本发明涉及一种同化油、脂肪或有机废料的微生物，它能有效地分解废液中所含的废油、脂肪或有机废料等，并对环境和人体没有危害；本发明还涉及用同样的微生物处理从饭店、餐车、旅馆、食品或烹调中心、医院等的设施或厨房所排出的废液的方法；本发明还涉及用同样的微生物消除这些废液所造成的臭气等的方法。更具体地，本发明涉及一种同化油、脂肪或有机废料等的微生物，它能有效地分解从上述地点所排出的废液中所含的废油或脂肪或有机废料等，和/或在这些废液中的高浓度的正己烷提取物；本发明还涉及处理从中所排出的废液以及消除这些废液所造成的臭气的方法。

近些年来，随着人类活动的进步所造成的工业和经济的发展以及营养生活方式的改变等，极大地增加了天然有机废料的量。具体地，随着营养生活方式转变为消耗更多动物食品的生活方式，家禽制品的消耗量暴涨。随着家禽消耗量的增加，造成了含有大量废油或脂肪等的废液的增加。具体地，大量的废油、脂肪或油样或油脂样物质等被作为废液从例如饭店、餐车、旅馆、食品或烹调中心、医院等的设施或厨房排出。因此，从这些设施等所排出的废液自然地含有大量废油或脂肪等。
一般地说，废液中所污染的废油、脂肪等到目前为止已经被例如传统的方法所处理，比如将废液废弃到河流或海洋中或燃烧。然而，因为废油、脂肪等的污染以及废油、脂肪等所造成的恶臭，废液的这些海洋处理可能成为河流、海洋等污染的原因，并形成一个社会问题。因此，目前为了避免河流和海洋的污染并保护海洋环境，法律已经禁止废液的海洋处置。另一方面，通过燃烧废液中所含的废油或脂肪等来处理或处置废液也成为大气污染的一个原因，造成环境破坏的发生，并因此产生了一个社会关注的问题。此外，从所排出的碳酸气体是造成气候改变的重要因素之一的角度出发，通过燃烧对废油、脂肪等的处置成为了严重的社会问题。因此，迫切地需要发展一种有效地处理废油或脂肪等的方法，它不会造成任何的环境破坏或可以尽可能地减少环境污染。
大量含有废油或脂肪等的废液也被作为污水从住宅中排出。在城市等中建立了足够多的污水处置工厂，废油在污水处置工厂被处理并分解到适当的程度后，含有废液等的污水可以被排放到河流或海洋中。然而，目前对含有废液的污水的处理需要大量的开支并给主管污水处置工厂等的当局增加了沉重的经济负担。另一方面，在其它一些很少建立或没有建立污水处置工厂的地区，含有废油或脂肪等的大量废液作为家庭污水被直接排放到河流或海洋等中，废液并没有被预先处理或处置到允许或适合于废弃到河流或海洋等中的令人满意的程度。这就造成河流或海洋等的污染，并因此造成环境破坏。
对没有或很少预先处理的污水中所含的废油、脂肪或有机废料的处置也可以造成各种问题。废液中的废油或脂肪等可以降低污水的温度，因此当污水的温度下降到油或脂肪等的凝固点以下时，造成油或脂肪等的凝固，并且所凝固的油或脂肪等被粘附到排放管等的内表面，因此造成排放管的堵塞。具体地，在污水处置工厂中，另外需要大量用于保养和维护排放管等的开支。
为了解决上述的严重问题，饭店、餐车、旅馆、超市、医院等的设施或厨房等现在已经被强行要求装配油脂捕集器，它作用为在废液被排放到排放管之前，废液所含的废油或脂肪的收集器。油脂捕集器可以是具有一个入口和一个出口的储存容器，通过所布置的入口，从设施厨房所排出的排出物可以流入到油脂捕集器中，通过所布置的出口，油脂捕集器中的排出物可以排放到排放管或用于分离固体物质与废液的罐中。油脂捕集器可以进一步地具有可被调整的结构，使得容器被分隔成三个或四个部分，使得废液可以在容器中停留更长的滞留时间，因此油脂捕集器可以容易网住排泄物中所含的废油或脂肪等。然而，在此要注意到，油脂捕集器具有从排出物中分离并收集废油或脂肪的物理功能，但它不具有生物地或化学地分解废液中所含的废油或脂肪等的功能。
必须在周期间隔内收集并从油脂捕集器中取出由油脂捕集器以上述方式从污水中所分离并收集到的废油或脂肪等，然后通过合适的方法将其处理。至今为止，在工业化废物处置点燃烧销毁上述方法中所收集到的这些废物。然而，全国的工业化废物处置点已经几乎达到了它们的处理或处置的极限。此外，因为环境破坏的问题或其它原因，修建新的工业化废物处置点几乎是不可能的。因此，在目前的环境下，经常发生废液的非法处理包括将废油或脂肪等废弃到河流、海洋等。这也成为了一个公众关注的问题。
为了解决通过燃烧或废弃到河流或海洋处理废液或废油、脂肪或有机废料等所带来问题，已经提出用化学的废物处理方法以及生物的废物处理方法作为上述的传统处置方法的替代方法。然而，目前还没有一种化学和生物处理方法被认为能达到实践可应用的技术水平。在此要明白，一方面，化学的废物处理是例如通过用化学试剂分解这些废油或脂肪等来处理或加工废液中所含的废油、脂肪或有机废料的方法；在另一方面，生物的废物处理是例如用能同化油或脂肪等的微生物或这些微生物的混合物分解这些废液来处理或加工这些废油或脂肪等的方法。
对于化学性废物处理方法，已经报告了一些方法，例如使用废物处置剂的方法，作为活性成分的废物处置试剂包括例如皂苷和烷基糖苷，例如己基糖苷、己基半乳糖苷、己基甘露糖苷、异己基糖苷等(日本专利申请No.7-24,454)；吸水聚合物，例如淀粉-丙烯酸接枝聚合物、纤维素-丙烯酸接枝聚合物、或丙烯酸聚合物，例如聚丙烯酸或其钠盐、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酸或其钠盐等，或阳离子聚合物，例如氨基烷基(甲基)丙烯酸酯四价盐聚合物、聚氨基甲基丙烯酰胺盐或四价盐聚合物、壳聚糖乙酸、聚氨砜、聚丙烯酰胺盐酸盐等等(日本专利申请No.7-188,647)；以及用于处理含有油或脂肪等的废液的试剂，包括三种表面活性物质的混合物，也就是作为阴离子表面活性物质的聚氧乙烯烷基醚硫酸酯钠盐、作为非离子表面活性物质的脂肪酸乙醇胺，以及聚乙烯烷基醚(日本专利申请No.2004-277,550)。
