGAATGGTGCAAAACCTTTCGCGGTATGGCATGATAGCGCCCGGAAGA

GAGTCAATTCAGGGTGGTGAATGTGAAACCAGTAACGTTATACGATGTCGCAGAGTATGCCGGT

GTCTCTTATCAGACCGTTTCCCGCGTGGTGAACCAGGCCAGCCACGTTTCTGCGAAAACGCGGG

AAAAAGTCGAAGCGGCGATGGCGGAGCTGAATTACATTCCCAACCGCGTGGCACAACAACTGG

CGGGCAAACAGTCGCTCCTGATTGGCGTTGCCACCTCCAGTCTGGCCCTGCACGCGCCGTCGCA

AATTGTCGCGGCGATTAAATCTCGCGCCGATCAACTGGGTGCCAGCGTGGTGGTGTCGATGGTA

GAACGAAGCGGCGTCGAAGCCTCTAAAGCGGCGGTGCACAATCTTCTCGCGCAACGCGTCAGTG

GGCTCATCATTAACTATCCGCTGGATGACCAGGATGCCATTGCTGTGGAAGCTGCCTGCACTAA

TGTTCCGGCGTTATTTCTTGATGTCTCTGACCAGACACCCATCAACAGTATTATTTTCTCCCATGA

AGACGGTACGCGACTGGGCGTGGAGCATCTGGTCGCATTGGGTCACCAGCAAATCGCGCTGTTA

GCGGGCCCATTAAGTTCTGTCTCGGCGCGTCTGCGTCTGGCTGGCTGGCATAAATATCTCACTCG

CAATCAAATTCAGCCGATAGCGGAACGGGAAGGCGACTCGAGTGCCATGTCCGGTTTTCAACAA

ACCATGCAAATGCTGAATGAGGGCATCGTTCCCACTGCGATGCTGGTTGCCAACGATCAGATGG

CGCTGGGCGCAATGCGCGCCATTACCGAGTCCGGGCTGCGCGTTGGTGCGGATATCTCGGTAGT

GGGATACGACGATACCGAAGACAGCTCCATGTTATATCCCGCCGTTAACCACCATCAAACAGGAT

TTTCGCCTGCTGGGGCAAACCAGCGTGGACCGCTTGGCTGCAACTCTCTCAGGGCCAGGCGGTGA

AGGGCAATCAGCTGTTGCCCGTCTCACTGGTGAAAAGAAAAACCACCCTGGCGCCCAATACGCA

AACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGCAGCTGGCACGACAGGTTTCCCGACTGG

AAAGCGGACAGTAAGGTACCATAGGATCCaggcacagga

用被称为AGebg-LacIQ#5的重组噬菌体将所述构建体输送到 F’tet/GM101的染色体中。在重组和分离之后，只有上述染色体插入 片段还保留在所述细胞内。将它重新命名为F’tet/GM221。在LB中 使用浓度为25微克/毫升的吖啶橙将F’tet附加体从所述菌株中清 除。所述清除后的菌株被确定为四环素敏感性，并且作为GM221保 存。

在大肠杆菌中的表达。在37℃下在LB培养基中生长存在于大 肠杆菌GM221中的每一种pAMG21-Fc-融合构建体的培养物。通过 以20纳克/毫升的最终浓度向培养基中添加合成的自身诱导剂N-(3- 羟基叠烷酰)-DL-高丝氨酸内酯实现了来自luxPR启动子的基因产物 表达的诱导。在37℃下再培养3小时。3小时之后，通过显微技术检 查包含体的存在，然后通过离心收集。在诱导过的培养物中观察到了 折射包含体的存在，这表明Fc融合体最有可能以不可溶的级份在大 肠杆菌中产生的。通过重新悬浮在含有10％β-巯基乙醇的Laemmli 样品缓冲液中直接裂解细胞沉淀，并且通过SDS-PAGE分析。在每 一种场合下，在SDS-PAGE凝胶上都观察到了分子量大致相当的强 的考马斯染色带。

                    实施例3

TALL-1肽体能抑制TALL-1介导的B细胞增殖。

通过阴性选择从C57BL/6脾中分离小鼠B淋巴细胞(MACS CD43(Ly-48)Microbeads，Miltenyi Biotech，Auburn，CA)。在MEM (10％热失活FCS，5×10-5M 2-巯基乙醇，100U/ml青霉素，100微 克/毫升链霉素)中培养纯化的(105)B细胞，培养是在96孔平底组 织培养平板上进行的，重复3次，在37℃，5％二氧化碳的条件下用 2微克/毫升山羊F(ab’)2抗小鼠IgM(Jackson ImmunoResearch Laboratory，West Grove，Pennsylvania)和标明数量的重组TALL-1肽体 培养4天时间。在经过18小时的培养时间之后，根据放射性3[H]胸 苷的吸收测定增殖。

                   实施例4

TALL-1肽体能抑制TALL-1与它的受体结合

用AGP3(又被称为TALL-1，Khare等，Proc.Natl.Acad.Sci. 97：3370-3375，2000)对Reacti-Gel 6x(Pierce)进行预先包衣，并且 用BSA封闭。在室温下将100皮摩尔和40皮摩尔的AGP3肽体样品 与标明的各种浓度的人AGP3一起培养8小时，然后通过人AGP3- 包衣的珠。通过荧光(Cy5)标记的山羊的抗人Fc抗体(Jackson ImmunoResearch)定量珠结合的肽体的数量。结合信号与在结合平衡 时游离肽体的浓度成正比。解离平衡常数(KD)是利用双曲线单一 位点同源结合模型(KinExTM软件)从竞争曲线的非线性回归获得 的。对于与人AGP3结合的AGP3肽体(SEQ ID NO：123)来说， KD大约为4皮摩尔(图10)。

为了确定AGP3肽体是否能中和鼠AGP3结合和人AGP3结合， 采用了BIAcore中和测定。所有实验都是在室温下在BIAcore 3000 上进行的。用10mM乙酸pH4.0将人TACI-Fc蛋白(Xia等， J.Exp. Med.192，137-144，2000)固定在B1芯片上，达到2900RU的水平。 将空白流式细胞用作背景对照。使用含有0.005％P20的流动PBS缓 冲液(不含钙或镁)，在没有和有所标明的各种数量的AGP3肽体(x 轴)的条件下培养1nM重组人AGP3(在添加了0.1毫克/毫升BSA 的流动缓冲液中)，然后加注到所述受体表面上。再生是通过以下方 式进行的：使用8mM甘氨酸pH1.5，1分钟，25mM 3-[环己基氨基]-1- 丙磺酸(CAPS)pH10.5，1mM氯化钠，1分钟。为了测定鼠AGP3 结合，在上述缓冲液中将人his-标记的TACI固定到1000RU上。在 有和没有图11中所标明的各种量的AGP3肽体(x轴)的条件下， 培养5nM重组鼠AGP3(在添加了0.1毫克/毫升BSA的流动缓冲液 中)，然后加注到受体表面上。再生是按照以下方式进行的：10mM 氯化氢pH2，2次，30秒，测定了在有和没有AGP3肽体(SEQ ID NO： 123)的条件下人和鼠AGP3的相对结合(y轴)。相对结合反应是 作为(RU-RU空白/Ruo-RU空白)测定的。AGP3肽体(SEQ ID NO： 123)能抑制人和鼠AGP3与它的受体ACTI的结合(图11A和11B)。

为了检验这种AGP3肽体是否能抑制AGP3与所有三种受体 (TACI，BCMA和BAFFR)的结合，将重组可溶性受体TACI，BCMA 和BAFFR蛋白固定在CM5芯片上。使用10mM乙酸，pH4，将人 TACI-Fc蛋白固定在6300RU上，将BCMA-Fc固定在5000RU上， 而将BAFR-Fc固定在6000RU上。将1nM重组人AGP3(在含有0.1 毫克/毫升BSA和0.1毫克/毫升肝素的流动缓冲液中)或1nM重组 APRIL蛋白(Yu等，Nat.Immunol.，1：252-256，2000)与标明数量的 AGP3肽体一起培养，然后加注到每一种受体表面上。AGP3实验的 再生是这样进行的：8mM甘氨酸pH1.5，1分钟，然后使用25mM CAPS，pH10.5，1mM氯化钠，1分钟。APRIL实验的再生是这样进 行的：8mM甘氨酸pH2，1分钟，然后使用25mM CAPS，pH4.5， 1mM氯化钠，1分钟。测定了AGP3和APRIL的相对结合。AGP3 肽体(SEQ ID NO：123)能抑制AGP3与所有三种受体的结合(图 12A)。AGP3肽体不会影响APRIL与所述受体的结合(图12B)。

                    实施例5

AGP3肽体能抑制AGP3介导的B细胞增殖

通过阴性筛选从C57BL/6脾中分离小鼠B淋巴细胞(MACS CD43(Ly-48)Microbeads，Miltenyi Biotech，Auburn，CA)。基本必 需培养基(MEM)，10％热失活胎牛血清(FCS)，5×10-5M 2-巯基 乙醇，100U/ml青霉素，100微克/毫升链霉素)中培养纯化的(105) B细胞，培养是在96孔平底组织培养平板上进行的，重复3次，在 37℃，5％二氧化碳的条件下用10纳克/毫升AGP3(TALL-1)蛋白 和2微克/毫升山羊F(ab’)2抗小鼠IgM(Jackson ImmunoResearch Laboratory，West Grove，Pennsylvania)和标明数量AGP3肽体(SEQ ID NO：123)一起培养4天时间。在经过18小时的培养时间之后，根 据放射性3[H]胸苷的吸收测定增殖。

                    实施例6

在小鼠中AGP3肽体对AGP3-刺激Ig产生的影响

对从Charles River Laboratory，Wilmington，MA.购买的小鼠 (Balb/c雌性9-14周大的体重为19-21克)的小鼠进行处理。每天 用1毫克/千克人AGP3 i.p.处理小鼠(n＝10)1次，连续进行5天， 然后用5毫克/千克或0.5毫克/千克AGP3肽体(SEQ ID NO：123) 或用盐水或5毫克/千克人Fc处理。其他小鼠不进行处理。在第6天 宰杀小鼠，以便测定血清IgM和IgA，是通过ELISA测定的。简单 地讲，用对IgM或IgA专一的捕捉抗体(Southern Biotechmology Associates，Birmingham，AL)对平板进行包衣，封闭，并且添加标准 稀释液(IgM购自Calbiochem，San Diego，CA，而IgA购自Southern Biotechmology Associates)或测试样品。使用对IgM或IgA专一的生 物素化的抗体(Southern Biotechmology Associates)，neutravidin-缀 合的过氧化物酶(Pierce，Rockford，IL)和四甲基联苯胺(TMB)微 孔过氧化物酶底物(KPL，Gaithersburg，MD)观察捕捉的Ig。在 Thermomax ELISA读数器(Molecular Devices，Menlo Park，CA)上对 光学密度进行定量。

通过5毫克/千克的抗AGP3肽体(SEQ ID NO：123)而不是通 过0.5毫克/千克抑制由人AGP3-刺激的IgM和IgA的血清含量的提 高(图14A和14B)。

                    实施例7

AGP3肽体降低小鼠体内脾B细胞数量

用5毫克/千克或1/5毫克/千克或0.5毫克/千克的AGP3肽体 (SEQ ID NO：123)或用盐水或用5毫克/千克的人Fc连续i.p.处理 小鼠(如上文所述，n＝7)7天时间。在第8天宰杀小鼠，以便统计 脾B细胞数量。将脾脏收集到盐水，并通过手工匀浆融合破碎，以 便得到细胞悬浮液。总的细胞数量是通过H1E计数器(Techincon， Tarrytowu，NY)获得的。B细胞的百分比是通过免疫荧光双染色和 流式细胞测定获得的，分别使用了荧光素异硫氰酸酯(FITC)缀合 的和藻红素(PE)-缀合的Ab抗AD3和B220抗体(PharMingen，San Diego，CA)和FACScan分析仪(Becton and Dickinson，Mountain View， CA)。确定B细胞是CD3-B220+。在所有剂量下，AGP3肽体(SEQ ID NO：123)能以剂量响应形式减少脾B细胞数量(图14)(SEQ ID NO：123)。

                    实施例8

AGP3肽体能减轻小鼠CIA模型的关节炎严重程度

用乳化在完全弗氏佐剂(Difco)中的牛II型胶原(bCII)(从 由他大学购买)通过在尾巴根处经皮注射对8-12周大的DBA/1小鼠 (获自Jackson Laboratories，Bar Harbor，ME)进行免疫。每次注射100 微升含有100微克的bCII。在首次免疫之后3周，用乳化在不完全 弗氏佐剂中的bCII进行加强免疫。从加强免疫当天开始进行治疗4 周时间。检查小鼠关节炎的发展。正如以前所披露的(Khare等， J. Immunol.155：3653-9，1995)，对所有四只爪子分别进行0-3的评分。 因此，对每一只动物来说，关节炎严重程度可以在0-12之间变化。 AGP3(SEQ ID NO：123)肽体治疗显著减轻了关节炎评分的严重程 度(图15)。

在最后治疗(第35天)之后1周采集血清样品，分析抗胶原抗 体含量。用溶解在碳酸缓冲液中的50微升4微克/毫升的牛CII溶液 对高结合ELISA平板(Immulon，Nunc)进行包衣，并且在冰箱中冷 藏保持平板过夜。用冰镇水洗涤平板3次。用75微升的由 PBS/.05％tween20/1％BSA组成的封闭溶液封闭非专一性结合1小 时。以1∶25，1∶100，1∶400，和1∶1600的比例在稀释平板上稀 释样品(用封闭缓冲液稀释)，并且将25微升所述样品添加到ELISA 平板的每一个孔中，使最终稀释倍数为100，400，1600和6400，最 终体积为100微升/孔。在室温下培养3小时之后，再次洗涤平板3 次。将100微升用封闭缓冲液稀释的二级抗体(大鼠抗小鼠IgM，IgG2a， IgG2b，IgG1，IgG3-HRP)添加到每一个孔中，并且培养平板至少2小 时。洗涤平板4次。将100微升TMB溶液(Sigma)添加到每一个 孔中，并且用50微升的25％硫酸终止反应。用ELISA平板读数器在 450nm波长下对所述平板进行读数。将OD与单位/毫升表示的标准 库进行比较。与PBS或Fc对照处理组相比，AGP3肽体(SEQ ID NO： 123)降低了血清抗胶原II IgG1，IgG 3，IgG 2a和IgG 2b水平(图16)。

                    实施例9

AGP3肽体治疗NZB/NZW狼疮小鼠

用PBS或标明剂量的AGP3肽体或人Fc蛋白通过i.p.治疗5周 大的易感狼疮的NZB×NZBWF1小鼠，每周3次，共8周时间。在 治疗之前用Albustix试剂条(Bayer AG)对尿液中的蛋白进行预筛 选。在本研究中不包括尿液中超过100毫克/dl蛋白的小鼠。在该实 验的整个过程中，每月评估尿液中的蛋白。AGP3肽体(SEQ ID NO： 123)治疗导致了蛋白尿发作的推迟，并且提高了成活率(图17)。

AGP3肽体治疗降低了小鼠的B细胞数量。Balb/c小鼠接受了7 次每天1次的腹膜内注射标明数量的AGP3肽体(SEQ ID NO：123) 或人Fc蛋白。在第8天，收集脾，并且对B220+B细胞进行FACS 分析，如表8所示。

表8

AGP3 Pb能减少正常小鼠的B细胞数量   n＝7    剂量(1/天×7)    脾B细胞   (1×10e6)     SD        t测验   盐水     51.3     9.6   Fc     5毫克/千克     45.5     7.1   肽体     5毫克/千克     20.1     3.8     1.37856 E-05     1.5毫克/千克     22.6     6.9     5.10194 E-05     0.5毫克/千克     25.8     3.6     0.000111409

现在对本发明进行了全面说明，本领域技术人员可以理解的 是，在不超出所提出的本发明构思和范围的前提下，可以对它进行多 种改变和改进。

                        序列表

<110>AMGEN INC.

<120>与TALL-1结合的肽和相关分子

<130>A-743(PCT)

<140>PCT/US 02/15273

<141>2002-05-13

<150>US 60/290,196

<151>2001-05-11

<160>197

<170>PatentIn version 3.2

<210>1

<211>684

<212>DNA

<213>人

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(684)

<400>1

atg gac aaa act cac aca tgt cca cct tgt cca gct ccg gaa ctc ctg    48

Met Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu

1               5                   10                  15

ggg gga ccg tca gtc ttc ctc ttc ccc cca aaa ccc aag gac acc ctc    96

Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

            20                  25                  30

atg atc tcc cgg acc cct gag gtc aca tgc gtg gtg gtg gac gtg agc    144

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

        35                  40                  45

cac gaa gac cct gag gtc aag ttc aac tgg tac gtg gac ggc gtg gag    192

His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

    50                  55                  60

gtg cat aat gcc aag aca aag ccg cgg gag gag cag tac aac agc acg    240

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr

65                  70                  75                  80

tac cgt gtg gtc agc gtc ctc acc gtc ctg cac cag gac tgg ctg aat    288

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn

                85                  90                  95

ggc aag gag tac aag tgc aag gtc tcc aac aaa gcc ctc cca gcc ccc    336

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro

            100                 105                 110

atc gag aaa acc atc tcc aaa gcc aaa ggg cag ccc cga gaa cca cag    384

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

        115                 120                 125

gtg tac acc ctg ccc cca tcc cgg gat gag ctg acc aag aac cag gtc    432

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val

    130                 135                 140

agc ctg acc tgc ctg gtc aaa ggc ttc tat ccc agc gac atc gcc gtg    480

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val

145                 150                 155                 160

gag tgg gag agc aat ggg cag ccg gag aac aac tac aag acc acg cct    528

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

                165                 170                 175

ccc gtg ctg gac tcc gac ggc tcc ttc ttc ctc tac agc aag ctc acc    576

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr

            180                 185                 190

gtg gac aag agc agg tgg cag cag ggg aac gtc ttc tca tgc tcc gtg    624

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val

        195                 200                 205

atg cat gag gct ctg cac aac cac tac acg cag aag agc ctc tcc ctg    672

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

    210                 215                 220

tct ccg ggt aaa                                                    684

Ser Pro Gly Lys

225

<210>2

<211>228

<212>PRT

<213>人

<400>2

Met Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu

1               5                   10                  15

Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

            20                  25                  30

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

        35                  40                  45

His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

    50                  55                  60

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr

65                  70                  75                  80

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn

                85                  90                  95

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro

            100                 105                 110

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

        115                 120                 125

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val

    130                 135                 140

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val

145                 150                 155                 160

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

                165                 170                 175

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr

            180                 185                 190

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val

        195                 200                 205

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

    210                 215                 220

Ser Pro Gly Lys

225

<210>3

<211>62

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>NdeI至SalI片段

<220>

<221>CDS

<222>(2)..(61)

<400>3

t atg ccg ggt act tgt ttc ccg ttc ccg tgg gaa tgc act cac gct ggt   49

  Met Pro Gly Thr Cys Phe Pro Phe Pro Trp Glu Cys Thr His Ala Gly

  1               5                   10                  15

gga ggc ggt ggg g                                                   62

Gly Gly Gly Gly

            20

<210>4

<211>20

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成构建体

<400>4

Met Pro Gly Thr Cys Phe Pro Phe Pro Trp Glu Cys Thr His Ala Gly

1               5                   10                  15

Gly Gly Gly Gly

            20

<210>5

<211>62

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>NdeI至SalI片段

<220>

<221>CDS

<222>(2)..(61)

<400>5

t atg tgg ggt gct tgt tgg ccg ttc ccg tgg gaa tgt ttc aaa gaa ggt    49

  Met Trp Gly Ala Cys Trp Pro Phe Pro Trp Glu Cys Phe Lys Glu Gly

  1               5                   10                  15

gga ggc ggt ggg g                                                    62

Gly Gly Gly Gly

            20

<210>6

<211>20

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成构建体

<400>6

Met Trp Gly Ala Cys Trp Pro Phe Pro Trp Glu Cys Phe Lys Glu Gly

1               5                   10                  15

Gly Gly Gly Gly

            20

<210>7

<211>62

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>NdeI至SalI片段

<220>

<221>CDS

<222>(2)..(61)

