[0001] 本发明涉及新型氨基甲酸酯糖脂及其用途。更具体地，本发明涉及在糖的6-位具有氨基甲酸酯的6-氨基甲酸酯糖脂，其产生方法，和其药物用途。

[0002] 免疫系统具有熟练监测功能来区分体内的异常细胞与自身正常细胞并仅消除异常细胞。当监测功能崩塌时，突变产生的异常细胞等不能被消除，并且允许其在体内存在和生长。生长的异常细胞块是肿瘤或癌症。

[0003] 癌症治疗主要是通过外科手术去除癌症或使用抗癌剂。然而，这些治疗方法经常对患者产生由于摘除手术和抗癌剂的副作用导致的身体负担，或由于手术疤痕导致的精神负担。

[0004] 在此类背景下，通过免疫疗法治疗正在引起关注。在免疫疗法中，患者自身的免疫细胞的数目得到增加，并且进一步经活化以攻击癌细胞。与外科手术相比，由于治疗导致的患者的身体负担小，且由于治疗导致的对患者的社会生活的影响可以尽可能降低。此外，还采用使用免疫疗法的治疗方法和外科手术的组合。由于可以去除通过免疫疗法尽可能减小的肿瘤，所以可以降低对患者的身体负担。此外，由于手术疤痕小，所以精神负担也可以得到急剧降低。

[0005] 自然杀伤(下文NK)T细胞是属于新的淋巴细胞谱系的免疫细胞，其表现出与其它淋巴细胞谱系(T、B和NK细胞)的特性不同的特性。NKT细胞与NK细胞有关，因为其中存在细胞毒性的穿孔蛋白颗粒(非专利文献1)。然而，因为NKT细胞不仅表达NK细胞标志物物，而且表达T细胞受体(TCR)，所以已经显示它们代表一类新的完全不同的细胞(非专利文献2)。NKT细胞可以产生以下两者：T辅助(Th)1细胞产生的Th1型细胞因子[主要干扰素(IFN)-γ]，其促进免疫刺激作用，和Th2细胞产生的Th2型细胞因子[主要白介素(IL)-4]，其促进免疫抑制作用(非专利文献3)。换言之，NKT细胞可以诱导免疫系统的活化和静息两者，这表明免疫系统在平衡调节中可能的作用(非专利文献4)。因此，当NKT细胞的功能可以得到控制时，免疫系统的异常平衡引起的各种疾病，特别是癌症，可以得到治疗。

[0006] 吸引最大关注的NKT细胞的特征在于以下事实：NKT细胞中表达的TCR的α链在属于一个特定物种的所有个体中是相同的。这基本上显示相同物种的生物体的所有NKT细胞都通过识别相同物质而活化。因此，α链是Vα24(对于人)和Vα14(对于小鼠)，在两个物种之间存在非常高的同源性。对于与α链形成一对的β链，只有非常有限数量的种类是已知的，并且因此，该TCR被称为“不变TCR”。NKT细胞的TCR识别糖脂，而T细胞的TCR识别蛋白片段，这也是特征。

[0007] 已知广泛种类的鞘糖脂存在于活的生物体中。在活的生物体中的一般鞘糖脂中，各种糖或糖链经由β-键键合至神经酰胺，并且它们存在于各种器官的细胞膜中。

[0008] 同时，已知包含经由α-键键合至神经酰胺的糖的鞘糖脂具有有效的免疫刺激作用和抗肿瘤活性。以agelasphins为代表的α-半乳糖神经酰胺类是从Agelas mauritianus(一种海绵)的提取物分离的糖脂，并且已经报道其有效活化NKT细胞(非专利文献5)。α-半乳糖神经酰胺由树突状细胞(DC)等代表的抗原递呈细胞(APC)摄取，并由与主要组织相容性复合物(MHC)I类分子类似的CD1d蛋白递呈在细胞膜上。NKT细胞通过经由使用TCR识别因此递呈的CD1d蛋白和α-半乳糖神经酰胺的复合物而活化，由此起始各种免疫反应。

[0009] 迄今为止，已经合成了各种类似物，并且已经研究了结构和活性之间的相关性。已经阐明，在合成类似物的系列中，由Kirin Brewery Co., Ltd.开发的KRN7000 (化合物1, α-GalCer)显示极强的抗肿瘤活性，且相应的β型(β-GalCer)没有显示免疫刺激活性(专利文献1，非专利文献6)。KRN7000是一种鞘糖脂，其包含由长链脂肪酸酰化鞘氨醇碱而获得的神经酰胺和以α构型与其键合的半乳糖。

[0010]

[0011] 近年来，专注于NKT细胞的上述功能，已经开发了癌症的治疗药物，其含有KRN7000作为活性成分。然而，通过施用KRN7000活化的NKT细胞产生IFN-γ，这是可用于治疗癌症和诱导免疫刺激活性的细胞因子，以及同时产生IL-4，这是诱导免疫抑制作用的细胞因子。作为结果，两者的效果相互抵消，产生了缺乏癌症治疗的足够效果的问题。

[0012] Tsuji等人的组已经开发出糖脂α-C-GalCer，其强烈活化小鼠的NKT细胞且优先产生IFN-γ(化合物2，专利文献2，非专利文献7)。然而，由于α-C-GalCer几乎不诱导人NKT细胞中产生细胞因子，所以其临床应用被认为是困难的。为了解决该问题，近年来已经开发了同样在人系统中显示强烈活性的化合物(非专利文献8)。

[0013]

[0014] 2007年报道了人CD1d/KRN7000/TCR的晶体结构分析(非专利文献9)。根据该报道，已经阐明，KRN7000的糖部分呈现在CD1d外侧并朝向TCR，而神经酰胺部分卡在CD1d的大疏水口袋中。还发现KRN7000的吡喃环上的氧原子和糖的6位羟基不与CD1d或TCR的任何氨基酸残基形成氢键。

[0015] 另一方面，我们已经分别开发了具有碳糖(carbasugar)的新型合成糖脂RCAI-56(化合物3)，并发现该化合物强烈活化NKT细胞，并诱导产生大量的IFN-γ(非专利文献10)。我们已经进一步开发了其中糖脂的糖部分的6-羟基被修饰的新型合成糖脂RCAI-61(化合物4)，并且发现该化合物比RCAI-56更容易制备且诱导IFN-γ的大量产生(非专利文献11)。
由于RCAI-56和RCAI-61甚至在小鼠和人的系统(体外)中显示出强烈活性，所以其临床应用是预期的。

[0016] 然而，由于RCAI-56的合成需要多个步骤，并且RCAI-61的合成需要糖的复杂修饰，所以已经期望开发新型类似物，其允许更加方便的制备且具有与RCAI-56和RCAI-61的活性相比等效或更高的免疫刺激活性。此外，由于RCAI-61具有水中低溶解度的问题，所以已经期望改善水溶解度。

[0017]

[0018]

[0019] 在2006年，Savage等人开发了PBS-57(化合物5)，其是糖脂，其中KRN7000的糖部分的6位羟基被转化为乙酰胺基团，并且该化合物显示出在DMSO中比KRN7000改善的溶解度，以及比KRN7000更强的活性(非专利文献12)。近年来已经报道，该化合物显示出强烈的佐剂活性(专利文献3-5)。此外，Calenbergh等人开发了一种糖脂(化合物6)，其中KRN7000的糖部分的6位羟基被转化为苯甲酰胺(非专利文献13)。由于苯甲酰胺类似物具有弱的IL-4产生诱导活性，所以它们诱导相对较大偏向的IFN-γ产生。然而，在任何报道中，其中6位被转化为酰胺基团的类似物的合成都要求将6位羟基转化为爆炸性叠氮基的步骤。因此，安全性变为工业规模合成的问题。

[0020]

[0021]

[0022] 已经合成了许多其中酰基侧链而非糖部分得到修饰的类似物，并且已经研究了其活性。在2010年，Wong等人报道了在酰基侧链上具有芳环的类似物的开发(非专利文献14)。已经报道，糖脂，7DW8-5(化合物7)，其由于与CD1d的疏水口袋内侧具有芳环的氨基酸残基的π-π堆积相互作用而具有增强的配体和CD1d的亲和力，显示比KRN7000更强的佐剂活性。

[0023]

[0024] 专利文献6和非专利文献15公开了作为KRN7000衍生物的在6-位具有氨基甲酸酯的合成糖脂。

[0025] 除了这些，还有许多关于其中6位羟基被转化为酰胺键的类似物的报道(专利文献7-9，非专利文献16-22)。

[0026] [文献列表]

[0027] [专利文献]

[0028] 专利文献1: WO 98/44928

[0029] 专利文献2: WO 03/105769

[0030] 专利文献3: WO 2010/023498

[0031] 专利文献4: WO 2010/040710

[0032] 专利文献5: US-B-2009/0162385

[0033] 专利文献6: US-B-2009/0275483

[0034] 专利文献7: WO 2008/080926

[0035] 专利文献8: WO 2007/118234

[0036] 专利文献9: WO 2004/094444

[0037] [非专利文献]

[0038] 非专利文献1: Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1998, 95, 5690-5693

