一种促进增殖的细胞培养液 |
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| 申请号 | CN201710708955.6 | 申请日 | 2017-08-17 | 公开(公告)号 | CN107418932A | 公开(公告)日 | 2017-12-01 |
| 申请人 | 重庆斯德姆生物技术有限公司; | 发明人 | 王健; 胡小东; 赵翔; | ||||
| 摘要 | 一种促进增殖的细胞培养液，它是以RPMI1640为 基础 培养液，同时加入 磷酸 氢二钠、磷酸二氢 钾 、胎 牛 血清、 氯化钠 、 葡萄糖 、 氯化钾 、维生素B12、 链霉素 、谷胱甘肽、甘 氨 酸、丙氨酸、天冬氨酸、 色氨酸 、苏氨酸、异亮氨酸、羧甲基 纤维 素钠。本 发明 培养基各成分相互协调，共同作用，能提供细胞生长增殖所需的充足营养与良好环境，能提高细胞活性和增殖能 力 ，特别适用于NK细胞的培养，使用本发明培养液培养能促使NK细胞快速稳定增殖，培养2周后，增殖倍数高达120倍以上，并且培养后的培养基中未检出 真菌 、细菌、支原体等， 微 生物 检测指标符合法规要求，配制所需原材料简单易得，值得市场推广应用。 | ||||||
| 权利要求 | 1.一种促进增殖的细胞培养液，其特征在于，它是以RPMI1640为基础培养液，同时再加入附加剂；所述附加剂包括磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、胎牛血清、氯化钠、葡萄糖、氯化钾、维生素B12、链霉素、谷胱甘肽、甘氨酸、丙氨酸、天冬氨酸、色氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、羧甲基纤维素钠。 |
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| 说明书全文 | 一种促进增殖的细胞培养液技术领域背景技术[0002] 细胞的生长需要营养环境，用于维持细胞生长的营养基质称为培养基。培养基按其物理状态可分为液体培养基和固体培养基。液体培养基用于大规模的工业生产以及生理代谢等基本理论的研究工作。液体培养基中加入一定的凝固剂(如琼脂)或固体培养物(如麸皮、大米等)便成为固体培养基。固体培养基为细胞的生长提供了一个营养及通气的表面，在这样一个营养表面上生产的细胞可形成单个菌落。因此，固体培养基在细胞的分离、鉴定、计数等方面起着相当重要的作用。从多细胞生物中分离所需要细胞和扩增获得的细胞以及对细胞进行体外改造，观察，必须解决细胞离体培养问题，同微生物细胞培养的难易相比，比较困难的是来自多细胞生物的单细胞培养，特别是动物细胞的培养。细胞培养泛指所有体外培养，其含义是指从动物活体体内取出组织，于模拟体内生理环境等特定的体内条件下，进行孵育培养，使之生存并生长。细胞培养工作现已广泛应用于生物学、医学、新药研发等各个领域，成为最重要的基础科学之一。 [0003] 目前，市场上的细胞培养基用料相对较为复杂，成本较高，促进增殖的能力较差，最终获得的细胞数量不够理想。 发明内容[0004] 本发明的目的在于提供一种促进增殖的细胞培养液。 [0005] 本发明的目的是通过如下技术措施实现的： [0006] 一种促进增殖的细胞培养液，其特征在于，它是以RPMI1640为基础培养液，同时再加入附加剂；所述附加剂包括磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、胎牛血清、氯化钠、葡萄糖、氯化钾、维生素B12、链霉素、谷胱甘肽、甘氨酸、丙氨酸、天冬氨酸、色氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、羧甲基纤维素钠。 [0007] 进一步，一种促进增殖的细胞培养液，其特征在于，它包括下来重量配比的成分组成：RPMI 1640培养基12～18份、磷酸氢二钠0.03～0.08份、磷酸二氢钾0.10～0.18份、胎牛血清6～11份、氯化钠15～23份、葡萄糖0.03～0.09份、氯化钾0.02～0.05份、维生素B12 0.001～0.007份、链霉素0.5～1.1份、谷胱甘肽0.03～0.07份、甘氨酸0.02～0.06份、丙氨酸0.02～0.06份、天冬氨酸0.03～0.08份、色氨酸0.02～0.06份、苏氨酸0.02～0.06份、异亮氨酸0.03～0.08份、羧甲基纤维素钠0.5～1.2份。 [0009] 为了使得细胞培养液的增殖效果更加明显，一种促进增殖的细胞培养液，它包括下列重量配比的成分组成：RPMI 1640培养基13～16份、磷酸氢二钠0.04～0.07份、磷酸二氢钾0.12～0.15份、胎牛血清7～10份、氯化钠17～21份、葡萄糖0.05～0.08份、氯化钾0.03～0.05份、维生素B12 0.002～0.006份、链霉素0.8～1.0份、谷胱甘肽0.05～0.07份、甘氨酸0.04～0.06份、丙氨酸0.03～0.05份、天冬氨酸0.05～0.07份、色氨酸0.04～0.06份、苏氨酸0.04～0.06份、异亮氨酸0.05～0.07份、羧甲基纤维素钠0.9～1.1份、灭菌注射用水1800～2350份、神经生长因子0.001～0.003份、转化生长因子0.001～0.003份、表皮细胞生长因子0.001～0.003份。 [0010] 最优的，一种促进增殖的细胞培养液，它包括下列重量配比的成分组成：RPMI 1640培养基15份、磷酸氢二钠0.05份、磷酸二氢钾0.15份、胎牛血清8份、氯化钠20份、葡萄糖0.07份、氯化钾0.05份、维生素B12 0.005份、链霉素1.0份、谷胱甘肽0.06份、甘氨酸0.05份、丙氨酸0.04份、天冬氨酸0.06份、色氨酸0.06份、苏氨酸0.06份、异亮氨酸0.06份、羧甲基纤维素钠1.0份、灭菌注射用水2223份、神经生长因子0.002份、转化生长因子0.002份、表皮细胞生长因子0.002份。 [0011] 本发明具有如下的有益效果： [0012] 本发明以RPMI1640培养基作为基础培养基，添加相应的附加剂，使得本发明培养基各成分相互协调，共同作用，能提供细胞生长增殖所需的充足营养与良好环境，能提高细胞活性和增殖能力，特别适用于NK细胞的培养，使用本发明培养液培养能促使NK细胞快速稳定增殖，培养2周后，增殖倍数高达120倍以上，并且培养后的培养基中未检出真菌、细菌、支原体等，微生物检测指标符合法规要求，配制所需原材料简单易得，值得市场推广应用。 具体实施方式[0013] 下面通过实施例对本发明进行具体的描述，有必要在此指出的是以下实施例只用于对本发明进行进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。 [0014] 实施例1 [0015] 一种促进增殖的细胞培养液包括以下配比的各组分： [0016]名称 用量 RPMI1640 15g 磷酸氢二钠 0.05g 磷酸氢二钾 0.15g 胎牛血清 8g 氯化钠 20g 葡萄糖 0.07g 氯化钾 0.05g 微生物B12 0.005g 链霉素 1.0g 谷胱甘肽 0.06g 甘氨酸 0.05g 丙氨酸 0.04g 天冬氨酸 0.06g 色氨酸 0.06g 苏氨酸 0.06g 异亮氨酸 0.06g 羧甲基纤维素钠 1.0g 灭菌注射用水 2223ml 神经生长因子 0.002g 转化生长因子 0.002g 表皮细胞生长因子 0.002g [0017] 制备方法：称取上述除灭菌注射用水的其他物质，置于适适宜容器中，于15～20℃温度下搅拌混合5～10分钟，待混合均匀后，加入灭菌注射用水，继续搅拌混合均匀，即得。 [0018] NK细胞培养实验： [0019] 取实施例1制得的细胞培养液，将NK细胞接种于培养液中，在37℃、5％二氧化碳饱和温度的二氧化碳培养箱中培养2周，每2天补加上述细胞培养液，记录生长情况，实验结果表明，NK细胞增殖150倍。 [0020] 实施例2 [0021] 一种促进增殖的细胞培养液包括以下配比的各组分： [0022]名称 用量(g) RPMI1640 13g 磷酸氢二钠 0.04g 磷酸氢二钾 0.12g 胎牛血清 7g 氯化钠 17g 葡萄糖 0.05g 氯化钾 0.03g 微生物B12 0.002g 链霉素 0.8g 谷胱甘肽 0.05g 甘氨酸 0.04g 丙氨酸 0.03g 天冬氨酸 0.05g 色氨酸 0.04g 苏氨酸 0.04g 异亮氨酸 0.05g 羧甲基纤维素钠 0.9g 灭菌注射用水 1889ml 神经生长因子 0.001g 转化生长因子 0.001g 表皮细胞生长因子 0.001g [0023] 制备方法：称取上述除灭菌注射用水的其他物质，置于适适宜容器中，于15～20℃温度下搅拌混合5～10分钟，待混合均匀后，加入灭菌注射用水，继续搅拌混合均匀，即得。 [0024] 按实施例1的实验方法，进行NK细胞培育实验，培育两周后，实验结果表明，NK细胞增殖130倍以上。 [0025] 实施例3 [0026] 一种促进增殖的细胞培养液包括以下配比的各组分： [0027]名称 用量(g) RPMI1640 16g 磷酸氢二钠 0.07g 磷酸氢二钾 0.15g 胎牛血清 10g 氯化钠 21g 葡萄糖 0.08g 氯化钾 0.05g 微生物B12 0.006g 链霉素 1.0g 谷胱甘肽 0.07g 甘氨酸 0.06g 丙氨酸 0.05g 天冬氨酸 0.07g 色氨酸 0.06g 苏氨酸 0.06g 异亮氨酸 0.07g 羧甲基纤维素钠 1.1g 灭菌注射用水 2333ml 神经生长因子 0.003g 转化生长因子 0.003g 表皮细胞生长因子 0.003g [0028] 制备方法：称取上述除灭菌注射用水的其他物质，置于适适宜容器中，于15～20℃温度下搅拌混合5～10分钟，待混合均匀后，加入灭菌注射用水，继续搅拌混合均匀，即得。 [0029] 按实施例1的实验方法，进行NK细胞培育实验，培育两周后，实验结果表明，NK细胞增殖120倍以上。 |
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