减毒的活胸膜肺炎放线杆菌

本发明涉及在编码毒素基因中具有突变的减毒活胸膜肺炎放线杆菌， 用于制备该细菌的方法，包括该细菌的疫苗，制备这种疫苗的方法，包括 毒素的疫苗，制造这种疫苗的方法以及用于保护动物免受胸膜肺炎放线杆 菌感染的方法。

放线杆菌属的细菌均产生所谓的RTX-毒素。(RTX代表毒素中的重 复)。

正是由于这些RTX-毒素的存在才高度地促成了这些细菌的病原性特 征。

RTX-毒素已由Braun等进行了广泛综述。(微生物学关键综述18 (2)：115-158(1991))。革兰氏阴性菌株的RTX-毒素也已由Welch，R.A. (分子微生物学5/3：521-528(1991))和Welch等(感染源和疾病4： 254-272(1995))加以综述。

所有已知的RTX-毒素显示一定种类的细胞毒或溶细胞活性。然而依据 毒素和酰化的差异，靶细胞和宿主特异性各有不同(McWhinney等；细菌 学杂志174：291-297(1992)和Hackett等；生物化学杂志270： 20250-20253(1995))。由于靶细胞的不同，RTX-毒素家族的多种毒 素称为如溶血素、溶细胞素或细胞毒素。

放线杆菌属包括许多不同种，特别是胸膜肺炎放线杆菌、体放线放线 杆菌、猪放线杆菌、罗氏放线杆菌、马驹放线杆菌(A.equuli)和李氏放 线杆菌(A.Lignieresi)。

胸膜肺炎放线杆菌产生血清型依赖性RTX-毒素，其对猪、马、牛和人 类红细胞、兔和猪嗜中性细胞和猪肺泡巨噬细胞是细胞毒性/溶细胞性的 (Rosendel等；美国兽医研究杂志，49：1053-1058(1998)，Maudsley J.R.和Kadis S；加拿大微生物学杂志，32：801-805(1986)，Frey.J 和Nicolet J；感染与免疫，56：2570-2575(1988)，Bendixon等；感 染与免疫，33：673-676(1981)，Kamp，E.M.和Van Leengoed，L.A.M.G.；临床微生物学杂志，27：1187-1191(1989))。

猪中放线杆菌的感染，由于小猪的急性致死和大龄动物体重净增的下 降而导致养猪业中严重的经济损失。

革兰氏阴性细菌中涉及RTX-毒素合成，激活和运输的操纵子的遗传结 构最近已由Coote，J.G加以综述(FEMS微生物学综述88：137-162 (1992))。Frey已在细菌蛋白毒素，Zbl Bakt增刊，24，p.322-，Freer 等.(编)，Gustaf Fischer，Stuttgart，Jena，纽约，1994中对胸膜肺炎放线 杆菌中的已知三种RTX-毒素进行了具体的综述。

在胸膜肺炎放线杆菌中，此种RTX-操纵子含有4个基因：实际的毒素 -基因(A)，激活基因(C)和2个编码涉及毒素分泌至周围介质蛋白的 基因(B和D)。毒素基因(A)的初级翻译产物是无毒性的蛋白，其中 的毒素活性由激活基因(C)产物所激活。

直到最近，认为只有具有上述遗传结构或至少具有毒素-基因(A)及 激活基因(C)的三种RTX-毒素才存在于放线杆菌中。

这三种RTX-毒素，ApxI、Apx-II和Apx-III分别具有显著的溶血活 性(ApxI)、温和的溶血活性(Apx-II)或巨噬细胞的细胞毒活性 (Apx-III)。

各种毒素的活性以不同的血清型相当随机地划分。存在四种亚型：

由血清型1，5，9和11所代表的亚型A，产生ApxI和Apx-II，

由血清型2，3，4，6和8所代表的亚型B，产生

Apx-II和Apx-III，

由血清型10所代表的亚型C，仅产生ApxI，

由血清型7和12所代表的亚型D，仅产生Apx-II，

已知，ApxI、-II和-III是抗胸膜肺炎放线杆菌感染的一般疫苗中的必 需成分：不包括至少ApxI、-II和III的疫苗将不提供对所有胸膜肺炎放线 杆菌血清型的保护。同样，不包括至少一种特异血清型Apx-毒素的疫苗将 甚至不会诱导对单-血清型的保护。

较早时期已描述了基于体外合成，丧失其毒性的胸膜肺炎放线杆菌 RTX-毒素的亚单位疫苗，如在欧洲专利EP NO.0354.628中所述，其中公 开了基于胸膜肺炎放线杆菌溶血素和细胞毒素的亚单位疫苗，并且在欧洲 专利EP NO.0453.024中所述，其中公开了基于溶血素、细胞毒素和外膜蛋 白的胸膜肺炎放线杆菌亚单位疫苗。

然而对亚单位疫苗来说一般具有4个重要的不足：

·为了充分地激活免疫系统需要大量的免疫原性材料。

·通常仅B-细胞免疫被激活。

·几种保护性抗原仅在体内被激活，且因此不能够以亚单位疫苗形式 存在。

·活的病原性细菌具有许多重要的免疫原性分子，如外膜蛋白和荚膜 蛋白，它们均对于保护至关重要且因此被包括进有效的亚单位疫苗中。

仅次于上述第1和第2点，尤其是第4点的明显问题使得难以制备有 效的亚单位疫苗。

这由例如在上述欧洲专利EP NO.0.453.024中公开的胸膜肺炎放线杆 菌亚单位疫苗加以说明，其中4种不同的亚单位(三种RTX-毒素和外膜蛋 白)结合于一种疫苗中。

很显然，为了克服抗Pasteurellaceae感染亚单位疫苗的不足，一种活 的减毒疫苗将是高度需要的。

活减毒疫苗具有下面的优势：

其可用低剂量施用(其是自我复制的)

其密切模拟天然/野生-型感染

其同时提供所有可能的免疫学重要的抗原。不过，尽管明显的优势， 本发明之前还没有商业上可得到的基于胸膜肺炎放线杆菌的活疫苗。其原 因在于下面似是而非的论点：如前述，Apx-I、-II和-III均是抗胸膜肺炎 放线杆菌感染普通疫苗的必需成分。因此活疫苗必需产生这三种RTX-毒 素。然而这三种RTX-毒素是所有放线杆菌种类中强有力的毒性因子(见， 如Coote，J.G.；FEMS微生物学综述88：137-162(1992))，Tascon 等.；分子微生物学，14：207-216(1994)，Jansen等.；感染与免疫.63： 27-37(1995))。

为了减弱活App菌株的毒力而对RTX-毒素的缺失在技术上是可行 的，但其没有提供解决问题的途径：由于它们不再在宿主中诱导对胸膜肺 炎放线杆菌溶血/细胞毒活性的免疫性，故这种RTX-阴性菌株作为活减毒 疫苗菌株将是无用的。

然而到现在，尽管在诱导免疫性中是重要的，但在建立免疫性中较 ApxI、-II和-III是次要的毒力因子还是未知的。

因此，在App基因组中具有这样的位点是高度必要的，即该位点当被 修饰时有利于毒力且因此导致减毒的App菌株，而同时，尽管其在激发免 疫性中是有用的，但从疫苗观点来看是必不可少的。然而这样的位点目前 还是未知的。此外，如果这样的位点将普遍存在于所有的App菌株中而不 是局限于某些血清型中，该位点是高度必要的。那么这样的位点将通过相 同位点的缺失允许对所有不同的血清型减毒。

提供普遍存在于无论什么血清型的所有胸膜肺炎放线杆菌菌株中的这 种减毒位点是本发明的目的之一。

最近，在胸膜肺炎放线杆菌血清型1菌株中发现了一种新的基因(论 文T.J.Anderson Nov.1995)。

尽管该基因不象已知的放线杆菌的ApxI、-II和-III基因，但其与已知 的脑膜炎奈氏球菌的RTX-毒素具有相似性，正是由于此原因将其命名为 RTX-基因apxIV。然而该基因几乎在所有的方面均与上述存在于各种放线 杆菌科的不同种中的三种已知RTX-毒素基因apxI、-II和-III不同。首先， 基因组结构完全不同。其次，没有如同发现于已知Apx-毒素的激活机制。 第三，在那时没有特异性的体内溶血或细胞毒活性可归结于该基因或其可 能的基因产物。

现已惊奇地发现该基因与三种已知的RTX-基因完全不同，无论其什么 血清型存在于胸膜肺炎放线杆菌的所有种类中。这通过探针杂交加以测 定，该探针包括apxIV编码序列，此序列中具有实施例6和7中所述所有 血清型胸膜肺炎放线杆菌的DNA限制性片段。出乎意料的是现已发现，虽 然apxIV缺失突变体是存活的，但与其具有apxIV的母本菌株相比，它们 毒性较小。

因此，已确定该基因产物，ApxIV毒素是所有胸膜肺炎放线杆菌菌株 中的毒力因子。这是个出乎意料的结论。因为到目前为止，根本没有什么 效应，更不用说可能影响毒力的效应被归结于该基因的体内产物。实际上， 直到现在无论如何甚至还没有该基因在胸膜肺炎放线杆菌体内或体外表达 的证据。因此以下的发现是本发明的优点之一：

·apxIV基因存在于任何血清型的所有胸膜肺炎放线杆菌菌株中；

·apxIV基因产物是所有胸膜肺炎放线杆菌血清型中的毒力因子，

·具有apxIV基因缺失的胸膜肺炎放线杆菌菌株仍然是存活的但具有 降低的毒力而没有显著减弱该菌株的免疫原性，

因此，本发明首次提供不产生有功能ApxIV毒素的胸膜肺炎放线杆菌 活减毒细菌。

有功能的ApxIV毒素被认为是这样的一种蛋白：即其具有在野生型细 菌中表达ApxIV毒素的所有特征，并且以野生型水平表达。因此，无功能 的ApxIV毒素被认为是这样的一种毒素：即其缺乏在野生型细菌中表达 ApxIV毒素的部分或所有特征，并且/或者以不足以获得ApxIV毒素野生型 效应的水平表达。

产生ApxIV毒素能力的丧失可，例如是由于编码ApxIV毒素编码序列 中的修饰。其也可是由于，例如，已知涉及apxIV基因转录的区域，如启 动子区域的修饰或由于涉及翻译区域，如核糖体结合位点的修饰。

apxIV基因的整体结构列于图1中。

该图中，ApxIV毒素特征性的同向重复区由阴影框(dashed box)表 示，而也是ApxIV特异的富含-甘氨酸的非肽(nonapeptide)区由黑箭头 表示。该重复区发现于ApxIV的C-末端部分。这些鉴别性特征存在于所有 的胸膜肺炎放线杆菌血清型中。两种血清型的核苷酸序列和氨基酸序列列 于SEQ.ID NO.1-4中。SEQ.ID.NO.1显示了App血清型1apxIV基因的核 酸序列，且SEQ.ID.NO.2显示了血清型1ApxIV毒素的相应氨基酸序列。 SEQ.ID.NO.3显示了App血清型3apxIV基因的核苷酸序列，而 SEQ.ID.NO.4显示了血清型3ApxIV毒素的相应氨基酸序列。图2显示各 种胸膜肺炎放线杆菌血清型的Apx-毒素之间的氨基酸水平，特别位于N- 末端的650个氨基酸具有相当高水平的保守性。这也是apxIV基因的异常 特性。从图1中显而易见，根据血清型的不同，位于该毒素C-末端重复数 目的差异可能发生。此差异解释了获自各种血清型基因及编码毒素大小的 差异。

甚至在分离自相同血清型的胸膜肺炎放线杆菌不同分离物的apxIV基 因之间可能有某些核苷酸序列的差异。这是由于本领域众所周知的存在于 所有有机体中的自然变异。在由apxIV基因编码的ApxIV毒素中某些氨基 酸由其它血清型ApxIV毒素中的别的氨基酸所替代是可能的，然而该多肽 功能没有改变。例如，在某一位点含有Asp的多肽和其相应位点含有Asn 的变异体仍然具有相同的特性。其中的氨基酸由功能类似氨基酸所替代的 方法称为功能性替换。此时的变异体蛋白称为功能性变异体。另一种变异 的原因是遗传密码简并现象。简言之，其意思为，例如氨基酸谷氨酸由GAT 和GAA所编码。除了Met和Trp以外，此现象适用于所有的氨基酸。因 此，很明显，例如本发明给出的血清型1ApxIV毒素可不仅由SEQ ID NO： 1中的核苷酸序列所编码而且也可由很多种其它序列所编码，所有的仍然得 到相同或功能相同的多肽。

因此，编码与ApxIV毒素功能相当多肽的变异apxIV序列属于本发明 的范围之内。

根据本发明的活减毒细菌可以几种方式获得。获得该菌一种可能的方 式是通过经典方法的途径，如以诱变剂如碱基类似物处理野生型胸膜肺炎 放线杆菌，以紫外光处理或温度处理细菌。不产生有功能ApxIV毒素的菌 株不诱导或以较小程度诱导抗ApxIV毒素抗体，且因此可容易地在动物测 试中加以筛选。必需的抗血清可按下面实施例3中描述获得。另一种可能 性是用重组DNA-技术有意识地向编码ApxIV毒素的基因中导入详细定义 的突变。这样的突变可以是插入、缺失、一个核苷酸被另一个所替代或其 组合，唯一的条件是该突变基因不再编码有功能的ApxIV毒素。可容易地 看出，尤其是在开放阅读框中导入终止密码子的突变，或导致开放阅读框 中移码的突变很适于获得不再编码有功能ApxIV毒素的菌株。这种突变可 通过，例如，用Clontech销售的Transformer试剂盒的体外定点诱变方 法加以完成。许多其它标准的重组DNA技术如以限制性酶消化基因，然后 以内切核酸酶处理和重新连接同样是可用的。

因此，在优选的方式中，本发明的该实施方案涉及其中编码ApxIV毒 素的基因包括突变的活减毒细菌。

包括apxIV基因片段或甚至整个基因缺失，或异源DNA-片段插入的详 细定义的突变，与经典诱导的突变相比，具有这样的优势：即它们将不回 复到野生型状况。

因此，在更为优选的方式中，本发明的该实施方案指其中编码ApxIV 毒素的基因包括插入和/或缺失的活减毒细菌。

如果现将大量的疫苗施于猪中，只要是为了降低接种费用的原因，很 明显几种疫苗的联合施用将会是合乎需要的。因此，使用活体减毒疫苗菌 株作为编码选自其它病原性微生物或病毒抗原的异源基因的重组载体是很 有吸引力的。施用这样的重组载体具有这样的优势，即施用该载体后，诱 导出同时抗两种或更多种疾病的免疫性。因为编码ApxIV毒素的基因可用 作这样异源基因的插入位点，所以根据本发明的活减毒细菌提供了异源基 因很适宜的载体。ApxIV基因用作插入位点具有这样的优势：即apxIV基 因被同时失活，并且新导入的异源基因可根据同源的胸膜肺炎放线杆菌基 因来表达。这种重组载体的构建可用标准的分子生物学技术如同源重组按 常规地加以完成。因此，在甚至更为优选的实施方案中，本发明涉及这样 的活减毒的胸膜肺炎放线杆菌：即其不产生有功能的ApxIV毒素，并且其 中有异源基因插入到ApxIV基因中。如上述，这样的异源基因可以是例如， 编码选自其它病原微生物或病毒抗原的基因。另一种可能性是插入编码涉 及激发免疫系统的蛋白，如白细胞介素或干扰素的基因。

在本发明更为优选的形式中，异源基因编码一个或更多个选自以下类 群的抗原，包括猪生殖呼吸综合症(PRRS)病毒、假狂犬病毒、猪流感 病毒、猪细小病毒、传染性胃肠炎病毒(Transmissible Gastroenteritis vires)、轮状病毒、大肠杆菌、猪丹毒丝菌、多杀巴斯德氏菌、支气管炎 博德特氏菌、副猪嗜血菌及猪链球菌。

然而在重组载体中异源基因的表达有严重的潜在危险：已知这几种蛋 白如果在异源菌中表达是有毒的。因此，编码该蛋白的基因决不可导入异 源载体中，因为由于表达一定量异源基因，故成功的重组体将会最终死亡。 流感嗜血杆菌的P-2蛋白，仅列举一个实施例，可简单地不在大肠杆菌中 表达(Munson等，感染与免疫57：88-94(1989))。本发明的目标 之一是提供没有此缺点的重组活载体。已意外发现，尽管apxIV基因在体 内有效表达(见实施例5)，但是其在体外不表达(见实施例4)。这是 从未能在体外培养的胸膜肺炎放线杆菌培养物中显示出ApxIV毒素的存在 得出的。这意味着ApxIV的表达依赖于其中培养有胸膜肺炎放线杆菌外在 环境来开启和关闭。该特征较已知的活重组载体提供了出乎预料的优势： 如果异源基因的表达受apxIV启动子控制，那么无论插入什么异源基因， 根据本发明的胸膜肺炎放线杆菌活减毒载体可在体外培养至高密度，因为 外源基因在这些条件下将不表达。施用许多细菌至宿主以后，异源基因的 表达将开始且在复制期间或细菌死后的某个时间，其将是宿主的免疫系统 可利用的。可通过，例如，用异源基因的编码区替代apxIV基因的编码序 列而将待表达的异源基因有功能地连接到apxIV启动子上。替代整个apxIV 基因是不必要的：以包括其终止密码子的异源基因编码区替代ApxIV的 ATG密码子就已足够。通过建立融合构建体在apxIV启动子影响下表达异 源基因也是可能的。这可通过在具有apxIV ATG密码子下游的apxIV阅读 框的框架中插入异源基因加以完成。

词语“有功能地连接到apxIV启动子上”意思为异源基因的转录在 apxIV启动子处起始。

不用说，插入异源基因的每个位置，其中的异源基因有功能地连接到 apxIV启动子上，存在于本发明的范围之内。

因此，该实施方案最为优选的形式涉及本发明的活减毒细菌，其中带 有有功能地连接到apxIV启动子区域上的异源基因。

天然apxIV启动子是个可开关的启动子，其在体外关闭且在体内打开， 该惊人的发现使该启动子成为其天然宿主中和作为其它细菌的异源启动子 很通用的表达工具。当用作其它细菌中的异源启动子时，包括该启动子的 DNA可从其宿主中分离并转入除胸膜肺炎放线杆菌以外的细菌中。

现在易行的另一种选择是克隆数拷贝的apxIV启动子，其中每种控制 着另一种基因的表达。这虽然能够在宿主菌胸膜肺炎放线杆菌中加以完 成，但该多拷贝原理同样适用于其它细菌。如上述，该启动子可用于在体 内选择性地表达一种或多种编码选自其它病原微生物或病毒抗原的异源基 因。该启动子也可用于表达编码细胞因子如白细胞介素、肿瘤坏死因子或 干扰素的异源DNA序列。已知数种细胞因子，如干扰素作为免疫调节剂而 起重要作用。因此在apxIV启动子的控制下表达这样的遗传信息可能是优 越的。因此，本发明的另一实施方案涉及带有控制apxIV基因表达启动子 的核苷酸序列。

在自然状态下控制apxIV基因表达的可开关启动子现被发现位于SEQ ID NO：5中位置451和1132之间的DNA片段中。很明显该DNA片段 中那些非启动子必需成分的部分不必要存在于该片段中。因此，保留该启 动子活性的此DNA片段的较短部分同样适用于异源基因的表达。因此，该 实施方案更为优选的形式涉及包括SEQ ID NO：5中位置451到1132DNA 片段或其仍具有启动子活性子片段的核苷酸序列。

细菌启动子均具有两个共有区，所谓的-10和-35区。虽然这些共有区 的侧翼序列可能在一定程度上影响启动子的效率，仅使用包括-35与ATG 密码子之间的DNA片段的启动子区域部分可能是优越的。该DNA片段位 于SEQ ID NO：5的位置617与位置641之间。因此，在本发明该实施方 案更为优选的形式中涉及包括SEQ ID NO：5中位置617至641之间DNA 片段的核苷酸序列。

本发明也涉及作为亚单位疫苗成分的ApxIV毒素。亚单位疫苗将最为 可能包括这三种已知的Apx-毒素。这一点上面已经提到。然而，如上述， 由于意外地发现ApsIV毒素存在于所有胸膜肺炎放线杆菌血清型中，故其 是亚单位疫苗理想的添加成分：产生的抗ApxIV毒素的中和抗体提供了对 无论什么血清型的每种及所有胸膜肺炎放线杆菌株所产生ApxIV毒素的保 护。因此，本发明的另一个实施方案涉及用于保护动物免受胸膜肺炎放线 杆菌细菌感染的亚单位疫苗，其中包括纯化的ApxIV毒素。ApxIV毒素可 单独施用，或与任何或所有上述的毒素ApxI、-II和-III结合施用和/或， 例如，与胸膜肺炎放线杆菌外膜蛋白(OMPs)结合施用。可通过将ApxIV 毒素以足以诱导免疫反应的量与药物上可接受的载体混合而容易地制备该 疫苗。通过在适当的表达载体中导入apxIV基因、表达该基因及分离毒素 而制备ApxIV毒素是可能的。本领域中已知有多种通用表达系统，如细胞 表达系统，杆状病毒表达系统及哺乳动物细胞表达系统。在实施例3中描 述了如何通过大肠杆菌中表达该基因而获得ApxIV毒素。

本发明的另一实施方案涉及活减毒疫苗，其中包括上述用于保护动物 免受胸膜肺炎放线杆菌感染的活减毒细菌。这种疫苗可通过将活减毒细菌 与药物上可接受的载体混合而获得。这些疫苗包括至少免疫原性有效量的 根据本发明活减毒产生菌。免疫原性有效量意思为接种时施用的活减毒菌 的量足以在宿主内诱导对产生毒性形式RTX-毒素菌的有效免疫反应。待施 用的有用剂量将随着年龄、体重及接种的动物，施用的方式和接种所要针 对病原体的类型而改变。此疫苗包括足以导致免疫反应的任何剂量的细 菌。例如，103与105个细菌之间的剂量范围是很合适的剂量。

药物上可接受的载体可以是简单的如水，但其也可以包括，例如，在 其中培养细菌的培养液。其它合适的载体例如，生理盐浓度的溶液。用于 本发明其它药物上可接受载体或稀释剂的实例包括稳定剂如SPGA、碳水 化合物(如山梨醇、甘露醇、淀粉、蔗糖、葡萄糖、葡聚糖)、蛋白如清 蛋白或酪蛋白、含有蛋白如牛血清或去脂牛奶的试剂及缓冲液(如磷酸盐 缓冲液)。

任选地，具有佐剂活性的一种或多种化合物可加入到疫苗中。佐剂为 非特异性的免疫系统刺激剂。它们增强宿主对入侵病原体的免疫反应。本 领域已知佐剂的实例有弗氏完全和不完全佐剂，维生素E，非离子型嵌段 聚合物，胞壁酰二肽，ISCOMs(免疫刺激复合物，参考如欧洲专利 EP109942)，皂角苷，矿物油，植物油和Carbopol(均聚物)。特别是 适用于粘膜应用的佐剂有，例如，大肠杆菌热不稳定性毒素(LT)或霍乱 毒素(CT)。

其它合适的佐剂有，例如，氢氧化铝，磷酸铝或氧化铝，油性乳剂(如 Bayol F(R)或Marcol52(R)，皂角苷或维生素E-加溶物。

因此，在优选形式中，根据本发明的疫苗包括佐剂。

为了施用到动物，根据本发明的疫苗可特别地以鼻内、皮内、皮下、 通过烟雾剂或肌肉内施用。

有几种保存亚单位和活生物的方式。例如在冰箱内保存是众所周知的 方法。在含有甘油的缓冲液中于-70℃保存也常使用。细菌也可保存于液氮 中。冷冻干燥是另一种保存方式。冷冻干燥的细菌可被保存并维持存活多 年。冷冻干燥的细菌的保存温度可位于零度以上而不损害其存活力。冷冻 干燥同样适用于亚单位。

冷冻干燥可根据众所周知的标准冷冻干燥方法加以完成。任选有利的 添加剂，如去脂牛奶、海藻糖、明胶或牛血清白蛋白可在冷冻过程中加入。

因此，在更为优选的实施方案中，根据本发明的疫苗是冷冻的形式。

在该实施方案更为优选的形式中，疫苗还额外包括一种或多种选自其 它病原体微生物或病毒的抗原。这种疫苗可通过将选自其它病原菌或病毒 的一种或多种抗原添加到根据本发明的活减毒菌及上述药物上可接受的载 体中而获得。