[0039] 非专利文献2: J. Immunol. 1995, 155, 2972-2983

[0040] 非专利文献3: J. Immunol. 1998, 161, 3271-3281

[0041] 非专利文献4: Science, 1997, 278, 1623-1626

[0042] 非专利文献5: Science, 1997, 278, 1626-1629

[0043] 非专利文献6: J. Med. Chem. 1995, 38, 2176-2187

[0044] 非专利文献7: J. Exp. Med. 2003, 198, 1631-1641

[0045] 非专利文献8: Immunology, 2009, 127, 216-225

[0046] 非专利文献9: Nature, 2007, 448, 44-49

[0047] 非专利文献10: Bioorg. Med. Chem. 2009, 17, 6360-6373

[0048] 非专利文献11: Tetrahedron Lett. 2008, 49, 6827-6830

[0049] 非专利文献12: J. Immunol. Method, 2006, 312, 34-39

[0050] 非专利文献13: J. Am. Chem. Soc., 2008, 130, 16468-16469

[0051] 非专利文献14: Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2010, 107, 13010-13015[0052] 非专利文献15: J. Am. Chem. Soc., 2008, 130, 12348-12354

[0053] 非专利文献16: EMBO Journal, 2011, 30, 2294-2305

[0054] 非专利文献17: J. Org. Chem., 2011, 76, 320-323

[0055] 非专利文献18: Immunity 2009, 31, 60-71

[0056] 非专利文献19: Tetrahedron 2009, 65, 6390-6395

[0057] 非专利文献20: Bioorg. Med. Chem. Lett. 2008, 18, 3052-3055

[0058] 非专利文献21: Nature Immunol., 2007, 8, 1105-1113

[0059] 非专利文献22: Org. Lett., 2002, 4, 1267-1270。

[0060] 发明概述

[0061] 本发明待解决的问题

[0062] 本发明已经鉴于此类实际情况来进行，并且其待解决的问题是提供有效作为抗肿瘤活性剂或疫苗佐剂的新型化合物和可用于合成所述化合物的中间体及其产生方法。此外，其目的是提供含有此类新型化合物的药物。

[0063] 解决问题的方式

[0064] 本发明人已经进行研究以试图解决上述问题，并且发现其中糖脂的糖部分的6位羟基被转化为氨基甲酸酯的类似物具有特异性的免疫调节效力，非常有效用于治疗癌症和感染，并且具有强烈佐剂活性，这导致本发明的完成。

[0065] 因此，本发明提供了下列内容。

[0066] [1] 式(I)代表的化合物，或其盐

[0067]

[0068] 其中

[0069] X是亚烷基或-NH-；

[0070] R1和R2是相同或不同的，且各自是氢原子、烷基、羟基、烷氧基、或任选具有取代基的芳基，R1和R2任选与邻近氮原子一起形成5或6元环；

[0071] R3是具有1-20个碳原子的烃基；且

[0072] R4是具有1-30个碳原子的烃基。

[0073] [2] 上述[1]的化合物或其盐，其中X是亚甲基或-NH-。

[0074] [3]上述[1]的化合物或其盐，其中R1是氢原子、C1–6烷基、羟基、C1–6烷氧基、或任选具有取代基的C6–12芳基。

[0075] [4] 上述[1]的化合物或其盐，其中R2是氢原子、C1–6烷基、羟基、C1–6烷氧基、或任选具有取代基的C6–12芳基。

[0076] [5] 上述[1]的化合物或其盐，其中R1和R2任选与邻近氮原子一起任选形成的5或6元环为5或6元含氮饱和杂环。

[0077] [6] 上述[1]的化合物或其盐，其中R3是C1–20烷基、C2–20烯基或C2–20炔基。

[0078] [7] 上述[1]的化合物或其盐，其中R4是C1–30烷基、C2–30烯基或C2–30炔基。

[0079] [8] 药物，其包含上述[1]-[7]中任一项的化合物或其盐。

[0080] [9] 选择性IFN-γ产生诱导剂，其包含上述[1]-[7]中任一项的化合物或其盐。

[0081] [10] 选择性IFN-γ产生诱导剂，其包含上述[1]-[7]中任一项的化合物或其盐，将所述选择性IFN-γ产生诱导剂在树突状细胞上刺激(pulse)。

[0082] [11] 用上述[1]-[7]中任一项的化合物或其盐刺激的人树突状细胞。

[0083] [12] 选择性IFN-γ产生诱导剂，其包含上述[11]中所述的人树突状细胞。

[0084] [13] 式(II)代表的化合物，或其盐

[0085]

[0086] 其中

[0087] A1-A5是相同或不同的，且各自是羟基保护基团；

[0088] R1和R2是相同或不同的，且各自是氢原子、烷基、羟基、烷氧基、或任选具有取代基的芳基，且R1和R2任选与邻近氮原子一起形成5或6元环；且

[0089] R3是具有1-20个碳原子的烃基。

[0090] [14] 上述[13]的化合物或其盐，其中R1和R2是相同或不同的，且各自是氢原子、C1–6烷基、羟基、C1–6烷氧基、或任选具有取代基的C6–12芳基，且R1和R2任选与邻近氮原子一起形成5或6元含氮饱和杂环。

[0091] [15] 上述[13]的化合物或其盐，其中R3是C1–20烷基、C2–20烯基或C2–20炔基。

[0092] [16] 选择性诱导IFN-γ的产生的方法，其包括将有效量的上述[1]-[7]中任一项的化合物或其盐施用于需要所述施用的目标。

[0093] [17] 选择性诱导IFN-γ的产生的方法，其包括将有效量的上述[1]-[7]中任一项的化合物或其盐施用于需要所述施用的目标，和用所述化合物或其盐刺激树突状细胞的步骤。

[0094] 发明效果

[0095] 其中糖脂的糖部分的6位羟基被转化为烷基醚(其是疏水性官能团)的类似物具有低溶解度的问题，即使它与KRN7000相比诱导偏向IFN-γ的细胞因子产生。相反，氨基甲酸酯基团比烷基更亲水。此外，羟基可以容易地被转化为氨基甲酸酯基团。不像酰胺基，不必使用具有爆炸的危险的试剂或官能团。

[0096] 因此，由于本发明开发的其中糖部分的6-位羟基被转化为氨基甲酸酯键的糖脂可以高度容易地合成，且可以与KRN7000相比诱导偏向IFN-γ的细胞因子产生，所以本发明可以提供有效用于治疗癌症和诱导佐剂作用的药物、其产生方法及其用途。

[0097] 此外，IFN-γ产生可以通过用本发明的糖脂刺激树突状细胞并施用树突状细胞而更加得到加强。

[0098] 附图简述

[0099] 图1是显示将糖脂(KRN7000或RCAI-123)静脉内施用于小鼠后过去所示时间后小鼠血浆的IFN-γ浓度的变化的图。

[0100] 图2是显示将糖脂(KRN7000或RCAI-123)静脉内施用于小鼠后过去所示时间后小鼠血浆的IL-4浓度的变化的图。

[0101] 图3是显示将糖脂(KRN7000或RCAI-123)静脉内施用于小鼠后过去所示时间后小鼠血浆的IL-12浓度的变化的图。

[0102] 图4是显示将用糖脂(KRN7000或RCAI-121、RCAI-122、RCAI-131)刺激的树突状细胞静脉内施用于小鼠后过去所示时间后小鼠血浆的IFN-γ浓度的变化的图。

[0103] 图5是显示将用糖脂(KRN7000 或RCAI-132、RCAI-139、RCAI-140、RCAI-141)刺激的树突状细胞静脉内施用于小鼠后过去所示时间后小鼠血浆的IFN-γ浓度的变化的图。

[0104] 图6是显示将用糖脂(KRN7000 或RCAI-123、RCAI-124、RCAI-137、RCAI-138、RCAI-140)刺激的树突状细胞静脉内施用于小鼠后过去所示时间后小鼠血浆的IFN-γ浓度的变化的图。

[0105] 图7是显示将用糖脂(KRN7000或RCAI-121、RCAI-122、RCAI-131)刺激的树突状细胞静脉内施用于小鼠后过去所示时间后小鼠血浆的IL-4浓度的变化的图。

[0106] 图8是显示将用糖脂(KRN7000 或RCAI-132、RCAI-139、RCAI-140、RCAI-141)刺激的树突状细胞静脉内施用于小鼠后过去所示时间后小鼠血浆的IL-4浓度的变化的图。

[0107] 图9是显示将用糖脂(KRN7000 或RCAI-123、RCAI-124、RCAI-137、RCAI-138、RCAI-140)刺激的树突状细胞静脉内施用于小鼠后过去所示时间后小鼠血浆的IL-4浓度的变化的图。

[0108] 图10是显示将用糖脂(KRN7000或RCAI-121、RCAI-122、RCAI-131)刺激的树突状细胞静脉内施用于小鼠后过去所示时间后小鼠血浆的IL-12浓度的变化的图。

[0109] 图11是显示将用糖脂(KRN7000 或RCAI-132、RCAI-139、RCAI-140、RCAI-141)刺激的树突状细胞静脉内施用于小鼠后过去所示时间后小鼠血浆的IL-12浓度的变化的图。

[0110] 图12是显示将用糖脂(KRN7000 或RCAI-123、RCAI-124、RCAI-137、RCAI-138、RCAI-140)刺激的树突状细胞静脉内施用于小鼠后过去所示时间后小鼠血浆的IL-12浓度的变化的图。

[0111] 实施方案的描述

[0112] 本发明在下面通过参考优选实施方案进行详细解释。

[0113] 首先解释待用于本说明书的各式中的符号的定义。

[0114] X是亚烷基或-NH-。“亚烷基”为，例如，具有1-8个碳原子的直链或支链亚烷基。具体实例包括亚甲基、亚乙基、三亚甲基、四亚甲基、五亚甲基、六亚甲基、七亚甲基、八亚甲基、亚丙基、乙基亚乙基、二甲基亚甲基、二甲基三亚甲基等。

