一种冻干粉干悬浮杀菌剂及其制备方法 |
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| 申请号 | CN201610016680.5 | 申请日 | 2016-01-12 | 公开(公告)号 | CN105519584A | 公开(公告)日 | 2016-04-27 |
| 申请人 | 郑州曹氏天正生物技术有限公司; | 发明人 | 曹恒瑜; 周强; 李小超; 魏云峰; | ||||
| 摘要 | 本 发明 提供了一种冻干粉干悬浮 杀菌剂 及其制备方法，所述杀菌剂按重量百分比计：寡雄腐霉卵孢子粉和 发酵 液冻干粉15-30％，润湿分散剂9-18％，紫外保护剂0.2-0.5％，崩解剂3-12％，粘结剂3.0-10％，载体29.5-69.8％，以混合方式喷雾 造粒 而得；所述杀菌剂弥补了单独施用其一的弊端，该剂型提高了卵孢子的萌发率和悬浮率，润湿和崩解速度快，分散性和热贮 稳定性 优，为 植物 病害防治提供了新材料。 | ||||||
| 权利要求 | 1.一种冻干粉干悬浮杀菌剂，其特征在于：由以下成分组成，按重量百分比计： |
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| 说明书全文 | 一种冻干粉干悬浮杀菌剂及其制备方法技术领域[0001] 本发明涉及环保技术领域，尤其是一种冻干粉干悬浮杀菌剂及其制备方法。 背景技术[0002] 干悬浮剂，是20世纪80年代国际上开始研发的农药新剂型和新制剂加工技术。干悬浮剂被认为既具有粒剂的优点，又具悬浮剂高分散性能的理想农药剂型，已成为新剂型开发的热点。其具有入水迅速崩解分散成高悬浮的固液分散体系的颗粒状剂型，不含有机溶剂，悬浮率高，无粉尘，使用方便。 [0003] 寡雄腐霉菌(Pythium Oligandrum)，隶鞭毛菌亚门，是自然界中存在的一种攻击性很强的寄生真菌，能在多种农作物根围定殖。寡雄腐霉是植物致病真菌的天敌，具有广谱、高效、抗病、促长、增产、环保的特点。寡雄腐霉生防机理主要为产生的分泌物及各种酶，是植物很好的促长活性剂，能促进作物根系发育，提高养分吸收。 [0004] 寡雄腐霉菌最初是从美国纽约的豌豆上分离出来，随后又从一些国家的土壤和植物上分得，如小麦、菜豆、番茄等。已有研究表明寡雄腐霉卵孢子接种于黄瓜根系周围，不仅有效的防治了根腐病，同时还提高了植物体内的生长素含量，而且还促进了生长和磷的吸收。 [0005] 欧洲一些发达国家寡雄腐霉卵孢子制剂(可湿性粉剂)，广泛应用于有机果蔬的生产中；国内则是引进捷克Image Trade国际股份有限公司与捷克生物制剂有限公司联合开发的多利维生·寡雄腐霉，自2009年由北京比奥瑞生物科技有限公司正式引进到中国登记注册以来，被全国农技推广中心列为“全国重点推广产品”、获得第十七届中国杨凌农业高新科技成果博览会“后稷奖”。被誉为具有世界顶尖技术的活性微生物广谱杀菌剂，在欧洲被誉为“新世纪农业之光”，并被认定为欧盟指定推荐产品。 [0006] 由于寡雄腐霉形成卵孢子，人工产孢较为困难，限制了其应用范围。然而，卵孢子的萌发和菌丝生长与外界环境密切相关，且其促生防病效果也受环境因素的影响，稳定性较差。针对上述弊端以及微生物农药速效性差的问题研发一种干悬浮杀菌剂具有非常重要的生产实践价值。 发明内容[0007] 本发明所要解决的技术问题在于提供一种冻干粉干悬浮杀菌剂。 [0008] 本发明所要解决的另一技术问题在于提供上述冻干粉干悬浮杀菌剂的制备方法。 [0009] 为解决上述技术问题，本发明的技术方案是： [0010] 一种冻干粉干悬浮杀菌剂，由以下成分组成，按重量百分比计： [0012] 所述润湿分散剂为Morwet EFW、k12、MF-5、TERWET1010、木质素磺酸钙、TERSPERSE 2020、Morwet D425、NNO、T36中的一种或多种组合； [0015] 所述粘结剂为CMC、木质素磺酸钠、PEG、草酸中的一种或多种组合； [0017] 优选的，上述冻干粉干悬浮杀菌剂，所述寡雄腐霉卵孢子粉和发酵液冻干粉作为有效成分，水分为3.2％，含孢量≥1x106个/g。 [0018] 优选的，上述冻干粉干悬浮杀菌剂，所述寡雄腐霉卵孢子粉和发酵液冻干粉的质量比为1-3：1-4。 [0019] 优选的，上述冻干粉干悬浮杀菌剂，所述寡雄腐霉卵孢子粉和发酵液冻干粉作为有效成分含量按重量百分比计为15％，其中，寡雄腐霉卵孢子粉和发酵液冻干粉的质量比为1：1，其余组分及用量为Morwet EFW与木质素磺酸钙9％，交联羧甲基纤维素钠4％，维生素C 0.3％，木质素磺酸钠3.5％，凹凸棒土68.2％，其中，Morwet EFW与木质素磺酸钙的质量比为1:2。 [0020] 优选的，上述冻干粉干悬浮杀菌剂，所述寡雄腐霉卵孢子粉和发酵液冻干粉作为有效成分含量按重量百分比计为20％，其中，寡雄腐霉卵孢子粉和发酵液冻干粉的质量比为3：1，其余组分及用量为TERWET1010和Morwet EFW 14％，交联聚乙烯吡咯烷酮8％，纳米氧化锌0.3％，草酸6％，白炭黑51.7％，其中，TERWET1010与Morwet EFW的质量比为2:1。 [0021] 优选的，上述冻干粉干悬浮杀菌剂，是由下述方法制备得到的： [0023] (2)向超细处理后的样品中加入组方量的寡雄腐霉卵孢子粉，经高速剪切机剪切至混合均匀后立即进行喷雾造粒，即得。 [0024] 优选的，上述冻干粉干悬浮杀菌剂，所述寡雄腐霉卵孢子粉是由下述方法得到的： [0025] (a)寡雄腐霉菌种的获得 [0026] 菌株为PythiumoligandrumDV74(市售商品制剂“多利维生·寡雄腐霉”卵孢子制剂)通过平板稀释法获得寡雄腐霉菌株，并经形态学鉴定和ITS序列测定，保存于斜面中，置于4℃冰箱待用； [0027] (b)寡雄腐霉菌卵孢子粉的收集 [0028] 将步骤(a)中菌种28±1℃、光周期12L:12D条件下于PDA培养基活化培养待产孢后，以1*104个孢子/mL浓度的悬液接种，于PD营养液培养，摇瓶培养，160r/min，温度控制在28±1℃，2天后转接入大型培养瓶扩大培养液24h即为接种液； [0029] 将玉米粒：麸皮：水按g/g/ml计1:5:1.5混合后浸泡10min，洗净沥干后湿热灭菌至半熟，冷却后按10％(V/m)接种液拌入接种，28±1℃、光周期12L：12D的条件下培养7-9天，然后将培养物经真空冷冻干燥机干燥(约48h)干燥后粉碎，使其含水率降至4％左右，即得到寡雄腐霉菌卵孢子粉，测其含孢量、活孢率，置在4℃条件下备用。 [0030] 优选的，上述冻干粉干悬浮杀菌剂，所述发酵液冻干粉是由下述方法得到的： [0031] (A)寡雄腐霉菌种的获得 [0032] 菌株为PythiumoligandrumDV74(市售商品制剂“多利维生·寡雄腐霉”卵孢子制剂)通过平板稀释法获得寡雄腐霉菌株，并经形态学鉴定和ITS序列测定，保存于斜面中，置于4℃冰箱待用； [0033] (B)寡雄腐霉菌发酵液冻干粉的获取 [0034] 将步骤(A)中菌种28±1℃、光周期12L:12D条件下于PDA培养基活化培养待产孢后，以1*104个孢子/mL浓度的悬液接种，于PD营养液培养，摇瓶培养，160r/min，温度控制在28±1℃，8天后收集发酵液，12000r/min离心10min，上清液经抽滤后即得到无菌发酵液，然后置于真空冷冻干燥机冻干48h后，收集冻干粉待用。 [0035] 上述冻干粉干悬浮杀菌剂的制备方法，具体制备步骤如下： [0036] (1)按组方量将发酵液冻干粉、润湿分散剂、紫外保护剂、崩解剂、粘结剂和载体经万能粉碎机机械混合均匀，加入水再经均质机(工作压力1000-1500bar)或砂磨机超细处理； [0037] (2)向超细处理后的样品中加入组方量的寡雄腐霉卵孢子粉，经高速剪切机剪切至混合均匀后立即进行喷雾造粒，即得。 [0038] 上述PDA培养基、PD营养液和扩大培养液均为真菌常用培养基。 [0039] 优选的，上述冻干粉干悬浮杀菌剂的制备方法，所述步骤(1)中均质机或砂磨机超细处理后粒径控制在35±5μm。 [0040] 优选的，上述冻干粉干悬浮杀菌剂的制备方法，所述步骤(2)中高速剪切机剪切速度为4000-8000r/min，时间15-30min。 [0041] 本发明的有益效果是： [0042] 上述冻干粉干悬浮杀菌剂，为寡雄腐霉卵孢子粉及其发酵液冻干粉混配的干悬浮剂，寡雄腐霉菌发酵液冻干粉属于水溶性物质，属于寡雄腐霉菌的次级代谢产物，具有抑菌杀菌的活性，与卵孢子粉制剂混配之后，弥补了单独施用其一的弊端，该剂型提高了卵孢子的萌发率和悬浮率，润湿和崩解速度快，分散性和热贮稳定性优，为植物病害防治提供了新材料。 [0043] 上述冻干粉干悬浮杀菌剂通过市售商品制剂“多利维生·寡雄腐霉”卵孢子制剂获得寡雄腐霉菌株，同时筛选出与其生物相容性较好的助剂，进行制备加工而得，利用寡雄腐霉卵孢子粉和发酵液冻干粉制作水悬浮液，水悬浮液经瞬间喷雾造粒制备成干悬浮剂，寡雄腐霉卵孢子粉及其发酵液冻干粉干悬浮剂具有卵孢子成活率高达85.16％、货架期长、崩解迅速，悬浮率高、粒径细，附着力强、耐冲刷等优点，是一种优秀的绿色农药，具有巨大市场开发前景。 具体实施方式[0044] 下面结合具体实施例对本发明所述技术方案作进一步的说明。 [0045] 实施例1：16％寡雄腐霉卵孢子粉及其发酵液冻干粉干悬浮剂 [0046] 表1 16％寡雄腐霉卵孢子粉及其发酵液冻干粉干悬浮剂配方一 [0047] [0048] [0049] 实施例2：20％寡雄腐霉卵孢子粉及其发酵液冻干粉干悬浮剂 [0050] 表2 20％寡雄腐霉卵孢子粉及其发酵液冻干粉干悬浮剂配方二 [0052] 实施例3:30％寡雄腐霉卵孢子粉及其发酵液冻干粉干悬浮剂 [0053] 表3 30％寡雄腐霉卵孢子粉及其发酵液冻干粉干悬浮剂配方三 [0054]组分 质量百分比(％) 寡雄腐霉卵孢子粉及其发酵液冻干粉(质量比1:4) 30 TERWET1010、Morwet EFW、Morwet D425(质量比1:2:3) 18 交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮(质量比1:1) 12 木质素磺酸钠 9 纳米氧化锌 0.2 白炭黑和凹凸棒土(质量比1:3) 30.8 [0055] 实施例4：16％寡雄腐霉卵孢子粉及其发酵液冻干粉干悬浮剂 [0056] 表4 