当然，不仅添加一种或多种抗原，而且添加一种或多种整个病原体如， 失活或活性形式病原体是可能的。

作为选择，可用上述已知的重组DNA技术将编码一种或多种选自其它 病原微生物或病毒的抗原的遗传信息克隆到活减毒菌中而获得疫苗。无论 从医学还是从身体角度看，这种疫苗当然较以每种病原体单独接种对接种 的动物产生较小的协迫。

在甚至更为优选的形式中，这些抗原选自猪生殖呼吸综合症(PRRS) 病毒、伪狂犬病毒、猪流感病毒、猪细小病毒、传染性胃肠炎病毒、轮状 病毒、大肠杆菌、猪丹毒丝菌、多杀巴斯德氏菌、支气管炎博德特氏菌、 副猪嗜血菌及猪链球菌。

本发明也涉及不能产生有功能ApxIV毒素的各种活减毒胸膜肺炎放线 杆菌的制备方法。这些方法包括在编码apxIV蛋白的基因中导入突变。用 诱变剂的经典突变技术和本领域众所周知的用于apxIV基因遗传信息插 入、替代或缺失的重组DNA技术是可用的。

在更为优选的形式中，上述方法用于导入缺失。

包括将根据本发明的细菌与药物上可接受的载体混合的用于本发明活 减毒疫苗制备的方法也是本发明的一部分。

用于亚单位疫苗制备的方法也在本发明的范围之内。该方法包括将纯 化的ApxIV毒素与药物上可接受的载体混合。

在活疫苗接种领域中另一个普遍认识到的问题如下：在宿主动物血清 中抗某种病原体抗体的存在表明该宿主已被此毒性或减毒形式的病原体感 染。然而区分野外感染的动物与以活疫苗菌株接种的动物是不可能的。根 据本发明的活体减毒胸膜肺炎放线杆菌按如下提供了该问题的解决方案： 如在实施例3中所述，胸膜肺炎放线杆菌血清型1的apxIV基因已被分离 并在异源宿主细胞中表达。将此表达产物进行PAAGE-凝胶电泳且然后用 于Western-印迹。将印迹与获自以胸膜肺炎放线杆菌有意识感染猪的恢复 期血清及获自野生菌株感染的血清孵育。发现apxIV基因在所有测试的胸 膜肺炎放线杆菌野生菌株中均有体内表达。这表明以胸膜肺炎放线杆菌感 染的猪将一直具有抗所有感染菌株血清型的感染它们的菌株的抗体。由于 apxIV基因的缺失，根据本发明的活减毒菌不再产生ApxIV毒素。因此以 本发明的活减毒胸膜肺炎放线杆菌菌株接种的动物在其血清中将不具有抗 ApxIV毒素的抗体。

在比较测试，如ELISA测试中，该血清将因此与所有免疫原性的胸膜 肺炎放线杆菌-蛋白如ApxI、II和/或III反应，但将不与ApxIV起反应。 然而，以胸膜肺炎放线杆菌野生菌株感染猪的血清将与所有免疫原性的胸 膜肺炎放线杆菌-蛋白，包括ApxIV起反应。因此，根据本发明的活减毒胸 膜肺炎放线杆菌证明是很适宜的标记疫苗，即可与野生菌株区分的疫苗菌 株。

用于区分疫苗菌株与野生菌株的诊断测试可以是简单的ELISA-测 试，其中的纯化ApxIV毒素涂到ELISA-平板的孔壁上。然后与待测的猪 血清孵育，接着与，如标记的抗猪抗体孵育可显示抗ApxIV毒素的抗体存 在与否。

另一种诊断测试系统的实例是，如，将包括纯化ApxIV毒素的Western 印迹与待测的猪血清孵育，接着检测特异性的抗-ApxIV抗体。

因此，用于区分以胸膜肺炎放线杆菌野生菌株感染猪的血清与以包括 本发明活减毒疫苗胸膜肺炎放线杆菌菌株疫苗接种猪的血清(包括纯化 ApxIV毒素)的诊断测试也在本发明的范围之内。

猪健康保护中的另一问题如下：即难以用快捷而清晰的方式测定猪是 否以胸膜肺炎放线杆菌或猪放线杆菌感染，或是二者共同感染。目前还没 有用于对猪放线杆菌特异性检测的诊断测试。这主要是由于这样的事实， 即胸膜肺炎放线杆菌与猪放线杆菌共有许多相同的抗原。两种高度抗原性 的Apx-毒素可作为实例；在如猪放线杆菌中，ApxI与ApxII具有高度保 守的同源物(Van Ostaayen等.，待发表)。

编码ApxI、-II和-III毒素或同源物的已知RTX基因实际上发现于放 线杆菌属的所有成员中，如胸膜肺炎放线杆菌、猪放线杆菌、罗氏放线杆 菌及马驹放线杆菌。因此，本发明者最初认为，新的RTX-毒素ApxIV在 所有放线杆菌属成员中是相同的。然而，测试猪病原性放线杆菌后发现， 又一次与已知三种RTX-基因惊奇地形成鲜明对照，即该新的RTX-基因 apxIV仅存在于猪病原体胸膜肺炎放线杆菌中。其没有出现于所有其它常 见的猪病原性放线杆菌各种类中，且因此它也没有出现于猪放线杆菌中。 见实施例6和7。因此，令人惊奇地注意到猪血清中抗ApxIV抗体的存在 是猪被胸膜肺炎放线杆菌感染而不是被猪放线杆菌或任何其它猪病原体放 线杆菌种类感染的快捷而又清晰的证据。

这样，本发明也提供了基于抗ApxIV抗体存在与否的诊断测试，且因 此用于特异性区分胸膜肺炎放线杆菌感染与猪放线杆菌感染的区别测试。 这种测试可以是，如，ELISA测试，其在分离的小孔中包括既存在于胸膜 肺炎放线杆菌又存在于猪放线杆菌中的ApxI及-II毒素和纯化的ApxIV毒 素。猪放线杆菌感染的动物血清将仅与包括ApxI和Apx-II的小孔起反应 而胸膜肺炎放线杆菌感染的动物也将与包括纯化ApxIV毒素的小孔起反 应。

实施例1：

胸膜肺炎放线杆菌血清型1apxIV基因的克隆与分析

标准的分子生物学方法(质粒DNA分离，限制性酶切、琼脂糖凝胶电 泳、Southern印迹、连接、转化、电穿孔)，如果没有另作说明，基本上 按Sambrook等(分子克隆，实验手册，冷泉港、纽约，1989)或Ausubel 等(当前分子生物学方法，John Wiley & Sons，纽约，1987)的描述进 行。PCR基本上按Innis等(PCR方法，方法及应用指南，学术出版公司， 圣地亚哥，1990)所述进行。染色体DNA分离根据Pitcher等(应用微生 物学通迅8；151-156，1989)完成。所有胸膜肺炎放线杆菌参比菌株(血 清型1：菌株4074；血清型2：菌株S1536：血清型3：S1421；血清型 4M62；血清型5a：K17；血清型5b：L20；血清型6：femφ；血清 型7：WF83；血清型8：405；血清型9：CVI13261；血清型10：13039； 血清型11：56153及血清型12：8329)的来源由Frey和Nicolet描述(临 床微生物杂志，28；232-236，1990)。胸膜肺炎放线杆菌血清型3菌 株HV114为野生型分离子(即在Beck等，临床微生物学杂志.，32； 2749-2754，1994中测试的血清型3菌株之一)。所用的其它放线杆菌菌 株；罗氏放线杆菌：ATCC27072；马驹放线杆菌：ATCC19392；猪放线 杆菌：ATCC15558。溶血巴斯德氏菌1型菌株ATCC14003被使用。

所用的大肠杆菌宿主菌株：XL1-blue(Stratagene，La Yolla，Ca；基因 型：rec A1 end A1 gyrA96 thi-1 hsd R17 sup E44 rel A 1lac[F’proAB laclq ZDM 15 Tn10(Tetr)])及HMS174(DE3)(AMS生物技术公司， 瑞士；基因型：F-rec A(rk12-mk12+)rifr IDE3)。根据获自T.J.，Anderson 论文的初步序列数据(Guelph大学，1995)，合成两条命名为 APXIVA-1L(5’-TGGCACTGACGGTGATGA-3’)和APXIVA-1R(5’ -GGCCATCGACTCAACCAT-3’)的引物。这些引物用于以胸膜肺炎放 线杆菌血清型3菌株HV114和血清型1参照菌株4074的染色体DNA作为 模板的PCR扩增中。用两种菌株扩增出442bp的片段。将获自血清型3染 色体DNA的此片段根据制造商方法手册以洋地黄毒苷-11-dUTP(宝灵曼) 标记(此片段命名为探针APXIVA，见图4)。随后将该标记探针用于与 含有ClaI消化的菌株4074染色体DNA的Southern印迹杂交。该探针与 大约8.0kb的片段杂交。血清型1菌株4074的apxIV基因通过将ClaI消 化的染色体DNA连接到ClaI消化的pBluescript II SK-(Stratagene美国) 中而加以分离。以连接的DNA转化大肠杆菌菌株XL1-blue并将转化体于 含有100mg/ml氨苄青霉素的LB平板上进行筛选。

用APXIVA探针通过平板硝酸纤维素复制品的菌落杂交筛选带有 apxIV的克隆。这样，分离到命名为pROK7的质粒并显示其带有约8kb 的ClaI插入子。将ClaI插入子的头6736bp进行测序(SEQ ID 1)并鉴 定出编码具有约186KD预期大小的编码1657个氨基酸残基蛋白 (SEQ ID 2)的4971个核苷酸的开放阅读框。该基因命名为apxIV-var1 (见图3)。

实施例2：

胸膜肺炎放线杆菌血清型3apxIV基因的克隆与分析

将标记的探针APXIVA(在实施例1中提到)用于与含有ClaI消化的 HV114菌株染色体DNA的Southern印迹杂交。探针与约7.0kb的片段杂 交。将从HV114分离的染色体DNA以CIaI消化，并与ClaI消化的 pBluescript II SK-(Stratagene美国)连接。以连接的DNA转化大肠杆菌 菌株XL1-blue并于具有100mg/ml氨苄青霉素的LB平板上筛选转化体。 用APXIVA探针通过平板的硝酸纤维素复制品的菌落杂交筛选带有apxIV 的克隆。因此，分离出一个名为pROK5的质粒并显示其带有约7kb的ClaI 插入子。通过序列分析分析该插入子(SEQ ID 3)。鉴定出一个4146bp 的开放阅读框，其编码具有约154KD预期大小的1382氨基酸残基的蛋白 (SEQ ID 4)。该基因命名为apxIV-Var3(见图3)。

实施例3：

ApxIV var3-多聚组氨酸融合蛋白在大肠杆菌中的表达

由质粒pROK5，制备一个缺失克隆，其中含有apxIV基因的3’末端， 从BamHI位点(SEQ ID NO：3中核苷酸NO.2747)到apxIV基因插 入下游末端的ClaI位点。将该质粒命名为pROK1。用寡核苷酸 APXIVAHIS1-L(5’-AGCCATATGGGCGATTTAAATTTCAG-3’)及 APXIVAHIS1-R(5’-TATGGATCCTCCGTGCTTCTGAGC-3’)和质粒 pROK1 DNA作为模板，扩增出2.1kb的DNA片段(见图4)，其中含有 分别位于5’和3’末端NdeI及BamHI限制性位点两侧的apxIV-var3(SEQ ID 3)中3520到5643bp的区域。在表达载体pETHIS-1中克隆NdeI/BamHI 消化的PCR片段后，以相同的酶消化，获得名为pJFFapxIV6/10 his-1的 质粒。质粒pETHIS-1是pET14b(Novagen公司.，Madison，Wi)的衍 生物，其中的多克隆位点已被扩展且已插入编码组氨酸十聚体 (decamer)的区域。因而，pJFFapxIV6/10 his-1质粒含有T7启动子控 制下的翻译融合体，其编码组氨酸六聚体、后接SEQ ID 4中653到1360 氨基酸残基，后面再接上组氨酸十聚体。将此质粒转化至具有pLysS的大 肠杆菌菌株HMS174(DE3)中，其中含有IPTG可诱导的T7RNA聚合 酶基因和用于增加稳定性的T7溶菌酶基因。将该菌株培养于含25mg/ml 氯霉素及100mg/ml的氨苄青霉素的LB培养基至0.5的OD650，并以10mM 浓度的异丙基-b-D-硫代吡喃半乳糖苷诱导。添加IPTG以后，细胞于37 ℃孵育2.5小时，离心收获细胞，并且分离包涵体形式的80kD预期大小的 融合蛋白。将包涵体溶解于pH8.0的6M盐酸胍、300mM NaCl和50mM NaH2PO4溶液中且80kD融合蛋白通过用Ni2+螯合柱(Qiagen AG，Basel) 的固定金属亲和层析(IMAC)(Schmitt等，分子生物学报告18； 223-230，1993)进一步加以纯化。以pH5.0从柱中洗脱纯净蛋白。将收 集的馏份于pH8.0的300mM NaCl和50mM NaH2PO4溶液中透析。以用1 体积完全弗氏佐剂(Difco实验室，Detroit，MI)混合的500mg多聚组 氨酸融合产物免疫兔子。3周后施以混合有不完全弗氏佐剂的相同量的增 强剂量。增强免疫后四周，将兔子放血并获得包括抗-ApxIV毒素抗体称为 血清522-409的超免疫血清。

实施例4：

apxIV基因在体外培养的胸膜肺炎放线杆菌中的表达

将血清型1的胸膜肺炎放线杆菌参比菌株培养于补充以10mg/ml b- NAD的Columbia肉汤中并按所述(Beck等，临床微生物杂志，32； 2749-2754，1994)进行收获。在相邻于包括ApxIA、ApxIIA和ApxIVA- 多聚组氨酸融合蛋白道的位置通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(Laemmli，自然 227：680-685，1970)分离浓缩的培养上清并进行Western印迹方法 (Towbin等，美国自然科学院院报76：4350-4354，1979)。将Western 印迹按Beek等所述(临床微生物学杂志，32；2749-2754，1994)与抗 -ApxIA-和抗-ApxIIA单克隆抗体及抗-ApxIV血清522-409(见实施例 3)起反应。分离的血清型1RTX毒素馏份清楚地含有ApxIA和ApxIIA。 ApxIVA的存在没能得到证实(见图5)。

实施例5：

apxIV基因在胸膜肺炎放线杆菌感染期间的体内表达

将含有80kD多聚组氨酸-ApxIV-var3融合蛋白(见实施例3)的聚丙 烯酰胺凝胶转移至硝酸纤维素膜上。将该膜分成细条带(strips)与抗血 清型1的(100倍稀释的)恢复期野生血清或以血清型1的参比菌株(Frey 和Nicolet，兽医微生物学，28；61-73，1991)实验性感染的猪血清起 反应。用碱性磷酸酶标记的抗兔IgG的偶联物(Kirkegaard Perry公司， Graithersburg，Md)与NBT(4-氮蓝四唑氯化物)及BCIP(5-溴-4-氯 -3-吲哚基-磷酸酯)显色观察反应(见图6)。血清型1野生型血清及实验 性感染的猪血清与80kD的多聚组氨酸-ApxIV-var3蛋白反应。这表明 ApxIV蛋白实际上表达，具有抗原性且在猪中胸膜肺炎放线杆菌感染过程 中诱导抗-ApxIV毒素抗体。

实施例6：

用Southern印迹(证明)apxIV基因在所有胸膜肺炎放线杆菌血清型 中的存在及其在非胸膜肺炎放线杆菌菌株中的不存在

为了研究apxIV基因在各种胸膜肺炎放线杆菌血清型及相关细菌中的 存在，制备三种探针(见图4)。探针APXIVA在实施例1中描述过。探 针APXIVA2在BamHI和NruI位点之间含有2015bp的DNA片段。通过 用寡聚体APPIV1-L(5’-GGGACAGTGGCTCAATTAAG-3’)和 (APPIV1-R(5’-AGCTGTAAACTCCACCAACG-3’)的PCR扩增制 备758bp的探针APPIVA1。所有的探针根据制造商手册以洋地黄毒苷- 11-dUTP(宝灵曼)标记并与Southern印迹杂交，印迹中含有所有胸膜肺 炎放线杆菌参比菌株和HV114野生菌株、猪放线杆菌(ATCC15558)、 罗氏放线杆菌(ATCC27072)及马驹放线杆菌(ATCC19392)的ClaI 消化的染色体DNA。所有三个探针反应类似(见图7APXIVA2探针的结 果)。所有的胸膜肺炎放线杆菌菌株反应，而没有观察到与猪放线杆菌、 马驹放线杆菌及罗氏放线杆菌菌株的反应。

实施例7：

用PCR扩增(证实)apxIV基因在胸膜肺炎放线杆菌及相关菌株中的 存在

用来自各种胸膜肺炎放线杆菌血清型、其它放线杆菌种类及溶血巴斯 德氏菌的50ng染色体DNA作为模板，及引物APXIVA-1L(5’- TGGCACTGACGGTGATGA-3’)和APXIVA-IR(5’- GGCCATCGACTCAACCAT-3’进行PCR扩增。产物在琼脂糖凝胶上分析 以后，在所有胸膜肺炎放线杆菌样品中观察到442bp预期大小的产物，但 没有在其它放线杆菌种类中观察到(图8)。这表明除了实施例6中的结 果外，PCR也可用于区分胸膜肺炎放线杆菌与其它放线杆菌种类。

实施例8：

ApxIV-var1多聚组氨酸融合蛋白的过量表达

以质粒pROK-7(见实施例1)作为模板且寡核苷酸APX4/II5-L (5’-CGCCATATGACAAAATTAACTATGCAAG)及APX4II6-R (5’-CGCGAATTCAGCGACACAAGAGATAT)作为PCR-引物开始， 扩增PCR片段。然后将足够量的该片段以限制性酶NdeI和EcoRI消化并 克隆入实施例3中所述的以相同酶消化的表达载体pETHIS-1中。根据得 到的命名为pJFFApxIVA1His1的质粒，按实施例3中所述在大肠杆菌中 过量表达206kD的1841个氨基酸残基的多聚组氨酸融合蛋白(PAGE中 测定的MW)。如在SEQ ID NO：5中所述，该蛋白由横跨其中no.1132 至6546核酸的编码区所编码。蛋白的氨基酸序列显示于SEQ ID NO：6 中。在Western印迹中，显示此产物与特异性的抗-ApxIV血清522-409反 应(实施例3中描述的抗血清)。

实施例9：

通过以ApxIV接种保护小鼠免受APP感染

两种均源自血清型1参比菌株4074基因组材料的在实施例8中所述 206KD多聚组氨酸-ApxIV融合蛋白和相应的108KD多聚组氨酸-ApxIA- 融合蛋白按实施例3中所述过量表达。将诱导大肠杆菌细胞的细胞沉淀物 重悬于PBS缓冲液(1g细胞沉淀于6ml缓冲液中)并于冰上45秒钟超声 粉碎2次用于细胞裂解。以22.000xg 4℃离心20分钟后，弃上清并将3M 的尿素(pH6.3)溶液洗得到的沉淀。22.000xg离心20分钟后去除尿素， 并将得到的沉淀溶于6M的盐酸胍(pH8.0)中。经PAGE凝胶的光密度 测定后通过特定蛋白的浓度对蛋白样品进行标准化。样品以PBS稀释并以 油性佐剂配制。

15只小鼠为一组共3组以ApxIV抗原(36.3微克)、ApxIA抗原 (36.3微克)或仅以佐剂进行腹膜内免疫。以0.4ml体积施用疫苗。第一 次接种24天后，将每组小鼠分成7只和8只小鼠的两组，均以一半量的抗 原增强免疫。7只小鼠的组以0.2ml的体积在腹膜内进行增强免疫且8只 小鼠的组以0.1ml每只于后肢进行肌肉内接种。增强免疫13天后，将小鼠 1.5 108cfu的毒性血清型1菌株腹膜内感染。

实施例10：

ApxIV的孔道形成能力：

表达ApxIV的新鲜诱导的大肠杆菌用作用于按Maier等，感染免疫， 64；4415-4423(1996)所述在人工脂双层中测试孔道形成的蛋白来源。 用于黑色脂双层实验的方法以前已有描述(Benz等；生物化学生物物理学 报511：305-319(1978)。膜由1％的asolection溶液(Sigma的大豆凝 集素型IV-S，St，Louis MO)于正癸烷中形成。形成10倍跨膜盐梯度 后5-10分钟用Keithley 610C静电计测量零电流膜电势(Zero current membrane potential)(Benz等，生物化学生物物理杂志551：238-247 (1979)。在0.5％胆固醇存在时ApxIV的存在导致高频率的孔道形成， 平均单个通道电导率(G)为4nS。

这些结果表示ApxIV诱导进入人工双层的孔道且因此对真核细胞是有 毒的且因此为胸膜肺炎放线杆菌的毒性因子。

附图说明：

图1：ApxIVA var1和ApxIVA var3(var代表血清型)的比较。图 示发现于C-末端的不同特征。阴影框代表ApxIVA中的同向重复区域。黑 体竖线表示富含甘氨酸非肽(nonapeptides)的位置，且DNA聚合酶家 族B特征以黑三角形表示。氨基酸序列YSDSANSKK代表ApxIVA var3 基因中的间隔序列。在ApxIVA var3中被缺失的ApxIVA var1序列片段也 显示于图中。

图2：ApxIVA var1和ApxIVA var3的同向重复1(A)、同向重复 2(B)及同向重复3(C)的氨基酸序列的比较。同向重复1，2和3 的每个拷贝由字母标记以区分它们用于序列比较。变异的残基以黑体字母 显示。

图3：pBLac7(T.J.Anderson学位论文.University of Guelph，1995)，pROK7和pROK5的部分限制性图谱。不同的开放阅读框 (ORF’s)以箭头表示。pROK7中的lacZ断箭头表示该基因的部分测 序。潜在的rho-非依赖性转录终止子被标出(W)。潜在的转录起点由三 角形标出。限制性位点： A＝Asp700；B＝BamHI；C＝ClaI；E＝EcoRV；Ec＝EcoRI；H＝HindIII；N＝NruI； Nd＝NdeI，Nh＝NheI；P＝PstI；S＝SpeI；Sm＝SmI。

图4：各种寡核苷酸和探针在apxIVA var3基因图谱上的位置。

图5：ApxIV在体外培养的血清型1参比菌株4074中的表达。A板 与抗-ApxIA单克隆抗体反应，板B与抗-ApxIIA单克隆抗体反应且板C与 抗-ApxIVA血清522-409反应。1道含有ApxIA-多聚组氨酸融合蛋白，2 道含有ApxIIA-多聚组氨酸融合蛋白，3道含有菌株4074浓缩培养物上 清，4道含有ApxIVA多聚组氨酸融合蛋白。

图6：显示以参比菌株血清型1实验性感染的猪血清(1道)或以80KD 多聚组氨酸融合蛋白血清型1野生感染猪血清(2-4道)反应性的免疫印 迹。使用血清522-409作为阳性对照(+)，用1000-倍稀释的多克隆兔抗 ApxI和ApxII(Frey等，感染免疫，57；2050-2056，1989)血清作 为阴性对照(-)。

图7：与探针APXIVA2杂交的ClaI消化的基因组DNA的Southern 印迹。1-13泳道：胸膜肺炎放线杆菌参比菌株；1：血清型1；2：血清 型2；3：血清型；4：血清型4；5：血清型5a；6：血清型5b；7： 血清型6；8：血清型7；9：血清型8；10：血清型9；11：血清型 10；12：血清型11；13：血清型12；14：HV114野生菌株；15： 猪放线杆菌(ATCC15558)；16：罗氏放线杆菌(ATCC27072)；17： 马驹放线杆菌(ATCC 19392)。分子大小标记(以千碱基对)显示于左 边。

图8：用引物APXIVA-1L和APXIVA-1R的PCR扩增。泳道分配： 1到13泳道分别含有胸膜肺炎放线杆菌参比菌株的1、2、3、4、5a、 5b、6、7、8、9、10、11和12血清型；14泳道：菌株HV114； 15泳道：猪放线杆菌ATCC15558；16泳道：罗氏放线杆菌ATCC27072； 17泳道：马驹放线杆菌ATCC19392；18泳道：李氏放线杆菌 (A.lignieresii)ATCC49236；19泳道：溶血巴斯德氏菌1型 ATCC14003。分子大小标记(以千碱基对)显示于左边。

                          序列表

(1)一般信息：

(i)申请人：

    (A)名称：AKZO Noble N.V.

