慢病毒试剂盒的盒子 |
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| 申请号 | CN201521063848.5 | 申请日 | 2015-12-17 | 公开(公告)号 | CN205329051U | 公开(公告)日 | 2016-06-22 |
| 申请人 | 深圳精准医疗科技有限公司; | 发明人 | 杨世成; 毛侃琅; | ||||
| 摘要 | 本实用新型公开了一种慢病毒 试剂 盒 的盒子，包括：盒体；盒盖；设置在盒体内的 衬板 ，衬板上设有多个试剂孔和多个保温孔，衬板与盒体的开口留有一段距离从而使得衬板与盒体形成一有开口的容置空间；设置在盒体内的温控元件，温控元件用于控制多个保温孔的 温度 ；设置在试剂孔内的试剂管；设置在盒体的 侧壁 的灯条，灯条位于容置空间内；以及设置在盒盖上的感应 块 ，感应块用于控制灯条的 开关 。这种慢病毒试剂盒的盒子通过在盒体的侧壁设置灯条，灯条打开时慢病毒试剂盒的盒子的内部光线较强，可以使得实验者很好的对放置于其中的试剂等进行查看，包括试剂上的标签以及试剂的剩余量等。 | ||||||
| 权利要求 | 1.一种慢病毒试剂盒的盒子，其特征在于，包括： |
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| 说明书全文 | 慢病毒试剂盒的盒子技术领域[0001] 本实用新型涉及生物技术领域，特别是涉及一种慢病毒试剂盒的盒子。 背景技术[0002] 基因表达是细胞在生命过程中，把储存在DNA序列中的遗传信息经过转录和翻译，转变成具有生物活性的蛋白质分子的过程。通过基因工程可以实现外源基因在生物细胞甚至生物体内的表达，从而达到人为调控细胞或实物体性状的目的。 [0003] 真核细胞，尤其是哺乳动物细胞的外源基因的导入，主要通过物理方法、化学方法或生物学方法完成。物理方法主要包括DNA显微注射法、电穿孔法和金属颗粒轰击法等方法；化学方法主要包括脂质体介导和受体介导等方法；生物学方法主要是通过各种病毒实现，如腺病毒、腺相关病毒、逆转录病毒、慢病毒等。物理方法和化学方法可以负载大量外源基因片段，并且有部分方法可以实现将外源基因插入到细胞或生物体的基因组中，但总体来说，通过这两类方法实现外源基因表达的效率不高，而且大多数时候无法很好地实现外源基因插入细胞或生物体基因组，进而无法实现外源基因的稳定永久表达。生物学方法中的腺相关病毒、慢病毒等方法则可以很好地实现这一目标，它们可以将外源基因整合到细胞或生物体的基因组中，从而实现外源基因的稳定永久表达。其中，慢病毒以其具有可以感染非分裂期细胞、容纳外源性基因片段更大等优点受到科学界的青睐。 [0004] 目前，不管是在实验室还是在产业界，慢病毒的应用都非常广泛。随着应用领域的不断扩大，对慢病毒的要求也在不断提高。当前，在科研和实际运用中，通过慢病毒一次导入两个基因并实现其高效表达的需求也越来越大，例如2013年《Science》杂志评选出的十大科学突破之首—癌症免疫疗法，包括TCR-T等技术。由于TCR-T技术能够表达特异性受体靶向识别特异性的细胞如肿瘤细胞，受到广泛的关注和研究，并从初期的基础免疫研究转变为现在的临床应用。由于TCR-T技术需要将T细胞受体(TCR)两个亚基对应的DNA序列同时导入到T细胞中，因此其对能实现双基因快速导入技术的需求非常迫切，而现有的慢病毒载体尚不能很好地满足这一需求。 [0005] 当前的慢病毒技术主要通过两种方式实现双基因的导入：在慢病毒载体的基因表达区构建双启动子或一个启动子+一个内部核糖体进入位点序列(IRES)，通过两个启动元件在转录水平实现两个外源基因的表达。这两种方式均可以实现双基因的表达，但存在以下两个主要的缺点：1、位于载体上游和下游基因的表达水平不一致。由于不同启动元件效率的不同以及两者之间可能存在的相互作用，从而导致上下游基因的表达水平差异很大(如10倍的差异)，甚至出现其中一个基因不表达的情况；2、慢病毒对外源基因的负载容量一般在8000-10000bp左右，而启动元件的大小一般在500-700bp左右。可以看到，单个启动元件占慢病毒负载容量的比例接近10％，因此多引入一个启动元件就意味着通过慢病毒导入的外源基因序列，就意味着可用于导入外源基因容量的减少。