对于用于生物的废物处理方法的微生物，已经报告了各种有机体，例如属于隐球菌属(genus Cryptococcus)(日本专利申请No.11-244,892)、不动杆菌属(genus Acinetobacter)(日本专利申请No.2003-24,051以及No.11-196,861)、芽孢杆菌属(genus Bacillus)(日本专利申请No.2003-228)、伯克霍尔德菌属(genus Burkholderia)(日本专利申请No.2002-125,659)、链球菌属(genus Staphylococcus)(日本专利申请No.2000-228,977)、假单胞菌属(genus Pseudomonas)(日本专利申请No.2000-270,845和No.2003-116,526)和曲霉属(genus Aspergillus)(日本专利申请No.2003-235,465)的大量菌株。当单独使用时，在先前工艺中所阐述的每种利用这些有机体的技术都可以分解废液中的油或脂肪等，但是每种有机体分解废油或脂肪等的能力不能说是足够有效的，同时它们不能有效地将有机废物减少到低于所设定的排出水平的水平。因此，仍有通过使用新类型的微生物或它们的混合物来改进这些方法的空间。
另一种设想是使用脂肪酶进行生物的废物处理方法，这是一种具有分解油或脂肪能力的酶。这些可以使用的脂肪酶例如可以是来源于动物或植物以及商品化可获得的来源于微生物的脂肪酶。在有机体来源的脂肪酶中，可以使用的脂肪酶所来源的有机体包括，但不限于根霉属(genusRhizopus)、曲霉属、毛霉属(genus Mucor)、假单胞菌属、地丝菌属(genusGeotrichum)、青霉属(genus Penicillium)或假丝酵母属(genus Candida)(日本专利申请No.2004-113,238)。
为了解决在涉及处置含有废油或脂肪等的废液的现有技术中所普遍存在的问题，本发明者已经成功地鉴定出特殊的微生物，它们能通过同化废油或脂肪等而生长在含有废料的废液中。本发明者已经鉴定出这些微生物是属于鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas sp.)、Microbacterium saperdae和Microbacterium esteraromaticum、和蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)，并提出了通过利用这些微生物的混合物分解有机废料的方法(日本专利No.3,400,418)，这是一种比单独使用这些微生物更为有效的处理方法。然而，已经发现用微生物混合物分解有机废料的方法仍有进一步改进的空间。
在此另外要注意的是从饭店、餐车、旅馆、饮食中心和医院等等的烹调设施或厨房等排出的废液具有不同的特性，它们可能在多重性能上有所不同的。因此为了有效地处理这些多重性能的废液，现在发现必须采用新的能适合于废液的各种特性的微生物混合物。例如，下面的表1显示了从每天排出废液量为50吨或少于50吨的设施中所排出废液的BOD值和正己烷提取物的量的统计(2003年环境部的统计数据)。
表1：来自不同设施的废液的BOD值和正己烷提取物的量
从上述的表1中可以清楚地看到，从不同的设施以及厨房等中排出的废液含有非常大的以及不同的量的正己烷提取物，并且具有非常高的BOD值，使得它们很容易产生臭气等问题。为了处理各种废液且不引起或很少引起问题，必须有效地分解废液中所含的废油、脂肪或有机废料等，和减少BOD值并在尽可能接近于引起发生臭气等的源头的地方原位处理废液。因此，为了解决废液处置中的问题，发展新型的微生物混合物可能有很大的帮助，它可以在更接近于引起发生污染等的源头的地点处置油脂捕集器中的污染。
处理含有废油或脂肪等的废液的组合处置罐有时可能不能将废液所含的有机材料处理到有效的程度，并将未充分处理的废液排放到公共排放管中。它所带来的问题是可能强加给公共污水处置工厂过多的负担。也在这个方面，能够在更接近于发生恶臭等的地点处理废液中所含的废油、脂肪等的新型的微生物混合物可能成为解决上述问题的有效工具。因此，发展这样的微生物混合物是有极大帮助的。
另外，要注意到因为油脂捕集器对废油或脂肪的无效处理或组合处置罐中的有机材料所造成的臭气等的持续发生可能成为公众关注的问题。然而，目前的现状是在饭店、饮食店等的烹调设施中对臭气的处理还没有进行到充分的程度。因此，发展能消除臭气等的微生物混合物对于废液的处理是非常重要的。
如上所述，对废液的处置可能给饭店、餐车、旅馆、烹调或饮食中心、医院等的小规模设施或厨房等带来沉重的经济负担，因此可以预计修建大规模的废物处置设备对于这些小规模的设施或厨房在经济上是困难的。而且，有时会非法地排出没有被充分处理的废液。换句话说，在废液处置上所要解决的现有问题有一大堆。也在这些方面，发展处理含有废油、脂肪或有机废料的废液以及消除所述废液所生成的恶臭的新型微生物以及方法是非常重要的，并且它非常有助于保持天然环境。