    (B)街道：Velperweg 76

    (C)城市：Arnhem 

    (E)国家：荷兰

    (F)邮编：(ZIP)：6824BM

(ii)发明题目：活体减毒胸膜肺炎放线杆菌

(iii)序列数目：4

(iv)计算机可读形式：

    (A)介质类型：软盘

    (B)计算机：IBM PC兼容机

    (C)操作系统：PC-DOS/MS-DOS

    (D)软件：专利发布#1.0，1.30版(EPO)

(2)SEQ ID NO：1信息：

(i)序列特征：

    (A)长度：6736个碱基对

    (B)类型：核酸

    (C)链型：双链

    (D)拓扑学：线性

(ii)分子类型：DNA(基因组)

(iii)假设条件：无

(iv)反义：无

(vi)最初来源：

    (A)有机体：胸膜肺炎放线杆菌

    (B)菌株：4074(血清型1参比菌株)

(vii)直接来源

    (B)克隆：pROK7

(ix)特征：

    (A)名字/关键：CDS

    (B)位置：1576…6549

    (D)其它信息/密码子-起始-1576

       /功能＝“RTX毒素”

       /产物：“ApxIV_var1”

       /基因＝“apxIV_var1”

       /数目＝1

(xi)序列描述：SEQ ID NO：1：

ATCGATATGC CGCCGGGTAC GGGCGATATC CAACTTACTC TTTCGCAACA AATTCCGGTT     60

ACCGGTGCGG TGGTGGTAAC CACTCCGCAA GATATTGCGT TATTAGATGC GGTGAAAGGT    120

ATTTCAATGT TCCAAAAAGT GTCGGTACCG GTCTTAGGTA TCATTGAAAA TATGAGCGTA    180

CATATCTGCC AAAATTGCGG TCACCACGAA GATATTTTCG GCACCGGCGG TGCGGAGAAA    240

GTGGCGAAGA AATACGGTAC TAAAGTATTA GGACAAATGC CGTTGCATAT TCGCTTACGT    300

CAAGATTTGG ATGCCGGCAC ACCGACCGTC GTTGCGGCAC CGGAACACGA AACCAGCCGA    360

GCCTATATTG AATTAGCGGC AAAAGTCGCT TCGGAATTAT ACTGGCAAGG TTCGGTTATC     420

CCGTCTGAAA TTATGATTCG TGAAGTAAAA TAAGTTTTAA TAACCACGAA AACACAAAGA     480

ACACAAGCGG TAGAATTTGC AGAAAAATTT GCAAATCCTA CCGCTTTTTT ATTAGTACGA     540

TTCGCTGTTG GACTGCTATT TGATTTGGTT TGTCAGGATA TTATGTTATT GTAATGAAAT     600

GTTAGTGAAT TATTTTTATT AATTTGAAAG GAAACAAAAT GAAAATAAAA AAACGTTACA     660

TTGCGCTGTT GGTCTTAGGT GTCGTTATCA GCTATGCCTG GTATCAAAAT TATCAATGGG     720

AACAGCTGAT GTTAAGCGGT TATTGTGAAA AGGACGGAAG TTATTTTGAT GATAGGCATA     780

CGAAGCAAGA ACTGATTGAT AGGGCAATTA ACTATATGCT GGAGCATCAA TCTAAAAAAA     840

CATACGATGC TTATACTGAT GAACCTTTAG AAATAAAACC ATATTTAACA ATAGAGGAAT     900

TTAAAAAACT CAATCCAAAT TGTTGTGAAA TTACCTCATG GCCAGCAGAT GCAGTTCCAC     960

AAGATTGGGA TGTTCGTGTG GAAGGTAAGG CATATAGGTA TGTAATCGTA AAATATTTAA    1020

GAACCTTAGC AAATAGAGAA CCTGAACGAT GGGAAACTAG TATTGTTTTT GATAATTGCG    1080

GCAATCCTAA AAGAGCAAGC TACTTATATT ATTTAAAGAG AGAAATTTAT TATGACAAAA    1140

TTAACTATGC AAGATGTGAC CAATTTATAT TTATATAAAA CGAAAACTCT ACCTAAAGAT    1200

AGATTGGATG ATTCACTTAT TTCTGAAATA GGAAAAGGAG ATGATGATAT TGATAGAAAA    1260

GAATTTATGG TGGGGCCGGG ACGTTTTGTG ACCGCTGATA ACTTTAGCGT TGTAAGAGAT    1320

TTTTTTAATG CTGGGAAATC ACGCATTATT GCGCCGCAAG TCCCGCCTAT TCGTTCACAG    1380

CAGGAAAAAA TCTTGGTCGG TTTAAAACCG GGCAAATATT CCAAAGCGCA GATATTGGAA    1440

ATGCTGGGTT ATACGAAAGG CGGAGAAGTG GTAAATGGCA TGTTTGCCGG TGAAGTCCAG    1500

ACATTAGGCT TTTATGACGA TGGCAAAGGG GATTTACTCG AACGCGCCTA TATCTGGAAT    1560

ACCACAGGAT TTAAA ATG AGC GAC AAT GCC TTT TTT GTT ATA GAA GAA TCA     1611

                 Met Ser Asp Asn Ala Phe Phe Val Ile Glu Glu Ser

                   1               5                  10

GGC AAA CGC TAT ATT GAA AAC TTT GGT ATT GAA CCT CTT GGT AAG CAA      1659

Gly Lys Arg Tyr Ile Glu Asn Phe Gly Ile Glu Pro Leu Gly Lys Gln

         15                  20                  25

GAA GAT TTT GAT TTT GTC GGC GGC TTT TGG TCT AAC TTA GTG AAT CGT      1707

Glu Asp Phe Asp Phe Val Gly Gly Phe Trp Ser Asn Leu Val Asn Arg

     30                  35                  40

GGT TTG GAA AGT ATT ATC GAC CCA TCC GGT ATC GGT GGA ACG GTA AAC      1755

Gly Leu Glu Ser Ile Ile Asp Pro Ser Gly Ile Gly Gly Thr Val Asn

 45                  50                  55                  60

CTT AAC TTT ACC GGC GAG GTG GAA ACC TAC ACG TTA GAC GAA ACA AGG      1803

Leu Asn Phe Thr Gly Glu Val Glu Thr Tyr Thr Leu Asp Glu Thr Arg

                 65                  70                  75

TTT AAA GCG GAA GCG GCG AAG AAA AGC CAT TGG AGT TTA GTG AAT GCG      1851

Phe Lys Ala Glu Ala Ala Lys Lys Ser His Trp Ser Leu Val Asn Ala

             80                  85                  90

GCG AAA GTA TAC GGC GGT TTA GAC CAA ATT ATT AAA AAA CTA TGG GAC      1899

Ala Lys Val Tyr Gly Gly Leu Asp Gln Ile Ile Lys Lys Leu Trp Asp

         95                 100                 105

AGT GGC TCA ATT AAG CAT TTA TAT CAA GAT AAA GAT ACG GGC AAA TTA    1947

Ser Gly Ser Ile Lys His Leu Tyr Gln Asp Lys Asp Thr Gly Lys Leu

    110                 115                 120

AAA CCG ATT ATT TAC GGC ACG GCC GGC AAC GAC AGT AAG ATT GAA GGC    1995

Lys Pro Ile Ile Tyr Gly Thr Ala Gly Asn Asp Ser Lys Ile Glu Gly

125                 130                 135                 140

ACT AAA ATC ACC CGT AGG ATT GCG GGT AAA GAA GTT ACG CTT GAT ATT    2043

Thr Lys Ile Thr Arg Arg Ile Ala Gly Lys Glu Val Thr Leu Asp Ile

                145                 150                 155

GCC AAT CAG AAA ATT GAA AAA GGC GTG TTA GAG AAA TTG GGG CTG TCT    2091

Ala Asn Gln Lys Ile Glu Lys Gly Val Leu Glu Lys Leu Gly Leu Ser

            160                 165                 170

GTT AGT GGT TCG GAT ATC ATT AAA TTG TTG TTT GGA GCA TTG ACT CCA    2139

Val Ser Gly Ser Asp Ile Ile Lys Leu Leu Phe Gly Ala Leu Thr Pro

        175                 180                 185

ACT TTA AAT AGA ATG TTG CTA TCA CAA CTT ATC CAG TCT TTT TCC GAT    2187

Thr Leu Asn Arg Met Leu Leu Ser Gln Leu Ile Gln Ser Phe Ser Asp

    190                 195                 200

AGC TTG GCT AAA CTT GAT AAT CCC TTA GCC CCT TAC ACT AAA AAT GGC    2235

Ser Leu Ala Lys Leu Asp Asn Pro Leu Ala Pro Tyr Thr Lys Asn Gly

205                 210                 215                 220

GTG GTT TAT GTC ACC GGC AAA GGG AAT GAT GTG CTT AAA GGA ACT GAA    2283

Val Val Tyr Val Thr Gly Lys Gly Asn Asp Val Leu Lys Gly Thr Glu

                225                 230                 235

CAT GAG GAT TTG TTT CTC GGT GGT GAG GGG AAT GAT ACT TAT TAT GCG    2331

His Glu Asp Leu Phe Leu Gly Gly Glu Gly Asn Asp Thr Tyr Tyr Ala

            240                 245                 250

AGA GTA GGC GAT ACA ATT GAA GAC GCC GAC GGC AAA GGT AAA GTC TAT    2379

Arg Val Gly Asp Thr Ile Glu Asp Ala Asp Gly Lys Gly Lys Val Tyr

        255                 260                 265

TTT GTG AGA GAA AAA GGG GTA CCT AAG GCG GAT CCT AAG CGG GTA GAG    2427

Phe Val Arg Glu Lys Gly Val Pro Lys Ala Asp Pro Lys Arg Val Glu

    270                 275                 280

TTT AGC GAG TAC ATA ACG AAA GAA GAA ATA AAA GAG GTT GAA AAG GGG    2475

Phe Ser Glu Tyr Ile Thr Lys Glu Glu Ile Lys Glu Val Glu Lys Gly

285                 290                 295                 300

TTA TTA ACT TAC GCA GTT TTA GAA AAT TAT AAr TGG GAA GAG AAA ACG    2523

Leu Leu Thr Tyr Ala Val Leu Glu Asn Tyr Asn Trp Glu Glu Lys Thr

                305                 310                 315

GCG ACT TTC GCT CAT GCG ACT ATG CTT AAT GAG CTT TTT ACT GAT TAT    2571

Ala Thr Phe Ala His Ala Thr Met Leu Asn Glu Leu Phe Thr Asp Tyr

            320                 325                 330

ACT AAT TAT CGT TAT GAA GTT AAA GGA CTA AAA TTG CCC GCC GTT AAA    2619

Thr Asn Tyr Arg Tyr Glu Val Lys Gly Leu Lys Leu Pro Ala Val Lys

        335                 340                 345

AAG TTA AAA AGT CCG TTG GTG GAG TTT ACA GCT GAT TTA TTA ACT GTT    2667

Lys Leu Lys Ser Pro Leu Val Glu Phe Thr Ala Asp Leu Leu Thr Val

    350                 355                 360

ACG CCT ATT GAC GAA AAC GGA AAA GCA CTT AGC GAA AAA AGT ATT ACG    2715

Thr Pro Ile Asp Glu Asn Gly Lys Ala Leu Ser Glu Lys Ser Ile Thr

365                 370                 375                 380

GTT AAA AAT TTT AAA AAT GGT GAT TTA GGA ATA AGG TTG TTG GAT CCT    2763

Val Lys Asn Phe Lys Asn Gly Asp Leu Gly Ile Arg Leu Leu Asp Pro

                385                 390                 395

AAT AGC TAT TAT TAT TTC CTT GAA GGC CAA GAT ACG GGT TTT TAT GGT    2811

Asn Ser Tyr Tyr Tyr Phe Leu Glu Gly Gln Asp Thr Gly Phe Tyr Gly

            400                 405                 410

CCT GCT TTT TAT ATT GAA CGA AAA AAC GGT GGC GGC GCT AAA AAT AAC    2859

Pro Ala Phe Tyr Ile Glu Arg Lys Asn Gly Gly Gly Ala Lys Asn Asn

        415                 420                 425

TCG TCG GGA GCA GGA AAT AGC AAA GAT TGG GGC GGG AAC GGG CAT GGA    2907

Ser Ser Gly Ala Gly Asn Ser Lys Asp Trp Gly Gly Asn Gly His Gly

    430                 435                 440

AAT CAC CGA AAT AAT GCC TCC GAC CTG AAT AAA CCG GAC GGA AAT AAT    2955

Asn His Arg Asn Asn Ala Ser Asp Leu Asn Lys Pro Asp Gly Asn Asn

445                 450                 455                 460

GGG AAT AAC CAA AAT AAC GGA AGC AAT CAA GAT AAT CAT AGC GAT GTG    3003

Gly Asn Asn Gln Asn Asn Gly Ser Asn Gln Asp Asn His Ser Asp Val

                465                 470                 475

AAT GCG CCA AAT AAC CCG GGA CGT AAC TAT GAT ATT TAC GAT CCT TTA    3051

Asn Ala Pro Asn Asn Pro Gly Arg Asn Tyr Asp Ile Tyr Asp Pro Leu

            480                 485                 490

GCT TTA GAT TTA GAT GGA GAT GGG CTT GAA ACC GTG TCG ATG AAC GGG    3099

Ala Leu Asp Leu Asp Gly Asp Gly Leu Glu Thr Val Ser Met Asn Gly

        495                 500                 505

CGA CAA GGC GCG TTA TTC GAT CAT GAA GGA AAA GGT ATT CGT ACC GCA    3147

Arg Gln Gly Ala Leu Phe Asp His Glu Gly Lys Gly Ile Arg Thr Ala

    510                 515                 520

ACG GGC TGG CTC GCT GCG GAT GAC GGT TTT TTA GTG TTA GAT CGT AAC    3195

Thr Gly Trp Leu Ala Ala Asp Asp Gly Phe Leu Val Leu Asp Arg Asn

525                 530                 535                 540

CAA GAC GGC ATT ATT AAT GAT ATA AGC GAG TTA TTT AGT AAT AAA AAT    3243

Gln Asp Gly Ile Ile Asn Asp Ile Ser Glu Leu Phe Ser Asn Lys Asn

                545                 550                 555

CAA CTT TCC GAC GGC AGT ATT TCT GCA CAC GGT TTT GCG ACA TTA GCC    3291

Gln Leu Ser Asp Gly Ser Ile Ser Ala His Gly Phe Ala Thr Leu Ala

            560                 565                 570

GAT TTG GAT ACA AAC CAA GAT CAG CGT ATC GAC CAA AAT GAT AAG CTG    3339

Asp Leu Asp Thr Asn Gln Asp Gln Arg Ile Asp Gln Asn Asp Lys Leu

        575                 580                 585

TTT TCT AAA CTC CAA ATT TGG CGG GAT TTA AAT CAA AAC GGT TTT AGT    3387

Phe Ser Lys Leu Gln Ile Trp Arg Asp Leu Asn Gln Asn Gly Phe Ser

    590                 595                 600

GAA GCG AAT GAG CTG TTT AGC TTA GAA AGT TTG AAT ATT AAA TCT TTA    3435

Glu Ala Asn Glu Leu Phe Ser Leu Glu Ser Leu Asn Ile Lys Ser Leu

605                 610                615                  620

CAT ACC GCC TAT GAA GAG CGT AAT GAT TTT CTA GCG GGC AAT AAT ATC    3483

His Thr Ala Tyr Glu Glu Arg Asn Asp Phe Leu Ala Gly Asn Asn Ile

                625                 630                 635

CTT GCT CAG CTT GGG AAG TAT GAA AAA ACG GAC GGT ACT TTT GCA CAA    3531

Leu Ala Gln Leu Gly Lys Tyr Glu Lys Thr Asp Gly Thr Phe Ala Gln

            640                 645                 650

ATG GGC GAT TTA AAT TTC AGT TTT AAC CCG TTT TAT AGC CGA TTT ACC    3579

Met Gly Asp Leu Asn Phe Ser Phe Asn Pro Phe Tyr Ser Arg Phe Thr

        655                 660                 665

GAA GCG TTA AAT TTA ACC GAG CAA CAA CGT CGC ACA ATT AAT CTA ACC    3627

Glu Ala Leu Asn Leu Thr Glu Gln Gln Arg Arg Thr Ile Asn Leu Thr

    670                 675                 680

GGC ACC GGT CGG GTT CGG GAT TTG CGT GAA GCC GCC GCA CTT TCT GAG    3675

Gly Thr Gly Arg Val Arg Asp Leu Arg Glu Ala Ala Ala Leu Ser Glu

685                 690                 695                 700

GAG TTG GCT GCT TTA TTA CAA CAG TAC ACT AAG GCC TCC GAT TTT CAG    3723

Glu Leu Ala Ala Leu Leu Gln Gln Tyr Thr Lys Ala Ser Asp Phe Gln

                705                 710                 715

GCA CAA CGA GAA TTA TTG CCT GCC ATT TTA GAT AAA TGG GCG GCA ACG    3771

Ala Gln Arg Glu Leu Leu Pro Ala Ile Leu Asp Lys Trp Ala Ala Thr

            720                 725                 730

GAT TTA CAG TAT CAA CAT TAT GAT AAA ACA TTA CTT AAA ACG GTA GAA    3819

Asp Leu Gln Tyr Gln His Tyr Asp Lys Thr Leu Leu Lys Thr Val Glu

        735                 740                 745

AGT ACC GAT AGT AGT GCT TCT GTC GTT AGA GTC ACG CCT TCT CAA TTA    3867

Ser Thr Asp Ser Ser Ala Ser Val Val Arg Val Thr Pro Ser Gln Leu

    750                 755                 760

AGT AGT ATA CGC AAT GCA AAG CAT GAT CCT ACC GTT ATG CAA AAC TTT    3915

Ser Ser Ile Arg Asn Ala Lys His Asp Pro Thr Val Met Gln Asn Phe

765                 770                 775                 780

GAA CAG AGT AAG GCA AAA ATT GCG ACT TTA AAT TCG CTC TAC GGG TTA    3963

Glu Gln Ser Lys Ala Lys Ile Ala Thr Leu Asn Ser Leu Tyr Gly Leu

                785                 790                 795

AAT ATC GAT CAA CTT TAT TAC ACG ACG GAT AAA GAC ATT CGC TAT ATT    4011

Asn Ile Asp Gln Leu Tyr Tyr Thr Thr Asp Lys Asp Ile Arg Tyr Ile

            800                 805                 810

ACT GAT AAA GTG AAT AAT ATG TAT CAA ACA ACC GTA GAA CTT GCC TAC    4059

Thr Asp Lys Val Asn Asn Met Tyr Gln Thr Thr Val Glu Leu Ala Tyr

        815                 820                 825

CGT TCT TTA CTT TTA CAA ACG CGT TTG AAG AAA TAT GTT TAT AGC GTT    4107

Arg Ser Leu Leu Leu Gln Thr Arg Leu Lys Lys Tyr Val Tyr Ser Val

    830                 835                 840

AAT GCG AAA CAA TTC GAA GGG AAA TGG GTA ACC GAT TAT TCT CGT ACT    4155

Asn Ala Lys Gln Phe Glu Gly Lys Trp Val Thr Asp Tyr Ser Arg Thr

845                 850                 855                 860

GAA GCC TTA TTT AAC TCT ACT TTT AAA CAA TCG CCT GAA AAT GCA TTA    4203

Glu Ala Leu Phe Asn Ser Thr Phe Lys Gln Ser Pro Glu Asn Ala Leu

                865                 870                 875

TAT GAT TTA AGC GAA TAC CTT TCT TTC TTT AAC GAT CCT ACG GAA TGG    4251

Tyr Asp Leu Ser Glu Tyr Leu Ser Phe Phe Asn Asp Pro Thr Glu Trp

            880                 885                 890

AAA GAA GGG CTA TTA CTG TTA AGC CGT TAT ATA GAT TAT GCT AAA GCA    4299

Lys Glu Gly Leu Leu Leu Leu Ser Arg Tyr Ile Asp Tyr Ala Lys Ala

        895                 900                 905

CAA GGA TTT TAT GAA AAC TGG GCG GCT ACT TCT AAC TTA ACT ATT GCC    4347

Gln Gly Phe Tyr Glu Asn Trp Ala Ala Thr Ser Asn Leu Thr Ile Ala

    910                 915                 920

CGT TTA AGA GAG GCT GGA GTA ATT TTT GCA GAA TCG ACG GAT TTA AAA    4395

Arg Leu Arg Glu Ala Gly Val Ile Phe Ala Glu Ser Thr Asp Leu Lys

925                 930                 935                 940

GGC GAT GAA AAA AAT AAT ATT TTG TTA GGT AGC CAA AAA GAT AAT AAC    4443

Gly Asp Glu Lys Asn Asn Ile Leu Leu Gly Ser Gln Lys Asp Asn Asn

                945                 950                 955

TTA TCG GGT AGT GCA GGT GAT GAT CTA CTT ATC GGC GGA GAG GGT AAT    4491

Leu Ser Gly Ser Ala Gly Asp Asp Leu Leu Ile Gly Gly Glu Gly Asn

            960                 965                 970

GAT ACG TTA AAA GGC AGC TAC GGT GCA GAC ACC TAT ATC TTT AGC AAA    4539

Asp Thr Leu Lys Gly Ser Tyr Gly Ala Asp Thr Tyr Ile Phe Ser Lys

        975                 980                 985

GGA CAC GGA CAG GAT ATC GTT TAT GAA GAT ACC AAT AAT GAT AAC CGC    4587

Gly His Gly Gln Asp Ile Val Tyr Glu Asp Thr Asn Asn Asp Asn Arg

    990                 995                 1000

GCA AGA GAT ATC GAC ACC TTA AAA TTT ACC GAT GTG AAT TAT GCG GAA    4635

Ala Arg Asp Ile Asp Thr Leu Lys Phe Thr Asp Val Asn Tyr Ala Glu

1005                1010                1015                1020

GTG AAG TTT CGA CGA GTA GAT AAT GAC TTA ATG TTA TTC GGT TAT CAT    4683

Val Lys Phe Arg Arg Val Asp Asn Asp Leu Met Leu Phe Gly Tyr His

                1025                1030                1035

GAT ACG GAT TCG GTC ACG GTA AAA TCC TTC TAC AGC CAT GTA GAT TAT    4731

Asp Thr Asp Ser Val Thr Val Lys Ser Phe Tyr Ser His Val Asp Tyr

            1040                1045                1050

CAA TTT GAC AAA TTG GAG TTT GCT GAC CGC AGT ATA ACT CGC GAT GAA    4779

Gln Phe Asp Lys Leu Glu Phe Ala Asp Arg Ser Ile Thr Arg Asp Glu

        1055                1060                1065

CTG ATT AAA GCA GGG CTT CAT CTA TAC GGC ACC GAT GGC AAT GAT GAT    4827

Leu Ile Lys Ala Gly Leu His Leu Tyr Gly Thr Asp Gly Asn Asp Asp

    1070                1075                1080

ATA AAG GAT CAT GCG GAT TGG GAC AGC ATT TTG GAA GGC GGC AAA GGC    4875

Ile Lys Asp His Ala Asp Trp Asp Ser Ile Leu Glu Gly Gly Lys Gly

1085                1090                1095                1100

AAC GAT ATT CTA AGA GGT GGC TAC GGT GCG GAC ACC TAT ATC TTT AGC    4923

Asn Asp Ile Leu Arg Gly Gly Tyr Gly Ala Asp Thr Tyr Ile Phe Ser

                1105                1110                1115

AAA GGA CAC GGA CAG GAT ATC GTT TAT GAA GAT ACC AAT AAT GAT AAC    4971

Lys Gly His Gly Gln Asp Ile Val Tyr Glu Asp Thr Asn Asn Asp Asn

            1120                1125                1130

CGC GCA AGA GAT ATC GAC ACC TTA AAA TTT ACT GAT GTG AAT TAT GCG    5019

Arg Ala Arg Asp Ile Asp Thr Leu Lys Phe Thr Asp Val Asn Tyr Ala

        1135                1140                1145

GAA GTG AAA TTC CGA CGA GTA GAT AAT GAC TTA ATG TTA TTC GGT TAT    5067

Glu Val Lys Phe Arg Arg Val Asp Asn Asp Leu Met Lau Phe Gly Tyr

    1150                1155                1160

CAT GAT ACG GAT TCG GTC ACG ATA AAA TCC TTC TAC AAC CAT GTA GAT    5115

His Asp Thr Asp Ser Val Thr Ile Lys Ser Phe Tyr Asn His Val Asp

1165                1170                1175                1180

TAT CAA TTT GAC AAA TTG GAA TTT GCT GAC CGC AGT ATA ACT CGT GAT    5163

Tyr Gln Phe Asp Lys Leu Glu Phe Ala Asp Arg Ser Ile Thr Arg Asp

                1185                1190                1195

GAA CTA GGT AAA CAA GGT ATG GCA TTA TTT GGC ACT GAC GGT GAT GAT    5211

Glu Leu Gly Lys Gln Gly Met Ala Leu Phe Gly Thr Asp Gly Asp Asp

            1200                1205                1210

AAT ATC AAC GAC TGG GGA CGT AAC TCG GTG ATT GAT GCC GGT GCG GGT    5259

Asn Ile Asn Asp Trp Gly Arg Asn Ser Val Ile Asp Ala Gly Ala Gly

        1215                1220                1225

AAT GAT ACG GTT AAT GGC GGT AAT GGC GAT GAC ACC CTC ATC GGC GGC    5307

Asn Asp Thr Val Asn Gly Gly Asn Gly Asp Asp Thr Leu Ile Gly Gly

    1230                1235                1240

AAA GGT AAT GAT ATT CTA AGA GGT GGC TAC GGT GCG GAC ACC TAT ATC    5355

Lys Gly Asn Asp Ile Leu Arg Gly Gly Tyr Gly Ala Asp Thr Tyr Ile

1245                1250                1255                1260