[0115] R1和R2是相同或不同的，且各自为氢原子、烷基、羟基、烷氧基、或任选具有取代基的芳基。R1和R2任选与邻近氮原子一起形成5或6元环。

[0116] “烷基”为，例如，C1-24，更优选C1-16，进一步优选C1-10，特别优选C1-6直链或支链烷基。具体实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基、十五烷基、十六烷基、十七烷基、十八烷基等。对于R1或R2优选作为烷基的是C1-6烷基(例如，甲基、乙基)。

[0117] “烷氧基”为，例如，C1-24，更优选C1-16，进一步优选C1-10，特别优选C1-6直链或支链烷氧基。具体实例包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、叔丁氧基等。对于R1或R2优选作为烷氧基的是C1-6烷氧基(例如，甲氧基)。

[0118] “任选具有取代基的芳基”中的“芳基”为，例如，C6-14，更优选C6-12，单环-三环芳基。具体实例包括苯基、萘基、蒽基、菲基等。对于R1或R2优选作为芳基的是C6-12芳基(例如，苯基)。“芳基”任选具有的取代基的实例包括卤素原子(例如，氯原子、氟原子、溴原子、碘原子)；烷基(例如，甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基)；
卤代烷基(例如，三氟甲基)；烷氧基(例如，甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、叔丁氧基)；羟基；氨基；烷基氨基(例如，甲基氨基、二甲基氨基、乙基氨基、二乙基氨基)；环烷基氨基等。取代基的位置和数目没有特别限制，并且一个至可取代的最大数目的取代基可以存在于可取代的位置。

[0119] R1和R2任选与邻近氮原子一起形成的5或6元环为，例如，5或6元含氮饱和杂环，其具体为吡咯烷、哌啶、吗啉、硫代吗啉、哌嗪等。优选的是吡咯烷、哌啶或吗啉。

[0120] R3是具有1-20个碳原子的烃基。“具有1-20个碳原子的烃基”是涵盖C1-20烷基、C2–20烯基、C2-20炔基、C3-20环烷基、C3-20环烯基、甚至C6-20芳基的概念，其可以是直链、支链或环状的，或者可以是饱和烃基或不饱和烃基，且任选在分子中或在末端具有不饱和键。这些中，优选作为R3的是C1-20烷基，C2–20烯基，和C2-20炔基，更优选的是C12-14烷基。作为R3，具体地，可以提及-C14H29等。

[0121] R4是具有1-30个碳原子的烃基。“具有1-30个碳原子的烃基”是涵盖C1-30烷基、C2–30烯基、C2-30炔基、C3-30环烷基、C3-30环烯基、甚至C6-30芳基的概念，其可以是直链、支链或环状的，或者可以是饱和烃基或不饱和烃基，且任选在分子中或在末端具有不饱和键。这些中，优选作为R4的是C1-30烷基，C2–30烯基，和C2-30炔基，更优选的是C10-30烷基，且进一步优选的是C15-25烷基。R4的具体实例包括-C16H33、-C24H49等。

[0122] 对于R3或R4的烃基任选具有取代基。当对于R3或R4的烃基具有取代基时，取代基的实例包括供电子基团，诸如卤素原子(优选氯原子、氟原子)；烷氧基(优选C1-24，更优选C1-16，又更优选C1-10，特别优选C1-4)，诸如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、叔丁氧基等；芳氧基(优选C6-14)，诸如苯氧基等；羟基；氨基；烷基氨基诸如甲基氨基、二甲基氨基、乙基氨基、二乙基氨基等；环烷基氨基；烷基羰基氨基，诸如乙酰胺等；环烷基羰基氨基；芳基羰基氨基(优选地，芳基羰基氨基，其中芳基部分为具有6-14的碳数的芳基)，诸如苯甲酰基氨基等，等，进一步，吸电子基团，诸如羧基；烷氧基羰基；酰基(酰基如下所述，优选烷基-羰基，其中烷基部分是具有1至24的碳数的直链或支链烷基)；氨基甲酰基；三氟甲基等。取代基的位置和数目没有特别限制，并且一个至可取代的最大数目的取代基可以存在于可取代的位置。当存在一个或多个取代基时，它们可以是相同或不同的。

[0123] 本说明书中的“酰基”为，例如，甲酰基；烷基-羰基(例如，烷基-羰基，其中烷基部分是具有1至24(优选1至12)的碳数的直链或支链烷基(例如，乙酰基、丙酰基、丁酰基、异丁酰基、戊酰基、新戊酰基、己酰基))；环烷基-羰基(例如，环烷基-羰基，其中环烷基部分是具有3至10的碳数的环烷基)；烯基-羰基(例如，烯基-羰基，其中烯基部分是具有2至12的碳数的直链或支链烯基(例如，丙烯酰基，甲基丙烯酰基))；芳基-羰基(例如，芳基-羰基，其中芳基部分是具有6至14的碳数的芳基(例如，苯甲酰基，萘甲酰基))等。芳基-羰基的芳基是，例如，单环-三环芳族烃基，且具体实例包括苯基、萘基、蒽基和菲基。这些中，作为酰基，甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基、异丁酰基、苯甲酰基、萘甲酰基等是优选的，且乙酰基和苯甲酰基是更优选的。

[0124] 上述烷基氨基和烷基羰基氨基的烷基部分的实例包括直链或支链烷基(优选的碳数1-24，更优选的碳数1-16，又更优选的碳数1-10，特别优选的碳数1-4)，诸如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基、十五烷基、十六烷基、十七烷基、十八烷基等。

[0125] 上述环烷基氨基和环烷基羰基氨基的环烷基部分的实例包括环烷基(优选的碳数3-24，更优选的碳数3-16，又更优选的碳数3-10，特别优选的碳数为3-6)诸如环戊基、环己基等。

[0126] 上述烷氧基羰基的烷氧基部分的实例包括与上述烷氧基类似的那些。

[0127] 上述取代基可以在可取代的位置被至少一种来自卤素、烷基、环烷基、烯基、炔基、苯基、烷氧基、羟基、氨基、烷基氨基和环烷基氨基的类型进一步取代。

[0128] 卤素、烷氧基、烷基氨基和环烷基氨基的实例包括与上述类似的那些。

[0129] 烷基的实例包括烷基(优选的碳数1-24，更优选的碳数1-16，又更优选的碳数1-10，特别优选的碳数1-4)，诸如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基、十五烷基、十六烷基、十七烷基、十八烷基等。

[0130] 环烷基部分的实例包括环烷基(优选的碳数3-24，更优选的碳数3-16，又更优选的碳数3-10，特别优选的碳数3-6)诸如环戊基、环己基等。

[0131] 烯基的实例包括烯基(优选的碳数2-24，更优选的碳数2-16，又更优选的碳数2-10，特别优选的碳数2-4)诸如乙烯基、丙烯基、丁烯基等。

[0132] 炔基的实例包括炔基(优选的碳数2-24，更优选的碳数2-16，又更优选的碳数2-10，特别优选的碳数2-4)诸如乙炔基、炔丙基、丁炔基、戊炔基等。

[0133] A1-A5是相同或不同的，且各自是氢原子或羟基保护基团。“羟基保护基团”的实例包括苄基、4-甲氧基苄基(即，对甲氧基苄基(PMB))，甲氧基乙氧基甲基，四氢吡喃基，三甲基甲硅烷基(TMS)，叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS或TBDMS)，叔丁基二苯基甲硅烷基(TBDPS)，叔丁氧基羰基，三氯乙氧基羰基，乙酰基，新戊酰基等。

[0134] 在本发明中，从源自糖(吡喃半乳糖)的环状结构的立体异构体采用α构型。

[0135] 当化合物(I)和化合物(II)具有源自除了糖的环状结构以外的结构(例如，除了糖的环状结构以外的部分的不对称碳等)的立体异构体，任何异构体也涵盖在本发明中，其可以是两种或更多种异构体的任何比率的混合物(包括外消旋物)。

[0136] 具体地，化合物(I)含有源自除了糖的环状结构以外的部分的不对称碳的光学异构体。在本发明中，化合物(I)可以是单一光学活性形式或两种或更多种光学活性形式的任何比率的混合物(包括外消旋物)。键合-NHC(=O)X-R4的不对称碳优选为S构型，且与键合-NHC(=O)X-R4的不对称碳邻近的键合OH的不对称碳优选为R构型。键合R3的不对称碳优选为R构型。

[0137] 此外，化合物(II)含有源自除了糖的环状结构以外的部分的不对称碳的光学异构体。在本发明中，化合物(II)可以是单一光学活性形式或两种或更多种光学活性形式的任何比率的混合物(包括外消旋物)。键合N3的不对称碳优选为S构型。键合-OA4的不对称碳优选为R构型。键合-OA5的不对称碳优选为R构型。

[0138] 化合物(I)和化合物(II)的盐优选为药学上可接受的盐；实例包括无机酸盐，诸如盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硝酸盐、和磷酸盐；有机酸盐，诸如琥珀酸盐、富马酸盐、乙酸盐、甲磺酸盐、和甲苯磺酸盐；碱金属盐，诸如钠盐和钾盐；碱土金属盐，诸如镁盐和钙盐；铵盐，诸如铵盐和烷基铵盐；等。

[0139] 本发明的优选的化合物(I)的具体实例显示于表1中，这不应被解释为限制性的。

[0140]

