用于局部递送治疗剂的药物递送系统以及其用途 |
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申请号 | CN202280062538.8 | 申请日 | 2022-09-14 | 公开(公告)号 | CN118019750A | 公开(公告)日 | 2024-05-10 |
申请人 | 上海椿安生物医药科技有限公司; | 发明人 | 吴国龙; 张纬江; 冯立春; 张浩; 李大峰; | ||||
摘要 | 本文公开了用于局部递送 治疗 剂的药物递送系统和方法,以及使用此类药物递送系统治疗 疾病 的方法。 | ||||||
权利要求 | 1.一种用于以受控速率局部递送治疗剂的药物递送系统,所述药物递送系统包括: |
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说明书全文 | 用于局部递送治疗剂的药物递送系统以及其用途技术领域[0001] 本公开涉及用于局部递送治疗剂的药物递送系统和方法,以及使用此类药物递送系统治疗疾病的方法。 [0002] 发明背景 [0003] 大多数治疗剂通过口服/GI吸收或全身注射全身性地递送到身体。这些递送途径方便并且适合于治疗全身性疾病。然而,更多疾病是局部病症。尽管全身性地施用的治疗剂可以有效治疗这些病症,但这些治疗剂也可以靶向可能导致副作用或不良反应的其它组织 或结合位点。为了减少全身副作用,局部施用的药物递送系统是期望的。将治疗剂递送到期望的位点不像口服或通过注射服用药物那样容易。因此,一种长期、持续释放的用于局部递送药物的药物递送系统是医生和患者接受此类产品的必要条件。此外,在向受试者施用药 物后,治疗剂在递送位点处维持有效浓度的释放曲线可能显著影响治疗剂的有效性。因此,治疗剂在身体内特定靶组织或位点处的药物递送代表了制药行业中的长期挑战。 [0004] 已经开发了许多药物递送系统以提供具有组织特异性或所期望释放曲线的受控药物递送。最常见的局部药物递送系统是使用可生物降解聚合物来控制治疗剂的释放速 率。这些药物递送系统通过聚合物侵蚀和药物分子扩散两者释放药物。这种复杂的释放控 制给药物产品制造和质量控制带来了巨大挑战。 [0005] 成功的局部药物递送系统有三个关键特性:在递送位点处维持递送系统的能力;以期望速率和曲线释放治疗剂的能力;以及使用治疗剂治疗局部病症的能力。本公开提供 了一种不同的方法以满足这些用于实现局部药物递送系统的关键特性,即,生物聚合物由 于其分子尺寸较大而将药物递送系统保持在递送位点处;治疗剂从上市产品中选择,或其 活性已被后期临床研究证明;以及与生物聚合物和治疗剂共价结合的连接子是化学上不稳 定的并且在降解时以期望速率向特定递送位点和特定疾病释放治疗剂。 发明内容[0006] 一方面,本公开提供了一种用于以受控速率局部递送治疗剂的药物递送系统,所述药物递送系统包括: [0007] 生物聚合物,所述生物聚合物至少包括第一结合基团BG1,所述第一结合基团BG1选自由以下组成的组:羧基、氨基以及其组合; [0008] 治疗剂,所述治疗剂至少包括第二结合基团BG2,所述第二结合基团BG2选自由以下组成的组:羟基、羧基、氨基、酰胺基、胺基以及其组合;以及 [0009] 连接子,所述连接子将所述生物聚合物与所述治疗剂共价连接,并且能够将所述治疗剂保留在施用位置; [0010] 其中所述连接子包括式(I)的结构: [0011] [0012] 其中 [0013] U通过BG1与所述生物聚合物连接,使得至少一个酰胺键得以形成,并且U选自‑N1 (R)‑或 其中 为含氮杂芳基或含氮杂环基,所述含氮杂芳基或所述含氮 杂环基任选地包括一个或多个选自N、O或S的另外的杂原子; [0014] A选自直接键、烷基和‑(CH2CH2O)m‑,其中所述烷基任选地被一个或多个R2基团取代; [0015] B选自由以下组成的组:直接键、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基,其中所述环烷基、3 所述杂环基、所述芳基和所述杂芳基中的每一个任选地被一个或多个R基团取代; [0016] C选自直接键、烷基或‑[C(=O)NHCH2]n‑,其中所述烷基任选地被一个或多个R4基团取代; [0017] V通过BG2与所述治疗剂连接,使得选自由以下组成的组的至少一个键得以形成:直接键、酯、碳酸酯、氨基甲酸酯、‑C(=O)NHCH2O‑或‑C(=O)OCH2O‑,并且V选自由以下组成的组:–C(=O)‑、‑OC(=O)‑、‑NHC(=O)‑、‑C(=O)NHCH2‑和‑C(=O)OCH2‑; [0018] R1选自由以下组成的组:氢、烷基、烯基和炔基; [0020] R5为烷基; [0021] m为0至5的整数;并且 [0022] n为1至4的整数, [0023] 条件是当所述生物聚合物为硫酸软骨素时,V不是–C(=O)‑。 [0024] 在一些实施方式中,本文所提供的药物递送系统中的所述连接子包括式(Ia)至(Ie)的结构: [0025] [0026] 以及 [0027] [0028] 其中, [0029] U和V如上文中所定义; [0030] M选自由以下组成的组:环烷基、杂环基、芳基和杂芳基,其中所述环烷基、所述杂3 环基、所述芳基和所述杂芳基中的每一个任选地被一个或多个R基团取代; [0031] 中的每一个任选地被独立地选自烷基或‑C(=O)OCH3的一个或多个基团取代; [0032] p为范围为0至10的整数; [0033] m和t独立地为范围为1至5的整数; [0034] q、r和s独立地为范围为0至5的整数;并且 [0035] t为范围为1至5的整数。 [0036] 另一方面,本公开提供了一种药物组合物,所述药物组合物包括本文所提供的药物递送系统以及药学上可接受的赋形剂。 [0039] 图2展示了在实施例2的单个IA剂量(HA MW 2000KDa)之后曲安奈德的血浆和滑膜时间‑浓度数据。 具体实施方式[0040] 现在将详细参考本公开的某些实施方式,在所附结构和式中展示了所述实施方式的实例。虽然将结合所列举的实施方式描述本公开,但应理解其并不意图将本公开限于那 些实施方式。相反,本公开旨在涵盖所有替代方案、修改和等效物,所述替代方案、修改和等效物可以包括在如权利要求书所限定的本公开的范围内。本领域技术人员将认识到与本文 所描述的那些方法和材料类似或等效的许多方法和材料,所述方法和材料可以用于实践本 公开。本公开决不限于所描述的方法和材料。在所并入的参考文献和类似材料中的一个或 多个(包括但不限于所定义的术语、术语用法、所描述的技术等)与本申请不同或相矛盾的 情况下,以本公开为准。本公开中所引用的所有参考文献、专利、专利申请均以全文引用的方式并入本文中。 [0041] 应理解,为清楚起见而在单独实施方式的上下文中描述的本公开的某些特征也可以在单个实施方式中组合提供。相反,为简洁起见而在单个实施方式的上下文中描述的本 公开的各种特征也可以单独提供或以任何合适的子组合提供。必须指出,除非上下文另外 明确规定,否则如说明书和所附权利要求书中所用,单数形式“一(a/an)”和“所述(the)”包括其复数形式。 [0042] 定义 [0043] 下文更详细地描述了具体官能团和化学术语的定义。出于本公开的目的,化学元素是根据元素周期表(Periodic Table of the Elements),CAS版,《物理和化学手册 (Handbook of Chemistry and Physics)》,第75版,内封面来标识的,并且具体的官能团总体上是如本文所描述那样定义的。另外,有机化学的一般原理以及特定的功能部分和反应 性描述于以下文献中:《有机化学(Organic Chemistr)》,Thomas Sorrell,第2版,索萨利托科学书籍出版社(University Science Books,Sausalito),2006;Smith和March《,三月先 进有机化学(March'sAdvanced Organic Chemistry)》,第6版,纽约的约翰威利父子出版公 司(John Wiley&Sons,Inc.,New York),2007;Larock,《复杂有机转换(Comprehensive Organic Transformations)》,第3版,纽约VCH出版社有限公司(VCH Publishers,Inc.,New York),2018;Carruthers《, 一些现代有机合成方法(Some Modern Methods of Organic Synthesis)》,第4版,剑桥的剑桥大学出版社(Cambridge University Press,Cambridge), 2004;上述文献中的每个文献的全部内容通过引用并入本文。 [0044] 在本公开的各处,描述了连接取代基。尤其希望每个连接取代基均包括连接取代基的正向和反向形式两者。例如,‑NR(CR'R")‑包括‑NR(CR'R")‑和‑(CR'R")NR‑两者。在结构明确需要连接基团的情况下,关于所述基团所列的马库什变量(markush variable)应理 解为连接基团。举例来说,如果结构需要连接基团且所述变量的马库什组定义列举“烷基”,那么应理解,所述“烷基”表示连接亚烷基。 [0045] 在与取代基连接的键显示与连接环中两个原子的键交叉时,此类取代基可以与环中的任何原子键合。当所列取代基未指示所述取代基键结到给定式化合物的其余部分的原 子时,那么所述取代基可经由所述式中的任何原子键结。取代基和/或变量的组合为可容许的,但仅在所述组合产生稳定化合物时。 [0046] 在任何变量(例如,Ri)在化合物的任何成分或式中出现多于一次时,其在每次出i 现时的定义独立于其在其它每次出现时的定义。因此,例如,如果显示基团被0至2个R部分i i 取代,则所述基团可以任选地被至多两个R部分取代,并且R在每次出现时各自独立地选自 i R的定义。而且,取代基和/或变量的组合是允许的,但仅在这类组合产生稳定化合物时才 允许。 [0047] 如本文所使用的,术语“Ci‑j”指示碳原子数量的范围,其中i和j是整数,并且碳原子数量的范围包括端点(即,i和j)和其间的每个整数点,并且其中j大于i。例如,C1‑6指示一至六个碳原子的范围,包括一个碳原子、两个碳原子、三个碳原子、四个碳原子、五个碳原子和六个碳原子。在一些实施方式中,术语“C1‑12”指示1至12个碳原子,尤其是1至10个碳原子,尤其是1至8个碳原子,尤其是1至6个碳原子,尤其是1至5个碳原子,尤其是1至4个碳原子,尤其是1至3个碳原子或尤其是1至2个碳原子。 [0048] 如本文所使用的,术语“烷基”,不论作为另一个术语的一部分还是独立地使用,是指可以任选地独立地被一个或多个下文所描述的取代基取代的饱和直链或支链烃基。术语“Ci‑j烷基”是指具有i至j个碳原子的烷基。在一些实施方式中,烷基含有1至10个碳原子。在一些实施方式中,烷基含有1至9个碳原子。在一些实施方式中,烷基含有1至8个碳原子、1至 7个碳原子、1至6个碳原子、1至5个碳原子、1至4个碳原子、1至3个碳原子或1至2个碳原子。 “C1‑10烷基”的实例包括但不限于甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基和癸基。“C1‑6烷基”的实例为甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、 2‑戊基、3‑戊基、2‑甲基‑2‑丁基、3‑甲基‑2‑丁基、3‑甲基‑1‑丁基、2‑甲基‑1‑丁基、1‑己基、 2‑己基、3‑己基、2‑甲基‑2‑戊基、3‑甲基‑2‑戊基、4‑甲基‑2‑戊基、3‑甲基‑3‑戊基、2‑甲基‑ 3‑戊基、2,3‑二甲基‑2‑丁基、3,3‑二甲基‑2‑丁基等。 [0049] 如本文所使用的,术语“烯基”,不论作为另一个术语的一部分还是独立地使用,是指可以任选地独立地被一个或多个本文所描述的取代基取代的具有至少一个碳‑碳双键的直链或支链烃基,并且包括具有“顺式”取向和“反式”取向或可替代地“E”取向和“Z”取向的基团。在一些实施方式中,烯基含有2至12个碳原子。在一些实施方式中,烯基含有2至11个碳原子。在一些实施方式中,烯基含有2至11个碳原子、2至10个碳原子、2至9个碳原子、2至8个碳原子、2至7个碳原子、2至6个碳原子、2至5个碳原子、2至4个碳原子、2至3个碳原子,并且在一些实施方式中,烯基含有2个碳原子。烯基的实例包括但不限于乙烯基(ethylenyl/ vinyl)、丙烯基(烯丙基)、丁烯基、戊烯基、1‑甲基‑2丁‑1‑基、5‑己烯基等。 [0050] 如本文所使用的,术语“炔基”,不论作为另一个术语的一部分还是独立地使用,是指可以任选地独立地被一个或多个本文所描述的取代基取代的具有至少一个碳‑碳三键的直链或支链烃基。在一些实施方式中,烯基含有2至12个碳原子。在一些实施方式中,炔基含有2至11个碳原子。在一些实施方式中,炔基含有2至11个碳原子、2至10个碳原子、2至9个碳原子、2至8个碳原子、2至7个碳原子、2至6个碳原子、2至5个碳原子、2至4个碳原子、2至3个碳原子,并且在一些实施方式中,炔基含有2个碳原子。炔基的实例包括但不限于乙炔基、1‑丙炔基、2‑丙炔基等。 [0051] 如本文所使用的,术语“烷氧基”,不论作为另一个术语的一部分还是独立地使用,是指如先前所定义的通过氧原子与母体分子连接的烷基。术语“Ci‑j烷氧基”意味着烷氧基的烷基部分具有i至j个碳原子。在一些实施方式中,烷氧基含有1至10个碳原子。在一些实施方式中,烷氧基含有1至9个碳原子。在一些实施方式中,烷氧基含有1至8个碳原子、1至7个碳原子、1至6个碳原子、1至5个碳原子、1至4个碳原子、1至3个碳原子或1至2个碳原子。“C1‑6烷氧基”的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基(例如,正丙氧基和异丙氧基)、叔丁氧基、新戊氧基、正己氧基等。 [0052] 如本文所使用的,术语“酰胺”是指‑C(=O)NR'‑,其中R'表示氢、N‑保护基团、烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基和其它合适的有机基团。 [0053] 如本文所使用的,术语“胺”是指氨的衍生物,其中一个或多个氢原子被取代基替换,并且可以由N(H)n(R')3‑n表示,其中n为0、1或2,并且每个R'独立地为羟基、硝基、N‑保护基团、烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基和其它合适的有机基团,或者两个R'与其所连接的氮原子一起形成任选地经取代的杂环基或杂芳基。 [0054] 如本文所使用的,术语“氨基”是指‑NH2。 [0055] 如本文所使用的,术语“芳基”,不论作为另一术语的一部分还是独立地使用,是指具有总共5至20个环成员的单环和多环体系,其中体系中的至少一个环是芳香族的,并且其中体系中的每个环含有3至12个环成员。“芳基”的实例包括但不限于苯基、联苯、萘基、蒽基等,其可带有一个或多个取代基。如本文所用,其中芳环与一个或多个另外环稠合的基团也包括在术语“芳基”的范围内。在多环环系统的情况下,仅需要一个环为芳香族(例如2,3‑二氢吲哚),尽管所有环均可为芳香族(例如喹啉)。第二环也可以是稠合的或桥连的。多环芳基的实例包括但不限于苯并呋喃基、茚满基、邻苯二甲酰亚胺基、萘酰亚胺基、啡啶基或四氢萘基等。芳基可以在一个或多个环位置处被如上文所述的取代基取代。 [0056] 如本文所使用的,术语“氨基甲酸酯”是指–N(R')C(=O)O‑,其中R'表示氢、N‑保护基团、烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基和其它合适的有机基团。 [0057] 如本文所使用的,术语“碳酸酯”是指‑OC(=O)O‑。 [0058] 如本文所使用的,术语“羧基(carboxylic group)或羧基(carboxyl)”是指‑COOH。 [0059] 如本文所使用的,术语“环烷基”,不论作为另一个术语的一部分还是独立地使用,是指单价非芳香族饱和或部分不饱和单环和多环体系,其中所有环原子均为碳,并且所述体系含有至少三个成环碳原子。在一些实施方式中,环烷基可含有3至12个成环碳原子、3至 10个成环碳原子、3至9个成环碳原子、3至8个成环碳原子、3至7个成环碳原子、3至6个成环碳原子、3至5个成环碳原子、4至12个成环碳原子、4至10个成环碳原子、4至9个成环碳原子、 4至8个成环碳原子、4至7个成环碳原子、4至6个成环碳原子、4至5个成环碳原子。环烷基可为饱和或部分不饱和的。环烷基可以被取代。在一些实施方式中,环烷基可为饱和的环状烷基。在一些实施方式中,环烷基可为在其环系统中含有至少一个双键或三键的部分不饱和 的环状烷基。在一些实施方式中,环烷基可为单环或多环的。单环环烷基的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、1‑环戊‑1‑烯基、1‑环戊‑2‑烯基、1‑环戊‑3‑烯基、环己基、1‑环己‑1‑烯基、1‑环己‑2‑烯基、1‑环己‑3‑烯基、环己二烯基、环庚基、环辛基、环壬基、环癸基、环十一烷基和环十二烷基。多环环烷基的实例包括但不限于金刚烷基、降冰片烷基、芴基、螺‑戊二烯基、螺[3.6]‑癸基、双环[1,1,1]戊烯基、双环[2,2,1]庚烯基等。 [0060] 如本文所使用的,术语“氰基”是指‑CN。 [0061] 如本文所使用的,术语“酯”是指‑C(=O)O‑。 [0062] 如本文所使用的,术语“卤素”是指选自氟(fluorine或fluoro)、氯(chlorine或chloro)、溴(bromine或bromo)和碘(iodine或iodo)的原子。 [0063] 如本文所使用的,术语“杂原子”是指氮、氧或硫,并且包括氮或硫的任何氧化形式以及碱性氮(包括N‑氧化物)的任何季铵化形式。 [0064] 如本文所使用的,术语“杂芳基”,不论作为另一个术语的一部分还是独立地使用,是指除碳原子之外还具有一个或多个杂原子的芳基。杂芳基可为单环的。单环杂芳基的实例包括但不限于噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、吲哚嗪基、嘌呤基、萘啶基、苯并呋喃基和蝶啶基。杂芳基还包括杂芳环与一个或多个芳基、环脂肪族基或杂环基环稠合的多环基团,其中连接基团或连接点位于杂芳环上。多环杂芳基的实例包 括但不限于吲哚基、异吲哚基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、苯并[1,3]二氧杂环戊烯基、二苯并呋喃基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、喹啉基、异喹啉基、二氢喹啉基、二氢异喹啉基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、4H‑喹嗪基、咔唑基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩恶嗪基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基等。 [0065] 如本文所使用的,术语“杂环基”是指饱和或部分不饱和碳环基,其中一个或多个环原子为各自独立地选自氧、硫、氮、磷等的杂原子,剩余环原子为碳,其中一个或多个环原子可以任选地独立地被一个或多个取代基取代。在一些实施方式中,杂环基为饱和杂环基。在一些实施方式中,杂环基为在其环系统中具有一个或多个双键的部分不饱和的杂环基。 在一些实施方式中,杂环基可含有碳、氮或硫的任何氧化形式和碱性氮的任何季铵化形式。 “杂环基”还包括其中杂环基与饱和、部分不饱和或完全不饱和(即,芳香族)的碳环或杂环环稠合的基团。在可能的情况下,杂环基可为碳连接的或氮连接的。在一些实施方式中,杂环为碳连接的。在一些实施方式中,杂环为氮连接的。举例来说,衍生自吡咯的基团可为吡咯‑1‑基(氮连接)或吡咯‑3‑基(碳连接)。此外,衍生自咪唑的基团可为咪唑‑1‑基(氮连接)或咪唑‑3‑基(碳连接)。 [0066] 在一些实施方式中,术语“3元至12元杂环基”是指具有1至3个各自独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3元至12元饱和或部分不饱和单环或多环杂环体系。稠合、螺和桥接环系统也包括在本定义范围内。单环杂环基的实例包括(但不限于)氧杂环丁烷基、1,1‑二氧代硫杂环丁烷基吡咯烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、吡唑基、咪唑基、三唑基、噁唑基、噻唑基、哌啶基(piperidyl)、哌嗪基、哌啶基(piperidinyl)、吗啉基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、三嗪基、吡啶酮基、嘧啶酮基、吡嗪酮基、嘧啶酮基、哒嗪酮基、吡咯烷基、三嗪酮基等。稠合杂环基的实例包括但不限于苯基稠环或吡啶基稠环,如喹啉基、异喹啉基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、喹喔啉基、喹嗪基、喹唑啉基、氮杂吲哚嗪基、蝶啶基、色烯基、异色烯基、吲哚基、异吲哚基、吲哚嗪基、吲唑基、嘌呤基、苯并呋喃基、异苯并呋喃基、苯并咪唑基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、咔唑基、吩嗪基、吩噻嗪基、啡啶基、咪唑[1,2‑a]吡啶基、[1,2,4]三唑并[4,3‑a]吡啶基、[1,2,3]三唑并[4,3‑a]吡啶基等。螺杂环基的实例包括但不限于螺吡喃基、螺恶嗪基等。桥接杂环基的实例包括但不限于吗啡烷基(morphanyl)、六亚甲基四胺基、3‑氮杂‑双环[3.1.0]己烷、8‑氮杂‑双环[3.2.1]辛烷、1‑氮杂‑双环[2.2.2]辛烷、1,4‑二氮杂双环[2.2.2]辛烷(DABCO)等。 [0067] 如本文所使用的,术语“羟基”是指‑OH。 [0068] 如本文所使用的,术语“结合基团”或“BG”是指第一实体(例如,本文所提供的生物聚合物、治疗剂)内处于特定位置的基团,所述基团能够与来自第二实体(例如,本文所提供的连接子)的另一基团反应以形成键,由此将两个实体连接在一起以形成一个实体。例如,一个实体中包括的羧基可以与另一个实体中包括的氨基反应以形成将所述两个实体连接在一起的酰胺键,其中所述羧基和所述氨基可以被视为结合基团。 [0069] 如本文所使用的,术语“键”或“连接子”是指由至少两个待连接的实体的官能团之间的化学反应形成的键或化学部分,由此形成一个分子或维持实体足够紧邻地缔合。连接子可以被整合到所得连接分子或结构中而具有或不具有其反应的官能团。此类键可以是共 价或非共价的。水解不稳定或可降解键意指,所述键能够在水或水溶液(包括例如体液,如血液)中降解。酶促不稳定或可降解键意指,所述键可由一种或多种酶降解。此类可降解键包括但不限于由一个实体中的羧酸与生物活性剂上的醇基形成的酯键,其中此类酯基一般 在生理条件下水解以释放生物活性剂。其它可水解降解键包括但不限于碳酸酯键、由胺与 醛反应产生的亚胺键、由磷酸基与醇反应产生的磷酸酯键、由酰肼与醛反应产生的腙键、由醛与醇反应产生的缩醛键、由胺基与羧基反应产生的酰胺键。 [0070] 如本文所使用的,术语“部分不饱和的”是指包括至少一个双键或三键的基团。术语“部分不饱和的”意图涵盖具有多个不饱和位点的环,但并不意图包括芳香族(即,完全不饱和的)部分。 [0071] 如本文所使用的,术语“药学上可接受的”表明物质或组合物在化学和/或毒理学上与构成调配物的其它成分和/或被治疗的受试者相容。 [0072] 如本文所使用的,术语“取代的”,无论前面是否有术语“任选地”,都意味着指定部分的一个或多个氢被合适的取代基替代。应当理解,“取代”或“被...取代”包括隐含前提条件,即此类取代与被取代原子的允许化合价一致,并且取代产生稳定的或化学上可行的化合物,例如,不会自发地经历如重排、环化、消除等转化的化合物。除非另有说明,否则“任选地取代的”基团可以在基团的每个可取代位置处具有适当的取代基,并且在任何给定结构 中的多于一个位置可以被多于一个选自指定组的取代基取代时,在每个位置处,取代基可 以相同或不同。本领域技术人员应理解,如果合适的话,取代基本身可以被取代。除非具体陈述为“未被取代的”,否则提及本文中的化学部分应理解为包括被取代的变体。举例来说,提及“芳基”基团或部分隐含地包括被取代和未被取代的变体两者。 [0073] 如本文所使用的,术语“治疗剂”、“药物”、“生物活性分子”、“生物活性剂”、“活性剂”等是指可能影响生物有机体(包括但不限于病毒、细菌、真菌、植物、动物和人)的任何物理或生物化学特性的任何物质。具体地,如本文所使用的,治疗剂包括旨在用于诊断、治愈、缓和、治疗或预防人类或其它动物的疾病或以其它方式增强人类或动物的身体或精神健康的任何物质。 [0075] 因此,一方面,本公开提供了一种能够以受控速率局部递送治疗剂的药物递送系统。在一些实施方式中,所述药物递送系统包括生物聚合物、治疗剂和连接子,所述连接子将所述生物聚合物与所述治疗剂共价连接,并且能够将所述治疗剂保留在施用位置。 [0076] 生物聚合物 [0077] 生物聚合物是由生物体产生的天然聚合物,并且含有共价键合以形成较大结构的单体单元。根据所使用的单体单元和所形成的生物聚合物的结构,生物聚合物分为三个主 要类别:多核苷酸、多肽和多糖。更具体地,多核苷酸(如RNA和DNA)是由13个或更多个核苷酸单体构成的长聚合物。多肽或蛋白质是氨基酸的短聚合物,并且一些主要的实例包括胶 原蛋白、肌动蛋白和纤维蛋白。多糖通常是线性键合的聚合碳水化合物结构,并且一些实例包括纤维素和藻酸盐。生物聚合物的其它实例包括橡胶、软木脂、黑色素和木质素。 [0078] 多种生物聚合物可用作聚合物递送媒剂以将治疗剂递送到靶细胞或组织。适于特定应用的生物聚合物是基于其靶向特定组织、器官或细胞的能力以及其体内稳定性,即,在循环系统或特定组织、细胞或器官中的体内停留时间来选择的。 [0079] 在一些实施方式中,所述生物聚合物选自至少包括第一结合基团BG1的生物相容性聚合物,所述第一结合基团能够与来自第二实体(例如,本文所提供的连接子)的反应性 官能团反应以形成键,由此将生物聚合物与第二实体(例如,连接子)连接。如本文所使用 的,术语“生物相容性”是指对生物学功能没有医学上不可接受的毒性或伤害作用或身体可耐受的物质。 [0080] 在一些实施方式中,所述生物聚合物选自至少包括第一结合基团BG1的生物相容性聚合物,其中BG1选自由以下组成的组:羟基、羧基、氨基以及其组合。BG1用作缀合适合于将治疗剂与生物聚合物连接的连接子的结合位点。BG1可以存在于生物聚合物的主链内的 任何位点处,并且因此在生物聚合物与连接子之间形成的键可以存在于生物聚合物的任何 部分处。 [0081] 在一些实施方式中,用于与来自连接子的反应性官能团反应的BG1可以相同或不同。在某些实施方式中,生物聚合物的BG1是相同的。在某些实施方式中,生物聚合物的BG1是不同的。 [0082] 在一些实施方式中,生物聚合物为生物相容性聚合物,所述生物相容性聚合物包括作为BG1的羧基,所述BG1能够与合适的连接子的反应性官能团反应以形成将含羧基的生 物聚合物与连接子连接的键。 [0083] 在某些实施方式中,连接子的反应性官能团为氨基或胺,所述氨基或胺与生物聚合物的羧基反应,使得酰胺键得以形成。 [0084] 在一些实施方式中,生物聚合物为生物相容性聚合物,所述生物相容性聚合物包括作为BG1的氨基或胺基团,所述BG1能够与合适的连接子的反应性官能团反应以形成键, 由此产生生物聚合物‑连接子缀合物。 [0085] 在某些实施方式中,连接子的反应性官能团为羧基,所述羧基与生物聚合物的氨基或胺基团反应,使得酰胺键得以形成。 [0086] 在一些实施方式中,由生物聚合物的BG1与连接子的反应性官能团之间的反应形1 1 成的键选自–C(O)N(R)‑或 其中R选自由以下组成的组:氢、烷基、烯基和炔基, 为任选地包括一个或多个选自N、O或S的另外的杂原子的含氮杂芳基或含氮杂环 基。 [0087] 在某些实施方式中,R1为氢。 [0088] 在某些实施方式中,R1为烷基。在某些实施方式中,R1为C1‑6烷基、C1‑5烷基、C1‑4烷基1 或C1‑3烷基。在某些实施方式中,R为甲基。 [0089] 在某些实施方式中,R1为烯基。在某些实施方式中,R1为C2‑6烯基、C2‑5烯基、C2‑4烯基1 或C2‑3烯基。在某些实施方式中,R为乙烯基。 [0090] 在某些实施方式中,R1为炔基。在某些实施方式中,R1为C2‑6炔基、C2‑5炔基、C2‑4炔基1 或C2‑3炔基。在某些实施方式中,R为乙炔基。 [0091] 在某些实施方式中, 选自由以下组成的组: [0092] [0093] [0094] 在一些实施方式中,生物聚合物可以选自由以下组成的组:透明质酸(HA)、葡聚糖、纤维素、直链淀粉、壳聚糖、甲壳素、软骨素、硫酸软骨素(CS)、明胶、藻酸盐、角叉菜胶、结冷胶、瓜尔豆胶、果胶、硬葡聚糖、黄原胶或其衍生物。 [0095] 在一些实施方式中,生物聚合物的数均分子量可以在400至3,000,000Da的范围内,例如,1,000至3,000,000Da、5,000至3,000,000Da、10,000至3,000,000Da、20,000至3, 000,000Da、30,000至3,000,000Da、40,000至3,000,000Da、50,000至3,000,000Da或50,000至2,000,000Da。 [0096] 在一些实施方式中,生物聚合物可以选自由以下组成的组:HA、壳聚糖、硫酸软骨素或其衍生物。 [0097] 在某些实施方式中,生物聚合物为HA。在某些实施方式中,HA可以衍生自任何来源。 [0098] 在某些实施方式中,生物聚合物为CS。在某些实施方式中,HA可以衍生自任何来源。 [0099] 在某些实施方式中,HA的数均分子量可以在400至3,000,000Da的范围内,例如,1,000至3,000,000Da、5,000至3,000,000Da、10,000至3,000,000Da、20,000至3,000,000Da、 30,000至3,000,000Da、40,000至3,000,000Da、50,000至3,000,000Da或50,000至2,000, 000Da。 [0100] 在某些实施方式中,生物聚合物为硫酸软骨素。在某些实施方式中,硫酸软骨素可以衍生自任何来源。 [0101] 在某些实施方式中,硫酸软骨素的数均分子量可以在400至3,000,000Da的范围内,例如,1,000至3,000,000Da、5,000至3,000,000Da、10,000至3,000,000Da、20,000至3, 000,000Da、30,000至3,000,000Da、40,000至3,000,000Da、50,000至3,000,000Da或50,000至2,000,000Da。 [0102] 治疗剂 [0103] 本公开提供了用于局部递送各种治疗剂的经改进的递送系统。 [0104] 在一些实施方式中,治疗剂至少包括第二结合基团BG2,所述第二结合基团BG2能够与来自第二实体(例如,本文所提供的连接子)的反应性官能团和任选的共反应物反应以 形成键,由此将治疗剂与第二实体(例如,连接子)连接。 [0105] 在一些实施方式中,治疗剂至少包括第二结合基团BG2,所述第二结合基团BG2选自由以下组成的组:羟基、羧基、氨基、酰胺基、胺基以及其组合。BG2用作缀合适合于将治疗剂与生物聚合物连接的连接子的结合位点。 [0106] 在一些实施方式中,治疗剂包括作为BG2的羟基,所述BG2能够与合适的连接子的反应性官能团和任选的共反应物反应以形成将含羟基的治疗剂与连接子连接的键。 [0107] 在某些实施方式中,治疗剂中的羟基与连接子的反应性官能团和任选的共反应物反应,使得治疗剂通过酯键与连接子连接。 [0108] 在某些实施方式中,治疗剂中的羟基与连接子的反应性官能团和任选的共反应物反应,使得治疗剂通过碳酸酯键与连接子连接。 [0109] 在某些实施方式中,治疗剂中的羟基与连接子的反应性官能团和任选的共反应物反应,使得治疗剂通过氨基甲酸酯键与连接子连接。 [0110] 在某些实施方式中,治疗剂中的羟基与连接子的反应性官能团和任选的共反应物反应,使得治疗剂通过‑C(=O)NHCH2O‑键与连接子连接。 [0111] 在某些实施方式中,治疗剂中的羟基与连接子的反应性官能团和任选的共反应物反应,使得治疗剂通过‑C(=O)OCH2O‑键与连接子连接。 [0112] 在一些实施方式中,治疗剂包括作为BG2的羧基,所述BG2能够与合适的连接子的反应性官能团和任选的共反应物反应以形成将含羧基的治疗剂与连接子连接的键。 [0113] 在某些实施方式中,治疗剂中的羧基与连接子的反应性官能团和任选的共反应物反应,使得治疗剂通过酯键与连接子连接。 [0114] 在一些实施方式中,治疗剂包括作为BG2的氨基或胺基,所述BG2能够与合适的连接子的反应性官能团和任选的共反应物反应以形成将含氨基/胺的治疗剂与连接子连接的 键。 [0115] 在某些实施方式中,治疗剂中的胺基与连接子的反应性官能团和任选的共反应物反应,使得治疗剂通过直接键、酰胺键、脲键、硫脲键、氨基甲酸酯键、硫代氨基甲酸酯键、氮杂‑缩醛键、氨基磷酸酯键等与连接子连接。 [0116] 在一些实施方式中,待递送的治疗剂是抗炎药物。 [0117] 在一些实施方式中,待递送的治疗剂是选自由以下组成的组的抗炎药物:曲安奈德、甲泼尼松(meprednisone)、泼尼松龙(prednisolone)、氢化可的松(hydrocortisone)、可的松(cortisone)、醋酸氟轻松(fluocinonide)、甲基强的松龙(methylprednisolone)、倍他米松(betamethasone)和地塞米松(dexamethasone)。 [0118] 连接子 [0119] 通过合适的连接子将治疗剂与生物聚合物连接来实现治疗剂的经改进的局部递送。通过选择合适的连接子,可以控制治疗剂从生物聚合物释放的速率,由此提供治疗剂向靶细胞或组织的经改进的递送。 [0120] 在一些实施方式中,多个连接子可以通过在生物条件下被切割的可切割键与治疗剂连接,由此释放治疗剂。 [0121] “可切割键”是在生理条件下切割的相对不稳定键。示例性可释放键为在与水反应后切割(即,水解)的可水解键。键在水中水解的趋势可能不仅取决于连接两个原子的键的一般类型,而且取决于连接到这些原子的取代基。适当的水解不稳定或弱键包括但不限于 羧酸酯、磷酸酯、酸酐、缩醛、缩酮、酰氧基烷基醚、亚胺、原酸酯、肽、寡核苷酸、硫酯、脲、硫脲、氨基甲酸酯、硫代氨基甲酸酯、氨基磷酸酯和碳酸盐。某些官能团具有可通过除水解外的工艺化学降解的原子。这类示例性可释放键包括某些氨基甲酸酯和Fmoc衍生物。含有合 适键的这些类别的官能团的某些分子可在碱作用后经历化学降解(释放)。在此类情况下, “切割”可以在较高pH值下发生或通过含有碱性部分的生物分子(例如,组氨酸)的作用发 生。另一示例性可切割键为可酶促切割键。“可酶促切割键”意指易由一种或多种酶切割的键。 [0122] 在一些实施方式中,连接子通过由连接子的反应性官能团和生物聚合物中的BG1形成的键与生物聚合物连接,并且通过由连接子的另一反应性官能团和治疗剂中的BG2形 成的键与治疗剂连接。 [0123] 在一些实施方式中,所述连接子包括式(I)的结构: [0124] [0125] 其中 [0126] U通过BG1与所述生物聚合物连接,使得至少一个酰胺键得以形成,并且U选自‑N1 (R)‑或 其中 为含氮杂芳基或含氮杂环基,所述含氮杂芳基或所述含氮 杂环基任选地包括选自N、O或S的一个或多个另外的杂原子; [0127] A选自直接键、烷基和‑(CH2CH2O)m‑,其中所述烷基任选地被一个或多个R2基团取代; [0128] B选自由以下组成的组:直接键、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基,其中所述环烷基、3 所述杂环基、所述芳基和所述杂芳基中的每一个任选地被一个或多个R基团取代; [0129] C选自直接键、烷基或‑[C(=O)NHCH2]n‑,其中所述烷基任选地被一个或多个R4基团取代; [0130] V通过BG2与所述治疗剂连接,使得选自由以下组成的组的至少一个键得以形成:直接键、酯、碳酸酯、氨基甲酸酯、‑C(=O)NHCH2O‑或‑C(=O)OCH2O‑,并且V选自由以下组成的组:–C(=O)‑、‑OC(=O)‑、‑NHC(=O)‑、‑C(=O)NHCH2‑和‑C(=O)OCH2‑; [0131] R1选自由以下组成的组:氢、烷基、烯基和炔基; [0132] R2、R3和R4中的每一个独立地选自由以下组成的组:卤素、羟基、氨基、氰基、烷基、5 烷氧基和‑C(=O)OR; [0133] R5为烷基; [0134] m为0至5的整数;并且 [0135] n为1至4的整数, [0136] 条件是当所述生物聚合物为硫酸软骨素时,V不是–C(=O)‑。 [0137] 在一些实施方式中,BG1为羧基并且U为‑N(R1)‑,使得酰胺键得以形成以将所述生物聚合物与所述连接子连接。 [0138] 在一些实施方式中,BG1为羧基并且U为 使得酰胺键得以形成以将所述生物聚合物与所述连接子连接。 [0139] 在某些实施方式中,BG1为羧基并且U为选自由以下组成的组的 [0140] [0141] 在一些实施方式中,BG2为羟基,并且V选自以下之一: [0142] (a)–C(=O)‑,所述–C(=O)‑通过BG2与所述治疗剂连接,使得酯键得以形成; [0143] (b)‑OC(=O)‑,所述‑OC(=O)‑通过BG2与所述治疗剂连接,使得碳酸酯键得以形成; [0144] (c)‑NHC(=O)‑,所述‑NHC(=O)‑通过BG2与所述治疗剂连接,使得氨基甲酸酯键得以形成; [0145] (d)‑C(=O)NHCH2‑,所述‑C(=O)NHCH2‑通过BG2与所述治疗剂连接,使得‑C(=O)NHCH2O‑键得以形成;或者 [0146] (e)‑C(=O)OCH2‑,所述‑C(=O)OCH2‑通过BG2与所述治疗剂连接,使得‑C(=O)OCH2O‑键得以形成。 [0147] 在一些实施方式中,A为直接键。 [0148] 在一些实施方式中,A为任选地被一个或多个R2基团取代的烷基。在某些实施方式2 中,A为任选地被一个或多个R基团取代的C1‑10烷基。在某些实施方式中,A为任选地被一个 2 2 或多个R基团取代的C1‑9烷基。在某些实施方式中,A为任选地被一个或多个R基团取代的 2 C1‑8烷基。在某些实施方式中,A为任选地被一个或多个R基团取代的C1‑7烷基。 [0149] 在某些实施方式中,每个R2独立地选自烷基或‑C(=O)OR5。 [0150] 在某些实施方式中,每个R2独立地为C1‑6烷基、C1‑5烷基、C1‑4烷基或C1‑3烷基。在某2 些实施方式中,R为甲基。 [0151] 在某些实施方式中,每个R2独立地为‑C(=O)OR5,其中R5为C1‑6烷基、C1‑5烷基、C1‑42 烷基或C1‑3烷基。在某些实施方式中,R为‑C(=O)OCH3。 [0152] 在一些实施方式中,A为‑(CH2CH2O)m‑。 [0153] 在某些实施方式中,m为0至4的整数。在某些实施方式中,m是1。在某些实施方式中,m是2。在某些实施方式中,m是3。在某些实施方式中,m是4。 [0154] 在一些实施方式中,B为直接键。 [0155] 在一些实施方式中,B为环烷基。 [0156] 在某些实施方式中,B为3至8元环烷基、3至7元环烷基、3至6元环烷基、3至5元环烷基或3至4元环烷基。 [0157] 在某些实施方式中,B选自由以下组成的组:环丁基、环戊基、环己基和双环[2.2.2]辛基。 [0158] 在一些实施方式中,B为芳基。在某些实施方式中,B为5至12元芳基、5至10元芳基、5至8元芳基或5至6元芳基。 [0159] 在某些实施方式中,B为苯基。 [0160] 在一些实施方式中,B为杂芳基。在某些实施方式中,B为5至12元杂芳基、5至10元杂芳基、5至8元杂芳基或5至6元杂芳基。 [0161] 在某些实施方式中,B为吡啶基或呋喃基。 [0162] 在一些实施方式中,A为直接键,并且B选自由以下组成的组:直接键、环烷基和芳基。 [0163] 在某些实施方式中,A为直接键,并且B为直接键。 [0164] 在某些实施方式中,A为直接键,并且B为3至8元环烷基、3至7元环烷基、3至6元环烷基、3至5元环烷基或3至4元环烷基。在某些实施方式中,A为直接键,并且B为环丁基、环己基或双环[2.2.2]辛基。 [0165] 在某些实施方式中,A为直接键,并且B为5至12元芳基、5至10元芳基、5至8元芳基或5至6元芳基。在某些实施方式中,A为直接键,并且B为苯基。 [0166] 在某些实施方式中,A为直接键,并且B为5至12元杂芳基、5至10元杂芳基、5至8元杂芳基或5至6元杂芳基。在某些实施方式中,A为直接键,并且B为吡啶基或呋喃基。 [0167] 在一些实施方式中,A为任选地被一个或多个R2基团取代的烷基,并且B选自由以下组成的组:直接键、芳基和杂芳基。 [0168] 在某些实施方式中,A为任选地被一个或多个R2基团取代的C1‑8烷基,并且B为直接2 5 5 键,其中R为烷基或‑C(=O)OR,其中R为烷基。 [0169] 在某些实施方式中,A为任选地被一个或多个R2基团取代的C1‑8烷基,并且B为5至12元芳基、5至10元芳基、5至8元芳基或5至6元芳基。在某些实施方式中,A为任选地被一个 2 或多个R基团取代的C1‑8烷基,并且B为苯基。 [0170] 在某些实施方式中,A为任选地被一个或多个R2基团取代的C1‑8烷基,并且B为杂芳2 基。在某些实施方式中,A为任选地被一个或多个R 基团取代的C1‑8烷基,并且B为吡啶基或呋喃基。 [0171] 在一些实施方式中,A为‑(CH2CH2O)m‑,其中m为0至4的整数,并且B为直接键。 [0172] 在一些实施方式中,C为直接键。 [0173] 在一些实施方式中,C为任选地被一个或多个R4基团取代的烷基。在某些实施方式4 中,C为任选地被一个或多个R 基团取代的C1‑6烷基。在某些实施方式中,C为任选地被一个 4 4 或多个R基团取代的C1‑5烷基。在某些实施方式中,C为任选地被一个或多个R基团取代的 4 C1‑4烷基。在某些实施方式中,C为任选地被一个或多个R 基团取代的C1‑3烷基。在某些实施方式中,C为甲基或乙基。 [0174] 在某些实施方式中,每个R4独立地选自烷基或‑C(=O)OR5。 [0175] 在某些实施方式中,每个R4独立地为C1‑6烷基、C1‑5烷基、C1‑4烷基或C1‑3烷基。在某4 些实施方式中,R为甲基。 [0176] 在某些实施方式中,每个R4独立地为‑C(=O)OR5,其中R5为C1‑6烷基、C1‑5烷基、C1‑44 烷基或C1‑3烷基。在某些实施方式中,R为‑C(=O)OCH3。 [0177] 在一些实施方式中,C为‑[C(=O)NHCH2]n‑。 [0178] 在一些实施方式中,A为直接键,B为直接键、环烷基或芳基,并且C选自由直接键或4 任选地被一个或多个R基团取代的烷基组成的组。 [0179] 在某些实施方式中,A为直接键,B为直接键,并且C为直接键。 [0180] 在某些实施方式中,A为直接键,B为环烷基,并且C为直接键。 [0181] 在某些实施方式中,A为直接键,B为芳基,并且C为直接键或任选地被一个或多个4 R基团取代的烷基。 [0182] 在一些实施方式中,A为任选地被一个或多个R2基团取代的烷基,B选自由以下组4 成的组:直接键、芳基和杂芳基,并且C选自直接键、任选地被一个或多个R基团取代的烷基或‑[C(=O)NHCH2]n‑。 [0183] 在某些实施方式中,A为任选地被一个或多个R2基团取代的C1‑8烷基,B为直接键,并且C为直接键或‑[C(=O)NHCH2]n‑。 [0184] 在某些实施方式中,A为任选地被一个或多个R2基团取代的C1‑8烷基,B为5至12元芳基、5至10元芳基、5至8元芳基或5至6元芳基,并且C为直接键。在某些实施方式中,A为任2 选地被一个或多个R基团取代的C1‑8烷基,B为苯基,并且C为直接键。 [0185] 在某些实施方式中,A为任选地被一个或多个R2基团取代的C1‑8烷基,B为杂芳基,2 并且C为直接键。在某些实施方式中,A为任选地被一个或多个R基团取代的C1‑8烷基,B为吡啶基或呋喃基,并且C为直接键。 [0186] 在一些实施方式中,A为‑(CH2CH2O)m‑,B为烷基,并且C为直接键。 [0187] 在一些实施方式中,A为‑(CH2CH2O)m‑,其中m为1、2、3或4,B为C1‑6烷基、C1‑5烷基、C1‑4烷基、C1‑3烷基或C1‑2烷基,并且C为直接键。 [0188] 在一些实施方式中,A为‑(CH2CH2O)m‑,B为直接键,并且C为直接键。 [0189] 在一些实施方式中,本文所提供的连接子包括式(Ia)至(Ie)的结构: [0190] [0191] 以及 [0192] [0193] 其中, [0194] U和V如上文所定义; [0195] M选自由以下组成的组:环烷基、杂环基、芳基和杂芳基,其中所述环烷基、所述杂3 环基、所述芳基和所述杂芳基中的每一个任选地被一个或多个R基团取代; [0196] 中的每一个任选地被一个或多个独立地选自烷基或‑C(=O)OCH3的基团取代; [0197] p为范围为0至10的整数; [0198] m和t独立地为范围为1至5的整数; [0199] q、r和s独立地为范围为0至5的整数;并且 [0200] t为范围为1至5的整数。 [0201] 在一些实施方式中,M选自由以下组成的组:环丁基、环戊基、环己基、双环[2.2.2]辛基、苯基、吡啶基和呋喃基。 [0202] 在一些实施方式中,本文所提供的连接子包括选自由以下组成的组的结构: [0203] [0204] [0205] 其中 中的每一个任选地被一个或多个独立地选自烷基或‑C(=O)OCH3的基团取代。 [0206] 药物递送系统 [0207] 在本公开的一方面,治疗剂通过连接子与生物聚合物连接,由此提供用于向靶位点局部递送治疗剂的药物递送系统。 [0208] 本文所提供的药物递送系统的生物聚合物可以具有一种或多种通过连接子缀合的治疗剂。生物聚合物可以通过生物聚合物主链中的羧基和/或氨基处的一个或多个连接 子与所述一种或多种治疗剂缀合。 [0209] 本公开的药物递送系统通过连接子在生物聚合物和治疗剂之间形成缀合而得到,其中所述缀合通过生物聚合物和连接子间的键合,以及治疗剂和连接子间的键合形成。 [0210] 在一些实施方式中,连接子的反应性官能团可以首先与治疗剂的BG2反应以在治疗剂与连接子之间形成键,由此提供治疗剂‑连接子缀合物。在连接子的末端处含有另一反应性官能团的治疗剂‑连接子缀合物,随后可以与生物聚合物的BG1反应以在生物聚合物与连接子之间形成键,由此提供本公开的药物递送系统。 [0211] 在某些实施方式中,可以首先使生物聚合物的BG1与连接子的反应性官能团反应以形成生物聚合物‑连接子缀合物,并且随后使治疗剂的BG2与生物聚合物‑连接子缀合物中的连接子的另一官能团反应,由此提供本公开的药物递送系统。 [0212] 在一些实施方式中,选择用于本文所提供的药物递送系统的生物聚合物为透明质酸或硫酸软骨素,并且选择用于本文所提供的药物递送系统的治疗剂选自由以下组成的 组:曲安奈德、甲泼尼松、泼尼松龙、氢化可的松、可的松、醋酸氟轻松、甲基强的松龙、倍他米松和地塞米松。 [0213] 在某些实施方式中,选择用于本文所提供的药物递送系统的生物聚合物为透明质酸,并且选择用于本文所提供的药物递送系统的治疗剂选自由以下组成的组:曲安奈德、甲泼尼松、泼尼松龙、氢化可的松、可的松、醋酸氟轻松、甲基强的松龙、倍他米松和地塞米松。 [0214] 在某些实施方式中,本文所提供的药物递送系统选自由以下组成的组: [0215] [0216] [0217] [0218] [0219] [0220] [0221] [0222] [0223] 在一些实施方式中,治疗剂可以通过连接子与生物聚合物缀合,如通过NMR测量的,所述治疗剂与生物聚合物的药物取代率(DSR)为至少1%、至少2%、至少3%、至少5%、至少8%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少 45%、至少50%,其中与生物聚合物的药物取代率(DSR)是指被药物取代的生物聚合物上基团的摩尔量与生物聚合物上能够被药物取代的基团的总摩尔量的比率。 [0224] 通过切割连接子与生物聚合物或治疗剂之间的键,治疗剂可以从本文所提供的药物递送系统中释放。在一些实施方式中,治疗剂的释放在生物聚合物与连接子之间的键被 切割以释放治疗剂‑连接子缀合物的情况下发生,所述治疗剂‑连接子缀合物可以被视为前药。随后从连接子中释放治疗剂可以涉及治疗剂与连接子之间的键的酶促或非酶促切割。 在一些实施方式中,治疗剂的释放在治疗剂与连接子之间的键在生物聚合物与连接子之间 的键未切割或在切割所述键之前切割的情况下发生。治疗剂的释放也可以涉及酶促或非酶 促过程。 [0225] 治疗剂的释放可能受到多种因素的影响,例如,特定治疗剂、连接子和生物聚合物的选择、药物递送系统的施用。本公开考虑具有不同分子量、结合基团BG1、与连接子的键的生物聚合物;具有不同反应性官能团和亚基的连接子;以及具有不同结合基团BG2、与连接子的键的治疗剂。 [0226] 本公开还考虑本文所提供的药物递送系统的不同局部施用。在一些实施方式中,本文所提供的药物递送系统被局部施用于有需要的受试者。在某些实施方式中,本文所提 供的药物递送系统通过注射被局部施用于有需要的受试者。在某些实施方式中,本文所提 供的药物递送系统通过口服剂型被局部施用于有需要的受试者。在某些实施方式中,本文 所提供的药物递送系统通过吸入被局部施用于有需要的受试者。在某些实施方式中,本文 所提供的药物递送系统通过植入被局部施用于有需要的受试者。在某些实施方式中,本文 所提供的药物递送系统通过局部(topical)应用被局部(locally)施用于有需要的受试者。 根据特定的治疗剂、连接子和生物聚合物组合,在施用于受试者时治疗剂的释放可能发生 在不同位置。例如,治疗剂的释放可能发生在施用位点处。 [0227] 在一些实施方式中,向受试者施用本文所提供的药物递送系统可以在至少几天到至少几个月的时间段内提供治疗剂的释放。 [0228] 从本文所提供的药物递送系统中释放治疗剂的特征可以为每天从药物递送系统中释放的治疗剂的百分比。在一些实施方式中,治疗剂的释放速率可以在以下范围内变化: 约0.01%至约20%/天、约0.01%至约15%/天、约0.01%至约10%/天、约0.01%至约9%/天、约0.01%至约8%/天、约0.01%至约7%/天、约0.01%至约6%/天、约0.01%至约5%/天、约0.01%至约4%/天、约0.01%至约3%/天、约0.01%至约2%/天、约0.01%至约1%/天、约0.01%至约0.5%/天、约0.01%至约0.4%/天、约0.01%至约0.3%/天,约0.01%至约0.2%/天、约0.01%至约0.1%/天、约0.01%至约0.05%/天、约0.01%至约0.04%/天、约0.01%至约0.03%/天或约0.01%至约0.02%/天。 [0229] 药物组合物 [0230] 另一方面,提供了包括本公开的药物递送系统的药物组合物。 [0231] 另一方面,提供了包括本公开的药物递送系统的药物组合物以及至少一种药学上可接受的赋形剂。 [0232] 如本文所使用的,术语“药物组合物”是指含有呈适于向受试者施用形式的本公开的药物递送系统的调配物。 [0233] 如本文所使用的,术语“药学上可接受的赋形剂”意指可用于制备通常安全、无毒并且在生物学上和其它方面均合乎需要的药物组合物的赋形剂,并且包括对于兽医用途以及人类药物用途而言是可接受的赋形剂。如本文所用,“药学上可接受的赋形剂”包括一种和多于一种此类赋形剂。术语“药学上可接受的赋形剂”还涵盖“药学上可接受的载体”和“药学上可接受的稀释剂”。 [0234] 本文所提供的药物组合物可以呈允许向受试者,包括但不限于人,施用组合物并且允许将组合物调配成与预期施用途径相容的任何形式。 [0235] 针对本文所提供的药物组合物考虑了多种途径,并且因此本文所提供的药物组合物可以取决于预期施用途径而以散装或单位剂型供应。例如,对于口服、经颊和舌下施用,粉剂、悬浮液、颗粒、锭剂、丸剂、胶囊、胶囊锭和囊片作为固体剂型可为可接受的,并且乳液、糖浆、酏剂、悬浮液和溶液作为液体剂型可为可接受的。对于注射施用,凝胶、溶液、乳液和悬浮液作为液体剂型可为可接受的,并且适于用适当溶液复原的粉剂作为固体剂型可为 可接受的。对于吸入施用,溶液、喷雾剂、干粉和气雾剂可为可接受的剂型。对于局部(包括经颊和舌下)或经皮施用,粉剂、喷雾剂、软膏、糊剂、乳膏、洗剂、凝胶、溶液和贴片可为可接受的剂型。对于阴道施用,阴道栓剂、棉塞、乳膏、凝胶、糊剂、泡沫和喷雾剂可为可接受的剂型。对于植入施用,固体、半固体、凝胶可为可接受的剂型。 [0236] 在一些实施方式中,本公开的药物组合物可以呈口服施用调配物形式。 [0237] 在一些实施方式中,本公开的药物组合物可以呈注射施用调配物形式。 [0238] 在一些实施方式中,本公开的药物组合物可以呈吸入施用调配物形式。 [0239] 在一些实施方式中,本公开的药物组合物可以呈局部施用调配物形式。 [0241] 除上文所描述的那些代表性剂型以外,药学上可接受的赋形剂和载体对于本领域技术人员而言通常是已知的并且因此包括在本公开中。这类赋形剂和载剂描述于例如“《雷氏药学大全(Remingtons Pharmaceutical Sciences)》”马克出版有限公司(Mack Pub.Co.,新泽西州)(1991);《雷明顿:药学科学与实践(Remington:The Science and Practice of Pharmacy)》,编辑费城科学大学(University of the Sciences in Philadelphia),第21版,LWW(2005),所述参考文献通过引用并入本文。 [0242] 在一些实施方式中,本公开的药物组合物可以被调配成单剂量。单次剂量中本文所提供的前药化合物的量将取决于所治疗的受试者和特定施用模式而变化。 [0243] 在一些实施方式中,本公开的药物组合物可被调配成以数天、数周、数月或甚至更长的时间间隔向受试者施用。 [0244] 另一方面,还提供了包括本公开的药物递送系统的药物组合物,作为两种或更多种组合疗法。 [0245] 药物递送系统的合成 [0246] 本文所提供的药物递送系统的合成在实施例中的合成方案中进行了说明。本文所提供的药物递送系统可以使用任何已知的有机合成技术来制备并且可以根据多种可能的 合成途径中的任何一种来合成,因此这些方案仅是说明性的,并不意味着限制可用于制备 本文所提供化合物的其它可能的方法。此外,所述流程中的步骤是为了更好地说明且可在 适当时改变。出于研究和可能提交给管理机构的目的来合成实施例中的化合物的实施方 式。 [0247] 用于制备本公开的药物递送系统的反应可以在合适的溶剂中进行,有机合成领域的技术人员可以容易地选择合适的溶剂。合适的溶剂可以在进行反应的温度(例如,范围可以为从溶剂的冻结温度到溶剂的沸腾温度的温度)下与起始材料(反应物)、中间体或产物 基本上无反应性。给定的反应可以在一种溶剂或一种以上溶剂的混合物中进行。取决于特 定反应步骤,用于特定反应步骤的合适溶剂可以由所属领域的技术人员进行选择。 [0248] 本公开的化合物的制备可以涉及各种化学基团的保护和脱保护。本领域技术人员可以容易地确定保护和脱保护的需要以及适当保护基团的选择。可以在例如以下参考文献 中找到保护基团的化学:T.W.Greene和P.G.M.Wuts《, 有机合成中的保护基团(Protective Groups in Organic Synthesis)》,第3版,纽约的约翰威利父子出版公司,(1999); P.Kocienski,《保护基团(Protecting Groups)》,乔治泰米出版社(Georg Thieme Verlag),2003;和Peter G.M.Wuts,《格林氏有机合成中的保护基团(Greene's Protective Groups in Organic Synthesis)》,第5版,威利出版社(Wiley),2014,所述参考文献全都通过引用整体并入本文。 [0249] 可以根据本领域中已知的任何适合方法监测反应。例如,可以通过如核磁共振波1 13 谱法(例如,H或 C)、红外光谱法、分光光度法(例如,UV可见)、质谱法等光谱学手段或通过如高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱法‑质谱法(LCMS)或薄层色谱法(TLC)等色谱方法来监测产物形成。本领域技术人员可以通过各种方法对化合物进行纯化,所述方法包括高效液 相色谱法(HPLC)(“制备型LC‑MS纯化:改进的化合物特定方法优化(Preparative LC‑MS Purification:Improved Compound Specific Method Optimization)”Karl F.Blom, Brian Glass,Richard Sparks,Andrew P.Combs《组合化学杂志(J.Combi.Chem.)》2004,6 (6),874‑883,所述参考文献通过引用整体并入本文)和正相硅胶色谱法。 [0252] 治疗疾病的方法 [0253] 另一方面,提供了一种治疗有需要的受试者的病症的方法,所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的本文所提供的药物递送系统或药物组合物。 [0254] 待治疗的病症取决于所述药物递送系统中选定的治疗剂或本文所提供的药物组合物。在一些实施方式中,所述病症可以为过敏性疾病、自身免疫性疾病或炎性疾病。在某些实施方式中,所述病症可以选自由以下组成的组:过敏性鼻炎、系统性红斑狼疮、风湿病、肾病综合征、自身免疫性溶血性贫血、特发性血小板减少性紫癜、艾迪生病(Addison disease)、神经性皮肤炎、皮肤瘙痒、腱炎、炎症、呼吸道疾病、骨关节炎、新生血管性(湿性)年龄相关黄斑变性(AMD)、视网膜静脉阻塞后黄斑水肿(RVO)、糖尿病性黄斑水肿(DME)、葡萄膜炎性黄斑水肿(UME)、糖尿病性视网膜病变(DR)、近视脉络膜新生血管(mCNV)、皮炎、银屑病、慢性阻塞性肺病和哮喘。 [0255] 在此背景下,术语“治疗有效量”是指在本文所提供的药物递送系统或其药学上可接受的盐中选定的治疗剂的量,所述量有效地向受试者提供“疗法”或“治疗”受试者的病症、疾病或病状。 [0256] 实施例 [0257] 出于说明的目的,包括了以下实施例。然而,应理解,这些实施例并不限制本公开,并且仅意图表明实践本公开的方法。所属领域的技术人员将认识到,所述的化学反应可容易地适用于制备本公开的多种其它化合物,并且用于制备本公开化合物的替代性方法被认 为在本公开的范围内。例如,可通过对于本领域技术人员来说显而易见的修饰,例如通过适当地保护干扰基团、通过利用除所述试剂和构建块外的本领域中已知的其它适合试剂和构 建块和/或通过常规地改变反应条件,成功地合成根据本公开的非示例性化合物。可替代 地,本文所公开或本领域中已知的其它反应将被认为适用于制备本公开的其它化合物。 [0258] 实施例1 [0259] HA和甘氨酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1': 4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0260] [0261] 步骤1:(叔丁氧基羰基)甘氨酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的制备[0262] [0263] 将9α‑氟‑11β,16α,17,21‑四羟基‑1,4‑孕二烯‑3,20‑二酮(曲安奈德,1086mg,2.5mmol)、(叔丁氧基羰基)甘氨酸(438mg,2.5mmol)、1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDCI,527mg,2.75mmol)、N,N‑二甲基吡啶‑4‑胺(DMAP,31mg,0.25mmol)溶解于DCM(25mL)中。在室温下搅拌反应混合物3小时。将溶液用DCM稀释,并用水和饱和盐水溶液洗 涤。将有机层经硫酸钠干燥,过滤并且然后在减压下浓缩。通过柱色谱法(PE/乙酸乙酯=2: 1~1:1)纯化粗残余物,以提供标题化合物(1120mg,产率:77.3%)。MS(m/z):C31H42FNO9的[M 1 +H]+计算值,592.67;实验值,536.2(M+H‑56)。H NMR(400MHz,氯仿‑d)δ7.21(d,J= 10.2Hz,1H),6.35(dd,J=10.1,1.9Hz,1H),6.13(t,J=1.7Hz,1H),5.05(d,J=9.4Hz,1H), 5.01–4.87(m,3H),4.42(d,J=8.9Hz,1H),4.11–3.97(m,2H),2.63(tdd,J=13.9,6.1, 1.8Hz,1H),2.54–2.29(m,4H),2.17–2.05(m,1H),1.86(dt,J=11.8,5.2Hz,1H),1.77–1.59(m,4H),1.55(s,3H),1.44(d,J=9.8Hz,12H),1.21(s,3H),0.93(s,3H)。 [0264] 步骤2:甘氨酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐的制备 [0265] [0266] 在冰浴下向(叔丁氧基羰基)甘氨酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯(500mg, 0.85mmol)于EtOAc(10mL)中的搅拌溶液中缓慢添加含4M HCl的乙酸乙酯(2mL)。使反应混 合物在室温下搅拌18小时。将溶液用EtOAc稀释,并且在减压下浓缩以提供呈白色固体的标题化合物(0.43g,产率:80.6%),所述标题化合物无需进一步纯化即可使用。MS(m/z): C26H34FNO7的[M+H]+计算值,492.56;实验值,492.3。 [0267] 步骤3:HA和甘氨酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0268] [0269] 在100mL圆底烧瓶中,将透明质酸(201.5mg,0.5mmol羧酸)溶解于40mL的去离子水中,随后在搅拌时逐滴添加26mL的乙腈。向溶液中添加4‑甲基吗啉(NMM,35mg,0.35mmol)和甘氨酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑ 4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐(185mg,0.35mmol),从而使粘度暂时增加。然后将溶液冷却到0℃,并且添加4‑(4,6‑二甲氧基‑1,3,5‑三嗪‑2‑基)‑4‑甲基吗啉鎓氯化物(DMTMM,111mg,0.4mmol)并在室温下搅拌72小时。然后将NaCl(293mg,5mmol)添加到反应混合物中,将所述反应混合物搅拌1小时,并且随后在搅拌时逐滴添加无水醇(200mL)。 将混合物过滤。收集滤饼,用无水醇洗涤,并且在真空下干燥以得到呈白色固体的标题化合 1 物。(透明质酸钠MW 50KDa 0.255g,产率:68.3%,DSR=32%);H NMR(400MHz,氧化氘)δ 7.69–7.56(m,0.32H),6.56–6.45(m,0.32H),6.35–6.27(m,0.32H),5.51–5.35(m,0.32H), 5.19–5.00(m,0.64H),4.77–4.36(m,2.32H),4.28–3.15(m,10.64H),2.90–2.45(m,1.28H), 2.31–2.18(m,0.32H),2.17–1.73(m,4.28H),1.69–1.47(m,1.92H),1.41–1.26(m,0.96H), 1.08–0.89(m,0.96H)。 [0270] 经此步骤,透明质酸钠(MW 500KDa)的反应提供了对应的产物(0.2g,产率:1 53.6%,DSR=33%)。H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.69–7.55(m,0.33H),6.57–6.45(m, 0.33H),6.35–6.25(m,0.33H),5.51–5.34(m,0.33H),5.18–5.01(m,0.66H),4.77–4.36(m, 2.33H),4.29–3.17(m,10.66H),2.89–2.46(m,1.32H),2.30–2.19(m,0.33H),2.17–1.71(m, 4.32H),1.65–1.44(m,1.98H),1.38–1.23(m,0.99H),1.06–0.88(m,0.99H)。 [0271] 经此步骤,透明质酸钠(MW 2000KDa)的反应提供了对应的产物(0.21g,产率:1 56.3%,DSR=30%)。H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.67–7.55(m,0.3H),6.56–6.45(m,0.3H), 6.36–6.27(m,0.3H),5.51–5.34(m,0.3H),5.18–5.01(m,0.6H),4.78–4.35(m,2.3H),4.31– 3.22(m,10.6H),2.89–2.46(m,1.2H),2.33–2.19(m,0.3H),2.18–1.73(m,4.2H),1.70–1.48(m,1.8H),1.40–1.26(m,0.9H),1.10–0.90(m,0.9H)。 [0272] 实施例2 [0273] HA和4‑氨基丁酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2', 1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0274] [0275] 步骤1:4‑((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的制备 [0276] [0277] 将9α‑氟‑11β,16α,17,21‑四羟基‑1,4‑孕二烯‑3,20‑二酮(曲安奈德,4345mg,10mmol)、4‑((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸(2642mg,13mmol)、1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDCI,2492mg,13mmol)、N,N‑二甲基吡啶‑4‑胺(DMAP,122mg,1mmol)溶解于DCM(100mL)中。在室温下搅拌反应混合物24小时。将溶液用DCM稀释,并用水和饱和盐水溶液洗涤。将有机层经硫酸钠干燥,过滤并且然后在减压下浓缩。通过柱色谱法(PE/乙酸乙酯=5: 1~2:1)纯化粗残余物,以提供标题化合物(6000mg,产率:96.9%)。MS(m/z):C33H46FNO9的[M+ 1 +H]计算值,620.73;实验值,564.3(M+H‑56)。H NMR(400MHz,氯仿‑d)δ7.20(d,J=10.1Hz, 1H),6.35(dd,J=10.2,1.9Hz,1H),6.13(d,J=1.8Hz,1H),4.98(d,J=4.9Hz,1H),4.90(s, 2H),4.68(s,1H),4.42(d,J=8.7Hz,1H),3.20(q,J=6.7Hz,2H),2.62(tt,J=14.2,7.3Hz, 1H),2.54–2.35(m,5H),2.17–2.06(m,1H),1.92–1.82(m,3H),1.74–1.58(m,5H),1.55(s, 3H),1.44(d,J=4.0Hz,12H),1.21(s,3H),0.94(s,3H)。 [0278] 步骤2:4‑氨基丁酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐的制备 [0279] [0280] 在冰浴下向4‑((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯(600mg,0.97mmol)于EtOAc(24mL)中的搅拌溶液中缓慢添加含4M HCl的乙酸乙酯(4.8mL)。 使反应混合物在室温下搅拌18小时。将溶液用EtOAc稀释,并且在减压下浓缩以提供呈白色固体的标题化合物(0.53g,产率:98.3%),所述标题化合物无需进一步纯化即可使用。MS(m/z):C28H38FNO7的[M+H]+计算值,520.61;实验值,520.1。 [0281] 步骤3:HA和4‑氨基丁酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备[0282] [0283] 在100mL圆底烧瓶中,将透明质酸(201.5mg,0.5mmol羧酸)溶解于40mL的去离子水中,随后在搅拌时逐滴添加26mL的乙腈。向溶液中添加4‑甲基吗啉(NMM,35mg,0.35mmol)和 4‑氨基丁酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐(195mg,0.35mmol),从而使粘度暂时增加。然后将溶液冷却到0℃,并且添加4‑(4,6‑二甲氧基‑1,3,5‑三嗪‑2‑基)‑4‑甲基吗啉鎓氯化物(DMTMM,111mg,0.4mmol),并在室温下搅拌72小时。然后将NaCl(293mg,5mmol)添加到反应混合物中,将所述反应混合物搅拌1小时,并且随后在搅拌时逐滴添加无水醇 (200mL)。将混合物过滤。收集滤饼,用无水醇洗涤,并且在真空下干燥以得到呈白色固体的 1 标题化合物。(透明质酸钠MW 50KDa 0.263g,产率:68.6%,DSR=32%);H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.70–7.56(m,0.32H),6.59–6.47(m,0.32H),6.39–6.26(m,0.32H),5.43–5.31(m, 0.32H),5.20–5.01(m,0.64H),4.78–4.44(m,2.32H),4.21–3.16(m,10.64H),2.91–2.51(m, 1.6H),2.35–2.26(m,0.32H),2.22–1.72(m,5.56H),1.70–1.47(m,1.92H),1.41–1.25(m, 0.96H),1.06–0.92(m,0.96H)。 [0284] 经此步骤,透明质酸钠(MW 500KDa)的反应提供了对应的产物(0.196g,产率:1 51.1%,DSR=30%)。H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.70–7.56(m,0.3H),6.58–6.48(m,0.3H), 6.38–6.26(m,0.3H),5.42–5.28(m,0.3H),5.18–5.00(m,0.6H),4.77–4.41(m,2.3H),4.23– 3.13(m,10.6H),2.87–2.51(m,1.5H),2.35–2.19(m,0.3H),2.18–1.71(m,5.4H),1.69–1.43(m,1.8H),1.39–1.21(m,0.9H),1.06–0.90(m,0.9H)。 [0285] 经此步骤,透明质酸钠(MW 2000KDa)的反应提供了对应的产物(0.191g,产率:1 49.8%,DSR=39%)。H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.70–7.54(m,0.39H),6.58–6.47(m, 0.39H),6.39–6.25(m,0.39H),5.43–5.30(m,0.39H),5.19–5.00(m,0.78H),4.78–4.44(m, 2.39H),4.25–3.15(m,10.78H),2.89–2.50(m,1.95H),2.34–2.23(m,0.39H),2.21–1.72(m, 6.12H),1.70–1.46(m,2.34H),1.41–1.23(m,1.17H),1.06–0.91(m,1.17H)。 [0286] 实施例3 [0287] HA和(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸4‑氨基丁酯的缀合物的制备[0288] [0289] [0290] 步骤1:(4‑(((2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12b‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)丁基)氨基甲酸叔丁酯的制备 [0291] [0292] 在N2下向9α‑氟‑11β,16α,17,21‑四羟基‑1,4‑孕二烯‑3,20‑二酮(曲安奈德,1304mg,3mmol)和碳酸双(4‑硝基苯基)酯(1094mg,3.6mmol)于二氯甲烷(27mL)中的混合物中添加三乙胺(1mL,7.2mmol),将反应混合物加热至回流持续6小时。然后添加(4‑羟基丁基)氨基甲酸叔丁酯(738mg,3.9mmol),并且在室温下将所得混合物搅拌16小时。将溶液用DCM稀释,并且用饱和NaHCO3溶液、水和饱和盐水溶液洗涤。将有机层经硫酸钠干燥,过滤并且然后在减压下浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物以得到标题产物(1.4g,产率:71.9%); + MS(m/z):C34H48FNO10的[M+H]计算值,650.75;实验值,594.3(M+H‑56)。 [0293] 步骤2:(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸4‑氨基丁酯盐酸盐的制备[0294] [0295] 在冰浴下向(4‑(((2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12b‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)丁基)氨基甲酸叔丁酯(1000mg,1.54mmol)于EtOAc(30mL)中的搅拌溶液中缓慢添加含4M HCl的乙酸乙酯(6mL)。使反应混合物在室温下搅拌18小时。将溶液用EtOAc稀释,并且在减压下浓缩以提供呈白色固体的标题化合物(0.9g,产率:99.8%),所述标题化合物无需进一步纯化即可使用。MS(m/z):C29H40FNO8的[M+H]+计算值,550.64;实验值,550.3。 [0296] 步骤3:HA和(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1': 4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸4‑氨基丁酯的缀合物的制备 [0297] [0298] 在100mL圆底烧瓶中,将透明质酸(101mg,0.25mmol羧酸)溶解于20mL的去离子水中,随后在搅拌时逐滴添加13mL的乙腈。向溶液中添加4‑甲基吗啉(NMM,18mg,0.175mmol)和(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸4‑氨基丁酯盐酸盐(103mg,0.175mmol),从而使粘度暂时增加。然后将溶液冷却到0℃,并且添加4‑(4,6‑二甲氧基‑1,3,5‑三嗪‑2‑基)‑4‑甲基吗啉鎓氯化物(DMTMM,49mg,0.175mmol)并在室温下搅拌72小时。然后将NaCl(147mg,2.5mmol)添加到反应混合物中,将所述反应混合物搅拌1小时,并且随后在搅拌时逐滴添加无水醇(100mL)。将混合物过滤。收集滤饼,用无水醇洗涤,并且在真空中干燥以得 1 到呈白色固体的标题化合物。(透明质酸钠MW 50KDa 0.096g,产率:48.7%,DSR=27%);H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.67–7.58(m,0.27H),6.56–6.49(m,0.27H),6.34–6.27(m,0.27H), 5.42–5.34(m,0.27H),5.19–5.01(m,0.54H),4.80–4.45(m,2.81H),4.39–3.07(m,10.54H), 2.92–2.49(m,1.35H),2.32–1.68(m,3.54H),1.67–1.45(m,3.51H),1.38–1.27(m,0.81H), 1.05–0.90(m,0.81H)。 [0299] 经此步骤,透明质酸钠(MW 500KDa)的反应提供了对应的产物(0.068g,产率:1 34.5%,DSR=25%)。