TTT AGC AAA GGA CAC GGA CAG GAT ATC GTT TAT GAA GAT ACC AAT AAT    5403

Phe Ser Lys Gly His Gly Gln Asp Ile Val Tyr Glu Asp Thr Asn Asn

                1265                1270                1275

GAT AAC CGC GCA AGA GAT ATC GAC ACC TTA AAA TTT ACC GAT GTG AAT    5451

Asp Asn Arg Ala Arg Asp Ile Asp Thr Leu Lys Phe Thr Asp Val Asn

            1280                1285                1290

TAT GCG GAA GTG AAA TTC CGA CGA GTA GAT AAT GAC TTA ATG TTA TTC    5499

Tyr Ala Glu Val Lys Phe Arg Arg Val Asp Asn Asp Leu Met Leu Phe

        1295                1300                1305

GGT TAT CAT GAT ACG GAT TCG GTC ACG GTA AAA TCC TTC TAC AGC CAT    5547

Gly Tyr His Asp Thr Asp Ser Val Thr Val Lys Ser Phe Tyr Ser His

    1310                1315                1320

GTA GAT TAT CAA TTT GAC AAA TTG GAG TTT GCT GAC CGC AGT ATA ACT    5595

Val Asp Tyr Gln Phe Asp Lys Leu Glu Phe Ala Asp Arg Ser Ile Thr

1325                1330                1335                1340

CGC GAT GAA CTG ATT AAA GCA GGG CTT CAT CTA TAC GGC ACC GAT GGC    5643

Arg Asp Glu Leu Ile Lys Ala Gly Leu His Leu Tyr Gly Thr Asp Gly

                1345                1350                1355

AAT GAT GAT ATA AAG GAT CAT GCG GAT TGG GAC AGC ATT TTG GAA GGC    5691

Asn Asp Asp Ile Lys Asp His Ala Asp Trp Asp Ser Ile Leu Glu Gly

            1360                1365                1370

GGC AAA GGC AAC GAT ATT CTA AGA GGT GGC TAC GGT GCG GAC ACC TAT    5739

Gly Lys Gly Asn Asp Ile Leu Arg Gly Gly Tyr Gly Ala Asp Thr Tyr

        1375                1380                1385

ATC TTT AGC AAA GGA CAC GGA CAG GAT ATC GTT TAT GAA GAT ACC AAT    5787

Ile Phe Ser Lys Gly His Gly Gln Asp Ile Val Tyr Glu Asp Thr Asn

    1390                1395                1400

AAT GAT AAC CGA GCA AGA GAT ATC GAC ACC TTA AAA TTT ACT GAT GTG    5835

Asn Asp Asn Arg Ala Arg Asp Ile Asp Thr Leu Lys Phe Thr Asp Val

1405                1410                1415                1420

AAT TAT GCG GAA GTG AAA TTC CGA CGA GTA GAT AAT GAC TTA ATG TTA    5883

Asn Tyr Ala Glu Val Lys Phe Arg Arg Val Asp Asn Asp Leu Met Leu

                1425                1430                1435

TTC GGT TAT CAT GAT ACG GAT TCG GTC ACG ATA AAA TCC TTC TAC AAC    5931

Phe Gly Tyr His Asp Thr Asp Ser Val Thr Ile Lys Ser Phe Tyr Asn

            1440                1445                1450

CAT GTA GAT TAT CAA TTT GAC AAA TTG GAA TTT GCT GAC CGC AGT ATA    5979

His Val Asp Tyr Gln Phe Asp Lys Leu Glu Phe Ala Asp Arg Ser Ile

        1455                1460                1465

ACT CGT GAT GAA CTA GGT AAA CAA GGT ATG GCA TTA TTT GGC ACT GAC    6027

Thr Arg Asp Glu Leu Gly Lys Gln Gly Met Ala Leu Phe Gly Thr Asp

    1470                1475                1480

GGT GAT GAT AAT ATC AAC GAC TGG GGA CGT AAC TCG GTG ATT GAT GCC    6075

Gly Asp Asp Asn Ile Asn Asp Trp Gly Arg Asn Ser Val Ile Asp Ala

1485                1490                1495                1500

GGT GCG GGT AAT GAT ACG GTT AAT GGC GGT AAT GGC GAT GAC ACC CTC    6123

Gly Ala Gly Asn Asp Thr Val Asn Gly Gly Asn Gly Asp Asp Thr Leu

                1505                1510                1515

ATC GGC GGC AAA GGT AAT GAT ATT CTA AGA GGT GGC TAC GGT GCG GAC    6171

Ile Gly Gly Lys Gly Asn Asp Ile Leu Arg Gly Gly Tyr Gly Ala Asp

            1520                1525                1530

ACC TAT ATC TTT AGC AAA GGA CAC GGA CAG GAT ATC GTT TAT GAA GAT    6219

Thr Tyr Ile Phe Ser Lys Gly His Gly Gln Asp Ile Val Tyr Glu Asp

        1535                1540                1545

ACC AAT AAT GAT AAC CGC GCA AGA GAT ATC GAC ACC TTA AAA TTT ACT    6267

Thr Asn Asn Asp Asn Arg Ala Arg Asp Ile Asp Thr Leu Lys Phe Thr

    1550                1555                1560

GAT ATT AAT TTA TCC GAA CTT TGG TTT AGC CGA GAA AAT AAC GAT TTG    6315

Asp Ile Asn Leu ser Glu Leu Trp Phe Ser Arg Glu Asn Asn Asp Leu

1565                1570                1575                1580

ATT ATT AAA TCA TTA TTA AGT GAG GAT AAA GTC ACG GTT CAA AAT TGG    6363

Ile Ile Lys Ser Leu Leu Ser Glu Asp Lys Val Thr Val Gln Asn Trp

                1585                1590                1595

TAT TCA CAC CAA GAT CAT AAA ATA GAA AAT ATT CGT TTA TCG AAT GAG    6411

Tyr Ser His Gln Asp His Lys Ile Glu Asn Ile Arg Leu Ser Asn Glu

            1600                1605                1610

CAA ACG TTG GTG AGC ACT CAG GTG GAG AAG ATG GTT GAG TCG ATG GCC    6459

Gln Thr Leu Val Ser Thr Gln Val Glu Lys Met Val Glu Ser Met Ala

        1615                1620                1625

GGC TTT GCT CAG AAG CAC GGA GGA GAG ATA TCT CTT GTG TCG CTT GAA    6507

Gly Phe Ala Gln Lys His Gly Gly Glu Ile Ser Leu Val Ser Leu Glu

    1630                1635                1640

GAG GTA AAA CAA TAT ATC AAT AGC TTA ACA GCT GCT TTA TAA            6549

Glu Val Lys Gln Tyr Ile Asn Ser Leu Thr Ala Ala Leu  *

1645                1650                1655

CATACGAAAG AAATCGGCAC AGTTTTTTTG AACTGTGCCG ATTTGATTTT AGTGTAAGAA  6609

TATAGCCTGA TTTTAAGAAA TTTACTCTTG GCTAATAACT ATTTCCCATT TTATAAGTTA  6669

TTGACGGATG GTTTTATCAA ATATGAGATC AAATCTTATT TTAAATTCGC TTTCCATTAA  6729

GCGATAT                                                            6736

(2)SEQ ID NO：2信息：

(i)序列特征：

    (A)长度：1658个氨基酸

    (B)类型：氨基酸

    (D)拓扑学：线性

(ii)分子类型：蛋白

(xi)序列描述：SEQ ID NO：2：

Met Ser Asp Asn Ala Phe Phe Val Ile Glu Glu Ser Gly Lys Arg Tyr

  1               5                  10                  15

Ile Glu Asn Phe Gly Ile Glu Pro Leu Gly Lys Gln Glu Asp Phe Asp

             20                  25                  30

Phe Val Gly Gly Phe Trp Ser Asn Leu Val Asn Arg Gly Leu Glu Ser

         35                  40                  45

Ile Ile Asp Pro Ser Gly Ile Gly Gly Thr Val Asn Leu Asn Phe Thr

     50                  55                  60

Gly Glu Val Glu Thr Tyr Thr Leu Asp Glu Thr Arg Phe Lys Ala Glu

 65                  70                  75                  80

Ala Ala Lys Lys Ser His Trp Ser Leu Val Asn Ala Ala Lys Val Tyr

                 85                  90                  95

Gly Gly Leu Asp Gln Ile Ile Lys Lys Leu Trp Asp Ser Gly Ser Ile

            100                 105                 110

Lys His Leu Tyr Gln Asp Lys Asp Thr Gly Lys Leu Lys Pro Ile Ile

        115                 120                 125

Tyr Gly Thr Ala Gly Asn Asp Ser Lys Ile Glu Gly Thr Lys Ile Thr

    130                 135                 140

Arg Arg Ile Ala Gly Lys Glu Val Thr Leu Asp Ile Ala Asn Gln Lys

145                 150                 155                 160

Ile Glu Lys Gly Val Leu Glu Lys Leu Gly Leu Ser Val Ser Gly Ser

                165                 170                 175

Asp Ile Ile Lys Leu Leu Phe Gly Ala Leu Thr Pro Thr Leu Asn Arg

            180                 185                 190

Met Leu Leu Ser Gln Leu Ile Gln Ser Phe Ser Asp Ser Leu Ala Lys

        195                 200                 205

Leu Asp Asn Pro Leu Ala Pro Tyr Thr Lys Asn Gly Val Val Tyr Val

    210                 215                 220

Thr Gly Lys Gly Asn Asp Val Leu Lys Gly Thr Glu His Glu Asp Leu

225                 230                 235                 240

Phe Leu Gly Gly Glu Gly Asn Asp Thr Tyr Tyr Ala Arg Val Gly Asp

                245                 250                 255

Thr Ile Glu Asp Ala Asp Gly Lys Gly Lys Val Tyr Phe Val Arg Glu

            260                 265                 270

Lys Gly Val Pro Lys Ala Asp Pro Lys Arg Val Glu Phe Ser Glu Tyr

        275                 280                 285

Ile Thr Lys Glu Glu Ile Lys Glu Val Glu Lys Gly Leu Leu Thr Tyr

    290                 295                 300

Ala Val Leu Glu Asn Tyr Asn Trp Glu Glu Lys Thr Ala Thr Phe Ala

305                 310                 315                 320

His Ala Thr Met Leu Asn Glu Leu Phe Thr Asp Tyr Thr Asn Tyr Arg

                325                 330                 335

Tyr Glu Val Lys Gly Leu Lys Leu Pro Ala Val Lys Lys Leu Lys Ser

            340                 345                 350

Pro Leu Val Glu Phe Thr Ala Asp Leu Leu Thr Val Thr Pro Ile Asp

        355                 360                 365

Glu Asn Gly Lys Ala Leu Ser Glu Lys Ser Ile Thr Val Lys Asn Phe

    370                 375                 380

Lys Asn Gly Asp Leu Gly Ile Arg Leu Leu Asp Pro Asn Ser Tyr Tyr

385                 390                 395                 400

Tyr Phe Leu Glu Gly Gln Asp Thr Gly Phe Tyr Gly Pro Ala Phe Tyr

                405                 410                 415

Ile Glu Arg Lys Asn Gly Gly Gly Ala Lys Asn Asn Ser Ser Gly Ala

            420                 425                 430

Gly Asn Ser Lys Asp Trp Gly Gly Asn Gly His Gly Asn His Arg Asn

        435                 440                 445

Asn Ala Ser Asp Leu Asn Lys Pro Asp Gly Asn Asn Gly Asn Asn Gln

    450                 455                 460

Asn Asn Gly Ser Asn Gln Asp Asn His Ser Asp Val Asn Ala Pro Asn

465                 470                 475                 480

Asn Pro Gly Arg Asn Tyr Asp Ile Tyr Asp Pro Leu Ala Leu Asp Leu

                485                 490                 495

Asp Gly Asp Gly Leu Glu Thr Val Ser Met Asn Gly Arg Gln Gly Ala

            500                 505                 510

Leu Phe Asp His Glu Gly Lys Gly Ile Arg Thr Ala Thr Gly Trp Leu

        515                 520                 525

Ala Ala Asp Asp Gly Phe Leu Val Leu Asp Arg Asn Gln Asp Gly Ile

    530                 535                 540

Ile Asn Asp Ile Ser Glu Leu Phe Ser Asn Lys Asn Gln Leu Ser Asp

545                 550                 555                 560

Gly Ser Ile Ser Ala His Gly Phe Ala Thr Leu Ala Asp Leu Asp Thr

                565                 570                 575

Asn Gln Asp Gln Arg Ile Asp Gln Asn Asp Lys Leu Phe Ser Lys Leu

            580                 585                 590

Gln Ile Trp Arg Asp Leu Asn Gln Asn Gly Phe Ser Glu Ala Asn Glu

        595                 600                 605

Leu Phe Ser Leu Glu Ser Leu Asn Ile Lys Ser Leu His Thr Ala Tyr

    610                 615                 620

Glu Glu Arg Asn Asp Phe Leu Ala Gly Asn Asn Ile Leu Ala Gln Leu

625                 630                 635                 640

Gly Lys Tyr Glu Lys Thr Asp Gly Thr Phe Ala Gln Met Gly Asp Leu

                645                 650                 655

Asn Phe Ser Phe Asn Pro Phe Tyr Ser Arg Phe Thr Glu Ala Leu Asn

            660                 665                 670

Leu Thr Glu Gln Gln Arg Arg Thr Ile Asn Leu Thr Gly Thr Gly Arg

        675                 680                 685

Val Arg Asp Leu Arg Glu Ala Ala Ala Leu Ser Glu Glu Leu Ala Ala

    690                 695                 700

Leu Leu Gln Gln Tyr Thr Lys Ala Ser Asp Phe Gln Ala Gln Arg Glu

705                 710                 715                 720

Leu Leu Pro Ala Ile Leu Asp Lys Trp Ala Ala Thr Asp Leu Gln Tyr

                725                 730                 735

Gln His Tyr Asp Lys Thr Leu Leu Lys Thr Val Glu Ser Thr Asp Ser

            740                 745                 750

Ser Ala Ser Val Val Arg Val Thr Pro Ser Gln Leu Ser Ser Ile Arg

        755                 760                 765

Asn Ala Lys His Asp Pro Thr Val Met Gln Asn Phe Glu Gln Ser Lys

    770                 775                 780

Ala Lys Ile Ala Thr Leu Asn Ser Leu Tyr Gly Leu Asn Ile Asp Gln

785                 790                 795                 800

Leu Tyr Tyr Thr Thr Asp Lys Asp Ile Arg Tyr Ile Thr Asp Lys Val

                805                 810                 815

Asn Asn Met Tyr Gln Thr Thr Val Glu Leu Ala Tyr Arg Ser Leu Leu

            820                 825                 830

Leu Gln Thr Arg Leu Lys Lys Tyr Val Tyr Ser Val Asn Ala Lys Gln

        835                 840                 845

Phe Glu Gly Lys Trp Val Thr Asp Tyr Ser Arg Thr Glu Ala Leu Phe

    850                 855                 860

Asn Ser Thr Phe Lys Gln Ser Pro Glu Asn Ala Leu Tyr Asp Leu Ser

865                 870                 875                 880

Glu Tyr Leu Ser Phe Phe Asn Asp Pro Thr Glu Trp Lys Glu Gly Leu

                885                 890                 895

Leu Leu Leu Ser Arg Tyr Ile Asp Tyr Ala Lys Ala Gln Gly Phe Tyr

            900                 905                 910

Glu Asn Trp Ala Ala Thr Ser Asn Leu Thr Ile Ala Arg Leu Arg Glu

        915                 920                 925

Ala Gly Val Ile Phe Ala Glu Ser Thr Asp Leu Lys Gly Asp Glu Lys

    930                 935                 940

Asn Asn Ile Leu Leu Gly Ser Gln Lys Asp Asn Asn Leu Ser Gly Ser

945                 950                 955                 960

Ala Gly Asp Asp Leu Leu Ile Gly Gly Glu Gly Asn Asp Thr Leu Lys

                965                 970                 975

Gly Ser Tyr Gly Ala Asp Thr Tyr Ile Phe Ser Lys Gly His Gly Gln

            980                 985                 990

Asp Ile Val Tyr Glu Asp Thr Asn Asn Asp Asn Arg Ala Arg Asp Ile

        995                 1000                1005

Asp Thr Leu Lys Phe Thr Asp Val Asn Tyr Ala Glu Val Lys Phe Arg

    1010                1015                1020

Arg Val Asp Asn Asp Leu Met Leu Phe Gly Tyr His Asp Thr Asp Ser

1025                1030                1035                1040

Val Thr Val Lys Ser Phe Tyr Ser His Val Asp Tyr Gln Phe Asp Lys

                1045                1050                1055

Leu Glu Phe Ala Asp Arg Ser Ile Thr Arg Asp Glu Leu Ile Lys Ala

            1060                1065                1070

Gly Leu His Leu Tyr Gly Thr Asp Gly Asn Asp Asp Ile Lys Asp His

        1075                1080                1085

Ala Asp Trp Asp Ser Ile Leu Glu Gly Gly Lys Gly Asn Asp Ile Leu

    1090                1095                1100

Arg Gly Gly Tyr Gly Ala Asp Thr Tyr Ile Phe Ser Lys Gly His Gly

1105                1110                1115                1120

Gln Asp Ile Val Tyr Glu Asp Thr Asn Asn Asp Asn Arg Ala Arg Asp

                1125                1130                1135

Ile Asp Thr Leu Lys Phe Thr Asp Val Asn Tyr Ala Glu Val Lys Phe

            1140                 1145               1150

Arg Arg Val Asp Asn Asp Leu Met Leu Phe Gly Tyr His Asp Thr Asp

        1155                1160                1165

Ser Val Thr Ile Lys Ser Phe Tyr Asn His Val Asp Tyr Gln Phe Asp

    1170                1175                1180

Lys Leu Glu Phe Ala Asp Arg Ser Ile Thr Arg Asp Glu Leu Gly Lys

1185                1190                1195                1200

Gln Gly Met Ala Leu Phe Gly Thr Asp Gly Asp Asp Asn Ile Asn Asp

                1205                1210                1215

Trp Gly Arg Asn Ser Val Ile Asp Ala Gly Ala Gly Asn Asp Thr Val

            1220                1225                1230

Asn Gly Gly Asn Gly Asp Asp Thr Leu Ile Gly Gly Lys Gly Asn Asp

        1235                1240                1245

Ile Leu Arg Gly Gly Tyr Gly Ala Asp Thr Tyr Ile Phe Ser Lys Gly

    1250                1255                1260

His Gly Gln Asp Ile Val Tyr Glu Asp Thr Asn Asn Asp Asn Arg Ala

1265                1270                1275                1280

Arg Asp Ile Asp Thr Leu Lys Phe Thr Asp Val Asn Tyr Ala Glu Val

                1285                1290                1295

Lys Phe Arg Arg Val Asp Asn Asp Leu Met Leu Phe Gly Tyr His Asp

            1300                1305                1310

Thr Asp Ser Val Thr Val Lys Ser Phe Tyr Ser His Val Asp Tyr Gln

        1315                1320                1325

Phe Asp Lys Leu Glu Phe Ala Asp Arg Ser Ile Thr Arg Asp Glu Leu

    1330                1335                1340

Ile Lys Ala Gly Leu His Leu Tyr Gly Thr Asp Gly Asn Asp Asp Ile

1345                1350                1355                1360

Lys Asp His Ala Asp Trp Asp Ser Ile Leu Glu Gly Gly Lys Gly Asn

                1365                1370                1375

Asp Ile Leu Arg Gly Gly Tyr Gly Ala Asp Thr Tyr Ile Phe Ser Lys

            1380                1385                1390

Gly His Gly Gln Asp Ile Val Tyr Glu Asp Thr Asn Asn Asp Asn Arg

        1395                1400                1405

Ala Arg Asp Ile Asp Thr Leu Lys Phe Thr Asp Val Asn Tyr Ala Glu

    1410                1415                1420

Val Lys Phe Arg Arg Val Asp Asn Asp Leu Met Leu Phe Gly Tyr His

1425                1430                1435                1440

Asp Thr Asp Ser Val Thr Ile Lys Ser Phe Tyr Asn His Val Asp Tyr

                1445                1450                1455

Gln Phe Asp Lys Leu Glu Phe Ala Asp Arg Ser Ile Thr Arg Asp Glu

            1460                1465                1470

Leu Gly Lys Gln Gly Met Ala Leu Phe Gly Thr Asp Gly Asp Asp Asn

        1475                1480                1485

Ile Asn Asp Trp Gly Arg Asn Ser Val Ile Asp Ala Gly Ala Gly Asn

    1490                1495                1500

Asp Thr Val Asn Gly Gly Asn Gly Asp Asp Thr Leu Ile Gly Gly Lys

1505                1510                1515                1520

Gly Asn Asp Ile Leu Arg Gly Gly Tyr Gly Ala Asp Thr Tyr Ile Phe

                1525                1530                1535

Ser Lys Gly His Gly Gln Asp Ile Val Tyr Glu Asp Thr Asn Asn Asp

            1540                1545                1550

Asn Arg Ala Arg Asp Ile Asp Thr Leu Lys Phe Thr Asp Ile Asn Leu

        1555                1560                1565

Ser Glu Leu Trp Phe Ser Arg Glu Asn Asn Asp Leu Ile Ile Lys Ser

    1570                1575                1580

Leu Leu Ser Glu Asp Lys Val Thr Val Gln Asn Trp Tyr Ser His Gln

1585                1590                1595                1600

Asp His Lys Ile Glu Asn Ile Arg Leu Ser Asn Glu Gln Thr Leu Val

                1605                1610                1615

Ser Thr Gln Val Glu Lys Met Val Glu Ser Met Ala Gly Phe Ala Gln

            1620                1625                1630

Lys His Gly Gly Glu Ile Ser Leu Val Ser Leu Glu Glu Val Lys Gln

        1635                1640                1645

Tyr Ile Asn Ser Leu Thr Ala Ala Leu  *

    1650                1655

(2)SEQ ID NO：3信息：

(i)序列特征：

    (A)长度：7004个碱基对

    (B)类型：核酸

    (C)链型：双链

    (D)拓扑学：线性

(ii)分子类型：DNA(基因组)