[0141] 下面解释本发明的化合物(I)和(II)的产生方法。

[0142] 化合物(I)和(II)可以根据以下方案中描述的方法或与其类似的方法来制备，但所述方法不限于此，并且可以根据需要进行适当修改。此类修改的实例包括烷基化、酰化、胺化、亚氨基化、卤化、还原、氧化等，对此利用通常用于该领域中的反应和方法。在这种情况下，根据官能团的类型，用合适的保护基团(可容易转化成官能团的基团)取代起始材料或中间体的阶段中的官能团对于产生技术有时是有效的。保护基团的化学特性、其引入和其去除的方法详细描述于，例如，T. Greene和P. Wuts “Protective Groups in Organic Synthesis” (第3版), John Wiley & Sons NY (1999)。

[0143] 作为起始材料化合物，除非特别指出，否则市售产品可以容易地获得，或可以根据本身已知的方法或者与其类似的方法来产生。

[0144] 本发明的化合物的合成方案显示如下(详细的反应遵循实施例)。在该方案中，特定基团和化合物有时用于描述。然而，对于本领域普通技术人员而言显然可以使用替代基团和化合物。

[0145] 方案1

[0146]

[0147] 其中，A是羟基保护基团，L是离去基团，其它符号定义如上。

[0148] 用于A的羟基保护基团的实例包括与用于A1-A5的上述基团类似的那些。用于L的离去基团的实例包括三氯乙亚胺酰基氧基(trichloroacetoimidoyloxy)、磷酸酯(phosphate) [-OP(O)(OPh)2等]、卤素(Br、F等)等。

[0149] [步骤1]

[0150] 在步骤1中，化合物A1的6位羟基得到保护。具体而言，使化合物A1与保护剂在有机溶剂中在碱存在的情况下反应。碱包括氨基化合物，诸如吡啶、2,6-卢剔啶、三乙胺等。有机硅试剂适合用作保护剂；例如，可以使用三氟甲磺酸叔丁基二甲基甲硅烷酯、叔丁基二甲基甲硅烷氯化物等。溶剂可以是任意的，只要它不抑制反应。作为溶剂，使用N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、四氢呋喃(THF)、六甲基磷酸三酰胺(HMPA)、其混合溶剂等。待使用碱的量通常是相对于化合物A1的1-2个当量。待使用的保护剂的量通常是每化合物A1的一个羟基的1-5个当量，优选1-2个当量。待使用溶剂的量通常是相对于化合物A1的10-50倍体积，优选10-20倍体积。该步骤优选在催化剂诸如4-(N,N-二甲基氨基)吡啶(DMAP)等存在的情况下进行。催化量足以作为待使用的催化剂的量。

[0151] 反应温度通常为-20℃至室温，优选0℃至室温；反应时间通常为1至48小时，优选12至24小时。反应完成后，将反应液在减压下浓缩，并将残余物通过柱层析纯化，由此可以以高产率获得化合物A2。

[0152] 起始材料化合物A1可以通过从文献(Carbohydr. Res., 1979, 73, 273)已知的方法来合成。

[0153] [步骤2]

[0154] 在步骤2中，将化合物A2的1位羟基转化为离去基团L，以得到化合物A3。例如，当离去基团是三氯乙亚胺酰基氧基(trichloroacetoimidoyloxy)时，化合物A3可以通过使化合物A2与三氯乙腈在碱存在的情况下反应来获得。

[0155] 待使用的三氯乙腈的量通常是相对于化合物A2的1-10个当量。碱的实例包括碳酸铯、二氮杂双环十一碳烯(DBU)、二氮杂双环壬烯(DBN)等。待使用碱的量通常是相对于化合物A2的0.01-2个当量。溶剂的实例包括二氯甲烷、二乙醚、THF等。待使用的溶剂的量通常是每1 mmol化合物A2的0.5-100 ml。反应温度通常为0-50℃，优选室温，且反应时间通常为30 min-24小时。

[0156] 化合物A3可以通过常规方法来分离。例如，化合物A3可以通过用溶剂稀释，用水、饱和碳酸氢钠水溶液、饱和盐水等洗涤，经无水碳酸钾等干燥，随后过滤和浓缩来获得。在必要时，可以进行进一步纯化。

[0157] [步骤3]

[0158] 在步骤3中，化合物A3与化合物A4在三氟甲磺酸三甲基甲硅烷酯和分子筛存在的情况下反应，以得到化合物A5。起始材料化合物A4可以通过从文献(Eur. J. Org. Chem., 1998, 291)已知的方法来合成。

[0159] 待使用的化合物A3的量通常是相对于化合物A4的0.1-10个当量。待使用的三氟甲磺酸三甲基甲硅烷酯的量通常是相对于化合物A3的0.01-3个当量。待使用的分子筛的量通常是每1 mmol化合物A3的1-2 g。溶剂的实例包括二氯甲烷、三氯甲烷、THF、二氧杂环己烷、乙酸乙酯等。待使用的溶剂的量通常是每1 mmol化合物A3的1-100 ml。反应温度通常为-78-60℃，且反应时间通常为0.1-24小时。

[0160] 化合物A5可以通过常规方法来分离。例如，反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩，并将残余物通过柱层析纯化，由此可以分离化合物A5。

[0161] [步骤4]

[0162] 在步骤4中，将6位羟基保护基团脱保护。脱保护方法根据保护基团的类型选自已知方法。例如，当保护基团A为TBS基团时，使化合物A5与四丁基氟化铵或酸在溶剂中反应。

[0163] 作为酸，优选使用强酸诸如三氟乙酸、对甲苯磺酸、盐酸等。待使用的酸的量通常是相对于化合物A5的催化量至10个当量，优选1至2个当量。

[0164] 待使用的四丁基氟化铵的量通常是相对于化合物A5的2个当量-20个当量。

[0165] 反应温度通常为-20-60℃，优选室温，且反应时间通常为1-24小时，优选2-12小时。

[0166] 优选作为溶剂的是水溶性溶剂，且四氢呋喃是特别优选的。待使用的溶剂的量通常是相对于化合物A5的1-100倍体积。

[0167] 反应完成后，使反应混合物进行使用具有不同极性的溶剂的柱层析，由此将其分离且纯化为化合物A6(α型)和化合物A7(β型)。

[0168] 方案2

[0169]

[0170] 其中每个符号如上所定义。

[0171] [步骤5]

[0172] 在步骤5中，在碱存在的情况下，使化合物A6与化合物A8反应，以得到化合物A9。起始材料化合物A8可以通过从文献已知的方法来合成(Synthesis, 1993, 103)。

[0173] 待使用的化合物A8的量通常是相对于化合物A6的1-10个当量，优选1-5个当量。

[0174] 碱的实例包括吡啶、三乙胺等，且吡啶是优选的。待使用的碱的量通常是相对于化合物A6的1-10个当量。可以使用任何溶剂，只要它不抑制反应，并且作为溶剂，使用N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、四氢呋喃(THF)、六甲基磷酸三酰胺(HMPA)、其混合溶剂等。THF和DMF的混合溶剂是优选的。待使用的溶剂的量通常是每1 mmol化合物A6的0.5-100 ml。反应温度为-20℃至室温，优选0-4℃，且反应时间通常为30 min-24小时。反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩，并将残余物通过柱层析纯化，以便以高产率获得化合物A9。

[0175] [步骤6]

[0176] 在步骤6中，使化合物A9与化合物A14在碱存在的情况下反应，以得到化合物A10。化合物A10涵盖在化合物(II)中。起始材料化合物A14根据R1和R2而变化，且通常可以通过从文献已知的方法来合成或可商购。

[0177] 待使用的化合物A14的量通常是相对于化合物A9的1-10个当量，优选2个当量。

[0178] 碱的实例包括4-(二甲基氨基)吡啶(DMAP)、二异丙基乙胺，DABCO等。待使用的碱的量通常是相对于化合物A9的1-10个当量，优选5个当量。溶剂的实例包括N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、THF、HMPA、其混合溶剂等。待使用的溶剂的量通常是每1 mmol化合物A9的0.5-50 ml。反应温度通常为-20-60℃，优选室温，且反应时间通常为10 min-24小时。反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩，并将残余物通过柱层析纯化，以便以高产率获得化合物A10。

[0179] [步骤7]

[0180] 在步骤7中，将化合物A10的叠氮基通过还原转化为氨基，以得到化合物A11。具体而言，使化合物A10与还原剂反应，然后与碱在有机溶剂中反应。还原剂的实例包括膦化合物，诸如三甲基膦、三丁基膦、三苯基膦等。作为溶剂，可以使用任何溶剂，只要它不抑制反应。例如，使用N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、四氢呋喃(THF)、六甲基磷酸三酰胺(HMPA)、其混合溶剂等。待使用的还原剂的量通常是每化合物A10的一个叠氮基的1-5个当量，优选1-2个当量。反应温度通常为-20-60℃，优选室温，且反应时间通常为1-48小时，优选12-24小时。反应完成后，将反应混合物用碱性水溶液诸如氢氧化钠水溶液等处理，且化合物A11可以通过常规方法分离和纯化。例如，将化合物用溶剂诸如乙酸乙酯等萃取。所获得的有机层用碳酸氢钠的饱和水溶液、饱和盐水等洗涤，且用无水碳酸钾等干燥。将溶液过滤后，将滤液在减压下浓缩，且可以将残余物通过柱层析纯化。

[0181] [步骤8]

[0182] 在步骤8中，将化合物A11的氨基酰化，以得到化合物A13。具体而言，使化合物A11与化合物A12在溶剂中，且在必要时，在碱存在的情况下反应。化合物A12(起始材料化合物)可以通过从文献(Org. Lett., 2006, 8, 3375)已知的方法来合成。