H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.66–7.54(m,0.25H),6.55–6.47(m, 0.25H),6.35–6.25(m,0.25H),5.42–5.29(m,0.25H),5.18–4.97(m,0.5H),4.79–4.42(m, 2.75H),4.39–3.05(m,10.5H),2.89–2.48(m,1.25H),2.37–1.67(m,3.5H),1.66–1.46(m, 3.25H),1.40–1.25(m,0.75H),1.07–0.90(m,0.75H)。 [0300] 经此步骤,透明质酸钠(MW 2000KDa)的反应提供了对应的产物(0.068g,产率:1 34.5%,DSR=15%)。H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.66–7.54(m,0.15H),6.57–6.43(m, 0.15H),6.34–6.25(m,0.15H),5.43–5.29(m,0.15H),5.18–4.97(m,0.3H),4.79–4.43(m, 2.45H),4.40–3.01(m,10.3H),2.86–2.50(m,0.75H),2.37–1.66(m,3.3H),1.65–1.46(m, 1.95H),1.39–1.24(m,0.45H),1.07–0.91(m,0.45H)。 [0301] 实施例4 [0302] HA和(4‑氨基丁基)氨基甲酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备[0303] [0304] 步骤1:(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)丁烷‑1,4‑二基二氨基甲酸叔丁酯的制备 [0305] [0306] 在N2下向9α‑氟‑11β,16α,17,21‑四羟基‑1,4‑孕二烯‑3,20‑二酮(曲安奈德,1090mg,2.5mmol)和碳酸双(4‑硝基苯基)酯(912mg,3mmol)于二氯甲烷(80mL)中的混合物中添加三乙胺(0.85mL,6mmol),将反应混合物加热至回流持续6小时。然后添加(4‑氨基丁基)氨基甲酸叔丁酯(612mg,3.25mmol),并且在室温下将所得混合物搅拌16小时。将溶液用DCM稀释,并且用饱和NaHCO3溶液、水和饱和盐水溶液洗涤。将有机层经硫酸钠干燥,过滤并且然后在减压下浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物以得到标题产物(1.24g,产率:76.5%); + 1 MS(m/z):C34H49FN2O9的[M+H]计算值,649.77;实验值,593.2(M+H‑56)。H NMR(400MHz,氯仿‑d)δ7.23(d,J=10.1Hz,1H),6.34(dd,J=10.1,1.9Hz,1H),6.13(t,J=1.7Hz,1H),5.14(t,J=5.9Hz,1H),4.99(d,J=4.8Hz,1H),4.88(t,J=13.2Hz,2H),4.69–4.58(m,1H),4.41 (dt,J=10.0,2.5Hz,1H),3.17(dt,J=30.1,6.1Hz,4H),2.68–2.59(m,1H),2.55–2.28(m, 4H),2.10(d,J=4.8Hz,2H),1.93–1.75(m,2H),1.70–1.53(m,9H),1.44(d,J=6.8Hz,12H), 1.21(s,3H),0.96(s,3H)。 [0307] 步骤2:(4‑氨基丁基)氨基甲酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐的制备[0308] [0309] 在冰浴下向(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1': 4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)丁烷‑1,4‑二基二氨基甲酸叔丁酯(400mg,0.62mmol)于EtOAc(8mL)中的搅拌溶液中缓慢添加含4M HCl的乙酸乙酯 (1.6mL)。使反应混合物在室温下搅拌18小时。将溶液用EtOAc稀释,并且在减压下浓缩以提供呈白色固体的标题化合物(0.3g,产率:82.8%),所述标题化合物无需进一步纯化即可使用。MS(m/z):C29H41FN2O7的[M+H]+计算值,549.65;实验值,549.3。 [0310] 步骤3:HA和(4‑氨基丁基)氨基甲酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0311] [0312] 在100mL圆底烧瓶中,将透明质酸(161mg,0.4mmol羧酸)溶解于30mL的去离子水中,随后在搅拌时逐滴添加21mL的乙腈。向溶液中添加4‑甲基吗啉(NMM,35mg,0.35mmol)和(4‑氨基丁基)氨基甲酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2', 1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐(164mg,0.28mmol),从而使粘度暂时增加。然后将溶液冷却到0℃,并且添加4‑(4,6‑二甲氧基‑1,3,5‑三嗪‑2‑基)‑4‑甲基吗啉鎓氯化物(DMTMM,78mg,0.28mmol),并在室温下搅拌72小时。然后将NaCl(234mg,4mmol)添加到反应混合物中,将所述反应混合物搅拌1小时,并且随后在搅拌时逐滴添加无水醇(200mL)。将混合物过滤。收集滤饼,用无水醇洗涤,并且在真空中干燥以得到 1 呈白色固体的标题化合物。(透明质酸钠MW 50KDa 0.151g,产率:48%,DSR=27%);H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.69–7.56(m,0.27H),6.59–6.46(m,0.27H),6.36–6.25(m,0.27H), 5.36–5.20(m,0.27H),5.19–4.90(m,0.54H),4.76–4.42(m,2.27H),4.26–3.13(m,11.08H), 2.92–2.48(m,1.08H),2.39–2.22(m,0.54H),2.21–1.98(m,3.54H),1.95–1.48(m,3.24H), 1.42–1.26(m,0.81H),1.10–0.92(m,0.81H)。 [0313] 经此步骤,透明质酸钠(MW 500KDa)的反应提供了对应的产物(0.183g,产率:1 58.1%,DSR=25%)。H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.69–7.56(m,0.25H),6.59–6.45(m, 0.25H),6.37–6.23(m,0.25H),5.37–5.05(m,0.75H),4.76–4.41(m,2.25H),4.25–3.09(m, 11H),2.91–2.46(m,1H),2.34–2.20(m,0.5H),2.19–1.98(m,3.5H),1.94–1.46(m,3H), 1.41–1.27(m,0.75H),1.09–0.92(m,0.75H)。 [0314] 经此步骤,透明质酸钠(MW 2000KDa)的反应提供了对应的产物(0.142g,产率:1 45.1%,DSR=15%)。H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.69–7.58(m,0.15H),6.60–6.49(m, 0.15H),6.40–6.26(m,0.15H),5.39–5.00(m,0.45H),4.80–4.47(m,2.15H),4.20–3.12(m, 10.6H),2.92–2.47(m,0.6H),2.40–2.23(m,0.3H),2.21–1.97(m,3.3H),1.95–1.46(m, 1.8H),1.41–1.25(m,0.45H),1.08–0.93(m,0.45H)。 [0315] 实施例5 [0316] HA和3‑氨基丙酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2', 1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0317] [0318] 步骤1:3‑((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的制备 [0319] [0320] 将9α‑氟‑11β,16α,17,21‑四羟基‑1,4‑孕二烯‑3,20‑二酮(曲安奈德,679mg,1.56mmol)、3‑((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸(387.5mg,1.8mmol)、1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDCI,432mg,2.25mmol)、N,N‑二甲基吡啶‑4‑胺(DMAP,18mg,0.15mmol)溶解于DCM(20mL)中。在室温下搅拌反应混合物24小时。将溶液用DCM稀释,并用水和饱和盐水溶液洗涤。将有机层经硫酸钠干燥,过滤并且然后在减压下浓缩。通过柱色谱法(PE/乙酸乙酯=5:1~2:1)纯化粗残余物,以提供标题化合物(650mg,产率:68.8%)。MS(m/z): + 1 C32H44FNO9的[M+H] 计算值,606.70;实验值,606.2.H NMR(400MHz,氯仿‑d)δ7.22(d,J= 10.1Hz,1H),6.35(dd,J=10.2,1.9Hz,1H),6.14(t,J=1.7Hz,1H),5.17(s,1H),4.99(dd,J =11.3,6.4Hz,2H),4.88(d,J=17.6Hz,1H),4.42(dt,J=8.4,2.8Hz,1H),3.46(t,J= 6.4Hz,2H),2.70–2.58(m,3H),2.53–2.29(m,4H),2.11(td,J=12.6,5.9Hz,1H),1.87(dt,J=11.9,5.4Hz,1H),1.73–1.60(m,4H),1.58(d,J=1.5Hz,3H),1.44(d,J=4.0Hz,12H), 1.22(s,3H),0.94(s,3H)。 [0321] 步骤2:3‑氨基丙酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐的制备 [0322] [0323] 在冰浴下向3‑((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯(605mg,1mmol)于EtOAc(25mL)中的搅拌溶液中缓慢添加含4M HCl的乙酸乙酯(5mL)。使反 应混合物在室温下搅拌40小时。将溶液用EtOAc稀释并且在减压下浓缩以提供呈白色固体 的标题化合物(0.54g,产率:99.7%),所述标题化合物无需进一步纯化即可使用。MS(m/z): C27H36FNO7的[M+H]+计算值,506.58;实验值,506.1。 [0324] 步骤3:HA(透明质酸)和3‑氨基丙酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0325] [0326] 在100mL圆底烧瓶中,将透明质酸(161mg,0.4mmol羧酸)溶解于30mL的去离子水中,随后在搅拌时逐滴添加21mL的乙腈。向溶液中添加4‑甲基吗啉(NMM,28mg,0.28mmol)和 3‑氨基丙酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐(152mg,0.28mmol),从而使粘度暂时增加。然后将溶液冷却到0℃,并且添加4‑(4,6‑二甲氧基‑1,3,5‑三嗪‑2‑基)‑4‑甲基吗啉鎓氯化物(DMTMM,78mg,0.28mmol)并在室温下搅拌72小时。然后将NaCl(234mg,4mmol)添加到反应混合物中,将所述反应混合物搅拌1小时,并且随后在搅拌时逐滴添加无水醇 (200mL)。将混合物过滤。收集滤饼,用无水醇洗涤,并且在真空中干燥以得到呈白色固体的 1 标题化合物。(透明质酸钠MW 50KDa 0.194g,产率:64.1%,DSR=26%);H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.67–7.51(m,0.26H),6.55–6.39(m,0.26H),6.33–6.19(m,0.26H),5.40–5.23(m, 0.26H),5.16–4.94(m,0.52H),4.76–4.32(m,2.26H),4.18–3.12(m,10.52H),2.99–2.39(m, 1.56H),2.30–2.17(m,0.26H),2.16–1.67(m,4.3H),1.65–1.42(m,1.56H),1.35–1.18(m, 0.78H),1.04–0.86(m,0.78H)。 [0327] 经此步骤,透明质酸钠(MW 500KDa)的反应提供了对应的产物(0.23g,产率:76%,1 DSR=22%)。H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.66–7.52(m,0.22H),6.55–6.39(m,0.22H),6.32– 6.18(m,0.22H),5.36–5.23(m,0.22H),5.16–4.95(m,0.44H),4.77–4.32(m,2.22H),4.19– 3.09(m,10.44H),2.94–2.40(m,1.32H),2.29–2.18(m,0.22H),2.16–1.91(m,4.1H),1.90– 1.42(m,1.32H),1.37–1.18(m,0.66H),1.02–0.85(m,0.66H)。 [0328] 经此步骤,透明质酸钠(MW 2000KDa)的反应提供了对应的产物(0.099g,产率:1 32.7%,DSR=30%)。H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.66–7.51(m,0.3H),6.55–6.40(m,0.3H), 6.32–6.21(m,0.3H),5.39–5.25(m,0.3H),5.14–4.94(m,0.6H),4.76–4.35(m,2.3H),4.21– 3.14(m,10.6H),2.95–2.45(m,1.8H),2.38–2.22(m,0.3H),2.18–1.68(m,4.5H),1.65–1.43(m,1.8H),1.38–1.20(m,0.9H),1.05–0.87(m,0.9H)。 [0329] 实施例6 [0330] HA和吡咯烷‑3‑甲酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0331] [0332] [0333] 步骤1:3‑(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1': 4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)吡咯烷‑1,3‑二甲酸1‑(叔丁基)酯的制备 [0334] [0335] 将9α‑氟‑11β,16α,17,21‑四羟基‑1,4‑孕二烯‑3,20‑二酮(曲安奈德,652mg,1.5mmol)、1‑(叔丁氧基羰基)吡咯烷‑3‑甲酸(420mg,1.95mmol)、1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDCI,375mg,1.95mmol)、N,N‑二甲基吡啶‑4‑胺(DMAP,18mg,0.15mmol)溶解于DCM(20mL)中。在室温下搅拌反应混合物3小时。将溶液用DCM稀释,并用水和饱和盐水溶液洗涤。将有机层经硫酸钠干燥,过滤并且然后在减压下浓缩。通过柱色谱法(PE/乙酸乙酯=5:1~2:1)纯化粗残余物,以提供标题化合物(910mg,产率:96.1%)。MS(m/z): + 1 C34H46FNO9的[M+H] 计算值,632.74;实验值,632.2。H NMR(400MHz,氯仿‑d)δ7.22(d,J= 10.1Hz,1H),6.35(dd,J=10.1,1.9Hz,1H),6.13(t,J=1.7Hz,1H),5.05–4.80(m,3H),4.42 (s,1H),3.70–3.33(m,4H),3.19(q,J=7.2,6.8Hz,1H),2.69–2.44(m,2H),2.39(dd,J= 12.9,5.4Hz,2H),2.30–1.99(m,4H),1.91–1.82(m,1H),1.70–1.58(m,4H),1.55(s,3H), 1.46(s,9H),1.43(s,3H),1.22(s,3H),0.93(s,3H)。 [0336] 步骤2:吡咯烷‑3‑甲酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐的制备 [0337] [0338] 在冰浴下,向3‑(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2', 1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)吡咯烷‑1,3‑二甲酸1‑(叔丁基)酯(600mg,0.95mmol)于EtOAc(24mL)中的搅拌溶液中缓慢添加含4M HCl的乙酸乙酯 (4.8mL)。使反应混合物在室温下搅拌18小时。将溶液用EtOAc稀释,并且在减压下浓缩以提供呈白色固体的标题化合物(0.53g,产率:97.6%),所述标题化合物无需进一步纯化即可使用。MS(m/z):C29H38FNO7的[M+H]+计算值,532.62;实验值,532.3。 [0339] 步骤3:HA和吡咯烷‑3‑甲酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备[0340] [0341] 在100mL圆底烧瓶中,将透明质酸(201mg,0.5mmol羧酸)溶解于40mL的去离子水中,随后在搅拌时逐滴添加20mL的乙腈。向溶液中添加4‑甲基吗啉(NMM,35mg,0.35mmol)和吡咯烷‑3‑甲酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐(199mg,0.35mmol),从而使粘度暂时增加。然后将溶液冷却到0℃,并且添加4‑(4,6‑二甲氧基‑1,3,5‑三嗪‑2‑基)‑4‑甲基吗啉鎓氯化物(DMTMM,97mg,0.35mmol),并在室温下搅拌72小时。然后将NaCl(439mg, 7.5mmol)添加到反应混合物中,将所述反应混合物搅拌1小时,并且随后在搅拌时逐滴添加无水醇(200mL)。将混合物过滤。收集滤饼,用无水醇洗涤,并且在真空下干燥以得到呈白色 1 固体的标题化合物。(透明质酸钠MW 50KDa 0.199g,产率:51.4%,DSR=22%);H NMR (400MHz,氧化氘)δ7.68–7.48(m,0.22H),6.57–6.38(m,0.22H),6.33–6.17(m,0.22H), 5.47–5.23(m,0.22H),5.17–4.98(m,0.44H),4.77–4.23(m,2.22H),4.19–2.99(m,11.1H), 2.87–2.38(m,0.88H),2.32–1.68(m,4.76H),1.66–1.42(m,1.32H),1.38–1.16(m,0.66H), 1.03–0.82(m,0.66H)。 [0342] 经此步骤,透明质酸钠(MW 500KDa)的反应提供了对应的产物(0.235g,产率:1 60.6%,DSR=7%)。H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.71–7.62(m,0.07H),6.61–6.53(m,0.07H), 6.42–6.33(m,0.07H),5.47–5.37(m,0.07H),5.28–5.00(m,0.14H),4.77–4.43(m,2.07H), 4.26–3.02(m,10.35H),2.91–2.58(m,0.28H),2.42–1.77(m,3.56H),1.74–1.58(m,0.42H), 1.44–1.35(m,0.21H),1.08–0.95(m,0.21H)。 [0343] 经此步骤,透明质酸钠(MW 2000KDa)的反应提供了对应的产物(0.188g,产率:1 48.5%,DSR=5%)。H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.72–7.62(m,0.05H),6.62–6.52(m,0.05H), 6.41–6.33(m,0.05H),5.48–5.38(m,0.05H),5.26–5.01(m,0.1H),4.80–4.40(m,2.05H), 4.33–2.98(m,10.25H),2.89–2.55(m,0.2H),2.42–1.75(m,3.4H),1.73–1.55(m,0.3H), 1.44–1.33(m,0.15H),1.10–0.97(m,0.15H)。 [0344] 实施例7 [0345] HA和氮杂环丁烷‑3‑甲酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备[0346] [0347] 步骤1:3‑(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1': 4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)氮杂环丁烷‑1,3‑二甲酸1‑(叔丁基)酯的制备 [0348] [0349] 将9α‑氟‑11β,16α,17,21‑四羟基‑1,4‑孕二烯‑3,20‑二酮(曲安奈德,434.5mg,1mmol)、1‑(叔丁氧基羰基)氮杂环丁烷‑3‑甲酸(262mg,1.3mmol)、1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDCI,249mg,1.3mmol)、N,N‑二甲基吡啶‑4‑胺(DMAP,13mg,0.1mmol)溶解于DCM(20mL)中。在室温下搅拌反应混合物2小时。将溶液用DCM稀释,并用水和饱和盐水溶液洗涤。将有机层经硫酸钠干燥,过滤并且然后在减压下浓缩。通过柱色谱法(PE/乙酸乙酯=5:1~2:1)纯化粗残余物,以提供标题化合物(600mg,产率:97.2%)。MS(m/z): + 1 C33H44FNO9的[M+H] 计算值,618.71;实验值,618.2。H NMR(400MHz,氯仿‑d)δ7.22(d,J= 10.1Hz,1H),6.36(dd,J=10.2,1.9Hz,1H),6.14(t,J=1.7Hz,1H),5.10–4.96(m,2H),4.90 (d,J=17.6Hz,1H),4.43(q,J=3.4Hz,1H),4.24–4.09(m,4H),3.48(tt,J=8.5,6.4Hz, 1H),2.70–2.57(m,1H),2.55–2.27(m,4H),2.11(td,J=12.5,5.9Hz,1H),1.87(dt,J= 11.6,5.1Hz,1H),1.77–1.59(m,4H),1.58(s,3H),1.44(d,J=2.6Hz,12H),1.22(s,3H), 0.95(s,3H)。 [0350] 步骤2:氮杂环丁烷‑3‑甲酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12αa,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐的制备[0351] [0352] 在冰浴下,向3‑(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2', 1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)氮杂环丁烷‑1,3‑二甲酸1‑(叔丁基)酯(300mg,0.49mmol)于EtOAc(12mL)中的搅拌溶液中缓慢添加含4M HCl的乙酸乙 酯(2.4mL)。使反应混合物在室温下搅拌18小时。将溶液用EtOAc稀释,并且在减压下浓缩以提供呈白色固体的标题化合物(0.25g,产率:92.9%),所述标题化合物无需进一步纯化即可使用。MS(m/z):C28H36FNO7的[M+H]+计算值,518.59;实验值,518.3。 [0353] 步骤3:HA和氮杂环丁烷‑3‑甲酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0354] [0355] 在100mL圆底烧瓶中,将透明质酸(161mg,0.4mmol羧酸)溶解于30mL的去离子水中,随后在搅拌时逐滴添加21mL的乙腈。向溶液中添加4‑甲基吗啉(NMM,28mg,0.28mmol)和氮杂环丁烷‑3‑甲酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α, 10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1': 4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐(155mg,0.28mmol),从而使粘度暂时增加。