一种用于诱导橡胶树多主棒孢霉真菌产孢方法

申请号 CN201610124393.6 申请日 2016-03-04 公开(公告)号 CN105586305A 公开(公告)日 2016-05-18
申请人 云南省热带作物科学研究所; 发明人 蔡志英; 李国华; 穆洪军; 刘一贤; 施玉萍;
摘要 本 发明 涉及一种用于诱导 橡胶 树多主棒孢霉 真菌 产孢方法,属于生命科学技术领域。本发明方法包括:接种橡胶苗木准备、多主棒孢霉真菌培养、多主棒孢霉真菌接种、及诱导产孢步骤。本发明的有益效果在于:1、本方法保持多主棒孢霉真菌生长在原来的寄主,而且其生长及产孢的环境与野生环境相似,所产生的孢子形态与野生条件下形成的一致,避免了现有室内人工基质培养导致多主棒孢霉真菌孢子变异。2、接种环境条件能人工调控不受季节限制、便于操作,节约了人 力 物力及时间。
权利要求

1.一种用于诱导橡胶树多主棒孢霉真菌产孢方法,其特征在于该方法的具体步骤如下:
(1)接种橡胶苗木准备
选用主栽橡胶树品系的嫁接苗,盆栽放置于温室中,常规方法浇施肥管理,当橡胶树新长出叶片处于淡绿色时用于接种多主棒孢霉真菌诱导产孢;
(2)多主棒孢霉真菌培养
将多主棒孢霉真菌接到PDA培养基平板上,置于28℃、自然光照环境条件下培养7d;
(3)多主棒孢霉真菌接种
用直径为0.5cm的打孔器从28℃、自然光照、PDA培养7d的橡胶树多主棒孢霉真菌菌落的外圈切取带菌琼脂,接种到橡胶叶被牙签刺伤部位,菌丝体直接接触叶片,每片橡胶叶接种一个带菌琼脂块;
(4)诱导产孢
橡胶叶接种后,保持温室内相对湿度保持在80%以上,温度在20℃~30℃,自然光照条件,3d后除出叶片上接种的带菌琼脂块,待多主棒孢霉真菌侵染橡胶叶片产生病斑,8d后受害叶部位呈灰褐色时多主棒孢霉真菌在病斑处长出棒状分生孢子。

说明书全文

一种用于诱导橡胶树多主棒孢霉真菌产孢方法

技术领域:

[0001] 本发明涉及一种用于诱导橡胶树多主棒孢霉真菌产孢方法,属于生命科学技术领域。背景技术:
[0002] 橡胶树多主树棒孢霉落叶病是继南美叶疫病之后的一种毁灭性病害,能为害橡胶幼苗、幼树和成龄树,侵害各龄期叶片,造成嫩叶、嫩梢回枯,叶片大量反复脱落,导致胶乳减产高达20%~25%,甚至造成橡胶树死亡。国内学者在研究中都遇到该真菌在室内人工培养条件下不易产孢,影响病原菌的形态鉴定及相关的科研工作。有学者采用室内培养基自然产孢法、纸片产孢法和菌丝打断法等对橡胶树多主棒孢霉真菌Corynespora cassiicola(Berk Curt)Wei菌株做诱导产孢,只有极少数橡胶树棒孢霉真菌在培养基上能产孢,用纸片法和菌丝打断法虽然能产孢,但孢子的形态与自然条件下形成的形态差异较大,难以用于形态鉴定。发明内容:
[0003] 本发明目的在于克服现有技术之不足,而提供一种用于诱导橡胶树多主棒孢霉真菌产孢方法。为后续多主棒孢霉真菌形态鉴定、病原菌入侵方式、致病性和种群遗传学等相关研究奠定基础
[0004] 发明人在研究中发现:在接近自然条件在温室中,采用人工接种活体橡胶树叶片、诱导其产孢,能够保持多主棒孢霉真菌生长在原来的寄主,而且其生长及产孢的环境与野生环境相似,所产生的孢子形态与野生条件下形成的一致,且能用于多主棒孢霉真菌孢子形态观察。
[0005] 本发明的用于诱导橡胶树多主棒孢霉真菌产孢方法,其具体步骤如下:
[0006] (1)接种橡胶苗木准备
[0007] 选用主栽橡胶树品为嫁接苗,盆栽放置于温室中,常规方法浇施肥管理,当橡胶树新长出叶片处于淡绿色时用于接种多主棒孢霉真菌诱导产孢;
[0008] (2)多主棒孢霉真菌培养
[0009] 将多主棒孢霉真菌接到常规的PDA培养基平板上,置于28℃、自然光照环境条件下培养7d;
[0010] (3)多主棒孢霉真菌接种
[0011] 用直径为0.5cm的打孔器从28℃、自然光照、常规的PDA培养7d的橡胶树多主棒孢霉真菌菌落的外圈切取带菌琼脂,接种到橡胶叶被牙签刺伤部位,菌丝体直接接触叶片,每片橡胶叶接种一个带菌琼脂块;
[0012] (4)诱导产孢
[0013] 橡胶叶接种后,保持温室内相对湿度保持在80%以上,温度在20℃~30℃,自然光照条件,3d后除出叶片上接种的带菌琼脂块,待多主棒孢霉真菌侵染橡胶叶片产生病斑,8d
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