负载凝血酶的止血用片材
| 专利类型 | 发明授权 | 法律事件 | 公开; 实质审查; 授权; |
| 专利有效性 | 有效专利 | 当前状态 | 授权 |
| 申请号 | CN202080022290.3 | 申请日 | 2020-03-19 |
| 公开(公告)号 | CN113597321B | 公开(公告)日 | 2023-06-20 |
| 申请人 | 安斯泰来制药株式会社; 国立大学法人东京医科齿科大学; | 申请人类型 | 企业 |
| 发明人 | 荻野淳; 吉原庆一; 木村泰治; 青木爱; 吉井俊贵; 江川聪; | 第一发明人 | 荻野淳 |
| 权利人 | 安斯泰来制药株式会社,国立大学法人东京医科齿科大学 | 权利人类型 | 企业 |
| 当前权利人 | 安斯泰来制药株式会社,国立大学法人东京医科齿科大学 | 当前权利人类型 | 企业 |
| 省份 | 当前专利权人所在省份： | 城市 | 当前专利权人所在城市： |
| 具体地址 | 当前专利权人所在详细地址：日本东京 | 邮编 | 当前专利权人邮编： |
| 主IPC国际分类 | A61L15/32 | 所有IPC国际分类 | A61L15/32 ; A61L15/42 ; A61L15/44 ; A61L15/64 ; A61L31/04 ; A61L31/14 ; A61L31/16 |
| 专利引用数量 | 0 | 专利被引用数量 | 0 |
| 专利权利要求数量 | 21 | 专利文献类型 | B |
| 专利代理机构 | 北京天昊联合知识产权代理有限公司 | 专利代理人 | 常海涛; 金小芳; |
| 摘要 | 本 发明 提供一种 止血 用片材，其是适用于外科手术时的止血、特别是脊椎外科手术时的止血、负载有凝血酶的止血用片材，不需要使用前的制备等，便利性提高，并且具有即使直接包埋在体内也无碍的 生物 体吸收性。所述止血用片材由负载有有效量的凝血酶的明胶海绵构成，(A) 密度 为30～55mg/cm3；(B)湿润时形状保持 角 度为55～120度。 | ||
| 权利要求 | 2 |
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| 说明书全文 | 负载凝血酶的止血用片材技术领域背景技术[0002] 随着手术技术的提高和手术器械的进步等，手术的安全性正在提高，但是出血时的止血操作会左右术后的经过，因此需要可靠地实施。一般来说，作为手术中的止血操作，可以列举出：出血部的压迫、结扎、血管缝合、热凝固、灼烧、药物等。但是，例如在对于脊椎(头～腰的脊椎骨)和其中的脊髓神经涉及的疾病和障碍的脊椎外科手术领域中，主要是脊 椎硬膜中的网状的错综复杂的静脉丛的出血，出血部大多在重要的神经附近。在这种情况 下，通过使用电手术刀等手术器械进行热凝固或灼烧来止血时，损伤神经的危险性提高，因此不采用该止血方法，也难以通过出血部结扎和血管缝合来止血。因此，大多采用使用纱布进行10分钟左右的压迫止血的方法，但是因纱布等会占据术野，妨碍之后的手术操作，有时候在纱布被取出之前不得不中断手术。有时也会使用由明胶或胶原蛋白构成的止血材料来 代替纱布。由明胶或胶原蛋白构成的海绵或片材会随着血液吸收而压迫出血部，通过物理 作用来止血，而且还通过所吸收的血液的凝固作用来止血，其止血效果也值得期待。 [0003] 明胶海绵具有高吸水性和生物体吸收性。现在，作为由明胶海绵构成的止血材料，例如市售的有“ゼルフォーム”(注册商标)(“ファイザー”制造)和“スポンゼル”(注册商标)(“LTLファーマ”制造)。在“スポンゼル”(注册商标)的说明书(非专利文献1)的用法/用量一栏中，记载了“将其适量保持干燥状态、或者浸泡在生理盐水或凝血酶溶液中，并贴附在皮肤或脏器的创伤面上，使渗出的血液吸收并凝固。本产品容易被组织吸收，因此即使包埋在体内也无碍”。但是，例如，像上述脊椎外科手术时那样，在能够使用止血材料的空间有限的出血部上贴附止血材料时，为了可以使止血材料密合在出血部，需要在弯曲止血材料的同时进行密合，但是，“ゼルフォーム”(注册商标)(厚度：约7～10mm)和“スポンゼル”(注册商标)(厚度：约1cm)较厚，因此需要切片成尽可能薄的片材状。另外，当由上述明胶海绵构成的止血材料吸收血液等时，会逐渐膨胀并软化，有时难以保持形状。例如，在脊椎外科手术的领域中也会发生如泉涌那样的涌出性的出血，在使用软化后的片材状的止血材料对 这样的涌出性的出血进行止血的情况下，因血液朝外产生的压力而使止血材料发生弯曲， 存在难以静置在出血部的问题。另外，在出血时溢出的血液有时会一边用抽吸器吸引，一边使用镊子将止血材料按压在出血部附近，但是也会存在因抽吸器的吸引或镊子的接触而导 致止血材料断裂或剥落等问题。因此，需要注意因吸收血液而处于湿润状态的由片材状的 明胶海绵构成的止血材料的操作。 [0004] 为了缩短止血时间，已知将作为血液凝固剂的凝血酶液涂布或浸渍在明胶海绵上来使用的方法。例如，非专利文献2中记载了“作为溶液直接涂布在出血部位的表面上，或者与生物体吸收性明胶海绵一起涂布”。但是，含有凝血酶的明胶海绵需要在使用时进行制 备，要求复杂的步骤和无菌制备。另外，处于被凝血酶液润湿状态下的明胶海绵对血液等的吸水性降低。此外，处于被凝血酶液等润湿状态下的明胶海绵难以保持形状。例如，将用生理盐水稀释后的凝血酶液浸渍在市售的作为明胶海绵的“スポンゼル”(注册商标)(“LTLファーマ”制造)和ゼルフォーム”(注册商标)(“ファイザー”制造)中，在使用镊子捏着湿润后的上述各个明胶海绵的端部而得的照片(图1(i)、(ii))中也可以观察到，浸润后的片材 状的明胶海绵会迅速弯曲，因此不适用于涌出性出血的止血。 [0005] 因此，提出了以干燥状态提供负载有凝血酶的明胶海绵的方案(专利文献1、2以及3)。然而，报告了“当使湿润的海绵干燥时，会发生海绵的破碎、和/或海绵材料的固有形状或结构一体性发生变化”，“该结构的变化会降低海绵材料吸收血液的能力、和/或降低海绵容易贴合身体表面的形状的能力”(专利文献3)。因此，提出了一种通过仅在明胶海绵的一部分中，例如仅在海绵的一个表面上浸润凝血酶液并冷冻干燥的方法来制造仅在表面上具 有凝血酶层的明胶海绵的方案(专利文献3)。但是，根据这个方案的明胶海绵具有厚度，并且需要确认朝向出血部的适用面，因此难以将本方案的止血材料贴附在能够使用止血材料 的空间有限的出血部，作为以脊椎硬膜中的网状的错综复杂的静脉丛的出血为主的脊椎外 科手术时的止血材料，现在为止还没有实用性的报告。 [0006] 为了使由明胶海绵构成的止血材料的表面变硬，提出了使明胶海绵高度交联的方案(专利文献4)。例如，提出了将切片成厚度为0.1mm～10mm的明胶海绵浸渍在使戊二醛等 醛类交联剂溶解在醇类而成的溶液中来交联的方法。根据该方案，将得到具有耐受出血的 强度的止血材料作为课题，但没有报告即使在干燥状态下弯曲也不会产生裂纹的性质和生 物体吸收性等。 [0007] “フロシール”(注册商标)(“バクスター”制造)，其是将颗粒状的交联后的明胶和凝血酶液混合而制备的凝胶状的含有人凝血酶明胶使用吸收性局部止血材料，也作为用于脊椎外科手术的止血材料(成套材料)而被市售。“フロシール”的说明书(非专利文献3)中记载了通过使用该成套材料中的凝血酶管形瓶、溶解液管形瓶、针头注射器、以及明胶组来制备止血材料的方法。例如记载了“使用被生理盐水湿润的纱布等，将本产品在出血部位保持2分钟”，此外，还记载了“为了不妨碍出血停止后凝血块(不被凝血块吸收而残留的量)的形成，将剩余部分轻轻地洗吸”。另外，记载了“使用本产品后最大膨胀约20％，因此无论手术的种类如何，使用者都应考虑可能会影响到周围组织”，以及“由于本产品的膨胀，特别是在用于神经附近的几乎封闭的空间的情况下，可能压迫神经”。 [0008] 除此以外，市售的还有以海绵状的胶原蛋白片材为载体、固定有纤维蛋白原和凝血酶的厚度为约5mm的组织粘接用片材即“タコシール”(注册商标)组织粘接用片材(“CSLベーリング”制造)。“タコシール”(注册商标)组织粘接用片材的适应症中不包含脊椎外科手术时的止血用途(非专利文献4)。 [0009] 现有技术文献 [0010] 专利文献 [0011] 专利文献1：日本特开昭58‑44057号公报 [0012] 专利文献2：国际公开第2009/128474号 [0013] 专利文献3：国际公开第2009/109963号 [0014] 专利文献4：日本实开平3‑9747号公报 [0015] 非专利文献 [0016] 非专利文献1：“スポンゼル”(注册商标)说明书(日本) [0017] 非专利文献2：RECOTHROM(注册商标)的HIGHLIGHTS OF PRESCRIBING INFORMATION(处方信息集锦)(美国) [0018] 非专利文献3：“フロシール”(注册商标)说明书(日本) [0019] 非专利文献4：“タコシール”(注册商标)组织粘接用片材说明书(日本) [0020] 非专利文献5：“タコシール”(注册商标)组织粘接用片材说明书药品Interview Form(日本) 发明内容[0021] 本发明要解决的课题 [0022] 已经对缩短止血时间、且不需要在使用时制备的含有凝血酶的止血材料进行很多研究，但是并未报告(例如)有关可用于像脊椎外科手术时那样的在能够使用止血材料的空 间有限的出血部的、可以对涌出性出血进行止血的止血用片材。