羧甲基化粒毛盘菌胞外多糖及其作为降血糖药物的用途 |
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| 申请号 | CN201611132270.3 | 申请日 | 2016-12-09 | 公开(公告)号 | CN106832026A | 公开(公告)日 | 2017-06-13 |
| 申请人 | 合肥工业大学; | 发明人 | 叶明; 王玉芬; 候国华; 李井雷; 杨柳; | ||||
| 摘要 | 本 发明 公开了一种由菌种保藏编号为CCTCC M 2016603的粒毛盘菌YM216胞外多糖改性而成的羧甲基化粒毛盘菌胞外多糖及其作为制备降血糖活性药物的应用。药效学证明，羧甲基化粒毛盘菌胞外多糖可以显着改善高脂 饲料 和链脲佐菌素诱导的II型糖尿病小鼠的糖耐量和体重，以及降低 糖化 血红蛋白、空腹血糖 水 平和血清胰岛素水平，具有良好的降血糖功能；此外，羧甲基化粒毛盘菌胞外多糖可以上调 葡萄糖 激酶和 磷酸 腺苷活化蛋白激酶的表达，而下调6‑磷酸酶的表达。采用本发明方法可以提高原粒毛盘菌胞外多糖的降血糖活性，且无毒 副作用 ，对于扩展多糖的应用范围具有积极意义。 | ||||||
| 权利要求 | 1.一种由菌种保藏编号为CCTCC M 2016603的粒毛盘菌YM216胞外多糖改性而成的羧甲基化粒毛盘菌胞外多糖，其特征在于：是将菌种保藏编号为CCTCC M 2016603的粒毛盘菌YM216发酵液浓缩后，用体积百分浓度为95％的3-4倍体积的乙醇沉淀24-48h，以沉淀物4-6倍体积的蒸馏水复溶沉淀得到粗多糖水溶液，向粗多糖水溶液加入1/10-1/8体积的质量百分浓度为30％的双氧水，50-55℃恒温至溶液无色，采用赛沃杰法向上述脱色的粗多糖水溶液中加1/4-1/2体积的按氯仿—正丁醇体积比为5:1的混合溶液脱蛋白，100-180r·min-1震荡20-30min后，静置至溶液分层后，取上层多糖溶液，重复上述步骤多次直至静置后可分为两层清澈的溶液；将上述经脱色脱蛋白的多糖溶液装入截留分子量为14000Da的透析袋先用自来水透析48h，再以蒸馏水透析24h，浓缩后于-50℃冷冻干燥24h得到粗多糖；再将粗多糖通过DEAE-52纤维素色谱柱和G-100葡聚糖凝胶柱进行分离纯化得到均一的胞外多糖；最后通过氯乙酸对粒毛盘菌胞外多糖进行羧甲基化修饰改性制备获得羧甲基化粒毛盘菌胞外多糖，如下按：将300mg粒毛盘菌胞外多糖与10-15mL异丙醇混合，然后加入4-6mL质量百分浓度为20％的NaOH水溶液，在室温下搅拌3-4h后，在搅拌下加入由1-4g氯乙酸、4-6mL |
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| 说明书全文 | 羧甲基化粒毛盘菌胞外多糖及其作为降血糖药物的用途技术领域[0001] 本发明属于羧甲基化粒毛盘菌胞外多糖在药物制备中的应用技术领域，具体涉及羧甲基化粒毛盘菌胞外多糖及其作为降血糖药物的用途。 背景技术[0002] 多糖广泛存在于高等植物、藻类、菌类及动物体内，是自然界含量最丰富的生物聚合物之一。糖尿病是由胰岛素分泌相对或绝对不足或胰岛素作用缺陷引起糖、蛋白质、脂肪、水和电解质等一系列代谢紊乱。糖尿病的治疗方法通常包括运动、饮食、口服降糖药和胰岛素治疗。