<400>7

t atg gtt ccg ttc tgt gac ctg ctg act aaa cac tgt ttc gaa gct ggt    49

  Met Val Pro Phe Cys Asp Leu Leu Thr Lys His Cys Phe Glu Ala Gly

  1               5                   10                  15

gga ggc ggt ggg g                                                   62

Gly Gly Gly Gly

            20

<210>8

<211>20

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成构建体

<400>8

Met Val Pro Phe Cys Asp Leu Leu Thr Lys His Cys Phe Glu Ala Gly

1               5                   10                  15

Gly Gly Gly Gly

            20

<210>9

<211>74

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>NdeI至SalI片段

<220>

<221>CDS

<222>(2)..(73)

<400>9

t atg ggt tct cgt tgt aaa tac aaa tgg gac gtt ctg act aaa cag tgt    49

  Met Gly Ser Arg Cys Lys Tyr Lys Trp Asp Val Leu Thr Lys Gln Cys

  1               5                   10                  15

ttc cac cac ggt gga ggc ggt ggg g                                    74

Phe His His Gly Gly Gly Gly Gly

            20

<210>10

<211>24

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成构建体

<400>10

Met Gly Ser Arg Cys Lys Tyr Lys Trp Asp Val Leu Thr Lys Gln Cys

1               5                   10                  15

Phe His His Gly Gly Gly Gly Gly

            20

<210>11

<211>74

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>NdeI至SalI片段

<220>

<221>CDS

<222>(2)..(73)

<400>11

t atg ctg ccg ggt tgt aaa tgg gac ctg ctg atc aaa cag tgg gtt tgt    49

  Met Leu Pro Gly Cys Lys Trp Asp Leu Leu Ile Lys Gln Trp Val Cys

  1               5                   10                  15

gac ccg ctg ggt gga ggc ggt ggg g                                    74

Asp Pro Leu Gly Gly Gly Gly Gly

            20

<210>12

<211>24

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成构建体

<400>12

Met Leu Pro Gly Cys Lys Trp Asp Leu Leu Ile Lys Gln Trp Val Cys

1               5                   10                  15

Asp Pro Leu Gly Gly Gly Gly Gly

            20

<210>13

<211>74

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>NdeI至SalI片段

<220>

<221>CDS

<222>(2)..(73)

<400>13

t atg tct gct gac tgt tac ttc gac atc ctg act aaa tct gac gtt tgt    49

  Met Ser Ala Asp Cys Tyr Phe Asp Ile Leu Thr Lys Ser Asp Val Cys

  1               5                   10                  15

act tct tct ggt gga ggc ggt ggg g                                    74

Thr Ser Ser Gly Gly Gly Gly Gly

            20

<210>14

<211>24

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成构建体

<400>14

Met Ser Ala Asp Cys Tyr Phe Asp Ile Leu Thr Lys Ser Asp Val Cys

1               5                   10                  15

Thr Ser Ser Gly Gly Gly Gly Gly

            20

<210>15

<211>74

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>NdeI至SalI片段

<220>

<221>CDS

<222>(2)..(73)

<400>15

t atg tct gac gac tgt atg tac gac cag ctg act cgt atg ttc atc tgt    49

  Met Ser Asp Asp Cys Met Tyr Asp Gln Leu Thr Arg Met Phe Ile Cys

  1               5                   10                  15

tct aac ctg ggt gga ggc ggt ggg g                                    74

Ser Asn Leu Gly Gly Gly Gly Gly

            20

<210>16

<211>24

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成构建体

<400>16

Met Ser Asp Asp Cys Met Tyr Asp Gln Leu Thr Arg Met Phe Ile Cys

1               5                   10                  15

Ser Asn Leu Gly Gly Gly Gly Gly

            20

<210>17

<211>76

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>NdeI至SalI片段

<220>

<221>CDS

<222>(2)..(73)

<400>17

t atg gac ctg aac tgt aaa tac gac gaa ctg act tac aaa gaa tgg tgt    49

  Met Asp Leu Asn Cys Lys Tyr Asp Glu Leu Thr Tyr Lys Glu Trp Cys

  1               5                   10                  15

cag ttc aac ggg gtg gag gcg gtg ggg                                   76

Gln Phe Asn Gly Val Glu Ala Val

            20

<210>18

<211>24

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成构建体

<400>18

Met Asp Leu Asn Cys Lys Tyr Asp Glu Leu Thr Tyr Lys Glu Trp Cys

1               5                   10                  15

Gln Phe Asn Gly Val Glu Ala Val

            20

<210>19

<211>74

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>NdeI至SalI片段

<220>

<221>CDS

<222>(2)..(73)

<400>19

t atg ttc cac gac tgt aaa tac gac ctg ctg act cgt cag atg gtt tgt    49

  Met Phc His Asp Cys Lys Tyr Asp Leu Leu Thr Arg Gln Met Val Cys

  1               5                   10                  15

cac ggt ctg ggt gga ggc ggt ggg g                                    74

His Gly Leu Gly Gly Gly Gly Gly

            20

<210>20

<211>24

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成构建体

<400>20

Met Phe His Asp Cys Lys Tyr Asp Leu Leu Thr Arg Gln Met Val Cys

1               5                   10                  15

His Gly Leu Gly Gly Gly Gly Gly

            20

<210>21

<211>74

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>NdeI至SalI片段

<220>

<221>CDS

<222>(2)..(73)

<400>21

t atg cgt aac cac tgt ttc tgg gac cac ctg ctg aaa cag gac atc tgt    49

  Met Arg Asn His Cys Phe Trp Asp His Leu Leu Lys Gln Asp Ile Cys

  1               5                   10                  15

ccg tct ccg ggt gga ggc ggt ggg g                                    74

Pro Ser Pro Gly Gly Gly Gly Gly

            20

<210>22

<211>24

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成构建体

<400>22

Met Arg Asn His Cys Phe Trp Asp His Leu Leu Lys Gln Asp Ile Cys

1               5                   10                  15

Pro Ser Pro Gly Gly Gly Gly Gly

            20

<210>23

<211>74

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>NdeI至SalI片段

<220>

<221>CDS

<222>(2)..(73)

<400>23

t atg gct aac cag tgt tgg tgg gac tct ctg ctg aaa aaa aac gtt tgt    49

  Met Ala Asn Gln Cys Trp Trp Asp Ser Leu Leu Lys Lys Asn Val Cys

  1               5                   10                  15

gaa ttc ttc ggt gga ggc ggt ggg g                                    74

Glu Phe Phe Gly Gly Gly Gly Gly

            20

<210>24

<211>24

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成构建体

<400>24

Met Ala Asn Gln Cys Trp Trp Asp Ser Leu Leu Lys Lys Asn Val Cys

1               5                   10                  15

Glu Phe Phe Gly Gly Gly Gly Gly

            20

<210>25

<211>74

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>NdeI至SalI片段

<220>

<221>CDS

<222>(2)..(73)

<400>25

t atg ttc cac gac tgc aaa tgg gac ctg ctg acc aaa cag tgg gtt tgc    49

  Met Phe His Asp Cys Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Val Cys

  1               5                   10                  15

cac ggt ctg ggt gga ggc ggt ggg g                                    74

His Gly Leu Gly Gly Gly Gly Gly

            20

<210>26

<211>24

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成构建体

<400>26

Met Phe His Asp Cys Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Val Cys

1               5                   10                  15

His Gly Leu Gly Gly Gly Gly Gly

            20

<210>27

<211>7285

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>pAMG21-RANK-Fc载体

<400>27

gatcagcagt ccccggaaca tcgtagctga cgccttcgcg ttgctcagtt gtccaacccc     60

ggaaacggga aaaagcaagt tttccccgct cccggcgttt caataactga aaaccatact    120

atttcacagt ttaaatcaca ttaaacgaca gtaatccccg ttgatttgtg cgccaacaca    180

gatcttcgtc acaattctca agtcgctgat ttcaaaaaac tgtagtatcc tctgcgaaac    240

gatccctgtt tgagtattga ggaggcgaga tgtcgcagac agaaaatgca gtgacttcct    300

cattgagtca aaagcggttt gtgcgcagag gtaagcctat gactgactct gagaaacaaa    360

tggccgttgt tgcaagaaaa cgtcttacac acaaagagat aaaagttttt gtcaaaaatc    420

ctctgaagga tctcatggtt gagtactgcg agagagaggg gataacacag gctcagttcg    480

ttgagaaaat catcaaagat gaactgcaaa gactggatat actaaagtaa agactttact    540

ttgtggcgta gcatgctaga ttactgatcg tttaaggaat tttgtggctg gccacgccgt    600

aaggtggcaa ggaactggtt ctgatgtgga tttacaggag ccagaaaagc aaaaaccccg    660

ataatcttct tcaacttttg cgagtacgaa aagattaccg gggcccactt aaaccgtata    720

gccaacaatt cagctatgcg gggagtatag ttatatgccc ggaaaagttc aagacttctt    780

tctgtgctcg ctccttctgc gcattgtaag tgcaggatgg tgtgactgat cttcaccaaa    840

cgtattaccg ccaggtaaag aacccgaatc cggtgtttac accccgtgaa ggtgcaggaa    900

cgctgaagtt ctgcgaaaaa ctgatggaaa aggcggtggg cttcacttcc cgttttgatt    960

tcgccattca tgtggcgcac gcccgttcgc gtgatctgcg tcgccgtatg ccaccagtgc    1020

tgcgtcgtcg ggctattgat gcgctcttgc aggggctgtg tttccactat gacccgctgg    1080

ccaaccgcgt ccagtgctcc atcaccacgc tggccattga gtgcggactg gcgacggagt    1140

ctgctgccgg aaaactctcc atcacccgtg ccacccgtgc cctgacgttc ctgtcagagc    1200

tgggactgat tacctaccag acggaatatg acccgcttat cgggtgctac attccgaccg    1260

atatcacgtt cacatctgca ctgtttgctg ccctcgatgt atcagaggag gcagtggccg    1320

ccgcgcgccg cagccgtgtg gtatgggaaa acaaacaacg caaaaagcag gggctggata    1380

ccctgggcat ggatgaactg atagcgaaag cctggcgttt tgttcgtgag cgttttcgca    1440

gttatcagac agagcttaag tcccgtggaa taaagcgtgc ccgtgcgcgt cgtgatgcgg    1500

acagggaacg tcaggatatt gtcaccctgg tgaaacggca gctgacgcgc gaaatcgcgg    1560

aagggcgctt cactgccaat cgtgaggcgg taaaacgcga agttgagcgt cgtgtgaagg    1620

agcgcatgat tctgtcacgt aaccgtaatt acagccggct ggccacagct tccccctgaa    1680

agtgacctcc tctgaataat ccggcctgcg ccggaggctt ccgcacgtct gaagcccgac    1740

agcgcacaaa aaatcagcac cacatacaaa aaacaacctc atcatccagc ttctggtgca    1800

tccggccccc cctgttttcg atacaaaaca cgcctcacag acggggaatt ttgcttatcc    1860

acattaaact gcaagggact tccccataag gttacaaccg ttcatgtcat aaagcgccat    1920

ccgccagcgt tacagggtgc aatgtatctt ttaaacacct gtttatatct cctttaaact    1980

acttaattac attcatttaa aaagaaaacc tattcactgc ctgtccttgg acagacagat    2040

atgcacctcc caccgcaagc ggcgggcccc taccggagcc gctttagtta caacactcag    2100

acacaaccac cagaaaaacc ccggtccagc gcagaactga aaccacaaag cccctccctc    2160

ataactgaaa agcggccccg ccccggtccg aagggccgga acagagtcgc ttttaattat    2220

gaatgttgta actacttcat catcgctgtc agtcttctcg ctggaagttc tcagtacacg    2280

ctcgtaagcg gccctgacgg cccgctaacg cggagatacg ccccgacttc gggtaaaccc    2340

tcgtcgggac cactccgacc gcgcacagaa gctctctcat ggctgaaagc gggtatggtc    2400

tggcagggct ggggatgggt aaggtgaaat ctatcaatca gtaccggctt acgccgggct    2460

tcggcggttt tactcctgtt tcatatatga aacaacaggt caccgccttc catgccgctg    2520

atgcggcata tcctggtaac gatatctgaa ttgttataca tgtgtatata cgtggtaatg    2580

acaaaaatag gacaagttaa aaatttacag gcgatgcaat gattcaaaca cgtaatcaat    2640

atcgggggtg ggcgaagaac tccagcatga gatccccgcg ctggaggatc atccagccgg    2700

cgtcccggaa aacgattccg aagcccaacc tttcatagaa ggcggcggtg gaatcgaaat    2760

ctcgtgatgg caggttgggc gtcgcttggt cggtcatttc gaaccccaga gtcccgctca    2820

gaagaactcg tcaagaaggc gatagaaggc gatgcgctgc gaatcgggag cggcgatacc    2880

gtaaagcacg aggaagcggt cagcccattc gccgccaagc tcttcagcaa tatcacgggt    2940

agccaacgct atgtcctgat agcggtccgc cacacccagc cggccacagt cgatgaatcc    3000

agaaaagcgg ccattttcca ccatgatatt cggcaagcag gcatcgccat gagtcacgac    3060

gagatcctcg ccgtcgggca tgcgcgcctt gagcctggcg aacagttcgg ctggcgcgag    3120

cccctgatgc tcttcgtcca gatcatcctg atcgacaaga ccggcttcca tccgagtacg    3180

tgctcgctcg atgcgatgtt tcgcttggtg gtcgaatggg caggtagccg gatcaagcgt    3240

atgcagccgc cgcattgcat cagccatgat ggatactttc tcggcaggag caaggtgaga    3300

tgacaggaga tcctgccccg gcacttcgcc caatagcagc cagtcccttc ccgcttcagt    3360

gacaacgtcg agcacagctg cgcaaggaac gcccgtcgtg gccagccacg atagccgcgc    3420

tgcctcgtcc tgcaattcat tcaggacacc ggacaggtcg gtcttgacaa aaagaaccgg    3480

gcgcccctgc gctgacagcc ggaacacggc ggcatcagag cagccgattg tctgttgtgc    3540

ccagtcatag ccgaatagcc tctccaccca agcggccgga gaacctgcgt gcaatccatc    3600

ttgttcaatc atgcgaaacg atcctcatcc tgtctcttga tctgatcttg atcccctgcg    3660

ccatcagatc cttggcggca agaaagccat ccagtttact ttgcagggct tcccaacctt    3720

accagagggc gccccagctg gcaattccgg ttcgcttgct gtccataaaa ccgcccagtc    3780

tagctatcgc catgtaagcc cactgcaagc tacctgcttt ctctttgcgc ttgcgttttc    3840

ccttgtccag atagcccagt agctgacatt catccggggt cagcaccgtt tctgcggact    3900

ggctttctac gtgttccgct tcctttagca gcccttgcgc cctgagtgct tgcggcagcg    3960

tgaagctaca tatatgtgat ccgggcaaat cgctgaatat tccttttgtc tccgaccatc    4020

aggcacctga gtcgctgtct ttttcgtgac attcagttcg ctgcgctcac ggctctggca    4080

gtgaatgggg gtaaatggca ctacaggcgc cttttatgga ttcatgcaag gaaactaccc    4140

ataatacaag aaaagcccgt cacgggcttc tcagggcgtt ttatggcggg tctgctatgt    4200

ggtgctatct gactttttgc tgttcagcag ttcctgccct ctgattttcc agtctgacca    4260

cttcggatta tcccgtgaca ggtcattcag actggctaat gcacccagta aggcagcggt    4320

atcatcaaca ggcttacccg tcttactgtc gaagacgtgc gtaacgtatg catggtctcc    4380

ccatgcgaga gtagggaact gccaggcatc aaataaaacg aaaggctcag tcgaaagact    4440

gggcctttcg ttttatctgt tgtttgtcgg tgaacgctct cctgagtagg acaaatccgc    4500

cgggagcgga tttgaacgtt gcgaagcaac ggcccggagg gtggcgggca ggacgcccgc    4560

cataaactgc caggcatcaa attaagcaga aggccatcct gacggatggc ctttttgcgt    4620

ttctacaaac tcttttgttt atttttctaa atacattcaa atatggacgt cgtacttaac    4680

ttttaaagta tgggcaatca attgctcctg ttaaaattgc tttagaaata ctttggcagc    4740

ggtttgttgt attgagtttc atttgcgcat tggttaaatg gaaagtgacc gtgcgcttac    4800

tacagcctaa tatttttgaa atatcccaag agctttttcc ttcgcatgcc cacgctaaac    4860

attctttttc tcttttggtt aaatcgttgt ttgatttatt atttgctata tttatttttc    4920

gataattatc aactagagaa ggaacaatta atggtatgtt catacacgca tgtaaaaata    4980

aactatctat atagttgtct ttctctgaat gtgcaaaact aagcattccg aagccattat    5040

tagcagtatg aatagggaaa ctaaacccag tgataagacc tgatgatttc gcttctttaa    5100

ttacatttgg agatttttta tttacagcat tgttttcaaa tatattccaa ttaatcggtg    5160

aatgattgga gttagaataa tctactatag gatcatattt tattaaatta gcgtcatcat    5220

aatattgcct ccatttttta gggtaattat ccagaattga aatatcagat ttaaccatag    5280

aatgaggata aatgatcgcg agtaaataat attcacaatg taccatttta gtcatatcag    5340

ataagcattg attaatatca ttattgcttc tacaggcttt aattttatta attattctgt    5400

aagtgtcgtc ggcatttatg tctttcatac ccatctcttt atccttacct attgtttgtc    5460

gcaagttttg cgtgttatat atcattaaaa cggtaataga ttgacatttg attctaataa    5520

attggatttt tgtcacacta ttatatcgct tgaaatacaa ttgtttaaca taagtacctg    5580

taggatcgta caggtttacg caagaaaatg gtttgttata gtcgattaat cgatttgatt    5640

ctagatttgt tttaactaat taaaggagga ataacatatg atcgctccac catgcaccag    5700

tgagaagcat tatgagcatc tgggacggtg ctgtaacaaa tgtgaaccag gaaagtacat    5760

gtcttctaaa tgcactacta cctctgacag tgtatgtctg ccctgtggcc cggatgaata    5820

cttggatagc tggaatgaag aagataaatg cttgctgcat aaagtttgtg atacaggcaa    5880

ggccctggtg gccgtggtcg ccggcaacag tacgaccccc cggcgctgcg cgtgcacggc    5940

tgggtaccac tggagccagg actgcgagtg ctgccgccgc aacaccgagt gcgcgccggg    6000

cctgggcgcc cagcacccgt tgcagctcaa caaggacaca gtgtgcaaac cttgccttgc    6060

aggctacttc tctgatgcct tttcctccac ggacaaatgc agaccctgga ccaactgtac    6120

cttccttgga aagagagtag aacatcatgg gacagagaaa tccgatgtgg tttgcagttc    6180

ttctctgcca gctagaaaac caccaaatga accccatgtt tacgtcgaca aaactcacac    6240

atgtccacct tgtccagctc cggaactcct ggggggaccg tcagtcttcc tcttcccccc    6300

aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag gtcacatgcg tggtggtgga    6360

cgtgagccac gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac gtggacggcg tggaggtgca    6420

taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gtacaacagc acgtaccgtg tggtcagcgt    6480

cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag tacaagtgca aggtctccaa    6540

caaagccctc ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa gccaaagggc agccccgaga    6600

accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggatgagctg accaagaacc aggtcagcct    6660

gacctgcctg gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc gtggagtggg agagcaatgg    6720

gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg gactccgacg gctccttctt    6780

cctctacagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag caggggaacg tcttctcatg    6840

ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag aagagcctct ccctgtctcc    6900

gggtaaataa tggatccgcg gaaagaagaa gaagaagaag aaagcccgaa aggaagctga    6960

gttggctgct gccaccgctg agcaataact agcataaccc cttggggcct ctaaacgggt    7020

cttgaggggt tttttgctga aaggaggaac cgctcttcac gctcttcacg cggataaata    7080

agtaacgatc cggtccagta atgacctcag aactccatct ggatttgttc agaacgctcg    7140

gttgccgccg ggcgtttttt attggtgaga atcgcagcaa cttgtcgcgc caatcgagcc    7200

atgtcgtcgt caacgacccc ccattcaaga acagcaagca gcattgagaa ctttggaatc    7260

cagtccctct tccacctgct gaccg                                          7285

<210>28

<211>7285

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>pAMG21-RANK-Fc载体

<220>

<221>misc_特征

<223>Xaa(Pos1，2，3，15，16，17)各自独立地是缺失的或是氨基酸残基；

     Xaa(Pos5，6，7，9，13)各自独立地是氨基酸残基。

<400>28

Gly Ala Thr Cys Ala Gly Cys Ala Gly Thr Cys Cys Cys Cys Gly Gly

1               5                   10                  15

Ala Ala Cys Ala Thr Cys Gly Thr Ala Gly Cys Thr Gly Ala Cys Gly

            20                  25                  30

Cys Cys Thr Thr Cys Gly Cys Gly Thr Thr Gly Cys Thr Cys Ala Gly

        35                  40                  45

Thr Thr Gly Thr Cys Cys Ala Ala Cys Cys Cys Cys Gly Gly Ala Ala

    50                  55                  60

Ala Cys Gly Gly Gly Ala Ala Ala Ala Ala Gly Cys Ala Ala Gly Thr

65                  70                  75                  80

Thr Thr Thr Cys Cys Cys Cys Gly Cys Thr Cys Cys Cys Gly Gly Cys

                85                  90                  95

Gly Thr Thr Thr Cys Ala Ala Thr Ala Ala Cys Thr Gly Ala Ala Ala

            100                 105                 110

Ala Cys Cys Ala Thr Ala Cys Thr Ala Thr Thr Thr Cys Ala Cys Ala

        115                 120                 125

Gly Thr Thr Thr Ala Ala Ala Thr Cys Ala Cys Ala Thr Thr Ala Ala

    130                 135                 140

Ala Cys Gly Ala Cys Ala Gly Thr Ala Ala Thr Cys Cys Cys Cys Gly

145                 150                 155                 160

Thr Thr Gly Ala Thr Thr Thr Gly Thr Gly Cys Gly Cys Cys Ala Ala

                165                 170                 175

Cys Ala Cys Ala Gly Ala Thr Cys Thr Thr Cys Gly Thr Cys Ala Cys

            180                 185                 190

Ala Ala Thr Thr Cys Thr Cys Ala Ala Gly Thr Cys Gly Cys Thr Gly

        195                 200                 205

Ala Thr Thr Thr Cys Ala Ala Ala Ala Ala Ala Cys Thr Gly Thr Ala

    210                 215                 220

Gly Thr Ala Thr Cys Cys Thr Cys Thr Gly Cys Gly Ala Ala Ala Cys

225                 230                 235                 240

Gly Ala Thr Cys Cys Cys Thr Gly Thr Thr Thr Gly Ala Gly Thr Ala

                245                 250                 255

Thr Thr Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Cys Gly Ala Gly Ala Thr Gly