另外，也没有对适用于上述止血用片材的湿润时的形状保持能力、强度、膨胀性、生物体吸收性等进行研究的报告，因此期望使考虑了这些方面的操作性优异的片材状的止血材料的开发和实用化。 [0023] 本发明的目的在于提供一种止血用片材，其适用于外科手术时的止血、特别是脊椎外科手术时的止血、且负载有有效量的凝血酶的止血用片材，具有处于干燥状态的止血 用片材即使发生变形也不会产生裂纹的性质、并且即使吸收血液而处于湿润状态也不会发 生断裂和弯曲。另外，本发明的目的在于提供一种止血用片材，其膨胀性低、即使在为了防止再出血而将止血用片材与出血部密合的状态下完成手术，也能够相对较快地被生物体吸 收。 [0024] 用于解决课题的手段 [0025] 在这种情况下，本发明人为了开发具有以下性质的由负载有凝血酶的明胶海绵构成的止血用片材，进行了深入研究：处于干燥状态的止血用片材即使因与出血部密合而发 生变形也不会产生裂纹的性质，吸收血液而处于湿润状态的止血用片材可耐受涌出性出血 的形状保持能力，血液浸润后的膨胀性不高，具有生物体吸收性等。 [0026] 结果发现：为了提供具有处于干燥状态的止血用片材即使弯曲也不会产生裂纹的性质、并且具有即使是涌出性的出血也可耐受止血的形状保持能力的、由负载有凝血酶的 明胶海绵构成的止血用片材，该止血用片材需要具有一定的密度和一定范围内的浸润时形 状保持能力，因此完成了本发明。 [0027] 另外，发现：除了上述性质以外，为了提供膨胀性低、具有能够相对较快地被生物体吸收的性质的由负载有凝血酶的明胶海绵构成的止血用片材，该止血用片材需要具有一定的密度和一定范围内的浸润时形状保持能力，因此完成了本发明。 [0028] 此外，发现：为了得到具有上述性质的由负载有凝血酶的明胶海绵构成的止血用片材，明胶海绵优选为通过特定的制造方法进行热交联而成的热交联明胶海绵，由此完成 本发明。 [0029] 即，本发明是， [0030] [1]一种止血用片材，其是由负载有有效量的凝血酶的明胶海绵构成的止血用片材， [0031] A)具有30～55mg/cm3的密度；并且 [0032] B)将裁剪成纵为10.0±1.0mm、横为20.0±1.0mm的该片材在生理盐水中浸渍30分钟后，将片材搭载在保持水平的直径为2.0±0.2mm、长度为11.0mm以上的圆柱状的金属棒 上，使得该片材的横向的中心线与棒一致，并静置5～30秒钟，此时以金属棒为中心的片材两端(最内侧部末端)的扩展角度所表示的湿润时形状保持角度为55～120度。 [0033] [2]根据[1]所述的止血用片材，厚度在1.0～3.5mm的范围内。 [0034] [3]根据[1]或[2]所述的止血用片材，具有这样的吸水性：在10秒以内吸收滴加到裁剪成纵横均为10.0±1.0mm的该片材上的0.1mL的磷酸缓冲液。 [0035] [4]根据[1]至[3]中任意一项所述的止血用片材，将以使得重量成为50.0±2.5mg的方式裁剪而成的[1]至[3]中任意一项所述的止血用片材投入到加入有胃蛋白酶盐酸试 液(80000±8000U/100mL)的三角烧瓶中，将所述三角烧瓶以使所述胃蛋白酶盐酸试液的水 面摇晃的速度在设为37±1℃的恒温水槽内振动，此时通过目视观察不到所述止血用片材 残留的消失时间小于330分钟。 [0036] [5]根据[1]至[4]中任意一项所述的止血用片材，其是由负载有10～200IU/cm2的重组人凝血酶的明胶海绵构成的止血用片材。 [0037] [6]根据[1]至[5]中任意一项所述的止血用片材，其是由负载有50±15IU/cm2的重组人凝血酶的明胶海绵构成的止血用片材。 [0038] [7]根据[1]至[6]中任意一项所述的止血用片材，其中，[1]中所述的湿润时形状保持角度为64～100度。 [0039] [8]根据[1]至[7]中任意一项所述的止血用片材，其密度为35～55mg/cm3。 [0040] [9]根据[1]至[8]中任意一项所述的止血用片材，其密度为37～52mg/cm3。 [0041] [10]根据[4]至[9]中任意一项所述的止血用片材，其中，[4]中所述的消失时间小于300分钟。 [0042] [11]根据[1]至[10]中任意一项所述的止血用片材，其用于脊椎外科手术时的止血。 [0043] [12]一种止血用片材，其是用于脊椎外科手术时的止血、且由负载有10～200IU/2 cm的重组人凝血酶的明胶海绵构成的止血用片材， [0044] A)厚度在1.0～3.5mm的范围内； [0045] B)具有30～55mg/cm3的密度； [0046] C)具有这样的吸水性：在10秒以内吸收滴加到裁剪成纵横均为10.0±1.0mm的该片材上的0.1mL的磷酸缓冲液；并且 [0047] D)将裁剪成纵为10.0±1.0mm、横为20.0±1.0mm的该片材在生理盐水中浸渍30分钟后，将片材搭载在保持水平的直径为2.0±0.2mm、长度为11.0mm以上的圆柱状的金属棒 上，使得该片材的横向的中心线与棒一致，并静置5～30秒钟，此时以金属棒为中心的片材两端(最内侧部末端)的扩展角度所表示的湿润时形状保持角度为55～120度。 [0048] [13]一种止血用片材，其是用于脊椎外科手术时的止血、且由负载有50±15IU/2 cm的重组人凝血酶的明胶海绵构成的止血用片材， [0049] A)厚度在1.0～3.5mm的范围内； [0050] B)具有30～55mg/cm3的密度； [0051] C)具有这样的吸水性：在10秒以内吸收滴加到裁剪成纵横均为10.0±1.0mm的该片材上的0.1mL的磷酸缓冲液；并且 [0052] D)将裁剪成纵为10.0±1.0mm、横为20.0±1.0mm的该片材在生理盐水中浸渍30分钟后，将片材搭载在保持水平的直径为2.0±0.2mm、长度为11.0mm以上的圆柱状的金属棒 上，使得该片材的横向的中心线与棒一致，并静置5～30秒钟，此时以金属棒为中心的片材两端(最内侧部末端)的扩展角度所表示的湿润时形状保持角度为55～120度。 [0053] [14]根据[1]至[13]中任意一项所述的止血用片材，其实质上不含有交联剂。 [0054] [15]一种止血用片材，其是用于脊椎外科手术时的止血、由负载有50±15IU/cm2的重组人凝血酶的明胶海绵构成、且实质上不含有交联剂的止血用片材， [0055] A)厚度在1.0～3.5mm的范围内； [0056] B)具有30～55mg/cm3的密度； [0057] C)具有这样的吸水性：在10秒以内吸收滴加到裁剪成纵横均为10.0±1.0mm的该片材上的0.1mL的磷酸缓冲液；并且 [0058] D)将裁剪成纵为10.0±1.0mm、横为20.0±1.0mm的该片材在生理盐水中浸渍30分钟后，将片材搭载在保持水平的直径为2.0±0.2mm、长度为11.0mm以上的圆柱状的金属棒 上，使得该片材的横向的中心线与棒一致，并静置5～30秒钟，此时以金属棒为中心的片材两端(最内侧部末端)的扩展角度所表示的湿润时形状保持角度为55～120度。 [0059] [16]根据[1]至[15]中任意一项所述的止血用片材，其中，明胶海绵为热交联明胶海绵。 [0060] [17]根据[16]所述的止血用片材，其中，热交联明胶海绵是通过以下方式制造的：将3～6重量％的明胶溶液起泡使得泡沫密度成为0.20～0.34g/mL，并且将干燥后的明胶海 绵在120～165℃的温度下进行合计10～30小时的热处理。 [0061] [18]根据[1]至[17]中任意一项所述的止血用片材，其是由负载有有效量的凝血酶的明胶海绵构成的止血用片材，通过以下制造方法制造，该制造方法包括： [0062] (1)将3～6重量％的明胶溶液起泡使得泡沫密度成为0.20～0.34g/mL，并且将干燥后的明胶海绵在120～165℃的温度下进行合计10～30小时的热处理，从而制造热交联明 胶海绵的工序；以及 [0063] (2)将通过工序(1)所得的热交联明胶海绵在凝血酶液中浸润，然后干燥，从而制造负载有有效量的凝血酶的交联明胶海绵的工序， [0064] 将所述干燥后的明胶海绵、或通过工序(1)所得的热交联明胶海绵、或通过工序(2)所得的负载有有效量的凝血酶的交联明胶海绵切片成厚度为1.0～3.5mm。 [0065] [19]一种制造方法，其是制造由负载有有效量的凝血酶的明胶海绵构成的止血用片材的方法，包括： [0066] (1)将3～6重量％的明胶溶液起泡使得泡沫密度成为0.20～0.34g/mL，并且将干燥后的明胶海绵在120～165℃的温度下进行合计10～30小时的热处理，从而制造热交联明 胶海绵的工序；以及 [0067] (2)将通过工序(1)所得的热交联明胶海绵在凝血酶液中浸润，然后干燥，从而制造负载有有效量的凝血酶的交联明胶海绵的工序， [0068] 将所述干燥后的明胶海绵、或通过工序(1)所得的热交联明胶海绵、或通过工序(2)所得的负载有有效量的凝血酶的交联明胶海绵切片成厚度为1.0～3.5mm。 [0069] [20]一种止血方法，其中使用[1]至[18]中任意一项所述的止血用片材对患者的脊椎外科手术时的出血进行止血。 [0070] 本发明的效果 [0071] 根据本发明，可以提供具有处于干燥状态的止血用片材即使弯曲也不会产生裂纹的性质、并且具有即使是涌出性的出血也可耐受止血的形状保持能力的、由负载有凝血酶 的明胶海绵构成的止血用片材。 [0072] 另外，可以提供膨胀性较低、具有能够相对较快地被生物体吸收的性质的、由负载有凝血酶的明胶海绵构成的止血用片材。 [0073] 另外，可以提供具有处于干燥状态的止血用片材即使弯曲也不会产生裂纹的性质、具有即使是涌出性的出血也可耐受止血的形状保持能力、膨胀性较低、并且具有能够相对较快地被生物体吸收的性质的、由负载有凝血酶的明胶海绵构成的止血用片材。 [0074] 另外，可以提供具有处于干燥状态的止血用片材即使弯曲也不会产生裂纹的性质、并且具有即使是涌出性的出血也可耐受止血的形状保持能力的、由负载有凝血酶的明 胶海绵构成的止血用片材的制造方法。 [0075] 另外，可以提供使用具有处于干燥状态的止血用片材即使弯曲也不会产生裂纹的性质、并且具有即使是涌出性的出血也可耐受止血的形状保持能力的、由负载有凝血酶的 明胶海绵构成的止血用片材对患者的脊椎外科手术时的出血进行止血的方法。 附图说明 [0076] [图1]在图1中，(i)和(ii)分别是表示背景技术中所示的被凝血酶液湿润的“スポンゼル”(注册商标)(“LTLファーマ”制造)和“ゼルフォーム”(注册商标)(“ファイザー”制造)的状态的情况的照片。(iii)、(iv)、(v)以及(vi)分别是在实施例3的(3‑1)中，为了测定湿润时的形状保持角度而摄像的片材Spo、片材Gel、片材B以及片材F的照片。(vii)是用于说明实施例3(3‑1)的湿润时形状保持能力试验方法的试验体系外观的照片。此外，(viii)是用于说明实施例3(3‑3)的拉伸强度的测定方法的试验体系外观的照片。 [0077] [图2]图2是表示在实施例5的(5‑5)中所制作的脊椎手术时的出血模型2和(5‑7)的止血情况的照片，(i)是再现涌出性出血(箭头处)时的照片，(ii)是在出血部位使用片材SH时的照片。 具体实施方式[0078] 本发明涉及由负载有有效量的凝血酶的明胶海绵构成的止血用片材(以下，有时记为“本发明的止血用片材”)。作为某些方式，本发明的止血用片材涉及脊椎外科手术时的止血用片材。 [0079] 在本说明书中，“明胶海绵”是指将明胶加工成作为多孔结构的海绵状而成的物质。作为原料所使用的明胶，只要是可以用作药品的明胶即可，没有特别地限定，可以使用来自动物的明胶，例如由牛骨、猪皮等所制造的医疗用明胶。作为加工方法，例如可以通过使明胶的溶液起泡，并将该泡沫冷冻干燥等来制作。 [0080] 本发明中所使用的“凝血酶”是与血液凝固机理相关联的一种酶，具有水解纤维蛋白原的性质。作为本发明中所使用的凝血酶，只要是可以被明胶海绵负载并适用的凝血酶即可，没有特别地限定，例如可以使用第十七次修订版日本药典收录的凝血酶(来自牛或人的凝血酶)和作为重组人凝血酶的RECOTHROM(注册商标)(“バクスター”制造)。 [0081] 在本说明书中，“有效量的凝血酶”是指具有良好的止血能力的凝血酶的量，应该根据各凝血酶而设定为适当的量。例如，在使用了重组人凝血酶的本发明的止血片材的研2 究中，在负载了约50IU/cm 的冷冻干燥明胶海绵中可以确认到止血效果，因此作为有效量 2 2 的凝血酶的负载量，例如可以为10～200IU/cm、作为某种方式可以为30～80IU/cm 、作为某 2 种方式可以为50±15IU/cm 。需要说明的是，上述上限和下限可以根据期望进行任意地组 合。作为定量凝血酶的方法，例如可以列举出日本药典所记载的定量方法。 [0082] 在本说明书中，“止血用”是指适用于出血部，例如用于对渗出或涌出的血液进行止血。 [0084] 在本说明书中，“止血用片材”是指厚度大约为0.2～5.0mm的止血材料。适用于出血部，可以通过吸收所渗出或涌出的血液和/或使其凝固的方法等来止血。纵横的长度是任意的，可以适当地采用在临床现场容易使用的大小(例如，纵为8.0mm、横为12.0mm的长条状片材，纵横均为20.0mm的正方形片材，纵为10.0mm、横为20.0mm的长方形片材等)。另外，也可以裁剪成适合使用时的大小来使用。需要说明的是，止血用片材的面具有纵和横，并规定长的一边为横。另外，有时也将横记为宽。 [0085] “厚度”是指在具有面扩展性的物体中相对于该扩展为垂直的方向上的长度。作为测定本发明的止血用片材的厚度的方法，例如可以列举出对上述垂直方向的面进行摄像、并在摄像画面上进行测定的方法；或者使用游标卡尺进行测定的方法。本发明的止血用片 材的厚度也需要考虑适用于在脊椎外科手术中在狭窄的术部所产生的脊椎硬膜处的出血。 在本发明的止血用片材的制造方法上，虽然其厚度因制造偏差而存在若干幅度的情况，但 是作为某种方式可以在1.0～3.5mm的范围内、作为某种方式在1.5～3.3mm的范围内、作为 某种方式在2.0～3.2mm的范围内，大致为均匀的厚度。 [0086] “密度”是指每单位体积的质量(重量)。作为测定止血用片材的密度的方法，例如可以列举出以下方法：使用游标卡尺等测定止血用片材的纵的长度、横的长度以及厚度，并将这些相乘而算出体积，用止血用片材的质量(重量)除以该体积。从适用于出血部的观点来看，优选具有一定程度的变形容许性，当密度过高时，可能因变形而产生裂纹等。另一方面，为了具有湿润时形状保持能力，需要一定程度的密度。本发明的负载有凝血酶的止血用 3 片材的具有变形容许性的密度作为某种方式可以为25～55mg/cm 、作为某种方式为30～ 3 3 3 55mg/cm、作为某种方式为35～55mg/cm、作为某种方式为37～52mg/cm 、作为某种方式为 3 38～45mg/cm。需要说明的是，上述上限和下限可以根据期望进行任意地组合。另外，上述 3 3 上限和下限可以根据期望，将上限设为45～55mg/cm的任意值、将下限设为25～38mg/cm的 任意值。 [0087] 在本说明书中，“吸水性”是指吸收(例如)磷酸缓冲液、生理盐水、水、以及血液等液体的性质。在将厚度在1.0～3.5mm的范围内的本发明的止血用片材用于出血部时，吸收血液并与出血部密合，从而凝血酶发挥止血作用，从这一方面来看，期望止血用片材迅速吸收液体。作为吸水性的评价方法，具体而言，例如可以列举出以下方法：在厚度在1.0～ 3.5mm的范围内、且裁剪成纵横均为10.0±1.0mm的正方形的本发明的止血用片材的一个面 上，滴下0.1mL的磷酸缓冲液，通过目视测定直至无法观察到本发明的止血用片材上的液体时的时间。快速吸水性是指：例如，在上述方法中，作为某种方式为10秒以内、作为某种方式为5秒以内、作为某种方式为2秒以内、作为某种方式为1秒以内。 [0088] 在本说明书中，“湿润时形状保持角度”是指通过湿润时形状保持能力试验所测定的片材两端(最内侧部末端)的扩展角度。上述湿润时形状保持能力试验规定为以下试验：将厚度在1.0～3.5mm的范围内、且裁剪成纵为10.0±1.0mm、横为20.0±1.0mm的本发明的 止血用片材在生理盐水中浸渍30分钟，然后将该片材搭载在保持水平的直径为2.0± 0.2mm、长度为11.0mm以上的圆柱状的金属棒上，使得该片材的横向的中心线(即，将长方形的该片材二等分成纵为10.0±1.0mm、横为10.0±1.0mm的正方形的中心线)与棒一致，测定 作为某种方式静置5～30秒钟、作为某种方式静置30秒钟时的湿润时形状保持角度的试验。 在湿润时形状保持角度小(即，表示该片材的两端下垂的状态)的情况下，湿润时形状保持 能力降低；在湿润时形状保持角度大(即，表示该片材的两端保持打开的状态)的情况下，湿润时形状保持能力高。如后述实施例5所示的那样，从止血时的操作性的观点来看，优选的是，被血液等湿润后的该片材的形状在一定程度上得以保持。被血液等湿润后的本发明的 止血用片材可以耐受止血操作和涌出性出血等的湿润时形状保持角度作为某种方式为55 ～120度、作为某种方式为60～120度、作为某种方式为62～110度、作为某种方式为64～110度、作为某种方式为64～100度、作为某种方式为68～110度、作为某种方式为68～88度。