化学药物包括磺酰脲类、双胍类、噻唑烷二酮、α-糖苷酶抑制剂等，然而这些化学药物都有副作用，对患者的健康造成损害。近年来，既能治疗糖尿病又无毒副作用的多糖备受关注，国内外对具有降糖作用的多糖的理化性质和药理研究进展迅速，据《食品科技》(2010年第3期82-84页)显示青钱柳多糖高、中、低剂量组与模型组血糖值有极显著性差异，可以显著提高糖尿病小鼠的糖耐量，说明青钱柳中多糖成分是降血糖的功能因子之一。多糖在新治疗剂的发展中发挥了重要作用，因为它具有比合成药物较小的毒副作用。许多研究表明，植物和真菌多糖可以有效地治疗糖尿病或高血脂。 [0003] 化学修饰是提高多糖活性的一种有效方法。中国专利号ZL201310258083.X《粒毛盘菌胞外多糖磷酸化衍生物及其在制备抗肿瘤药物中的应用》公开了菌种保藏编号为CCTCCNo:M2011196的粒毛盘菌所产胞外多糖制备磷酸化衍生物，并以上述胞外多糖磷酸化衍生物为原料作为制备抗肿瘤药物的应用，结果表明磷酸化衍生物的抗肿瘤活性比原来的胞外多糖显著。《食品和化学毒物学》(Food and Chemical Toxicology,2013,62,285–291)曾报道硒化多糖具有显著的抗氧化和降血脂活性，并保护由糖尿病诱发的胰腺、肝脏、肾脏损伤。据《生物大分子》(International Journal of Biological Macromolecules,2015,72,157–165)报道银耳多糖和其羧甲基化衍生物均具有抗氧化活性，且羧甲基化的衍生物比原始多糖表现出更强的抗氧化活性和保湿保活动，这表明化学修饰可以显著增强多糖的生物活性，获得有治疗性能的新药理学试剂。羧甲基化修饰可用作来改善一些多糖的生物活性，以获得更有效的不同的生理功能的多糖衍生物。本发明人课题组于2016年10月31日保藏了位于武汉市武昌珞珈山武汉大学生命科学学院的中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)的一种菌种保藏编号为CCTCC M 2016603的粒毛盘菌属YM216(Lachnum sp.YM216)。 目前尚未有公开文献提及将菌种保藏编号为CCTCC M 2016603的粒毛盘菌YM216(本发明人课题组自定编号代码)胞外多糖采取羧甲基化修饰以改性为羧甲基化多糖，以及将其作为制备降血糖药物的应用方面的报道。 发明内容[0004] 本发明的目的是提供一种由菌种保藏编号为CCTCC M 2016603的粒毛盘菌YM216(Lachnum sp.YM216)胞外多糖改性而成的羧甲基化粒毛盘菌胞外多糖及其作为制备降血糖活性药物的应用。 [0005] 本发明的羧甲基化粒毛盘菌胞外多糖，其特征在于：是将菌种保藏编号为CCTCC M 2016603的粒毛盘菌YM216发酵液浓缩后，用体积百分浓度为95％的3-4倍体积的乙醇沉淀 24-48h，以沉淀物4-6倍体积的蒸馏水复溶沉淀得到粗多糖水溶液，向粗多糖水溶液加入1/ 10-1/8体积的质量百分浓度为30％的双氧水，50-55℃恒温至溶液无色，采用赛沃杰法(Sevage法)即向上述脱色的粗多糖水溶液中加1/4-1/2体积的按氯仿—正丁醇体积比为5: 