(iii)假设：无

(iv)反义：无

(vi)最初来源：

    (A)有机体：胸膜肺炎放线杆菌

    (B)菌株：HV114(血清型3野生菌株)

(vii)直接来源：

    (B)克隆：pROK5

(ix)特征：

    (A)名字/关键：CDS

    (B)位置：1566…5714

    (D)其它信息：/密码子-起始＝1566

       /功能＝“RTX-毒素”

       /产物＝“ ApxIV_var3 ”

       /基因＝“apxIV_var3”

       /数目＝1

(xi)序列描述：SEQ ID NO：3：

ATCGATATGC CGCCGGGTAC GGGCGATATC CAACTTACTC TTTCGCAACA AATTCCGGTT     60

ACCGGTGCGG TAGTGGTAAC TACTCCGCAA GATATTGCGT TATTAGATGC GGTGAAAGGT    120

ATTTCAATGT TCCAAAAAGT GTCGGTACCG GTCTTAGGTA TCATTGAAAA TATGAGCGTG    180

CATATCTGCC AAAATTGCGG TCACCACGAA GATATTTTCG GCACCGGCGG TGCGGAGAAA    240

GTGGCGAAGA AATACGGTAC TAAAGTATTA GGACAAATGC CGTTGCATAT TCGCTTACGT    300

CAAGATTTGG ATGCCGGCAC ACCGACCGTC GTTGCGGCAC CGGAACACGA CACCAGCAGA    360

GCCTATATTG AATTAGCGGC AAAAGTCGCT TCGGAATTAT ACTGGCAAGG TTCGGTTATC    420

CCGTCTGAAA TTATGATTCG TGAAGTAAAA TAAGCCTACA TAACCACGGA ATACCAGATA    480

ACACAGAAGG AAAACAAGCG GTAGAATTTG CAGAAAAAGT TGCAAATTCT ACCGCTTTTT    540

TATTAGTACG ATTCGCTGTT GGACTGCCAT TTGATTTGGT TTGTCAGGAT ATTATGTTAT    600

TGTAATGAAA TGTTAGTGAA TTATTTTTAT TAATTTGAAA GGAGACAAAA TGAAAATAAA    660

AAAACGTTAC ATTGCGCTGC TAGCTTTAGG CAGTGTTATT GGCTATGCCT GGTATCAAAA    720

TTATCAATGG GAACAGTTGA TGTTAAGTGG CTATTGTGAA AAGGACGGAA GCTATTGTGA    780

TGATAGGCAT ACGAAGCAGG AACTGATTGA TAGGGCAATT AACTATGTGC TGGAAAATCA    840

AATTCAACAG ACATATGAAG GTGATGACCT TGTGGATATA AAACAATATT CAACAATAGA    900

GGAATTTAAA AAACTAAATC CGAATTGTTG TAAGGTAGAT TCTTGGCCGG ATGATGCTGT    960

TCGTGAGGAT GCTGATTTAC AGCGAGAGGG CAAAGCGTAT AAATACGTAA AAGTCAAATA   1020

TTTAAGAACC TATTTAGCGA ATAGAGAACC TGAACAATGG GAAAATTACA TAGTATTTGA   1080

TAATTGCAGT GGAATTAAAG AAAGACACCA ACTGTATTAA AAATAGATTA GATGGAGACA     1140

ACACGATGAC AAAACTAACT ATCCAAGATG TGACTAATTT ATATTTATAT AAGCAAAGAA     1200

CTTTACCTAC GGATAGGTTA GATGATTCGC TTATTAGCAA AACAGGAAAA GGGGAAAATA     1260

TTGATAAAAA GGAATTTATG GCGGGGCCGG GACGTTTTGT GACGGCCGAT AATTTTAGTG     1320

TTGTAAAAGA CTTTTTTACT GCAAAGGATT CATTAATAAA CCTAAGCTTG CAGACTCGTA     1380

TATTAGCGAA TTTAAAGCCG GGCAAATATT CCAAAGCGCA GATATTAGAA ATGTTGGGCT     1440

ATACGAAAAA TGGAGAAAAG GTAGATGGCA TGTTTACCGG TGAAGTCCAG ACATTAGGCT     1500

TTTATGACGA TGGCAAAGGG GATTTACTCG AACGCGCCTA TATCTGAAAT ACCACAGGAT     1560

TTAAA ATG AGC GAC AAT GCC TTT TTT GTT ATA GAA GAA TCA GGC AAA         1607

      Met Ser Asp Asn Ala Phe Phe Val Ile Glu Glu Ser Gly Lys

          1660                1665                1670

CGC TAT ATT GAA AAC TTT GGT ATT GAA CCT CTT GGT AAG CAA GAA GAT       1655

Arg Tyr Ile Glu Asn Phe Gly Ile Glu Pro Leu Gly Lys Gln Glu Asp

        1675                1680                1685

TTT GAT TTT GTC GGC GGC TTT TGG TCT AAC TTA GTG AAT CGT GGT TTG       1703

Phe Asp Phe Val Gly Gly Phe Trp Ser Asn Leu Val Asn Arg Gly Leu

    1690                1695                1700

GAA AGT ATT ATC GAC CCA TCC GGT ATC GGT GGA ACG GTA AAC CTT AAC       1751

Glu Ser Ile Ile Asp Pro Ser Gly Ile Gly Gly Thr Val Asn Leu Asn

1705                1710                1715                1720

TTT ACC GGC GAG GTG GAA ACC TAC ACG TTA GAC GAA ACA AGG TTT AAA       1799

Phe Thr Gly Glu Val Glu Thr Tyr Thr Leu Asp Glu Thr Arg Phe Lys

                1725                1730                1735

GCG GAA GCG GCG AAG AAA AGC CAT TGG AGT TTA GTG AAT GCG GCG AAA       1847

Ala Glu Ala Ala Lys Lys Ser His Trp Ser Leu Val Asn Ala Ala Lys

            1740                1745                1750

GTA TAC GGC GGT TTA GAC CAA ATT ATT AAA AAA CTA TGG GAC AGT GGC       1895

Val Tyr Gly Gly Leu Asp Gln Ile Ile Lys Lys Leu Trp Asp Ser Gly

        1755                1760                1765

TCA ATT AAG CAT TTA TAT CAA GAT AAA GAT ACG GGC AAA TTA AAA CCG       1943

Ser Ile Lys His Leu Tyr Gln Asp Lys Asp Thr Gly Lys Leu Lys Pro

    1770                1775                1780

ATT ATT TAC GGC ACG GCC GGC AAC GAC AGT AAG ATT GAA GGC ACT AAA       1991

Ile Ile Tyr Gly Thr Ala Gly Asn Asp Ser Lys Ile Glu Gly Thr Lys

1785                1790                1795                1800

ATC ACC CGT AGG ATT GCG GGT AAA GAA GTT ACG CTT GAT ATT GCC AAT       2039

Ile Thr Arg Arg Ile Ala Gly Lys Glu Val Thr Leu Asp Ile Ala Asn

                1805                1810                1815

CAG AAA ATT GAA AAA GGC GTG TTA GAG AAA TTG GGG CTG TCT GTT AGT       2087

Gln Lys Ile Glu Lys Gly Val Leu Glu Lys Leu Gly Leu Ser Val Ser

            1820                1825                1830

GGT TCG GAT ATC ATT AAA TTG TTG TTT GGA GCA TTG ACT CCA ACT TTA       2135

Gly Ser Asp Ile Ile Lys Leu Leu Phe Gly Ala Leu Thr Pro Thr Leu

        1835                1840                1845

AAT AGA ATG TTG CTA TCA CAA CTT ATC CAG TCT TTT TCC GAT AGC TTG       2183

Asn Arg Met Leu Leu Ser Gln Leu Ile Gln Ser Phe Ser Asp Ser Leu

    1850                1855                1860

GCT AAA CTT GAT AAT CCC TTA GCC CCT TAC ACT AAA AAT GGC GTG GTT    2231

Ala Lys Leu Asp Asn Pro Leu Ala Pro Tyr Thr Lys Asn Gly Val Val

1865                1870                1875                1880

TAT GTC ACC GGC AAA GGG AAT GAT GTG CTT AAA GGA ACT GAA CAT GAG    2279

Tyr Val Thr Gly Lys Gly Asn Asp Val Leu Lys Gly Thr Glu His Glu

                1885                1890                1895

GAT TTG TTT CTC GGT GGT GAG GGG AAT GAT ACT TAT TAT GCG AGA GTA    2327

Asp Leu Phe Leu Gly Gly Glu Gly Asn Asp Thr Tyr Tyr Ala Arg Val

            1900                1905                1910

GGC GAT ACA ATT GAA GAC GCC GAC GGC AAA GGT AAA GTC TAT TTT GTG    2375

Gly Asp Thr Ile Glu Asp Ala Asp Gly Lys Gly Lys Val Tyr Phe Val

        1915                1920                1925

AGA GAA AAA GGG GTA CCT AAG GCG GAT CCT AAG CGG GTA GAG TTT AGC    2423

Arg Glu Lys Gly Val Pro Lys Ala Asp Pro Lys Arg Val Glu Phe Ser

    1930                1935                1940

GAG TAC ATA ACG AAA GAA GAA ATA AAA GAG GTT GAA AAG GGG TTA TTA    2471

Glu Tyr Ile Thr Lys Glu Glu Ile Lys Glu Val Glu Lys Gly Leu Leu

1945                1950                1955                1960

ACT TAC GCA GTT TTA GAA AAT TAT AAT TGG GAA GAG AAA ACG GCG ACT    2519

Thr Tyr Ala Val Leu Glu Asn Tyr Asn Trp Glu Glu Lys Thr Ala Thr

                1965                1970                1975

TTC GCT CAT GCG ACT ATG CTT AAT GAG CTT TTT ACT GAT TAT ACT AAT    2567

Phe Ala His Ala Thr Met Leu Asn Glu Leu Phe Thr Asp Tyr Thr Asn

            1980                1985                1990

TAT CGT TAT GAA GTT AAA GGA CTA AAA TTG CCC GCC GTT AAA AAG TTA    2615

Tyr Arg Tyr Glu Val Lys Gly Leu Lys Leu Pro Ala Val Lys Lys Leu

        1995                2000                2005

AAA AGT CCG TTG GTG GAG TTT ACA GCT GAT TTA TTA ACT GTT ACG CCT    2663

Lys Ser Pro Leu Val Glu Phe Thr Ala Asp Leu Leu Thr Val Thr Pro

    2010                2015                2020

ATT GAC GAA AAC GGA AAA GCA CTT AGC GAA AAA AGT ATT ACG GTT AAA    2711

Ile Asp Glu Asn Gly Lys Ala Leu Ser Glu Lys Ser Ile Thr Val Lys

2025                2030                2035                2040

AAT TTT AAA AAT GGT GAT TTA GGA ATA AGG TTG TTG GAT CCT AAT AGC    2759

Asn Phe Lys Asn Gly Asp Leu Gly Ile Arg Leu Leu Asp Pro Asn Ser

                2045                2050                2055

TAT TAT TAT TTC CTT GAA GGC CAA GAT ACG GGT TTT TAT GGT CCT GCT    2807

Tyr Tyr Tyr Phe Leu Glu Gly Gln Asp Thr Gly Phe Tyr Gly Pro Ala

            2060                2065                2070

TTT TAT ATT GAA CGA AAA AAC GGT GGA GGC TCT AAA AAT AAC TCG TCG    2855

Phe Tyr Ile Glu Arg Lys Asn Gly Gly Gly Ser Lys Asn Asn Ser Ser

        2075                2080                2085

GGA GCA GGA AAT AGC AAA GAT TGG GGC GGG AAC GGG CAT GGA AAT CAC    2903

Gly Ala Gly Asn Ser Lys Asp Trp Gly Gly Asn Gly His Gly Asn His

    2090                2095                    2100

CGA AAT AAT GCC TCC GAC CTG AAT AAA CCG GAC GGA AAT AAT GGG AAT    2951

Arg Asn Asn Ala Ser Asp Leu Asn Lys Pro Asp Gly Asn Asn Gly Asn

2105                2110                2115                2120

AAC CAA AAT AAC GGA AGC AAT CAA GAT AAT CAT AGC GAT GTG AAT GCG    2999

Asn Gln Asn Asn Gly Ser Asn Gln Asp Asn His Ser Asp Val Asn Ala

                2125                2130                2135

CCA AAT AAC CCG GGA CGT AAC TAT GAT ATT TAC GAT CCT TTA GCT TTA    3047

Pro Asn Asn Pro Gly Arg Asn Tyr Asp Ile Tyr Asp Pro Leu Ala Leu

            2140                2145                2150

GAT TTA GAT GGA GAT GGG CTT GAA ACC GTG TCG ATG AAC GGG CGA CAA    3095

Asp Leu Asp Gly Asp Gly Leu Glu Thr Val Ser Met Asn Gly Arg Gln

        2155                2160                2165

GGC GCG TTA TTC GAT CAT GAA GGA AAA GGT ATT CGT ACC GCA ACG GGC    3143

Gly Ala Leu Phe Asp His Glu Gly Lys Gly Ile Arg Thr Ala Thr Gly

    2170                2175                2180

TGG CTC GCT GCG GAT GAC GGT TTT TTA GTG TTA GAT CGT AAC CAA GAC    3191

Trp Leu Ala Ala Asp Asp Gly Phe Leu Val Leu Asp Arg Asn Gln Asp

2185                2190                2195                2200

GGC ATT ATT AAT GAT ATA AGC GAG TTA TTT AGT AAT AAA AAT CAA CTT    3239

Gly Ile Ile Asn Asp Ile Ser Glu Leu Phe Ser Asn Lys Asn Gln Leu

                2205                2210                2215

TCC GAC GGG AGT ATT TCT GCA CAC GGT TTT GCG ACA TTA GCC GAT TTG    3287

Ser Asp Gly Ser Ile Ser Ala His Gly Phe Ala Thr Leu Ala Asp Leu

            2220                2225                2230

GAT ACA AAC CAA GAT CAG CGT ATC GAC CAA AAT GAT AAG CTG TTT TCT    3335

Asp Thr Asn Gln Asp Gln Arg Ile Asp Gln Asn Asp Lys Leu Phe Ser

        2235                2240                2245

AAA CTC CAA ATT TGG CGG GAT TTA AAT CAA AAC GGT TTT AGT GAA GCG    3383

Lys Leu Gln Ile Trp Arg Asp Leu Asn Gln Asn Gly Phe Ser Glu Ala

    2250                2255                2260

AAT GAG CTG TTT AGC TTA GAA AGT TTG AAT ATT AAA TCT TTA CAT ACC    3431

Asn Glu Leu Phe Ser Leu Glu Ser Leu Asn Ile Lys Ser Leu His Thr

2265                2270                2275                2280

GCC TAT GAA GAG CGT AAT GAT TTT CTA GCG GGC AAT AAT ATC CTT GCT    3479

Ala Tyr Glu Glu Arg Asn Asp Phe Leu Ala Gly Asn Asn Ile Leu Ala

                2285                2290                2295

CAG CTT GGG AAG TAT GAA AAA ACG GAC GGT ACT TTT GGA CAA ATG GGC    3527

Gln Leu Gly Lys Tyr Glu Lys Thr Asp Gly Thr Phe Gly Gln Met Gly

            2300                2305                2310

GAT TTA AAT TTC AGT TTT AAC CCG TTT TAT AGC CGA TTT ACC GAA GCG    3575

Asp Leu Asn Phe Ser Phe Asn Pro Phe Tyr Ser Arg Phe Thr Glu Ala

        2315                2320                2325

TTA AAT TTA ACC GAG CAA CAA CGT CGC ACA ATT AAT CTA ACC GGC ACC    3623

Leu Asn Leu Thr Glu Gln Gln Arg Arg Thr Ile Asn Leu Thr Gly Thr

    2330                2335                2340

GGT CGG GTT CGG GAT TTG CGT GAA GCC GCC GCA CTT TCT GAG GAG TTG    3671

Gly Arg Val Arg Asp Leu Arg Glu Ala Ala Ala Leu Ser Glu Glu Leu

2345                2350                2355                2360

GCT GCT TTA TTA CAA CAG TAC ACT AAG GGC TCC GAT TTT CAG GCA CAA    3719

Ala Ala Leu Leu Gln Gln Tyr Thr Lys Gly Ser Asp Phe Gln Ala Gln

                2365                2370                2375

CGA GAA TTA TTG CCT GCC ATT TTA GAT AAA TGG GCG GCA ACG GAT TTA    3767

Arg Glu Leu Leu Pro Ala Ile Leu Asp Lys Trp Ala Ala Thr Asp Leu

            2380                2385                2390

CAG TAT CAA CAT TAT GAT AAA ACA TTA CTT AAA ACG GTA GAA AGT ACC    3815

Gln Tyr Gln His Tyr Asp Lys Thr Leu Leu Lys Thr Val Glu Ser Thr

        2395                2400                2405

GAT AGT AGT GCT TCT GTC GTT AGA GTC ACG CCT TCT CAA TTA AGT AGT    3863

Asp Ser Ser Ala Ser Val Val Arg Val Thr Pro Ser Gln Leu Ser Ser

    2410                2415                2420

ATA CGC AAT GTA AAG CAT GAT CCT ACC GTT ATG CAA AAC TGT GAA CAA    3911

Ile Arg Asn Val Lys His Asp Pro Thr Val Met Gln Asn Cys Glu Gln

2425                2430                2435                2440

AGT AAG GCA AAA ATT GCG ACT TTA AAT TCG CTC TAC GGG TTA AAT ATT    3959

Ser Lys Ala Lys Ile Ala Thr Leu Asn Ser Leu Tyr Gly Leu Asn Ile

                2445                2450                2455

GAT CAA CTT TAT TAT ACG ACG GAT AAA GAC ATT CGT TAT ATT ACT GAC    4007

Asp Gln Leu Tyr Tyr Thr Thr Asp Lys Asp Ile Arg Tyr Ile Thr Asp

            2460                2465                2470

AAA GTG AAT AAT ATG TAT CAA ACA ACC GGA GAA CTC GGC TAT CGT TCT    4055

Lys Val Asn Asn Met Tyr Gln Thr Thr Gly Glu Leu Gly Tyr Arg Ser

        2475                2480                2485

TTA CTT TTA CAA ACG CGT GTG AAG AAA TAT GTT TAT AGC GTT AAT GCG    4103

Leu Leu Leu Gln Thr Arg Val Lys Lys Tyr Val Tyr Ser Val Asn Ala

    2490                2495                2500

AAA CAA TTC GAA GGG AAA TGG GTA GCC GAT TAT TCT CGT ACT GAA GCC    4151

Lys Gln Phe Glu Gly Lys Trp Val Ala Asp Tyr Ser Arg Thr Glu Ala

2505                2510                2515                2520

TTA TTT AAC TCT ACT TAT AAA CAA TCG CCC GAA AAT GTA TTA TAT GAT    4199

Leu Phe Asn Ser Thr Tyr Lys Gln Ser Pro Glu Asn Val Leu Tyr Asp

                2525                2530                2535

TTA CGC GAA TAC CTT TCT TTC TAT AAC GAC CCT ACG GAA TGG AAA GAA    4247

Leu Arg Glu Tyr Leu Ser Phe Tyr Asn Asp Pro Thr Glu Trp Lys Glu

            2540                2545                2550

GGG CTA TTA CTG TTA AGC CGT TAT ATA GAT TAT GCT AAA GCA CAA GGA    4295

Gly Leu Leu Leu Leu Ser Arg Tyr Ile Asp Tyr Ala Lys Ala Gln Gly

        2555                2560                2565

TTT TAT GAA AAC TGG GCG GCT ACT TCT AAC TTA ACT ATT GCC CGT TTA    4343

Phe Tyr Glu Asn Trp Ala Ala Thr Ser Asn Leu Thr Ile Ala Arg Leu

    2570                2575                2580

AGA GAG GCT GGA GTA ATT TGT GCA GAA TCG ACG GAT TTA AAA GGC GAT    4391

Arg Glu Ala Gly Val Ile Cys Ala Glu Ser Thr Asp Leu Lys Gly Asp

2585                2590                2595                2600

GAA AAA AAT AAT ATT GTG TTA GGT AGC CAA AAA GAT AAT AAC TTA TCG    4439

Glu Lys Asn Asn Ile Val Leu Gly Ser Gln Lys Asp Asn Asn Leu Ser

                2605                2610                2615

GGT AGT GCA GGT GAT GAT CTA CTT ATC GGC GGA GAG GGT AAT GAT ACG    4487

Gly Ser Ala Gly Asp Asp Leu Leu Ile Gly Gly Glu Gly Asn Asp Thr

            2620                2625                2630

TTA AAA GGC AGC TAC GGT GCA GAC ACC TAT ATC TTT AGC AAA GGG CAT    4535

Leu Lys Gly Ser Tyr Gly Ala Asp Thr Tyr Ile Phe Ser Lys Gly His

        2635                2640                2645

GGA CAA GAT GTA ATT TAT GAA TAT TCC GAC AGT GCA AAC TCT AAA AAA    4583

Gly Gln Asp Val Ile Tyr Glu Tyr Ser Asp Ser Ala Asn Ser Lys Lys

    2650                2655                2660

GAT ATT GAT ACC TTA AAA TTT ACC GAT GTG AAT TAT GCG GAA GTG AAG    4631

Asp Ile Asp Thr Leu Lys Phe Thr Asp Val Asn Tyr Ala Glu Val Lys

2665                2670                2675                2680

TTT CGA CGA GTA GAT AAT GAC TTA ATG TTA TTC GGT TAT CAT GAT ACG    4679

Phe Arg Arg Val Asp Asn Asp Leu Met Leu Phe Gly Tyr His Asp Thr

                2685                2690                2695

GAT TCG GTC ACG GTA AAA TCC TTC TAC AGC CAT GTA GAT TAT CAA TTT    4727

Asp Ser Val Thr Val Lys Ser Phe Tyr Ser His Val Asp Tyr Gln Phe

            2700                2705                2710

GAC AAA TTG GAG TTT GCT GAC CGC AGT ATA ACT CGC GAT GAA CTG ATT    4775

Asp Lys Leu Glu Phe Ala Asp Arg Ser Ile Thr Arg Asp Glu Leu Ile

        2715                2720                2725

AAA GCA GGG CTT CAT CTA TAC GGC ACC GAT GGC AAT GAT GAT ATA AAG    4823

Lys Ala Gly Leu His Leu Tyr Gly Thr Asp Gly Asn Asp Asp Ile Lys

    2730                2735                2740

GAT CAT GCG GAT TGG GAC AGC ATT GTG GAA GGC GGC AAA GGC AAC GAT    4871

Asp His Ala Asp Trp Asp Ser Ile Val Glu Gly Gly Lys Gly Asn Asp

2745                2750                2755                2760

ATT CTA AGA GGT GGC TAC GGT GCG GAC ACC TAT ATC TTT AGC AAA GGA    4919

Ile Leu Arg Gly Gly Tyr Gly Ala Asp Thr Tyr Ile Phe Ser Lys Gly

                2765                2770                2775

CAC GGA CAG GAT ATC GTT TAT GAA GAT ACC AAT AAT GAT AAC CGA GCA    4967

His Gly Gln Asp Ile Val Tyr Glu Asp Thr Asn Asn Asp Asn Arg Ala

            2780                2785                2790

AGA GAT ATC GAC ACC TTA ACA TTT ACT GAT GTG AAT TAT GCG GAA GTG    5015