然后将溶液冷却到0℃,并且添加4‑(4,6‑二甲氧基‑1,3,5‑三嗪‑2‑基)‑ 4‑甲基吗啉鎓氯化物(DMTMM,78mg,0.28mmol),并在室温下搅拌72小时。然后将NaCl (234mg,4mmol)添加到反应混合物中,将所述反应混合物搅拌1小时,并且随后在搅拌时逐滴添加无水醇(200mL)。将混合物过滤。收集滤饼,用无水醇洗涤,并且在真空下干燥以得到 1 呈白色固体的标题化合物。(透明质酸钠MW 50KDa 0.24g,产率:78.4%,DSR=15%);H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.75–7.61(m,0.15H),6.65–6.53(m,0.15H),6.43–6.32(m,0.15H), 5.58–5.44(m,0.15H),5.26–5.11(m,0.3H),4.81–4.41(m,2.15H),4.34–3.38(m,10.75H), 2.99–2.57(m,0.3H),2.45–1.80(m,4.2H),1.77–1.52(m,0.9H),1.48–1.37(m,0.45H), 1.14–1.00(m,0.45H)。 [0356] 经此步骤,透明质酸钠(MW 500KDa)的反应提供了对应的产物(0.236g,产率:1 77%,DSR=19%)。H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.73–7.62(m,0.19H),6.64–6.52(m,0.19H), 6.43–6.31(m,0.19H),5.58–5.42(m,0.19H),5.27–5.12(m,0.38H),4.81–4.40(m,2.19H), 4.30–3.19(m,10.95H),2.95–2.55(m,0.38H),2.41–1.75(m,4.52H),1.74–1.53(m,1.14H), 1.47–1.35(m,0.57H),1.12–0.97(m,0.57H)。 [0357] 经此步骤,透明质酸钠(MW 2000KDa)的反应提供了对应的产物(0.166g,产率:1 54.2%,DSR=20%)。H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.76–7.61(m,0.2H),6.64–6.52(m,0.2H), 6.43–6.32(m,0.2H),5.56–5.44(m,0.2H),5.27–5.09(m,0.4H),4.80–4.43(m,2.2H),4.26– 3.11(m,11H),2.96–2.50(m,0.4H),2.37–1.75(m,4.6H),1.74–1.50(m,1.2H),1.45–1.34(m,0.6H),1.11–0.95(m,0.6H)。 [0358] 实施例8 [0359] HA和丙氨酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1': 4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0360] [0361] 步骤1:(叔丁氧基羰基)丙氨酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的制备[0362] [0363] 将9α‑氟‑11β,16α,17,21‑四羟基‑1,4‑孕二烯‑3,20‑二酮(曲安奈德,652mg,1.5mmol)、(叔丁氧基羰基)丙氨酸(369mg,1.95mmol)、1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDCI,374mg,1.95mmol)、N,N‑二甲基吡啶‑4‑胺(DMAP,18mg,0.15mmol)溶解于DCM(30mL)中。在室温下搅拌反应混合物2小时。将溶液用DCM稀释,并用水和饱和盐水溶液洗 涤。将有机层经硫酸钠干燥,过滤并且然后在减压下浓缩。通过柱色谱法(PE/乙酸乙酯=5: 1~2:1)纯化粗残余物,以提供标题化合物(900mg,产率:99.1%)。MS(m/z):C32H44FNO9的[M++ 1 H]计算值,606.70;实验值,606.2。H NMR(400MHz,氯仿‑d)δ7.22(dd,J=10.1,2.1Hz,1H), 6.35(dd,J=10.2,1.9Hz,1H),6.14(t,J=1.7Hz,1H),5.13–4.78(m,4H),4.42(d,J= 8.4Hz,2H),2.72–2.56(m,1H),2.57–2.21(m,4H),2.10(td,J=12.5,5.8Hz,1H),1.92–1.81(m,1H),1.79‑1.58(m,4H),1.55(m,3H),1.51(dd,J=11.0,7.4Hz,3H),1.44(d,J=6.6Hz, 12H),1.22(d,J=3.2Hz,3H),0.93(d,J=1.9Hz,3H)。 [0364] 步骤2:丙氨酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐的制备 [0365] [0366] 在冰浴下向(叔丁氧基羰基)丙氨酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯(600mg, 0.99mmol)于EtOAc(12mL)中的搅拌溶液中缓慢添加含4M HCl的乙酸乙酯(2.4mL)。使反应 混合物在室温下搅拌18小时。将溶液用EtOAc稀释,并且在减压下浓缩以提供呈白色固体的标题化合物(0.51g,产率:95.1%),所述标题化合物无需进一步纯化即可使用。MS(m/z): C27H36FNO7的[M+H]+计算值,506.58;实验值,506.4。 [0367] 步骤3:HA和丙氨酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0368] [0369] 在100mL圆底烧瓶中,将透明质酸(161mg,0.4mmol羧酸)溶解于30mL的去离子水中,随后在搅拌时逐滴添加21mL的乙腈。向溶液中添加4‑甲基吗啉(NMM,28mg,0.28mmol)和丙氨酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑ 4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐(155mg,0.28mmol),从而使粘度暂时增加。然后将溶液冷却到0℃,并且添加4‑(4,6‑二甲氧基‑1,3,5‑三嗪‑2‑基)‑4‑甲基吗啉鎓氯化物(DMTMM,78mg,0.28mmol),并在室温下搅拌72小时。然后将NaCl(234mg,4mmol)添加到反应混合物中,将所述反应混合物搅拌1小时,并且随后在搅拌时逐滴添加无水醇 (200mL)。将混合物过滤。收集滤饼,用无水醇洗涤,并且在真空中干燥以得到呈白色固体的 1 标题化合物。(透明质酸钠MW 50KDa 0.208g,产率:68.7%,DSR=20%);H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.74–7.60(m,0.2H),6.64–6.53(m,0.2H),6.43–6.31(m,0.2H),5.57–5.41(m, 0.2H),5.22–5.05(m,0.4H),4.85–4.47(m,2.4H),4.24–3.36(m,10H),2.98–2.57(m,0.8H), 2.42–1.79(m,4.8H),1.77–1.50(m,1.2H),1.45–1.31(m,0.6H),1.14–0.98(m,0.6H)。 [0370] 经此步骤,透明质酸钠(MW 500KDa)的反应提供了对应的产物(0.168g,产率:1 55.5%,DSR=25%)。H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.75–7.61(m,0.25H),6.62–6.52(m, 0.25H),6.42–6.32(m,0.25H),5.56–5.40(m,0.25H),5.25–5.07(m,0.5H),4.84–4.46(m, 2.5H),4.26–3.32(m,10H),2.98–2.58(m,1H),2.42–1.78(m,5.25H),1.77–1.51(m,1.5H), 1.45–1.30(m,0.75H),1.14–0.95(m,0.75H)。 [0371] 经此步骤,透明质酸钠(MW 500KDa)的反应提供了对应的产物(0.202g,产率:1 66.7%,DSR=10%)。H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.74–7.63(m,0.1H),6.63–6.52(m,0.1H), 6.42–6.34(m,0.1H),5.53–5.10(m,0.3H),4.82–4.47(m,2.2H),4.27–3.27(m,10H),2.94– 2.57(m,0.4H),2.42–1.78(m,3.9H),1.75–1.58(m,0.6H),1.43–1.34(m,0.3H),1.11–0.98(m,0.3H)。 [0372] 实施例9 [0373] HA和8‑氨基辛酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2', 1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0374] [0375] [0376] 步骤1:8‑((叔丁氧基羰基)氨基)辛酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的制备 [0377] [0378] 将9α‑氟‑11β,16α,17,21‑四羟基‑1,4‑孕二烯‑3,20‑二酮(曲安奈德,652mg,1.5mmol)、8‑((叔丁氧基羰基)氨基)辛酸(506mg,1.95mmol)、1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDCI,374mg,1.95mmol)、N,N‑二甲基吡啶‑4‑胺(DMAP,18mg,0.15mmol)溶解于DCM(18mL)中。在室温下搅拌反应混合物24小时。将溶液用DCM稀释并用水和饱和盐水溶 液洗涤。将有机层经硫酸钠干燥,过滤并且然后在减压下浓缩。通过柱色谱法(PE/乙酸乙酯=2:1~5:3)纯化粗残余物,以提供标题化合物(720mg,产率:54.7%)。MS(m/z):C37H54FNO9 1 的[M+H]+计算值,676.84;实验值,620.2(M+H‑56)。H NMR(400MHz,氯仿‑d)δ7.21(d,J= 10.1Hz,1H),6.34(dd,J=10.1,1.9Hz,1H),6.13(d,J=1.9Hz,1H),5.03–4.95(m,1H), 4.95–4.78(m,2H),4.55(t,J=5.9Hz,1H),4.42(d,J=8.8Hz,1H),3.09(t,J=6.9Hz,2H), 2.70–2.57(m,1H),2.55–2.32(m,5H),2.16–2.05(m,1H),1.92–1.82(m,1H),1.78–1.60(m, 6H),1.55(m,3H),1.44(d,J=5.7Hz,14H),1.39–1.29(m,7H),1.22(s,3H),0.95(s,3H)。 [0379] 步骤2:8‑氨基辛酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐的制备 [0380] [0381] 在冰浴下向8‑((叔丁氧基羰基)氨基)辛酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯(600mg,0.89mmol)于EtOAc(24mL)中的搅拌溶液中缓慢添加含4M HCl的乙酸乙酯(4.8mL)。 使反应混合物在室温下搅拌18小时。将溶液用EtOAc稀释,并且在减压下浓缩以提供呈白色固体的标题化合物(0.533g,产率:97.9%),所述标题化合物无需进一步纯化即可使用。MS(m/z):C32H46FNO7的[M+H]+计算值,576.72;实验值,576.1。 [0382] 步骤3:HA和8‑氨基辛酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备[0383] [0384] 在100mL圆底烧瓶中,将透明质酸(161mg,0.4mmol羧酸)溶解于32mL的去离子水中,随后在搅拌时逐滴添加21mL的乙腈。向溶液中添加4‑甲基吗啉(NMM,28mg,0.28mmol)和 8‑氨基辛酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐(172mg,0.28mmol),从而使粘度暂时增加。然后将溶液冷却到0℃,并且添加4‑(4,6‑二甲氧基‑1,3,5‑三嗪‑2‑基)‑4‑甲基吗啉鎓氯化物(DMTMM,78mg,0.28mmol),并在室温下搅拌72小时。然后将NaCl(234mg,4mmol)添加到反应混合物中,将所述反应混合物搅拌1小时并且随后在搅拌时逐滴添加无水醇 (200mL)。将混合物过滤。收集滤饼,用无水醇洗涤,并且在真空中干燥以得到呈白色固体的 1 标题化合物。(透明质酸钠MW 50KDa 0.2g,产率:62.1%,DSR=8%);HNMR(400MHz,氧化氘)δ7.65–7.56(m,0.08H),6.57–6.46(m,0.08H),6.34–6.26(m,0.08H),5.35–5.25(m, 0.08H),5.17–5.01(m,0.16H),4.83–4.43(m,2.08H),4.28–3.07(m,10.16H),2.85–2.52(m, 0.08H),2.35–1.69(m,4.04H),1.67–1.50(m,0.72H),1.48–1.36(m,0.72H),1.05–0.92(m, 0.24H)。 [0385] 经此步骤,透明质酸钠(MW 500KDa)的反应提供了对应的产物(0.2g,产率:1 62.1%,DSR=12%)。H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.70–7.58(m,0.12H),6.60–6.50(m, 0.12H),6.41–6.30(m,0.12H),5.41–5.28(m,0.12H),5.20–5.02(m,0.24H),4.79–4.42(m, 2.12H),4.31–3.08(m,10.24H),2.90–2.48(m,0.12H),2.38–1.74(m,4.56H),1.70–1.54(m, 1.08H),1.50–1.39(m,1.08H),1.08–0.94(m,0.36H)。 [0386] 经此步骤,透明质酸钠(MW 2000KDa)的反应提供了对应的产物(0.121g,产率:1 37.5%,DSR=22%)。H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.66–7.53(m,0.22H),6.61–6.45(m, 0.22H),6.39–6.26(m,0.22H),5.35–5.03(m,0.66H),4.83–4.38(m,2.22H),4.11–3.09(m, 10.44H),2.82–2.41(m,0.22H),2.29–1.69(m,5.86H),1.67–1.49(m,1.98H),1.48–1.37(m, 1.98H),1.01–0.92(m,0.66H)。 [0387] 实施例10 [0388] HA和哌啶‑4‑甲酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0389] [0390] 步骤1:4‑(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1': 4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)哌啶‑1,4‑二甲酸1‑(叔丁基)酯的制备 [0391] [0392] 将9α‑氟‑11β,16α,17,21‑四羟基‑1,4‑孕二烯‑3,20‑二酮(曲安奈德,652mg,1.5mmol)、1‑(叔丁氧基羰基)哌啶‑4‑甲酸(447mg,1.95mmol)、1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDCI,374mg,1.95mmol)、N,N‑二甲基吡啶‑4‑胺(DMAP,18mg,0.15mmol)溶解于DCM(18mL)中。在室温下搅拌反应混合物24小时。将溶液用DCM稀释,并用水和饱和盐水溶液洗涤。将有机层经硫酸钠干燥,过滤并且然后在减压下浓缩。通过柱色谱法(PE/乙酸乙酯=5:1~2:1)纯化粗残余物,以提供标题化合物(920mg,产率:94.9%)。MS(m/z):C35H48FNO9+ 1 的[M+H]计算值,646.774;实验值,590.3(M+H‑56)。H NMR(400MHz,氯仿‑d)δ7.22(d,J= 10.1Hz,1H),6.35(dd,J=10.1,1.9Hz,1H),6.13(t,J=1.7Hz,1H),5.07–4.92(m,2H),4.86 (d,J=17.7Hz,1H),4.42(dq,J=8.9,2.9Hz,1H),4.01(d,J=12.7Hz,2H),2.91(t,J= 12.3Hz,2H),2.62(tt,J=10.1,4.1Hz,2H),2.55–2.27(m,4H),2.10(td,J=12.6,5.9Hz, 1H),2.03–1.83(m,3H),1.77–1.57(m,6H),1.55(s,3H),1.45(d,J=10.9Hz,12H),1.22(s, 3H),0.94(s,3H)。 [0393] 步骤2:哌啶‑4‑甲酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6βb‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐的制备 [0394] [0395] 在冰浴下向4‑(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)哌啶‑1,4‑二甲酸1‑(叔丁基)酯(700mg,1.08mmol)于EtOAc(28mL)中的搅拌溶液中缓慢添加含4M HCl的乙酸乙酯 (5.6mL)。使反应混合物在室温下搅拌40小时。将溶液用EtOAc稀释,并且在减压下浓缩以提供呈白色固体的标题化合物(0.556g,产率:93.9%),所述标题化合物无需进一步纯化即可使用。MS(m/z):C30H40FNO7的[M+H]+计算值,546.65;实验值,546.4。 [0396] 步骤3:HA和哌啶‑4‑甲酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备[0397] [0398] 在100mL圆底烧瓶中,将透明质酸(161mg,0.4mmol羧酸)溶解于32mL的去离子水中,随后在搅拌时逐滴添加21mL的乙腈。向溶液中添加4‑甲基吗啉(NMM,28mg,0.28mmol)和哌啶‑4‑甲酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐(163mg,0.28mmol),从而使粘度暂时增加。然后将溶液冷却到0℃,并且添加4‑(4,6‑二甲氧基‑1,3,5‑三嗪‑2‑基)‑4‑甲基吗啉鎓氯化物(DMTMM,78mg,0.28mmol),并在室温下搅拌72小时。然后将NaCl(234mg,4mmol)添加到反应混合物中,将所述反应混合物搅拌1小时,并且随后在搅拌时逐滴添加无水醇 (200mL)。将混合物过滤。收集滤饼,用无水醇洗涤,并且在真空中干燥以得到呈白色固体的 1 标题化合物。(透明质酸钠MW 50KDa 0.2g,产率:63.7%,DSR=27%);H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.66–7.54(m,0.27H),6.57–6.47(m,0.27H),6.36–6.27(m,0.27H),5.45–5.33(m, 0.27H),5.16–4.93(m,0.54H),4.82–4.39(m,2.27H),4.28–3.21(m,10.54H),3.14–2.51(m, 1.08H),2.38–1.73(m,4.89H),1.70–1.46(m,3.24H),1.41–1.24(m,0.81H),1.08–0.92(m, 0.81H)。 [0399] 经此步骤,透明质酸钠(MW 500KDa)的反应提供了对应的产物(0.18g,产率:1 57.3%,DSR=16%)。H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.67–7.53(m,0.16H),6.59–6.47(m, 0.16H),6.35–6.27(m,0.16H),5.47–5.31(m,0.16H),5.15–4.95(m,0.32H),4.84–4.39(m, 2.16H),4.26–3.19(m,10.32H),3.12–2.49(m,0.64H),2.37–1.73(m,4.12H),1.70–1.46(m, 1.92H),1.42–1.24(m,0.48H),1.07–0.91(m,0.48H)。 [0400] 经此步骤,透明质酸钠(MW 2000KDa)的反应提供了对应的产物(0.16g,产率:1 51%,DSR=5%)。H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.67–7.56(m,0.05H),6.57–6.49(m,0.05H), 6.35–6.29(m,0.05H),5.45–5.33(m,0.05H),5.18–4.98(m,0.1H),4.83–4.39(m,2.05H), 4.22–3.17(m,10.1H),2.95–2.39(m,0.2H),2.32–1.71(m,3.35H),1.68–1.50(m,0.6H), 1.41–1.27(m,0.15H),1.05–0.90(m,0.15H)。 [0401] 实施例11 [0402] HA和3‑氨基环丁烷‑1‑甲酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12βb‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备[0403] [0404] 步骤1:3‑((叔丁氧基羰基)氨基)环丁烷‑1‑甲酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6b‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12, 12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的制备 [0405] [0406] 将9α‑氟‑11β,16α,17,21‑四羟基‑1,4‑孕二烯‑3,20‑二酮(曲安奈德,1004mg,2.31mmol)、3‑((叔丁氧基羰基)氨基)环丁烷‑1‑甲酸(3649mg,3mmol)、1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDCI,663mg,3.46mmol)、N,N‑二甲基吡啶‑4‑胺(DMAP,28.3mg, 0.23mmol)溶解于DCM(30mL)中。在室温下搅拌反应混合物24小时。将溶液用DCM稀释,并用水和饱和盐水溶液洗涤。将有机层经硫酸钠干燥,过滤并且然后在减压下浓缩。通过柱色谱法(PE/乙酸乙酯=5:1~2:1)纯化粗残余物,以提供标题化合物(1420mg,产率:97.5%)。MS+ 1 (m/z):C34H46FNO9的[M+H]计算值,632.74;实验值,576.3(M+H‑56)。H NMR(400MHz,DMSO‑d6)δ7.30(d,J=10.2Hz,1H),6.24(dd,J=10.1,1.9Hz,1H),6.02(t,J=1.7Hz,1H),5.48 (dt,J=4.8,2.1Hz,1H),5.15(dd,J=17.9,11.2Hz,1H),4.87(t,J=5.4Hz,1H),4.76(t,J =18.2Hz,1H),4.27–4.16(m,1H),4.00–3.83(m,1H),3.10–2.82(m,1H),2.69–2.57(m,1H), 2.47–2.19(m,4H),2.16–2.01(m,3H),1.97–1.68(m,3H),1.64–1.45(m,5H),1.43–1.32(m, 13H),1.24(s,1H),1.16(d,J=4.8Hz,3H),0.84(d,J=6.9Hz,3H)。 [0407] 步骤2:3‑氨基环丁烷‑1‑甲酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐的制备[0408] [0409] 在冰浴下向3‑((叔丁氧基羰基)氨基)环丁烷‑1‑甲酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6b‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯(900mg,1.42mmol)于EtOAc(36mL)中的搅拌溶液中缓慢添加含4M HCl的乙酸乙酯 (可商购获得)(7.2mL)。