根据上述的状况，本发明者进行了广泛的研究和探索以解决如上述的在现有技术中所存在的各种困难和问题，并发展出应用上述的新的微生物混合物的技术。结果，现在发现一些新的微生物菌株可以分解含有废油或脂肪等的废液，以及如上述的具有各种特性的废液中的高浓度的有机废料。还发现这些微生物的新菌株彼此或与其它已知的微生物菌株的混合物能有效地分解废油和有机废料。此外，还发现微生物的培养混合物可以消除其中所含的废油或脂肪等的腐烂或腐败所产生的臭气，以及可以制出消臭的微生物制剂。根据这些发现完成了本发明。
因此，本发明的目的是提供一种同化油、脂肪或有机废料等的微生物或这些微生物的混合物，所述微生物能有效并容易地分解废液中所含的甚至高浓度的废油、脂肪或有机废料等，且不危害环境及人体。本发明的另一个目的是提供用所述微生物或微生物混合物处理这些废液的方法以及提供用所述微生物或微生物混合物消除餐车设施或厨房等所产生的臭气的方法。根据本发明的微生物或微生物混合物、以及处理废液和其它目的的方法可以有效地消除废液中的甚至高浓度的废油、脂肪或有机废料等。而且消除这些废液的恶臭等的方法可以有效地消除烹调设施或厨房、卫生间、宠物污水设备等中的臭气。
当将根据本发明的微生物和微生物混合物培养于含有废油或脂肪等的培养基中时，它们可以减少废液中所含的废油或脂肪等的量，从而减少污染或臭气等的程度，并最后将其消除。
现在，将更详细地描述在本说明书中所使用的名词。然而在此要注意的是，在此所用的名词在任何方面都不应当被解释为限定于在下面描述中所用的特殊意义，它应当被理解为，它只被用于说明的目的以及解释的简洁性。而且在此要注意到在此所用的名词不排除名词本身所具有的通用含义。
名词“废液”和相关名词在此是一般性名词，是指含有烹调或特殊处置动物来源食品等或处理油脂加工等所生成的废油、脂肪或任何其它的油性或油脂性物质的液体。名词“油”和“脂肪”在此用于指脂肪酸、它们的甘油酯或含有同一种的或通过烹调或其它任何方法变性烹调油所生成的变性油的动物或植物来源的有机油性物质。因此要明白，当在本说明书中使用其中任何一个名词时，该名词也应当被解释为包括另一个名词的意义。名词“废油”和“含有油或脂肪的废液”在此用于指含有废油或脂肪等的废液等，以及相应地含有废油的排泄物或污水。名词“有机废料”在此用于指含有有机物质的废料，它包括或不限于从设施、厨房等所排出的废液。名词“同化”在此用于指清除废油、脂肪或有机废料等的行为，以及涉及分解或同化废液中所含的废油、脂肪或有机废料等的行为。另外，名词“设施”或“厨房”或相关名词在此用于指烹调设施、厨房或任何地方包括但不限于饭店、厨房、餐车、旅馆、烹调或饮食中心、超市、医院、食品加工厂、处置设备、动物饲养场所、私人家居等，在这些地方，家禽食品或油或脂肪等，或任何其它的油性或油脂性材料被烹调、处理、处置等，并且废液是因烹调、处理、处置等所形成。名词“污水”和“排泄物”在此用于指从设施或厨房等所排出的任何废液，如家居或家庭废液或工业废液等。此外，名词“臭气”或“恶臭”在此用于指从任何地方所生成的令人厌恶的气味，它给人一种不舒服的感觉，这些地方可以包括但不限于厨房、排水管、废物处置工厂、处理各种事务的房间和家居、动物包括宠物等等。
为了实现这个目的，在第一部分，本发明提供了同化废液中所含的油、脂肪或有机废料等的微生物，它们能分解废液中所含的废油、脂肪或有机废料等。在另一个部分，它提供了这些能分解其中所含的废油、脂肪或有机废料等的同化油或脂肪等的微生物的混合物。本发明进一步提供了通过使用能同化同样物质的微生物或微生物混合物处理废液的方法。仍在另外的部分，本发明提供了一种利用微生物或微生物混合物以及处置罐分解最多到占处置罐总体积的大约7％体积的废油、脂肪或有机废料等的方法。仍在本发明的另外部分，提供了一种利用微生物或微生物混合物以及油脂捕集器分解废液中所含的比上述从设施或厨房等排出的排泄物或污水中的水平更低浓度的废油、脂肪或有机废料等并将排泄物或污水按所设定的废排泄物的标准水平排放到排放管等的方法。此外，仍在另外的部分，本发明提供了消除设施或厨房所产生的臭气的消臭试剂以及消除臭气的方法。
更具体地，本发明还有的主要目的是提供一种同化废液中所含的油、脂肪或有机废料等的微生物，它属于鞘氨醇单胞菌属并包括能通过同化废液中所含的废油、脂肪或有机废料等而生长在这样的废液中的鞘氨醇单胞菌的菌株。在另一个方面，本发明的目的是提供一种同化油、脂肪或有机废料等的微生物，它属于能通过同化废液中所含的废油或脂肪等而生长废液中的诺卡氏菌属(genus Nocardia)。
在另一个部分，本发明的另一个目的是提供能同化废液中所含的油、脂肪或有机废料等的微生物的混合物，它属于能通过同化废油或脂肪等而生长在废液中的诺卡氏菌属，属于能通过同化废油或脂肪等而生长在废液中的鞘氨醇单胞菌属，和/或能通过同化废油或脂肪等而生长在废液中的微杆菌属(genus Microbacterium)，和/或能通过同化废油或脂肪等而生长在废液中的芽孢杆菌属。
在另外的部分，本发明的一个目的是提供一种处理废液的方法，它通过应用同化油、脂肪或有机废料等的微生物或能同化废液中所含的废油或脂肪等的微生物的混合物分解废液中所含的废油、脂肪或有机废料等。仍在另外的部分，本发明的目的是提供了一种适合用于处理废液的包括同化废液中所含的油、脂肪或有机废料等的微生物的微生物制剂，以及提供了通过应用相应的微生物制剂处理废液及消除恶臭的方法。