需要说明的是，上述上限和下限可以根据期望进行任意地组合。 [0089] 在本说明书中，“拉伸强度”是指对本发明的止血用片材在纵向或横向上施加拉伸力而不断裂的最大拉伸负荷(g)。作为测定拉伸强度的方法，具体而言，例如可以列举出以下方法：将厚度在1.0～3.5mm的范围内、且裁剪成纵横均为15.0±1.0mm的正方形的本发明的止血用片材在生理盐水中浸渍60分钟，使用镊子等器具夹住并固定该片材的一端，在对 侧沿垂直方向施加一定的负荷，测定直到断裂时的负荷(n＝3)，多次测定整体上没有观察 到断裂时的负荷，求出其平均值。需要说明的是，在本方法中，有无断裂的判定为：将对该片材施加负荷而在5秒钟不断裂的情况规定为无断裂；将在5秒以内断裂的情况规定为断裂。 在本方法中，在血液吸收后也能够耐受止血操作和涌出性出血的适宜的拉伸强度作为某种 方式为20g以上、作为某种方式为22g以上、作为某种方式为29g以上、作为某种方式为20g～ 40g、作为某种方式为22g～35g。需要说明的是，上述上限和下限可以根据期望进行任意地组合。 [0090] 在本说明书中，“生物体吸收性”是指本发明的止血用片材在生物体内消失的性质。一般来说，当明胶海绵等止血材料长期残留在体内时，诱发肉芽肿等的风险提高，因此期望止血用片材具有即使包埋在体内也无碍的生物体吸收性、或者生物体吸收性高，即作 为止血材料的作用结束后的止血用片材快速消失。作为评价生物体吸收性的方法，例如可 以列举出使用了大鼠的肝脏的试验。具体而言，在雄性大鼠的肝脏表面安放直径为8mm的开洞损伤制造用板，通过使用手术刀切去露出的部分以使其出血，将裁剪成纵横约为5mm的正方形的厚度在1.0～3.5mm的范围内的本发明的止血用片材应用在出血部，确认不再观察到 再出血后缝合开腹部，经过一定时间后再次开腹，通过目视观察来确认本发明的止血用片 材的消失。期望的是，本发明的止血用片材的消失时间与市售的具有生物体吸收性的止血 材料相同或更快。在“タコシール”(注册商标)的药品Interview Form(非专利文献5)中，记载了“在雄性大鼠的肝脏创面上贴附0.5cm×0.5cm/只的タコシール(中间省略)，随时间进 行肉眼的观察”，以及“贴附20周时(中间省略)，所有例子中的タコシール消失”，因此，例如，在该试验中，作为本发明的止血用片材的消失例被确认的时间，期望的是，作为某种方式为20周以下、作为某种方式为18周以下、作为某种方式为14周以下、作为某种方式为12周以下、作为某种方式为10周以下、作为某种方式为8周以下。需要说明的是，消失例被确认的时间的下限为1天。 [0091] 作为评价生物体吸收性的其他方法，可以列举出使用了胃蛋白酶盐酸试液的试验。胃蛋白酶为一种天冬氨酸蛋白酶，明胶会被蛋白酶分解并消失。因此，该试验可以评价由明胶海绵构成的本发明的止血用片材的消失容易程度。具体而言，该试验是以下方法：将厚度在1.0～3.5mm的范围内、重量为50±2.5mg、且裁剪成正方形的本发明的止血用片材添 加到加入有胃蛋白酶盐酸试液(以100mL中含有80000±8000U的胃蛋白酶的方式制备的试 液)的200mL三角烧瓶中，将该三角烧瓶在温度设为37±1℃的恒温水槽内振动，通过目视观 察该片材不再残留的时间(分钟)(以后有时也称为消失时间)来判定。需要说明的是，只要 适宜地选择使试液的水面摇晃的速度，则对振动速度没有特别地限定。具体而言，例如，在使用作为TAITEC制的恒温水槽的桌上型振动恒温槽“ウォーターバス·シェーカー PERSONAL‑11”时，振动速度优选为78次/分钟。当消失时间为一定时间以上时，无法期望高的生物体吸收性。作为某种方式小于330分钟、作为某种方式小于300分钟、作为某种方式小于200分钟。需要说明的是，消失时间的下限为1分钟。 [0092] 作为评价生物体吸收性的其他方法，例如可以列举出以下方法：将厚度在1.0～3.5mm的范围内、且裁剪成适宜大小的本发明的止血用片材放入对作为吞噬细胞的巨噬细 胞进行培养或分离后的细胞液中，并保管在温度设为约37℃的恒温槽内，确认该片材的消 失时间。 [0093] 在本说明书中，“变形容许性”是指在将干燥后的本发明的止血用片材卷弯时不产生裂纹或断裂。作为评价变形容许性的方法，例如可以列举出以下方法：将作为某种方式的、厚度在1.0～3.5mm的范围内、且裁剪成纵为约10mm、横为约20mm的本发明的止血用片材卷曲在直径为约7mm的管的侧面即圆柱状的曲面上，使该片材的横向卷绕在曲面上，此时通过目视观察来确认该片材是否产生裂纹或断裂。 [0094] 在本说明书中，“止血用片材的膨胀”是指被润湿的本发明的止血用片材的纵的长度、横的长度、和/或厚度增加。在用于脊椎外科手术时的止血而以用在出血部位的状态包埋在体内时，如果膨胀率较小，则压迫周围组织和神经等的风险降低，因此止血后不除去也是可以的。作为测定本发明的止血用片材的膨胀率的方法，例如作为某种方式，将本发明的止血用片材在10.0±0.5mg的范围内裁剪成正方形，并将其浸润到放入了精制水的底盘中，通过使用显微镜等对该止血用片材的侧面进行摄像(倍数10倍)，得到浸润后经过0小时、1 小时、3小时和/或6小时的时间点的该止血用片材的图像，在图像上测定该止血用片材的一边的长度和厚度，根据浸润前的止血用片材的一边的长度和厚度算出相对于湿润前的变化 率，作为膨胀率。本发明的止血用片材的膨胀率的上限作为某种方式小于15％、作为某种方式小于10％、作为某种方式小于5％、作为某种方式小于3％。需要说明的是，本发明的止血用片材因湿润而自重增加，从而厚度可能减少，因此本发明的止血用片材的膨胀率的下限 作为某种方式为‑15％以上、作为某种方式为‑10％以上。 [0095] 作为本发明的止血用片材，优选是兼具赋予良好止血能力的湿润时形状保持角度和适度的生物体吸收性的片材。作为某种方式，其是湿润时形状保持角度为55～120度，且在使用胃蛋白酶盐酸试液的试验中，消失时间小于330分钟的止血用片材。作为某种方式，其是湿润时形状保持角度为60～120度，并且在使用胃蛋白酶盐酸试液的试验中，消失时间小于300分钟的止血用片材。作为某种方式，其是湿润时形状保持角度为62～110度，并且在使用胃蛋白酶盐酸试液的试验中，消失时间小于300分钟的止血用片材。作为某种方式，其是湿润时形状保持角度为64～110度，并且在使用胃蛋白酶盐酸试液的试验中，消失时间小于300分钟的止血用片材。需要说明的是，上述湿润时形状保持角度的上限和下限可以根据期望进行任意地组合。另外，上述湿润时形状保持角度与使用了胃蛋白酶盐酸试液的试验 中的消失时间可以根据期望进行任意地组合。 [0096] 在本说明书中，“脊椎外科手术”是指对于脊椎(头～腰的脊椎骨)以及其中的脊髓神经涉及的疾病或障碍的脊椎外科手术，该手术中的出血主要是脊椎硬膜的网状的错综复杂的静脉丛的出血，但不限于此。多数情况下需要在大约数mm～十几mm左右的狭窄的术部 进行止血操作。作为脊椎外科手术，例如可以列举出关节炎、椎间盘的变质、背痛、腰痛、坐骨神经痛、颈部脊椎病、颈部痛、脊椎后弯、脊椎侧弯、退变性关节病、变形性关节炎、脊椎分离症、脊椎滑脱症、椎间盘滑脱、脊柱不稳定等。 [0097] 在本发明所使用的明胶海绵中，也可以在能够实现本发明所期望的效果的范围内，根据期望进一步负载各种药品添加物。作为这样的药品添加物，只要在制药学上容许、且在药理学上容许，则没有特别地限定。例如，可以负载稳定剂、柔软剂、渗透剂等。 [0099] 作为柔软剂，例如可以列举出聚乙二醇、丙三醇等。 [0100] 作为渗透剂，例如可以列举出聚山梨酯80等表面活性剂等。 [0101] 这些药品添加物可以适宜适量地负载1种或2种以上的组合。 [0102] 在本发明所使用的明胶海绵中，也可以在能够实现本发明所期望的效果的范围内，根据期望进一步负载其他活性成分。例如，可以列举出纤维蛋白原、维生素K依赖性凝血因子、第XIII因子、纤维粘连蛋白、抗菌剂、抗炎剂、和/或这些的组合等，但不限于这些。 [0103] 在本说明书中，“交联明胶海绵”或“交联了的明胶海绵”是指实施了交联处理的明胶海绵。只要最终可以赋予作为用于本发明的止血用片材的明胶海绵的特性，则对交联处理没有特别地限定。例如通过实施热处理的热交联或使用交联剂(例如甲醛、戊二醛、碳二亚胺、乙二醇二缩水甘油醚、聚乙二醇二缩水甘油醚、六亚甲基二异氰酸酯、环氧类等)的化学交联，可以实施所期望的交联处理。明胶的热交联是通过热处理将明胶的Lys残基的ε‑氨基经过在分子内或分子间氧化/脱酰胺化而成为醛基，并使该反应基与其他Lys残基的ε‑氨基发生缩合等而引起的。因交联导致分子运动性降低，因此，例如可以通过利用固体NMR测定缓和时间的伸长率来评价交联度。需要说明的是，利用热交联的交联明胶海绵也称为“热交联明胶海绵”，利用交联剂的交联明胶海绵也称为“化学交联明胶海绵”。