1的混合溶液脱蛋白，100-180r·min-1震荡20-30min后，静置至溶液分层后，取上层多糖溶液，重复上述步骤多次直至静置后可分为两层清澈的溶液；将上述经脱色脱蛋白的多糖溶液装入截留分子量为14000Da的透析袋先用自来水透析48h，再以蒸馏水透析24h，浓缩后于-50℃冷冻干燥24h得到粗多糖；再将粗多糖通过DEAE-52纤维素色谱柱和G-100葡聚糖凝胶柱进行分离纯化得到均一的胞外多糖；最后通过氯乙酸对粒毛盘菌胞外多糖进行羧甲基化修饰改性制备获得羧甲基化粒毛盘菌胞外多糖，如下按：将300mg粒毛盘菌胞外多糖与 10-15mL异丙醇混合，然后加入4-6mL质量百分浓度为20％的NaOH水溶液，在室温下搅拌3- 4h后，在搅拌下加入由1-4g氯乙酸、4-6mL 20％的NaOH水溶液和10-15mL异丙醇组成的羧甲基化剂，50-60℃恒温反应3-6h，用0.5M HCl将混合液调节至中性，然后加入4-5倍体积的无水乙醇，醇沉24-48h并离心获得醇沉多糖；将醇沉多糖经冷冻干燥后复溶于40-60℃水中，再于截留分子量为14000Da透析袋中先用自来水逆向流动透析24-48h，再用蒸馏水透析24- 48h，收集透析袋内保留液并旋转蒸发浓缩，冷冻干燥后所得到的含-CH2COOH基团的羧甲基化粒毛盘菌胞外多糖。 [0006] 本发明的羧甲基化粒毛盘菌胞外多糖作为降血糖药物的用途，其特征在于：将菌种保藏编号为CCTCC M 2016603的粒毛盘菌YM216所产胞外多糖改性而成的羧甲基化粒毛盘菌胞外多糖作为制备降血糖活性药物，通过对链脲佐菌素(STZ)和高脂饲料诱导的II型糖尿病小鼠的药理实验，确立羧甲基化粒毛盘菌胞外多糖的降血糖作用；从而按药剂学的常规制备方法，将有效量的该羧甲基化粒毛盘菌胞外多糖与药用辅料混合加工制备成口服片剂或胶囊服用。 [0007] 药效学证明，羧甲基化粒毛盘菌胞外多糖可以显着改善高脂饲料和链脲佐菌素诱导的II型糖尿病小鼠的糖耐量和体重，以及降低糖化血红蛋白、空腹血糖水平和血清胰岛素水平，具有良好的降血糖功能；此外，羧甲基化粒毛盘菌胞外多糖可以上调葡萄糖激酶和磷酸腺苷活化蛋白激酶的表达，而下调6-磷酸酶的表达。采用本发明方法可以提高原粒毛盘菌胞外多糖的降血糖活性，且无毒副作用，对于扩展多糖的应用范围具有积极意义。本发明方法简单经济，可将该羧甲基化粒毛盘菌胞外多糖应用于制备片剂或胶囊剂型的降血糖药物。附图说明 [0008] 图1为羧甲基化修饰改性前的粒毛盘菌胞外多糖(LEP)的红外光谱图； [0009] 图2为羧甲基化粒毛盘菌胞外多糖(CLEP)的红外光谱图； [0010] 图3为小鼠胰腺组织病理学检查照片(400×)。 具体实施方式[0011] 实施例1： [0012] (一)粒毛盘菌胞外多糖(LEP)的制备 [0013] 将菌种保藏编号为CCTCC M 2016603的粒毛盘菌YM216接种于100L发酵罐，装料系数体积比为0.7，接种量为5％(v/v)，培养温度为26℃，通气量为1.0L/min，搅拌转速为180r/min，发酵时间为10d，培养基配方为：无水葡萄糖30g·L-1，酵母膏5g·L-1，MgSO4· 7H2O 1g·L-1，KH2PO41g·L-1，VB150mg·L-1，自然pH，将发酵液抽滤，收集发酵液，60℃低压旋转蒸发浓缩，加入4倍体积的体积百分浓度为95％乙醇醇沉24h，4500r·min-1离心8min，倾去上清液，以沉淀物5倍体积的蒸馏水复溶沉淀即得粗多糖水溶液，向得到的粗多糖水溶液加入1/10体积的质量百分浓度为30％的双氧水，50℃恒温至溶液无色，采用赛沃杰法(Sevage法)脱蛋白，即向粗多糖水溶液中加入1/3体积的体积比为5:1氯仿—正丁醇混合溶液，150r·min-1震荡20min后，静置至溶液分层后，取上层多糖溶液，重复上述步骤多次直至静置后可分为两层清澈的溶液；将多糖溶液装入截留分子量为14000Da的透析袋用自来水透析48h，蒸馏水透析24h，浓缩后于-50℃冷冻干燥24h。