[0183] 尽管溶剂没有特别限制，只要反应不受抑制，例如，优选使用卤素溶剂(例如，二氯甲烷，氯仿)。

[0184] 在必要时，可以添加碱。碱的实例包括吡啶、三乙胺等，且三乙胺是优选的。

[0185] 待使用的溶剂的量通常是相对于化合物A11的5至100倍体积，优选20至50倍体积。

[0186] 待使用的碱的量通常是相对于化合物A11的10至50个当量，优选10至20个当量。

[0187] 待使用的化合物A12的量通常是相对于化合物A11的1至20个当量，优选1至2个当量。

[0188] 反应温度通常为-20℃至室温，优选为0至4℃，且反应时间通常为1至24小时，优选6至12小时。

[0189] 反应完成后，化合物A3可以通过常规方法来分离和纯化。例如，将反应混合物用水稀释，且用醚溶剂诸如二乙醚等；酯溶剂诸如乙酸乙酯等来萃取。当吡啶被用作碱时，将获得的有机层用饱和硫酸铜水溶液洗涤，用水、饱和盐水等洗涤，且经无水硫酸镁等干燥。过滤后，将滤液在减压下浓缩，且将残余物通过柱层析等纯化，以得到化合物A13。

[0190] [步骤9]

[0191] 在步骤9中，将化合物A13的羟基保护基团A1-A5脱保护，以得到化合物A(化合物(I))。脱保护方法根据保护基团的类型选自已知方法。例如，在苄基的情况下，使化合物A13在溶剂中在氢和还原催化剂存在的情况下反应。

[0192] 作为溶剂，醇溶剂和卤素溶剂的混合溶剂是优选的，且乙醇和氯仿的混合溶剂是更优选的。待使用的溶剂的量通常是相对于化合物A13的10至100倍体积，优选10至50倍体积。

[0193] 还原催化剂的实例包括氢氧化钯、氢氧化钯-活性炭、氧化铂、Raney镍等。作为待使用的还原催化剂的量，相对于化合物A13的催化量通常是足够的。

[0194] 反应时间通常是1-24小时，优选12-24小时。反应温度通常为0℃-室温，优选室温。

[0195] 反应完成后，将反应液过滤，将滤液在减压下浓缩，且将残余物通过柱层析纯化，由此可以以良好产率获得期望的化合物A。

[0196] 方案3

[0197]

[0198] [步骤10]

[0199] 在步骤10中，将化合物A6的6位羟基羰基化，并进一步键合至哌啶，以得到化合物G1。具体而言，使化合物A6在溶剂中与羰基化试剂反应，且在反应后，与哌啶反应。

[0200] 作为羰基化试剂，使用光气、其二聚物或三聚物、氯碳酸盐等。

[0201] 溶剂没有特别限制，只要它不抑制反应。例如，优选使用卤素溶剂(例如，亚甲基氯，二氯甲烷，氯仿)。

[0202] 必要时可以添加碱。碱的实例包括吡啶、三乙胺等，且吡啶是优选的。

[0203] 待使用的溶剂的量通常是相对于化合物A6的5至100倍体积，优选20至50倍体积。

[0204] 待使用的碱的量通常是相对于化合物A6的1-50个当量，优选2-20个当量。

[0205] 反应温度通常为0-50℃，优选在室温，且反应时间通常为30 min-24小时。

[0206] 化合物G1可以通过常规方法来分离。例如，反应完成后，将反应混合物在减压下浓缩，并将残余物通过柱层析纯化，由此可以分离化合物G1。

[0207] [步骤11]

[0208] 在步骤11中，将化合物G1转化为化合物G。化合物G涵盖在化合物(I)中。

[0209] 该步骤以与步骤7-9中相同的方式进行，除了起始化合物为化合物G1而非化合物A10。

[0210] 方案4

[0211]

[0212] [步骤12]

[0213] 在步骤12中，将化合物A11的氨基转化为脲基(ureido group)，以得到化合物N2。具体而言，使化合物A11与化合物N1在溶剂中，且在必要时，在碱存在的情况下反应。化合物N1(起始材料化合物)可以通过已知的方法来合成，或者是可商购的。

[0214] 尽管溶剂没有特别限制，只要反应不受抑制，但例如，优选使用卤素溶剂(例如，二氯甲烷，氯仿)。

[0215] 在必要时，可以添加碱。碱的实例包括吡啶、三乙胺等。

[0216] 待使用的溶剂的量通常是相对于化合物A11的5至100倍体积，优选20至50倍体积。

[0217] 待使用的碱的量通常是相对于化合物A11的10至50个当量，优选10至20个当量。

[0218] 待使用的化合物N1的量通常是相对于化合物A11的1至20个当量，优选1至10个当量。

[0219] 反应温度通常为-20℃至室温，且反应时间通常为1至24小时。

[0220] 反应完成后，化合物N2可以通过常规方法来分离和纯化。例如，将反应混合物用水稀释，且用醚溶剂诸如二乙醚等；酯溶剂诸如乙酸乙酯等来萃取。当吡啶被用作碱时，将获得的有机层用饱和硫酸铜水溶液洗涤，用水、饱和盐水等洗涤，且经无水硫酸镁等干燥。过滤后，将滤液在减压下浓缩，且将残余物通过柱层析等纯化，以得到化合物N2。

[0221] [步骤13]

[0222] 在步骤13中，将化合物N2转化为化合物N。化合物N涵盖在化合物(I)中。

[0223] 该步骤以与步骤9中相同的方式进行，除了起始化合物为化合物N2而非化合物A13。

[0224] 通过施用本发明的化合物(I)或其盐(以下也称为“本发明的氨基甲酸酯糖脂”)，NKT细胞可被活化，且IFN-γ产生可以得到选择性且优先诱导。而且，与常规α半乳糖苷神经酰胺不同，IL-4产生的增加得到抑制。因此，癌症或感染的预防或治疗等是可能的，而不加重疾病状态。本发明的糖脂的氨基甲酸酯基团与酰胺基团相比不容易被代谢。因此，NKT细胞可以被长时间强烈活化。此外，甚至在施用比α半乳糖苷神经酰胺的剂量更小的剂量的情况下，NKT细胞也可以被有效活化，以增加产生的IFN-γ的量。

[0225] 通过用本发明的氨基甲酸酯糖脂刺激人树突状细胞且将树突状细胞施用于受试者，可以获得更强的IFN-γ产生诱导作用。此处使用的人树突状细胞没有特别限制，只要它是能够经由本发明的氨基甲酸酯糖脂活化NKT细胞的人源树突状细胞(hDC)，并且可以是髓样树突状细胞(DC1)和淋巴样树突状细胞(DC2)中任一种，优选DC1。hDC可以通过本身已知的任何方法来制备，并且还可以从人表皮、淋巴样组织的T细胞区域、外周非淋巴样组织、输入淋巴、真皮等分离。优选地，它可以通过，例如，通过密度梯度离心法等从人外周血等分离单核细胞、髓细胞等，和将其在GM-CSF和IL-4存在的情况下培养约7天-约10天来制备。

[0226] hDC可以用本发明的氨基甲酸酯糖脂通过众所周知的常规方法进行刺激。例如，hDC可以通过在含有浓度约100-约200 ng/ml的本发明的氨基甲酸酯糖脂的培养基(例如，RPMI-1640培养基等)中培养约12-约48小时进行刺激。刺激也可以通过在GM-CSF和IL-4存在的情况下在培养和成熟上述未成熟的hDC的过程中将本发明的糖脂添加至培养基中来进行。

[0227] 同时NKT细胞的活化的存在或不存在和其水平可以通过本身已知的任何方法来测量。例如，NKT细胞的活化可以通过使用活化的NKT细胞产生的细胞因子的量作为指标来评价。作为活化的NKT细胞产生的细胞因子，可以提及IFN-γ、IL-4、GM-CSF、IL-10等。本发明的糖脂选择性诱导IFN-γ的产生。

[0228] NKT细胞中细胞因子的产生可以通过，例如，使用针对细胞因子的抗体，来测量。例如，NKT细胞的活化也可以通过常规的免疫测定法(诸如ELISA方法、RIA方法、FIA方法、EIA方法等)和通过使用细胞培养上清液进行评价。在一个优选的实施方案中，方法包括使含有NKT细胞的样品与固定有抗细胞因子抗体的固相接触，和固-液分离后，通过夹心法通过使用标记的抗细胞因子抗体来检测和计数结合至固相的细胞因子。标记的实例包括酶、荧光物质、发光物质、染料、放射性同位素等。也可以使用生物素化的抗细胞因子抗体和标记结合的(链霉)抗生物素蛋白。使用酶诸如碱性磷酸酶等作为标记的测定系统已知为用于检测产生细胞因子的细胞的ELISPOT的名称。

[0229] 可以由本发明的氨基甲酸酯糖脂预防或治疗的疾病没有特别限制，只要预期IFN-γ产生的增加显示对其直接或间接的预防或治疗效果。其实例包括哺乳动物(例如，小鼠、猫、牛、狗、马、山羊、猴、人)中的各种癌(例如，乳腺癌、结肠直肠癌、肺癌、前列腺癌、食道癌、胃癌、肝癌、胆道癌、脾癌、肾癌、膀胱癌、子宫癌、睾丸癌、甲状腺癌、胰腺癌、脑肿瘤、卵巢癌、皮肤癌、血液肿瘤(例如，成人T细胞白血病、慢性髓样白血病、恶性淋巴瘤等)等)；各种感染，例如，病毒疾病(例如，由于乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒导致的病毒性肝炎、疱疹、获得性免疫缺陷综合征(AIDS)等)、细菌感染(例如，药物抗性结核病、非典型分枝杆菌感染等)、霉菌病(例如，念珠菌病等)等。