使反应混合物在室温下搅拌40小时。将溶液用EtOAc稀释,并且在减压下浓缩以提供呈白色固体的标题化合物(0.7g,产率:92.8%),所述标题化合物无需进一步纯化即可使用。MS(m/z):C29H38FNO7的[M+H]+计算值,532.62;实验值,532.2。 [0410] 步骤3:HA和3‑氨基环丁烷‑1‑甲酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12βb‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0411] [0412] 在100mL圆底烧瓶中,将透明质酸(201mg,0.5mmol羧酸)溶解于40mL的去离子水中,随后在搅拌时逐滴添加20mL的乙腈。向溶液中添加4‑甲基吗啉(NMM,35mg,0.35mmol)和 3‑氨基环丁烷‑1‑甲酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α, 10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12βb‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1': 4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐(199mg,0.35mmol),从而使粘度暂时增加。然后将溶液冷却到0℃,并且添加4‑(4,6‑二甲氧基‑1,3,5‑三嗪‑2‑基)‑ 4‑甲基吗啉鎓氯化物(DMTMM,97mg,0.35mmol),并在室温下搅拌72小时。然后将NaCl (439mg,7.5mmol)添加到反应混合物中,将所述反应混合物搅拌1小时,并且随后在搅拌时逐滴添加无水醇(200mL)。将混合物过滤。收集滤饼,用无水醇洗涤,并且在真空中干燥以得 1 到呈白色固体的标题化合物。(透明质酸钠MW 50KDa 0.18g,产率:46.5%,DSR=35%);H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.68–7.57(m,0.35H),6.59–6.47(m,0.35H),6.36–6.29(m,0.35H), 5.45–5.30(m,0.35H),5.18–4.96(m,0.7H),4.81–4.33(m,2.35H),4.21–3.11(m,10.35H), 2.95–2.46(m,0.7H),2.33–1.72(m,6.85H),1.69–1.46(m,2.8H),1.39–1.20(m,1.05H), 1.04–0.89(m,1.05H)。 [0413] 经此步骤,透明质酸钠(MW 500KDa)的反应提供了对应的产物(0.19g,产率:49%,1 DSR=34%)。H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.68–7.58(m,0.34H),6.57–6.46(m,0.34H),6.38– 6.26(m,0.34H),5.41–5.30(m,0.34H),5.18–4.97(m,0.68H),4.80–4.35(m,2.34H),4.19– 3.15(m,10.34H),2.95–2.52(m,0.68H),2.33–1.72(m,6.74H),1.69–1.45(m,2.72H),1.39– 1.18(m,1.02H),1.07–0.90(m,1.02H)。 [0414] 经此步骤,透明质酸钠(MW 2000KDa)的反应提供了对应的产物(0.13g,产率:1 33.5%,DSR=25%)。H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.70–7.56(m,0.25H),6.61–6.48(m, 0.25H),6.37–6.23(m,0.25H),5.42–5.30(m,0.25H),5.18–4.97(m,0.5H),4.80–4.43(m, 2.25H),4.22–3.07(m,10.25H),2.93–2.60(m,0.5H),2.38–1.92(m,5.75H),1.72–1.43(m, 2H),1.40–1.19(m,0.75H),1.06–0.87(m,0.75H)。 [0415] 实施例12 [0416] HA和3‑氨基丙酸2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备[0417] [0418] [0419] 步骤1:3‑((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的制备 [0420] [0421] 将(6α,9α,11β,16β)‑6,9‑二氟‑11,21‑二羟基‑16,17‑[(1‑甲基亚乙基)双(氧基)]孕‑1,4‑二烯‑3,20‑二酮(氟轻松醋酸酯,453mg,1mmol)、4‑((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸(246mg,1.3mmol)、1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDCI,249mg,1.3mmol)、N,N‑二甲基吡啶‑4‑胺(DMAP,12mg,0.1mmol)溶解于DCM(20mL)中。在室温下搅拌反应混合物24小时。将溶液用DCM稀释,并用水和饱和盐水溶液洗涤。将有机层经硫酸钠干燥,过滤,并且然后在减压下浓缩。通过柱色谱法(PE/乙酸乙酯=5:1~2:1)纯化粗残余物,以提供标题+ 化合物(620mg,产率:99.5%)。MS(m/z):C32H43F2NO9的[M+H]计算值,624.69;实验值,568.2 1 (M+H‑56)。H NMR(400MHz,氯仿‑d)δ7.15(dd,J=10.2,1.5Hz,1H),6.44(d,J=2.0Hz,1H), 6.38(dd,J=10.1,1.9Hz,1H),5.53–5.29(m,1H),5.17(s,1H),5.07–4.85(m,3H),4.43(dq,J=8.8,2.8Hz,1H),3.46(q,J=6.2Hz,2H),2.66(t,J=6.1Hz,2H),2.58–2.34(m,3H), 2.34–2.24(m,1H),2.19(td,J=12.4,5.8Hz,1H),1.88–1.59(m,4H),1.54(s,3H),1.51– 1.39(m,12H),1.22(s,3H),0.93(s,3H)。 [0422] 步骤2:3‑氨基丙酸2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐的制备[0423] [0424] 在冰浴下向3‑((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯(400mg,0.64mmol)于EtOAc(16mL)中的搅拌溶液中缓慢添加含4M HCl的乙酸乙酯 (3.2mL)。使反应混合物在室温下搅拌40小时。将溶液用EtOAc稀释,并且在减压下浓缩以提供呈白色固体的标题化合物(0.375g,产率:97.9%),所述标题化合物无需进一步纯化即可使用。MS(m/z):C27H35F2NO7的[M+H]+计算值,524.57;实验值,524.3。 [0425] 步骤3:HA和3‑氨基丙酸2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0426] [0427] 在100mL圆底烧瓶中,将透明质酸(161mg,0.4mmol羧酸)溶解于32mL的去离子水中,随后在搅拌时逐滴添加21mL的乙腈。向溶液中添加4‑甲基吗啉(NMM,28mg,0.28mmol)和 3‑氨基丙酸2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α, 10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1': 4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐(157mg,0.28mmol),从而使粘度暂时增加。然后将溶液冷却到0℃,并且添加4‑(4,6‑二甲氧基‑1,3,5‑三嗪‑2‑基)‑ 4‑甲基吗啉鎓氯化物(DMTMM,78mg,0.28mmol),并在室温下搅拌72小时。然后将NaCl (234mg,4mmol)添加到反应混合物中,将所述反应混合物搅拌1小时,并且随后在搅拌时逐滴添加无水醇(200mL)。将混合物过滤。收集滤饼,用无水醇洗涤,并且在真空中干燥以得到 1 呈白色固体的标题化合物。(透明质酸钠MW 50KDa 0.198g,产率:64.4%,DSR=30%);H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.67–7.54(m,0.3H),6.67–6.49(m,0.6H),5.91–5.63(m,0.3H), 5.44–5.32(m,0.3H),5.23–5.01(m,0.6H),4.81–4.45(m,2.3H),4.21–3.31(m,10.6H), 3.02–2.47(m,0.9H),2.38–1.74(m,4.5H),1.72–1.49(m,2.4H),1.42–1.27(m,1.5H),1.09– 0.90(m,1.5H)。 [0428] 实施例13 [0429] HA和4‑(氨基甲基)苯甲酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备[0430] [0431] 步骤1:4‑(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)苯甲酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12, 12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的制备 [0432] [0433] 将9α‑氟‑11β,16α,17,21‑四羟基‑1,4‑孕二烯‑3,20‑二酮(曲安奈德,679mg,1.56mmol)、4‑(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)苯甲酸(387.5mg,1.8mmol)、1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDCI,432mg,2.25mmol)、N,N‑二甲基吡啶‑4‑胺(DMAP,18mg, 0.15mmol)溶解于DCM(20mL)中。在室温下搅拌反应混合物24小时。将溶液用DCM稀释,并用水和饱和盐水溶液洗涤。将有机层经硫酸钠干燥,过滤并且然后在减压下浓缩。通过柱色谱法(PE/乙酸乙酯=5:1~2:1)纯化粗残余物,以提供标题化合物(650mg,产率:62.4%)。MS+ 1 (m/z):C37H46FNO9的[M+H]计算值,668.77;实验值,668.2。H NMR(400MHz,DMSO‑d6)δ7.97(d,J=8.0Hz,2H),7.42(d,J=8.0Hz,2H),7.31(d,J=10.2Hz,1H),6.25(dd,J=10.1, 1.9Hz,1H),6.03(t,J=1.7Hz,1H),5.51(d,J=4.1Hz,1H),5.41(d,J=18.0Hz,1H),5.01 (d,J=17.9Hz,1H),4.89(d,J=4.6Hz,1H),4.22(d,J=6.1Hz,3H),2.73–2.60(m,1H), 2.58–2.42(m,2H),2.39–2.30(m,1H),2.15–2.06(m,1H),2.03–1.92(m,2H),1.82(t,J= 8.9Hz,2H),1.54(d,J=21.4Hz,5H),1.40(d,J=8.5Hz,12H),1.23(s,3H),0.90(s,3H)。 [0434] 步骤2:4‑(氨基甲基)苯甲酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐的制备[0435] [0436] 在冰浴下向4‑(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)苯甲酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯(200mg,0.3mmol)于EtOAc(20mL)中的搅拌溶液中缓慢添加含4M HCl的乙酸乙酯 (4mL)。使反应混合物在室温下搅拌40小时。将溶液用EtOAc稀释,并且在减压下浓缩以提供呈白色固体的标题化合物(0.18g,产率:99%),所述标题化合物无需进一步纯化即可使用。 MS(m/z):C32H38FNO7的[M+H]+计算值,568.65;实验值,568.3。 [0437] 步骤3:HA和4‑(氨基甲基)苯甲酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0438] [0439] 在100mL圆底烧瓶中,将透明质酸(201mg,0.5mmol羧酸)溶解于22mL的去离子水中,随后在搅拌时逐滴添加22mL的1,4‑二噁烷。向溶液中添加4‑(氨基甲基)苯甲酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2, 4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐(120mg,0.2mmol)、N‑羟基琥珀酰亚胺(NHS,46mg, 0.4mmol)和1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDCI,38mg,0.2mmol),从而使粘度暂时增加。用5% NaHCO3溶液将反应混合物的pH调节到6~6.5。然后在室温下搅拌反应混合 物持续24小时。将5% NaHCO3溶液(5mL)添加到反应混合物中,在搅拌1小时之后,添加1M HCl溶液(4.3mL)。然后将NaCl(293mg,5mmol)添加到反应混合物中,将所述反应混合物搅拌 1小时,并且随后在‑10℃下搅拌时逐滴添加无水醇(200mL)。将混合物过滤。收集滤饼,用无水醇洗涤,并且在真空中干燥以得到呈白色固体的标题化合物。(透明质酸钠MW 50KDa 1 0.2g,产率:63.4%,DSR=30%);H NMR(400MHz,氧化氘)δ8.24–8.12(m,0.6H),7.72–7.57(m,0.9H),6.62–6.50(m,0.3H),6.40–6.30(m,0.3H),5.65–5.56(m,0.3H),5.38–5.16(m, 0.9H),4.78–4.43(m,2.6H),4.23–3.24(m,10.9H),2.93–2.49(m,1.2H),2.45–1.77(m, 4.2H),1.72–1.54(m,2.4H),1.49–1.38(m,0.9H),1.14–0.97(m,0.9H)。 [0440] 经此步骤,透明质酸钠(MW 500KDa)的反应提供了对应的产物(0.13g,产率:1 41.2%,DSR=25%)。H NMR(400MHz,氧化氘)δ8.27–8.13(m,0.5H),7.76–7.57(m,0.75H), 6.64–6.50(m,0.25H),6.41–6.26(m,0.25H),5.71–5.56(m,0.25H),5.39–5.13(m,0.75H), 4.80–4.43(m,2.5H),4.21–3.18(m,10.75H),2.99–2.54(m,1H),2.44–1.77(m,4H),1.75– 1.55(m,2H),1.50–1.38(m,0.75H),1.18–0.99(m,0.75H)。 [0441] 经此步骤,透明质酸钠(MW 2000KDa)的反应提供了对应的产物(0.13g,产率:1 41.2%,DSR=25%)。H NMR(400MHz,氧化氘)δ8.26–8.12(m,0.5H),7.74–7.55(m,0.75H), 6.65–6.50(m,0.25H),6.40–6.27(m,0.25H),5.70–5.51(m,0.25H),5.36–5.09(m,0.75H), 4.84–4.41(m,2.5H),4.27–3.08(m,10.75H),2.97–2.54(m,1H),2.43–1.78(m,4H),1.75– 1.56(m,2H),1.50–1.37(m,0.75H),1.17–0.99(m,0.75H)。 [0442] 实施例14 [0443] HA和(2‑氨基乙基)氨基甲酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备[0444] [0445] 步骤1:(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)乙烷‑1,2‑二基二氨基甲酸叔丁酯的制备 [0446] [0447] 在N2下向9α‑氟‑11β,16α,17,21‑四羟基‑1,4‑孕二烯‑3,20‑二酮(曲安奈德,652mg,1.5mmol)和碳酸双(4‑硝基苯基)酯(547mg,1.8mmol)于二氯甲烷(80mL)中的混合物中添加三乙胺(0.42mL,3mmol),将反应混合物加热至回流持续2小时。然后添加(2‑氨基乙基)氨基甲酸叔丁酯(312mg,1.95mmol),并且在室温下将所得混合物搅拌2小时。将溶液用DCM稀释,并且用饱和NaHCO3溶液、水和饱和盐水溶液洗涤。将有机层经硫酸钠干燥,过滤并且然后在减压下浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物以得到标题产物(0.65g,产率:69.8%); + 1 MS(m/z):C32H45FN2O9的[M+H]计算值,621.72;实验值,565.3(M+H‑56)。H NMR(400MHz,氯仿‑d)δ7.22(d,J=10.2Hz,1H),6.34(dd,J=10.1,1.9Hz,1H),6.13(t,J=1.8Hz,1H), 5.56–5.32(m,1H),4.99(d,J=4.9Hz,1H),4.94–4.80(d,J=16.9Hz,3H),4.45–4.37(m, 1H),3.40–3.20(m,4H),2.72–2.56(m,1H),2.56–2.32(m,4H),2.17–2.03(m,2H),1.95–1.82(m,3H),1.75(d,J=14.0Hz,1H),1.70–1.59(m,3H),1.45(s,9H),1.43(s,3H),1.21(s,3H), 0.96(s,3H)。 [0448] 步骤2:(2‑氨基乙基)氨基甲酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐的制备[0449] [0450] 在冰浴下向(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1': 4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)乙烷‑1,2‑二基二氨基甲酸叔丁酯(500mg,0.8mmol)于EtOAc(20mL)中的搅拌溶液中缓慢添加含4M HCl的乙酸乙酯 (4mL)。使反应混合物在室温下搅拌40小时。将溶液用EtOAc稀释,并且在减压下浓缩以提供呈白色固体的标题化合物(0.386g,产率:97.9%),所述标题化合物无需进一步纯化即可使+ 用。MS(m/z):C27H37FN2O7的[M+H]计算值,521.60;实验值,521.3。 [0451] 步骤3:HA和(2‑氨基乙基)氨基甲酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0452] [0453] 在100mL圆底烧瓶中,将透明质酸(201mg,0.5mmol羧酸)溶解于22mL的去离子水中,随后在搅拌时逐滴添加22mL的1,4‑二噁烷。向溶液中添加(2‑氨基乙基)氨基甲酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2, 4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐(111mg,0.2mmol)、N‑羟基琥珀酰亚胺(NHS,46mg, 0.4mmol)和1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDCI,38mg,0.2mmol),从而使粘度暂时增加。用5% NaHCO3溶液将反应混合物的pH调节到6~6.5。然后在室温下搅拌反应混合 物持续24小时。将5% NaHCO3溶液(5mL)添加到反应混合物中,在搅拌1小时之后,添加1M HCl溶液(4.3mL)。然后将NaCl(1000mg,17mmol)添加到反应混合物中,将所述反应混合物搅拌1小时,并且随后在‑10℃下搅拌时逐滴添加无水醇(200mL)。将混合物过滤。收集滤饼,用无水醇洗涤,并且在真空中干燥以得到呈白色固体的标题化合物。(透明质酸钠MW 50KDa 1 0.2g,产率:65.5%,DSR=18%);H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.68–7.58(m,0.18H),6.59– 6.48(m,0.18H),6.37–6.29(m,0.18H),5.40–5.24(m,0.18H),5.21–5.09(m,0.18H),4.82– 4.40(m,2.54H),4.26–3.13(m,10.72H),2.95–2.51(m,0.72H),2.37–1.72(m,4.08H),1.71– 1.47(m,1.08H),1.40–1.30(m,0.54H),1.09–0.92(m,0.54H)。 [0454] 经此步骤,透明质酸钠(MW 500KDa)的反应提供了对应的产物(0.2g,产率:1 65.5%,DSR=19%)。H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.70–7.58(m,0.19H),6.61–6.52(m, 0.19H),6.41–6.30(m,0.19H),5.44–5.24(m,0.19H),5.22–5.09(m,0.19H),4.81–4.40(m, 2.38H),4.27–3.11(m,10.76H),2.96–2.53(m,0.76H),2.41–1.73(m,4.14H),1.71–1.48(m, 1.14H),1.44–1.31(m,0.57H),1.10–0.95(m,0.57H)。 [0455] 经此步骤,透明质酸钠(MW 2000KDa)的反应提供了对应的产物(0.19g,产率:1 62.2%,DSR=14%)。H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.69–7.56(m,0.14H),6.61–6.49(m, 0.14H),6.40–6.28(m,0.14H),5.44–5.24(m,0.14H),5.22–5.07(m,0.14H),4.81–4.39(m, 2.28H),4.26–3.11(m,10.56H),2.92–2.49(m,0.56H),2.39–1.75(m,3.84H),1.72–1.48(m, 0.84H),1.43–1.30(m,0.42H),1.09–0.93(m,0.42H)。 [0456] 实施例15 [0457] HA和(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸4‑(氨基甲基)苄酯的缀合物的制备 [0458] [0459] [0460] 步骤1:1H‑咪唑‑1‑甲酸4‑(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)苄酯的制备 [0461] [0462] 向(4‑(羟基甲基)苄基)氨基甲酸叔丁酯(356mg,1.5mmol)于DCM(10mL)中的溶液中添加1,1'‑羰基二咪唑(CDI,486mg,3mmol)。在室温下将所得混合物搅拌16小时。将溶液用DCM稀释,并且用饱和NaHCO3溶液、水和饱和盐水溶液洗涤。将有机层经硫酸钠干燥,过滤并且然后在减压下浓缩以提供呈黄色油的标题化合物(0.49g,产率:98.6%),所述标题化合物无需进一步纯化即可使用。 [0463] 步骤2:(4‑((((2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)甲基)苄基)氨基甲酸叔丁酯的制备 [0464] [0465] 在N2下向9α‑氟‑11β,16α,17,21‑四羟基‑1,4‑孕二烯‑3,20‑二酮(曲安奈德,521mg,1.2mmol)于DMF(10mL)中的溶液中添加1H‑咪唑‑1‑甲酸4‑(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)苄酯(477mg,1.44mmol)和K2CO3(166mg,1.2mmol)。在室温下将所得混合物搅拌16小时。在室温下将反应混合物倒入水(30mL)中,过滤并且将滤饼溶解于DCM(40mL)中。将溶液经硫酸钠干燥,过滤并且然后在减压下浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物以得到标题产物 + (0.42g,产率:50.2%);MS(m/z):C38H48FNO10的[M+H] 计算值,698.80;实验值,642.0(M+H‑ 1 56)。