Arg Asp Ile Asp Thr Leu Thr Phe Thr Asp Val Asn Tyr Ala Glu Val

        2795                2800                2805

AAA TTC CGA CGA GTA GAT AAT GAC TTA ATG TTA TTC GGT TAT CAT GAT    5063

Lys Phe Arg Arg Val Asp Asn Asp Leu Met Leu Phe Gly Tyr His Asp

    2810                2815                2820

ACG GAT TCG GTC ACG ATA AAA TCC TTC TAC AAC CAT GTA GAT TAT CAA    5111

Thr Asp Ser Val Thr Ile Lys Ser Phe Tyr Asn His Val Asp Tyr Gln

2825                2830                2835                2840

TGT GAC AAA TTG GAC TTT GCT GAC CGC AGT ATA ACT CGT GAT GAA CTA    5159

Cys Asp Lys Leu Asp Phe Ala Asp Arg Ser Ile Thr Arg Asp Glu Leu

                2845                2850                2855

GGT AAA CAA GGT ATG GCA TTA TTT GGC ACT GAC GGC GAT GAT AAT ATC    5207

Gly Lys Gln Gly Met Ala Leu Phe Gly Thr Asp Gly Asp Asp Asn Ile

            2860                2865                2870

AAC GAC TGG GGA CGT AAC TCG GTG ATT GAT GCC GGT GCG GGT AAT GAT    5255

Asn Asp Trp Gly Arg Asn Ser Val Ile Asp Ala Gly Ala Gly Asn Asp

        2875                2880                2885

ACG GTT AAT GGC GGT AAT GGC GAT GAC ACC CTC ATC GGC GGC AAA GGT    5303

Thr Val Asn Gly Gly Asn Gly Asp Asp Thr Leu Ile Gly Gly Lys Gly

    2890                2895                2900

AAT GAT ATT CTA AGA GGT GGC TAC GGT GCG GAC ACC TAT ATC TTT AGC    5351

Asn Asp Ile Leu Arg Gly Gly Tyr Gly Ala Asp Thr Tyr Ile Phe Ser

2905                2910                2915                2920

AAA GGA CAC GGA CAG GAT ATC GTT TAT GAA GAT ACC AAT AAT GAT AAC    5399

Lys Gly His Gly Gln Asp Ile Val Tyr Glu Asp Thr Asn Asn Asp Asn

                2925                2930                2935

CGC GCA AGA GAT ATC GAC ACC TTA AAA TTT ACT GAT ATT AAT TTA TCC    5447

Arg Ala Arg Asp Ile Asp Thr Leu Lys Phe Thr Asp Ile Asn Leu Ser

            2940                2945                2950

GAA CTT TGG TTT AGC CGA GAA AAT AAC GAT TTG ATT ATT AAA TCA TTA      5495

Glu Leu Trp Phe Ser Arg Glu Asn Asn Asp Leu Ile Ile Lys Ser Leu

        2955                2960                2965

TTA AGT GAG GAT AAA GTC ACG GTT CAA AAT TGG TAT TCA CAC CAA GAT      5543

Leu Ser Glu Asp Lys Val Thr Val Gln Asn Trp Tyr Ser His Gln Asp

    2970                2975                2980

CAT AAA ATA GAA AAT ATT CGT TTA TCG AAT GAG CAA ATG TTG GTG AGC      5591

His Lys Ile Glu Asn Ile Arg Leu Ser Asn Glu Gln Met Leu Val Ser

2985                2990                2995                3000

ACT CAG GTG GAG AAG ATG GTT GAG TCG ATG GCC GGC TTT GCT CAG AAG      5639

Thr Gln Val Glu Lys Met Val Glu Ser Met Ala Gly Phe Ala Gln Lys

                3005                3010                3015

CAC GGA GGA GAG ATA TCT CTT CTG TCG CCT GAA GAG GTA AAA CAA TAT      5687

His Gly Gly Glu Ile Ser Leu Leu Ser Pro Glu Glu Val Lys Gln Tyr

            3020                3025                3030

ATC AAT AGC TTA ACA GCT GCT TTA TAA CATACGAAAG AAATCGGCAC            5734

Ile Asn Ser Leu Thr Ala Ala Leu  *

        3035                3040

AGTTTTTGTG AACTGTGCCG ATTTGATTTT AGTGTAAGAA TATAGCCTGA TTTTAAGAAA    5794

TTTACTCTTG GCTAATAACT ATTTCCCATT TTATAAGTTA TTGACGGATG GTTTTATCAA    5854

ATATGAGATC AAATCTTATT TTAAATTCGC TTTCCATTAA GCGATATTGA TCTTTTAAGT    5914

TTGGGGCCGC ATGAGTTTGG AACCGATACC ACTCATTGTG GGAATCAATA CACAATACGC    5974

TGTAATCGGA CTCTTGCAGT TCATAATAAT GCTTTCTCTC CGTTAATTCT TCTTGCGTAT    6034

ATGGCGAGAG ATTAAAGCTG AATGGCTGGT TCGCACTAAC AAACAGGTTC TCCGATTTCA    6094

GATATTCACA ACCGTAATGG CTACCGGTTT CCTGCGGTTT TACATAATTG GTATGATTTT    6154

GTTTAGCTGT TATACGGTAG ATGCCTAATT GTGGTAAATT GCGTGTGTCA ATATAGCTTT    6214

CTTGTTCTCC GTAACCGAAA TACTCAATGG CGTTTTCTGT TTTAGCTAAG AAGAAACGTA    6274

AGCCGAAGCG GGGTAAATAC GGTAATTCGA TCGGGCGAAT AGCGTTAATT TCAACCGAAA    6334

GTTGTCCGTC ATTGAAGATA CGATAACGAA TATCCAGTGT TAAAATGCGA CCGCGAGAAA    6394

TTGACACAAT TGCAGATTTT ACTGAAAATT CGACCGCTTG TTCGCTTTGC TGCCACTGAA    6454

TTTCATACGC TCTGGTATAG GCTTTATCGT AGCCGGCATT TTGGCACGCC TCACGAATGA    6514

GGCGATCATT GTCGGTTGGC GCACGCCAAA TATTAAAATC TAACGATTGT TGGATAATCG    6574

CTTTACCGGC TTTTTCAATA CGGGTGAAAA TCCCTTTCTG TTTATCTAAT TGATAACTAA    6634

ATTGACCGTT GTGTACGTTA ATGTGGAAGC GATCTTCTTG TACTTCAAAT GCACTGTTCT    6694

CAATTGTGAA TTGTGGTAAT ACTAATTTAT TTTCGCTAAA TAAATTGAGC TGCTCGAAGC    6754

CAAGTGAATG TGCTTCGTCT AATAATTCGA CCGCGGTATT TAAGCGATAA TTTAAATTCA    6814

GTAGCCATAA ATGCCCGTTA TTTTTTGGTA ACTCAATCGG TAATACTACG CTGCCGTGCG    6874

GTTGGCAAGA AACGGATAAA TTCCCACCGC TTGTCACCAC GCCGTTTTCG ACAAATTCGT    6934

AATCAATCGT TAAATAATCG GCAAGATCAG TGAAATCCAA GTAGTTGTGG ATCACAATTT    6994

GGTTATCGAT                                                           7004

(2)SEQ ID NO：4：信息：

(i)序列特征：

    (A)长度：1383个氨基酸

    (B)类型：氨基酸

    (D)拓扑学：线性

(ii)分子类型：蛋白

(xi)序列描述：SEQ ID NO：4：

Met Ser Asp Asn Ala Phe Phe Val Ile Glu Glu Ser Gly Lys Arg Tyr

  1               5                  10                  15

Ile Glu Asn Phe Gly Ile Glu Pro Leu Gly Lys Gln Glu Asp Phe Asp

             20                  25                  30

Phe Val Gly Gly Phe Trp Ser Asn Leu Val Asn Arg Gly Leu Glu Ser

         35                  40                  45

Ile Ile Asp Pro Ser Gly Ile Gly Gly Thr Val Asn Leu Asn Phe Thr

     50                  55                  60

Gly Glu Val Glu Thr Tyr Thr Leu Asp Glu Thr Arg Phe Lys Ala Glu

 65                  70                  75                  80

Ala Ala Lys Lys Ser His Trp Ser Leu Val Asn Ala Ala Lys Val Tyr

                 85                  90                  95

Gly Gly Leu Asp Gln Ile Ile Lys Lys Leu Trp Asp Ser Gly Ser Ile

            100                 105                 110

Lys His Leu Tyr Gln Asp Lys Asp Thr Gly Lys Leu Lys Pro Ile Ile

        115                 120                 125

Tyr Gly Thr Ala Gly Asn Asp Ser Lys Ile Glu Gly Thr Lys Ile Thr

    130                 135                 140

Arg Arg Ile Ala Gly Lys Glu Val Thr Leu Asp Ile Ala Asn Gln Lys

145                 150                 155                 160

Ile Glu Lys Gly Val Leu Glu Lys Leu Gly Leu Ser Val Ser Gly Ser

                165                 170                 175

Asp Ile Ile Lys Leu Leu Phe Gly Ala Leu Thr Pro Thr Leu Asn Arg

            180                 185                 190

Met Leu Leu Ser Gln Leu Ile Gln Ser Phe Ser Asp Ser Leu Ala Lys

        195                 200                 205

Leu Asp Asn Pro Leu Ala Pro Tyr Thr Lys Asn Gly Val Val Tyr Val

    210                 215                 220

Thr Gly Lys Gly Asn Asp Val Leu Lys Gly Thr Glu His Glu Asp Leu

225                 230                 235                 240

Phe Leu Gly Gly Glu Gly Asn Asp Thr Tyr Tyr Ala Arg Val Gly Asp

                245                 250                 255

Thr Ile Glu Asp Ala Asp Gly Lys Gly Lys Val Tyr Phe Val Arg Glu

            260                 265                 270

Lys Gly Val Pro Lys Ala Asp Pro Lys Arg Val Glu Phe Ser Glu Tyr

        275                 280                 285

Ile Thr Lys Glu Glu Ile Lys Glu Val Glu Lys Gly Leu Leu Thr Tyr

    290                 295                 300

Ala Val Leu Glu Asn Tyr Asn Trp Glu Glu Lys Thr Ala Thr Phe Ala

305                 310                 315                 320

His Ala Thr Met Leu Asn Glu Leu Phe Thr Asp Tyr Thr Asn Tyr Arg

                325                 330                 335

Tyr Glu Val Lys Gly Leu Lys Leu Pro Ala Val Lys Lys Leu Lys Ser

            340                 345                 350

Pro Leu Val Glu Phe Thr Ala Asp Leu Leu Thr Val Thr Pro Ile Asp

        355                 360                 365

Glu Asn Gly Lys Ala Leu Ser Glu Lys Ser Ile Thr Val Lys Asn Phe

    370                 375                 380

Lys Asn Gly Asp Leu Gly Ile Arg Leu Leu Asp Pro Asn Ser Tyr Tyr

385                 390                 395                 400

Tyr Phe Leu Glu Gly Gln Asp Thr Gly Phe Tyr Gly Pro Ala Phe Tyr

                405                 410                 415

Ile Glu Arg Lys Asn Gly Gly Gly Ser Lys Asn Asn Ser Ser Gly Ala

            420                 425                 430

Gly Asn Ser Lys Asp Trp Gly Gly Asn Gly His Gly Asn His Arg Asn

        435                 440                 445

Asn Ala Ser Asp Leu Asn Lys Pro Asp Gly Asn Asn Gly Asn Asn Gln

    450                 455                 460

Asn Asn Gly Ser Asn Gln Asp Asn His Ser Asp Val Asn Ala Pro Asn

465                 470                 475                 480

Asn Pro Gly Arg Asn Tyr Asp Ile Tyr Asp Pro Leu Ala Leu Asp Leu

                485                 490                 495

Asp Gly Asp Gly Leu Glu Thr Val Ser Met Asn Gly Arg Gln Gly Ala

            500                 505                 510

Leu Phe Asp His Glu Gly Lys Gly Ile Arg Thr Ala Thr Gly Trp Leu

        515                 520                 525

Ala Ala Asp Asp Gly Phe Leu Val Leu Asp Arg Asn Gln Asp Gly Ile

    530                 535                 540

Ile Asn Asp Ile Ser Glu Leu Phe Ser Asn Lys Asn Gln Leu Ser Asp

545                 550                 555                 560

Gly Ser Ile Ser Ala His Gly Phe Ala Thr Leu Ala Asp Leu Asp Thr

                565                 570                 575

Asn Gln Asp Gln Arg Ile Asp Gln Asn Asp Lys Leu Phe Ser Lys Leu

            580                 585                 590

Gln Ile Trp Arg Asp Leu Asn Gln Asn Gly Phe Ser Glu Ala Asn Glu

        595                 600                 605

Leu Phe Ser Leu Glu Ser Leu Asn Ile Lys Ser Leu His Thr Ala Tyr

    610                 615                 620

Glu Glu Arg Asn Asp Phe Leu Ala Gly Asn Asn Ile Leu Ala Gln Leu

625                 630                 635                 640

Gly Lys Tyr Glu Lys Thr Asp Gly Thr Phe Gly Gln Met Gly Asp Leu

                645                 650                 655

Asn Phe Ser Phe Asn Pro Phe Tyr Ser Arg Phe Thr Glu Ala Leu Asn

            660                 665                 670

Leu Thr Glu Gln Gln Arg Arg Thr Ile Asn Leu Thr Gly Thr Gly Arg

        675                 680                 685

Val Arg Asp Leu Arg Glu Ala Ala Ala Leu Ser Glu Glu Leu Ala Ala

    690                 695                 700

Leu Leu Gln Gln Tyr Thr Lys Gly Ser Asp Phe Gln Ala Gln Arg Glu

705                 710                 715                 720

Leu Leu Pro Ala Ile Leu Asp Lys Trp Ala Ala Thr Asp Leu Gln Tyr

                725                 730                 735

Gln His Tyr Asp Lys Thr Leu Leu Lys Thr Val Glu Ser Thr Asp Ser

            740                 745                 750

Ser Ala Ser Val Val Arg Val Thr Pro Ser Gln Leu Ser Ser Ile Arg

        755                 760                 765

Asn Val Lys His Asp Pro Thr Val Met Gln Asn Cys Glu Gln Ser Lys

    770                 775                 780

Ala Lys Ile Ala Thr Leu Asn Ser Leu Tyr Gly Leu Asn Ile Asp Gln

785                 790                 795                 800

Leu Tyr Tyr Thr Thr Asp Lys Asp Ile Arg Tyr Ile Thr Asp Lys Val

                805                 810                 815

Asn Asn Met Tyr Gln Thr Thr Gly Glu Leu Gly Tyr Arg Ser Leu Leu

            820                 825                 830

Leu Gln Thr Arg Val Lys Lys Tyr Val Tyr Ser Val Asn Ala Lys Gln

        835                 840                 845

Phe Glu Gly Lys Trp Val Ala Asp Tyr Ser Arg Thr Glu Ala Leu Phe

    850                 855                 860

Asn Ser Thr Tyr Lys Gln Ser Pro Glu Asn Val Leu Tyr Asp Leu Arg

865                 870                 875                 880

Glu Tyr Leu Ser Phe Tyr Asn Asp Pro Thr Glu Trp Lys Glu Gly Leu

                885                 890                 895

Leu Leu Leu Ser Arg Tyr Ile Asp Tyr Ala Lys Ala Gln Gly Phe Tyr

            900                 905                 910

Glu Asn Trp Ala Ala Thr Ser Asn Leu Thr Ile Ala Arg Leu Arg Glu

        915                 920                 925

Ala Gly Val Ile Cys Ala Glu Ser Thr Asp Leu Lys Gly Asp Glu Lys

    930                 935                 940

Asn Asn Ile Val Leu Gly Ser Gln Lys Asp Asn Asn Leu Ser Gly Ser

945                 950                 955                 960

Ala Gly Asp Asp Leu Leu Ile Gly Gly Glu Gly Asn Asp Thr Leu Lys

                965                 970                 975

Gly Ser Tyr Gly Ala Asp Thr Tyr Ile Phe Ser Lys Gly His Gly Gln

            980                 985                 990

Asp Val Ile Tyr Glu Tyr Ser Asp Ser Ala Asn Ser Lys Lys Asp Ile

        995                 1000                1005

Asp Thr Leu Lys Phe Thr Asp Val Asn Tyr Ala Glu Val Lys Phe Arg

    1010                1015                1020

Arg Val Asp Asn Asp Leu Met Leu Phe Gly Tyr His Asp Thr Asp Ser

1025                1030                1035                1040

Val Thr Val Lys Ser Phe Tyr Ser His Val Asp Tyr Gln Phe Asp Lys

                1045                1050                1055

Leu Glu Phe Ala Asp Arg Ser Ile Thr Arg Asp Glu Leu Ile Lys Ala

            1060                1065                1070

Gly Leu His Leu Tyr Gly Thr Asp Gly Asn Asp Asp Ile Lys Asp His

        1075                1080                1085

Ala Asp Trp Asp Ser Ile Val Glu Gly Gly Lys Gly Asn Asp Ile Leu

    1090                1095                1100

Arg Gly Gly Tyr Gly Ala Asp Thr Tyr Ile Phe Ser Lys Gly His Gly

1105                1110                1115                1120

Gln Asp Ile Val Tyr Glu Asp Thr Asn Asn Asp Asn Arg Ala Arg Asp

                1125                1130                1135

Ile Asp Thr Leu Thr Phe Thr Asp Val Asn Tyr Ala Glu Val Lys Phe

            1140                1145                1150

Arg Arg Val Asp Asn Asp Leu Met Leu Phe Gly Tyr His Asp Thr Asp

        1155                1160                1165

Ser Val Thr Ile Lys Ser Phe Tyr Asn His Val Asp Tyr Gln Cys Asp

    1170                1175                1180

Lys Leu Asp Phe Ala Asp Arg Ser Ile Thr Arg Asp Glu Leu Gly Lys

1185                1190                1195                1200

Gln Gly Met Ala Leu Phe Gly Thr Asp Gly Asp Asp Asn Ile Asn Asp

                1205                1210                1215

Trp Gly Arg Asn Ser Val Ile Asp Ala Gly Ala Gly Asn Asp Thr Val

            1220                1225                1230

Asn Gly Gly Asn Gly Asp Asp Thr Leu Ile Gly Gly Lys Gly Asn Asp

        1235                1240                1245

Ile Leu Arg Gly Gly Tyr Gly Ala Asp Thr Tyr Ile Phe Ser Lys Gly

    1250                1255                1260

His Gly Gln Asp Ile Val Tyr Glu Asp Thr Asn Asn Asp Asn Arg Ala

1265                1270                1275                1280

Arg Asp Ile Asp Thr Leu Lys Phe Thr Asp Ile Asn Leu Ser Glu Leu

                1285                1290                1295

Trp Phe Ser Arg Glu Asn Asn Asp Leu Ile Ile Lys Ser Leu Leu Ser

            1300                1305                1310

Glu Asp Lys Val Thr Val Gln Asn Trp Tyr Ser His Gln Asp His Lys

        1315                1320                1325

Ile Glu Asn Ile Arg Leu Ser Asn Glu Gln Met Leu Val Ser Thr Gln

    1330                1335                1340

Val Glu Lys Met Val Glu Ser Met Ala Gly Phe Ala Gln Lys His Gly

1345                1350                1355                1360

Gly Glu Ile Ser Leu Leu Ser Pro Glu Glu Val Lys Gln Tyr Ile Asn

                1365                1370                1375

Ser Leu Thr Ala Ala Leu  *

            1380

(2)SEQ ID NO：5信息：

(i)序列特征：

    (A)长度：6736个碱基对

    (B)类型：核酸

    (C)链型：双链

    (D)拓扑学：线性

(ii)分子类型：DNA(基因组)

(iii)假设：无

(iv)反义：无

(vi)最初来源：

    (A)有机体：胸膜肺炎放线杆菌

    (B)菌株：4074(血清型1参比菌株)

(vii)直接来源：

    (B)克隆：pROK7

(ix)特征：

    (A)名字/关键：CDS

    (B)位置：1132…6549

    (C)鉴定方法：实验

    (D)其它信息：/密码子-起始＝1132

       /功能＝“RTX毒素”

       /产物＝“ApxIV”

       /证据＝实验

       /基因＝“ApxIV_v1”

(ix)特征：

    (A)名字/关键：CDS

    (B)位置：639…1178

    (D)其它信息：/密码子_起始＝639

       /功能＝“未知”

       /产物＝“ORF1”

       /基因＝“orf1”

(ix)特征：

    (A)名字/关键：CDS

    (B)位置：1…453

    (D)其它信息：/部分

       /产物＝“Met-G”

       /基因＝“mrp”

       /标准_名＝“mrp”

       /标记＝mrp

(ix)特征：

    (A)名字/关键：-10_信号

    (B)位置：617…623

    (D)其它信息：/标准_名字＝“-10”

                 /标记＝-10_S

(ix)特征：

    (A)名字/关键：-35_信号

    (B)位置：594..599

    (D)其它信息：/标准_名字＝“-35_S”

                 /标记：＝-35_S

(ix)特征：

    (A)名字/关键：启动子

    (B)位置：454…1131

    (D)其它信息：/功能＝“启动子”

       /标准_名称＝“启动子ApxIV”