[0230] 此外，只要不损害功效，本发明的氨基甲酸酯糖脂可以与其它药物(例如，现有的抗癌剂、抗病毒药、抗细菌药、抗真菌药等)组合使用。在这种情况下，施用期间没有限制，且这些药剂可以同时或以时间间隔施用于受试者。剂量可以通过考虑临床上采用的剂量作为标准来适当确定。本发明的氨基甲酸酯糖脂与并用药物的混合比例可以根据施用受试者、施用途径、目标疾病、病况、组合等适当地确定。

[0231] 现有抗癌剂的实例包括化疗药物、激素治疗药物、免疫治疗药物等。

[0232] 化疗药物的实例包括烷基化药物(例如，环磷酰胺、异环磷酰胺(Iphosphamide)、尼莫司汀、雷莫司汀、卡波醌(Carboquone)等)，抗代谢药物(例如，甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶、替加氟、卡莫氟、UFT、Doxyfluridine、阿糖胞苷、依诺他滨、巯嘌呤、巯基嘌呤核苷、硫鸟嘌呤等)，抗癌抗生素(例如，丝裂霉素(Mytomicin)、阿霉素、柔红霉素、表柔比星、吡柔比星、伊达比星、博来霉素、培洛霉素(Peplomycin)、放线菌素等)，源自植物的抗癌剂(例如，长春新碱、长春花碱、长春地辛、依托泊苷、喜树碱、伊立替康等)，顺铂，卡铂，奈达铂，紫杉醇，多西他赛，雌莫司汀等。

[0233] 激素治疗药物的实例包括肾上腺皮质激素(例如，泼尼松龙、泼尼松、地塞米松、醋酸可的松等)，雌激素(例如，雌二醇、乙炔雌二醇、磷雌酚(Fosfestrol)、Clorotrianisene等)，抗雌激素(例如，Epithiostanol、美雄烷(Mepitiostane)、他莫昔芬、克罗米酚等)，黄体生成激素(例如己酸羟孕酮、地屈孕酮、甲羟孕酮、诺塞甾酮(Norethysterone)、炔诺酮等)，LHRH衍生物(例如，醋酸亮丙瑞林等)等。

[0234] 免疫治疗药物的实例包括源自微生物或细菌的组分(例如，胞壁酰二肽衍生物、毕西巴尼(Picibanil)等)，具有免疫增强活性的多糖(例如，香菇多糖、裂裥菌素、云芝多糖等)，基因工程改造的细胞因子(例如，干扰素、白介素-2(IL-2)、白介素-12(IL-12)、肿瘤坏死因子(TNF)等)，集落刺激剂(例如，粒细胞集落刺激因子、红细胞生成素等)等。

[0235] 抗病毒药物的实例包括核酸合成抑制抗病毒药物(例如，阿昔洛韦、更昔洛韦、阿糖腺苷、膦甲酸、齐多夫定、拉米夫定、去羟肌苷等)，细胞内侵入抑制性抗病毒药物(例如，金刚烷胺、扎那米韦、奥司他韦等)，宿主预防能力增强抗病毒药物(例如干扰素、异丙肌苷等)等。

[0236] 抗细菌药物的实例包括青霉素抗生素类(例如，sawacillin、pasetocin、yamacillin、bacacil、viccillin、pentrex等)，头孢抗生素类(例如，对头孢菌素IV(keflex)、kefral、cefzon、tomiron、cefspan、pansporin等)，大环内酯抗生素类(例如，赤藓红、clarith、klaricid、rulid、交沙霉素等)，四环素抗生素类(例如，米诺霉素(minomycin)、强力霉素(vibramycin)、hydramycin、ledermycin等)，磷霉素抗生素类(例如，磷霉素(fosmicin)、eukocin等)，氨基糖苷抗生素类(例如，卡那霉素等)，新的喹诺酮抗细菌药物(例如，可乐必妥(cravit)、泰利必妥(tarivid)、baccidal、tosuxacin、ozex等)等。

[0237] 抗真菌剂的实例包括多烯抗真菌药物(例如，抗滴虫霉素、两性霉素B、制霉菌素等)，咪唑抗真菌药物(例如，益康唑、咪康唑、克霉唑等)，三唑抗真菌药(例如，氟康唑、itoraconazole等)，烯丙胺抗真菌药物(例如，布替萘芬、特比萘芬盐酸盐等)，氟胞嘧啶(5-FC)抗真菌药物(例如，氟胞嘧啶等)等。

[0238] 当将本发明的氨基甲酸酯糖脂施用于人时，其可以原样或与药学上可接受的载体、赋形剂、稀释剂等共混后以药物组合物诸如口服制剂(例如，粉末、颗粒、片剂、胶囊)、肠胃外制剂(例如，注射剂)和栓剂(例如，直肠栓剂、阴道栓剂)的形式口服或肠胃外安全地施用。这些制剂可以通过常规已知的方法来产生。

[0239] 注射的实例包括皮下注射、静脉内注射、肌内注射、腹膜内注射、滴注等。注射剂可以通过在增溶剂(例如，β-环糊精)，分散剂(如，羧甲基纤维素、藻酸钠)，防腐剂(例如，对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、苯甲醇、氯丁醇)，等渗剂(例如，氯化钠、甘油、山梨糖醇、葡萄糖)等存在的情况下通过常规方法处理本发明的糖脂来制备为含水注射剂。注射剂也可以通过将本发明的糖脂溶解、悬浮或乳化在植物油(例如，橄榄油、芝麻油、花生油、棉子油、玉米油)，丙二醇等中来制备成油性注射剂。

[0240] 口服制剂也可以通过以下产生：向本发明的氨基甲酸酯糖脂适当时添加，例如，赋形剂(例如，乳糖、蔗糖、淀粉)，崩解剂(例如，淀粉、碳酸钙)，粘合剂(例如，淀粉、阿拉伯胶、羧甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基纤维素)或润滑剂(例如，滑石、硬脂酸镁、聚乙二醇)等，将混合物压缩成形，然后，根据需要，用羟丙基甲基纤维素等包衣混合物。栓剂可以通过将本发明的氨基甲酸酯糖脂与非刺激性赋形剂(例如，聚乙二醇、高级脂肪酸的甘油酯)共混来产生。

[0241] 本发明的氨基甲酸酯糖脂的剂量根据年龄、体重、症状、剂型、施用方法、施用持续时间等变化；例如，对于患者(成人，体重约60 kg)，0.1至1 mg/kg，优选0.5至1 mg/kg，更优选0.8至1 mg/kg的每日剂量以单一或几个分份口服或肠胃外施用。

[0242] 为了试图诱导IFN-γ产生，也可能用本发明的氨基甲酸酯糖脂刺激树突状细胞并将所述树突状细胞施用于患者。因此，本发明提供了含有用本发明的氨基甲酸酯糖脂刺激的树突状细胞的选择性IFN-γ产生诱导剂。

[0243] 所述试剂可以根据常规方式通过混合有效量的上述用本发明的氨基甲酸酯糖脂刺激的hDC与药学上可接受的载体等来制备为口服/肠胃外制剂。通常将药剂制备为肠胃外制剂诸如注射剂、悬浮液、滴注剂等。可以包含在肠胃外制剂中的药学上可接受的载体的实例包括注射用水溶液，诸如生理盐水、含有葡萄糖和其它助剂(例如，D-山梨醇、D-甘露醇、氯化钠等)等的等渗溶液。本发明的药剂可以与，例如，缓冲剂(例如，磷酸盐缓冲液、乙酸钠缓冲液)，安慰剂(例如，苯扎氯铵、盐酸普鲁卡因等)，稳定剂(例如，人血清白蛋白，聚乙二醇等)，防腐剂，抗氧化剂等共混。当将药剂配制为水性悬浮液时，用本发明的氨基甲酸酯糖脂刺激的hDC只需要以约5×106-约1×107个细胞/ml悬浮在上述水溶液中。由于因此获得的制剂是稳定且低毒性的，所以可以将其安全地施用于人。尽管施用的受试者优选为hDC来源的患者他/她自己(即，自体移植)，但当受试者是经预测具有与待施用的hDC的相容性的人时，受试者没有限制。施用方法没有特别限制，且可以采用口服或肠胃外施用。优选的是注射或滴注施用，且可以提及静脉内施用、皮下施用、皮内施用、肌内施用、腹膜内施用、直接施用于患部等。尽管本发明的药剂的剂量根据施用受试者、目标器官、症状、施用方法等变5 7
化，但其单剂量通常为约6×10-约1×10个细胞的量的hDC，将其，例如，以约1-约2周时间间隔便利地肠胃外施用于成年患者(体重60 kg)约4-约8次。
实施例

[0244] 本发明在下面通过参照实施例和实验例更详细地进行解释，所述实施例和实验例不应当被解释为限制性的。

[0245] 实施例1：RCAI-123(涵盖在化合物A中)的合成和纯化方法

[0246]

[0247] 化合物2的合成

[0248] 化合物1可以通过从文献(Carbohydr. Res., 1979, 73, 273)已知的方法来合成。在0℃，向N,N-二甲基甲酰胺(120 mL)中化合物1(6.03 g, 13.4 mmol)和三乙胺(9.3 mL, 67 mmol)的溶液中添加叔丁基二甲基甲硅烷基氯(2.21 g, 14.7 mmol)和4-(N,N-二甲基氨基)吡啶(163 mg, 1.33 mmol)。将反应混合物在室温搅拌15小时，添加水，并将混合物用乙酸乙酯萃取。将有机层依次用水和饱和盐水洗涤，并经无水硫酸镁干燥。过滤之后，将滤液在减压下浓缩并将溶剂蒸发。将残余物通过硅胶柱层析(80 g,己烷:乙酸乙酯=10:1)纯化以得到作为无色油状物的化合物2(7.04 g, 93%, α-型:β-型=约3:2的混合物)。