为了进一步地实现本发明的目的，在一个方面，提供了属于鞘氨醇单胞菌属并能通过同化废液例如废液中所含的油、脂肪或有机废料等而生长的特殊菌株。在另一个方面，本发明进一步提供了同化油或脂肪并属于能通过同化废液中所含的废油、脂肪或有机废料等而生长在废液中的诺卡氏菌属。此外，在另一个方面，本发明提供了同化油、脂肪或有机废料等的微生物菌株，它属于诺卡氏菌属并通过同化废油或脂肪等而生长在废液中。
仍在另一个方面，本发明提供了同化废液中所含的油、脂肪或有机废料等的微生物混合物，它包括属于诺卡氏菌属和鞘氨醇单胞菌属和/或微杆菌属和/或芽孢杆菌属的微生物，每一种微生物均能通过同化废液中所含的废油、脂肪或有机废料等而生长在废液中。此外，在优选的部分，本发明提供了一种微生物混合物，它包括属于每种能同化废油、脂肪或有机废料等并生长在含有此类物质的培养基中的菌属的菌株。
具体实施方案本发明包括同化油、脂肪等的新的微生物，它能分解废液中所含的废油、脂肪或有机废料等的，它属于鞘氨醇单胞菌属或诺卡氏菌属。另外，本发明包括一种同化其中所含的废油或脂肪或有机废料的微生物(属于诺卡氏菌属的微生物)以及至少一种同化油或脂肪等的微生物(属于鞘氨醇单胞菌属、微杆菌属和芽孢杆菌属)的微生物混合物。
根据本发明，新的同化油、脂肪或有机废料等的微生物是选自同化油或脂肪等的微生物的组，当将微生物连续地培养于废液肉汤培养基以扩增菌株的细胞，并在加入有含有废油、脂肪或有机废料等的废液的液体培养基中进一步培养所扩增的菌株细胞，它们能同化废液中所含的废油、脂肪或有机废料并在恶劣的环境下生长于这样的废液中。为了可以有效地选择从土壤标本中所分离得到的微生物，已经设计出选择培养基用于从土壤细菌中选择出微生物，它们能有效地分解废液中所含的油、脂肪或有机废料等。此外，经过广泛的参考和研究后，已经配制出选择培养基的成分，因此可以提供成分接近于厨房等排放的内容物的培养基制剂。通过设计应用鱼肉及猪肉的热水提取物(50g/L)且不含糖成分和其它成分的培养基已经制成这样的选择培养基。当掺有糖成分时，培养基容易被外来微生物所污染。如果培养基被外来微生物所污染，那么外来微生物将大量传播并导致不产生产有用的微生物。通过在室温及有氧条件下连续的长时间培养已经选择出一组具有有效地分解废油或脂肪等的稳定能力的微生物，其中过量的氧气已经被加入到培养基中。另外，令人惊讶的是，已经发现这些微生物的混和培养物具有消除来源于废油或脂肪等的臭气等的能力，所以可以制得包括微生物或微生物混合物的消臭制剂，它们能消除废液中所含的废油或脂肪等所产生的臭气等。
已经从混和培养物的各种微生物中分离得到根据本发明的同化油或脂肪的微生物，并根据“Bergey系统细菌学手册，第8版”分类。通过测定菌株的16SrDNA的部分碱基序列已经鉴定出菌株。因此，根据本发明的微生物被鉴定为相应地属于鞘氨醇单胞菌属和诺卡氏菌属的新菌株。换句话说，它们相应地被鉴定为鞘氨醇单胞菌2629-1b、鞘氨醇单胞菌2629-3b、和诺卡氏菌2629-2b。这些新菌株在2004年1月22日被保藏于独立行政法人产业技术综合研究所特许生物寄托中心(IPOD)中，并相应地被命名为鞘氨醇单胞菌2629-1b FERM P-19641(Sphingomonassp.2629-1b FERM P-19641)、鞘氨醇单胞菌2629-3b FERM P-19643(Sphingomonas sp.2629-3b FERM P-19643)、和诺卡氏菌2629-2b FERMP-19642(Nocardia sp.2629-2b FERM P-19642)。
根据本发明的同化废油、脂肪或有机废料等的微生物的混合物包括属于诺卡氏菌属的微生物的一或多种菌株与属于鞘氨醇单胞菌属的微生物和/或属于微杆菌属的微生物和/或属于芽孢杆菌属的微生物的一或多种菌株的混合物，每种菌株均能通过同化含有废油、脂肪或有机废料等的废液中所含的废油或脂肪而生长并生长于其中。
可以使用属于诺卡氏菌属的能同化废液中所含的废油或脂肪等的菌株，例如诺卡氏菌2629-2b FERM P-19642。另外，也可以使用除上述诺卡氏菌菌株外的属于诺卡氏菌属的其它菌株。
根据本发明，用作为微生物混合物的同化油或脂肪等的其它微生物可以包括属于鞘氨醇单胞菌属的菌株，包括但不限于鞘氨醇单胞菌2629-1b(FERM P-19641)、鞘氨醇单胞菌2629-3b(FERM P-19643)、以及鞘氨醇单胞菌SIID 440-2(FERM P-17975)。在现有技术中被描述了这些同化油或脂肪等的菌株(日本专利No.3,400,418)，以及被本发明者鉴定并保藏于上述的独立行政法人产业技术综合研究所特许生物寄托中心中(IPOD)。
另外，用作为本发明的微生物混合物的同化油或脂肪等的其它微生物可以包括属于微杆菌属的菌株，包括但不限于Microbacterium saperdaeSIID 440-1(FERM P-17974)和Microbacterium esteraromaticum SIID440-3(FERM P-17976)。这些菌株的每种都是在现有技术中被描述过的同化油或脂肪等的菌株(日本专利No.3,400,418)，以及被本发明者鉴定并保藏于上述的独立行政法人产业技术综合研究所特许生物寄托中心中(IPOD)。