       /标记＝启动子

(ix)序列描述：SEQ ID NO：5：

ATC GAT ATG CCG CCG GGT ACG GGC GAT ATC CAA CTT ACT CTT TCG CAA     48

Ile Asp Met Pro Pro Gly Thr Gly Asp Ile Gln Leu Thr Leu Ser Gln

  1               5                  10                 15

CAA ATT CCG GTT ACC GGT GCG GTG GTG GTA ACC ACT CCG CAA GAT ATT     96

Gln Ile Pro Val Thr Gly Ala Val Val Val Thr Thr Pro Gln Asp Ile

            20                   25                  30

GCG TTA TTA GAT GCG GTG AAA GGT ATT TCA ATG TTC CAA AAA GTG TCG    144

Ala Leu Leu Asp Ala Val Lys Gly Ile Ser Met Phe Gln Lys Val Ser

         35                  40                  45

GTA CCG GTC TTA GGT ATC ATT GAA AAT ATG AGC GTA CAT ATC TGC CAA    192

Val Pro Val Leu Gly Ile Ile Glu Asn Met Ser Val His Ile Cys Gln

     50                  55                 60

AAT TGC GGT CAC CAC GAA GAT ATT TTC GGC ACC GGC GGT GCG GAG AAA      240

Asn Cys Gly His His Glu Asp Ile Phe Gly Thr Gly Gly Ala Glu Lys

 65                  70                  75                  80

GTG GCG AAG AAA TAC GGT ACT AAA GTA TTA GGA CAA ATG CCG TTG CAT      288

Val Ala Lys Lys Tyr Gly Thr Lys Val Leu Gly Gln Met Pro Leu His

                 85                  90                  95

ATT CGC TTA CGT CAA GAT TTG GAT GCC GGC ACA CCG ACC GTC GTT GCG      336

Ile Arg Leu Arg Gln Asp Leu Asp Ala Gly Thr Pro Thr Val Val Ala

            100                 105                 110

GCA CCG GAA CAC GAA ACC AGC CGA GCC TAT ATT GAA TTA GCG GCA AAA      384

Ala Pro Glu His Glu Thr Ser Arg Ala Tyr Ile Glu Leu Ala Ala Lys

        115                 120                 125

GTC GCT TCG GAA TTA TAC TGG CAA GGT TCG GTT ATC CCG TCT GAA ATT      432

Val Ala Ser Glu Leu Tyr Trp Gln Gly Sar Val Ile Pro Ser Glu Ile

    130                 135                 140

ATG ATT CGT GAA GTA AAA TAA GTTTTAATAA CCACGAAAAC ACAAAGAACA         483

Met Ile Arg Glu Val Lys  *

145                 150

CAAGCGGTAG AATTTGCAGA AAAATTTGCA AATCCTACCG CTTTTTTATT AGTACGATTC    543

GCTGTTGGAC TGCTATTTGA TTTGGTTTGT CAGGATATTA TGTTATTGTA ATGAAATGTT    603

AGTGAATTAT TTTTATTAAT TTGAAAGGAA ACAAAATGAA AATAAAAAAA CGTTACATTG    663

CGCTGTTGGT CTTAGGTGTC GTTATCAGCT ATGCCTGGTA TCAAAATTAT CAATGGGAAC    723

AGCTGATGTT AAGCGGTTAT TGTGAAAAGG ACGGAAGTTA TTTTGATGAT AGGCATACGA    783

AGCAAGAACT GATTGATAGG GCAATTAACT ATATGCTGGA GCATCAATCT AAAAAAACAT    843

ACGATGCTTA TACTGATGAA CCTTTAGAAA TAAAACCATA TTTAACAATA GAGGAATTTA    903

AAAAACTCAA TCCAAATTGT TGTGAAATTA CCTCATGGCC AGCAGATGCA GTTCCACAAG    963

ATTGGGATGT TCGTGTGGAA GGTAAGGCAT ATAGGTATGT AATCGTAAAA TATTTAAGAA   1023

CCTTAGCAAA TAGAGAACCT GAACGATGGG AAACTAGTAT TGTTTTTGAT AATTGCGGCA   1083

ATCCTAAAAG AGCAAGCTAC TTATATTATT TAAAGAGAGA AATTTATT ATG ACA AAA    1140

                                                     Met Thr Lys

                                                       1

TTA ACT ATG CAA GAT GTG ACC AAT TTA TAT TTA TAT AAA ACG AAA ACT     1188

Leu Thr Met Gln Asp Val Thr Asn Leu Tyr Leu Tyr Lys Thr Lys Thr

      5                  10                  15

CTA CCT AAA GAT AGA TTG GAT GAT TCA CTT ATT TCT GAA ATA GGA AAA     1236

Leu Pro Lys Asp Arg Leu Asp Asp Ser Leu Ile Ser Glu Ile Gly Lys

 20                  25                  30                  35

GGA GAT GAT GAT ATT GAT AGA AAA GAA TTT ATG GTG GGG CCG GGA CGT     1284

Gly Asp Asp Asp Ile Asp Arg Lys Glu Phe Met Val Gly Pro Gly Arg

                 40                  45                  50

TTT GTG ACC GCT GAT AAC TTT AGC GTT GTA AGA GAT TTT TTT AAT GCT     1332

Phe Val Thr Ala Asp Asn Phe Ser Val Val Arg Asp Phe Phe Asn Ala

             55                  60                  65

GGG AAA TCA CGC ATT ATT GCG CCG CAA GTC CCG CCT ATT CGT TCA CAG     1380

Gly Lys Ser Arg Ile Ile Ala Pro Gln Val Pro Pro Ile Arg Ser Gln

         70                  75                  80

CAG GAA AAA ATC TTG GTC GGT TTA AAA CCG GGC AAA TAT TCC AAA GCG     1428

Gln Glu Lys Ile Leu Val Gly Leu Lys Pro Gly Lys Tyr Ser Lys Ala

     85                  90                  95

CAG ATA TTG GAA ATG CTG GGT TAT ACG AAA GGC GGA GAA GTG GTA AAT     1476

Gln Ile Leu Glu Met Leu Gly Tyr Thr Lys Gly Gly Glu Val Val Asn

100                 105                 110                 115

GGC ATG TTT GCC GGT GAA GTC CAG ACA TTA GGC TTT TAT GAC GAT GGC     1524

Gly Met Phe Ala Gly Glu Val Gln Thr Leu Gly Phe Tyr Asp Asp Gly

                120                 125                 130

AAA GGG GAT TTA CTC GAA CGC GCC TAT ATC TGG AAT ACC ACA GGA TTT     1572

Lys Gly Asp Leu Leu Glu Arg Ala Tyr Ile Trp Asn Thr Thr Gly Phe

            135                 140                 145

AAA ATG AGC GAC AAT GCC TTT TTT GTT ATA GAA GAA TCA GGC AAA CGC     1620

Lys Met Ser Asp Asn Ala Phe Phe Val Ile Glu Glu Ser Gly Lys Arg

        150                 155                 160

TAT ATT GAA AAC TTT GGT ATT GAA CCT CTT GGT AAG CAA GAA GAT TTT    1668

Tyr Ile Glu Asn Phe Gly Ile Glu Pro Leu Gly Lys Gln Glu Asp Phe

    165                 170                 175

GAT TTT GTC GGC GGC TTT TGG TCT AAC TTA GTG AAT CGT GGT TTG GAA    1716

Asp Phe Val Gly Gly Phe Trp Ser Asn Leu Val Asn Arg Gly Leu Glu

180                 185                 190                 195

AGT ATT ATC GAC CCA TCC GGT ATC GGT GGA ACG GTA AAC CTT AAC TTT    1764

Sar Ile Ile Asp Pro Sar Gly Ile Gly Gly Thr Val Asn Leu Asn Phe

                200                 205                 210

ACC GGC GAG GTG GAA ACC TAC ACG TTA GAC GAA ACA AGG TTT AAA GCG    1812

Thr Gly Glu Val Glu Thr Tyr Thr Leu Asp Glu Thr Arg Phe Lys Ala

            215                 220                 225

GAA GCG GCG AAG AAA AGC CAT TGG AGT TTA GTG AAT GCG GCG AAA GTA    1860

Glu Ala Ala Lys Lys Ser His Trp Ser Leu Val Asn Ala Ala Lys Val

        230                 235                 240

TAC GGC GGT TTA GAC CAA ATT ATT AAA AAA CTA TGG GAC AGT GGC TCA    1908

Tyr Gly Gly Leu Asp Gln Ile Ile Lys Lys Leu Trp Asp Ser Gly Ser

    245                 250                 255

ATT AAG CAT TTA TAT CAA GAT AAA GAT ACG GGC AAA TTA AAA CCG ATT    1956

Ile Lys His Leu Tyr Gln Asp Lys Asp Thr Gly Lys Leu Lys Pro Ile

260                 265                 270                 275

ATT TAC GGC ACG GCC GGC AAC GAC AGT AAG ATT GAA GGC ACT AAA ATC    2004

Ile Tyr Gly Thr Ala Gly Asn Asp Ser Lys Ile Glu Gly Thr Lys Ile

                280                 285                 290

ACC CGT AGG ATT GCG GGT AAA GAA GTT ACG CTT GAT ATT GCC AAT CAG    2052

Thr Arg Arg Ile Ala Gly Lys Glu Val Thr Leu Asp Ile Ala Asn Gln

            295                 300                 305

AAA ATT GAA AAA GGC GTG TTA GAG AAA TTG GGG CTG TCT GTT AGT GGT    2100

Lys Ile Glu Lys Gly Val Leu Glu Lys Leu Gly Leu Ser Val Ser Gly

        310                 315                 320

TCG GAT ATC ATT AAA TTG TTG TTT GGA GCA TTG ACT CCA ACT TTA AAT    2148

Ser Asp Ile Ile Lys Leu Leu Phe Gly Ala Leu Thr Pro Thr Leu Asn

    325                 330                 335

AGA ATG TTG CTA TCA CAA CTT ATC CAG TCT TTT TCC GAT AGC TTG GCT    2196

Arg Met Leu Leu Ser Gln Leu Ile Gln Ser Phe Ser Asp Ser Leu Ala

340                 345                 350                 355

AAA CTT GAT AAT CCC TTA GCC CCT TAC ACT AAA AAT GGC GTG GTT TAT    2244

Lys Leu Asp Asn Pro Leu Ala Pro Tyr Thr Lys Asn Gly Val Val Tyr

                360                 365                 370

GTC ACC GGC AAA GGG AAT GAT GTG CTT AAA GGA ACT GAA CAT GAG GAT    2292

Val Thr Gly Lys Gly Asn Asp Val Leu Lys Gly Thr Glu His Glu Asp

            375                 380                 385

TTG TTT CTC GGT GGT GAG GGG AAT GAT ACT TAT TAT GCG AGA GTA GGC    2340

Leu Phe Leu Gly Gly Glu Gly Asn Asp Thr Tyr Tyr Ala Arg Val Gly

        390                 395                 400

GAT ACA ATT GAA GAC GCC GAC GGC AAA GGT AAA GTC TAT TTT GTG AGA    2388

Asp Thr Ile Glu Asp Ala Asp Gly Lys Gly Lys Val Tyr Phe Val Arg

    405                 410                 415

GAA AAA GGG GTA CCT AAG GCG GAT CCT AAG CGG GTA GAG TTT AGC GAG    2436

Glu Lys Gly Val Pro Lys Ala Asp Pro Lys Arg Val Glu Phe Ser Glu

420                 425                 430                 435

TAC ATA ACG AAA GAA GAA ATA AAA GAG GTT GAA AAG GGG TTA TTA ACT    2484

Tyr Ile Thr Lys Glu Glu Ile Lys Glu Val Glu Lys Gly Leu Leu Thr

                440                 445                 450

TAC GCA GTT TTA GAA AAT TAT AAT TGG GAA GAG AAA ACG GCG ACT TTC    2532

Tyr Ala Val Leu Glu Asn Tyr Asn Trp Glu Glu Lys Thr Ala Thr Phe

            455                 460                 465

GCT CAT GCG ACT ATG CTT AAT GAG CTT TTT ACT GAT TAT ACT AAT TAT    2580

Ala His Ala Thr Met Leu Asn Glu Leu Phe Thr Asp Tyr Thr Asn Tyr

        470                 475                 480

CGT TAT GAA GTT AAA GGA CTA AAA TTG CCC GCC GTT AAA AAG TTA AAA    2628

Arg Tyr Glu Val Lys Gly Leu Lys Leu Pro Ala Val Lys Lys Leu Lys

    485                 490                 495

AGT CCG TTG GTG GAG TTT ACA GCT GAT TTA TTA ACT GTT ACG CCT ATT    2676

Ser Pro Leu Val Glu Phe Thr Ala Asp Leu Leu Thr Val Thr Pro Ile

500                 505                 510                 515

GAC GAA AAC GGA AAA GCA CTT AGC GAA AAA AGT ATT ACG GTT AAA AAT    2724

Asp Glu Asn Gly Lys Ala Leu Ser Glu Lys Ser Ile Thr Val Lys Asn

                520                 525                 530

TTT AAA AAT GGT GAT TTA GGA ATA AGG TTG TTG GAT CCT AAT AGC TAT    2772

Phe Lys Asn Gly Asp Leu Gly Ile Arg Leu Leu Asp Pro Asn Ser Tyr

            535                 540                 545

TAT TAT TTC CTT GAA GGC CAA GAT ACG GGT TTT TAT GGT CCT GCT TTT    2820

Tyr Tyr Phe Leu Glu Gly Gln Asp Thr Gly Phe Tyr Gly Pro Ala Phe

        550                 555                 560

TAT ATT GAA CGA AAA AAC GGT GGC GGC GCT AAA AAT AAC TCG TCG GGA    2868

Tyr Ile Glu Arg Lys Asn Gly Gly Gly Ala Lys Asn Asn Ser Ser Gly

    565                 570                 575

GCA GGA AAT AGC AAA GAT TGG GGC GGG AAC GGG CAT GGA AAT CAC CGA    2916

Ala Gly Asn Ser Lys Asp Trp Gly Gly Asn Gly His Gly Asn His Arg

580                 585                 590                 595

AAT AAT GCC TCC GAC CTG AAT AAA CCG GAC GGA AAT AAT GGG AAT AAC    2964

Asn Asn Ala Ser Asp Leu Asn Lys Pro Asp Gly Asn Asn Gly Asn Asn

                600                 605                 610

CAA AAT AAC GGA AGC AAT CAA GAT AAT CAT AGC GAT GTG AAT GCG CCA    3012

Gln Asn Asn Gly Ser Asn Gln Asp Asn His Ser Asp Val Asn Ala Pro

            615                 620                 625

AAT AAC CCG GGA CGT AAC TAT GAT ATT TAC GAT CCT TTA GCT TTA GAT    3060

Asn Asn Pro Gly Arg Asn Tyr Asp Ile Tyr Asp Pro Leu Ala Leu Asp

        630                 635                 640

TTA GAT GGA GAT GGG CTT GAA ACC GTG TCG ATG AAC GGG CGA CAA GGC    3108

Leu Asp Gly Asp Gly Leu Glu Thr Val Ser Met Asn Gly Arg Gln Gly

    645                 650                 655

GCG TTA TTC GAT CAT GAA GGA AAA GGT ATT CGT ACC GCA ACG GGC TGG    3156

Ala Leu Phe Asp His Glu Gly Lys Gly Ile Arg Thr Ala Thr Gly Trp

660                 665                 670                 675

CTC GCT GCG GAT GAC GGT TTT TTA GTG TTA GAT CGT AAC CAA GAC GGC    3204

Leu Ala Ala Asp Asp Gly Phe Leu Val Leu Asp Arg Asn Gln Asp Gly

                680                 685                 690

ATT ATT AAT GAT ATA AGC GAG TTA TTT AGT AAT AAA AAT CAA CTT TCC    3252

Ile Ile Asn Asp Ile Ser Glu Leu Phe Ser Asn Lys Asn Gln Leu Ser

            695                 700                 705

GAC GGC AGT ATT TCT GCA CAC GGT TTT GCG ACA TTA GCC GAT TTG GAT    3300

Asp Gly Ser Ile Ser Ala His Gly Phe Ala Thr Leu Ala Asp Leu Asp

        710                 715                 720

ACA AAC CAA GAT CAG CGT ATC GAC CAA AAT GAT AAG CTG TTT TCT AAA    3348

Thr Asn Gln Asp Gln Arg Ile Asp Gln Asn Asp Lys Leu Phe Ser Lys

    725                 730                 735

CTC CAA ATT TGG CGG GAT TTA AAT CAA AAC GGT TTT AGT GAA GCG AAT    3396

Leu Gln Ile Trp Arg Asp Leu Asn Gln Ass Gly Phe Ser Glu Ala Asn

740                 745                 750                 755

GAG CTG TTT AGC TTA GAA AGT TTG AAT ATT AAA TCT TTA CAT ACC GCC    3444

Glu Leu Phe Ser Leu Glu Ser Leu Asn Ile Lys Ser Leu His Thr Ala

                760                 765                 770

TAT GAA GAG CGT AAT GAT TTT CTA GCG GGC AAT AAT ATC CTT GCT CAG    3492

Tyr Glu Glu Arg Asn Asp Phe Leu Ala Gly Asn Asn Ile Leu Ala Gln

            775                 780                 785

CTT GGG AAG TAT GAA AAA ACG GAC GGT ACT TTT GCA CAA ATG GGC GAT    3540

Leu Gly Lys Tyr Glu Lys Thr Asp Gly Thr Phe Ala Gln Met Gly Asp

        790                 795                 800

TTA AAT TTC AGT TTT AAC CCG TTT TAT AGC CGA TTT ACC GAA GCG TTA    3588

Leu Asn Phe Ser Phe Asn Pro Phe Tyr Ser Arg Phe Thr Glu Ala Leu

    805                 810                 815

AAT TTA ACC GAG CAA CAA CGT CGC ACA ATT AAT CTA ACC GGC ACC GGT    3636

Asn Leu Thr Glu Gln Gln Arg Arg Thr Ile Asn Leu Thr Gly Thr Gly

820                 825                 830                 835

CGG GTT CGG GAT TTG CGT GAA GCC GCC GCA CTT TCT GAG GAG TTG GCT    3684

Arg Val Arg Asp Leu Arg Glu Ala Ala Ala Leu Ser Glu Glu Leu Ala

                840                 845                 850

GCT TTA TTA CAA CAG TAC ACT AAG GCC TCC GAT TTT CAG GCA CAA CGA    3732

Ala Leu Leu Gln Gln Tyr Thr Lys Ala Ser Asp Phe Gln Ala Gln Arg

            855                 860                 865

GAA TTA TTG CCT GCC ATT TTA GAT AAA TGG GCG GCA ACG GAT TTA CAG    3780

Glu Leu Leu Pro Ala Ile Leu Asp Lys Trp Ala Ala Thr Asp Leu Gln

        870                 875                 880

TAT CAA CAT TAT GAT AAA ACA TTA CTT AAA ACG GTA GAA AGT ACC GAT    3828

Tyr Gln His Tyr Asp Lys Thr Leu Leu Lys Thr Val Glu Ser Thr Asp

    885                 890                 895

AGT AGT GCT TCT GTC GTT AGA GTC ACG CCT TCT CAA TTA AGT AGT ATA    3876

Ser Ser Ala Ser Val Val Arg Val Thr Pro Ser Gln Leu Ser Ser Ile

900                 905                 910                 915

CGC AAT GCA AAG CAT GAT CCT ACC GTT ATG CAA AAC TTT GAA CAG AGT    3924

Arg Asn Ala Lys His Asp Pro Thr Val Met Gln Asn Phe Glu Gln Ser

                920                 925                 930

AAG GCA AAA ATT GCG ACT TTA AAT TCG CTC TAC GGG TTA AAT ATC GAT    3972

Lys Ala Lys Ile Ala Thr Leu Asn Ser Leu Tyr Gly Leu Asn Ile Asp

            935                 940                 945

CAA CTT TAT TAC ACG ACG GAT AAA GAC ATT CGC TAT ATT ACT GAT AAA    4020

Gln Leu Tyr Tyr Thr Thr Asp Lys Asp Ile Arg Tyr Ile Thr Asp Lys

        950                 955                 960

GTG AAT AAT ATG TAT CAA ACA ACC GTA GAA CTT GCC TAC CGT TCT TTA    4068

Val Asn Asn Met Tyr Gln Thr Thr Val Glu Leu Ala Tyr Arg Ser Leu

    965                 970                 975

CTT TTA CAA ACG CGT TTG AAG AAA TAT GTT TAT AGC GTT AAT GCG AAA    4116

Leu Leu Gln Thr Arg Leu Lys Lys Tyr Val Tyr Ser Val Asn Ala Lys

980                 985                 990                 995

CAA TTC GAA GGG AAA TGG GTA ACC GAT TAT TCT CGT ACT GAA GCC TTA    4164

Gln Phe Glu Gly Lys Trp Val Thr Asp Tyr Ser Arg Thr Glu Ala Leu

                1000                1005                1010

TTT AAC TCT ACT TTT AAA CAA TCG CCT GAA AAT GCA TTA TAT GAT TTA    4212

Phe Asn Ser Thr Phe Lys Gln Ser Pro Glu Asn Ala Leu Tyr Asp Leu

            1015                1020                1025

AGC GAA TAC CTT TCT TTC TTT AAC GAT CCT ACG GAA TGG AAA GAA GGG    4260

Ser Glu Tyr Leu Ser Phe Phe Asn Asp Pro Thr Glu Trp Lys Glu Gly

        1030                1035                1040

CTA TTA CTG TTA AGC CGT TAT ATA GAT TAT GCT AAA GCA CAA GGA TTT    4308

Leu Leu Leu Leu Ser Arg Tyr Ile Asp Tyr Ala Lys Ala Gln Gly Phe

    1045                1050                1055

TAT GAA AAC TGG GCG GCT ACT TCT AAC TTA ACT ATT GCC CGT TTA AGA    4356

Tyr Glu Asn Trp Ala Ala Thr Ser Asn Leu Thr Ile Ala Arg Leu Arg

1060                1065                1070                1075

GAG GCT GGA GTA ATT TTT GCA GAA TCG ACG GAT TTA AAA GGC GAT GAA    4404

Glu Ala Gly Val Ile Phe Ala Glu Ser Thr Asp Leu Lys Gly Asp Glu

                1080                1085                1090

AAA AAT AAT ATT TTG TTA GGT AGC CAA AAA GAT AAT AAC TTA TCG GGT    4452

Lys Asn Asn Ile Leu Leu Gly Ser Gln Lys Asp Asn Asn Leu Ser Gly

            1095                1100                1105

AGT GCA GGT GAT GAT CTA CTT ATC GGC GGA GAG GGT AAT GAT ACG TTA    4500

Ser Ala Gly Asp Asp Leu Leu Ile Gly Gly Glu Gly Asn Asp Thr Leu

        1110                1115                1120

AAA GGC AGC TAC GGT GCA GAC ACC TAT ATC TTT AGC AAA GGA CAC GGA    4548

Lys Gly Ser Tyr Gly Ala Asp Thr Tyr Ile Phe Ser Lys Gly His Gly

    1125                1130                1135

CAG GAT ATC GTT TAT GAA GAT ACC AAT AAT GAT AAC CGC GCA AGA GAT    4596

Gln Asp Ile Val Tyr Glu Asp Thr Asn Asn Asp Asn Arg Ala Arg Asp

1140                1145                1150                1155

ATC GAC ACC TTA AAA TTT ACC GAT GTG AAT TAT GCG GAA GTG AAG TTT    4644

Ile Asp Thr Leu Lys Phe Thr Asp Val Asn Tyr Ala Glu Val Lys Phe

                1160                1165                1170

CGA CGA GTA GAT AAT GAC TTA ATG TTA TTC GGT TAT CAT GAT ACG GAT    4692

Arg Arg Val Asp Asn Asp Leu Met Leu Phe Gly Tyr His Asp Thr Asp

            1175                1180                1185

TCG GTC ACG GTA AAA TCC TTC TAC AGC CAT GTA GAT TAT CAA TTT GAC    4740

Ser Val Thr Val Lys Ser Phe Tyr Ser His Val Asp Tyr Gln Phe Asp

        1190                1195                1200

AAA TTG GAG TTT GCT GAC CGC AGT ATA ACT CGC GAT GAA CTG ATT AAA    4788

Lys Leu Glu Phe Ala Asp Arg Ser Ile Thr Arg Asp Glu Leu Ile Lys

    1205                1210                1215

GCA GGG CTT CAT CTA TAC GGC ACC GAT GGC AAT GAT GAT ATA AAG GAT    4836

Ala Gly Leu His Leu Tyr Gly Thr Asp Gly Asn Asp Asp Ile Lys Asp

1220                1225                1230                1235

CAT GCG GAT TGG GAC AGC ATT TTG GAA GGC GGC AAA GGC AAC GAT ATT    4884

His Ala Asp Trp Asp Ser Ile Leu Glu Gly Gly Lys Gly Asn Asp Ile

                1240                1245                1250

CTA AGA GGT GGC TAC GGT GCG GAC ACC TAT ATC TTT AGC AAA GGA CAC    4932

Leu Arg Gly Gly Tyr Gly Ala Asp Thr Tyr Ile Phe Ser Lys Gly His

            1255                1260                1265

GGA CAG GAT ATC GTT TAT GAA GAT ACC AAT AAT GAT AAC CGC GCA AGA    4980

Gly Gln Asp Ile Val Tyr Glu Asp Thr Asn Asn Asp Asn Arg Ala Arg

        1270                1275                1280

GAT ATC GAC ACC TTA AAA TTT ACT GAT GTG AAT TAT GCG GAA GTG AAA    5028

Asp Ile Asp Thr Leu Lys Phe Thr Asp Val Asn Tyr Ala Glu Val Lys

    1285                1290                1295

TTC CGA CGA GTA GAT AAT GAC TTA ATG TTA TTC GGT TAT CAT GAT ACG    5076

Phe Arg Arg Val Asp Asn Asp Leu Met Leu Phe Gly Tyr His Asp Thr

1300                1305                1310                1315

GAT TCG GTC ACG ATA AAA TCC TTC TAC AAC CAT GTA GAT TAT CAA TTT    5124

Asp Ser Val Thr Ile Lys Ser Phe Tyr Asn His Val Asp Tyr Gln Phe

                1320                1325                1330

GAC AAA TTG GAA TTT GCT GAC CGC AGT ATA ACT CGT GAT GAA CTA GGT    5172

Asp Lys Leu Glu Phe Ala Asp Arg Ser Ile Thr Arg Asp Glu Leu Gly

            1335                1340                1345

AAA CAA GGT ATG GCA TTA TTT GGC ACT GAC GGT GAT GAT AAT ATC AAC    5220

Lys Gln Gly Met Ala Leu Phe Gly Thr Asp Gly Asp Asp Asn Ile Asn

        1350                1355                1360

GAC TGG GGA CGT AAC TCG GTG ATT GAT GCC GGT GCG GGT AAT GAT ACG    5268

Asp Trp Gly Arg Asn Ser Val Ile Asp Ala Gly Ala Gly Asn Asp Thr

    1365                1370                1375

GTT AAT GGC GGT AAT GGC GAT GAC ACC CTC ATC GGC GGC AAA GGT AAT    5316

Val Asn Gly Gly Asn Gly Asp Asp Thr Leu Ile Gly Gly Lys Gly Asn

1380                1385                1390                1395

GAT ATT CTA AGA GGT GGC TAC GGT GCG GAC ACC TAT ATC TTT AGC AAA    5364

Asp Ile Leu Arg Gly Gly Tyr Gly Ala Asp Thr Tyr Ile Phe Ser Lys

                1400                1405                1410

GGA CAC GGA CAG GAT ATC GTT TAT GAA GAT ACC AAT AAT GAT AAC CGC    5412

Gly His Gly Gln Asp Ile Val Tyr Glu Asp Thr Asn Asn Asp Asn Arg