需要说明的是，“交联明胶海绵”、“交联了的明胶海绵”、“热交联明胶海绵”、以及“化学交联明胶海绵”也可以直接用于本发明的止血用片材的说明中。 [0104] 热交联作为交联处理的某种方式。在本说明书中，热交联有时也记为热处理。在文献等(van Luyn MJ.,Biomaterials,13(14),pp.1017‑1024(1992):van Luyn MJ.,J.Biomed.,Mater.Res.26(8),pp.1091‑1110(1992):Huang Lee LL., J.Biomed.Mater.Res.24(9),pp.1185‑1201(1990)等)中报告了不限于戊二醛，很多交联剂都缺乏生物体相容性，它们的残留性和毒性令人担心。作为本发明的明胶海绵的某种方式，其实质上不含交联剂。需要说明的是，在本发明中，“实质上不含交联剂”是指在不损害本发明的目的的范围内，特别是在不呈现毒性的范围内，添加交联剂的实施方式也包含在本发 明中。 [0105] 在本说明书中，“泡沫密度”是指从明胶溶液因冷却搅拌等而起泡所得到的明胶泡沫中，量取预定容量的明胶泡沫并测定其质量，用该质量除以上述容量所得的值(单位：g/mL)。 [0106] 本发明也涉及止血用片材的制造方法。 [0107] 对于本发明的止血用片材的制造方法中所使用的“明胶海绵”、“凝血酶”、“有效量的凝血酶”、“止血用”、“片材”、“片材状”、“片材载体”、“止血用片材”、“厚度”、“密度”、“吸水性”、以及“湿润时形状保持角度”、“脊椎外科手术”、“热交联明胶海绵”、“泡沫密度”，本发明的止血用片材中的该说明可以直接适用。另外，本发明的止血用片材可以直接适用于本发明的止血用片材的制造方法中的说明。 [0108] 本发明的止血用片材的制造方法如下所述。 [0109] (1)交联明胶海绵的止血用片材载体的制造 [0110] 溶解明胶，制备明胶溶液。以使浓度作为某种方式成为4～6重量％、作为某种方式成为4～5重量％、作为某种方式成为3.8～4.5重量％的方式，将来自动物的明胶加入到已升温至约37～53℃的精制水中，搅拌直到明胶完全溶解为止，从而制备了明胶溶液。需要说明的是，上述上限和下限可以根据期望进行任意地组合。 [0111] 通过冷却搅拌使明胶溶液起泡，从而制备了具有所期望的泡沫密度的明胶泡沫。作为某种方式，将明胶溶液投入到连续式搅拌装置的料斗中，然后在向搅拌部供给一定量 的明胶溶液的同时，将空气也送入溶液内，一边冷却至约20～23℃，一边搅拌使其起泡，从而得到了泡沫密度在0.25～0.34g/mL的范围内的明胶泡沫。可以根据条件适当地选择明胶 溶液的浓度和泡沫密度。作为某种方式是由3～6重量％的明胶溶液构成的泡沫密度为0.20 ～0.34g/mL的明胶泡沫、作为某种方式是由4重量％的明胶溶液构成的泡沫密度为0.25～ 0.34g/mL的明胶泡沫、作为某种方式是由4重量％的明胶溶液构成的泡沫密度为0.27～ 0.34g/mL的明胶泡沫、作为某种方式是由4重量％的明胶溶液构成的泡沫密度为0.29～ 0.34g/mL的明胶泡沫、作为某种方式是由4重量％的明胶溶液构成的泡沫密度为0.32～ 0.34g/mL的明胶泡沫、作为某种方式是由5重量％的明胶溶液构成的泡沫密度为0.25～ 0.34g/mL的明胶泡沫、作为某种方式是由5重量％的明胶溶液构成的泡沫密度为0.29～ 0.34g/mL的明胶泡沫、作为某种方式是由5重量％的明胶溶液构成的泡沫密度为0.27～ 0.34g/mL的明胶泡沫、作为某种方式是由5重量％的明胶溶液构成的泡沫密度为0.32～ 0.34g/mL的明胶泡沫、作为某种方式是由6％的明胶溶液构成的泡沫密度为0.20～0.34g/ mL的明胶泡沫、作为某种方式是由6重量％的明胶溶液构成的泡沫密度为0.27～0.31g/mL 的明胶泡沫，但是不限于上述范围。 [0112] 通过将具有所期望的泡沫密度的明胶泡沫分注在容器中，并在‑40～‑20℃下冻结，从而可以形成冻结块。从容器中取出冻结块，优选预先在‑20℃下进行预备冻结，然后使用冷冻干燥机进行冷冻干燥，从而可以得到明胶海绵。作为某种方式，通过将冷冻干燥机的搁板温度设为0℃，并在13.3Pa的减压下干燥48～240小时，然后将搁板温度升温至60℃，并在0Pa的减压下干燥24～120小时，从而可以得到明胶海绵。需要说明的是，干燥时间只要能够得到干燥的明胶海绵，则干燥时间的上限可以自由地改变。 [0113] 实施交联的热处理时的温度和时间可以根据明胶溶液的泡沫密度、凝血酶的种类以及负载量进行适量地设定。例如，在制造使用由4重量％的明胶溶液构成的泡沫密度为 2 0.29～0.34g/mL的明胶泡沫所制造的明胶海绵，并且负载有50IU/cm的重组人凝血酶的明 胶海绵的情况下，作为某种方式可以在153℃下进行200分钟以上的热处理后，在120℃下进行450分钟以上的热处理，进一步在150～160℃下进行2～10小时的、或者在145～165℃下 进行2～20小时的热处理。作为某种方式在120～165℃的温度下进行合计5～30小时的热处 理、作为某种方式在120～165℃的温度下进行合计8～25小时的热处理、作为某种方式在 120～165℃的温度下进行合计10～22小时的热处理、作为某种方式在145～165℃的温度下 进行合计5～30小时的热处理、作为某种方式在145～165℃的温度下进行合计8～25小时的 热处理、作为某种方式在145～165℃的温度下进行合计10～22小时的热处理。 [0114] 交联明胶海绵可以在浸润凝血酶液之前将其切片成所期望的厚度的片材。无论交联处理的前后都可以进行切片。或者也可以在将凝血酶负载在交联明胶海绵上并冷冻干燥 后将其切片成所期望的厚度。将交联前的明胶海绵、交联明胶海绵、负载有凝血酶的交联明胶海绵制成片材状时的厚度作为某种方式在1.0～3.5mm的范围内、作为某种方式在1.5～ 3.3mm的范围内、作为某种方式在2.0～3.2mm的范围内。需要说明的是，上述上限和下限可以根据期望进行任意地组合。 [0115] 通过适当地组合明胶溶液浓度、泡沫密度、以及交联方法，可以得到适合上述本发明的止血用片材的交联明胶海绵的止血用片材载体。虽然本说明书的实施例中示出了优选的制造例，但不一定限于此。 [0116] (2)负载有凝血酶的止血用片材的制造 [0117] 通过将上述止血用片材载体在凝血酶液中浸润后并冷冻干燥，从而可以得到由整个海绵上负载了凝血酶的明胶海绵构成的本发明的止血用片材。也可以使切片前的交联明 胶海绵被凝血酶液填满，并在冷冻干燥后切片成所期望的厚度，从而可以得到本发明的止 血用片材。 [0118] 对使交联明胶海绵(优选为热交联明胶海绵)的片材载体浸润凝血酶液的方法没有特别地限定，可以列举出浸渍、喷雾、部分浸润、贴附凝血酶层等。从可以简单地使整个明胶海绵浸润凝血酶的方面来看，可以列举出浸渍。 [0119] 作为某种方式，可以将含有所期望的量的凝血酶的凝血酶液(约250～1500IU/mL)分注在托盘中，使其相当于交联明胶海绵(优选为热交联明胶海绵)所希望负载的蛋白质量 的液体量。通过在托盘中加入交联明胶海绵的片材并使其完全浸渍，然后进行冷冻干燥，从而可以制造本发明的止血用片材，特别是适用于脊椎外科手术时的止血的止血用片材。 [0120] 本发明也涉及对患者的脊椎外科手术时的出血进行止血的方法。 [0121] 对于本发明的方法中所使用的“明胶海绵”、“凝血酶”、“有效量的凝血酶”、“止血用”、“片材”、“片材状”、“片材载体”、“止血用片材”、“厚度”、“密度”、“吸水性”、“湿润时形状保持角度”、“脊椎外科手术”、“热交联明胶海绵”以及“泡沫密度”，本发明的止血用片材和本发明的止血用片材的制造方法中的该说明可以直接适用。 [0122] 实施例 [0123] 以下，列举实施例并对本发明进行具体地说明，但是不限定本发明的范围。 [0124] <实施例1>止血用片材的制造1 [0125] (1‑1)热交联明胶海绵的片材载体的制造 [0126] 将明胶(来自牛骨、G3287P：“新田ゼラチン”制造)加入到已升温至50℃的精制水中，使用通用搅拌装置(SCR‑210、iuchi制造)进行搅拌并溶解，从而制备了4％(w/w)或6％(w/w)的明胶溶液。将明胶溶液投入到连续式搅拌装置(TM110‑GA、“愛工舎製作所”制造)的料斗中，分别将4％的明胶溶液或6％的明胶溶液在搅拌部中冷却，使得产品温度分别成为22℃或21℃，另外，同时以一定速度供给明胶溶液，并且调节空气的进给量，同时以搅拌部旋转速度为约1196转/分钟的速度起泡。将所得的以下(a)～(d)的泡沫密度的明胶泡沫分 注在不锈钢制的容器或聚乙烯制的容器中，并在‑40～‑30℃下冻结。 [0127] (a)由4重量％的明胶溶液构成的泡沫密度为0.24g/mL的明胶泡沫； [0128] (b)由4重量％的明胶溶液构成的泡沫密度为0.33g/mL的明胶泡沫； [0129] (c)由6重量％的明胶溶液构成的泡沫密度为0.29g/mL的明胶泡沫； [0130] (d)由6重量％的明胶溶液构成的泡沫密度为0.35g/mL的明胶泡沫。 [0132] 将在机内为‑20℃的冷冻干燥机(Lypoh‑3、“アルバック”制造)中所得的冻结块放入干燥机中进行预备冻结，在搁板温度为0℃、13.3Pa的减压下干燥96～141小时，然后将搁板温度升温至60℃、减压至0Pa后进一步干燥24～72小时，从而得到了明胶海绵。使用火腿切片机(LH30、“日立工機”制造)将所得的明胶海绵切片成约3mm，从而得到了明胶海绵的切片品。需要说明的是，由(d)的明胶泡沫所制造的明胶海绵在切片时产生了裂纹，因此终止了后续的研究。 [0133] 使用干热灭菌机(DCH‑120HL，“アルプ”制造)将上述所得的明胶海绵的切片品在153℃下实施198～210分钟的热处理后，进一步在120℃下实施426～442分钟的热处理，从 而得到了交联明胶海绵的切片品。 [0134] 对于交联明胶海绵的切片品，进一步使用干热灭菌机(DCH‑120HL，“アルプ”制造)，在以下(i)的不实施追加热处理、或者在以下(ii)～(iv)的任意一项条件下实施追加 的热处理(以后，有时也称为追加热处理)，裁剪成纵为50mm、横为100mm的长度，从而得到了止血用片材载体A～L。 [0135] (i)无追加热处理； [0136] (ii)155℃、约4小时的追加热处理； [0137] (iii)155℃，约8小时的追加热处理； [0138] (iv)155℃，约12小时的追加热处理。 [0139] 需要说明的是，在后述的表1中，片材A～L是表示后述的负载有凝血酶的止血用片材A～L和止血用片材载体A～L二者的记载，A～L如“泡沫密度‑追加热处理”栏中所示，泡沫密度(a)～(c)和追加热处理(i)～(iv)不同。 [0140] (1‑2)负载有凝血酶的止血用片材的制造 [0141] 将重组人凝血酶制剂(RECOTHROM(注册商标)20000IU Topical Kit、以及RECOTHROM(注册商标)5000IU Topical Kit、“バクスター”制造)的管瓶开封后，使用注射用水实施再溶解，从而得到了凝血酶液(284IU/mL)。将(1‑1)中所制造的止血用片材载体A～L浸渍在分注有8.8mL的凝血酶液的托盘中。在冷冻干燥机(Lyoph‑3或Lyoph‑2、“アルバック”制造)中，将上述片材载体在‑18℃下实施305分钟、在‑8℃下实施600分钟、以及在‑10℃下实施125分钟的预备冻结，然后在10℃、133.0Pa的减压下干燥约9～约12小时、以及在10℃、73.0Pa的减压下干燥10小时，然后升温至25℃后，在73.0Pa的减压下干燥1.5小时、以及 2 在25℃、0Pa的减压下干燥约2～6小时，从而制造了负载有约50IU/cm的凝血酶的止血用片 材。 [0142] (1‑3)各个止血用片材载体的密度、负载有凝血酶的止血用片材的厚度和密度的测定 [0143] 将(1‑1)中所得的各个止血用片材载体和(1‑2)中所得的各个负载有凝血酶的止血用片材裁剪成纵横均为10mm的正方形，使用游标卡尺测定尺寸，并且称量样品的重量，从而算出了各个止血用片材载体和各个负载有凝血酶的止血用片材的密度(n＝20)。 [0144] (1‑4)结果 [0145] 止血用片材载体密度和负载有凝血酶的止血用片材密度如表1所示。对片材B、F以及H测定了负载有凝血酶的止血用片材的厚度，结果均为2.6±0.2mm(n＝16)，是大体均匀 的。 [0146] [表1] [0147] [0148] 注1：平均值±标准偏差 [0149] <实施例2>止血用片材的制造2 [0150] (2‑1)明胶海绵的片材载体的制造 [0151] 将明胶(来自牛骨、GGG：“新田ゼラチン”制造)加入到已升温至40℃的精制水中，使用通用搅拌装置(SCR‑210、iuchi制造)进行搅拌并溶解，从而制备了4％(w/w)的明胶溶液。将明胶溶液投入到搅拌装置(“ヤマナ精工”制造)中，将冷却循环装置(PCU‑3610R、aspite制造)的冷却水设为25.0℃，一边冷却搅拌装置，一边以500转/分钟的搅拌部旋转速度搅拌2分钟，然后变为300转/分钟的旋转速度搅拌22分钟，从而使其起泡。将所得的明胶泡沫分注在不锈钢制的容器中，在低温恒温器(PU‑1J、espec制)中在‑40℃下冻结，升温至‑2℃半解冻后，从低温恒温器中取出不锈钢制的容器，并从容器中取出由半解冻状态的明胶构成的块体后，使用火腿切片机(LH30、“日立工機”制造)将其切片成2～3mm，从而得到了明胶海绵的切片品。将所得的切片品放入到预先在‑20℃下进行了预备冻结的冷冻干燥机 (Lyoph‑2或Lyoph‑3、“アルバック”制造)中，在搁板温度为60℃、0Pa的减压下干燥约10～17小时，从而得到了明胶海绵的切片品。使用干热灭菌机(DCH‑120HL，“アルプ”制造)，将所得的明胶海绵的切片品在145℃下热处理约4小时，并裁剪成止血用片材载体(横纵40mm)。 [0152] (2‑2)负载有凝血酶的止血用片材的制造 [0153] 将重组人凝血酶制剂(RECOTHROM(注册商标)、5000IU TopicalKit、“バクスター”制造)的管瓶开封，并将720μL的使用注射用水再溶解而成的溶液(11076IU/mL)和6.0mg的核黄素悬浊在冷却了的乙醇中，从而得到了总量为14.5g的凝血酶液。将1.7mL的凝血酶液 滴入到(2‑1)中所得的止血用片材载体上，并放入到冷冻干燥机(Lyoph‑2和Lyoph‑3、“アルバック”制造)中，在10℃、133.3Pa的减压下干燥约21～22小时，从而制造了负载有约50IU/ 2 cm的重组人凝血酶的止血用片材，即后述表2中的片材M(比较例)。 [0154] (2‑3)使用“スポンゼル”(注册商标)的止血用片材载体的制造 [0155] 与(1‑1)中所记载的(ii)同样地，在155～156℃下对“スポンゼル”(注册商标)(“LTLファーマ”制造)实施约4小时的热处理，并使用火腿切片机(LH30、“日立工機”制造)将其切片成厚度约为2.6mm，作为后述表2中的片材SH的载体。作为比较例，将“スポンゼル”(注册商标)切片成约3mm的片材作为片材Spo的载体。 [0156] (2‑4)使用“スポンゼル”(注册商标)的负载有凝血酶的止血用片材的制造 [0157] 与(1‑2)同样地，在(2‑3)中所得的片材SH的载体和片材Spo的载体中浸渍约50IU/2 cm的重组人凝血酶，并在冷冻干燥机(Lyoph‑3或Lyoph‑2、“アルバック”制造)中在‑18℃下实施305分钟、在‑8℃下实施600分钟、以及在‑10℃下实施125分钟的预备冻结后，在10℃、 133.0Pa的减压下干燥约5～14小时、以及在10℃、73.0Pa的减压下干燥约9～10小时，升温至25℃后，在73.0Pa的减压下干燥1.5小时、以及在25℃、0Pa的减压下干燥约5～16.5小时， 2 从而制造了负载有约50IU/cm 的凝血酶的止血用片材，即后述表2中的片材SH和片材Spo (比较例)。 [0158] (2‑5)使用“ゼルフォーム”(注册商标)的负载有凝血酶的止血用片材的制造 [0159] 此外，与(2‑3)同样地，将切片成约3mm的“ゼルフォーム”(注册商标)(“ファイザー”制造)作为载体，与(1‑2)同样地，在冷冻干燥机(Lyoph‑3、“アルバック”制造)中，将浸渍2 了约50IU/cm的重组人凝血酶的片材载体在‑18℃下实施305分钟、在‑8℃下实施600分钟、以及在‑10℃下实施125分钟的预备冻结后，在10℃、133.0Pa的减压下干燥约14小时、以及在10℃、73.0Pa的减压下干燥约9小时，升温至25℃后，在73.0Pa的减压下干燥1.5小时、以 2 及在25℃、0Pa的减压下干燥16.5小时，从而得到了负载有约50IU/cm的凝血酶的止血用片 材，即后述表2中的片材Gel(比较例)。但是，“ゼルフォーム”(注册商标)无法吸收为了负载 2 约50IU/cm的凝血酶所需的药液量，即使强迫尝试吸水，也无法增加吸水量，因此认为凝血 2 酶的负载量少于50IU/cm。 [0160] (2‑6)各个负载有凝血酶的止血用片材的厚度和密度的测定及结果 [0161] 从各个止血用片材中以形成纵横均为10mm的正方形的方式裁剪样品，使用游标卡尺测定厚度。另外，称量样品的重量，从而算出止血用片材的密度。各个片材的厚度和密度如表2所示。 [0162] [表2] [0163] [0164] 注1：平均值±标准偏差 [0165] <实施例3>负载有凝血酶的止血片材的湿润时形状保持角度和拉伸强度的测定 [0166] (3‑1)湿润时形状保持能力试验 [0167] 将实施例1和实施例2所制造的负载有凝血酶的各个止血用片材裁剪成纵为约10mm、横为约20mm，测定湿润时形状保持角度。