此外，用作为本发明的微生物混合物的同化油或脂肪等的其它微生物可以包括属于芽孢杆菌属的菌株，包括但不限于蜡状芽孢杆菌SIID440-4(FERM P-17977)。这些菌株的每种都是在现有技术中被描述了的同化油或脂肪等的菌株(日本专利No.3,400,418)，以及被本发明者鉴定并保藏于上述的独立行政法人产业技术综合研究所特许生物寄托中心中(IPOD)。
根据应用的目的或方式的不同，本发明的同化油或脂肪等的微生物的混合物的混合比例可以不同，它们每种都可以按相同的比例混和或按比其它的菌株更大或更小的比例混和。同化油或脂肪的微生物的混合物可以具有很强的作用，因为它们有着极高的同化废液中所含的废油、脂肪或有机废料等的能力以及极佳的可重复性，并且它们是容易控制的。
作为本发明的一个方面，可以制得同化油或脂肪等的微生物的混合物，例如通过将设定的同化油或脂肪等的微生物以相同的量加入到培养混合物中，并在肉汤培养基(含有鱼肉及猪肉的热水提取物：50g/L)，15℃-20℃，通风换气的有氧条件下孵育所形成的混合物，通风换气方法是以每分钟每立方米60升的速度加入空气直到稳定期(7天)。在实际应用中，在过滤去除固体物质后，可以更好地部分性地使用培养混合物。
以下通过实施例更详细地描述本发明。
实施例1：在日本大分县大分市收集土壤标本，并从日本大分县大分市的排污管中收集污水。将一定量的各种标本加入到500升含有由培养混合物所构成的肉汤培养基的容器中，并用鱼肉及猪肉的热水提取物(50g/L)稀释。此后，在有氧条件下(通过以每分钟每立方米60升的速度加入空气来通风换气)，在15℃-20℃连续培养培养基2年，从而选择出具有所设定的特性且能同化油或脂肪等的微生物，并最后获得多种能有效地分解其中所含的废油或脂肪等的微生物的菌株。在这个实施例中，在实际的接近于油脂捕集器的原位条件的环境下进行孵育。
实施例2将由在实施例1中选择到的新微生物所构成的培养混合物稀释，并涂覆于营养琼脂培养基上，使得微生物生长于培养基上。然后从培养基中分离得到单个菌落，根据它们的微生物性能测定出三种类型的微生物并鉴定为菌株2629-1b、2629-2b和2629-3b。
从培养基中收集到这些菌株，并将它们以相同量混和得到培养混合物，发现相应微生物的三种菌株的培养混合物能有效地分解废油和脂肪等。根据在Bergey系统细菌学手册第8版中所述的实验方法研究这些菌株的细菌学性能。在表1中列出了菌株的细菌学性能。
表1
注：+：阳性；-：阴性通过分析它们的16SrDNA的部分碱基序列来分类和鉴定这些微生物。用PrepManTM方法(Applied Biosystems，美国)从这些菌株中提取到基因组DNA。通过PCR方法用所提取到的DNA扩增16SrDNA的5’末端的近500个碱基对区域。之后，测序和分析所扩增的碱基序列。用MicroSeqTM500 16SrDNA细菌测序试剂盒(Applied Biosystems，美国)进行PCR产物的纯化和循环测序。根据实验流程(P/N 4308132 Rev.A：Applied Biosystems，美国)进行从基因组DNA的提取到循环测序的过程中的操作。在这个实验流程中，所用的热循环器是GeneAmP PCR system9600(Applied Biosystems，美国)，以及所用的DNA测序仪是ABIPRISM377 DNA测序仪(Applied Biosystems，美国)。
利用所得到的16SrDNA的碱基序列研究同源性并建立分类树，对这些菌株的邻近种类以及它们所属的分类组别进行了回顾。相应地用MircroSeqTM微生物鉴定系统软件v1.4和MircroSeqTM500文库v.0023(Applied Biosystems，美国)研究同源性并建立分类树。通过分析，利用所得到的16SrDNA的碱基序列实现同源性研究，确定了十种具有前十个最高同源性比例的菌株。另外，通过应用具有最高同源性比例的十种菌株以及标本的16SrDNA，用邻近连接方法形成了分子分类树(Saitou和Nei，Mol.Biol.Evol.，19874：406-425)，对标本的邻近种类以及它所属的分类组别进行了回顾。此外，如果通过MicroSeqTM细菌500文库的搜索没有找到具有100％同源性的菌株，就用BLAST(Altschul等，NucleicAcids Res.199725：3389-3402)根据DNA碱基序列数据库搜索同源性。
实施例3：对菌株2629-1b的16SrDNA的部分碱基序列(SEQ ID#1)的测定从MicroSeqTM分析的结果发现菌株2629-1b的16SrDNA的部分碱基序列提示与粘连鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas adhaesiva)(Int.J.Syst.Bacteriol.199040：320-321)具有最高的同源性为97.66％。也说明菌株2629-1b的16SrDNA是包含于鞘氨醇单胞菌的16SrDNA所形成的群簇中，并且它与Sphingomonas echinoids(Dinner等，Int.J.Syst.Bacteriol.1962 49：1103-1109)的16SrDNA形成了一个群簇。另外，用BLAST对GenBank/EMBL/DDBJ的同源性搜索结果发现菌株2629-1b的16SrDNA与菌株(未被培养的细菌，编号为No.AF443570)的16SrDNA具有最高的同源性为98.1％。此外，发现菌株2629-1b的16SrDNA与Sphingomonaskoreensis JSS-26(标准菌株)(Lee等，200151：1491-1498)的16SrDNA具有99.1％的同源性。上述结果说明菌株2629-1b属于与Sphingomonaskoreensis的标准菌株接近的种类，但是它不完全等同于它的标准菌株。因此，菌株2629-1b被确定为鞘氨醇单胞菌。