            260                 265                 270

Thr Cys Gly Cys Ala Gly Ala Cys Ala Gly Ala Ala Ala Ala Thr Gly

        275                 280                 285

Cys Ala Gly Thr Gly Ala Cys Thr Thr Cys Cys Thr Cys Ala Thr Thr

    290                 295                 300

Gly Ala Gly Thr Cys Ala Ala Ala Ala Gly Cys Gly Gly Thr Thr Thr

305                 310                 315                 320

Gly Thr Gly Cys Gly Cys Ala Gly Ala Gly Gly Thr Ala Ala Gly Cys

                325                 330                 335

Cys Thr Ala Thr Gly Ala Cys Thr Gly Ala Cys Thr Cys Thr Gly Ala

            340                 345                 350

Gly Ala Ala Ala Cys Ala Ala Ala Thr Gly Gly Cys Cys Gly Thr Thr

        355                 360                 365

Gly Thr Thr Gly Cys Ala Ala Gly Ala Ala Ala Ala Cys Gly Thr Cys

    370                 375                 380

Thr Thr Ala Cys Ala Cys Ala Cys Ala Ala Ala Gly Ala Gly Ala Thr

385                 390                 395                 400

Ala Ala Ala Ala Gly Thr Thr Thr Thr Thr Gly Thr Cys Ala Ala Ala

            405                 410                 415

Ala Ala Thr Cys Cys Thr Cys Thr Gly Ala Ala Gly Gly Ala Thr Cys

            420                 425                 430

Thr Cys Ala Thr Gly Gly Thr Thr Gly Ala Gly Thr Ala Cys Thr Gly

        435                 440                 445

Cys Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Gly Gly Gly Ala Thr Ala

    450                 455                 460

Ala Cys Ala Cys Ala Gly Gly Cys Thr Cys Ala Gly Thr Thr Cys Gly

465                 470                 475                 480

Thr Thr Gly Ala Gly Ala Ala Ala Ala Thr Cys Ala Thr Cys Ala Ala

                485                 490                 495

Ala Gly Ala Thr Gly Ala Ala Cys Thr Gly Cys Ala Ala Ala Gly Ala

            500                 505                 510

Cys Thr Gly Gly Ala Thr Ala Thr Ala Cys Thr Ala Ala Ala Gly Thr

        515                 520                 525

Ala Ala Ala Gly Ala Cys Thr Thr Thr Ala Cys Thr Thr Thr Gly Thr

    530                 535                 540

Gly Gly Cys Gly Thr Ala Gly Cys Ala Thr Gly Cys Thr Ala Gly Ala

545                 550                 555                 560

Thr Thr Ala Cys Thr Gly Ala Thr Cys Gly Thr Thr Thr Ala Ala Gly

                565                 570                 575

Gly Ala Ala Thr Thr Thr Thr Gly Thr Gly Gly Cys Thr Gly Gly Cys

            580                 585                 590

Cys Ala Cys Gly Cys Cys Gly Thr Ala Ala Gly Gly Thr Gly Gly Cys

        595                 600                 605

Ala Ala Gly Gly Ala Ala Cys Thr Gly Gly Thr Thr Cys Thr Gly Ala

    610                 615                 620

Thr Gly Thr Gly Gly Ala Thr Thr Thr Ala Cys Ala Gly Gly Ala Gly

625                 630                 635                 640

Cys Cys Ala Gly Ala Ala Ala Ala Gly Cys Ala Ala Ala Ala Ala Cys

                645                 650                 655

Cys Cys Cys Gly Ala Thr Ala Ala Thr Cys Thr Thr Cys Thr Thr Cys

            660                 665                 670

Ala Ala Cys Thr Thr Thr Thr Gly Cys Gly Ala Gly Thr Ala Cys Gly

        675                 680                 685

Ala Ala Ala Ala Gly Ala Thr Thr Ala Cys Cys Gly Gly Gly Gly Cys

    690                 695                 700

Cys Cys Ala Cys Thr Thr Ala Ala Ala Cys Cys Gly Thr Ala Thr Ala

705                 710                 715                 720

Gly Cys Cys Ala Ala Cys Ala Ala Thr Thr Cys Ala Gly Cys Thr Ala

                725                 730                 735

Thr Gly Cys Gly Gly Gly Gly Ala Gly Thr Ala Thr Ala Gly Thr Thr

            740                 745                 750

Ala Thr Ala Thr Gly Cys Cys Cys Gly Gly Ala Ala Ala Ala Gly Thr

        755                 760                 765

Thr Cys Ala Ala Gly Ala Cys Thr Thr Cys Thr Thr Thr Cys Thr Gly

    770                 775                 780

Thr Gly Cys Thr Cys Gly Cys Thr Cys Cys Thr Thr Cys Thr Gly Cys

785                 790                 795                 800

Gly Cys Ala Thr Thr Gly Thr Ala Ala Gly Thr Gly Cys Ala Gly Gly

                805                 810                 815

Ala Thr Gly Gly Thr Gly Thr Gly Ala Cys Thr Gly Ala Thr Cys Thr

            820                 825                 830

Thr Cys Ala Cys Cys Ala Ala Ala Cys Gly Thr Ala Thr Thr Ala Cys

        835                 840                 845

Cys Gly Cys Cys Ala Gly Gly Thr Ala Ala Ala Gly Ala Ala Cys Cys

    850                 855                 860

Cys Gly Ala Ala Thr Cys Cys Gly Gly Thr Gly Thr Thr Thr Ala Cys

865                 870                 875                 880

Ala Cys Cys Cys Cys Gly Thr Gly Ala Ala Gly Gly Thr Gly Cys Ala

                885                 890                 895

Gly Gly Ala Ala Cys Gly Cys Thr Gly Ala Ala Gly Thr Thr Cys Thr

            900                 905                 910

Gly Cys Gly Ala Ala Ala Ala Ala Cys Thr Gly Ala Thr Gly Gly Ala

        915                 920                 925

Ala Ala Ala Gly Gly Cys Gly Gly Thr Gly Gly Gly Cys Thr Thr Cys

    930                 935                 940

Ala Cys Thr Thr Cys Cys Cys Gly Thr Thr Thr Thr Gly Ala Thr Thr

945                 950                 955                 960

Thr Cys Gly Cys Cys Ala Thr Thr Cys Ala Thr Gly Thr Gly Gly Cys

                965                 970                 975

Gly Cys Ala Cys Gly Cys Cys Cys Gly Thr Thr Cys Gly Cys Gly Thr

            980                 985                 990

Gly Ala Thr Cys Thr Gly Cys Gly Thr Cys Gly Cys Cys Gly Thr Ala

        995                 1000                1005

Thr Gly Cys Cys Ala Cys Cys Ala Gly Thr Gly Cys Thr Gly Cys

    1010                1015                1020

Gly Thr Cys Gly Thr Cys Gly Gly Gly Cys Thr Ala Thr Thr Gly

    1025                1030                1035

Ala Thr Gly Cys Gly Cys Thr Cys Thr Thr Gly Cys Ala Gly Gly

    1040                1045                1050

Gly Gly Cys Thr Gly Thr Gly Thr Thr Thr Cys Cys Ala Cys Thr

    1055                1060                1065

Ala Thr Gly Ala Cys Cys Cys Gly Cys Thr Gly Gly Cys Cys Ala

    1070                1075                1080

Ala Cys Cys Gly Cys Gly Thr Cys Cys Ala Gly Thr Gly Cys Thr

    1085                1090                1095

Cys Cys Ala Thr Cys Ala Cys Cys Ala Cys Gly Cys Thr Gly Gly

    1100                1105                1110

Cys Cys Ala Thr Thr Gly Ala Gly Thr Gly Cys Gly Gly Ala Cys

    1115                1120                1125

Thr Gly Gly Cys Gly Ala Cys Gly Gly Ala Gly Thr Cys Thr Gly

    1130                1135                1140

Cys Thr Gly Cys Cys Gly Gly Ala Ala Ala Ala Cys Thr Cys Thr

    1145                1150                1155

Cys Cys Ala Thr Cys Ala Cys Cys Cys Gly Thr Gly Cys Cys Ala

    1160                1165                1170

Cys Cys Cys Gly Thr Gly Cys Cys Cys Thr Gly Ala Cys Gly Thr

    1175                1180                1185

Thr Cys Cys Thr Gly Thr Cys Ala Gly Ala Gly Cys Thr Gly Gly

    1190                1195                1200

Gly Ala Cys Thr Gly Ala Thr Thr Ala Cys Cys Thr Ala Cys Cys

    1205                1210                1215

Ala Gly Ala Cys Gly Gly Ala Ala Thr Ala Thr Gly Ala Cys Cys

    1220                1225                1230

Cys Gly Cys Thr Thr Ala Thr Cys Gly Gly Gly Thr Gly Cys Thr

    1235                1240                1245

Ala Cys Ala Thr Thr Cys Cys Gly Ala Cys Cys Gly Ala Thr Ala

    1250                1255                1260

Thr Cys Ala Cys Gly Thr Thr Cys Ala Cys Ala Thr Cys Thr Gly

    1265                1270                1275

Cys Ala Cys Thr Gly Thr Thr Thr Gly Cys Thr Gly Cys Cys Cys

    1280                1285                1290

Thr Cys Gly Ala Thr Gly Thr Ala Thr Cys Ala Gly Ala Gly Gly

    1295                1300                1305

Ala Gly Gly Cys Ala Gly Thr Gly Gly Cys Cys Gly Cys Cys Gly

    1310                1315                1320

Cys Gly Cys Gly Cys Cys Gly Cys Ala Gly Cys Cys Gly Thr Gly

    1325                1330                1335

Thr Gly Gly Thr Ala Thr Gly Gly Gly Ala Ala Ala Ala Cys Ala

    1340                1345                1350

Ala Ala Cys Ala Ala Cys Gly Cys Ala Ala Ala Ala Ala Gly Cys

    1355                1360                1365

Ala Gly Gly Gly Gly Cys Thr Gly Gly Ala Thr Ala Cys Cys Cys

    1370                1375                1380

Thr Gly Gly Gly Cys Ala Thr Gly Gly Ala Thr Gly Ala Ala Cys

    1385                1390                1395

Thr Gly Ala Thr Ala Gly Cys Gly Ala Ala Ala Gly Cys Cys Thr

    1400                1405                1410

Gly Gly Cys Gly Thr Thr Thr Thr Gly Thr Thr Cys Gly Thr Gly

    1415                1420                1425

Ala Gly Cys Gly Thr Thr Thr Thr Cys Gly Cys Ala Gly Thr Thr

    1430                1435                1440

Ala Thr Cys Ala Gly Ala Cys Ala Gly Ala Gly Cys Thr Thr Ala

    1445                1450                1455

Ala Gly Thr Cys Cys Cys Gly Thr Gly Gly Ala Ala Thr Ala Ala

    1460                1465                1470

Ala Gly Cys Gly Thr Gly Cys Cys Cys Gly Thr Gly Cys Gly Cys

    1475                1480                1485

Gly Thr Cys Gly Thr Gly Ala Thr Gly Cys Gly Gly Ala Cys Ala

    1490                1495                1500

Gly Gly Gly Ala Ala Cys Gly Thr Cys Ala Gly Gly Ala Thr Ala

    1505                1510                1515

Thr Thr Gly Thr Cys Ala Cys Cys Cys Thr Gly Gly Thr Gly Ala

    1520                1525                1530

Ala Ala Cys Gly Gly Cys Ala Gly Cys Thr Gly Ala Cys Gly Cys

    1535                1540                1545

Gly Cys Gly Ala Ala Ala Thr Cys Gly Cys Gly Gly Ala Ala Gly

    1550                1555                1560

Gly Gly Cys Gly Cys Thr Thr Cys Ala Cys Thr Gly Cys Cys Ala

    1565                1570                1575

Ala Thr Cys Gly Thr Gly Ala Gly Gly Cys Gly Gly Thr Ala Ala

    1580                1585                1590

Ala Ala Cys Gly Cys Gly Ala Ala Gly Thr Thr Gly Ala Gly Cys

    1595                1600                1605

Gly Thr Cys Gly Thr Gly Thr Gly Ala Ala Gly Gly Ala Gly Cys

    1610                1615                1620

Gly Cys Ala Thr Gly Ala Thr Thr Cys Thr Gly Thr Cys Ala Cys

    1625                1630                1635

Gly Thr Ala Ala Cys Cys Gly Thr Ala Ala Thr Thr Ala Cys Ala

    1640                1645                1650

Gly Cys Cys Gly Gly Cys Thr Gly Gly Cys Cys Ala Cys Ala Gly

    1655                1660                1665

Cys Thr Thr Cys Cys Cys Cys Cys Thr Gly Ala Ala Ala Gly Thr

    1670                1675                1680

Gly Ala Cys Cys Thr Cys Cys Thr Cys Thr Gly Ala Ala Thr Ala

    1685                1690                1695

Ala Thr Cys Cys Gly Gly Cys Cys Thr Gly Cys Gly Cys Cys Gly

    1700                1705                1710

Gly Ala Gly Gly Cys Thr Thr Cys Cys Gly Cys Ala Cys Gly Thr

    1715                1720                1725

Cys Thr Gly Ala Ala Gly Cys Cys Cys Gly Ala Cys Ala Gly Cys

    1730                1735                1740

Gly Cys Ala Cys Ala Ala Ala Ala Ala Ala Thr Cys Ala Gly Cys

    1745                1750                1755

Ala Cys Cys Ala Cys Ala Thr Ala Cys Ala Ala Ala Ala Ala Ala

    1760                1765                1770

Cys Ala Ala Cys Cys Thr Cys Ala Thr Cys Ala Thr Cys Cys Ala

    1775                1780                1785

Gly Cys Thr Thr Cys Thr Gly Gly Thr Gly Cys Ala Thr Cys Cys

    1790                1795                1800

Gly Gly Cys Cys Cys Cys Cys Cys Cys Thr Gly Thr Thr Thr Thr

    1805                1810                1815

Cys Gly Ala Thr Ala Cys Ala Ala Ala Ala Cys Ala Cys Gly Cys

    1820                1825                1830

Cys Thr Cys Ala Cys Ala Gly Ala Cys Gly Gly Gly Gly Ala Ala

    1835                1840                1845

Thr Thr Thr Thr Gly Cys Thr Thr Ala Thr Cys Cys Ala Cys Ala

    1850                1855                1860

Thr Thr Ala Ala Ala Cys Thr Gly Cys Ala Ala Gly Gly Gly Ala

    1865                1870                1875

Cys Thr Thr Cys Cys Cys Cys Ala Thr Ala Ala Gly Gly Thr Thr

    1880                1885                1890

Ala Cys Ala Ala Cys Cys Gly Thr Thr Cys Ala Thr Gly Thr Cys

    1895                1900                1905

Ala Thr Ala Ala Ala Gly Cys Gly Cys Cys Ala Thr Cys Cys Gly

    1910                1915                1920

Cys Cys Ala Gly Cys Gly Thr Thr Ala Cys Ala Gly Gly Gly Thr

    1925                1930                1935

Gly Cys Ala Ala Thr Gly Thr Ala Thr Cys Thr Thr Thr Thr Ala

    1940                1945                1950

Ala Ala Cys Ala Cys Cys Thr Gly Thr Thr Thr Ala Thr Ala Thr

    1955                1960                1965

Cys Thr Cys Cys Thr Thr Thr Ala Ala Ala Cys Thr Ala Cys Thr

    1970                1975                1980

Thr Ala Ala Thr Thr Ala Cys Ala Thr Thr Cys Ala Thr Thr Thr

    1985                1990                1995

Ala Ala Ala Ala Ala Gly Ala Ala Ala Ala Cys Cys Thr Ala Thr

    2000                2005                2010

Thr Cys Ala Cys Thr Gly Cys Cys Thr Gly Thr Cys Cys Thr Thr

    2015                2020                2025

Gly Gly Ala Cys Ala Gly Ala Cys Ala Gly Ala Thr Ala Thr Gly

    2030                2035                2040

Cys Ala Cys Cys Thr Cys Cys Cys Ala Cys Cys Gly Cys Ala Ala

    2045                2050                2055

Gly Cys Gly Gly Cys Gly Gly Gly Cys Cys Cys Cys Thr Ala Cys

    2060                2065                2070

Cys Gly Gly Ala Gly Cys Cys Gly Cys Thr Thr Thr Ala Gly Thr

    2075                2080                2085

Thr Ala Cys Ala Ala Cys Ala Cys Thr Cys Ala Gly Ala Cys Ala

    2090                2095                2100

Cys Ala Ala Cys Cys Ala Cys Cys Ala Gly Ala Ala Ala Ala Ala

    2105                2110                2115

Cys Cys Cys Cys Gly Gly Thr Cys Cys Ala Gly Cys Gly Cys Ala

    2120                2125                2130

Gly Ala Ala Cys Thr Gly Ala Ala Ala Cys Cys Ala Cys Ala Ala

    2135                2140                2145

Ala Gly Cys Cys Cys Cys Thr Cys Cys Cys Thr Cys Ala Thr Ala

    2150                2155                2160

Ala Cys Thr Gly Ala Ala Ala Ala Gly Cys Gly Gly Cys Cys Cys

    2165                2170                2175

Cys Gly Cys Cys Cys Cys Gly Gly Thr Cys Cys Gly Ala Ala Gly

    2180                2185                2190

Gly Gly Cys Cys Gly Gly Ala Ala Cys Ala Gly Ala Gly Thr Cys

    2195                2200                2205

Gly Cys Thr Thr Thr Thr Ala Ala Thr Thr Ala Thr Gly Ala Ala

    2210                2215                2220

Thr Gly Thr Thr Gly Thr Ala Ala Cys Thr Ala Cys Thr Thr Cys

    2225                2230                2235

Ala Thr Cys Ala Thr Cys Gly Cys Thr Gly Thr Cys Ala Gly Thr

    2240                2245                2250

Cys Thr Thr Cys Thr Cys Gly Cys Thr Gly Gly Ala Ala Gly Thr

    2255                2260                2265

Thr Cys Thr Cys Ala Gly Thr Ala Cys Ala Cys Gly Cys Thr Cys

    2270                2275                2280

Gly Thr Ala Ala Gly Cys Gly Gly Cys Cys Cys Thr Gly Ala Cys

    2285                2290                2295

Gly Gly Cys Cys Cys Gly Cys Thr Ala Ala Cys Gly Cys Gly Gly

    2300                2305                2310

Ala Gly Ala Thr Ala Cys Gly Cys Cys Cys Cys Gly Ala Cys Thr

    2315                2320                2325

Thr Cys Gly Gly Gly Thr Ala Ala Ala Cys Cys Cys Thr Cys Gly

    2330                2335                2340

Thr Cys Gly Gly Gly Ala Cys Cys Ala Cys Thr Cys Cys Gly Ala

    2345                2350                2355

Cys Cys Gly Cys Gly Cys Ala Cys Ala Gly Ala Ala Gly Cys Thr

    2360                2365                2370

Cys Thr Cys Thr Cys Ala Thr Gly Gly Cys Thr Gly Ala Ala Ala

    2375                2380                2385

Gly Cys Gly Gly Gly Thr Ala Thr Gly Gly Thr Cys Thr Gly Gly

    2390                2395                2400

Cys Ala Gly Gly Gly Cys Thr Gly Gly Gly Gly Ala Thr Gly Gly

    2405                2410                2415

Gly Thr Ala Ala Gly Gly Thr Gly Ala Ala Ala Thr Cys Thr Ala

    2420                2425                2430

Thr Cys Ala Ala Thr Cys Ala Gly Thr Ala Cys Cys Gly Gly Cys

    2435                2440                2445

Thr Thr Ala Cys Gly Cys Cys Gly Gly Gly Cys Thr Thr Cys Gly

    2450                2455                2460

Gly Cys Gly Gly Thr Thr Thr Thr Ala Cys Thr Cys Cys Thr Gly

    2465                2470                2475

Thr Thr Thr Cys Ala Thr Ala Thr Ala Thr Gly Ala Ala Ala Cys

    2480                2485                2490

Ala Ala Cys Ala Gly Gly Thr Cys Ala Cys Cys Gly Cys Cys Thr

    2495                2500                2505

Thr Cys Cys Ala Thr Gly Cys Cys Gly Cys Thr Gly Ala Thr Gly

    2510                2515                2520

Cys Gly Gly Cys Ala Thr Ala Thr Cys Cys Thr Gly Gly Thr Ala

    2525                2530                2535

Ala Cys Gly Ala Thr Ala Thr Cys Thr Gly Ala Ala Thr Thr Gly

    2540                2545                2550

Thr Thr Ala Thr Ala Cys Ala Thr Gly Thr Gly Thr Ala Thr Ala

    2555                2560                2565

Thr Ala Cys Gly Thr Gly Gly Thr Ala Ala Thr Gly Ala Cys Ala

    2570                2575                2580

Ala Ala Ala Ala Thr Ala Gly Gly Ala Cys Ala Ala Gly Thr Thr

    2585                2590                2595

Ala Ala Ala Ala Ala Thr Thr Thr Ala Cys Ala Gly Gly Cys Gly

    2600                2605                2610

Ala Thr Gly Cys Ala Ala Thr Gly Ala Thr Thr Cys Ala Ala Ala

    2615                2620                2625

Cys Ala Cys Gly Thr Ala Ala Thr Cys Ala Ala Thr Ala Thr Cys

    2630                2635                2640

Gly Gly Gly Gly Gly Thr Gly Gly Gly Cys Gly Ala Ala Gly Ala

    2645                2650                2655

Ala Cys Thr Cys Cys Ala Gly Cys Ala Thr Gly Ala Gly Ala Thr

    2660                2665                2670

Cys Cys Cys Cys Gly Cys Gly Cys Thr Gly Gly Ala Gly Gly Ala

    2675                2680                2685

Thr Cys Ala Thr Cys Cys Ala Gly Cys Cys Gly Gly Cys Gly Thr

    2690                2695                2700

Cys Cys Cys Gly Gly Ala Ala Ala Ala Cys Gly Ala Thr Thr Cys

    2705                2710                2715

Cys Gly Ala Ala Gly Cys Cys Cys Ala Ala Cys Cys Thr Thr Thr

    2720                2725                2730

Cys Ala Thr Ala Gly Ala Ala Gly Gly Cys Gly Gly Cys Gly Gly

    2735                2740                2745

Thr Gly Gly Ala Ala Thr Cys Gly Ala Ala Ala Thr Cys Thr Cys

    2750                2755                2760

Gly Thr Gly Ala Thr Gly Gly Cys Ala Gly Gly Thr Thr Gly Gly

    2765                2770                2775

Gly Cys Gly Thr Cys Gly Cys Thr Thr Gly Gly Thr Cys Gly Gly

    2780                2785                2790

Thr Cys Ala Thr Thr Thr Cys Gly Ala Ala Cys Cys Cys Cys Ala

    2795                2800                2805

Gly Ala Gly Thr Cys Cys Cys Gly Cys Thr Cys Ala Gly Ala Ala

    2810                2815                2820

Gly Ala Ala Cys Thr Cys Gly Thr Cys Ala Ala Gly Ala Ala Gly

    2825                2830                2835

Gly Cys Gly Ala Thr Ala Gly Ala Ala Gly Gly Cys Gly Ala Thr

    2840                2845                2850

Gly Cys Gly Cys Thr Gly Cys Gly Ala Ala Thr Cys Gly Gly Gly

    2855                2860                2865

Ala Gly Cys Gly Gly Cys Gly Ala Thr Ala Cys Cys Gly Thr Ala

    2870                2875                2880

Ala Ala Gly Cys Ala Cys Gly Ala Gly Gly Ala Ala Gly Cys Gly

    2885                2890                2895

Gly Thr Cys Ala Gly Cys Cys Cys Ala Thr Thr Cys Gly Cys Cys

    2900                2905                2910

Gly Cys Cys Ala Ala Gly Cys Thr Cys Thr Thr Cys Ala Gly Cys

    2915                2920                2925

Ala Ala Thr Ala Thr Cys Ala Cys Gly Gly Gly Thr Ala Gly Cys

    2930                2935                2940

Cys Ala Ala Cys Gly Cys Thr Ala Thr Gly Thr Cys Cys Thr Gly

    2945                2950                2955

Ala Thr Ala Gly Cys Gly Gly Thr Cys Cys Gly Cys Cys Ala Cys

    2960                2965                2970

Ala Cys Cys Cys Ala Gly Cys Cys Gly Gly Cys Cys Ala Cys Ala

    2975                2980                2985

Gly Thr Cys Gly Ala Thr Gly Ala Ala Thr Cys Cys Ala Gly Ala

    2990                2995                3000

Ala Ala Ala Gly Cys Gly Gly Cys Cys Ala Thr Thr Thr Thr Cys

    3005                3010                3015

Cys Ala Cys Cys Ala Thr Gly Ala Thr Ala Thr Thr Cys Gly Gly

    3020                3025                3030

Cys Ala Ala Gly Cys Ala Gly Gly Cys Ala Thr Cys Gly Cys Cys

    3035                3040                3045

Ala Thr Gly Ala Gly Thr Cys Ala Cys Gly Ala Cys Gly Ala Gly

    3050                3055                3060

Ala Thr Cys Cys Thr Cys Gly Cys Cys Gly Thr Cys Gly Gly Gly

    3065                3070                3075

Cys Ala Thr Gly Cys Gly Cys Gly Cys Cys Thr Thr Gly Ala Gly

    3080                3085                3090

Cys Cys Thr Gly Gly Cys Gly Ala Ala Cys Ala Gly Thr Thr Cys

    3095                3100                3105

Gly Gly Cys Thr Gly Gly Cys Gly Cys Gly Ala Gly Cys Cys Cys

    3110                3115                3120

Cys Thr Gly Ala Thr Gly Cys Thr Cys Thr Thr Cys Gly Thr Cys

    3125                3130                3135

Cys Ala Gly Ala Thr Cys Ala Thr Cys Cys Thr Gly Ala Thr Cys

    3140                3145                3150

Gly Ala Cys Ala Ala Gly Ala Cys Cys Gly Gly Cys Thr Thr Cys

    3155                3160                3165

Cys Ala Thr Cys Cys Gly Ala Gly Thr Ala Cys Gly Thr Gly Cys

    3170                3175                3180

Thr Cys Gly Cys Thr Cys Gly Ala Thr Gly Cys Gly Ala Thr Gly

    3185                3190                3195

Thr Thr Thr Cys Gly Cys Thr Thr Gly Gly Thr Gly Gly Thr Cys

    3200                3205                3210

Gly Ala Ala Thr Gly Gly Gly Cys Ala Gly Gly Thr Ala Gly Cys

    3215                3220                3225

Cys Gly Gly Ala Thr Cys Ala Ala Gly Cys Gly Thr Ala Thr Gly

    3230                3235                3240

Cys Ala Gly Cys Cys Gly Cys Cys Gly Cys Ala Thr Thr Gly Cys

    3245                3250                3255

Ala Thr Cys Ala Gly Cys Cys Ala Thr Gly Ala Thr Gly Gly Ala

    3260                3265                3270

Thr Ala Cys Thr Thr Thr Cys Thr Cys Gly Gly Cys Ala Gly Gly

    3275                3280                3285

Ala Gly Cys Ala Ala Gly Gly Thr Gly Ala Gly Ala Thr Gly Ala

    3290                3295                3300

Cys Ala Gly Gly Ala Gly Ala Thr Cys Cys Thr Gly Cys Cys Cys

    3305                3310                3315

Cys Gly Gly Cys Ala Cys Thr Thr Cys Gly Cys Cys Cys Ala Ala

    3320                3325                3330

Thr Ala Gly Cys Ala Gly Cys Cys Ala Gly Thr Cys Cys Cys Thr

    3335                3340                3345

Thr Cys Cys Cys Gly Cys Thr Thr Cys Ala Gly Thr Gly Ala Cys

    3350                3355                3360

Ala Ala Cys Gly Thr Cys Gly Ala Gly Cys Ala Cys Ala Gly Cys

    3365                3370                3375

Thr Gly Cys Gly Cys Ala Ala Gly Gly Ala Ala Cys Gly Cys Cys

    3380                3385                3390

Cys Gly Thr Cys Gly Thr Gly Gly Cys Cys Ala Gly Cys Cys Ala

    3395                3400                3405

Cys Gly Ala Thr Ala Gly Cys Cys Gly Cys Gly Cys Thr Gly Cys

    3410                3415                3420

Cys Thr Cys Gly Thr Cys Cys Thr Gly Cys Ala Ala Thr Thr Cys

    3425                3430                3435

Ala Thr Thr Cys Ala Gly Gly Ala Cys Ala Cys Cys Gly Gly Ala

    3440                3445                3450

Cys Ala Gly Gly Thr Cys Gly Gly Thr Cys Thr Thr Gly Ala Cys

    3455                3460                3465

Ala Ala Ala Ala Ala Gly Ala Ala Cys Cys Gly Gly Gly Cys Gly

    3470                3475                3480

Cys Cys Cys Cys Thr Gly Cys Gly Cys Thr Gly Ala Cys Ala Gly

    3485                3490                3495

Cys Cys Gly Gly Ala Ala Cys Ala Cys Gly Gly Cys Gly Gly Cys

    3500                3505                3510

Ala Thr Cys Ala Gly Ala Gly Cys Ala Gly Cys Cys Gly Ala Thr

    3515                3520                3525

Thr Gly Thr Cys Thr Gly Thr Thr Gly Thr Gly Cys Cys Cys Ala

    3530                3535                3540

Gly Thr Cys Ala Thr Ala Gly Cys Cys Gly Ala Ala Thr Ala Gly

    3545                3550                3555

Cys Cys Thr Cys Thr Cys Cys Ala Cys Cys Cys Ala Ala Gly Cys

