一株解淀粉芽孢杆菌及其在制备防治地黄根腐病及斑枯病微生物菌剂中的应用专利检索- 使用微生物的方法专利检索查询-专利查询网

一株解淀粉芽孢杆菌及其在制备防治地黄根腐病及斑枯病微生物菌剂中的应用
申请号	CN201710766412.X	申请日	2017-08-30	公开(公告)号	CN107502571A	公开(公告)日	2017-12-22
申请人	河南师范大学;			发明人	杨清香; 王瑞飞; 王妍; 李明军;
摘要	本发明公开了一株解淀粉芽孢杆菌及其在制备防治地黄根腐病及斑枯病微生物菌剂中的应用，属于植物病害的微生物防治技术领域。本发明的技术方案要点为：一株解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC NO.14229。本发明还具体公开了该解淀粉芽孢杆菌的分离纯化方法及其在制备防治地黄根腐病及斑枯病微生物菌剂中的应用。本发明采用平板分离纯化的方法从名贵中药地黄的根际土壤中获得一株细菌，经16s rDNA测序鉴定为解淀粉芽孢杆菌，并且该菌株能够高效拮抗地黄根腐病与斑枯病，为开发地黄生防型微生物菌剂提供了一株新的菌种资源。
权利要求	1.一株解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC NO. 14229。 2.一种权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌的分离纯化方法，其特征在于具体过程为：将 10g地黄根际土壤溶于100mL生理盐水中，取100μL上清液涂布于固体LB培养基上于37℃培养36h，其中固体LB培养基的成分以g/L计为：氯化钠10、酵母粉5、蛋白胨10，其余成分为水，pH7.0，挑取其中的单菌落在固体LB培养基上进行划线分离纯化，获得一株菌落特征明显的细菌，编号ZSY-1，该菌株的菌落遗传特征如下：菌落培养8h之内，菌落圆滑，半透明，表面光泽，菌落黏稠易挑起，12h之后，菌落呈乳白色，不透明，菌落中间凸起，周围表面皱缩，形成菌膜，难挑起，16S rDNA测序及BLAST比对结果显示该菌株与解淀粉芽孢杆菌具有99%的相似性，其测序序列如序列表SEQIDNO:1所示，纯化后的菌种保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC NO. 14229，保藏日期为2017年6月12日。 3.权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌在制备防治地黄根腐病及斑枯病微生物菌剂中的应用。
说明书全文	一株解淀粉芽孢杆菌及其在制备防治地黄根腐病及斑枯病微生物菌剂中的应用技术领域 [0001] 本发明属于植物病害的微生物防治技术领域，具体涉及一株解淀粉芽孢杆菌及其在制备防治地黄根腐病及斑枯病微生物菌剂中的应用。背景技术 [0002] 地黄块根是一味传统中药，需求量极大，但是地黄本身对生长条件要求较为苛刻，喜干而忌水，忌连作且其种植有明显的地域性（河南省焦作市的一些地区如温县等产出的地黄具有最好的质量），这使其成为一种不可多得的经济药材。地黄的生长时期较长，通常从4月份持续到12月份，在每年6月份到8月份，河南省焦作市炎热多雨的天气特点常常造成一些真菌病原微生物如根腐病和斑枯病病原菌的爆发式增殖，并侵染地黄块根，造成大规模减产。为了实现地黄的稳产，每年大量的农药被喷洒以控制地黄的根腐病和斑枯病，但是这些农药的残留物一方面对环境造成了污染，另一方面也增加了地黄作为药物的安全性隐患。 [0003] 近年来，微生物菌剂因其在防治植物病害方面所特有的高效性和无污染性，正在成为现代农业病害防治的首选方法。微生物菌剂的主要成分是各种微生物菌种，已有的研究表明，植物生长环境是微生物菌种的重要资源库，不同微生物甚至是同一种微生物为了适应不同的环境条件，其生理特点可能产生巨大的变化。因此，从地黄生长环境中筛选合适的微生物菌种，开发高效的微生物菌剂调整地黄-微生物-环境间的微生态平衡，对于防治地黄根腐病和斑枯病病害、提高地黄产量具有非常重要的意义。本发明的创新点在于一株解淀粉芽孢杆菌ZSY-1的获得及其在制备防治地黄根腐病及斑枯病微生物菌剂中的应用。发明内容 [0004] 本发明解决的技术问题是提供了一株解淀粉芽孢杆菌及其在制备防治地黄根腐病及斑枯病微生物菌剂中的应用。 [0005] 本发明为解决上述技术问题采用如下技术方案：一株解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏单位地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为： CGMCC NO. 14229。 [0006] 本发明所述的解淀粉芽孢杆菌的分离纯化方法，其特征在于具体过程为：将10g地黄根际土壤溶于100mL生理盐水中，取100μL上清液涂布于固体LB培养基上于37℃培养36h，其中固体LB培养基的成分以g/L计为：氯化钠10、酵母粉5、蛋白胨10，其余成分为水，pH7.0，挑取其中的单菌落在固体LB培养基上进行划线分离纯化，获得一株菌落特征明显的细菌，编号ZSY-1，该菌株的菌落遗传特征如下：菌落培养8h之内，菌落圆滑，半透明，表面光泽，菌落黏稠易挑起，12h之后，菌落呈乳白色，不透明，菌落中间凸起，周围表面皱缩，形成菌膜，难挑起，16S rDNA测序及BLAST比对结果显示该菌株与解淀粉芽孢杆菌具有99%的相似性，其测序序列如序列表SEQIDNO:1所示，纯化后的菌种保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC NO. 14229，保藏日期为2017年6月12日。 [0007] 本发明所述的解淀粉芽孢杆菌在制备防治地黄根腐病及斑枯病微生物菌剂中的应用。 [0008] 本发明采用平板分离纯化的方法从名贵中药地黄的根际土壤中获得一株细菌，经16s rDNA测序鉴定为解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens，编号ZSY-1，并且该菌株能够高效拮抗地黄根腐病与斑枯病，为开发地黄生防型微生物菌剂提供了一株新的菌种资源。附图说明 [0009] 图1是解淀粉芽孢杆菌ZSY-1对峙地黄根腐病的对比图；图2是解淀粉芽孢杆菌ZSY-1对峙地黄斑枯病的对比图。具体实施方式 [0010] 以下通过实施例对本发明的上述内容做进一步详细说明，但不应该将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例，凡基于本发明上述内容实现的技术均属于本发明的范围。 [0011] 菌株获得及分离纯化：将10g地黄根际土壤溶于100mL生理盐水中，取100μL上清液涂布于固体LB培养基上于37℃培养36h，其中固体LB培养基的成分以g/L计为：氯化钠10、酵母粉5、蛋白胨10，其余成分为水，pH7.0。挑取其中的单菌落在固体LB培养基上进行划线分离纯化，获得一株细菌菌株，编号ZSY-1，经16S rDNA测序及BLAST比对确定该菌与解淀粉芽孢杆菌具有99%的相似性。纯化后的菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC NO. 14229，保藏日期：2017年6月12日。 [0012] 解淀粉芽孢杆菌ZSY-1拮抗地黄根腐病及斑枯病病原菌：实施例1（拮抗地黄根腐病）采用平板对峙法，将在PDA平板上培养4-5天的地黄根腐病病菌Fusarium solani打成直径为6mm的菌饼，接种于另一PDA培养基中间有6mm孔径的位置，然后将在LB培养基上活化 36h的已纯化解淀粉芽孢杆菌ZSY-1接种于距菌饼2cm处，每个PDA平板对称接种4个点，重复 3组，以点接无菌水作为空白对照，置于28℃培养箱中，待对照中病原菌生长4天后，测量病原菌菌落半径，按照抑制率=(空白对照致病菌菌落半径-ZSY-1对峙致病菌半径)/空白对照致病菌菌落半径100%计算抑菌效果。结果显示，解淀粉芽孢杆菌ZSY-1对地黄根腐病病菌Fusarium solani的抑制率达到了45.8%（附图1）。 [0013] 实施例2（拮抗地黄斑枯病）采用平板对峙法，将在PDA平板上培养4-5天的地黄斑枯病病菌Septoria digitalis Pass打成直径为6mm的菌饼，接种于另一PDA培养基中间有6mm孔径的位置，然后将在LB培养基上活化36h的已纯化解淀粉芽孢杆菌ZSY-1接种于距菌饼2cm处，每个PDA平板对称接种4个点，重复3组，以点接无菌水作为空白对照，置于28℃培养箱中，待对照中病原菌生长4天后，按照抑制率=(空白对照致病菌菌落半径-ZSY-1对峙致病菌半径)/空白对照致病菌菌落半径100%计算抑菌效果。结果显示，解淀粉芽孢杆菌ZSY-1对地黄斑枯病菌Septoria digitalis Pass的抑制率达到了72%（附图2）。 [0014] 以上实施例描述了本发明的基本原理、主要特征及优点，本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明原理的范围下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进均落入本发明保护的范围内。

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