[0249]

[0250] 化合物3的合成

[0251] 在室温向二氯甲烷(50 mL)中化合物2(2.02 g, 3.58 mmol)的溶液中添加三氯乙腈(3.65 mL, 36.1 mmol)和碳酸铯(590 mg, 1.81 mmol)。将反应混合物在室温搅拌16小时，添加水，并将混合物用二氯甲烷萃取。将有机层用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，并经无水碳酸钾干燥。过滤之后，将滤液在减压下浓缩，并将溶剂蒸发以得到作为橙色油状物的目标化合物3(2.6 g, α-型:β-型=约2:1的混合物)。该化合物无需进一步纯化即用于下一操作。

[0252]

[0253] 化合物5的合成

[0254] 化合物4可以通过从文献(Eur. J. Org. Chem., 1998, 291)已知的方法来合成。在40℃(油浴温度)，向无水二氯甲烷(50 mL)中化合物4 (1.51 g, 2.88 mmol)、通过上述方法获得的化合物3 (2.6 g)和分子筛(4A, 粉末, 9.3 g)的悬浮液中添加三氟甲磺酸三甲基甲硅烷酯(26 μL, 0.14 mmol)。将反应混合物在40℃(油浴温度)搅拌15分钟，冷却至室温并过滤。过滤之后，将滤液用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，并将有机层经无水碳酸钾干燥。过滤之后，将滤液在减压下浓缩并将溶剂蒸发。将残余物通过硅胶柱层析(50 g, 己烷:
乙酸乙酯=20:1)纯化以得到作为无色油状物的化合物5(2.69 g, 87%, α-型:β-型=约3:1的混合物)。

[0255]

[0256] 化合物6、7的合成

[0257] 在室温，向四氢呋喃(50 mL)中通过上述方法获得的化合物5(2.69 g, 2.51 mmol,α-型:β-型=约3:1的混合物)的溶液中添加四氢呋喃中四丁基氟化铵的溶液(1.0M, 5.0 mL, 5.0 mmol)。将反应混合物在室温搅拌3小时，添加水，并将混合物用乙酸乙酯萃取。将有机层依次用水和饱和盐水洗涤，并经无水硫酸镁干燥。过滤之后，将滤液在减压下浓缩并将溶剂蒸发。将残余物通过硅胶柱层析(30 g)纯化以得到各自作为无色油状物的化合物6(α-型, 己烷:乙酸乙酯=5:1, 1.67 g, 70%)和化合物7(β-型, 己烷:乙酸乙酯=3:1, 
612 mg, 25%)。

[0258]

[0259]

[0260]

[0261]

[0262]

[0263]

[0264] 化合物9的合成

[0265] 化合物8可以通过从文献(Synthesis, 1993, 103)已知的方法来合成。在0℃，向四氢呋喃-N,N―二甲基甲酰胺(1:1, 40 mL)中化合物6(1.05 g, 1.10 mmol)和吡啶(444 μL, 5.49 mmol)的溶液中添加化合物8(589 mg, 3.32 mmol)。将反应混合物在室温搅拌16小时，添加水，并将混合物用乙酸乙酯萃取。将有机层依次用水、饱和硫酸铜水溶液、水、饱和碳酸氢钠水溶液和饱和盐水洗涤，并经无水硫酸镁干燥。过滤之后，将滤液在减压下浓缩并将溶剂蒸发。将残余物通过硅胶柱层析(30 g, 己烷:乙酸乙酯=5:1)纯化以得到作为无色油状物的化合物9(1.23g, 定量)。

[0266]

[0267]

[0268]

[0269]

[0270] 化合物10的合成

[0271] 在室温向N,N-二甲基甲酰胺(5 mL)中化合物9(122 mg, 0.111 mmol)和二异丙基乙基胺(97 μL, 0.557 mmol)的溶液中添加二甲基胺盐酸盐(18 mg, 0.221 mmol)。将反应混合物在室温搅拌17小时，添加水，并将混合物用乙酸乙酯萃取。将有机层依次用水、饱和碳酸氢钠水溶液和饱和盐水洗涤，并经无水硫酸镁干燥。过滤之后，将滤液在减压下浓缩并将溶剂蒸发。将残余物通过硅胶柱层析(30 g, 己烷:乙酸乙酯=5:1)纯化以得到作为无色油状物的化合物10(101 mg, 89%)。

[0272]

[0273]

[0274]

[0275]

[0276] 化合物11的合成

[0277] 在0℃，向无水四氢呋喃(10 mL)中化合物10(217 mg, 0.211 mmol)的溶液中添加四氢呋喃中三甲基膦的溶液(1.0 M, 1.1 mL, 1.1 mmol)。将反应混合物在室温搅拌15小时，并添加氢氧化钠水溶液(1.0 M, 2.2 mL, 2.2 mmol)。在室温进一步搅拌6小时之后，添加水，并将混合物用乙酸乙酯萃取。将有机层依次用水、饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，并经无水碳酸钾干燥。过滤之后，将滤液在减压下浓缩并将溶剂蒸发。将残余物通过硅胶柱层析(NH二氧化硅, 30 g, 己烷:乙酸乙酯=1:1)纯化以得到作为无色油状物的化合物11(161 mg, 76%)。

[0278]

[0279]

[0280]

[0281]

[0282] 化合物13的合成

[0283] 化合物12可以通过从文献(Org. Lett., 2006, 8, 3375)已知的方法来合成。在0℃，向无水二氯甲烷(10 mL)中化合物11 (151 mg, 0.151 mmol)和三乙胺(105 μL, 0.757 mmol)的溶液中添加无水二氯甲烷(2 mL)中化合物12(70 mg, 0.17 mmol)的溶液。将反应混合物在室温搅拌18小时，添加水，并将混合物用乙酸乙酯萃取。将有机层依次用水、饱和碳酸氢钠水溶液和饱和盐水洗涤，并经无水硫酸镁干燥。过滤之后，将滤液在减压下浓缩并将溶剂蒸发。将残余物通过硅胶柱层析(30 g, 己烷:乙酸乙酯=4:1)纯化以得到作为无色固体的化合物13(183 mg, 88%)。

[0284]

[0285]

[0286] RCAI-123的合成

[0287] 在室温向乙醇-氯仿(4:1, 10 mL)中化合物13 (179 mg, 0.130 mmol)的溶液中添加氢氧化钯-活性碳(20%, 湿重, 44 mg)。在氢气气氛下，将混合物在室温搅拌15小时，并用氯仿-甲醇(5:1)的混合溶剂稀释。过滤之后，将滤液在减压下浓缩并将溶剂蒸发。将残余物通过硅胶柱层析(6 g, 氯仿:甲醇=25:2)纯化以得到作为无色粉末的RCAI-123 (101 mg, 84%)。

[0288]

[0289]

[0290]

[0291] 实施例2：RCAI-124 (化合物B)的合成和纯化方法

[0292] 通过与实施例1中的方法类似的方法，合成并纯化RCAI-124。

[0293] RCAI-124的物理特性显示如下。

[0294]

[0295]

[0296]

[0297] 实施例3：RCAI-137 (化合物C)的合成和纯化方法

[0298] 通过与实施例1中的方法类似的方法，合成并纯化RCAI-137。

[0299] RCAI-137的物理特性显示如下。

[0300]

[0301]

[0302]

[0303] 实施例4：RCAI-138 (化合物D)的合成和纯化方法

[0304] 通过与实施例1中的方法类似的方法，合成并纯化RCAI-138。

[0305] RCAI-138的物理特性显示如下。

[0306]

[0307]

[0308]

[0309] 实施例5：RCAI-148 (化合物E)的合成和纯化方法

[0310] 通过与实施例1中的方法类似的方法，合成并纯化RCAI-148。

[0311] RCAI-148的物理特性显示如下。

[0312]

[0313]

[0314]

[0315] 实施例6：RCAI-149 (化合物F)的合成和纯化方法

[0316] 通过与实施例1中的方法类似的方法，合成并纯化RCAI-149。

[0317] RCAI-149的物理特性显示如下。

[0318]

[0319]

[0320]

[0321] 实施例7：RCAI-121(涵盖在化合物G中)的合成和纯化方法

[0322]

[0323] 化合物1’的合成

[0324] 在0℃，向无水二氯甲烷(10 mL)中通过上述方法获得的化合物6(250 mg, 0.261 mmol)和吡啶(106 μL, 1.31 mmol)的溶液中添加三光气(52 mg, 0.175 mmol)。将反应混合物在室温搅拌1小时，并添加哌啶(129 μL, 1.30 mmol)。在室温进一步搅拌15小时之后，添加水，并将混合物用乙酸乙酯萃取。将有机层依次用水、1M盐酸、水、饱和碳酸氢钠水溶液和饱和盐水洗涤，并经无水硫酸镁干燥。过滤之后，将滤液在减压下浓缩并将溶剂蒸发。将残余物通过硅胶柱层析(30 g, 己烷:乙酸乙酯=6:1)纯化以得到作为无色油状物的化合物1’(267 mg, 96%)。

[0325]

[0326]

[0327]

[0328] RCAI-121的合成和纯化方法

[0329] 通过与将化合物10转化为RCAI-123的方法类似的方法，从化合物1’合成并纯化化合物RCAI-121。

[0330] RCAI-121的物理特性显示如下。

[0331]