将此多糖用双蒸水配成30.0mg·mL-1的溶液，进DEAE52-纤维素色谱柱，分别以0、0.3、0.5M NaCl洗脱，洗脱流速为0.5mL·min-1，采用硫酸苯酚法，以490nm处的吸光值表示测定每管洗脱液中的多糖含量。分别收集相应洗脱液流出组分后用自来水、蒸馏水各透析24h，浓缩，冻干；用双蒸水将上述多糖组分-1 干粉配制成15mg·mL 的多糖溶液，进G-100葡聚糖凝胶柱，用双蒸水洗脱，洗脱流速为 0.5mL·min-1，并收集分级分离后的主要组分，透析24h，浓缩、冻干后得到的粒毛盘菌胞外多糖，简称命名为LEP。 [0014] (二)羧甲基化粒毛盘菌多糖(CLEP)的制备及结构验证 [0015] (1)羧甲基化粒毛盘菌多糖(CLEP)的制备 [0016] 将300mg LEP与12.5mL异丙醇混合，并且在室温下将混合物150r·min-1搅拌15min，然后慢慢滴入5mL质量百分浓度为20％的NaOH水溶液，在室温下搅拌3h后，在搅拌下加入由2.63g氯乙酸、5mL质量百分浓度为20％的NaOH溶液和12.5mL异丙醇组成的羧甲基化剂。在60℃下继续反应4h，冷却至室温后，用0.5M HCl调节溶液的pH值至7，浓缩至50mL，加入4倍体积百分浓度为95％乙醇醇沉并收集沉淀，依次用无水乙醇、丙酮洗涤两次，将醇沉多糖经冷冻干燥后复溶于50℃水中，再于截留分子量为14000Da透析袋将产物用自来水逆向流动透析48h，蒸馏水透析24h，收集透析袋内保留液并旋转蒸发浓缩，-50℃冷冻干燥得多糖羧甲基化衍生物CLEP。 [0017] (2)羧甲基化粒毛盘菌多糖(CLEP)的结构验证 [0018] CLEP取代度的测定：精确称取0.05g CLEP溶于20mL 0.1M标准HCl溶液中，置搅拌器上使其完全溶解，用0.1M标准NaOH溶液滴定，分别记下pH 2.1和pH 4.3时所消耗的NaOH溶液体积V1、V2，CLEP的取代度计算如下： [0019] [0020] [0021] 其中， m为样品质量/(g)；c为NaOH标准溶液的浓度/(M)；DS为CLEP的羧甲基化取代度。 [0022] 经上述测试可知本实施例所得羧甲基化粒毛盘菌胞外多糖CLEP的羧甲基化取代度(DS)为0.36。 [0023] 红外光谱测定：分别取上述改性前的粒毛盘菌胞外多糖LEP与羧甲基化粒毛盘菌胞外多糖CLEP 5mg，以多糖的质量(mg)与KBr的质量(mg)比为1︰30，将LEP或CLEP与KBr混合均匀，研磨后压片，采用傅里叶变换红外光谱仪(Nexus 670)进行IR光谱分析，扫描范围是4000-400cm-1。 [0024] 图1为改性前的粒毛盘菌胞外多糖(LEP)的红外光谱图；图2为羧甲基化粒毛盘菌胞外多糖(CLEP)的红外光谱图。对比分析这两个红外光谱图的结果表明，改性前后的粒毛盘菌胞外多糖均具有粒毛盘菌多糖的特征吸收峰，由图1所示，LEP的红外光谱中3400cm-1处的吸收峰是O-H伸缩振动引起的，表明存在分子间和分子内氢键。