            1415                1420                1425

GCA AGA GAT ATC GAC ACC TTA AAA TTT ACC GAT GTG AAT TAT GCG GAA    5460

Ala Arg Asp Ile Asp Thr Leu Lys Phe Thr Asp Val Asn Tyr Ala Glu

        1430                1435                1440

GTG AAA TTC CGA CGA GTA GAT AAT GAC TTA ATG TTA TTC GGT TAT CAT    5508

Val Lys Phe Arg Arg Val Asp Asn Asp Leu Met Leu Phe Gly Tyr His

    1445                1450                1455

GAT ACG GAT TCG GTC ACG GTA AAA TCC TTC TAC AGC CAT GTA GAT TAT    5556

Asp Thr Asp Ser Val Thr Val Lys Ser Phe Tyr Ser His Val Asp Tyr

1460                1465                1470                1475

CAA TTT GAC AAA TTG GAG TTT GCT GAC CGC AGT ATA ACT CGC GAT GAA    5604

Gln Phe Asp Lys Leu Glu Phe Ala Asp Arg Ser Ile Thr Arg Asp Glu

                1480                1485                1490

CTG ATT AAA GCA GGG CTT CAT CTA TAC GGC ACC GAT GGC AAT GAT GAT    5652

Leu Ile Lys Ala Gly Leu His Leu Tyr Gly Thr Asp Gly Asn Asp Asp

            1495                1500                1505

ATA AAG GAT CAT GCG GAT TGG GAC AGC ATT TTG GAA GGC GGC AAA GGC    5700

Ile Lys Asp His Ala Asp Trp Asp Ser Ile Leu Glu Gly Gly Lys Gly

        1510                1515                1520

AAC GAT ATT CTA AGA GGT GGC TAC GGT GCG GAC ACC TAT ATC TTT AGC    5748

Asn Asp Ile Leu Arg Gly Gly Tyr Gly Ala Asp Thr Tyr Ile Phe Ser

    1525                1530                1535

AAA GGA CAC GGA CAG GAT ATC GTT TAT GAA GAT ACC AAT AAT GAT AAC    5796

Lys Gly His Gly Gln Asp Ile Val Tyr Glu Asp Thr Asn Asn Asp Asn

1540                1545                1550               1555

CGA GCA AGA GAT ATC GAC ACC TTA AAA TTT ACT GAT GTG AAT TAT GCG    5844

Arg Ala Arg Asp Ile Asp Thr Leu Lys Phe Thr Asp Val Asn Tyr Ala

                1560               1565                 1570

GAA GTG AAA TTC CGA CGA GTA GAT AAT GAC TTA ATG TTA TTC GGT TAT    5892

Glu Val Lys Phe Arg Arg Val Asp Asn Asp Leu Met Leu Phe Gly Tyr

            1575                1580                1585

CAT GAT ACG GAT TCG GTC ACG ATA AAA TCC TTC TAC AAC CAT GTA GAT    5940

His Asp Thr Asp Ser Val Thr Ile Lys Ser Phe Tyr Asn His Val Asp

        1590                1595                1600

TAT CAA TTT GAC AAA TTG GAA TTT GCT GAC CGC AGT ATA ACT CGT GAT    5988

Tyr Gln Phe Asp Lys Leu Glu Phe Ala Asp Arg Ser Ile Thr Arg Asp

    1605                1610                1615

GAA CTA GGT AAA CAA GGT ATG GCA TTA TTT GGC ACT GAC GGT GAT GAT    6036

Glu Leu Gly Lys Gln Gly Met Ala Leu Phe Gly Thr Asp Gly Asp Asp

1620                1625                1630                1635

AAT ATC AAC GAC TGG GGA CGT AAC TCG GTG ATT GAT GCC GGT GCG GGT    6084

Asn Ile Asn Asp Trp Gly Arg Asn Ser Val Ile Asp Ala Gly Ala Gly

                1640                1645                1650

AAT GAT ACG GTT AAT GGC GGT AAT GGC GAT GAC ACC CTC ATC GGC GGC    6132

Asn Asp Thr Val Asn Gly Gly Asn Gly Asp Asp Thr Leu Ile Gly Gly

            1655                1660                1665

AAA GGT AAT GAT ATT CTA AGA GGT GGC TAC GGT GCG GAC ACC TAT ATC    6180

Lys Gly Asn Asp Ile Leu Arg Gly Gly Tyr Gly Ala Asp Thr Tyr Ile

        1670                1675                1680

TTT AGC AAA GGA CAC GGA CAG GAT ATC GTT TAT GAA GAT ACC AAT AAT    6228

Phe Ser Lys Gly His Gly Gln Asp Ile Val Tyr Glu Asp Thr Asn Asn

    1685                1690                1695

GAT AAC CGC GCA AGA GAT ATC GAC ACC TTA AAA TTT ACT GAT ATT AAT    6276

Asp Asn Arg Ala Arg Asp Ile Asp Thr Leu Lys Phe Thr Asp Ile Asn

1700                1705                1710               1715

TTA TCC GAA CTT TGG TTT AGC CGA GAA AAT AAC GAT TTG ATT ATT AAA    6324

Leu Ser Glu Leu Trp Phe Ser Arg Glu Asn Asn Asp Leu Ile Ile Lys

                1720                1725                1730

TCA TTA TTA AGT GAG GAT AAA GTC ACG GTT CAA AAT TGG TAT TCA CAC    6372

Ser Leu Leu Ser Glu Asp Lys Val Thr Val Gln Asn Trp Tyr Ser His

            1735                1740                1745

CAA GAT CAT AAA ATA GAA AAT ATT CGT TTA TCG AAT GAG CAA ACG TTG    6420

Gln Asp His Lys Ile Glu Asn Ile Arg Leu Ser Asn Glu Gln Thr Leu

        1750                1755                1760

GTG AGC ACT CAG GTG GAG AAG ATG GTT GAG TCG ATG GCC GGC TTT GCT    6468

Val Ser Thr Gln Val Glu Lys Met Val Glu Ser Met Ala Gly Phe Ala

    1765                1770                1775

CAG AAG CAC GGA GGA GAG ATA TCT CTT GTG TCG CTT GAA GAG GTA AAA    6516

Gln Lys His Gly Gly Glu Ile Ser Leu Val Ser Leu Glu Glu Val Lys

1780                1785                1790                1795

CAA TAT ATC AAT AGC TTA ACA GCT GCT TTA TAA CATACGAAAG AAATCGGCAC  6569

Gln Tyr Ile Asn Ser Leu Thr Ala Ala Leu  *

                1800                1805

AGTTTTTTTG AACTGTGCCG ATTTGATTTT AGTGTAAGAA TATAGCCTGA TTTTAAGAAA  6629

TTTACTCTTG GCTAATAACT ATTTCCCATT TTATAAGTTA TTGACGGATG GTTTTATCAA  6689

ATATGAGATC AAATCTTATT TTAAATTCGC TTTCCATTAA GCGATAT                6736

(2)SEQ ID NO：6信息：

(i)序列特征：

    (A)长度：151个氨基酸

    (B)类型：氨基酸

    (D)拓扑学：线性

(ii)分子类型：蛋白

(xi)序列描述：SEQ ID NO：6：

Ile Asp Met Pro Pro Gly Thr Gly Asp Ile Gln Leu Thr Leu Ser Gln

  1               5                  10                  15

Gln Ile Pro Val Thr Gly Ala Val Val Val Thr Thr Pro Gln Asp Ile

             20                  25                  30

Ala Leu Leu Asp Ala Val Lys Gly Ile Ser Met Phe Gln Lys Val Ser

         35                  40                  45

Val Pro Val Leu Gly Ile Ile Glu Asn Met Ser Val His Ile Cys Gln

     50                  55                  60

Asn Cys Gly His His Glu Asp Ile Phe Gly Thr Gly Gly Ala Glu Lys

 65                  70                  75                  80

Val Ala Lys Lys Tyr Gly Thr Lys Val Leu Gly Gln Met Pro Leu His

                 85                  90                  95

Ile Arg Leu Arg Gln Asp Leu Asp Ala Gly Thr Pro Thr Val Val Ala

            100                 105                 110

Ala Pro Glu His Glu Thr Ser Arg Ala Tyr Ile Glu Leu Ala Ala Lys

        115                 120                 125

Val Ala Ser Glu Leu Tyr Trp Gln Gly Ser Val Ile Pro Ser Glu Ile

    130                 135                 140

Met Ile Arg Glu Val Lys  *

145                 150

(2)SEQ ID NO：7信息：

    (i)序列特征：

    (A)长度：1806个氨基酸

    (B)类型：氨基酸

    (D)拓扑学：线性

(ii)分子类型：蛋白

(xi)序列描述：SEQ ID NO：7：

Met Thr Lys Leu Thr Met Gln Asp Val Thr Asn Leu Tyr Leu Tyr Lys

  1               5                  10                  15

Thr Lys Thr Leu Pro Lys Asp Arg Leu Asp Asp Ser Leu Ile Ser Glu

             20                  25                  30

Ile Gly Lys Gly Asp Asp Asp Ile Asp Arg Lys Glu Phe Met Val Gly

         35                  40                  45

Pro Gly Arg Phe Val Thr Ala Asp Asn Phe Ser Val Val Arg Asp Phe

     50                  55                  60

Phe Asn Ala Gly Lys Ser Arg Ile Ile Ala Pro Gln Val Pro Pro Ile

 65                  70                  75                  80

Arg Ser Gln Gln Glu Lys Ile Leu Val Gly Leu Lys Pro Gly Lys Tyr

                 85                  90                  95

Ser Lys Ala Gln Ile Leu Glu Met Leu Gly Tyr Thr Lys Gly Gly Glu

            100                 105                  110

Val Val Asn Gly Met Phe Ala Gly Glu Val Gln Thr Leu Gly Phe Tyr

        115                 120                 125

Asp Asp Gly Lys Gly Asp Leu Leu Glu Arg Ala Tyr Ile Trp Asn Thr

    130                 135                 140

Thr Gly Phe Lys Met Ser Asp Asn Ala Phe Phe Val Ile Glu Glu Ser

145                 150                 155                 160

Gly Lys Arg Tyr Ile Glu Asn Phe Gly Ile Glu Pro Leu Gly Lys Gln

                165                 170                 175

Glu Asp Phe Asp Phe Val Gly Gly Phe Trp Ser Asn Leu Val Asn Arg

            180                 185                 190

Gly Leu Glu Ser Ile Ile Asp Pro Ser Gly Ile Gly Gly Thr Val Asn

        195                 200                 205

Leu Asn Phe Thr Gly Glu Val Glu Thr Tyr Thr Leu Asp Glu Thr Arg

    210                 215                 220

Phe Lys Ala Glu Ala Ala Lys Lys Ser His Trp Ser Leu Val Asn Ala

225                 230                  235                240

Ala Lys Val Tyr Gly Gly Leu Asp Gln Ile Ile Lys Lys Leu Trp Asp

                245                 250                 255

Ser Gly Ser Ile Lys His Leu Tyr Gln Asp Lys Asp Thr Gly Lys Leu

            260                 265                 270

Lys Pro Ile Ile Tyr Gly Thr Ala Gly Asn Asp Ser Lys Ile Glu Gly

        275                 280                 285

Thr Lys Ile Thr Arg Arg Ile Ala Gly Lys Glu Val Thr Leu Asp Ile

    290                 295                 300

Ala Asn Gln Lys Ile Glu Lys Gly Val Leu Glu Lys Leu Gly Leu Ser

305                 310                 315                 320

Val Ser Gly Ser Asp Ile Ile Lys Leu Leu Phe Gly Ala Leu Thr Pro

                325                 330                 335

Thr Leu Asn Arg Met Leu Leu Ser Gln Leu Ile Gln Ser Phe Ser Asp

            340                 345                 350

Ser Leu Ala Lys Leu Asp Asn Pro Leu Ala Pro Tyr Thr Lys Asn Gly

        355                 360                 365

Val Val Tyr Val Thr Gly Lys Gly Asn Asp Val Leu Lys Gly Thr Glu

    370                 375                 380

His Glu Asp Leu Phe Leu Gly Gly Glu Gly Asn Asp Thr Tyr Tyr Ala

385                 390                 395                 400

Arg Val Gly Asp Thr Ile Glu Asp Ala Asp Gly Lys Gly Lys Val Tyr

                405                 410                 415

Phe Val Arg Glu Lys Gly Val Pro Lys Ala Asp Pro Lys Arg Val Glu

            420                 425                 430

Phe Ser Glu Tyr Ile Thr Lys Glu Glu Ile Lys Glu Val Glu Lys Gly

        435                 440                 445

Leu Leu Thr Tyr Ala Val Leu Glu Asn Tyr Asn Trp Glu Glu Lys Thr

    450                 455                 460

Ala Thr Phe Ala His Ala Thr Met Leu Asn Glu Leu Phe Thr Asp Tyr

465                 470                 475                 480

Thr Asn Tyr Arg Tyr Glu Val Lys Gly Leu Lys Leu Pro Ala Val Lys

                485                 490                 495

Lys Leu Lys Ser Pro Leu Val Glu Phe Thr Ala Asp Leu Leu Thr Val

            500                 505                 510

Thr Pro Ile Asp Glu Asn Gly Lys Ala Leu Ser Glu Lys Ser Ile Thr

        515                 520                 525

Val Lys Asn Phe Lys Asn Gly Asp Leu Gly Ile Arg Leu Leu Asp Pro

    530                 535                 540

Asn Ser Tyr Tyr Tyr Phe Leu Glu Gly Gln Asp Thr Gly Phe Tyr Gly

545                 550                 555                 560

Pro Ala Phe Tyr Ile Glu Arg Lys Asn Gly Gly Gly Ala Lys Asn Asn

                565                 570                 575

Ser Ser Gly Ala Gly Asn Ser Lys Asp Trp Gly Gly Asn Gly His Gly

            580                 585                 590

Asn His Arg Asn Asn Ala Ser Asp Leu Asn Lys Pro Asp Gly Asn Asn

        595                 600                 605

Gly Asn Asn Gln Asn Asn Gly Ser Asn Gln Asp Asn His Ser Asp Val

    610                 615                 620

Asn Ala Pro Asn Asn Pro Gly Arg Asn Tyr Asp Ile Tyr Asp Pro Leu

625                 630                 635                 640

Ala Leu Asp Leu Asp Gly Asp Gly Leu Glu Thr Val Ser Met Asn Gly

                645                 650                 655

Arg Gln Gly Ala Leu Phe Asp His Glu Gly Lys Gly Ile Arg Thr Ala

            660                 665                 670

Thr Gly Trp Leu Ala Ala Asp Asp Gly Phe Leu Val Leu Asp Arg Asn

        675                 680                 685

Gln Asp Gly Ile Ile Asn Asp Ile Ser Glu Leu Phe Ser Asn Lys Asn

    690                 695                 700

Gln Leu Ser Asp Gly Ser Ile Ser Ala His Gly Phe Ala Thr Leu Ala

705                 710                 715                 720

Asp Leu Asp Thr Asn Gln Asp Gln Arg Ile Asp Gln Asn Asp Lys Leu

                725                 730                 735

Phe Ser Lys Leu Gln Ile Trp Arg Asp Leu Asn Gln Asn Gly Phe Ser

            740                 745                 750

Glu Ala Asn Glu Leu Phe Ser Leu Glu Ser Leu Asn Ile Lys Ser Leu

        755                 760                 765

His Thr Ala Tyr Glu Glu Arg Asn Asp Phe Leu Ala Gly Asn Asn Ile

    770                 775                 780

Leu Ala Gln Leu Gly Lys Tyr Glu Lys Thr Asp Gly Thr Phe Ala Gln

785                 790                 795                 800

Met Gly Asp Leu Asn Phe Ser Phe Asn Pro Phe Tyr Ser Arg Phe Thr

                805                 810                 815

Glu Ala Leu Asn Leu Thr Glu Gln Gln Arg Arg Thr Ile Asn Leu Thr

            820                 825                 830

Gly Thr Gly Arg Val Arg Asp Leu Arg Glu Ala Ala Ala Leu Ser Glu

        835                 840                 845

Glu Leu Ala Ala Leu Leu Gln Gln Tyr Thr Lys Ala Ser Asp Phe Gln

    850                 855                 860

Ala Gln Arg Glu Leu Leu Pro Ala Ile Leu Asp Lys Trp Ala Ala Thr

865                 870                 875                 880

Asp Leu Gln Tyr Gln His Tyr Asp Lys Thr Leu Leu Lys Thr Val Glu

                885                 890                 895

Ser Thr Asp Ser Ser Ala Ser Val Val Arg Val Thr Pro Ser Gln Leu

            900                 905                 910

Ser Ser Ile Arg Asn Ala Lys His Asp Pro Thr Val Met Gln Asn Phe

        915                 920                 925

Glu Gln Ser Lys Ala Lys Ile Ala Thr Leu Asn Ser Leu Tyr Gly Leu

    930                 935                 940

Asn Ile Asp Gln Leu Tyr Tyr Thr Thr Asp Lys Asp Ile Arg Tyr Ile

945                 950                 955                 960

Thr Asp Lys Val Asn Asn Met Tyr Gln Thr Thr Val Glu Leu Ala Tyr

                965                 970                 975

Arg Ser Leu Leu Leu Gln Thr Arg Leu Lys Lys Tyr Val Tyr Ser Val

            980                 985                 990

Asn Ala Lys Gln Phe Glu Gly Lys Trp Val Thr Asp Tyr Ser Arg Thr

        995                 1000                1005

Glu Ala Leu Phe Asn Ser Thr Phe Lys Gln Ser Pro Glu Asn Ala Leu

    1010                1015                1020

Tyr Asp Leu Ser Glu Tyr Leu Ser Phe Phe Asn Asp Pro Thr Glu Trp

1025                1030                1035                1040

Lys Glu Gly Leu Leu Leu Leu Ser Arg Tyr Ile Asp Tyr Ala Lys Ala

                1045                1050                1055

Gln Gly Phe Tyr Glu Asn Trp Ala Ala Thr Ser Asn Leu Thr Ile Ala

            1060               1065                 1070

Arg Leu Arg Glu Ala Gly Val Ile Phe Ala Glu Ser Thr Asp Leu Lys

        1075                1080                1085

Gly Asp Glu Lys Asn Asn Ile Leu Leu Gly Ser Gln Lys Asp Asn Asn

    1090                1095                1100

Leu Ser Gly Ser Ala Gly Asp Asp Leu Leu Ile Gly Gly Glu Gly Asn

1105                1110                1115                1120

Asp Thr Leu Lys Gly Ser Tyr Gly Ala Asp Thr Tyr Ile Phe Ser Lys

                1125                1130                1135

Gly His Gly Gln Asp Ile Val Tyr Glu Asp Thr Asn Asn Asp Asn Arg

            1140                1145                1150

Ala Arg Asp Ile Asp Thr Leu Lys Phe Thr Asp Val Asn Tyr Ala Glu

        1155                1160                1165

Val Lys Phe Arg Arg Val Asp Asn Asp Leu Met Leu Phe Gly Tyr His

    1170                1175                1180

Asp Thr Asp Ser Val Thr Val Lys Ser Phe Tyr Ser His Val Asp Tyr

1185                1190                1195                1200

Gln Phe Asp Lys Leu Glu Phe Ala Asp Arg Ser Ile Thr Arg Asp Glu

                1205                1210                1215

Leu Ile Lys Ala Gly Leu His Leu Tyr Gly Thr Asp Gly Asn Asp Asp

            1220                1225                1230

Ile Lys Asp His Ala Asp Trp Asp Ser Ile Leu Glu Gly Gly Lys Gly

        1235                1240                1245

Asn Asp Ile Leu Arg Gly Gly Tyr Gly Ala Asp Thr Tyr Ile Phe Ser

    1250                1255                1260

Lys Gly His Gly Gln Asp Ile Val Tyr Glu Asp Thr Asn Asn Asp Asn

1265                1270                1275                1280

Arg Ala Arg Asp Ile Asp Thr Leu Lys Phe Thr Asp Val Asn Tyr Ala

                1285                1290                1295

Glu Val Lys Phe Arg Arg Val Asp Asn Asp Leu Met Leu Phe Gly Tyr

            1300                1305                1310

His Asp Thr Asp Ser Val Thr Ile Lys Ser Phe Tyr Asn His Val Asp

        1315                1320                1325

Tyr Gln Phe Asp Lys Leu Glu Phe Ala Asp Arg Ser Ile Thr Arg Asp

    1330                1335                1340

Glu Leu Gly Lys Gln Gly Met Ala Leu Phe Gly Thr Asp Gly Asp Asp

1345                1350                1355                1360

Asn Ile Asn Asp Trp Gly Arg Asn Ser Val Ile Asp Ala Gly Ala Gly

                1365                1370                1375

Asn Asp Thr Val Asn Gly Gly Asn Gly Asp Asp Thr Leu Ile Gly Gly

            1380                1385                1390

Lys Gly Asn Asp Ile Leu Arg Gly Gly Tyr Gly Ala Asp Thr Tyr Ile

        1395                1400                1405

Phe Ser Lys Gly His Gly Gln Asp Ile Val Tyr Glu Asp Thr Asn Asn

    1410                1415                1420

Asp Asn Arg Ala Arg Asp Ile Asp Thr Leu Lys Phe Thr Asp Val Asn

1425                1430                1435                1440

Tyr Ala Glu Val Lys Phe   g Arg Val Asp Asn Asp Leu Met Leu Phe

                1445                1450                1455

Gly Tyr His Asp Thr Asp Ser Val Thr Val Lys Ser Phe Tyr Ser His

            1460                1465                1470

Val Asp Tyr Gln Phe Asp Lys Leu Glu Phe Ala Asp Arg Ser Ile Thr

        1475                1480                1485

Arg Asp Glu Leu Ile Lys Ala Gly Leu His Leu Tyr Gly Thr Asp Gly

    1490                1495                1500

Asn Asp Asp Ile Lys Asp His Ala Asp Trp Asp Ser Ile Leu Glu Gly

1505                1510                1515                1520

Gly Lys Gly Asn Asp Ile Leu Arg Gly Gly Tyr Gly Ala Asp Thr Tyr

                1525                1530                1535

Ile Phe Ser Lys Gly His Gly Gln Asp Ile Val Tyr Glu Asp Thr Asn

            1540                1545                1550

Asn Asp Asn Arg Ala Arg Asp Ile Asp Thr Leu Lys Phe Thr Asp Val

        1555                1560                1565

Asn Tyr Ala Glu Val Lys Phe Arg Arg Val Asp Asn Asp Leu Met Leu

    1570                1575                1580

Phe Gly Tyr His Asp Thr Asp Ser Val Thr Ile Lys Ser Phe Tyr Asn

1585                1590                1595                1600

His Val Asp Tyr Gln Phe Asp Lys Leu Glu Phe Ala Asp Arg Ser Ile

                1605                1610                1615

Thr Arg Asp Glu Leu Gly Lys Gln Gly Met Ala Leu Phe Gly Thr Asp

            1620                1625                1630

Gly Asp Asp Asn Ile Asn Asp Trp Gly Arg Asn Ser Val Ile Asp Ala

        1635                1640                1645

Gly Ala Gly Asn Asp Thr Val Asn Gly Gly Asn Gly Asp Asp Thr Leu

    1650                1655                1660

Ile Gly Gly Lys Gly Asn Asp Ile Leu Arg Gly Gly Tyr Gly Ala Asp

1665                1670                1675                1680

Thr Tyr Ile Phe Ser Lys Gly His Gly Gln Asp Ile Val Tyr Glu Asp

                1685                1690                1695

Thr Asn Asn Asp Asn Arg Ala Arg Asp Ile Asp Thr Leu Lys Phe Thr

            1700                1705                1710

Asp Ile Asn Leu Ser Glu Leu Trp Phe Ser Arg Glu Asn Asn Asp Leu

        1715                1720                1725

Ile Ile Lys Ser Leu Leu Ser Glu Asp Lys Val Thr Val Gln Asn Trp

    1730                1735                1740

Tyr Ser His Gln Asp His Lys Ile Glu Asn Ile Arg Leu Ser Asn Glu

1745                1750                1755                1760

Gln Thr Leu Val Ser Thr Gln Val Glu Lys Met Val Glu Ser Met Ala

                1765                1770                1775

Gly Phe Ala Gln Lys His Gly Gly Glu Ile Ser Leu Val Ser Leu Glu

            1780                1785                1790

Glu Val Lys Gln Tyr Ile Asn Ser Leu Thr Ala Ala Leu  *

        1795                1800                1805