另外，将鞘氨醇单胞菌2629-1b(FERM P-19641)的16SrDNA的部分碱基序列与鞘氨醇单胞菌SIID 440-2(FERM P-17975)的进行比较，这是一种如日本专利No.3,400,418所阐述的属于同一鞘氨醇单胞菌属的菌株。因此，发现菌株鞘氨醇单胞菌2629-1b(FERM P-19641)不同于菌株鞘氨醇单胞菌SIID 440-2(FERM P-17975)。
此外，从菌株鞘氨醇单胞菌2629-1b的16SrDNA的碱基序列的性能及分析中可以发现菌株鞘氨醇单胞菌2629-1b(FERM P-19641)不同于荚膜鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas capsulate)(日本专利申请出版物No.2003-250,527)和少动鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas paucimobilis)(日本专利申请出版物No.11-46,756)。已知荚膜鞘氨醇单胞菌能分解有害物质聚乙烯醇以及少动鞘氨醇单胞菌能分解含有石油产品的污染物。此外，对16SrDNA的碱基序列的分析表明菌株鞘氨醇单胞菌2629-1b(FERMP-19641)不同于任何一种已知的鞘氨醇单胞菌菌株。
另外，与菌株鞘氨醇单胞菌2629-1b(FERM P-19641)一样，菌株鞘氨醇单胞菌2629-3b(FERM P-19643)同样不同于任何一种已知的鞘氨醇单胞菌菌株。
实施例4：对菌株2629-2b的16SrDNA的部分碱基序列(SEQ ID#2)的测定从MicroSeqTM分析的结果发现菌株2629-2b的16SrDNA的部分碱基序列提示与星状诺卡氏菌(Nocardia asteroiddes)(Int.J.Syst.Bacteriol.1980 30：225-420)具有最高的同源性为99.2％。在分子分类树中也发现菌株2629-2b的16SrDNA与星状诺卡氏菌的16SrDNA形成了一个群簇。另外，从用BLAST对GenBank/EMBL/DDBJ的同源性搜索的结果发现菌株2629-2b的16SrDNA与标准菌株(星状诺卡氏菌ATCC 19247和DSM43757)的16SrDNA具有最高的同源性为99.4％。从上述结果可以推断菌株2629-2b是一种属于诺卡氏菌属的菌种并被鉴定为诺卡氏菌2629-2b。
实施例5：对菌株2629-3b的16SrDNA的部分碱基序列(SEQ ID#3)的测定从MicroSeqTM分析的结果发现菌株2629-3b的16SrDNA的部分碱基序列提示与Sphingomonas macrogoltabidus(Int.J.Syst.Bacteriol.1993 43：864-865)具有最高的同源性为99.58％。在分子分类树中也发现菌株2629-3b的16SrDNA与Sphingomonas macrogoltabidus的16SrDNA形成了一个群簇。另外，从用BLAST对GenBank/EMBL/DDBJ的同源性搜索的结果发现菌株2629-3b的16SrDNA与Sphingomonas chilensis S37菌株的16SrDNA具有最高同源性为99.4％。此外，发现菌株2629-3b的16SrDNA与标准菌株(Sphingomonas macrogoltabidus IFO 15033)的16SrDNA的同源性为99.1％。从上述结果可以推断菌株2629-3b为鞘氨醇单胞菌。
另外，将鞘氨醇单胞菌2629-3b(FERM P-19643)的16SrDNA的部分碱基序列与鞘氨醇单胞菌SIID 440-2(FERM P-17975)的进行比较，这是一种如日本专利No.3,400,418所阐述的属于同一属鞘氨醇单胞菌属的菌株。结果发现菌株鞘氨醇单胞菌2629-3b(FERM P-19643)不同于菌株鞘氨醇单胞菌SIID 440-2(FERM P-17975)。
实施例6：为了研究菌株鞘氨醇单胞菌2629-1b(FERM P-19641)、诺卡氏菌2629-2b(FERM P-19642)以及鞘氨醇单胞菌2629-3b(FERM P-19643)的混合物分解废油或脂肪等的能力，将这些菌株分别在肉汤培养基(含有鱼肉和猪肉的热水提取物：500g/L)中进行扩增到稳定期，然后测定每种培养混合物的BOD(生物需氧量)值以及正己烷提取物的量。然后将每种培养混合物(500ml)加入到油脂捕集器中，并在加入24小时时测定BOD值以及正己烷提取物的量。根据JIS(日本工业标准)KO102-21测定BOD值，以及根据JIS KO102-243测定正己烷提取物的量。从测定中发现，在每种情况中，与没有添加菌株培养混合物的情况比较，所加入的各种菌株培养混合物将BOD值和正己烷提取物的量减少到0.1％或更低。