    3560                3565                3570

Gly Gly Cys Cys Gly Gly Ala Gly Ala Ala Cys Cys Thr Gly Cys

    3575                3580                3585

Gly Thr Gly Cys Ala Ala Thr Cys Cys Ala Thr Cys Thr Thr Gly

    3590                3595                3600

Thr Thr Cys Ala Ala Thr Cys Ala Thr Gly Cys Gly Ala Ala Ala

    3605                3610                3615

Cys Gly Ala Thr Cys Cys Thr Cys Ala Thr Cys Cys Thr Gly Thr

    3620                3625                3630

Cys Thr Cys Thr Thr Gly Ala Thr Cys Thr Gly Ala Thr Cys Thr

    3635                3640                3645

Thr Gly Ala Thr Cys Cys Cys Cys Thr Gly Cys Gly Cys Cys Ala

    3650                3655                3660

Thr Cys Ala Gly Ala Thr Cys Cys Thr Thr Gly Gly Cys Gly Gly

    3665                3670                3675

Cys Ala Ala Gly Ala Ala Ala Gly Cys Cys Ala Thr Cys Cys Ala

    3680                3685                3690

Gly Thr Thr Thr Ala Cys Thr Thr Thr Gly Cys Ala Gly Gly Gly

    3695                3700                3705

Cys Thr Thr Cys Cys Cys Ala Ala Cys Cys Thr Thr Ala Cys Cys

    3710                3715                3720

Ala Gly Ala Gly Gly Gly Cys Gly Cys Cys Cys Cys Ala Gly Cys

    3725                3730                3735

Thr Gly Gly Cys Ala Ala Thr Thr Cys Cys Gly Gly Thr Thr Cys

    3740                3745                3750

Gly Cys Thr Thr Gly Cys Thr Gly Thr Cys Cys Ala Thr Ala Ala

    3755                3760                3765

Ala Ala Cys Cys Gly Cys Cys Cys Ala Gly Thr Cys Thr Ala Gly

    3770                3775                3780

Cys Thr Ala Thr Cys Gly Cys Cys Ala Thr Gly Thr Ala Ala Gly

    3785                3790                3795

Cys Cys Cys Ala Cys Thr Gly Cys Ala Ala Gly Cys Thr Ala Cys

    3800                3805                3810

Cys Thr Gly Cys Thr Thr Thr Cys Thr Cys Thr Thr Thr Gly Cys

    3815                3820                3825

Gly Cys Thr Thr Gly Cys Gly Thr Thr Thr Thr Cys Cys Cys Thr

    3830                3835                3840

Thr Gly Thr Cys Cys Ala Gly Ala Thr Ala Gly Cys Cys Cys Ala

    3845                3850                3855

Gly Thr Ala Gly Cys Thr Gly Ala Cys Ala Thr Thr Cys Ala Thr

    3860                3865                3870

Cys Cys Gly Gly Gly Gly Thr Cys Ala Gly Cys Ala Cys Cys Gly

    3875                3880                3885

Thr Thr Thr Cys Thr Gly Cys Gly Gly Ala Cys Thr Gly Gly Cys

    3890                3895                3900

Thr Thr Thr Cys Thr Ala Cys Gly Thr Gly Thr Thr Cys Cys Gly

    3905                3910                3915

Cys Thr Thr Cys Cys Thr Thr Thr Ala Gly Cys Ala Gly Cys Cys

    3920                3925                3930

Cys Thr Thr Gly Cys Gly Cys Cys Cys Thr Gly Ala Gly Thr Gly

    3935                3940                3945

Cys Thr Thr Gly Cys Gly Gly Cys Ala Gly Cys Gly Thr Gly Ala

    3950                3955                3960

Ala Gly Cys Thr Ala Cys Ala Thr Ala Thr Ala Thr Gly Thr Gly

    3965                3970                3975

Ala Thr Cys Cys Gly Gly Gly Cys Ala Ala Ala Thr Cys Gly Cys

    3980                3985                3990

Thr Gly Ala Ala Thr Ala Thr Thr Cys Cys Thr Thr Thr Thr Gly

    3995                4000                4005

Thr Cys Thr Cys Cys Gly Ala Cys Cys Ala Thr Cys Ala Gly Gly

    4010                4015                4020

Cys Ala Cys Cys Thr Gly Ala Gly Thr Cys Gly Cys Thr Gly Thr

    4025                4030                4035

Cys Thr Thr Thr Thr Thr Cys Gly Thr Gly Ala Cys Ala Thr Thr

    4040                4045                4050

Cys Ala Gly Thr Thr Cys Gly Cys Thr Gly Cys Gly Cys Thr Cys

    4055                4060                4065

Ala Cys Gly Gly Cys Thr Cys Thr Gly Gly Cys Ala Gly Thr Gly

    4070                4075                4080

Ala Ala Thr Gly Gly Gly Gly Gly Thr Ala Ala Ala Thr Gly Gly

    4085                4090                4095

Cys Ala Cys Thr Ala Cys Ala Gly Gly Cys Gly Cys Cys Thr Thr

    4100                4105                4110

Thr Thr Ala Thr Gly Gly Ala Thr Thr Cys Ala Thr Gly Cys Ala

    4115                4120                4125

Ala Gly Gly Ala Ala Ala Cys Thr Ala Cys Cys Cys Ala Thr Ala

    4130                4135                4140

Ala Thr Ala Cys Ala Ala Gly Ala Ala Ala Ala Gly Cys Cys Cys

    4145                4150                4155

Gly Thr Cys Ala Cys Gly Gly Gly Cys Thr Thr Cys Thr Cys Ala

    4160                4165                4170

Gly Gly Gly Cys Gly Thr Thr Thr Thr Ala Thr Gly Gly Cys Gly

    4175                4180                4185

Gly Gly Thr Cys Thr Gly Cys Thr Ala Thr Gly Thr Gly Gly Thr

    4190                4195                4200

Gly Cys Thr Ala Thr Cys Thr Gly Ala Cys Thr Thr Thr Thr Thr

    4205                4210                4215

Gly Cys Thr Gly Thr Thr Cys Ala Gly Cys Ala Gly Thr Thr Cys

    4220                4225                4230

Cys Thr Gly Cys Cys Cys Thr Cys Thr Gly Ala Thr Thr Thr Thr

    4235                4240                4245

Cys Cys Ala Gly Thr Cys Thr Gly Ala Cys Cys Ala Cys Thr Thr

    4250                4255                4260

Cys Gly Gly Ala Thr Thr Ala Thr Cys Cys Cys Gly Thr Gly Ala

    4265                4270                4275

Cys Ala Gly Gly Thr Cys Ala Thr Thr Cys Ala Gly Ala Cys Thr

    4280                4285                4290

Gly Gly Cys Thr Ala Ala Thr Gly Cys Ala Cys Cys Cys Ala Gly

    4295                4300                4305

Thr Ala Ala Gly Gly Cys Ala Gly Cys Gly Gly Thr Ala Thr Cys

    4310                4315                4320

Ala Thr Cys Ala Ala Cys Ala Gly Gly Cys Thr Thr Ala Cys Cys

    4325                4330                4335

Cys Gly Thr Cys Thr Thr Ala Cys Thr Gly Thr Cys Gly Ala Ala

    4340                4345                4350

Gly Ala Cys Gly Thr Gly Cys Gly Thr Ala Ala Cys Gly Thr Ala

    4355                4360                4365

Thr Gly Cys Ala Thr Gly Gly Thr Cys Thr Cys Cys Cys Cys Ala

    4370                4375                4380

Thr Gly Cys Gly Ala Gly Ala Gly Thr Ala Gly Gly Gly Ala Ala

    4385                4390                4395

Cys Thr Gly Cys Cys Ala Gly Gly Cys Ala Thr Cys Ala Ala Ala

    4400                4405                4410

Thr Ala Ala Ala Ala Cys Gly Ala Ala Ala Gly Gly Cys Thr Cys

    4415                4420                4425

Ala Gly Thr Cys Gly Ala Ala Ala Gly Ala Cys Thr Gly Gly Gly

    4430                4435                4440

Cys Cys Thr Thr Thr Cys Gly Thr Thr Thr Thr Ala Thr Cys Thr

    4445                4450                4455

Gly Thr Thr Gly Thr Thr Thr Gly Thr Cys Gly Gly Thr Gly Ala

    4460                4465                4470

Ala Cys Gly Cys Thr Cys Thr Cys Cys Thr Gly Ala Gly Thr Ala

    4475                4480                4485

Gly Gly Ala Cys Ala Ala Ala Thr Cys Cys Gly Cys Cys Gly Gly

    4490                4495                4500

Gly Ala Gly Cys Gly Gly Ala Thr Thr Thr Gly Ala Ala Cys Gly

    4505                4510                4515

Thr Thr Gly Cys Gly Ala Ala Gly Cys Ala Ala Cys Gly Gly Cys

    4520                4525                4530

Cys Cys Gly Gly Ala Gly Gly Gly Thr Gly Gly Cys Gly Gly Gly

    4535                4540                4545

Cys Ala Gly Gly Ala Cys Gly Cys Cys Cys Gly Cys Cys Ala Thr

    4550                4555                4560

Ala Ala Ala Cys Thr Gly Cys Cys Ala Gly Gly Cys Ala Thr Cys

    4565                4570                4575

Ala Ala Ala Thr Thr Ala Ala Gly Cys Ala Gly Ala Ala Gly Gly

    4580                4585                4590

Cys Cys Ala Thr Cys Cys Thr Gly Ala Cys Gly Gly Ala Thr Gly

    4595                4600                4605

Gly Cys Cys Thr Thr Thr Thr Thr Gly Cys Gly Thr Thr Thr Cys

    4610                4615                4620

Thr Ala Cys Ala Ala Ala Cys Thr Cys Thr Thr Thr Thr Gly Thr

    4625                4630                4635

Thr Thr Ala Thr Thr Thr Thr Thr Cys Thr Ala Ala Ala Thr Ala

    4640                4645                4650

Cys Ala Thr Thr Cys Ala Ala Ala Thr Ala Thr Gly Gly Ala Cys

    4655                4660                4665

Gly Thr Cys Gly Thr Ala Cys Thr Thr Ala Ala Cys Thr Thr Thr

    4670                4675                4680

Thr Ala Ala Ala Gly Thr Ala Thr Gly Gly Gly Cys Ala Ala Thr

    4685                4690                4695

Cys Ala Ala Thr Thr Gly Cys Thr Cys Cys Thr Gly Thr Thr Ala

    4700                4705                4710

Ala Ala Ala Thr Thr Gly Cys Thr Thr Thr Ala Gly Ala Ala Ala

    4715                4720                4725

Thr Ala Cys Thr Thr Thr Gly Gly Cys Ala Gly Cys Gly Gly Thr

    4730                4735                4740

Thr Thr Gly Thr Thr Gly Thr Ala Thr Thr Gly Ala Gly Thr Thr

    4745                4750                4755

Thr Cys Ala Thr Thr Thr Gly Cys Gly Cys Ala Thr Thr Gly Gly

    4760                4765                4770

Thr Thr Ala Ala Ala Thr Gly Gly Ala Ala Ala Gly Thr Gly Ala

    4775                4780                4785

Cys Cys Gly Thr Gly Cys Gly Cys Thr Thr Ala Cys Thr Ala Cys

    4790                4795                4800

Ala Gly Cys Cys Thr Ala Ala Thr Ala Thr Thr Thr Thr Thr Gly

    4805                4810                4815

Ala Ala Ala Thr Ala Thr Cys Cys Cys Ala Ala Gly Ala Gly Cys

    4820                4825                4830

Thr Thr Thr Thr Thr Cys Cys Thr Thr Cys Gly Cys Ala Thr Gly

    4835                4840                4845

Cys Cys Cys Ala Cys Gly Cys Thr Ala Ala Ala Cys Ala Thr Thr

    4850                4855                4860

Cys Thr Thr Thr Thr Thr Cys Thr Cys Thr Thr Thr Thr Gly Gly

    4865                4870                4875

Thr Thr Ala Ala Ala Thr Cys Gly Thr Thr Gly Thr Thr Thr Gly

    4880                4885                4890

Ala Thr Thr Thr Ala Thr Thr Ala Thr Thr Thr Gly Cys Thr Ala

    4895                4900                4905

Thr Ala Thr Thr Thr Ala Thr Thr Thr Thr Thr Cys Gly Ala Thr

    4910                4915                4920

Ala Ala Thr Thr Ala Thr Cys Ala Ala Cys Thr Ala Gly Ala Gly

    4925                4930                4935

Ala Ala Gly Gly Ala Ala Cys Ala Ala Thr Thr Ala Ala Thr Gly

    4940                4945                4950

Gly Thr Ala Thr Gly Thr Thr Cys Ala Thr Ala Cys Ala Cys Gly

    4955                4960                4965

Cys Ala Thr Gly Thr Ala Ala Ala Ala Ala Thr Ala Ala Ala Cys

    4970                4975                4980

Thr Ala Thr Cys Thr Ala Thr Ala Thr Ala Gly Thr Thr Gly Thr

    4985                4990                4995

Cys Thr Thr Thr Cys Thr Cys Thr Gly Ala Ala Thr Gly Thr Gly

    5000                5005                5010

Cys Ala Ala Ala Ala Cys Thr Ala Ala Gly Cys Ala Thr Thr Cys

    5015                5020                5025

Cys Gly Ala Ala Gly Cys Cys Ala Thr Thr Ala Thr Thr Ala Gly

    5030                5035                5040

Cys Ala Gly Thr Ala Thr Gly Ala Ala Thr Ala Gly Gly Gly Ala

    5045                5050                5055

Ala Ala Cys Thr Ala Ala Ala Cys Cys Cys Ala Gly Thr Gly Ala

    5060                5065                5070

Thr Ala Ala Gly Ala Cys Cys Thr Gly Ala Thr Gly Ala Thr Thr

    5075                5080                5085

Thr Cys Gly Cys Thr Thr Cys Thr Thr Thr Ala Ala Thr Thr Ala

    5090                5095                5100

Cys Ala Thr Thr Thr Gly Gly Ala Gly Ala Thr Thr Thr Thr Thr

    5105                5110                5115

Thr Ala Thr Thr Thr Ala Cys Ala Gly Cys Ala Thr Thr Gly Thr

    5120                5125                5130

Thr Thr Thr Cys Ala Ala Ala Thr Ala Thr Ala Thr Thr Cys Cys

    5135                5140                5145

Ala Ala Thr Thr Ala Ala Thr Cys Gly Gly Thr Gly Ala Ala Thr

    5150                5155                5160

Gly Ala Thr Thr Gly Gly Ala Gly Thr Thr Ala Gly Ala Ala Thr

    5165                5170                5175

Ala Ala Thr Cys Thr Ala Cys Thr Ala Thr Ala Gly Gly Ala Thr

    5180                5185                5190

Cys Ala Thr Ala Thr Thr Thr Thr Ala Thr Thr Ala Ala Ala Thr

    5195                5200                5205

Thr Ala Gly Cys Gly Thr Cys Ala Thr Cys Ala Thr Ala Ala Thr

    5210                5215                5220

Ala Thr Thr Gly Cys Cys Thr Cys Cys Ala Thr Thr Thr Thr Thr

    5225                5230                5235

Thr Ala Gly Gly Gly Thr Ala Ala Thr Thr Ala Thr Cys Cys Ala

    5240                5245                5250

Gly Ala Ala Thr Thr Gly Ala Ala Ala Thr Ala Thr Cys Ala Gly

    5255                5260                5265

Ala Thr Thr Thr Ala Ala Cys Cys Ala Thr Ala Gly Ala Ala Thr

    5270                5275                5280

Gly Ala Gly Gly Ala Thr Ala Ala Ala Thr Gly Ala Thr Cys Gly

    5285                5290                5295

Cys Gly Ala Gly Thr Ala Ala Ala Thr Ala Ala Thr Ala Thr Thr

    5300                5305                5310

Cys Ala Cys Ala Ala Thr Gly Thr Ala Cys Cys Ala Thr Thr Thr

    5315                5320                5325

Thr Ala Gly Thr Cys Ala Thr Ala Thr Cys Ala Gly Ala Thr Ala

    5330                5335                5340

Ala Gly Cys Ala Thr Thr Gly Ala Thr Thr Ala Ala Thr Ala Thr

    5345                5350                5355

Cys Ala Thr Thr Ala Thr Thr Gly Cys Thr Thr Cys Thr Ala Cys

    5360                5365                5370

Ala Gly Gly Cys Thr Thr Thr Ala Ala Thr Thr Thr Thr Ala Thr

    5375                5380                5385

Thr Ala Ala Thr Thr Ala Thr Thr Cys Thr Gly Thr Ala Ala Gly

    5390                5395                5400

Thr Gly Thr Cys Gly Thr Cys Gly Gly Cys Ala Thr Thr Thr Ala

    5405                5410                5415

Thr Gly Thr Cys Thr Thr Thr Cys Ala Thr Ala Gys Cys Cys Ala

    5420                5425                5430

Thr Cys Thr Cys Thr Thr Thr Ala Thr Cys Cys Thr Thr Ala Cys

    5435                5440                5445

Cys Thr Ala Thr Thr Gly Thr Thr Thr Gly Thr Cys Gly Cys Ala

    5450                5455                5460

Ala Gly Thr Thr Thr Thr Gly Cys Gly Thr Gly Thr Thr Ala Thr

    5465                5470                5475

Ala Thr Ala Thr Cys Ala Thr Thr Ala Ala Ala Ala Cys Gly Gly

    5480                5485                5490

Thr Ala Ala Thr Ala Gly Ala Thr Thr Gly Ala Cys Ala Thr Thr

    5495                5500                5505

Thr Gly Ala Thr Thr Cys Thr Ala Ala Thr Ala Ala Ala Thr Thr

    5510                5515                5520

Gly Gly Ala Thr Thr Thr Thr Thr Gly Thr Cys Ala Cys Ala Cys

    5525                5530                5535

Thr Ala Thr Thr Ala Thr Ala Thr Cys Gly Cys Thr Thr Gly Ala

    5540                5545                5550

Ala Ala Thr Ala Cys Ala Ala Thr Thr Gly Thr Thr Thr Ala Ala

    5555                5560                5565

Cys Ala Thr Ala Ala Gly Thr Ala Cys Cys Thr Gly Thr Ala Gly

    5570                5575                5580

Gly Ala Thr Cys Gly Thr Ala Cys Ala Gly Gly Thr Thr Thr Ala

    5585                5590                5595

Cys Gly Cys Ala Ala Gly Ala Ala Ala Ala Thr Gly Gly Thr Thr

    5600                5605                5610

Thr Gly Thr Thr Ala Thr Ala Gly Thr Cys Gly Ala Thr Thr Ala

    5615                5620                5625

Ala Thr Cys Gly Ala Thr Thr Thr Gly Ala Thr Thr Cys Thr Ala

    5630                5635                5640

Gly Ala Thr Thr Thr Gly Thr Thr Thr Thr Ala Ala Cys Thr Ala

    5645                5650                5655

Ala Thr Thr Ala Ala Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Ala Thr Ala

    5660                5665                5670

Ala Cys Ala Thr Ala Thr Gly Ala Thr Cys Gly Cys Thr Cys Cys

    5675                5680                5685

Ala Cys Cys Ala Thr Gly Cys Ala Cys Cys Ala Gly Thr Gly Ala

    5690                5695                5700

Gly Ala Ala Gly Cys Ala Thr Thr Ala Thr Gly Ala Gly Cys Ala

    5705                5710                5715

Thr Cys Thr Gly Gly Gly Ala Cys Gly Gly Thr Gly Cys Thr Gly

    5720                5725                5730

Thr Ala Ala Cys Ala Ala Ala Thr Gly Thr Gly Ala Ala Cys Cys

    5735                5740                5745

Ala Gly Gly Ala Ala Ala Gly Thr Ala Cys Ala Thr Gly Thr Cys

    5750                5755                5760

Thr Thr Cys Thr Ala Ala Ala Thr Gly Cys Ala Cys Thr Ala Cys

    5765                5770                5775

Thr Ala Cys Cys Thr Cys Thr Gly Ala Cys Ala Gly Thr Gly Thr

    5780                5785                5790

Ala Thr Gly Thr Cys Thr Gly Cys Cys Cys Thr Gly Thr Gly Gly

    5795                5800                5805

Cys Cys Cys Gly Gly Ala Thr Gly Ala Ala Thr Ala Cys Thr Thr

    5810                5815                5820

Gly Gly Ala Thr Ala Gly Cys Thr Gly Gly Ala Ala Thr Gly Ala

    5825                5830                5835

Ala Gly Ala Ala Gly Ala Thr Ala Ala Ala Thr Gly Cys Thr Thr

    5840                5845                5850

Gly Cys Thr Gly Cys Ala Thr Ala Ala Ala Gly Thr Thr Thr Gly

    5855                5860                5865

Thr Gly Ala Thr Ala Cys Ala Gly Gly Cys Ala Ala Gly Gly Cys

    5870                5875                5880

Cys Cys Thr Gly Gly Thr Gly Gly Cys Cys Gly Thr Gly Gly Thr

    5885                5890                5895

Cys Gly Cys Cys Gly Gly Cys Ala Ala Cys Ala Gly Thr Ala Cys

    5900                5905                5910

Gly Ala Cys Cys Cys Cys Cys Cys Gly Gly Cys Gly Cys Thr Gly

    5915                5920                5925

Cys Gly Cys Gly Thr Gly Cys Ala Cys Gly Gly Cys Thr Gly Gly

    5930                5935                5940

Gly Thr Ala Cys Cys Ala Cys Thr Gly Gly Ala Gly Cys Cys Ala

    5945                5950                5955

Gly Gly Ala Cys Thr Gly Cys Gly Ala Gly Thr Gly Cys Thr Gly

    5960                5965                5970

Cys Cys Gly Cys Cys Gly Cys Ala Ala Cys Ala Cys Cys Gly Ala

    5975                5980                5985

Gly Thr Gly Cys Gly Cys Gly Cys Cys Gly Gly Gly Cys Cys Thr

    5990                5995                6000

Gly Gly Gly Cys Gly Cys Cys Cys Ala Gly Cys Ala Cys Cys Cys

    6005                6010                6015

Gly Thr Thr Gly Cys Ala Gly Cys Thr Cys Ala Ala Cys Ala Ala

    6020                6025                6030

Gly Gly Ala Cys Ala Cys Ala Gly Thr Gly Thr Gly Cys Ala Ala

    6035                6040                6045

Ala Cys Cys Thr Thr Gly Cys Cys Thr Thr Gly Cys Ala Gly Gly

    6050                6055                6060

Cys Thr Ala Cys Thr Thr Cys Thr Cys Thr Gly Ala Thr Gly Cys

    6065                6070                6075

Cys Thr Thr Thr Thr Cys Cys Thr Cys Cys Ala Cys Gly Gly Ala

    6080                6085                6090

Cys Ala Ala Ala Thr Gly Cys Ala Gly Ala Cys Cys Cys Thr Gly

    6095                6100                6105

Gly Ala Cys Cys Ala Ala Cys Thr Gly Thr Ala Cys Cys Thr Thr

    6110                6115                6120

Cys Cys Thr Thr Gly Gly Ala Ala Ala Gly Ala Gly Ala Gly Thr

    6125                6130                6135

Ala Gly Ala Ala Cys Ala Thr Cys Ala Thr Gly Gly Gly Ala Cys

    6140                6145                6150

Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Thr Cys Cys Gly Ala Thr Gly Thr

    6155                6160                6165

Gly Gly Thr Thr Thr Gly Cys Ala Gly Thr Thr Cys Thr Thr Cys

    6170                6175                6180

Thr Cys Thr Gly Cys Cys Ala Gly Cys Thr Ala Gly Ala Ala Ala

    6185                6190                6195

Ala Cys Cys Ala Cys Cys Ala Ala Ala Thr Gly Ala Ala Cys Cys

    6200                6205                6210

Cys Cys Ala Thr Gly Thr Thr Thr Ala Cys Gly Thr Cys Gly Ala

    6215                6220                6225

Cys Ala Ala Ala Ala Cys Thr Cys Ala Cys Ala Cys Ala Thr Gly

    6230                6235                6240

Thr Cys Cys Ala Cys Cys Thr Thr Gly Thr Cys Cys Ala Gly Cys

    6245                6250                6255

Thr Cys Cys Gly Gly Ala Ala Cys Thr Cys Cys Thr Gly Gly Gly

    6260                6265                6270

Gly Gly Gly Ala Cys Cys Gly Thr Cys Ala Gly Thr Cys Thr Thr

    6275                6280                6285

Cys Cys Thr Cys Thr Thr Cys Cys Cys Cys Cys Cys Ala Ala Ala

    6290                6295                6300

Ala Cys Cys Cys Ala Ala Gly Gly Ala Cys Ala Cys Cys Cys Thr

    6305                6310                6315

Cys Ala Thr Gly Ala Thr Cys Thr Cys Cys Cys Gly Gly Ala Cys

    6320                6325                6330

Cys Cys Cys Thr Gly Ala Gly Gly Thr Cys Ala Cys Ala Thr Gly

    6335                6340                6345

Cys Gly Thr Gly Gly Thr Gly Gly Thr Gly Gly Ala Cys Gly Thr

    6350                6355                6360

Gly Ala Gly Cys Cys Ala Cys Gly Ala Ala Gly Ala Cys Cys Cys

    6365                6370                6375

Thr Gly Ala Gly Gly Thr Cys Ala Ala Gly Thr Thr Cys Ala Ala

    6380                6385                6390

Cys Thr Gly Gly Thr Ala Cys Gly Thr Gly Gly Ala Cys Gly Gly

    6395                6400                6405

Cys Gly Thr Gly Gly Ala Gly Gly Thr Gly Cys Ala Thr Ala Ala

    6410                6415                6420

Thr Gly Cys Cys Ala Ala Gly Ala Cys Ala Ala Ala Gly Cys Cys

    6425                6430                6435

Gly Cys Gly Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Cys Ala Gly Thr Ala

    6440                6445                6450

Cys Ala Ala Cys Ala Gly Cys Ala Cys Gly Thr Ala Cys Cys Gly

    6455                6460                6465

Thr Gly Thr Gly Gly Thr Cys Ala Gly Cys Gly Thr Cys Cys Thr

    6470                6475                6480

Cys Ala Cys Cys Gly Thr Cys Cys Thr Gly Cys Ala Cys Cys Ala

    6485                6490                6495

Gly Gly Ala Cys Thr Gly Gly Cys Thr Gly Ala Ala Thr Gly Gly

    6500                6505                6510

Cys Ala Ala Gly Gly Ala Gly Thr Ala Cys Ala Ala Gly Thr Gly

    6515                6520                6525

Cys Ala Ala Gly Gly Thr Cys Thr Cys Cys Ala Ala Cys Ala Ala

    6530                6535                6540

Ala Gly Cys Cys Cys Thr Cys Cys Cys Ala Gly Cys Cys Cys Cys

    6545                6550                6555

Cys Ala Thr Cys Gly Ala Gly Ala Ala Ala Ala Cys Cys Ala Thr

    6560                6565                6570

Cys Thr Cys Cys Ala Ala Ala Gly Cys Cys Ala Ala Ala Gly Gly

    6575                6580                6585

Gly Cys Ala Gly Cys Cys Cys Cys Gly Ala Gly Ala Ala Cys Cys

    6590                6595                6600

Ala Cys Ala Gly Gly Thr Gly Thr Ala Cys Ala Cys Cys Cys Thr

    6605                6610                6615

Gly Cys Cys Cys Cys Cys Ala Thr Cys Cys Cys Gly Gly Gly Ala

    6620                6625                6630

Thr Gly Ala Gly Cys Thr Gly Ala Cys Cys Ala Ala Gly Ala Ala

    6635                6640                6645

Cys Cys Ala Gly Gly Thr Cys Ala Gly Cys Cys Thr Gly Ala Cys

    6650                6655                6660

Cys Thr Gly Cys Cys Thr Gly Gly Thr Cys Ala Ala Ala Gly Gly

    6665                6670                6675

Cys Thr Thr Cys Thr Ala Thr Cys Cys Cys Ala Gly Cys Gly Ala

    6680                6685                6690

Cys Ala Thr Cys Gly Cys Cys Gly Thr Gly Gly Ala Gly Thr Gly

    6695                6700                6705

Gly Gly Ala Gly Ala Gly Cys Ala Ala Thr Gly Gly Gly Cys Ala

    6710                6715                6720

Gly Cys Cys Gly Gly Ala Gly Ala Ala Cys Ala Ala Cys Thr Ala

    6725                6730                6735

Cys Ala Ala Gly Ala Cys Cys Ala Cys Gly Cys Cys Thr Cys Cys

    6740                6745                6750

Cys Gly Thr Gly Cys Thr Gly Gly Ala Cys Thr Cys Cys Gly Ala

    6755                6760                6765

Cys Gly Gly Cys Thr Cys Cys Thr Thr Cys Thr Thr Cys Cys Thr

    6770                6775                6780

Cys Thr Ala Cys Ala Gly Cys Ala Ala Gly Cys Thr Cys Ala Cys

    6785                6790                6795

Cys Gly Thr Gly Gly Ala Cys Ala Ala Gly Ala Gly Cys Ala Gly

    6800                6805                6810

Gly Thr Gly Gly Cys Ala Gly Cys Ala Gly Gly Gly Gly Ala Ala

    68l5                6820                6825

Cys Gly Thr Cys Thr Thr Cys Thr Cys Ala Thr Gly Cys Thr Cys

    6830                6835                6840

Cys Gly Thr Gly Ala Thr Gly Cys Ala Thr Gly Ala Gly Gly Cys

    6845                6850                6855

Thr Cys Thr Gly Cys Ala Cys Ala Ala Cys Cys Ala Cys Thr Ala

    6860                6865                6870

Cys Ala Cys Gly Cys Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gly Cys Cys Thr

