一种用于抗衰老的干细胞分泌素及其制备方法和应用 |
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| 申请号 | CN201710639267.9 | 申请日 | 2017-07-31 | 公开(公告)号 | CN107446974A | 公开(公告)日 | 2017-12-08 |
| 申请人 | 深圳中旭细胞再生医学研究有限公司; | 发明人 | 张锦芳; 卓成柳; 吴中泽; | ||||
| 摘要 | 本 发明 公开了一种用于抗衰老的干细胞分泌素及其制备方法和应用，制备时，采集间充质干细胞，培养2-5天，收集培养细胞，经PBS缓冲液洗涤后，加入 水 裂解得到裂解液；再将裂解液低温离心，收集上清液，加入上清液 质量 1-2％的人血 白蛋白 即得干细胞分泌素。间充质干细胞包括骨髓、脐带、胎盘与脂肪。本发明制得的干细胞分泌素能够具有抗衰老的效果，该干细胞分泌素来源于骨髓间充质干细胞。本发明证明该分泌素，与未处理的相比，能延缓人的成体MSCs的衰老，所以有潜在延缓衰老的潜能。本发明药物的使用方式可以是静脉注射或局部使用。 | ||||||
| 权利要求 | 1.一种用于抗衰老的干细胞分泌素的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： |
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| 说明书全文 | 一种用于抗衰老的干细胞分泌素及其制备方法和应用技术领域背景技术[0002] 干细胞(stem cell)是一类具有自我复制能力(self-renewing)的多潜能细胞。在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞。根据干细胞所处的发育阶段分为胚胎干细胞(embryonic stem cell，ES细胞)和成体干细胞(somatic stem cell)。根据干细胞的发育潜能分为三类：全能干细胞(totipotent stem cell，TSC)、多能干细胞(pluripotent stem cell)和单能干细胞(unipotent stem cell)(专能干细胞)。干细胞(Stem Cell)是一种未充分分化，尚不成熟的细胞，具有再生各种组织器官和人体的潜在功能，医学界称为“万用细胞”。 [0003] 干细胞被誉为“不老泉”，在再生医学领域有巨大的应用前景，如骨髓移植，神经损伤性疾病、肌萎缩症、阿尔茨海默综合症等疾病的治疗方面。应用干细胞治疗疾病较传统方法具有很多优点：(1)低毒性(或无毒性)，一次给药，长期有效；(2)不需要完全了解疾病发病的确切机制；(3)还可能应用自身干细胞移植，避免产生免疫排斥反应。因此，干细胞尤其是间充质干细胞，因其来源方便、具有多能性、而又不涉及伦理问题，在临床应用中首当其冲。 [0004] 干细胞在临床应用中还是存在一定的风险，例如细菌污染，还有一定的致瘤性。干细胞生长分化时，会分泌细胞分泌素，可以称之为细胞因子，里面包含多种生长因子，例如胰岛素生长因子、血管内皮生长因子、转化生长因子、皮肤生长因子、纤维细胞生长因子及一些相关的胶原蛋白物质，而这些因子都会参与不同组织及反应的机制中。现在已有的研究表明来源于干细胞的分泌素具有与干细胞相似的特性，具有多种生物学功能。 [0005] 基于以上描述，我们可以推测干细胞分泌素在抗衰老方面可能更具有一定的效果。 发明内容[0006] 本发明的目的在于提供一种用于抗衰老的干细胞分泌素及其制备方法和应用，以解决上述背景技术中提出的问题。 [0007] 为实现上述目的，本发明提供如下技术方案： [0008] 一种用于抗衰老的干细胞分泌素的制备方法，包括以下步骤： [0010] 作为本发明进一步的方案：间充质干细胞培养前还包括经流式细胞仪鉴定步骤。 [0011] 作为本发明进一步的方案：将裂解液经1-5℃、10000-14000r/min低温离心20-40min。 [0012] 作为本发明进一步的方案：将裂解液经4℃、10000r/min低温离心30min。 [0013] 作为本发明进一步的方案：间充质干细胞包括骨髓、脐带、胎盘与脂肪。 [0014] 作为本发明进一步的方案：间充质干细胞为脐带。 [0015] 本发明另一目的是提供所述方法制得的干细胞分泌素。 [0016] 本发明另一目的是提供所述干细胞分泌素在制备抗衰老药物中的应用。 [0017] 作为本发明进一步的方案：所述药物为注射或外用剂型。 [0018] 与现有技术相比，本发明的有益效果是： [0019] 本发明制得的干细胞分泌素能够具有抗衰老的效果，该干细胞分泌素来源于骨髓间充质干细胞。本发明证明该分泌素，与未处理的相比，能延缓人的成体MSCs的衰老，所以有潜在延缓衰老的潜能。本发明药物的使用方式可以是静脉注射或局部使用(例如通过皮肤涂抹)。附图说明 具体实施方式[0021] 下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。 [0022] 实施例1 [0023] 本发明实施例中，干细胞分泌素的制备：采用人胎儿来源的MSCs(骨髓间质干细胞，mesenchymal stem cells)(FMSCs)，经流式细胞仪鉴定后培养3天，收集培养细胞，经PBS缓冲液洗涤2次后，加入水得到裂解液。再经4℃、10000r/min低温离心30min，收集上清液，加入1.5％的人血白蛋白即为干细胞分泌素。 [0024] 实施例2 [0025] 本发明实施例中，干细胞分泌素的制备：采用人胎儿来源的MSCs(骨髓间质干细胞，mesenchymal stem cells)(FMSCs)，经流式细胞仪鉴定后培养2天，收集培养细胞，经PBS缓冲液洗涤2次后，加入水得到裂解液。再经1℃、10000r/min低温离心40min，收集上清液，加入1％的人血白蛋白即为干细胞分泌素。 [0026] 实施例3 [0027] 本发明实施例中，干细胞分泌素的制备：采用人胎儿来源的MSCs(骨髓间质干细胞，mesenchymal stem cells)(FMSCs)，经流式细胞仪鉴定后培养5天，收集培养细胞，经PBS缓冲液洗涤2次后，加入水得到裂解液。再经5℃、14000r/min低温离心20min，收集上清液，加入2％的人血白蛋白即为干细胞分泌素。 [0028] 实施例4 [0029] 本发明实施例中，干细胞分泌素的制备：采用人胎儿来源的MSCs(骨髓间质干细胞，mesenchymal stem cells)(FMSCs)，经流式细胞仪鉴定后培养4天，收集培养细胞，经PBS缓冲液洗涤2次后，加入水得到裂解液。再经2℃、12000r/min低温离心25min，收集上清液，加入1.2％的人血白蛋白即为干细胞分泌素。 [0030] 为验证本发明实施例1制得的干细胞分泌素对人的成体MSCs(AMSCs)增殖的影响，进行了以下试验。 [0031] 人AMSCs(脂肪间充质干细胞，Adipose mesenchymal stemcell)用mitomycin C(丝裂霉素C)处理后以终止其增殖，然后接种于96孔板，然后用干细胞分泌素处理后，Alamar blue分析显示加入干细胞分泌素共培养后并没有对人AMSCs引起氧压力(一种衰老的标志)(图1A)。并且在第2天及第4天，干细胞分泌素促进了人AMSCs细胞的增殖(图1B)。 [0032] 对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。 [0033] 此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。 |
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