首先，将所裁剪的各个止血用片材在生理盐水中浸润30分钟。将直径为2.0±0.2mm、长度为15cm的“ミクロスパーテル”(“アズワン”制造)作为金属棒，将两端搭载在纵横均为13cm、且具有深度的塑料托盘容器的边缘上，金属棒保持水平，将在生理盐水中浸渍过的该片材搭载在上述金属棒上，使得该片材的横向的 中心线位于所述金属棒上，静置5秒钟。然后，在一直到经过25秒钟的期间，以使该片材的横向侧面成为正面的方式从金属棒的前端侧进行摄像。需要说明的是，通过目视可以确认：本试验方法中所试验的所有的负载有凝血酶的止血用片材在目视观察时从搭载在金属棒上 开始到5秒钟后该片材的形状完成变化，在之后的摄像中(25秒钟期间)不再继续发生形状 变化。根据所摄像的图像，测定了湿润时形状保持角度。多次实施试验(n＝3～10)。 [0168] 例如，当从右斜上方对上述试验的外观摄像时，如图1的(vii)所示。在该图中，分别将湿润时形状保持角度不同的片材B(左侧)和片材Gel(右侧)搭载在金属棒上、并且并排观察，湿润时形状保持能力可以根据湿润时形状保持角度的不同来判断。 [0169] (3‑2)湿润时形状保持能力试验的结果 [0170] 结果如表3所示。 [0171] [表3] [0172] [0173] 注1：平均值±标准误差 [0174] 如图1的(iii)和(iv)所示，将市售的明胶海绵作为片材载体的片材Spo和片材Gel因湿润而变得柔软，湿润时形状保持角度较小。另一方面，片材SH是在“スポンゼル”(注册商标)中进行热交联而成的热交联明胶海绵片材，但湿润时形状保持角度高于片材Spo。另 外，如图1的(v)和(vi)所示，例如片材B和片材F，可以保持片材状的形状，并且保持在金属棒上的宽角度，即本发明的止血用片材具有较大的湿润时形状保持角度，从而可以确认即 使在湿润时也具有高的形状保持能力。 [0175] (3‑3)拉伸强度的测定 [0176] 多次对实施例2中所制造的负载有凝血酶的各个止血用片材(纵横均为约15mm)实施了拉伸强度试验(n＝2～3，n＝3时，计算平均值±标准误差)。使用双夹(黑色、极豆、13mm宽、ASKUL制造)制作了用于固定湿润后的止血用片材的夹具，在对侧安装50mL或15mL的一 次性管，通过填充水量来调节负荷量(例如，参照图1的(viii))。 [0177] (3‑4)拉伸强度的结果 [0178] 结果如下所示。需要说明的是，括号内是各个止血用片材的密度和湿润时形状保持角度。 [0179] 片材SH(37.6±2.1mg/cm3、64±5度)：22±0.3g； [0180] 片材B(42.2±2.9mg/cm3、78±6度)：29±0.3g； [0181] 片材Spo(38.9±3.0mg/cm3、20±3度)：18±0.0g； [0182] 片材M(未测定、8±2度)：实施2次，均为18g。 [0183] 与片材M(比较例)和片材Spo(比较例)相比，片材SH的拉伸强度具有较高的值。此外，密度高的片材B表现出更大的拉伸强度。根据这个结果可以确认：实施了追加热处理的明胶海绵的止血用片材具有较大的拉伸强度，止血时难以发生破损或断裂。另外，湿润时形状保持角度高的止血用片材也表现出拉伸强度增大的倾向。因此，可以推测，即使止血用片材B在止血中被抽吸器等吸引，也难以发生破损或破裂。 [0184] <实施例4>负载有凝血酶的止血用片材的吸水性 [0185] (4‑1)吸水性的评价方法 [0186] 将实施例1中所制造的负载有凝血酶的止血用片材B裁剪成纵横均为10.0mm的正方形，作为样品。在样品的一个面上滴加0.1mL的磷酸缓冲液(pH为7.4、gibco制造)，测定通过目视不能观察到该样品上的液体为止的时间(n＝4)。另外，作为比较例，同样地对“タコシール”(注册商标)组织粘接用片材(“CSLベーリング”制造)和“ゼルフォーム”(注册商标)(“ファイザー”制造)评价了吸水性。需要说明的是，对于“タコシール”(注册商标)组织粘接用片材，对活性面和非活性面(背面)两面进行了测定。将测定时间最大设为300秒钟，在经过300秒钟后仍然能够观察到液体的情况下，将吸水时间作为300秒钟以上(临界 (cutoff)值)。 [0187] (4‑2)吸水性的结果 [0188] 在片材B中，溶液刚滴下后快速被吸收，吸水所需时间为1秒以内。 [0189] 另一方面，“タコシール”(注册商标)组织粘接用片材(表面和背面)和“ゼルフォーム”(注册商标)在片材与液滴的接触面均产生界面张力，从而观察到液滴的积蓄。尽管液滴逐渐地被吸收，但是经过300秒钟后依然有液滴残留。 [0190] 因此，可以认为：将交联明胶海绵的片材作为载体的负载有凝血酶的止血用片材具有高吸水性，在止血时能瞬间吸收血液。另一方面，可以确认：在作为福尔马林改性(即，使用甲醛交联的)明胶海绵的“ゼルフォーム”(注册商标)(“ファイザー”制造)和作为胶原蛋白片材制剂的“タコシール”(注册商标)组织粘接用片材(“CSLベーリング”制造)中，吸水需要时间。 [0191] <实施例5>使用脊椎外科手术时的出血模型的止血用片材的止血效果 [0192] (5‑1)脊椎外科手术时的出血模型1的制作 [0193] 使用迷你猪(NIBS、年龄为19～20个月)制作了脊椎外科手术的出血模型1。作为导入麻醉，向肌肉内给药15mg/kg的氯胺酮盐酸盐后，通过气管插管使用吸入麻醉器(Vigor 21II DX、“アコマ医科工業株式会社”制造)，在N2O:O2＝2:1的混合气体+1～2％的异氟烷的条件下保持麻醉，使用动物用人工呼吸器(PRO‑V mk II“アコマ医科工業株式会社”制造)，在10～15mL/kg、10～12次/分钟的条件下管理呼吸。动物以腹卧位固定，正中切开并剥离肌肉层，一边使用牵引器确保术野，一边展开并露出腰椎。该露出腰椎的过程中会产生出血，将其作为模拟脊椎外科手术时的出血的出血模型1。 [0194] (5‑2)使用脊椎外科手术时的出血模型1的止血试验方法 [0195] 对于上述脊椎外科手术的出血模型1的出血，使用镊子将止血用片材按压在出血点附近，并使用镊子固定保持止血用片材。如果通过目视确认到没有来自该出血部的追加 出血，那么从此时开始保持止血状态30秒钟，不进行追加的止血处理而继续进行观察，目视确认了该止血状态得以保持。止血结束的判定为：在观察中从适用部没有确认到追加出血 的情况下，在通过目视确认到没有追加出血的时间点时判定为止血结束。另外，将从最初在该出血点附近使用止血用片材的时间点开始，到判定止血结束的时间点为止的经过时间， 设为止血时间。 [0196] (5‑3)使用负载有凝血酶的片材M进行止血试验 [0197] 对于上述脊椎外科手术的出血模型1的出血，将实施例2所制造的片材M裁剪成纵横均为20mm的正方形的片材，一边使用抽吸器吸引出血的血液，一边使用镊子将该片材按 压在出血点附近，并使用镊子固定保持该片材，同时观察止血状态。对3处出血点进行了试验，结果：1处判定为止血结束(使用了1片该片材，止血时间为30秒钟)，其他2处当吸收血液时无法保持片材状，凝集成块状，或因抽吸器吸引而观察到断裂，因此无法进行止血。 [0198] 在实际临床的脊椎外科手术中，也需要对比上述脊椎外科手术的出血模型1中所观察到的出血势头更激烈的涌出性出血进行止血。因此，可以推测：片材M或与片材M具有同等程度的湿润时形状保持角度和拉伸强度的负载有凝血酶的止血用片材难以进行涌出性 出血的止血。 [0199] (5‑4)脊椎外科手术时的出血模型2的制作 [0200] 对使用迷你猪(NIBS，年龄为11个月)，通过(5‑1)中所记载的方法制作的露出腰椎的模型，进一步使用空气钻削掉椎骨，去除椎弓露出脊髓，切开脊髓侧的椎骨静脉分枝末梢静脉，使其以涌出的方式出血(参照图2(i))，将其作为模仿脊椎外科手术时的激烈涌出性出血的出血模型2。 [0201] 发现多处可切开的分枝末梢静脉后，为了不漏看，立即切开以确认涌出性出血，在直至开始止血试验之前将纱布塞入出血点附近进行暂时止血。进行止血试验时，除去该纱布确认了涌出性出血重新开始之后，开始止血试验。 [0202] (5‑5)使用脊椎外科手术时的出血模型2的止血试验方法 [0203] 止血试验中，一边使用抽吸器抽吸血液，一边使用镊子将片材按压在出血点附近，并使用镊子或抽吸器固定保持止血用片材，观察出血状况。在判断为出血势头强、或止血部的空间大的情况下，以从上面按压的方式追加该片材，重复进行该操作，直到可以从该片材的血液吸收状况等判断为出血结束为止。使用时，根据止血部的空间使该片材弯曲或团成一团使用。如果通过目视确认到没有来自该出血部的追加出血，则至少30秒钟，不进行追加的止血处理并继续进行观察，确认了该止血状态得以保持。止血结束的判定为：在观察中从适用部没有确认到追加出血的情况下，在通过目视确认到没有追加出血的时间点时判定为 止血结束。