    6875                6880                6885

Cys Thr Cys Cys Cys Thr Gly Thr Cys Thr Cys Cys Gly Gly Gly

    6890                6895                6900

Thr Ala Ala Ala Thr Ala Ala Thr Gly Gly Ala Thr Cys Cys Gly

    6905                6910                6915

Cys Gly Gly Ala Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Ala

    6920                6925                6930

Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Ala Ala Gly Cys Cys Cys Gly

    6935                6940                6945

Ala Ala Ala Gly Gly Ala Ala Gly Cys Thr Gly Ala Gly Thr Thr

    6950                6955                6960

Gly Gly Cys Thr Gly Cys Thr Gly Cys Cys Ala Cys Cys Gly Cys

    6965                6970                6975

Thr Gly Ala Gly Cys Ala Ala Thr Ala Ala Cys Thr Ala Gly Cys

    6980                6985                6990

Ala Thr Ala Ala Cys Cys Cys Cys Thr Thr Gly Gly Gly Gly Cys

    6995                7000                7005

Cys Thr Cys Thr Ala Ala Ala Cys Gly Gly Gly Thr Cys Thr Thr

    7010                7015                7020

Gly Ala Gly Gly Gly Gly Thr Thr Thr Thr Thr Thr Gly Cys Thr

    7025                7030                7035

Gly Ala Ala Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Ala Cys Cys Gly Cys

    7040                7045                7050

Thr Cys Thr Thr Cys Ala Cys Gly Cys Thr Cys Thr Thr Cys Ala

    7055                7060                7065

Cys Gly Cys Gly Gly Ala Thr Ala Ala Ala Thr Ala Ala Gly Thr

    7070                7075                7080

Ala Ala Cys Gly Ala Thr Cys Cys Gly Gly Thr Cys Cys Ala Gly

    7085                7090                7095

Thr Ala Ala Thr Gly Ala Cys Cys Thr Cys Ala Gly Ala Ala Cys

    7100                7105                7110

Thr Cys Cys Ala Thr Cys Thr Gly Gly Ala Thr Thr Thr Gly Thr

    7115                7120                7125

Thr Cys Ala Gly Ala Ala Cys Gly Cys Thr Cys Gly Gly Thr Thr

    7130                7135                7140

Gly Cys Cys Gly Cys Cys Gly Gly Gly Cys Gly Thr Thr Thr Thr

    7145                7150                7155

Thr Thr Ala Thr Thr Gly Gly Thr Gly Ala Gly Ala Ala Thr Cys

    7160                7165                7170

Gly Cys Ala Gly Cys Ala Ala Cys Thr Thr Gly Thr Cys Gly Cys

    7175                7180                7185

Gly Cys Cys Ala Ala Thr Cys Gly Ala Gly Cys Cys Ala Thr Gly

    7190                7195                7200

Thr Cys Gly Thr Cys Gly Thr Cys Ala Ala Cys Gly Ala Cys Cys

    7205                7210                7215

Cys Cys Cys Cys Ala Thr Thr Cys Ala Ala Gly Ala Ala Cys Ala

    7220                7225                7230

Gly Cys Ala Ala Gly Cys Ala Gly Cys Ala Thr Thr Gly Ala Gly

    7235                7240                7245

Ala Ala Cys Thr Thr Thr Gly Gly Ala Ala Thr Cys Cys Ala Gly

    7250                7255                7260

Thr Cys Cys Cys Thr Cys Thr Thr Cys Cys Ala Cys Cys Thr Gly

    7265                7270                7275

Cys Thr Gly Ala Cys Cys Gly

    7280                7285

<210>29

<211>14

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>29

Pro Gly Thr Cys Phe Pro Phe Pro Trp Glu Cys Thr His Ala

1               5                   10

<210>30

<211>14

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>30

Trp Gly Ala Cys Trp Pro Phe Pro Trp Glu Cys Phe Lys Glu

1               5                   10

<210>31

<211>14

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>31

Val Pro Phe Cys Asp Leu Leu Thr Lys His Cys Phe Glu Ala

1               5                   10

<210>32

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>32

Gly Ser Arg Cys Lys Tyr Lys Trp Asp Val Leu Thr Lys Gln Cys Phe

1               5                   10                  15

His His

<210>33

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>33

Leu Pro Gly Cys Lys Trp Asp Leu Leu Ile Lys Gln Trp Val Cys Asp

1               5                   10                  15

Pro Leu

<210>34

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>34

Ser Ala Asp Cys Tyr Phe Asp Ile Leu Thr Lys Ser Asp Val Cys Thr

1               5                   10                  15

Ser Ser

<210>35

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>35

Ser Asp Asp Cys Met Tyr Asp Gln Leu Thr Arg Met Phe Ile Cys Ser

1               5                   10                  15

Asn Leu

<210>36

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>36

Asp Leu Asn Cys Lys Tyr Asp Glu Leu Thr Tyr Lys Glu Trp Cys Gln

1               5                   10                  15

Phe Asn

<210>37

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>37

Phe His Asp Cys Lys Tyr Asp Leu Leu Thr Arg Gln Met Val Cys His

1               5                   10                  15

Gly Leu

<210>38

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>38

Arg Asn His Cys Phe Trp Asp His Leu Leu Lys Gln Asp Ile Cys Pro

1               5                   10                  15

Ser Pro

<210>39

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>39

Ala Asn Gln Cys Trp Trp Asp Ser Leu Thr Lys Lys Asn Val Cys Glu

1               5                   10                  15

Phe Phe

<210>40

<211>8

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>聚甘氨酸接头

<400>40

gggkgggg                                                            8

<210>41

<211>8

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>聚甘氨酸接头

<220>

<221>misc_特征

<222>(4)..(4)

<223>N是天冬酰胺

<400>41

gggngsgg                                                            8

<210>42

<211>8

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>聚甘氨酸接头

<400>42

gggcgggg                                                            8

<210>43

<211>5

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>聚甘氨酸接头

<400>43

Gly Pro Asn Gly Gly

1               5

<210>44

<211>19

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>肽键

<220>

<221>misc_特征

<222>(19)..(19)

<223>Xaa＝肽键

     Fc结构域在第19位与C末端连接

<400>44

Leu Pro Gly Cys Lys Trp Asp Leu Leu Ile Lys Gln Trp Val Cys Asp

1               5                   10                  15

Pro Leu Xaa

<210>45

<211>19

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>肽键

<220>

<221>misc_特征

<222>(1)..(1)

<223>Xaa＝肽键

     Fc结构域在第1位与N末端连接

<400>45

Xaa Leu Pro Gly Cys Lys Trp Asp Leu Leu Ile Lys Gln Trp Val Cys

1               5                   10                  15

Asp Pro Leu

<210>46

<211>38

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>肽键

<220>

<221>misc_特征

<222>(19)..(19)

<223>Xaa＝肽键

<220>

<221>misc_特征

<222>(38)..(38)

<223>Xaa＝肽键

     Fc结构域在第38位与C末端连接

<400>46

Leu Pro Gly Cys Lys Trp Asp Leu Leu Ile Lys Gln Trp Val Cys Asp

1               5                   10                  15

Pro Leu Xaa Leu Pro Gly Cys Lys Trp Asp Leu Leu Ile Lys Gln Trp

            20                  25                  30

Val Cys Asp Pro Leu Xaa

        35

<210>47

<211>38

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>肽键

<220>

<221>misc_特征

<222>(1)..(1)

<223>Xaa＝肽键

     Fc结构域在第1位与N末端连接

<220>

<221>misc_特征

<222>(20)..(20)

<223>Xaa＝肽键

<400>47

Xaa Leu Pro Gly Cys Lys Trp Asp Leu Leu Ile Lys Gln Trp Val Cys

1               5                   10                  15

Asp Pro Leu Xaa Leu Pro Gly Cys Lys Trp Asp Leu Leu Ile Lys Gln

            20                  25                  30

Trp Val Cys Asp Pro Leu

        35

<210>48

<211>19

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>肽键

<220>

<221>misc_特征

<222>(19)..(19)

<223>Xaa＝肽键

     Fc结构域在第19位与C末端连接

<400>48

Ser Ala Asp Cys Tyr Phe Asp Ile Leu Thr Lys Ser Asp Val Cys Thr

1               5                   10                  15

Ser Ser Xaa

<210>49

<211>19

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>肽键

<220>

<221>misc_特征

<222>(1)..(1)

<223>Xaa＝肽键

     Fc结构域在第1位与N末端连接

<400>49

Xaa Ser Ala Asp Cys Tyr Phe Asp Ile Leu Thr Lys Ser Asp Val Cys

1               5                   10                  15

Thr Ser Ser

<210>50

<211>36

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>肽键

<220>

<221>misc_特征

<222>(18)..(18)

<223>Xaa＝肽键

<220>

<221>misc_特征

<222>(36)..(36)

<223>Xaa＝肽键

     Fc结构域在第36位与C末端连接

<400>50

Ser Ala Asp Cys Tyr Phe Asp Ile Leu Thr Lys Ser Asp Val Thr Ser

1               5                   10                  15

Ser Xaa Ser Ala Asp Cys Tyr Phe Asp Ile Leu Thr Lys Ser Asp Val

            20                  25                  30

Thr Ser Ser Xaa

        35

<210>51

<211>36

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>肽键

<220>

<221>misc_特征

<222>(1)..(1)

<223>Xaa＝肽键

     Fc结构域在第1位与N末端连接

<220>

<221>misc_特征

<222>(19)..(19)

<223>Xaa＝肽键

<400>51

Xaa Ser Ala Asp Cys Tyr Phe Asp Ile Leu Thr Lys Ser Asp Val Thr

1               5                   10                  15

Ser Ser Xaa Ser Ala Asp Cys Tyr Phe Asp Ile Leu Thr Lys Ser Asp

            20                  25                  30

Val Thr Ser Ser

        35

<210>52

<211>19

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>肽键

<220>

<221>misc_特征

<222>(19)..(19)

<223>Xaa＝肽键

     Fc结构域在第19位与C末端连接

<400>52

Phe His Asp Cys Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Val Cys His

1               5                   10                  15

Gly Leu Xaa

<210>53

<211>19

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>肽键

<220>

<221>misc_特征

<222>(1)..(1)

<223>Xaa＝肽键

     Fc结构域在第1位与N末端连接

<400>53

Xaa Phe His Asp Cys Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Val Cys

1               5                   10                  15

His Gly Leu

<210>54

<211>38

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>肽键

<220>

<221>misc_特征

<222>(19)..(19)

<223>Xaa＝肽键

<220>

<221>misc_特征

<222>(38)..(38)

<223>Xaa＝肽键

    Fc结构域在第38位与C末端连接

<400>54

Phe His Asp Cys Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Val Cys His

1               5                   10                  15

Gly Leu Xaa Phe His Asp Cys Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp

            20                  25                  30

Val Cys His Gly Leu Xaa

        35

<210>55

<211>38

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>肽键

<220>

<221>misc_特征

<222>(1)..(1)

<223>Xaa＝肽键

     Fc结构域在第1位与N末端连接

<220>

<221>misc_特征

<222>(20)..(20)

<223>Xaa＝肽键

<400>55

Xaa Phe His Asp Cys Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Val Cys

1               5                   10                  15

His Gly Leu Xaa Phe His Asp Cys Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln

            20                  25                  30

Trp Val Cys His Gly Leu

        35

<210>56

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>寡核苷酸

<400>56

cggcgcaact atcggtatca agctg                                          25

<210>57

<211>26

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>寡核苷酸

<400>57

catgtaccgt aacactgagt ttcgtc                                         26

<210>58

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>共有肽

<400>58

Phe His Asp Cys Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Val Cys His

1               5                   10                  15

Gly Leu

<210>59

<211>23

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的接头序列

<400>59

Gly Ser Gly Ser Ala Thr Gly Gly Ser Gly Ser Thr Ala Ser Ser Gly

1               5                   10                  15

Ser Gly Ser Ala Thr His Met

            20

<210>60

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>60

Asn Gln Thr Leu Trp Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Phe Ile Thr