2930cm-1处的吸收峰是C-H伸缩振动引起的，表明有-CH2-存在。1650cm-1处出现的吸收峰为结合水所产生的H-O-H弯曲-1 -1振动峰，1410cm 处出现的吸收峰为C-O伸缩振动峰，1060cm 处的吸收峰是C-O-C不对称伸缩振动引起的。由图2所示，羧甲基化改性后，多糖的特征峰发生了一定程度的变化， 2930cm-1处的C-H伸缩振动峰明显减弱，1650cm-1和1410cm-1处的吸收峰都消失了。在 1600cm-1、1420cm-1和1330cm-1处观察到新的吸收峰，分别为羰基中的C＝O不对称伸缩振动、C-O伸缩振动和亚甲基振动，表明LEP羧甲基化修饰成功。 [0025] (三)羧甲基化粒毛盘菌胞外多糖CLEP的降血糖作用药理实验 [0026] 动物：昆明小鼠100只，体重20±2g。 [0027] 生长环境：温度23±2℃，湿度55±5％，12h的光照和12h的黑暗交替饲养。 [0028] 试剂盒：糖化血红蛋白(HbA1c)和肝糖原，为南京建成科技有限公司产品。血清胰岛素水平(FINS)，葡萄糖激酶(GK)，磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)，葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)，氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR-γ)，葡萄糖的表达6-磷酸酶(G6P)，为上海工业延生股份有限公司产品。 [0029] 阳性药物：1，1-二甲双胍盐酸盐，为北京四环制药有限公司产品。 [0030] 建模药物：链脲佐菌素(STZ),为美国Sigma公司产品。 [0031] 空腹血糖水平(FBG)：血糖仪，为三诺(SANNUO)公司产品。 [0032] 方法：100只昆明小鼠进行自由饮水和饮食，适应性喂养7天。取10只喂普通饲料作为正常对照组，其余90只喂高脂肪饲料(HFD)建立II型糖尿病模型。高脂肪饲料喂养后的第20天、第27天和第34天将喂高脂饲料的小鼠禁食12小时后腹腔注射30mg/Kg STZ(0.1M的柠檬酸钠和0.1M柠檬酸，pH值4.2-4.5)三次。HFD喂养且空腹血糖水平高于7.8mM小鼠被认为是成功诱导的II型糖尿病小鼠，在整个实验期间并继续喂高脂饲料。II型糖尿病小鼠被分为6组，一组为阴性组和一组阳性组，其他4组分别口服剂量为200和50mg/Kg的LEP和CLEP。 整个实验的小鼠分组(n＝8)如下：正常对照组(10mL/Kg生理盐水)；模型组(10mL/Kg生理盐水)；阳性组(100mg/Kg二甲双胍)；LEP高剂量组(200mg/Kg)；LEP低剂量组(50mg/Kg)；CLEP高剂量组(200mg/Kg)；CLEP低剂量组(50mg/Kg)。连续给药4周，每周测定一次血糖值(空腹 12h后)和体重。 [0033] 口服葡萄糖耐受性试验：治疗4周后，糖尿病小鼠禁食12h，然后口服葡萄糖给药(2.0g/Kg b.w.)。在给药0、30、60、120和180min后通过由小鼠的尾部获得的血液滴葡萄糖分别测得血糖值。 [0034] 灌胃结束后，摘眼球取血，4℃、3000r·min-1离心5min取血清，脱颈椎处死，收集胰腺和肝脏。