另外，将从最初在该出血点附近使用止血用片材的时间点开始，到判定止血结束的时间点为止的经过时间，设为止血时间。 [0204] (5‑6)使用本发明的止血用片材的试验结果 [0205] 将实施例2中所制造的负载有凝血酶的片材SH裁剪成纵为8mm、横为12mm的长条状，应用于止血模型2。在独立的5处出血点上使用片材SH，开始进行止血试验(参照图2 (ii))，结果，使用后立即吸收血液，即使湿润后也保持片材的形状，几乎看不到凝集成块状或因抽吸器吸引而断裂，可以使用追加的止血用片材继续进行止血操作。所有的出血部均 判定为止血结束，止血时间的平均值为2分25秒，止血用片材的平均使用片数为4.6片。另 外，确认了可以以需要的最小限度的大小使用，不会占据术野。 [0206] 在本试验中，判定为止血结束的片材SH的湿润时形状保持角度为64度，并且拉伸强度为22g。因此，具备与该片材同等或更高的湿润时形状保持角度和拉伸强度的本发明的止血用片材对脊椎外科手术时的出血、特别是涌出性出血的止血效果值得被期待。 [0207] <实施例6>使用肝脏损伤出血模型的负载有凝血酶的止血用片材的止血效果 [0208] (6‑1)肝脏损伤出血模型的制作 [0209] 将迷你猪(Goettingen minipigs、年龄为21个月)开腹，露出肝脏，将直径为12mm的开洞损伤制作用板安置在肝脏表面，使用手术刀切去露出的部分以制成损伤并使其出 血，从而制作了肝脏损伤出血模型。对动物在静脉内给药肝素钠(500～3000U、给药液量： 0.5～3.0mL)，使活性化凝固时间调整为300秒钟左右。使用“アクタライクMINIII”(株式会社トライテック)测定活性化凝固时间。 [0210] (6‑2)使用肝脏损伤出血模型的止血试验 [0211] 将裁剪成纵横均为20.0mm的正方形的负载有凝血酶的止血用片材或市售的止血材料以接触损伤部位的方式搭载，开始止血。通过用手指从上面轻轻按压该片材或止血材 料并固定来使用。使用1分钟后拿开按压的手指，从此时开始到5分钟观察有无出血。止血结束的判定为：在观察中肝脏表面没有发现新的出血的情况下，将拿开手指的时间点判定为 止血结束，止血时间为1分钟。另一方面，在拿掉手指时发现出血的情况下，测量直到肝脏表面不再发现新的出血为止的时间，将其作为止血时间。在使用6分钟后依然发现出血的情况下，将止血时间作为6分钟以上。 [0212] (6‑3)使用负载有凝血酶的片材B、C、E或F、或者“タコシール”(注册商标)组织粘接用片材进行止血试验的结果 [0213] 使用实施例1中所制造的负载有凝血酶的片材B、C、E或F、或者“タコシール”(注册商标)组织粘接用片材，进行了使用肝脏损伤出血模型的止血试验。在“タコシール”(注册商标)组织粘接用片材中，使用6分钟后，在5例中仍然有3例发现出血。在“タコシール”(注册商标)组织粘接用片材的说明书中，如记载的“将该活性成分固定面贴附在粘接/封闭部位，通常压迫3～5分钟”那样，在“タコシール”(注册商标)组织粘接用片材中，可以推测：至少需要3分钟通过用手指从上面轻轻按压止血用片材来进行止血处理，本试验的1分钟止血 处理不够充分。另一方面，在负载有凝血酶的片材B的所有例子(5/5)中都没有发现出血，止血时间为1分钟。另外，在负载有凝血酶的片材C(3/3)、片材E(2/2)以及片材F(2/2)中也都未发现出血。 [0214] 这表明：对于一般的外科手术中的组织表面，本发明的止血用片材具有比现有的止血片材更优异的止血能力。另外，由于本发明的止血用片材具有优异的变形容许性、湿润时形状保持能力以及拉伸强度，因此可以推测：对于使止血用片材追随组织的凹凸面的循 环器官的外科手术中的心脏或血管的出血也具有优异的止血能力。 [0215] <实施例7>止血用片材的生物体吸收性 [0216] (7‑1)使用胃蛋白酶盐酸试液的试验 [0217] 将负载有凝血酶的止血用片材A～H以及SH以不改变厚度的方式裁剪成重量为50mg且纵横均为20～25mm的正方形。在精制水中加入3100U/mg的胃蛋白酶(“和光純薬”制造)，从而制备了80000±8000U/100mL的胃蛋白酶盐酸试液。将加入有所述胃蛋白酶盐酸试 液的200mL三角烧瓶放入温度设为37℃的恒温水槽(PERSONAL‑11、TAITEC制造)中，将所裁剪的该片材投入后，振动(振动速度为78次/分钟)，测定不再发现该片材有残留的时间(消 失时间)(n＝3)。结果如表4所示。 [0218] [表4] [0219] [0220] (7‑2)使用大鼠肝脏的试验 [0221] 使用异氟烷(2～3％)将雄性大鼠(Wistar系，年龄为7～15周)麻醉，通过切开腹部正中央来开腹，露出肝脏。将直径为8mm的开洞损伤制作用板安置在肝脏表面，使用手术刀削去露出的部分，从而制成损伤并使其出血。将实施例1和2中所制造的负载有凝血酶的片 材A～H、SH、或“タコシ一ル”(注册商标)组织粘接用片材裁剪成纵横均为约5mm的正方形，施用于损伤部位，放置5分钟。确认没有再次出血后，将开腹处缝合，皮下给药镇痛剂 (Meloxicam、1mg/kg)。为了防止体温下降，从麻醉到苏醒都使用保温箱保温，苏醒后放回饲养笼。在体内埋设后，隔开一定时期后使用异氟烷(2～3％)麻醉下再次开腹，确认了该片材的消失(n＝2～6)。确认各个片材消失的时间和试验例中的消失例数如表5所示。 [0222] [表5] [0223] [0224] (7‑3)考察 [0225] 作为具有生物体吸收性的止血材料的“タコシール”(注册商标)组织粘接用片材在体内埋设后14周的时间点，在所有例子(3/3)中确认了片材的残留。因此，可以认为：与“タコシ一ル”(注册商标)组织粘接用片材相比，负载有凝血酶的片材SH、A～D、以及F更容易在生物体内消失。 [0226] 需要说明的是，在使用了胃蛋白酶盐酸试液的试验中消失时间较慢的负载有凝血酶的止血用片材在使用了大鼠肝脏的试验中的消失时间也倾向于长期化。因此，可以认为： 在使用了胃蛋白酶盐酸试液的试验中至少消失时间超过330分钟的负载有凝血酶的止血用 片材即使包埋在生物体内，消失时间也会长期化。 [0227] <实施例8>负载有凝血酶的止血用片材的变形容许性的确认 [0228] (8‑1)测定 [0229] 对负载有凝血酶的止血用片材在变形的情况下是否产生裂纹和断裂进行了试验。将实施例1的负载有凝血酶的片材B、H、以及J裁剪成纵为10mm、横为20mm。将裁剪成的各个片材卷曲在直径为约7mm的管(BioClean Tip 1000μL、RAININ制造)的侧面即圆柱状的曲面上，使得该片材的横向卷绕在该曲面上，确认该片材是否产生裂纹和断裂。 [0230] (8‑2)结果 [0231] 在片材B和J的所有例子(5/5)中没有观察到裂纹和断裂，但是在片材H的所有例子(5/5)中均观察到了裂纹。随着密度的提高，观察到变形容许性降低。因此，可以推测：具备与该片材B和J同等或更高的变形容许性的本发明的止血用片材具有即使将干燥状态的止 血用片材与出血部密合而变形也不会产生裂纹的性质，因此可将止血材料用于像脊椎外科 手术时那样可以使用止血材料的空间受限的出血部。 [0232] <实施例9>负载有凝血酶的止血用片材的膨胀的确认 [0233] (9‑1)测定 [0234] 使用与实施例1的负载有凝血酶的片材B相同的方法制造止血用片材，并将该片材在10±0.5mg的范围内裁剪成正方形，从而得到了4片样品(纵横均为15.01±0.39mm、厚度： 3.11±0.08mm)。将该样品浸入到加有精制水的浅盘中，使用显微镜(VW‑9000、“キーエンス”制造)对经过一定时间的样品的侧面进行摄像(倍数10倍)，得到了该样品的图像。在图像上测定止血用片材的宽度和厚度。测定时间点为湿润前、刚湿润、1小时后、3小时后、以及 6小时后，算出相对于湿润前的变化率作为膨胀率(n＝4)。 [0235] (9‑2)结果 [0236] 结果如表6所示。横向膨胀率在湿润时为约6％，但是没有观察到进一步的膨胀。另一方面，观察到厚度方向的膨胀率随时间缩小。当换算成负载有凝血酶的止血用片材的体积时，湿润后1小时的体积膨胀为10～11％左右，湿润后3小时与湿润前的体积相同。因此，与该片材同等的本发明的止血用片材适用于脊椎外科手术时。 [0237] [表6] [0238] 湿润后的时间 刚湿润 1小时 3小时 6小时横向的膨胀率(％) 5.9±5.4 5.9±6.1 3.9±5.5 2.8±3.6 厚度方向的膨胀率(％) ‑2.4±8.0 ‑0.8±8.1 ‑6.6±2.3 ‑9.2±6.3 [0239] n＝4、平均值±标准偏差 [0240] 工业实用性 [0241] 本发明的负载有凝血酶的止血用片材对手术时的止血、特别是脊椎外科手术时的止血有用。 |
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