H NMR(400MHz,氯仿‑d)δ7.35(d,J=8.0Hz,2H),7.29(d,J=8.0Hz,2H),7.18(d,J= 10.1Hz,1H),6.34(dd,J=10.1,1.9Hz,1H),6.13(t,J=1.7Hz,1H),5.18(s,2H),5.12–4.98 (m,2H),4.89(s,1H),4.79(d,J=17.8Hz,1H),4.41(dt,J=9.1,2.9Hz,1H),4.32(d,J= 6.0Hz,2H),2.71–2.57(m,1H),2.53–2.34(m,3H),2.10(dt,J=12.2,6.2Hz,1H),1.94–1.81(m,2H),1.72–1.59(m,4H),1.54(s,3H),1.46(s,9H),1.42(s,3H),1.21(s,3H),0.94(s, 3H)。 [0466] 步骤3:(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸4‑(氨基甲基)苄酯盐酸盐的制备 [0467] [0468] 在冰浴下向(4‑((((2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)甲基)苄基)氨基甲酸叔丁酯(418mg,0.6mmol)于EtOAc(20mL)中的搅拌溶液中缓慢添加含4M HCl的 乙酸乙酯(可商购获得)(4mL)。使反应混合物在室温下搅拌40小时。将溶液用EtOAc稀释,并且在减压下浓缩以提供呈白色固体的标题化合物(0.3g,产率:83.6%),所述标题化合物无+ 需进一步纯化即可使用。MS(m/z):C33H40FNO8的[M+H]计算值,598.68;实验值,598.3。 [0469] 步骤4:HA和(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1': 4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸4‑(氨基甲基)苄酯的缀合物的制备 [0470] [0471] 在100mL圆底烧瓶中,将透明质酸(201mg,0.5mmol羧酸)溶解于22mL的去离子水中,随后在搅拌时逐滴添加22mL的1,4‑二噁烷。向溶液中添加(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS, 11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸4‑(氨基甲基)苄酯盐酸盐(127mg,0.2mmol)、N‑羟基琥珀酰亚胺(NHS,46mg, 0.4mmol)和1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDCI,38mg,0.2mmol),从而使粘度暂时增加。用5% NaHCO3溶液将反应混合物的pH调节到6~6.5。然后在室温下搅拌反应混合 物持续24小时。将5% NaHCO3溶液(5mL)添加到反应混合物中,在搅拌1小时之后,添加1M HCl溶液(4.3mL)。然后将NaCl(293mg,5mmol)添加到反应混合物中,将所述反应混合物搅拌 1小时,并且随后在‑10℃下搅拌时逐滴添加无水醇(200mL)。将混合物过滤。收集滤饼,用无水醇洗涤,并且在真空中干燥以得到呈白色固体的标题化合物。(透明质酸钠MW 50KDa 1 0.21g,产率:47.7%,DSR=18%);H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.66–7.39(m,0.9H),6.59– 6.46(m,0.18H),6.37–6.25(m,0.18H),5.47–5.24(m,0.54H),5.16–5.01(m,0.36H),4.81– 4.31(m,2.54H),4.19–3.13(m,10H),2.93–2.49(m,0.72H),2.33–1.73(m,4.08H),1.70– 1.43(m,1.08H),1.36–1.28(m,0.54H),1.04–0.87(m,0.54H)。 [0472] 经此步骤,透明质酸钠(MW 500KDa)的反应提供了对应的产物(0.19g,产率:1 43.1%,DSR=18%)。H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.69–7.38(m,0.9H),6.56–6.45(m,0.18H), 6.35–6.24(m,0.18H),5.46–5.25(m,0.54H),5.17–4.99(m,0.36H),4.80–4.35(m,2.54H), 4.20–3.06(m,10H),2.91–2.50(m,0.72H),2.35–1.72(m,4.08H),1.70–1.44(m,1.08H), 1.36–1.27(m,0.54H),1.04–0.89(m,0.54H)。 [0473] 经此步骤,透明质酸钠(MW 2000KDa)的反应提供了对应的产物(0.2g,产率:1 45.4%,DSR=15%)。H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.70–7.43(m,0.75H),6.63–6.50(m, 0.15H),6.41–6.32(m,0.15H),5.50–5.31(m,0.45H),5.22–5.03(m,0.3H),4.82–4.40(m, 2.45H),4.25–3.09(m,10H),2.94–2.52(m,0.6H),2.38–1.76(m,3.9H),1.72–1.51(m, 0.9H),1.42–1.32(m,0.45H),1.07–0.90(m,0.45H)。 [0474] 实施例16 [0475] HA和碳酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基吡咯烷‑3‑基酯的缀合物的制备[0476] [0477] 步骤1:1H‑咪唑‑1‑甲酸1‑(叔丁氧基羰基)吡咯烷‑3‑基酯的制备 [0478] [0479] 向3‑羟基吡咯烷‑1‑甲酸叔丁酯(281mg,1.5mmol)于DCM(10mL)中的溶液中添加1,1'‑羰基二咪唑(CDI,486mg,3mmol)。在室温下将所得混合物搅拌16小时。将溶液用DCM稀释,并且用饱和NaHCO3溶液、水和饱和盐水溶液洗涤。将有机层经硫酸钠干燥,过滤并且然后在减压下浓缩以提供呈黄色油的标题化合物(0.35g,产率:83%),所述标题化合物无需进一步纯化即可使用。MS(m/z):C13H19N3O4的[M+H]+计算值,282.31;实验值,282.1。 [0480] 步骤2:3‑(((2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1': 4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)吡咯烷‑1‑甲酸叔丁酯的制备 [0481] [0482] 在N2下向9α‑氟‑11β,16α,17,21‑四羟基‑1,4‑孕二烯‑3,20‑二酮(曲安奈德,564mg,1.3mmol)于DMF(10mL)中的溶液中添加1H‑咪唑‑1‑甲酸1‑(叔丁氧基羰基)吡咯烷‑ 3‑基酯(365mg,1.3mmol)和K2CO3(179mg,1.3mmol)。在室温下将所得混合物搅拌16小时。在室温下将反应混合物倒入水(30mL)中,过滤并且将滤饼溶解于DCM(40mL)中。将溶液经硫酸钠干燥,过滤并且然后在减压下浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物以得到标题产物(0.7g,+ 1 产率:50.2%);MS(m/z):C34H46FNO10的[M+H] 计算值,648.74;实验值,592.2(M+H‑56)。H NMR(400MHz,氯仿‑d)δ7.24–7.18(m,1H),6.35(dd,J=10.1,1.9Hz,1H),6.13(t,J=1.8Hz, 1H),5.21(t,J=4.1Hz,1H),5.13(d,J=17.8Hz,1H),5.00(dd,J=5.2,2.2Hz,1H),4.90– 4.69(m,1H),4.48–4.35(m,1H),3.53(d,J=29.5Hz,4H),2.70–2.30(m,5H),2.26–2.06(m, 3H),1.87(dt,J=11.8,5.4Hz,1H),1.76–1.52(m,7H),1.47(s,9H),1.43(s,3H),1.21(d,J =6.8Hz,3H),0.95(d,J=6.5Hz,3H)。 [0483] 步骤3:碳酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1': 4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基吡咯烷‑3‑基酯盐酸盐的制备[0484] [0485] 在冰浴下向3‑(((2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)吡咯烷‑1‑甲酸叔丁酯(421mg,0.65mmol)于EtOAc(20mL)中的搅拌溶液中缓慢添加含4M HCl的乙酸乙酯(可商购获得)(4mL)。使反应混合物在室温下搅拌40小时。将溶液用EtOAc稀释,并且在减压下浓缩以提供呈白色固体的标题化合物(0.3g,产率:79%),所述标题化合物无需进一+ 步纯化即可使用。MS(m/z):C29H38FNO8的[M+H]计算值,548.62;实验值,548.2。 [0486] 步骤4:HA和碳酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2', 1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基吡咯烷‑3‑基酯的缀合物的制备 [0487] [0488] 在100mL圆底烧瓶中,将透明质酸(201mg,0.5mmol羧酸)溶解于22mL的去离子水中,随后在搅拌时逐滴添加22mL的1,4‑二噁烷。向溶液中添加碳酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α, 11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑ 2‑氧代乙基吡咯烷‑3‑基酯盐酸盐(117mg,0.2mmol)、N‑羟基琥珀酰亚胺(NHS,46mg, 0.4mmol)和1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDCI,38mg,0.2mmol),从而使粘度暂时增加。用5% NaHCO3溶液将反应混合物的pH调节到6~6.5。然后在室温下搅拌反应混合 物持续24小时。将5% NaHCO3溶液(5mL)添加到反应混合物中,在搅拌1小时之后,添加1M HCl溶液(4.3mL)。然后将NaCl(293mg,5mmol)添加到反应混合物中,将所述反应混合物搅拌 1小时,并且随后在‑10℃下搅拌时逐滴添加无水醇(200mL)。将混合物过滤。收集滤饼,用无水醇洗涤,并且在真空中干燥以得到呈白色固体的标题化合物。(透明质酸钠MW 50KDa 1 0.19g,产率:61%,DSR=9%);H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.66–7.57(m,0.09H),6.57–6.49(m,0.09H),6.38–6.29(m,0.09H),5.54–5.30(m,0.27H),5.18–5.03(m,0.09H),4.82–4.38(m,2.09H),4.23–3.20(m,10.36H),2.96–2.50(m,0.36H),2.45–1.72(m,3.36H),1.70–1.46(m,0.9H),1.40–1.27(m,0.27H),1.06–0.89(m,0.27H)。 [0489] 经此步骤,透明质酸钠(MW 500KDa)的反应提供了对应的产物(0.15g,产率:1 48.2%,DSR=10%)。H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.65–7.56(m,0.1H),6.57–6.48(m,0.1H), 6.38–6.28(m,0.1H),5.52–5.30(m,0.3H),5.22–5.04(m,0.1H),4.81–4.37(m,2.1H),4.27– 3.10(m,10.4H),2.93–2.51(m,0.4H),2.43–1.72(m,3.4H),1.69–1.46(m,1H),1.39–1.27(m,0.3H),1.06–0.88(m,0.3H)。 [0490] 经此步骤,透明质酸钠(MW 2000KDa)的反应提供了对应的产物(0.16g,产率:1 51.4%,DSR=6%)。H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.69–7.61(m,0.06H),6.61–6.51(m,0.06H), 6.40–6.31(m,0.06H),5.52–5.33(m,0.18H),5.24–5.06(m,0.06H),4.82–4.40(m,2.06H), 4.25–3.14(m,10.24H),2.94–2.59(m,0.24H),2.52–1.73(m,3.24H),1.71–1.50(m,0.6H), 1.41–1.32(m,0.18H),1.06–0.92(m,0.18H)。 [0491] 实施例17 [0492] HA和(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸2‑氨基乙酯的缀合物的制备[0493] [0494] 步骤1:1H‑咪唑‑1‑甲酸2‑((叔丁氧基羰基)氨基)乙酯的制备 [0495] [0496] 向(2‑羟基乙基)氨基甲酸叔丁酯(1600mg,10mmol)于DCM(100mL)中的溶液中添加1,1'‑羰基二咪唑(CDI,3200mg,20mmol)。在室温下将所得混合物搅拌16小时。将溶液用DCM稀释,并且用饱和NaHCO3溶液、水和饱和盐水溶液洗涤。将有机层经硫酸钠干燥,过滤并且然后在减压下浓缩以提供呈黄色油的标题化合物(2.5g,产率:98%),所述标题化合物无需进一步纯化即可使用。MS(m/z):C11H17N3O4的[M+H]+计算值,256.27;实验值,256.2。 [0497] 步骤2:(2‑(((2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯的制备 [0498] [0499] 在N2下向9α‑氟‑11β,16α,17,21‑四羟基‑1,4‑孕二烯‑3,20‑二酮(曲安奈德,434mg,1mmol)于DMF(10mL)中的溶液中添加1H‑咪唑‑1‑甲酸2‑((叔丁氧基羰基)氨基)乙酯(505mg,2mmol)和K2CO3(138mg,1mmol)。在室温下将所得混合物搅拌16小时。在室温下将反应混合物倒入水(30mL)中,过滤并且将滤饼溶解于DCM(40mL)中。将溶液经硫酸钠干燥,过滤并且然后在减压下浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物以得到标题产物(0.26g,产率: + 1 41.8%);MS(m/z):C32H44FNO10的[M+H] 计算值,622.70;实验值,566.2(M+H‑56)。H NMR(400MHz,氯仿‑d)δ7.21(d,J=10.2Hz,1H),6.35(dd,J=10.1,1.9Hz,1H),6.13(d,J= 1.8Hz,1H),5.11–4.99(m,2H),4.92(s,1H),4.81(d,J=17.8Hz,1H),4.43(dq,J=8.9, 2.7Hz,1H),4.24(q,J=5.8Hz,2H),3.54–3.37(m,2H),2.71–2.28(m,5H),2.10(td,J= 12.5,5.8Hz,1H),1.87(dt,J=12.0,5.3Hz,1H),1.74–1.60(m,4H),1.55(s,3H),1.45(s, 9H),1.43(s,3H),1.21(s,3H),0.95(s,3H)。 [0500] 步骤3:(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸2‑氨基乙酯盐酸盐的制备[0501] [0502] 在冰浴下向(2‑(((2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(249mg,0.4mmol)于EtOAc(15mL)中的搅拌溶液中缓慢添加含4M HCl的乙酸乙酯(3mL)。使反应混合物在室温下搅拌40小时。将溶液用EtOAc稀释,并且在减压下浓缩以提供呈白色固体的标题化合物(0.22g,产率:98.6%),所述标题化合物无需进一步纯化即+ 可使用。MS(m/z):C27H36FNO8的[M+H]计算值,522.58;实验值,522.2。 [0503] 步骤3:HA和(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1': 4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸2‑氨基乙酯的缀合物的制备 [0504] [0505] 在100mL圆底烧瓶中,将透明质酸(201mg,0.5mmol羧酸)溶解22mL的去离子水中,随后在搅拌时逐滴添加22mL的1,4‑二噁烷。向溶液中添加(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α, 12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸2‑氨基乙酯盐酸盐(112mg,0.2mmol)、N‑羟基琥珀酰亚胺(NHS,46mg,0.4mmol)和1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDCI,38mg,0.2mmol),从而使粘度暂时增加。 用5% NaHCO3溶液将反应混合物的pH调节到6~6.5。然后在室温下搅拌反应混合物持续24 小时。将5% NaHCO3溶液(5mL)添加到反应混合物中,在搅拌1小时之后,添加1M HCl溶液 (4.3mL)。然后将NaCl(293mg,5mmol)添加到反应混合物中,将所述反应混合物搅拌1小时,并且随后在‑10℃下搅拌时逐滴添加无水醇(200mL)。将混合物过滤。收集滤饼,用无水醇洗涤,并且在真空中干燥以得到呈白色固体的标题化合物。(透明质酸钠MW 50KDa 0.18g,产 1 率:59%,DSR=14%);H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.68–7.59(m,0.14H),6.58–6.50(m, 0.14H),6.37–6.28(m,0.14H),5.42–5.29(m,0.14H),5.24–5.09(m,0.28H),4.80–4.34(m, 2.42H),4.26–3.20(m,10.28H),2.96–2.51(m,0.7H),2.35–1.73(m,3.28H),1.70–1.49(m, 1.26H),1.43–1.31(m,0.42H),1.08–0.94(m,0.42H)。 [0506] 经此步骤,透明质酸钠(MW 500KDa)的反应提供了对应的产物(0.18g,产率:59%,1 DSR=16%)。H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.69–7.59(m,0.16H),6.60–6.51(m,0.16H),6.40– 6.30(m,0.16H),5.50–5.32(m,0.16H),5.24–5.01(m,0.32H),4.81–4.38(m,2.48H),4.23– 3.15(m,10.32H),2.94–2.49(m,0.8H),2.37–1.74(m,3.32H),1.71–1.50(m,1.44H),1.43– 1.32(m,0.48H),1.09–0.93(m,0.48H)。 [0507] 经此步骤,透明质酸钠(MW 2000KDa)的反应提供了对应的产物(0.19g,产率:1 62.2%,DSR=14%)。H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.70–7.59(m,0.14H),6.60–6.50(m, 0.14H),6.40–6.32(m,0.14H),5.52–5.32(m,0.14H),5.24–5.02(m,0.28H),4.82–4.34(m, 2.42H),4.27–3.13(m,10.28H),3.02–2.49(m,0.7H),2.38–1.75(m,3.28H),1.73–1.48(m, 1.26H),1.42–1.32(m,0.42H),1.10–0.95(m,0.42H)。 [0508] 实施例18 [0509] HA和5‑氨基戊酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2', 1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0510] [0511] 步骤1:5‑((叔丁氧基羰基)氨基)戊酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的制备 [0512] [0513] 将9α‑氟‑11β,16α,17,21‑四羟基‑1,4‑孕二烯‑3,20‑二酮(曲安奈德,435mg,1mmol)、5‑((叔丁氧基羰基)氨基)戊酸(282mg,1.3mmol)、1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDCI,249mg,1.3mmol)、N,N‑二甲基吡啶‑4‑胺(DMAP,12mg,0.1mmol)溶解于DCM(20mL)中。在室温下搅拌反应混合物24小时。将溶液用DCM稀释,并用水和饱和盐水溶液洗涤。将有机层经硫酸钠干燥,过滤并且然后在减压下浓缩。通过柱色谱法(PE/乙酸乙酯=5: 1~2:1)纯化粗残余物,以提供标题化合物(600mg,产率:94.7%)。MS(m/z):C34H48FNO9的[M++ 1 H]计算值,634.75;实验值,578.3(M+H‑56)。H NMR(400MHz,氯仿‑d)δ7.21(d,J=10.1Hz, 1H),6.35(dd,J=10.1,1.9Hz,1H),6.13(t,J=1.7Hz,1H),4.98(d,J=4.9Hz,1H),4.90(d, J=2.4Hz,2H),4.63(t,J=5.8Hz,1H),4.42(d,J=8.7Hz,1H),3.14(q,J=6.7Hz,2H), 2.69–2.58(m,1H),2.55–2.43(m,3H),2.43–2.32(m,3H),2.28–2.18(m,1H),2.11(td,J= 12.5,5.9Hz,1H),1.87(dt,J=11.9,5.3Hz,1H),1.80–1.53(m,10H),1.49–1.39(m,12H), 1.21(s,3H),0.94(s,3H)。 [0514] 步骤2:5‑氨基戊酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐的制备 [0515] [0516] 在冰浴下,向5‑((叔丁氧基羰基)氨基)戊酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯(600mg,0.95mmol)于EtOAc(24mL)中的搅拌溶液中缓慢添加含4M HCl的乙酸乙酯(4.8mL)。 使反应混合物在室温下搅拌18小时。将溶液用EtOAc稀释,并且在减压下浓缩以提供呈白色固体的标题化合物(0.51g,产率:94.2%),所述标题化合物无需进一步纯化即可使用。MS+ (m/z):C29H40FNO7的[M+H]计算值,534.64;实验值,534.3。 [0517] 步骤3:HA和5‑氨基戊酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备[0518] [0519] 在100mL圆底烧瓶中,将透明质酸(201mg,0.5mmol羧酸)溶解于22mL去离子水中,随后在搅拌时逐滴添加22mL的1,4‑二噁烷。向溶液中添加5‑氨基戊酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8, 8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐(114mg,0.2mmol)、N‑羟基琥珀酰亚胺(NHS,46mg,0.4mmol)和1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDCI,38mg,0.2mmol),从而使粘度暂时增加。用5% NaHCO3溶液将反应混合物的pH调节到6~6.5。然后在室温下搅拌反应混合物持续24小时。 将5% NaHCO3溶液(5mL)添加到反应混合物中,在搅拌1小时之后,添加1M HCl溶液 (4.3mL)。然后将NaCl(293mg,5mmol)添加到反应混合物中,将所述反应混合物搅拌1小时,并且随后在‑10℃下搅拌时逐滴添加无水醇(200mL)。将混合物过滤。收集滤饼,用无水醇洗涤,并且在真空中干燥以得到呈白色固体的标题化合物。