将等量的七种菌株，即鞘氨醇单胞菌2629-1b(FERM P-19641)、鞘氨醇单胞菌2629-3b(FERM P-19643)、鞘氨醇单胞菌SIID 440-2(FERMP-17975)、诺卡氏菌2629-2b(FERM P-19642)、Microbacterium saperdaeSIID 440-1(FERM P-17974)、Microbacterium esteraromaticum SIID 440-3(FERM P-17976)和蜡状芽孢杆菌SIID 440-4(FERM P-17977)分别加入到肉汤培养基中(含有鱼肉和猪肉的热水提取物：500g/L)中并在15℃-20℃，通风换气(以每立方米每分钟60升的速度供应空气)所形成的有氧条件下孵育培养基7天直到稳定期。从结果中发现，与未加入菌株培养混合物的情况比较，所加入的七种不同类型的菌株都将BOD值和正己烷提取物减少到0.1％或更低。
实施例7：通过将本发明的同化废油和油脂等的微生物的混合物加入到饭店所装备的油脂捕集器中，进行了一个分解饭店(平均每日餐饮的供应能力为近500份)厨房的排放管中的废油、脂肪或有机废料的试验。
在这个试验中所用的油脂捕集器是常用捕集器，它是分成三个部分的处置容器。每个部分的容积为1-1.5立方米，并具有与泵相连的弥散喷嘴。在容器的第一个部分，以每立方米每分钟60升的速度通风换气的方法孵育上述微生物的培养混合物。在第二个部分，为了分解和同化所剩余的废油和脂肪等，将培养混合物从第一部分转移到第二部分，并按与第一部分相同的方法连续孵育。第三个部分是备用部分，在每日工作完成后，将培养混合物(100ppm-1,000ppm：50ml)与水池中的水一起混合并加入到油脂捕集器中。油脂捕集器上装配有自动装置，使得可以在恒定的时间把恒定量的培养混合物加入到罗网中。
然后在用微生物处理的前后，测定油脂捕集器排出物的BOD值以及正己烷提取物的量。根据JIS KO102-21测定BOD值，以及根据JISKO102-243测定正己烷提取物的量。
下面的表2显示了在十五个不同的设施中以同样方法进行的试验的其中一个试验中所得到的结果。发现在这些试验中得到了相似的结果。在试验中，在油脂捕集器中扩增目标菌株，因为环境条件的原因例如营养条件等，以极为不同的比例混合菌株，随后用大量的排出物稀释并每天加入培养混合物。
表2：
根据培养混合物中所含有的油、脂肪或有机废料等的种类和/或量，所加入的含有同化油或脂肪等的微生物的培养混合物的量优选的是不同的，特别是当培养混合物被加入到组合的污水容器、工业处置工厂、污水处置工厂等时。
实施例8：含有微生物混合物的培养混合物的制备(消臭微生物制剂)以等量(1-4×106个细胞/ml)混合三种的菌株，即鞘氨醇单胞菌2629-1b(FERM P-19641)、鞘氨醇单胞菌2629-3b(FERM P-19643)以及诺卡氏菌2629-2b(FERM P-19642)，并加入到肉汤培养基(含有鱼肉和猪肉的热水提取物：500g/L)中，在25℃，以每立方米每分钟60升的速度通风换气下孵育7天。然后过滤所得到的培养基以生成含有微生物混合物的培养混合物，并用作为消臭微生物制剂。
实施例9：消除臭气的实验经日本大分县的两个地点的厨房所装配的油脂捕集器，在用所生成的微生物混合物处理的前后，按与实施例7中基本相同的方法进行甲基硫醇、三甲胺、氨和硫化氢浓度的测定，所有的物质都是造成臭气的物质。测定发现在治疗后这些物质都被减低到低于每个地点的测定界限。
实施例10：感觉测试在上述的如实施例9存在大量上述物质的情况中，证实造成臭气的上述物质可以被分解。在另一方面，非常少量的造成臭气的化合物可以成为产生臭气的源头的大问题，用上述的检测设备很难检测出这么少量的目标化合物。因此，在许多情况中，检测常常依赖于人的感觉，因此在本实施例中，通过感觉测试测定出消臭效果。用下面描述的6种分级评价检测臭气的感觉测试的结果：S0：没有感觉到气味；S1：感觉到非常弱的气味；S2：弱的气味，但感觉到特殊气味；S3：清晰地感觉到气味；S4：感觉到强烈的气味；S5：感觉到非常强烈的气味。
为了证实在实施例8中所得到的消臭微生物制剂的消臭效果，10个健康志愿者进行了上述的感觉测试。测试结果显示于下面的表3中。
表3：感觉测试的结果
在上述表3中所示的感觉测试的结果表明当使用包括本发明的微生物的混合物的消臭剂时，臭气的完全清除已经被证实。
在此也要注意，尽管三种微生物(鞘氨醇单胞菌2629-1b(FERMP-19641)、鞘氨醇单胞菌2629-3b(FERM P-19643)以及诺卡氏菌2629-2b(FERM P-19642))的每一种微生物都有消臭的作用，但是含有三种微生物的混合物的培养液具有最强的消除臭气的作用。
可以用基本相同的方法对在日本大分县、福岗县、熊本县、长崎县、广岛县、冈山县、东京县的超过100个地点的宠物(例如狗和猫)、卫生间、厨房、油脂捕集器、污水处置容器、家禽和牲畜饲养设施等进行含有本发明的微生物混合物的培养液的感觉测试。结果发现在这些设施中所产生的臭气被消除到满意的程度。