因此使用这两种方式实现的慢病毒双基因表达均不是特别理想。现有技术中尚无可解决以上问题的慢病毒载体。 [0006] 现有的慢病毒试剂盒的盒子本身主要起作用的仅限于存放试剂，但是在实际实验的过程中，尽管有实验室和实验操作台本身的照明设施，但是由于慢病毒试剂盒的盒子本身的结构的阻挡，慢病毒试剂盒的盒子内的光线往往较弱，实验者仍不能很好的对放置于其中的试剂瓶等进行查看，包括试剂瓶内的标签以及试剂瓶内试剂的剩余量等。实用新型内容 [0007] 基于此，有必要提供一种内部光线较强的慢病毒试剂盒的盒子。 [0008] 一种慢病毒试剂盒的盒子，包括： [0009] 盒体； [0010] 与所述盒体转动连接的盒盖； [0011] 设置在所述盒体内的衬板，所述衬板上设有多个试剂孔和多个保温孔，所述衬板与所述盒体的开口留有一段距离从而使得所述衬板与所述盒体形成一有开口的容置空间； [0012] 设置在所述盒体内的温控元件，所述温控元件用于控制所述多个保温孔的温度； [0013] 设置在所述试剂孔内的试剂管； [0018] 在一个实施例中，所述温控元件为帕尔贴，所述控制器为单片机。 [0019] 在一个实施例中，所述盒体为长方体，所述灯条为4个，4个所述灯条分别设置在所述盒体的四个侧壁。 [0020] 在一个实施例中，还包括设在所述盒盖内侧的辅助灯条，所述感应块还用于控制所述辅助灯条的开关。 [0021] 在一个实施例中，所述感应块设置在所述盒盖与所述盒体接触的位置。 [0022] 在一个实施例中，所述衬板上设有8个试剂孔，所述试剂管的数量为8个； [0023] 8个所述试剂管分别用于承装慢病毒转移载体、慢病毒包装辅助载体、第一上游引物、第一下游引物、第二上游引物、第二下游引物、第一无菌水和第二无菌水； [0024] 所述第一上游引物和所述第一下游引物用于第一基因的插入，所述第二上游引物和所述第二下游引物用于第二基因的插入。 [0025] 在一个实施例中，所述慢病毒转移载体为pRRLSIN.cPPT.MSCV-Dual-Casp9.WPRE载体。 [0026] 在一个实施例中，所述慢病毒包装辅助载体包括pMDLg/pRRE载体、pRSV-Rev载体和pMD-G载体。 [0027] 这种慢病毒试剂盒的盒子通过在盒体的侧壁设置灯条，灯条打开时慢病毒试剂盒的盒子的内部光线较强，可以使得实验者很好的对放置于其中的试剂等进行查看，包括试剂上的标签以及试剂的剩余量等。 [0029] 图1为一实施方式的慢病毒试剂盒的盒子的结构示意图； [0030] 图2为如图1所示的慢病毒试剂盒的盒子的保温孔的结构示意图。 具体实施方式[0031] 下面主要结合附图及具体实施例对慢病毒试剂盒的盒子及其制备方法作进一步详细的说明。 [0032] 如图1和图2所示的慢病毒试剂盒的盒子，包括盒体10、盒盖20、衬板30、试剂管(图中未显示)、温控元件50、灯条60和感应块70。 [0033] 盒盖20与盒体10转动连接。 [0034] 衬板30设置在盒体10内，衬板30上设有多个试剂孔32和多个保温孔34，衬板30与盒体10的开口留有一段距离从而使得衬板30与盒体10形成一有开口的容置空间。 [0035] 试剂管设置在试剂孔32。 [0036] 温控元件50设置在盒体10内，温控元件50用于控制多个保温孔34的温度。 [0037] 具体的，温控元件50用于控制多个保温孔34的温度为4℃或37℃，温控元件50与多个保温孔34的底部接触。 [0038] 本实施方式中，慢病毒试剂盒的盒子还包括包覆多个保温孔34外壁的隔热海绵(图中未显示)、温控探头(图中未显示)、温控模式开关80以及控制器(图中未显示)。 [0039] 温控探头与用于多个保温孔34的外壁直接接触，用于感应多个保温孔34的温度，控制器接收温控探头感应到的多个保温孔34的温度，控制温控元件50启动，调节多个保温孔34的温度为4℃或37℃。 [0040] 本实施方式中，保温孔34为4个，保温孔34可以容纳200μL的EP管。 [0041] 温控模式开关80用于打开或关闭温控元件50。 [0042] 本实施方式中，温控元件50为帕尔贴，控制器为单片机。 [0043] 这种慢病毒试剂盒的盒子通过温控元件50调节多个保温孔34的温度为4℃或37℃，可以适用于需要低温保存的试剂或者需要在37℃下反应的试剂，方便操作。 [0044] 灯条60设置在盒体10的侧壁，具体的，灯条60位于容置空间。 [0045] 本实施方式中，盒体10为长方体，灯条60为4个，4个灯条60分别设置在盒体10的四个侧壁。 [0046] 结合图1，这种慢病毒试剂盒的盒子还包括设在盒盖20内侧的辅助灯条62。 [0047] 本实施方式中，辅助灯条62为显示屏的背光灯。 [0048] 感应块70设置在盒盖20上，感应块70用于控制灯条60和辅助灯条62的开关。 [0049] 当盒体10和盒盖20合上时，感应块70控制灯条60和辅助灯条62关闭；当盒体10和盒盖20打开时，感应块70控制灯条60和辅助灯条62打开。 [0051] 优选的，感应块70设置在盒盖20与盒体10接触的位置。 [0053] 这种慢病毒试剂盒的盒子还包括设置在盒盖20内侧的照明开关90。照明开关90可以直接打开或断开灯条60和辅助灯条62与电源的电连接，当这种慢病毒试剂盒的盒子中还有光敏感型试剂时，照明开关90可以断开灯条60和辅助灯条62与电源的电连接，从而避免盒体10和盒盖20打开时，灯条60和辅助灯条62打开。 [0054] 本实施方式中，试剂管为8个。 [0055] 8个试剂管分别用于承装慢病毒转移载体、慢病毒包装辅助载体、第一上游引物、第一下游引物、第二下游引物、第一无菌水和第二无菌水。 [0056] 本实施方式中，慢病毒转移载体为pRRLSIN.cPPT.MSCV-Dual-Casp9.WPRE载体。 [0057] pRRLSIN.cPPT.MSCV-Dual-Casp9.WPRE载体由pRRLSIN.cPPT.MSCV/GFP.WPRE载体改造得到，将pRRLSIN.cPPT.MSCV/GFP.WPRE载体中编码GFP的序列替换为带有自杀开关的双基因表达盒子Dual-Casp9。 [0058] pRRLSIN.cPPT.MSCV/GFP.WPRE载体由购自addgene的商业化的质粒pRRLSIN.cPPT.PGK/GFP.WPRE改造而来，将质粒pRRLSIN.cPPT.PGK/GFP.WPRE改造而来的PGK启动子换成了MSCV启动子即可。 [0059] 本实施方式中，慢病毒包装辅助载体包括pMDLg/pRRE载体、pRSV-Rev载体和pMD-G载体。pMDLg/pRRE载体、pRSV-Rev载体和pMD-G载体均为商业购买的慢病毒包装辅助载体。 [0060] 其中，pRRLSIN.cPPT.MSCV-Dual-Casp9.WPRE载体包含带有自杀开关的双基因表达盒子Dual-Casp9。带有自杀开关的双基因表达盒子Dual-Casp9包括从5’到3’端依次排列的如下结构：第一多克隆位点-第一弗林蛋白酶切割位点-V5标签-第一Spacer-第一2A肽-Casp9-第二多克隆位点，其中，“-”代表连接。 [0061] Casp9包括从5’到3’端依次排列的如下结构：iCasp9-第二弗林蛋白酶切割位点-第二Spacer-第二2A肽。 [0062] 第一多克隆位点包括从5’到3’端依次排列的如下结构：Asc I酶切位点、Bst BI酶切位点、Bam HI酶切位点和Age I酶切位点。 [0063] 第二多克隆位点包括从5’到3’端依次排列的如下结构：Xho I酶切位点、Spe I酶切位点、Xma I酶切位点和Sal I酶切位点。 [0064] 在第一多克隆位点中插入的外源基因，需去除其终止密码子序列。 [0065] 第一上游引物和第一下游引物用于第一基因的插入，第二上游引物和第二下游引物用于第二基因的插入。 [0066] 这种慢病毒试剂盒的盒子通过在盒体10的侧壁设置灯条60，灯条60打开时慢病毒试剂盒的盒子的内部光线较强，可以使得实验者很好的对放置于其中的试剂等进行查看，包括试剂上的标签以及试剂的剩余量等。 [0067] 此外，这种慢病毒试剂盒的盒子通过温控元件50调节多个保温孔34的温度为4℃或37℃，可以适用于需要低温保存的试剂或者需要在37℃下反应的试剂，方便操作。 |
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