1               5                   10                  15

Tyr Met

<210>61

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>61

Pro Val Tyr Gln Gly Trp Trp Asp Thr Leu Thr Lys Leu Tyr Ile Trp

1               5                   10                  15

Asp Gly

<210>62

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>62

Trp Leu Asp Gly Gly Trp Arg Asp Pro Leu Ile Lys Arg Ser Val Gln

1               5                   10                  15

Leu Gly

<210>63

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>63

Gly His Gln Gln Phe Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Val Gln

1               5                   10                  15

Ser Asn

<210>64

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>64

Gln Arg Val Gly Gln Phe Trp Asp Val Leu Thr Lys Met Phe Ile Thr

1               5                   10                  15

Gly Ser

<210>65

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>65

Gln Ala Gln Gly Trp Ser Tyr Asp Ala Leu Ile Lys Thr Trp Ile Arg

1               5                   10                  15

Trp Pro

<210>66

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>66

Gly Trp Met His Trp Lys Trp Asp Pro Leu Thr Lys Gln Ala Leu Pro

1               5                   10                  15

Trp Met

<210>67

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>67

Gly His Pro Thr Tyr Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Ile Leu

1               5                   10                  15

Gln Met

<210>68

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>68

Trp Asn Asn Trp Ser Leu Trp Asp Pro Leu Thr Lys Leu Trp Leu Gln

1               5                   10                  15

Gln Asn

<210>69

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>69

Trp Gln Trp Gly Trp Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Val Gln

1               5                   10                  15

Gln Gln

<210>70

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>70

Gly Gln Met Gly Trp Arg Trp Asp Pro Leu Thr Lys Met Trp Leu Gly

1               5                   10                  15

Thr Ser

<210>71

<211>62

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>寡核苷酸

<400>71

tatgccgggt acttgtttcc cgttcccgtg ggaatgcact cacgctggtg gaggcggtgg    60

gg                                                                   62

<210>72

<211>64

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>寡核苷酸

<400>72

tcgaccccac cgcctcctgg agcgtgagtg cattcccacg ggaagccgaa acaagtaccc    60

ggca                                                                 64

<210>73

<211>62

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>寡核苷酸

<400>73

tatgtggggt gcttgttggc cgttcccgtg ggaatgtttc aaagaaggtg gaggcggtgg    60

gg                                                                   62

<210>74

<211>64

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>寡核苷酸

<400>74

tcgaccccac cgcctccacc ttctttgaaa cattcccacg ggaacggcca acaagcaccc    60

caca                                                                 64

<210>75

<211>62

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>寡核苷酸

<400>75

tatggttccg ttctgtgacc tgctgactaa acactgtttc gaagctggtg gaggcggtgg    60

gg                                                                   62

<210>76

<211>64

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>寡核苷酸

<400>76

tcgaccccac cgcctccacc agcttcgaaa cagtgtttag tcagcaggtc acagaacgga    60

acca                                                                 64

<210>77

<211>74

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>寡核苷酸

<400>77

tatgggttct cgttgtaaat acaaatggga cgttctgact aaacagtgtt tccaccacgg    60

tggaggcggt gggg                                                      74

<210>78

<211>76

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>寡核苷酸

<400>78

tcgaccccac cgcctccacc gtggtggaaa cactgtttag tcagaacgtc ccatttgtat    60

ttacaacgag aaccca                                                    76

<210>79

<211>74

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>寡核苷酸

<400>79

tatgctgccg ggttgtaaat gggacctgct gatcaaacag tgggtttgtg acccgctggg    60

tggaggcggt gggg                                                      74

<210>80

<211>76

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>寡核苷酸

<400>80    

tcgaccccac cgcctccacc cagcgggtca caaacccact gtttgatcag caggtcccat    60

ttacaacccg gcagca                                                    76

<210>81

<211>74

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>寡核苷酸

<400>81

tatgtctgct gactgttact tcgacatcct gactaaatct gacgtttgta cttcttctgg    60

tggaggcggt gggg                                                      74

<210>82

<211>76

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>寡核苷酸

<400>82

tcgaccccac cgcctccacc agaagaagta caaacgtcag atttagtcag gatgtcgaag    60

taacagtcag cagaca                                                    76

<210>83

<211>74

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>寡核苷酸

<400>83

tatgtctgac gactgtatgt acgaccagct gactcgtatg ttcatctgtt ctaacctggg    60

tggaggcggt gggg                                                      74

<210>84

<211>76

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>寡核苷酸

<400>84

tcgaccccac cgcctccacc caggttagaa cagatgaaca tacgagtcag ctggtcgtac    60

atacagtcgt cagaca                                                    76

<210>85

<211>74

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>寡核苷酸

<400>85

tatggacctg aactgtaaat acgacgaact gacttacaaa gaatggtgtc agttcaacgg    60

tggaggcggt gggg                                                      74

<210>86

<211>76

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>寡核苷酸

<400>86

tcgaccccac cgcctccacc gttgaactga caccattctt tgtaagtcag ttcgtcgtat    60

ttacagttca ggtcca                                                    76

<210>87

<211>74

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>寡核苷酸

<400>87

tatgttccac gactgtaaat acgacctgct gactcgtcag atggtttgtc acggtctggg    60

tggaggcggt gggg                                                      74

<210>88

<211>76

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>寡核苷酸

<400>88    

tcgaccccac cgcctccacc cagaccgtga caaaccatct gacgagtcag caggtcgtat    60

ttacagtcgt ggaaca                                                    76

<210>89

<211>74

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>寡核苷酸

<400>89

tatgcgtaac cactgtttct gggaccacct gctgaaacag gacatctgtc cgtctccggg    60

tggaggcggt gggg                                                      74

<210>90

<211>76

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>寡核苷酸

<400>90

tcgaccccac cgcctccacc cggagacgga cagatgtcct gtttcagcag gtggtcccag    60

aaacagtggt tacgca                                                    76

<210>91

<211>74

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>寡核苷酸

<400>91

tatggctaac cagtgttggt gggactctct gctgaaaaaa aacgtttgtg aattcttcgg    60

tggaggcggt gggg                                                      74

<210>92

<211>76

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>寡核苷酸

<400>92

tcgaccccac cgcctccacc gaagaattca caaacgtttt ttttcagcag agagtcccac    60

caacactggt tagcca                                                    76

<210>93

<211>74

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>寡核苷酸

<400>93

tatgttccac gactgcaaat gggacctgct gaccaaacag tgggtttgcc acggtctggg    60

tggaggcggt gggg                                                      74

<210>94

<211>76

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>寡核苷酸

<400>94

tcgaccccac cgcctccacc cagaccgtgg caaacccact gtttggtcag caggtcccat    60

ttgcagtcgt ggaaca                                                    76

<210>95

<211>141

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>pAMG21-RANK-Fc载体

<400>95

ctaattccgc tctcacctac caaacaatgc ccccctgcaa aaaataaatt catataaaaa    60

acatacagat aaccatctgc ggtgataaat tatctctggc ggtgttgaca taaataccac    120

tggcggtgat actgagcaca t                                              141

<210>96

<211>55

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>pAMG21-RANK-Fc载体

<400>96

cgatttgatt ctagaaggag gaataacata tggttaacgc gttggaattc ggtac         55

<210>97

<211>1546

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>pAMG21

<400>97

gcgtaacgta tgcatggtct ccccatgcga gagtagggaa ctgccaggca tcaaataaaa    60

cgaaaggctc agtcgaaaga ctgggccttt cgttttatct gttgtttgtc ggtgaacgct    120

ctcctgagta ggacaaatcc gccgggagcg gatttgaacg ttgcgaagca acggcccgga    180

gggtggcggg caggacgccc gccataaact gccaggcatc aaattaagca gaaggccatc    240

ctgacggatg gcctttttgc gtttctacaa actcttttgt ttatttttct aaatacattc    300

aaatatggac gtcgtactta acttttaaag tatgggcaat caattgctcc tgttaaaatt    360

gctttagaaa tactttggca gcggtttgtt gtattgagtt tcatttgcgc attggttaaa    420

tggaaagtga ccgtgcgctt actacagcct aatatttttg aaatatccca agagcttttt    480

ccttcgcatg cccacgctaa acattctttt tctcttttgg ttaaatcgtt gtttgattta    540

ttatttgcta tatttatttt tcgataatta tcaactagag aaggaacaat taatggtatg    600

ttcatacacg catgtaaaaa taaactatct atatagttgt ctttctctga atgtgcaaaa    660

ctaagcattc cgaagccatt attagcagta tgaataggga aactaaaccc agtgataaga    720

cctgatgatt tcgcttcttt aattacattt ggagattttt tatttacagc attgttttca    780

aatatattcc aattaatcgg tgaatgattg gagttagaat aatctactat aggatcatat    840

tttattaaat tagcgtcatc ataatattgc ctccattttt tagggtaatt atccagaatt    900

gaaatatcag atttaaccat agaatgagga taaatgatcg cgagtaaata atattcacaa    960

tgtaccattt tagtcatatc agataagcat tgattaatat cattattgct tctacaggct    1020

ttaattttat taattattct gtaagtgtcg tcggcattta tgtctttcat acccatctct    1080

ttatccttac ctattgtttg tcgcaagttt tgcgtgttat atatcattaa aacggtaata    1140

gattgacatt tgattctaat aaattggatt tttgtcacac tattatatcg cttgaaatac    1200

aattgtttaa cataagtacc tgtaggatcg tacaggttta cgcaagaaaa tggtttgtta    1260

tagtcgatta atcgatttga ttctagattt gttttaacta attaaaggag gaataacata    1320

tggttaacgc gttggaattc gagctcacta gtgtcgacct gcagggtacc atggaagctt    1380

actcgaggat ccgcggaaag aagaagaaga agaagaaagc ccgaaaggaa gctgagttgg    1440

ctgctgccac cgctgagcaa taactagcat aaccccttgg ggcctctaaa cgggtcttga    1500

ggggtttttt gctgaaagga ggaaccgctc ttcacgctct tcacgc                   1546

<210>98

<211>872

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>GM221

<400>98

ttattttcgt gcggccgcac cattatcacc gccagaggta aactagtcaa cacgcacggt    60

gttagatatt tatcccttgc ggtgatagat tgagcacatc gatttgattc tagaaggagg    120

gataatatat gagcacaaaa aagaaaccat taacacaaga gcagcttgag gacgcacgtc    180

gccttaaagc aatttatgaa aaaaagaaaa atgaacttgg cttatcccag gaatctgtcg    240

cagacaagat ggggatgggg cagtcaggcg ttggtgcttt atttaatggc atcaatgcat    300

taaatgctta taacgccgca ttgcttacaa aaattctcaa agttagcgtt gaagaattta    360

gcccttcaat cgccagagaa tctacgagat gtatgaagcg gttagtatgc agccgtcact    420

tagaagtgag tatgagtacc ctgttttttc tcatgttcag gcagggatgt tctcacctaa    480

gcttagaacc tttaccaaag gtgatgcgga gagatgggta agcacaacca aaaaagccag    540

tgattctgca ttctggcttg aggttgaagg taattccatg accgcaccaa caggctccaa    600

gccaagcttt cctgacggaa tgttaattct cgttgaccct gagcaggctg ttgagccagg    660

tgatttctgc atagccagac ttgggggtga tgagtttacc ttcaagaaac tgatcaggga    720

tagcggtcag gtgtttttac aaccactaaa cccacagtac ccaatgatcc catgcaatga    780

gagttgttcc gttgtgggga aagttatcgc tagtcagtgg cctgaagaga cgtttggctg    840

atagactagt ggatccacta gtgtttctgc cc                                  872

<210>99

<211>1197

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>GM221

<400>99

ggcggaaacc gacgtccatc gaatggtgca aaacctttcg cggtatggca tgatagcgcc    60

cggaagagag tcaattcagg gtggtgaatg tgaaaccagt aacgttatac gatgtcgcag    120

agtatgccgg tgtctcttat cagaccgttt cccgcgtggt gaaccaggcc agccacgttt    180

ctgcgaaaac gcgggaaaaa gtcgaagcgg cgatggcgga gctgaattac attcccaacc    240

gcgtggcaca acaactggcg ggcaaacagt cgctcctgat tggcgttgcc acctccagtc    300

tggccctgca cgcgccgtcg caaattgtcg cggcgattaa atctcgcgcc gatcaactgg    360

gtgccagcgt ggtggtgtcg atggtagaac gaagcggcgt cgaagcctgt aaagcggcgg    420

tgcacaatct tctcgcgcaa cgcgtcagtg ggctgatcat taactatccg ctggatgacc    480

aggatgccat tgctgtggaa gctgcctgca ctaatgttcc ggcgttattt cttgatgtct    540

ctgaccagac acccatcaac agtattattt tctcccatga agacggtacg cgactgggcg    600

tggagcatct ggtcgcattg ggtcaccagc aaatcgcgct gttagcgggc ccattaagtt    660

ctgtctcggc gcgtctgcgt ctggctggct ggcataaata tctcactcgc aatcaaattc    720

agccgatagc ggaacgggaa ggcgactgga gtgccatgtc cggttttcaa caaaccatgc    780

aaatgctgaa tgagggcatc gttcccactg cgatgctggt tgccaacgat cagatggcgc    840

tgggcgcaat gcgcgccatt accgagtccg ggctgcgcgt tggtgcggat atctcggtag    900

tgggatacga cgataccgaa gacagctcat gttatatccc gccgttaacc accatcaaac    960

aggattttcg cctgctgggg caaaccagcg tggaccgctt gctgcaactc tctcagggcc    1020

aggcggtgaa gggcaatcag ctgttgcccg tctcactggt gaaaagaaaa accaccctgg    1080

cgcccaatac gcaaaccgcc tctccccgcg cgttggccga ttcattaatg cagctggcac    1140

gacaggtttc ccgactggaa agcggacagt aaggtaccat aggatccagg cacagga       1197

<210>100

<211>14

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>TALL-1调节剂

<220>

<221>misc_特征

<222>(1，2，3，13)..(14)

<223>Xaa(Pos1，2，3，13，14)各自独立地是缺失的或是氨基酸残基；

<220>

<221>misc_特征

<222>(6)..(6)

<223>Xaa(Pos6)是氨基酸残基；Xaa(Pos9)是碱性或疏水残基；

<220>

<221>misc_特征

<222>(12)..(12)

<223>Xaa(Pos12)是中性疏水残基。

<400>100

Xaa Xaa Xaa Cys Asp Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Xaa

1               5                   10

<210>101

<211>14

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>TALL-1调节剂

<220>

<221>misc_特征

<222>(1，2，3，12和)..(13)

<223>Xaa(Pos1，2，3，12，13)各自独立地是缺失的或是氨基酸残基；

<220>

<221>misc_特征

<222>(5 and)..(8)

<223>Xaa(Pos5，8)是中性疏水残基；Xaa(Pos 10)是酸性残基；

<220>

<221>misc_特征

<222>(14)..(14)

<223>Xaa(Pos14)是缺失的或是氨基酸残基。

<400>101

Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Pro Phe Xaa Trp Xaa Cys Xaa Xaa Xaa

1               5                   10

<210>102

<211>14

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>TALL-1调节剂

<220>

<221>misc_特征

<222>(1，2，3，12，13和)..(14)

<223>Xaa(Pos1，2，3，12，13，14)各自独立地是缺失的和是氨基酸残基；

<220>

<221>misc_特征

<222>(6和)..(7)

<223>Xaa(Pos6，7)是疏水残基；

<220>

<221>misc_特征

<222>(10)..(10)

<223>Xaa(Pos10)是酸性和极性疏水残基。

<400>102

Xaa Xaa Xaa Cys Trp Xaa Xaa Trp Gly Xaa Cys Xaa Xaa Xaa

1               5                   10

<210>103

<211>14

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>TALL-1调节剂

<220>

<221>misc_特征

<222>(1)..(1)

<223>Xaa(Pos1)是缺失的或是氨基酸残基；

<220>

<221>misc_特征

<222>(2和)..(14)

<223>Xaa(Pos2，14)是中性的疏水残基；

<220>

<221>misc_特征

<222>(3和)..(10)

<223>Xaa(Pos3，10)是氨基酸残基；

<220>

<221>misc_特征

<222>(5，6，7，8，12和)..(13)

<223>Xaa(Pos5，6，7，8，12，13)各自独立地是氨基酸残基；

<220>

<221>misc_特征

<222>(9)..(9)

<223>Xaa(Pos9)是酸性残基。

<400>103

Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Xaa

1               5                   10

<210>104

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>TALL-1调节剂

<220>

<221>misc_特征

<222>(1，2，12，13，16，17和)..(18)

<223>Xaa(Pos1，2，12，13，16，17，18)各自独立地是缺失的或是氨基酸残基；

<220>

<221>misc_特征

<222>(3)..(3)

<223>Xaa(Pos3)是酸性或酰胺残基；

<220>

<221>misc_特征

<222>(5 and)..(8)

<223>Xaa(Pos5，8)是氨基酸残基；

<220>

<221>misc_特征

<222>(6)..(6)

<223>Xaa(Pos6)是芳族残基；

<220>

<221>misc_特征

<222>(11)..(11)

<223>Xaa(Pos11)是碱基残基；

<220>

<221>misc_特征

<222>(14)..(14)

<223>Xaa(Pos14)是中性疏水残基。

<400>104

Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Asp Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Cys Xaa

1               5                   10                  15

Xaa Xaa

<210>105

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>TALL-1调节剂

<220>

<221>misc_特征

<222>(1，2和)..(3)

<223>Xaa(Pos1，2，3)各自独立地是缺失的或是氨基酸残基；

<220>

<221>misc_特征

<222>(5，7，14和)..(16)

<223>Xaa(Pos5，7，14，16)是氨基酸残基；

<220>

<221>misc_特征

<222>(10)..(10)

<223>Xaa(Pos10)是碱性残基；

<220>

<221>misc_特征

<222>(11和)..(12)

<223>Xaa(Pos11，12)各自独立地是氨基酸残基；

<220>

<221>misc_特征

<222>(13和)..(17)

<223>Xaa(Pos13，17)是中性疏水残基；

<220>

<221>misc_特征

<222>(18)..(18)

<223>Xaa(Pos18)是氨基酸残基和是缺失的。

<400>105

Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Asp Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Cys Xaa

1               5                  10                  15

Xaa Xaa

<210>106

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>TALL-1调节剂

<220>

<221>misc_特征

<222>(1，2，3，16，17和)..(18)

<223>Xaa(Pos1，2，3，16，17，18)各自独立地是缺失的或是氨基酸残基；

<220>

<221>misc_特征

<222>(5，6，7，10和)..(14)

<223>Xaa(Pos5，6，7，10，14)各自独立地是氨基酸残基。

<400>106

Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Xaa Trp Asp Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Cys Xaa

1               5                   10                  15

Xaa Xaa

<210>107

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>TALL-1调节剂

<220>

<221>misc_特征

<222>(1，2，3，15，16，17)..(18)

<223>Xaa(Pos1，2，3，15，16，17，18)各自独立地是缺失的或是氨基酸残基；

<220>

<221>misc_特征

<222>(5，6，7，9和)..(13)

<223>Xaa(Pos5，6，7，9 13)各自独立地是氨基酸残基；

<220>

<221>misc_特征

<222>(11)..(11)

<223>Xaa(Pos 11)是T或I；和

<400>107

Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Xaa Asp Xaa Leu Xaa Lys Xaa Cys Xaa Xaa

1               5                   10                  15

Xaa Xaa

<210>108

<211>4

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>TALL-1调节剂

<220>

<221>misc_特征

<222>(2)..(2)

<223>(Pos 2)的X是氨基酸残基

<220>

<221>misc_特征

<222>(4)..(4)

<223>(Pos 4)的X是苏氨酰或异亮氨酰

<400>108

Asp Xaa Leu Xaa

1

<210>109

<211>14

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>TALL-1调节剂

<220>

<221>misc_特征

<222>(1，2和)..(3)

<223>X at(Pos 1，2，3)是缺失的或是氨基酸残基(当X12、X13和X14中的一个是C时，X1、

     X2和X3中的一个优选是C)；

<220>

<221>misc_特征

<222>(5)..(5)

<223>(Pos 5)的X是W，Y，或F(优选W)；

<220>

<221>misc_特征

<222>(7)..(7)

<223>(Pos 7)的X是氨基酸残基(优选L)；

<220>

<221>misc_特征

<222>(9)..(9)

<223>(Pos 9)的X是T或I(优选T)；

<220>

<221>misc_特征

<222>(10)..(10)

<223>(Pos 10)的X是K，R，或H(优选K).

<220>

<221>misc_特征

<222>(12)..(12)

<223>at(Pos 12)的X是C，中性疏水残基或碱基残基(优选W，C，或R)；

<220>

<221>misc_特征

<222>(13)..(13)

<223>(Post 13)的X是C，中性疏水残基或是缺失的(优选V)；

<220>

<221>misc_特征

<222>(14)..(14)