工业应用根据本发明，同化废液中所含的油、脂肪或有机废料的微生物可以分解废液中所含的废油、脂肪或有机废料并减低BOD值和正己烷提取物的量。微生物包括鞘氨醇单胞菌2629-1b(FERM P-19641)、鞘氨醇单胞菌2629-3b(FERM P-19643)以及诺卡氏菌2629-2b(FERM P-19642)或属于诺卡氏菌属并能通过同化废油、脂肪或有机废料等而生长的微生物以及属于鞘氨醇单胞菌属和/或微杆菌属和/或芽孢杆菌属的微生物的混合物，每种微生物均能通过同化特别是从家居或工业厨房等所排放的废液中所含的废油、脂肪或有机废料等而生长。
序列表<110>环微研株式会社<120>同化油或脂肪等的微生物和用其处理废液和消臭的方法<130>KBK002<160>3<170>PatentIn version 3.1<210>1<211>471<212>DNA<213>Sphingomonas sp.2629-1b<400>1tggagagttt gatcctggct cagaatgaac gctggcggca tgcctaacac atgcaagtcg     60aacgaaggct tcggccttag tggcgcacgg gtgcgtaacg cgtgggaatc tgcccttggg    120ttcggaataa cagttagaaa tgactgctaa taccggatga tgtcgtaaga ccaaagattt    180atcgcccaag gatgagcccg cgtaggatta gctagttggc ggggtaaagg cccaccaagg    240cgacgatcct tagctggtct gagaggatga tcagccacac tgggactgag acacggccca    300gactcctacg ggaggcagca gtggggaata ttggacaatg ggcgaaagcc tgatccagca    360atgccgcgtg agtgatgaag gccttagggt tgtaaagctc ttttacccgg gatgataatg    420acagtaccgg gagaataagc tccggctaac ttcgtgccag cagccgcggt a             471<210>2<211>500<212>DNA<213>Nocardia sp.2629-2b<400>2tggagagttt gatcctggct caggacgaac gctggcggcg tgcttaacac atgcaagtcg     60agcggtaagg cccttcgggg tacacgagcg gcgaacgggt gagtaacacg tgggtgatct    120gcctcgtact tcgggataag cctgggaaac tgggtctaat accggatatg accttcggmt    180gcatgtcygw gggtggaaag atttatcggt acgagatggg cccgcggcct atcagcttgt    240tggtggggta atggcctacc aaggcgacga cgggtagccg gcctgagagg gcgaccggcc    300acactgggac tgagacacgg cccagactcc tacgggaggc agcagtgggg aatattgcac    360aatgggcgaa agcctgatgc agcgacgccg cgtgagggat gacggccttc gggttgtaaa    420cctctttcga cagggacgaa gcgcaagtga cggtacctgt agaagaagca ccggccaact    480acgtgccagc agccgcggta                                                500<210>3<211>471<212>DNA<213>Sphingomonas sp.2629-3b
<400>3tggagagttt gatcctggct cagaacgaac gctggcggca tgcctaacac atgcaagtcg     60aacgaagtct tcggacttag tggcgcacgg gtgcgtaacg cgtgggaatc tgcccttggg    120tacggaataa ctcagagaaa tttgtgctaa taccgtataa tgtcttcgga ccaaagattt    180atcgcccaag gatgagcccg cgtaagatta gctagttggt ggggtaaaag cctaccaagg    240cgacgatctt tagctggtct gagaggatga tcagccacac tgggactgag acacggccca    300gactcctacg ggaggcagca gtggggaata ttggacaatg ggcgaaagcc tgatccagca    360atgccgcgtg agtgatgaag gccctagggt tgtaaagctc ttttacccgg gatgataatg    420acagtaccgg gagaataagc tccggctaac tccgtgccag cagccgcggt a             471