全胰腺置10％福尔马林溶液中固定，O.C.T.包埋剂包埋、切片，苏木精和伊红染色，光学显微镜下观察拍照。血清胰岛素(FINS)采用酶联免疫(ELISA)试剂盒测定。将肝组织样品按重量(g)：体积(mL)＝1：10的比例均浆。在3000r·min-1，4℃离心10min，然后保存于-70℃直到分析。收集上清液，并立即进行分析。肝糖原含量采用试剂盒检测，GK，G6P和AMPK含量用ELISA法检测试剂盒检测。 [0035] (四)结果 [0036] (1)LEP及CLEP对FBG水平和体重的影响 [0037] 相对于正常组小鼠(表1)，模型组和治疗组的小鼠的FBG水平显著升高。与模型组相比，LEP，CLEP灌胃4周后，糖尿病小鼠的FBG水平显著降低(P<0.05或P<0.01)。与初始情况相比，LEP，CLEP高剂量组FBG水平分别降低10.42％和28.24％，低剂量组分别降低7.87％和19.79％。然而与正常组相比，低剂量和高剂量的LEP和CLEP组FBG水平显著升高(P<0.05或P<0.01)。因此CLEP对HFD和STZ诱导的糖尿病小鼠的FBG水平具有更积极的效果，且高剂量治疗具有最大的降血糖作用。给药后STZ诱导的糖尿病小鼠的体重受到影响，比正常小鼠的低。二甲双胍，LEP和CLEP治疗后，与初始体重相比，模型组的体重略微增加(P<0.05或P< 0.01)。因此LEP和CLEP可以剂量依赖性改善小鼠体重损失，但效果不如二甲双胍显著。 [0038] 表1 LEP和CLEP对小鼠空腹血糖值和体重的影响 [0039] [0040] 注：与正常组相比，*P<0.05，**P<0.01。 [0041] (2)LEP及CLEP对口服葡萄糖耐量试验(OGTT)的影响 [0042] 如表2所示葡萄糖耐量试验期间血糖水平的变化。在口服葡萄糖后，各组的血糖水平在30min时增加到最大值，然后逐渐下降。与正常组小鼠相比，模型组小鼠表现为口服葡萄糖后显著的高血糖反应。在各时间点，治疗组的血糖水平显著低于模型组(P<0.01或P<0.05)，这表明LEP和CLEP剂量依赖性并显著提高小鼠的葡萄糖耐量。治疗组中，高剂量比低剂量的小鼠具有更有效的葡萄糖耐受性。 [0043] 表2 LEP和CLEP对糖尿病小鼠糖耐量的影响 [0044] [0045] 注：与正常组相比，*P<0.05，**P<0.01。 [0046] (3)LEP和CLEP对血清糖化血红蛋白和血清胰岛素以及肝糖原的影响[0047] 如表3所示，模型组的糖化血红蛋白比正常组高(P<0.01)，治疗4周后，LEP和CLEP显著降低糖化血红蛋白含量。与模型组相比，LEP和CLEP高剂量组糖化血红蛋白含量分别下降7.35％和14.36％。此外，模型组小鼠血清胰岛素(FINS)高于正常对照组小鼠(P<0.01)。LEP和CLEP治疗显著降低糖尿病小鼠FINS水平(P<0.01或P<0.05)。另一方面，与正常组相比，模型组小鼠在注射STZ后表现出肝糖原水平显著下降(P<0.01或P<0.05)。当LEP和CLEP(高剂量)治疗4周，小鼠肝糖原水平明显恢复接近于阳性对照组的小鼠肝糖原含量。 [0048] 表3对糖尿病小鼠血清FINS,HbA1c和肝糖原的影响 [0049] [0050] 注：与正常组相比，*P<0.05，**P<0.01。 [0051] (4)胰腺组织病理学变化 [0052] STZ诱导的糖尿病小鼠表现出几乎所有组织退化，如肝细胞局灶性坏死，中央静脉及淋巴细胞浸润、充血等。不同组胰腺组织学的变化如图3所示：模型组和治疗组小鼠发现了胰腺组织病理形态(图3)，在低剂量和高剂量CLEP(无剂量效应关系)治疗后，STZ诱导的严重胰腺病变大大减少。结果表明，LEP和CLEP可以保护和干预恢复STZ诱导的糖尿病小鼠胰腺组织。此外，高剂量LEP和CLEP组小鼠出现正常的β细胞结构。 [0053] (5)LEP和CLEP对肝脏中葡萄糖代谢酶的表达的影响 [0054] 各组肝组织中G6P,AMPK和GK的变化如表4。治疗4周后，与模型组小鼠相比,LEP和CLEP治疗的糖尿病小鼠的肝组织中的GK和AMPK的表达显著增加(P<0.05或P<0.01)，而G6P的表达下降。然而，高剂量CLEP促进AMPK表达(P<0.01)且接近于正常组小鼠水平。这些数据表明，LEP和CLEP剂量依赖性并且显著地促进了肝脏葡萄糖和糖原酵解，且CLEP的治疗效果更好。这些结果表明，CLEP可能通过促进糖原合成和葡萄糖的利用表现出显著的降血糖作用。 [0055] 表4 LEP和CLEP对肝脏中葡萄糖代谢酶的表达的影响 [0056] [0057] 注：与正常组相比，*P<0.05，**P<0.01。 [0058] (五)羧甲基化粒毛盘菌胞外多糖CLEP制剂的加工 [0059] 1、片剂加工 [0060] 将300-600g的羧甲基化粒毛盘菌胞外多糖与药用辅料稀释剂200-300g、助流剂20-50g混匀后，与200-400mL乙醇混合均匀制得软材，软材过筛得到湿颗粒，干燥后整粒，最后加入润滑剂5-10g混匀后压片，制成1000片片剂。所述药用辅料稀释剂选用糊精或干淀粉；所述助流剂采用滑石粉、微粉硅胶或微晶纤维素；所述润滑剂采用硬脂酸镁或硬脂酸锌。 [0061] 本实施例推荐的片剂加工的优选例为：取过80-100目筛的上述羧甲基化粒毛盘菌胞外多糖500g、稀释剂糊精250g、助流剂滑石粉40g，混合均匀后加300mL乙醇混合均匀制得软材，软材过筛得到湿颗粒，干燥后整粒，最后加入润滑剂硬脂酸镁10g混匀后压片，制成1000片，片重0.8g，羧甲基化粒毛盘菌胞外多糖含量0.5g/片。 [0062] 2、胶囊剂加工 [0063] 将药用辅料稀释剂200-300g、助流剂50-70g、润湿剂2-6g混匀后，再与300-600g的上述羧甲基化粒毛盘菌胞外多糖混合均匀，装1#空心胶囊，制得胶囊剂100粒。所述药用辅料稀释剂选用糊精或干淀粉；所述助流剂采用滑石粉或微粉硅胶或微晶纤维素；所述润湿剂采用十二烷基硫酸钠或者磺基丁二酸二辛酯。 [0064] 本实施例推荐的胶囊剂加工优选例为：取稀释剂干淀粉200g，助流剂滑石粉40g，润湿剂十二烷基硫酸钠5g混合均匀后，再与400g上述羧甲基化粒毛盘菌胞外多糖混合均匀后装1#空心胶囊1000粒，多糖含量0.4g/粒。 [0065] 上述实验结果表明，本发明的羧甲基化粒毛盘菌胞外多糖具有显著的降血糖功能，且无毒副作用。本发明的羧甲基化粒毛盘菌胞外多糖作为制备降血糖活性药物的应用方法简单经济，可将该羧甲基化粒毛盘菌胞外多糖应用于制备片剂或胶囊剂型的降血糖药物。 |
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