<223>(Pos 14)是X是任意氨基酸残基或是缺失的。

<400>109

Xaa Xaa Xaa Lys Xaa Asp Xaa Leu Xaa Xaa Gln Xaa Xaa Xaa

1               5                   10

<210>110

<211>5

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>TALL-1调节剂

<400>110

Pro Phe Pro Trp Glu

1               5

<210>111

<211>248

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>TALL-1抑制性肽体

<400>111

Met Pro Gly Thr Cys Phe Pro Phe Pro Trp Glu Cys Thr His Ala Gly

1               5                   10                  15

Gly Gly Gly Gly Val Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

            20                  25                  30

Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

        35                  40                  45

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

    50                  55                  60

Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val

65                  70                  75                  80

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

                85                  90                  95

Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

            100                 105                 110

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala

        115                 120                 125

Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

    130                 135                 140

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr

145                 150                 155                 160

Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

                165                 170                 175

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

            180                 185                 190

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr

        195                 200                 205

Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe

    210                 215                 220

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

225                 230                 235                 240

Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

                245

<210>112

<211>248

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>TALL-1抑制性肽体

<400>112

Met Trp Gly Ala Cys Trp Pro Phe Pro Trp Glu Cys Phe Lys Glu Gly

1               5                   10                  15

Gly Gly Gly Gly Val Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

            20                  25                  30

Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

        35                  40                  45

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

    50                  55                  60

Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val

65                  70                  75                  80

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

                85                  90                  95

Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

            100                 105                 110

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala

        115                 120                 125

Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

    130                 135                 140

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr

145                 150                 155                 160

Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

                165                 170                 175

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

            180                 185                 190

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr

        195                 200                 205

Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe

    210                 215                 220

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

225                 230                 235                 240

Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

                245

<210>113

<211>248

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>TALL-1抑制性肽体

<400>113

Met Val Pro Phe Cys Asp Leu Leu Thr Lys His Cys Phe Glu Ala Gly

1               5                   10                  15

Gly Gly Gly Gly Val Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

            20                  25                  30

Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

        35                  40                  45

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

    50                  55                  60

Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val

65                  70                  75                  80

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

                85                  90                  95

Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

            100                 105                 110

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala

        115                 120                 125

Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

    130                 135                 140

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr

145                 150                 155                 160

Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

                165                 170                 175

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

            180                 185                 190

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr

        195                 200                 205

Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe

    210                 215                 220

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

225                 230                 235                 240

Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

                245

<210>114

<211>252

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>TALL-1抑制性肽体

<400>114

Met Gly Ser Arg Cys Lys Tyr Lys Trp Asp Val Leu Thr Lys Gln Cys

1               5                   10                  15

Phe His His Gly Gly Gly Gly Gly Val Asp Lys Thr His Thr Cys Pro

            20                  25                  30

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

        35                  40                  45

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

    50                  55                  60

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe

65                  70                  75                  80

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

                85                  90                  95

Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

            100                 105                 110

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

        115                 120                 125

Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

    130                 135                 140

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg

145                 150                 155                 160

Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly

                165                 170                 175

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

            180                 185                 190

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

        195                 200                 205

Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln

    210                 215                 220

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

225                 230                 235                 240

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

                245                 250

<210>115

<211>252

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>TALL-1抑制性肽体

<400>115

Met Leu Pro Gly Cys Lys Trp Asp Leu Leu Ile Lys Gln Trp Val Cys

1               5                   10                  15

Asp Pro Leu Gly Gly Gly Gly Gly Val Asp Lys Thr His Thr Cys Pro

            20                  25                  30

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

        35                  40                  45

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

    50                  55                  60

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe

65                  70                  75                  80

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

                85                  90                  95

Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

            100                 105                 110

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

        115                 120                 125

Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

    130                 135                 140

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg

145                 150                 155                 160

Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly

                165                 170                 175

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

            180                 185                 190

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

        195                 200                 205

Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln

    210                 215                 220

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

225                 230                 235                 240

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

                245                 250

<210>116

<211>252

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>TALL-1抑制性肽体

<400>116

Met Ser Ala Asp Cys Tyr Phe Asp Ile Leu Thr Lys Ser Asp Val Cys

1               5                   10                  15

Thr Ser Ser Gly Gly Gly Gly Gly Val Asp Lys Thr His Thr Cys Pro

            20                  25                  30

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

        35                  40                  45

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

    50                  55                  60

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe

65                  70                  75                  80

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

                85                  90                  95

Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

            100                 105                 110

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

        115                 120                 125

Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

    130                 135                 140

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg

145                 150                 155                 160

Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly

                165                 170                 175

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

            180                 185                 190

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

        195                 200                 205

Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln

    210                 215                 220

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

225                 230                 235                 240

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

                245                 250

<210>117

<211>252

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>TALL-1抑制性肽体

<400>117

Met Ser Asp Asp Cys Met Tyr Asp Gln Leu Thr Arg Met Phe Ile Cys

1               5                   10                  15

Ser Asn Leu Gly Gly Gly Gly Gly Val Asp Lys Thr His Thr Cys Pro

            20                  25                  30

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

        35                  40                  45

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

    50                  55                  60

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe

65                  70                  75                  80

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

                85                  90                  95

Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

            100                 105                 110

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

        115                 120                 125

Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

    130                 135                 140

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg

145                 150                 155                 160

Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly

                165                 170                 175

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

            180                 185                 190

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

        195                 200                 205

Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln

    210                 215                 220

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

225                 230                 235                 240

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

                245                 250

<210>118

<211>252

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>TALL-1抑制性肽体

<400>118

Met Asp Leu Asn Cys Lys Tyr Asp Glu Leu Thr Tyr Lys Glu Trp Cys

1               5                   10                  15

Gln Phe Asn Gly Gly Gly Gly Gly Val Asp Lys Thr His Thr Cys Pro

            20                  25                  30

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

        35                  40                  45

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

    50                  55                  60

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe

65                  70                  75                  80

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

                85                  90                  95

Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

            100                 105                 110

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

        115                 120                 125

Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

    130                 135                 140

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg

145                 150                 155                 160

Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly

                165                 170                 175

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

            180                 185                 190

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

        195                 200                 205

Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln

    210                 215                 220

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

225                 230                 235                 240

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

                245                 250

<210>119

<211>252

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>TALL-1抑制性肽体

<400>119

Met Phe His Asp Cys Lys Tyr Asp Leu Leu Thr Arg Gln Met Val Cys

1               5                   10                   15

His Gly Leu Gly Gly Gly Gly Gly Val Asp Lys Thr His Thr Cys Pro

            20                  25                  30

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

        35                  40                  45

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

    50                  55                  60

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe

65                  70                  75                  80

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

                85                  90                  95

Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

            100                 105                 110

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

        115                 120                 125

Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

    130                 135                 140

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg

145                 150                 155                 160

Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly

                165                 170                 175

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

            180                 185                 190

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

        195                 200                 205

Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln

    210                 215                 220

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

225                 230                 235                 240

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

                245                 250

<210>120

<211>252

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>TALL-1抑制性肽体

<400>120

Met Arg Asn His Cys Phe Trp Asp His Leu Leu Lys Gln Asp Ile Cys

1               5                   10                  15

Pro Ser Pro Gly Gly Gly Gly Gly Val Asp Lys Thr His Thr Cys Pro

            20                  25                  30

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

        35                  40                  45

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

    50                  55                  60

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe

65                  70                  75                  80

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

                85                  90                  95

Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

            100                 105                 110

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

        115                 120                 125

Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

    130                 135                 140

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg

145                 150                 155                 160

Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly

                165                 170                 175

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

            180                 185                 190

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

        195                 200                 205

Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln

    210                 215                 220

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

225                 230                 235                 240

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

            245                 250

<210>121

<211>252

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>TALL-1抑制性肽体

<400>121

Met Ala Asn Gln Cys Trp Trp Asp Ser Leu Thr Lys Lys Asn Val Cys

1               5                   10                  15

Glu Phe Phe Gly Gly Gly Gly Gly Val Asp Lys Thr His Thr Cys Pro

            20                  25                  30

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

        35                  40                  45

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

    50                  55                  60

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe

65                  70                  75                  80

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

                85                  90                  95

Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

            100                 105                 110

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

        115                 120                 125

Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

    130                 135                 140

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg

145                 150                 155                 160

Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly

                165                 170                 175

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

            180                 185                 190

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

        195                 200                 205

Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln

    210                 215                 220

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

225                 230                 235                 240

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

                245                 250

<210>122

<211>252

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>TALL-1抑制性肽体

<400>122

Met Phe His Asp Cys Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Val Cys

1               5                   10                  15

His Gly Leu Gly Gly Gly Gly Gly Val Asp Lys Thr His Thr Cys Pro

            20                  25                  30

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

        35                  40                  45

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

    50                  55                  60

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe

65                  70                  75                  80

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

                85                  90                  95

Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

            100                 105                 110

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

        115                 120                 125

Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

    130                 135                 140

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg

145                 150                 155                 160

Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly

                165                 170                 175

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

            180                 185                 190

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

        195                 200                 205

Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln

    210                 215                 220

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

225                 230                 235                 240

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

                245                 250

<210>123

<211>293

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>TALL-1抑制性肽体

<400>123

Met Leu Pro Gly Cys Lys Trp Asp Leu Leu Ile Lys Gln Trp Val Cys

1               5                   10                  15

Asp Pro Leu Gly Ser Gly Ser Ala Thr Gly Gly Ser Gly Ser Thr Ala

            20                  25                  30

Ser Ser Gly Ser Gly Ser Ala Thr His Met Leu Pro Gly Cys Lys Trp

        35                  40                  45

Asp Leu Leu Ile Lys Gln Trp Val Cys Asp Pro Leu Gly Gly Gly Gly

    50                  55                  60

Gly Val Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu

65                  70                  75                  80

Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

                85                  90                  95

Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val

            100                 105                 110

Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val

        115                 120                 125

Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser

    130                 135                 140

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu

145                 150                 155                 160

Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala

                165                 170                 175

Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro

            180                 185                 190

Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln

        195                 200                 205

Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala

    210                 215                 220

Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr

225                 230                 235                 240

Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu

                245                 250                 255

Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser

            260                 265                 270

Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser

        275                 280                 285

Leu Ser Pro Gly Lys

    290

<210>124

<211>293

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>TALL-1抑制性肽体

<400>124

Met Phe His Asp Cys Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Val Cys

1               5                   10                  15

His Gly Leu Gly Ser Gly Ser Ala Thr Gly Gly Ser Gly Ser Thr Ala

            20                  25                  30

Ser Ser Gly Ser Gly Ser Ala Thr His Met Phe His Asp Cys Lys Trp

        35                  40                  45

Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Val Cys His Gly Leu Gly Gly Gly Gly

    50                  55                  60

Gly Val Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu

65                  70                  75                  80

Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

                85                  90                  95

Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val

            100                 105                 110

Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val

        115                 120                 125

Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser

    130                 135                 140

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu

145                 150                 155                 160

Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala

                165                 170                 175

Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro

            180                 185                 190

Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln

        195                 200                 205

Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala

    210                 215                 220

Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr

225                 230                 235                 240

Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu

                245                 250                 255

Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser

            260                 265                 270

Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser

        275                 280                 285

Leu Ser Pro Gly Lys

    290

<210>125

<211>14

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>共有序列

<220>

<221>misc_特征

<222>(1，2和)..(3)

<223>(Pos 1，2，3)的X是缺失的或是氨基酸残基(当X12、X13和X14中的一个是C时，X1、X2

和X3中的一个是C)；

<220>

<221>misc_特征

<222>(7)..(7)

<223>(Pos 7)的X是氨基酸残基(优选L)；

<220>

<221>misc_特征

<222>(9)..(9)

<223>(Pos 9)的X是T或I(优选T)；

<220>

<221>misc_特征

<222>(12)..(12)

<223>(Pos 12)的X是C，中性疏水残基，或碱性残基(优选W，C，或R)；

<220>

<221>misc_特征

<222>(13)..(13)

<223>(Pos 13)的X是C，中性疏水残基或是缺失的(优选V)；

<220>

<221>misc_特征

<222>(14)..(14)

<223>(Pos 14)的X是任意氨基酸残基或是缺失的。

<400>125

Xaa Xaa Xaa Lys Trp Asp Xaa Leu Xaa Lys Gln Xaa Xaa Xaa

1               5                   10

<210>126

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>126

Tyr Lys Gly Arg Gln Met Trp Asp Ile Leu Thr Arg Ser Trp Val Val

1               5                   10                  15

Ser Leu

<210>127

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>127

Gln Asp Val Gly Leu Trp Trp Asp Ile Leu Thr Arg Ala Trp Met Pro

1               5                   10                  15

Asn Ile

<210>128

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>128

Gln Asn Ala Gln Arg Val Trp Asp Leu Leu Ile Arg Thr Trp Val Tyr

1               5                   10                  15

Pro Gln

<210>129

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>129

Gly Trp Asn Glu Ala Trp Trp Asp Glu Leu Thr Lys Ile Trp Val Leu

1               5                   10                  15

Glu Gln

<210>130

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>130

Arg Ile Thr Cys Asp Thr Trp Asp Ser Leu Ile Lys Lys Cys Val Pro

1               5                   10                  15

Gln Ser

<210>131

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>131

Gly Ala Ile Met Gln Phe Trp Asp Ser Leu Thr Lys Thr Trp Leu Arg

1               5                   10                  15

Gln Ser

<210>132

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>132

Trp Leu His Ser Gly Trp Trp Asp Pro Leu Thr Lys His Trp Leu Gln

1               5                   10                  15

Lys Val

<210>133

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>133

Ser Glu Trp Phe Phe Trp Phe Asp Pro Leu Thr Arg Ala Gln Leu Lys

1               5                   10                  15

Phe Arg

<210>134

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>134

Gly Val Trp Phe Trp Trp Phe Asp Pro Leu Thr Lys Gln Trp Thr Gln

1               5                   10                  15

Ala Gly

<210>135

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>135

Met Gln Cys Lys Gly Tyr Tyr Asp Ile Leu Thr Lys Trp Cys Val Thr

1               5                   10                  15

Asn Gly

<210>136

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>136

Leu Trp Ser Lys Glu Val Trp Asp Ile Leu Thr Lys Ser Trp Val Ser

1               5                   10                  15

Gln Ala

<210>137

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>137

Lys Ala Ala Gly Trp Trp Phe Asp Trp Leu Thr Lys Val Trp Val Pro

1               5                   10                  15

Ala Pro

<210>138

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>138

Ala Tyr Gln Thr Trp Phe Trp Asp Ser Leu Thr Arg Leu Trp Leu Ser

1               5                   10                  15

Thr Thr

<210>139

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>139

Ser Gly Gln His Phe Trp Trp Asp Leu Leu Thr Arg Ser Trp Thr Pro

1               5                   10                  15

Ser Thr

<210>140

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>140

Leu Gly Val Gly Gln Lys Trp Asp Pro Leu Thr Lys Gln Trp Val Ser

1               5                   10                  15

Arg Gly

<210>141

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>141

Val Gly Lys Met Cys Gln Trp Asp Pro Leu Ile Lys Arg Thr Val Cys

1               5                   10                  15

Val Gly

<210>142

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>142

Cys Arg Gln Gly Ala Lys Phe Asp Leu Leu Thr Lys Gln Cys Leu Leu

1               5                   10                  15

Gly Arg

<210>143

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>143

Gly Gln Ala Ile Arg His Trp Asp Val Leu Thr Lys Gln Trp Val Asp

1               5                   10                  15

Ser Gln

<210>144

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>144

Arg Gly Pro Cys Gly Ser Trp Asp Leu Leu Thr Lys His Cys Leu Asp

1               5                   10                  15

Ser Gln

<210>145

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>145

Trp Gln Trp Lys Gln Gln Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Met Val Trp

1               5                   10                  15

Val Gly

<210>146

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>146

Pro Ile Thr Ile Cys Arg Lys Asp Leu Leu Thr Lys Gln Val Val Cys

1               5                   10                  15

Leu Asp

<210>147

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>147

Lys Thr Cys Asn Gly Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Cys Leu Gln

1               5                   10                  15

Gln Ala

<210>148

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>148

Lys Cys Leu Lys Gly Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Cys Val Thr

1               5                   10                  15

Glu Val

<210>149

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>149

Arg Cys Trp Asn Gly Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Cys Ile His

1               5                   10                  15

Pro Trp

<210>150

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>150

Asn Arg Asp Met Arg Lys Trp Asp Pro Leu Ile Lys Gln Trp Ile Val

1               5                   10                  15

Arg Pro

<210>151

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>151

Gln Ala Ala Ala Ala Thr Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Leu Val

1               5                   10                  15

Pro Pro

<210>152

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>152

Pro Glu Gly Gly Pro Lys Trp Asp Pro Leu Thr Lys Gln Phe Leu Pro

1               5                   10                  15

Pro Val

<210>153

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>153

Gln Thr Pro Gln Lys Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Phe Thr

1               5                   10                  15

Arg Asn

<210>154

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>154

Ile Gly Ser Pro Cys Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Met Ile Cys

1               5                   10                  15

Gln Thr

<210>155

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>155

Cys Thr Ala Ala Gly Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Cys Ile Gln

1               5                   10                  15

Glu Lys

<210>156

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>156

Val Ser Gln Cys Met Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Cys Leu Gln

1               5                   10                  15

Gly Trp

<210>157

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>157

Val Trp Gly Thr Trp Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Tyr Leu Pro

1               5                   10                  15

Pro Gln

<210>158

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>158

Gly Trp Trp Glu Met Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Tyr Arg

1               5                   10                  15

Pro Gln

<210>159

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>159

Thr Ala Gln Val Ser Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Leu Pro

1               5                   10                  15

Leu Ala

<210>160

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>160

Gln Leu Trp Gly Thr Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Tyr Ile Gln

1               5                   10                  15

Ile Met

<210>161

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>161

Trp Ala Thr Ser Gln Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Val Gln

1               5               10                      15

Asn Met

<210>162

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>162

Gln Arg Gln Cys Ala Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Cys Val Leu

1               5                   10                  15

Phe Tyr

<210>163

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>163

Lys Thr Thr Asp Cys Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Arg Ile Cys

1               5                   10                  15

Gln Val

<210>164

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>164

Leu Leu Cys Gln Gly Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Cys Leu Lys

1               5                   10                  15

Leu Arg

<210>165

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>165

Leu Met Trp Phe Trp Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Leu Val Pro

1               5                   10                  15

Thr Phe

<210>166

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>166

Gln Thr Trp Ala Trp Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Ile Gly

1               5                   10                  15

Pro Met

<210>167

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>167

Asn Lys Glu Leu Leu Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Cys Arg Gly

1               5                   10                  15

Arg Ser

<210>168

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>168

Gly Gln Lys Asp Leu Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Tyr Val Arg

1               5                   10                  15

Gln Ser

<210>169

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>169

Pro Lys Pro Cys Gln Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Cys Leu Gly

1               5                   10                  15

Ser Val

<210>170

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>170

Gly Gln Ile Gly Trp Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Ile Gln

1               5                   10                  15

Thr Arg

<210>171

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>171

Val Trp Leu Asp Trp Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Ile His

1               5                   10                  15

Pro Gln

<210>172

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>172

Gln Glu Trp Glu Tyr Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Gly Trp

1               5                   10                  15

Leu Arg

<210>173

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>173

His Trp Asp Ser Trp Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Val Val

1               5                   10                  15

Gln Ala

<210>174

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>174

Thr Arg Pro Leu Gln Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Leu Arg

1               5                   10                  15

Val Gly

<210>175

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>175

Ser Asp Gln Trp Gln Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Phe Trp

1               5                   10                  15

Asp Val

<210>176

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>176

Gln Gln Thr Phe Met Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Ile Arg

1               5                   10                  15

Arg His

<210>177

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>177

Gln Gly Glu Cys Arg Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Cys Phe Pro

1               5                   10                  15

Gly Gln

<210>178

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>178

Gly Gln Met Gly Trp Arg Trp Asp Pro Leu Ile Lys Met Cys Leu Gly

1               5                   10                  15

Pro Ser

<210>179

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>179

Gln Leu Asp Gly Cys Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Lys Val Cys

1               5                   10                  15

Ile Pro

<210>180

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>180

His Gly Tyr Trp Gln Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Trp Val Ser

1               5                   10                  15

Ser Glu

<210>181

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>181

His Gln Gly Gln Cys Gly Trp Asp Leu Leu Thr Arg Ile Tyr Leu Pro

1               5                   10                  15

Cys His

<210>182

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>182

Leu His Lys Ala Cys Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Cys Trp Pro

1               5                   10                  15

Met Gln

<210>183

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>183

Gly Pro Pro Gly Ser Val Trp Asp Leu Leu Thr Lys Ile Trp Ile Gln

1               5                   10                  15

Thr Gly

<210>184

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>184

Ile Thr Gln Asp Trp Arg Phe Asp Thr Leu Thr Arg Leu Trp Leu Pro

1               5                   10                  15

Leu Arg

<210>185

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>185

Gln Gly Gly Phe Ala Ala Trp Asp Val Leu Thr Lys Met Trp Ile Thr

1               5                   10                  15

Val Pro

<210>186

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>186

Gly His Gly Thr Pro Trp Trp Asp Ala Leu Thr Arg Ile Trp Ile Leu

1               5                   10                  15

Gly Val

<210>187

<211>18

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>187

Val Trp Pro Trp Gln Lys Trp Asp Leu Leu Thr Lys Gln Phe Val Phe

1               5                   10                  15

Gln Asp

<210>188

<211>19

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的TALL-1调节结构域

<400>188

Trp Gln Gln Trp Ser Trp Lys Trp Asp Leu Leu Thr Arg Gln Tyr Ile

1               5                   10                  15

Ser Ser Ser

<210>189

<211>882

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>TALL-1 12-3串联二聚体

<400>189

atgcttccag gctgcaagtg ggatcttctt attaagcaat gggtatgcga tccacttgga    60

tccggttctg ctactggtgg ttccggctcc accgcaagct ctggttcagg cagtgcgact    120

catatgctgc cgggttgtaa atgggacctg ctgatcaaac agtgggtttg tgacccgctg    180

ggtggaggcg gtggggtcga caaaactcac acatgtccac cttgtccagc tccggaactc    240

ctggggggac cgtcagtctt cctcttcccc ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc    300

cggacccctg aggtcacatg cgtggtggtg gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag    360

ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag    420

cagtacaaca gcacgtaccg tgtggtcagc gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg    480

aatggcaagg agtacaagtg caaggtctcc aacaaagccc tcccagcccc catcgagaaa    540

accatctcca aagccaaagg gcagccccga gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc    600

cgggatgagc tgaccaagaa ccaggtcagc ctgacctgcc tggtcaaagg cttctatccc    660

agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaat gggcagccgg agaacaacta caagaccacg    720

cctcccgtgc tggactccga cggctccttc ttcctctaca gcaagctcac cgtggacaag    780

agcaggtggc agcaggggaa cgtcttctca tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac    840

cactacacgc agaagagcct ctccctgtct ccgggtaaat aa                       882

<210>190

<211>23

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的接头

<400>190

Gly Ser Gly Ser Ala Thr Gly Gly Ser Gly Ser Thr Ala Ser Ser Gly

1               5                   10                  15

Ser Gly Ser Ala Thr Gly Met

            20

<210>191

<211>23

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的接头

<400>191

Gly Ser Gly Ser Ala Thr Gly Gly Ser Gly Ser Thr Ala Ser Ser Gly

1               5                   10                  15

Ser Gly Ser Ala Thr Gly Ser

            20

<210>192

<211>46

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的接头

<400>192

Gly Ser Gly Ser Ala Thr Gly Gly Ser Gly Ser Thr Ala Ser Ser Gly

1               5                   10                  15

Ser Gly Ser Ala Thr His Met Gly Ser Gly Ser Ala Thr Gly Gly Ser

            20                  25                  30

Gly Ser Thr Ala Ser Ser Gly Ser Gly Ser Ala Thr His Met

        35                  40                  45

<210>193

<211>23

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的接头

<220>

<221>misc_特征

<222>(22)..(23)

<223>(Pos 22)的X独立地是碱性或疏水残基，

     (Pos 23)的X独立地是疏水残基。

<400>193

Gly Ser Gly Ser Ala Thr Gly Gly Ser Gly Ser Thr Ala Ser Ser Gly

1               5                   10                  15

Ser Gly Ser Ala Thr Xaa Xaa

            20

<210>194

<211>46

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>优选的接头

<220>

<221>misc_特征

<222>(22，23，45和)..(46)

<223>(Pos 22)和(Pos 45)的X各自独立地是碱性或疏水残基，(Pos 23)和(Pos 46)的X各自

独立地是疏水残基

<400>194

Gly Ser Gly Ser Ala Thr Gly Gly Ser Gly Ser Thr Ala Ser Ser Gly

1               5                   10                  15

Ser Gly Ser Ala Thr Xaa Xaa Gly Ser Gly Ser Ala Thr Gly Gly Ser

            20                  25                  30

Gly Ser Thr Ala Ser Ser Gly Ser Gly Ser Ala Thr Xaa Xaa

        35                  40                  45

<210>195

<211>38

<212>PRT

<213>人

<400>195

Met Arg Arg Gly Pro Arg Ser Leu Arg Gly Arg Asp Ala Pro Val Pro

1               5                   10                  15

Thr Pro Cys Val Pro Thr Glu Cys Tyr Asp Leu Leu Val Arg Lys Cys

            20                  25                  30

Val Asp Cys Arg Leu Leu

        35

<210>196

<211>41

<212>PRT

<213>人

<400>196

Thr Ile Cys Asn His Gln Ser Gln Arg Thr Cys Ala Ala Phe Cys Arg

1               5                   10                  15

Ser Leu Ser Cys Arg Lys Glu Gln Gly Lys Phe Tyr Asp His Leu Leu

            20                  25                  30

Arg Asp Cys Ile Ser Cys Ala Ser Ile

        35                  40

<210>197

<211>42

<212>PRT

<213>人

<400>197

Phe Val Ser Pro Ser Gln Glu Ile Arg Gly Arg Phe Arg Arg Met Leu

1               5                   10                  15

Gln Met Ala Gly Gln Cys Ser Gln Asn Glu Tyr Phe Asp Ser Leu Leu

            20                  25                  30

His Ala Cys Ile Pro Cys Gln Leu Arg Cys

        35                  40

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