15％寡雄腐霉卵孢子粉及其发酵液冻干粉干悬浮剂配方四 [0057]组分 质量百分比(％) 寡雄腐霉卵孢子粉及其发酵液冻干粉(质量比1:1) 15 Morwet EFW与木质素磺酸钙(质量比1:1) 9 交联聚羧甲基纤维素钠 4 木质素磺酸钠 3.5 维生素C 0.3 凹凸棒土 68.2 [0058] 实施例5：20％寡雄腐霉卵孢子粉及其发酵液冻干粉干悬浮剂 [0059] 表5 20％寡雄腐霉卵孢子粉及其发酵液冻干粉干悬浮剂配方五 [0060]组分 质量百分比(％) 寡雄腐霉卵孢子粉及其发酵液冻干粉(质量比3:1) 20 TERWET1010和Morwet EFW(质量比2:1) 14 交联聚乙烯吡咯烷酮 8 草酸 6 纳米氧化锌 0.3 白炭黑 51.7 [0061] 制备方法：按上述配方的重量百分比称取各组分，经粉碎机机械混合均匀(寡雄腐霉卵孢子粉除外)后加入适量的水，经均质机进行超细处理(至粒径35μm左右)，加入寡雄腐霉卵孢子粉，经高速剪切机剪切使寡雄腐霉卵孢子粉均匀分散于上述组分的水溶液中，最后进行喷雾造粒。 [0062] 实施例6：寡雄腐霉卵孢子粉及其发酵液冻干粉干悬浮剂的应用 [0063] 1材料与方法 [0064] 1.1供试材料 [0065] 1.1.1苹果轮纹病 [0066] 1.1.2草莓灰霉病 [0067] 1.1.3供试药剂 [0068] 本实施方式的干悬剂为16％寡雄腐霉卵孢子粉及其发酵液冻干粉干悬浮剂(实施例1)、20％寡雄腐霉卵孢子粉及其发酵液冻干粉干悬浮剂(实施例2)和30％寡雄腐霉卵孢子粉及其发酵液冻干粉干悬浮剂(实施例3)，对照分别为多利维生·寡雄腐霉可湿性粉剂和50％多菌灵可湿性粉剂。 [0069] 1.2方法 [0070] 离体试验:将寡雄腐霉卵孢子粉及其发酵液冻干粉干悬浮剂分别稀释成40、120、160倍悬浮液，分别吸取各悬浮液1mL注入灭菌培养皿中，再加入9mL冷却至45℃左右的PDA培养基，轻轻摇动使之混匀，制成平板，然后分别挑取病原菌菌块移植到平板中央，每处理重复3次，以无菌水代替菌株孢子悬浮液作为对照，经恒温培养3d后，测量病原菌菌落直径，计算各处理抑制率。 [0071] 盆栽试验:分别将各种病原菌转至PDA平板活化4d，再转至PD液体培养基中，每瓶转5块，培养6d，测透光率喷雾接种，保湿培养黄瓜苗至发病，三种病原菌透光率分别为1.4％、4.2％和8.6％；将寡雄腐霉卵孢子粉及其发酵液冻干粉干悬浮剂分别采取稀释400倍、800倍和1600倍液，喷雾防治病原菌，15d后检查防治效果，根据病级指数划分标准(表 6)，按照以下公式计算防治效果。 [0072] 表6病级指数划分标准 [0073] [0074] [0075] 病情指数＝〔∑(病级数值×该病级叶数)×100〕/(病级最高值×调查叶数)[0076] 防治效果(％)＝(CK病情指数-处理病情指数)×100/CK病情指数 [0077] 1.3结果与分析 [0078] 表7寡雄腐霉卵孢子粉及其发酵液冻干粉干悬浮剂对苹果轮纹病的离体试验[0079] [0080] 表8寡雄腐霉卵孢子粉及其发酵液冻干粉干悬浮剂对草莓灰霉病的离体试验[0081] [0082] 采用喷雾技术的寡雄腐霉卵孢子粉及其发酵液冻干粉干悬浮剂的离体试验结果见表7、8。可知，该寡雄腐霉卵孢子粉及其发酵液冻干粉干悬浮剂对苹果轮纹病的防效在72％以上，对草莓灰霉病防效在67％以上。 |
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