[0332]

[0333]

[0334] 实施例8：RCAI-122 (化合物H)的合成和纯化方法

[0335] 通过与实施例7中的方法类似的方法，合成并纯化RCAI-122。

[0336] RCAI-122的物理特性显示如下。

[0337]

[0338]

[0339]

[0340] 实施例9：RCAI-131 (化合物I)的合成和纯化方法

[0341] 通过与实施例7中的方法类似的方法，合成并纯化RCAI-131。

[0342] RCAI-131的物理特性显示如下。

[0343]

[0344]

[0345]

[0346] 实施例10：RCAI-132 (化合物J)的合成和纯化方法

[0347] 通过与实施例7中的方法类似的方法，合成并纯化RCAI-132。

[0348] RCAI-132的物理特性显示如下。

[0349]

[0350]

[0351]

[0352] 实施例11：RCAI-139 (化合物K)的合成和纯化方法

[0353] 通过与实施例7中的方法类似的方法，合成并纯化RCAI-139。

[0354] RCAI-139的物理特性显示如下。

[0355]

[0356]

[0357]

[0358] 实施例12：RCAI-140 (化合物L)的合成和纯化方法

[0359] 通过与实施例7中的方法类似的方法，合成并纯化RCAI-140。

[0360] RCAI-140的物理特性显示如下。

[0361]

[0362]

[0363]

[0364] 实施例13：RCAI-141 (化合物M)的合成和纯化方法

[0365] 通过与实施例7中的方法类似的方法，合成并纯化RCAI-141。

[0366] RCAI-141的物理特性显示如下。

[0367]

[0368]

[0369]

[0370] 实施例14：RCAI-150(涵盖在化合物N中)的合成和纯化方法

[0371]

[0372] 化合物2’’的合成

[0373] 在0℃，向氯仿(5 mL)中通过上述方法获得的化合物11(119 mg, 0.119 mmol)的溶液中添加可商购的十六烷基异氰酸酯(化合物1’’, 111 μL, 0.357 mmol)。将反应混合物在室温搅拌14小时，添加水，并将混合物用乙酸乙酯萃取。将有机层依次用水、饱和碳酸氢钠水溶液和饱和盐水洗涤，并经无水硫酸镁干燥。过滤之后，将滤液在减压下浓缩并将溶剂蒸发。将残余物通过硅胶柱层析(30 g, 己烷:乙酸乙酯=3:1)纯化以得到作为无色固体的化合物2’’(147 mg, 97%)。

[0374]

[0375]

[0376]

[0377] RCAI-150的合成和纯化方法

[0378] 通过与将化合物13转化为RCAI-123的方法类似的方法，从化合物2’’合成并纯化RCAI-150。

[0379] 化合物RCAI-150的物理特性显示如下。

[0380]

[0381]

[0382]

[0383] 实验例1：氨基甲酸酯糖脂的生物活性试验

[0384] 制备二甲亚砜(DMSO)中α-GalCer (KRN7000)、RCAI-123、RCAI-124、RCAI-137、RCAI-138、RCAI-148、RCAI-149、RCAI-121、RCAI-122、RCAI-131、RCAI-132、RCAI-139、RCAI-140、RCAI-141 和RCAI-150中每一种的溶液，浓度为1 mg/mL。将上述DMSO溶液用含有0.5% tween 20 (Bio-Rad)的磷酸盐缓冲液(Invitrogen)稀释5倍，并用磷酸盐缓冲液进一步稀释20倍，使得当从每只小鼠的尾静脉施用200 μL时，剂量变为100 μg/kg体重。

[0385] 向每组三只C57BL/6小鼠的尾静脉各注射制备的RCAI-123、RCAI-124、RCAI-137、RCAI-138、RCAI-148、RCAI-149、RCAI-121、RCAI-122、RCAI-131、RCAI-132、RCAI-139、RCAI-140、RCAI-141 或RCAI-150的溶液(200 μL)(每只小鼠施用约2 μg)。作为对照物质，使用α-GalCer (KRN7000)，并将使得所述剂量变为100 μg/kg体重的相同的方式制备的α-GalCer (KRN7000)的溶液(200 μL)注射到尾静脉。临施用前和过去1、3、6、12、24、32、48、60 和72小时之后的血液(80 μL)从眼眶静脉丛收集，并制备血浆。

[0386] 临施用RCAI-123前和施用后血浆中每种细胞因子的含量通过细胞计数珠阵列(CBA)系统(BD Biosciences)(这是ELISA方法之一)进行测量。

[0387] 临施用前和过去1、3、6、12、24、32、48、60 和72小时之后的血浆中IFN-γ的含量的测量结果(平均值)和其标准偏差(STDEV)显示于图1中。临施用前和从施用过去3、6和12小时后的血浆中IL-4的含量的测量结果(平均值)和其标准偏差(STDEV)显示于图2中。临施用前和从施用过去3、6和12小时后的血浆中IL-12的含量的测量结果(平均值)和其标准偏差(STDEV)显示于图3中。

[0388] 上述结果揭示，RCAI-123在与α-GalCer (KRN7000)相同的程度诱导IFN-γ产生，但与α-GalCer (KRN7000)相比诱导少量的IL-4产生，这表明RCAI-123具有偏向IFN-γ的细胞因子产生诱导活性。即，通过将糖部分的6-位羟基转化为氨基甲酸酯键，已经开发能够诱导偏向Th1型的细胞因子产生的新型化合物。

[0389] 实验例2：用氨基甲酸酯糖脂刺激的树突状细胞的生物学活性试验

[0390] (树突状细胞的制备)

[0391] 骨髓细胞从C57BL/6J小鼠的股骨收集，用红血细胞裂解缓冲液(SIGMA)溶血，且制备单核细胞。此外，将Fcγ受体阳性细胞根据淘选方法使用人γ球蛋白(SIGMA)去除，以浓缩未分化的细胞。

[0392] 将密度为2.7×105/cm2的浓缩的未分化单核细胞在含有5 ng/mL GM-CSF (R&D)的RPMI1640 (10% FBS)培养基(Invitrogen)中在37℃、5% CO2的条件下培养5天，以诱导分化成含有CD11c-阳性树突状细胞的细胞。

[0393] 为了从分化诱导细胞回收目标CD11c-阳性树突状细胞，将细胞在400 μL RPMI1640 (10% FBS)中悬浮，添加100 μL CD11c微珠(Milltenyi biotech)，并将混合物在4℃孵育15 min。将混合物用MACS缓冲液洗涤，并将CD11c-阳性树突状细胞通过阳性选择使用LS柱回收。

[0394] 将回收的树突状细胞通过以下用糖脂刺激：以3.1×105/cm2的密度在含有浓度为100 ng/mL的糖脂的RPMI1640 (10% FBS)培养基中在37℃、5% CO2的条件下培养24天。为了制备糖脂溶液，首先制备浓度为1 mg/mL的二甲亚砜(DMSO)溶液。将溶液用含有0.5% tween 
20 (Bio-Rad)的磷酸盐缓冲液(Invitrogen)稀释5倍，并用磷酸盐缓冲液进一步稀释2倍。

[0395] 用糖脂刺激的树突状细胞用磷酸盐缓冲液洗涤，用磷酸盐缓冲液调节至2.5×106个细胞/mL的浓度，并将200 μL，即，5×105个细胞，注入C57BL/6小鼠的尾静脉(每组3只小鼠)。

[0396] 作为糖脂，使用RCAI-121、RCAI-122、RCAI-123、RCAI-124、RCAI-131、RCAI-132、RCAI-137、RCAI-138、RCAI-139、RCAI-140 和RCAI-141的氨基甲酸酯糖脂，并使用α-GalCer (KRN7000)作为对照物质。

[0397] 临施用前和从施用过去1、3、6、12、24、32、48、60 和72小时之后从眼眶静脉丛收集血液(80 μL)，并制备血浆。

[0398] 临施用前和从施用过去1、3、6、12、24、32、48、60 和72小时之后的血浆中IFN-γ的含量通过夹心ELISA法(ENDOGEN)进行测量。IFN-γ的产生量的测量结果(平均值)和其标准偏差(STDEV)显示于图4-6。

[0399] 临施用前和从施用过去1、3、6、12、24、32、48、60 和72小时之后的血浆中IL-4的含量通过通过细胞计数珠阵列(CBA)系统(BD Biosciences)(这是ELISA方法之一)进行测量。IL-4的产生量的测量结果(平均值)和其标准偏差(STDEV)显示于图7-9。

[0400] 临施用前和从施用过去1、3、6、12、24、32、48、60 和72小时之后的血浆中IL-12的含量通过CBA系统(BD Biosciences)进行测量。IL-12的产生量的测量结果(平均值)和其标准偏差(STDEV)显示于图10-12。

[0401] 上述结果揭示，较强的IFN-γ产生可以通过用本发明的氨基甲酸酯糖脂刺激树突状细胞并将刺激的树突状细胞施用于活体而选择性诱导。

[0402] 由于本发明开发的其中糖部分的6-位羟基被转化为氨基甲酸酯键的糖脂可以非常容易地合成，并能够与KRN7000相比诱导偏向IFN-γ的细胞因子产生，所以本发明可以提供有效用于治疗癌症和诱导佐剂作用的药物、其制备方法及其用途。

[0403] 此外，IFN-γ产生可以通过用本发明的糖脂刺激树突状细胞并施用树突状细胞而更加得到加强。

[0404] 本申请基于在日本提交的专利申请号2012-101384(申请日：2012年4月26日)，其内容完全并入本文。