(透明质酸钠MW 50KDa 0.17g,产 1 率:55.1%,DSR=10%);H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.65–7.56(m,0.1H),6.56–6.47(m, 0.1H),6.36–6.27(m,0.1H),5.37–5.26(m,0.1H),5.19–5.01(m,0.2H),4.80–4.38(m, 2.1H),4.29–3.09(m,10.2H),2.89–2.46(m,0.5H),2.37–1.67(m,3.3H),1.66–1.49(m, 1.4H),1.40–1.30(m,0.3H),1.05–0.90(m,0.3H)。 [0520] 经此步骤,透明质酸钠(MW 500KDa)的反应提供了对应的产物(0.19g,产率:1 61.6%,DSR=16%)。H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.67–7.57(m,0.16H),6.57–6.49(m, 0.16H),6.37–6.28(m,0.16H),5.40–5.28(m,0.16H),5.20–5.02(m,0.32H),4.79–4.40(m, 2.16H),4.29–3.08(m,10.32H),2.94–2.51(m,0.8H),2.39–1.68(m,3.48H),1.66–1.50(m, 2.24H),1.42–1.30(m,0.48H),1.06–0.93(m,0.48H)。 [0521] 经此步骤,透明质酸钠(MW 500KDa)的反应提供了对应的产物(0.17g,产率:1 55.1%,DSR=8%)。H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.67–7.55(m,0.08H),6.56–6.46(m,0.08H), 6.36–6.26(m,0.08H),5.38–5.27(m,0.08H),5.20–5.01(m,0.16H),4.79–4.36(m,2.08H), 4.27–3.04(m,10.16H),2.89–2.43(m,0.4H),2.35–1.68(m,3.24H),1.67–1.45(m,1.12H), 1.40–1.27(m,0.24H),1.05–0.90(m,0.24H)。 [0522] 实施例19 [0523] HA和甘氨酰甘氨酰甘氨酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备[0524] [0525] 步骤1:(叔丁氧基羰基)甘氨酰甘氨酰甘氨酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的制备 [0526] [0527] 将9α‑氟‑11β,16α,17,21‑四羟基‑1,4‑孕二烯‑3,20‑二酮(曲安奈德,435mg,1mmol)、(叔丁氧基羰基)甘氨酰甘氨酰甘氨酸(376mg,1.3mmol)、1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDCI,249mg,1.3mmol)、N,N‑二甲基吡啶‑4‑胺(DMAP,12mg,0.1mmol)溶解于DCM(20mL)中。在室温下搅拌反应混合物4小时。将溶液用DCM稀释,并用水和饱和盐水溶液洗涤。将有机层经硫酸钠干燥,过滤并且然后在减压下浓缩。通过柱色谱法(PE/乙酸乙酯=5:1~2:1)纯化粗残余物,以提供标题化合物(690mg,产率:97.8%)。MS(m/z): 1 C35H48FN3O11的[M+H]+计算值,706.78;实验值,706.2。H NMR(400MHz,氯仿‑d)δ7.57–7.37(m,2H),6.34(dd,J=10.1,1.9Hz,1H),6.13(t,J=1.7Hz,1H),5.61(s,1H),5.06–4.93(m, 3H),4.43(dt,J=9.3,2.9Hz,1H),4.39–4.19(m,2H),3.96(ddt,J=41.3,22.8,10.7Hz, 4H),3.79–3.65(m,1H),2.63(td,J=13.6,5.8Hz,1H),2.54–2.34(m,2H),2.29(dt,J= 14.0,3.4Hz,1H),2.15–2.01(m,2H),1.87(dd,J=12.5,5.8Hz,1H),1.77–1.53(m,7H),1.44(d,J=9.4Hz,12H),1.20(s,3H),0.89(s,3H)。 [0528] 步骤2:甘氨酰甘氨酰甘氨酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐的制备[0529] [0530] 在冰浴下,向(叔丁氧基羰基)甘氨酰甘氨酰甘氨酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯(600mg,0.85mmol)于EtOAc(24mL)中的搅拌溶液中缓慢添加含4M HCl的乙酸乙酯 (4.8mL)。使反应混合物在室温下搅拌18小时。将溶液用EtOAc稀释,并且在减压下浓缩,以提供呈白色固体的标题化合物(0.5g,产率:91.7%),所述标题化合物无需进一步纯化即可使用。MS(m/z):C30H40FN3O9的[M+H]+计算值,606.66;实验值,606.3。 [0531] 步骤3:HA和甘氨酰甘氨酰甘氨酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0532] [0533] 在100mL圆底烧瓶中,将透明质酸(201mg,0.5mmol羧酸)溶解于22mL去离子水中,随后在搅拌时逐滴添加22mL的1,4‑二噁烷。向溶液中添加甘氨酰甘氨酰甘氨酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α, 6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐(128mg,0.2mmol)、N‑羟基琥珀酰亚胺(NHS,46mg,0.4mmol)和1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDCI,38mg,0.2mmol),从而使粘度暂时增加。 用5% NaHCO3溶液将反应混合物的pH调节到6~6.5。然后在室温下搅拌反应混合物持续24 小时。将5% NaHCO3溶液(5mL)添加到反应混合物中,在搅拌1小时之后,添加1M HCl溶液 (4.3mL)。然后将NaCl(1000mg,17mmol)添加到反应混合物中,将所述反应混合物搅拌1小 时,并且随后在‑10℃下搅拌时逐滴添加无水醇(200mL)。将混合物过滤。收集滤饼,用无水醇洗涤,并且在真空中干燥以得到呈白色固体的标题化合物。(透明质酸钠MW 50KDa 1 0.18g,产率:55.9%,DSR=13%);H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.66–7.56(m,0.13H),6.56– 6.45(m,0.13H),6.35–6.27(m,0.13H),5.43–5.25(m,0.13H),5.22–4.98(m,0.39H),4.81– 4.41(m,2.13H),4.35–3.27(m,10.65H),2.90–2.51(m,0.52H),2.36–1.71(m,3.39H),1.69– 1.46(m,1.17H),1.39–1.30(m,0.39H),1.07–0.90(m,0.39H)。 [0534] 经此步骤,透明质酸钠(MW 500KDa)的反应提供了对应的产物(0.2g,产率:1 62.1%,DSR=16%)。H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.69–7.58(m,0.16H),6.60–6.49(m, 0.16H),6.39–6.29(m,0.16H),5.50–5.28(m,0.16H),5.24–5.08(m,0.48H),4.80–4.48(m, 2.16H),4.39–3.20(m,10.8H),2.98–2.55(m,0.64H),2.40–1.73(m,3.48H),1.71–1.49(m, 1.44H),1.42–1.31(m,0.48H),1.09–0.93(m,0.48H)。 [0535] 经此步骤,透明质酸钠(MW 2000KDa)的反应提供了对应的产物(0.2g,产率:1 62.1%,DSR=13%)。H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.70–7.59(m,0.13H),6.61–6.50(m, 0.13H),6.41–6.31(m,0.13H),5.51–5.28(m,0.13H),5.25–5.08(m,0.39H),4.82–4.44(m, 2.13H),4.37–3.15(m,10.65H),2.96–2.54(m,0.52H),2.40–1.75(m,3.39H),1.72–1.48(m, 1.17H),1.43–1.33(m,0.39H),1.10–0.92(m,0.39H)。 [0536] 实施例20 [0537] HA和(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸1‑氨基丙‑2‑基酯的缀合物的制备 [0538] [0539] [0540] 步骤1:1H‑咪唑‑1‑甲酸1‑((叔丁氧基羰基)氨基)丙‑2‑基酯的制备 [0541] [0542] 向(2‑羟基丙基)氨基甲酸叔丁酯(525mg,3mmol)于DCM(30mL)中的溶液中添加1,1'‑羰基二咪唑(CDI,972mg,6mmol)。在室温下将所得混合物搅拌16小时。将溶液用DCM稀释,并且用饱和NaHCO3溶液、水和饱和盐水溶液洗涤。将有机层经硫酸钠干燥,过滤并且然后在减压下浓缩,以提供呈黄色油的标题化合物(0.8g,产率:98.7%),所述标题化合物无需进一步纯化即可使用。MS(m/z):C12H19N3O4的[M+H]+计算值,270.14;实验值,270.2。 [0543] 步骤2:(2‑(((2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯的制备 [0544] [0545] 在N2下,向9α‑氟‑11β,16α,17,21‑四羟基‑1,4‑孕二烯‑3,20‑二酮(曲安奈德,1041mg,2.4mmol)于DMF(30mL)中的溶液中添加1H‑咪唑‑1‑甲酸1‑((叔丁氧基羰基)氨基)丙‑2‑基酯(800mg,3mmol)和K2CO3(414mg,13mmol)。在室温下将所得混合物搅拌16小时。在室温下将反应混合物倒入水(90mL)中,过滤并且将滤饼溶解于DCM(40mL)中。将溶液经硫酸钠干燥,过滤并且然后在减压下浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物以得到标题产物(0.7g,+ 1 产率:45.9%);MS(m/z):C33H46FNO10的[M+H] 计算值,636.31;实验值,580.2(M+H‑56)。H NMR(400MHz,氯仿‑d)δ7.26(s,1H),6.34(dd,J=10.1,1.9Hz,1H),6.13(t,J=1.8Hz,1H), 5.10–4.97(m,2H),4.94–4.78(m,3H),4.47–4.37(m,1H),3.49–3.17(m,2H),2.63(td,J= 13.7,5.9Hz,1H),2.53–2.30(m,4H),2.17–2.07(m,2H),1.86(dt,J=11.9,5.4Hz,1H), 1.77–1.58(m,6H),1.55(d,J=1.8Hz,3H),1.49–1.38(m,9H),1.31(dd,J=7.9,6.4Hz,3H), 1.20(d,J=4.0Hz,3H),0.96(d,J=7.1Hz,3H)。 [0546] 步骤3:(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸1‑氨基丙‑2‑基酯盐酸盐的制备 [0547] [0548] 在冰浴下,向(2‑(((2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(699mg,1.1mmol)于EtOAc(20mL)中的搅拌溶液中缓慢添加含4M HCl的乙酸 乙酯(4mL)。使反应混合物在室温下搅拌18小时。将溶液用EtOAc稀释,并且在减压下浓缩,以提供呈白色固体的标题化合物(0.62g,产率:98.6%),所述标题化合物无需进一步纯化+ 即可使用。MS(m/z):C28H38FNO8的[M+H]计算值,536.26;实验值,536.3。 [0549] 步骤4:HA和(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1': 4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸1‑氨基丙‑2‑基酯的缀合物的制备 [0550] [0551] 在100mL圆底烧瓶中,将透明质酸(201mg,0.5mmol羧酸)溶解于22mL去离子水中,随后在搅拌时逐滴添加20mL的1,4‑二噁烷。向溶液中添加(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α, 12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸1‑氨基丙‑2‑基酯盐酸盐(114mg,0.2mmol)、N‑羟基琥珀酰亚胺(NHS,46mg, 0.4mmol)和1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDCI,38mg,0.2mmol),从而使粘度暂时增加。用5% NaHCO3溶液将反应混合物的pH调节到6~6.5。然后在室温下搅拌反应混合 物持续24小时。将5% NaHCO3溶液(5mL)添加到反应混合物中,在搅拌1小时之后,添加1M HCl溶液(4.3mL)。然后将NaCl(293mg,5mmol)添加到反应混合物中,将所述反应混合物搅拌 1小时,并且随后在‑10℃下搅拌时逐滴添加无水醇(200mL)。将混合物过滤。收集滤饼,用无水醇洗涤,并且在真空中干燥以得到呈白色固体的标题化合物。(透明质酸钠MW 50KDa 1 0.22g,产率:71.4%,DSR=17%);H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.71–7.61(m,0.17H),6.64– 6.50(m,0.17H),6.43–6.31(m,0.17H),5.49–5.33(m,0.17H),5.26–4.98(m,0.68H),4.80– 4.44(m,2.17H),4.25–3.09(m,10.34H),2.96–2.50(m,0.68H),2.41–1.73(m,3.34H),1.72– 1.53(m,1.7H),1.48–1.34(m,1.02H),1.10–0.91(m,0.51H)。 [0552] 经此步骤,透明质酸钠(MW 500KDa)的反应提供了对应的产物(0.19g,产率:1 61.6%,DSR=14%)。H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.71–7.60(m,0.14H),6.64–6.51(m, 0.14H),6.43–6.32(m,0.14H),5.52–5.32(m,0.14H),5.26–4.98(m,0.56H),4.81–4.43(m, 2.14H),4.26–3.20(m,10.28H),3.04–2.53(m,0.56H),2.40–1.74(m,3.28H),1.73–1.52(m, 1.4H),1.50–1.33(m,0.84H),1.10–0.93(m,0.42H)。 [0553] 经此步骤,透明质酸钠(MW 2000KDa)的反应提供了对应的产物(0.16g,产率:1 51.9%,DSR=14%)。H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.72–7.59(m,0.14H),6.66–6.53(m, 0.14H),6.42–6.30(m,0.14H),5.51–5.32(m,0.14H),5.25–4.95(m,0.56H),4.80–4.40(m, 2.14H),4.32–3.08(m,10.28H),2.96–2.52(m,0.56H),2.28–1.74(m,3.28H),1.73–1.52(m, 1.4H),1.51–1.34(m,0.84H),1.11–0.90(m,0.42H)。 [0554] 实施例21 [0555] HA和哌啶‑4‑甲酸2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备[0556] [0557] 步骤1:4‑(2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)哌啶‑1,4‑二甲酸1‑(叔丁基)酯的制备 [0558] [0559] 将(6α,9α,11β,16β)‑6,9‑二氟‑11,21‑二羟基‑16,17‑[(1‑甲基亚乙基)双(氧基)]孕‑1,4‑二烯‑3,20‑二酮(679mg,1.5mmol)、1‑(叔丁氧基羰基)哌啶‑4‑甲酸(447mg,1.95mmol)、1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺(431mg,2.25mmol)、N,N‑二甲基吡啶‑ 4‑胺(18mg,0.15mmol)溶解于DCM(30mL)中。在室温下搅拌反应混合物3小时。将溶液用DCM稀释,并用水和饱和盐水溶液洗涤。将有机层经硫酸钠干燥,过滤并且然后在减压下浓缩。 通过柱色谱法(PE/EtOAc=2:1~1:1)纯化粗残余物,以提供标题化合物(940mg,产率: + 1 94%)。MS(m/z):C35H47F2NO9的[M+H] 计算值,664.32;实验值,608.3(M+H‑56)。H NMR(400MHz,氯仿‑d)δ7.14(dd,J=10.1,1.5Hz,1H),6.44(d,J=2.2Hz,1H),6.38(dd,J= 10.2,1.9Hz,1H),5.53–5.28(m,1H),5.04–4.84(m,3H),4.42(dd,J=7.4,4.3Hz,1H),4.01 (d,J=12.4Hz,2H),2.98–2.85(m,2H),2.66–2.58(m,1H),2.57–2.35(m,3H),2.29(dd,J= 7.1,5.0Hz,1H),2.19(td,J=12.5,6.0Hz,1H),2.02–1.88(m,2H),1.83–1.59(m,6H),1.54 (s,3H),1.50–1.40(m,12H),1.23(s,3H),0.93(s,3H)。 [0560] 步骤2:哌啶‑4‑甲酸2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐的制备[0561] [0562] 在冰浴下,向4‑(2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)哌啶‑1,4‑二甲酸1‑(叔丁基)酯(800mg,1.2mmol)于EtOAc(32mL)中的搅拌溶液中缓慢添加含4M HCl的乙酸 乙酯(6.4mL)。使反应混合物冷却到室温,并且然后在室温下搅拌19小时。将溶液用EtOAc稀释,并且在减压下浓缩以提供呈白色固体的标题化合物(0.6g,产率:88%),所述标题化合+ 物无需进一步纯化即可使用。MS(m/z):C30H39F2NO7的[M+H]计算值,564.27;实验值,564.3。 [0563] 步骤3:HA和哌啶‑4‑甲酸2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0564] [0565] 在100mL圆底烧瓶中,将透明质酸(201mg,0.5mmol羧酸)溶解于22mL去离子水中,随后在搅拌时逐滴添加22mL的1,4‑二噁烷。向溶液中添加哌啶‑4‑甲酸2‑((2S,6αS,6βR, 7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐(120mg,0.2mmol)、N‑羟基琥珀酰亚胺(46mg,0.4mmol)和 1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺(38mg,0.2mmol),从而使粘度暂时增加。用5%NaHCO3溶液将反应混合物的pH调节到6~6.5。然后在室温下搅拌反应混合物持续24小时。 将5% NaHCO3溶液(2mL)添加到反应混合物中,在搅拌1小时之后,添加1M HCl溶液(1mL)。 然后将NaCl(293mg,5mmol)添加到反应混合物中,将所述反应混合物搅拌1小时,并且随后在‑10℃下搅拌时逐滴添加无水醇(270mL)。将混合物过滤。收集滤饼,用无水醇洗涤,并且在真空中干燥以得到呈白色固体的标题化合物。(透明质酸钠MW 50KDa 0.204g,产率: 1 65%,DSR=6%);H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.55–7.45(m,0.06H),6.55–6.43(m,0.12H), 579–5.57(m,0.06H),5.36–5.27(m,0.06H),5.18–4.98(m,0.12H),4.72–4.27(m,2.06H), 4.22–3.15(m,10.12H),3.11–2.66(m,0.18H),2.55–2.41(m,0.24H),2.35–1.65(m,3.48H), 1.64–1.54(m,0.18H),1.53–1.46(m,0.18H),1.35–1.27(m,0.18H),1.00–0.89(m,0.18H)。 [0566] 实施例22 [0567] HA和4‑(氨基甲基)苯甲酸2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0568] [0569] 步骤1:4‑(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)苯甲酸2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的制备 [0570] [0571] 将(6α,9α,11β,16β)‑6,9‑二氟‑11,21‑二羟基‑16,17‑[(1‑甲基亚乙基)双(氧基)]孕‑1,4‑二烯‑3,20‑二酮(679mg,1.5mmol)、4‑(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)苯甲酸(490mg,1.95mmol)、1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺(432mg,2.25mmol)、N,N‑二甲基吡啶‑4‑胺(18mg,0.15mmol)溶解于DCM(30mL)中。在室温下搅拌反应混合物3小时。将溶液用DCM稀释,并用水和饱和盐水溶液洗涤。将有机层经硫酸钠干燥,过滤并且然后在减压下浓缩。通过柱色谱法(PE/乙酸乙酯=5:1~2:1)纯化粗残余物,以提供标题化合物+ (1000mg,产率:97%)。MS(m/z):C37H45F2NO9的[M+H]计算值,686.31;实验值,630.2(M+H‑ 1 56)。H NMR(400MHz,氯仿‑d)δ8.09–8.00(m,2H),7.37(d,J=8.0Hz,2H),7.13(dd,J= 10.1,1.4Hz,1H),6.45(s,1H),6.38(dd,J=10.1,1.9Hz,1H),5.45(ddd,J=11.6,6.6, 1.9Hz,1H),5.13(d,J=3.3Hz,2H),5.07–4.92(m,2H),4.50–4.29(m,3H),2.61–2.40(m, 2H),2.40–2.16(m,3H),1.90–1.61(m,4H),1.54(s,3H),1.51–1.42(m,12H),1.29(s,3H), 1.00(s,3H)。 [0572] 步骤2:4‑(氨基甲基)苯甲酸2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐的制备 [0573] [0574] 在冰浴下,向4‑(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)苯甲酸2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯(800mg,1.17mmol)于EtOAc(32mL)中的搅拌溶液中缓慢添加含4M HCl的乙酸乙酯(6.4mL)。使反应混合物冷却到室温,并且然后在室温下搅拌40小时。将溶液用EtOAc稀释,并且在减压下浓缩以提供呈白色固体的标题化合物(0.54g,产率:78%),所述标题化+ 合物无需进一步纯化即可使用。MS(m/z):C32H37F2NO7的[M+H] 计算值,586.25;实验值, 586.4。 [0575] 步骤3:HA和4‑(氨基甲基)苯甲酸2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0576] [0577] 在100mL圆底烧瓶中,将透明质酸(201mg,0.5mmol羧酸)溶解于22mL的去离子水中,随后在搅拌时逐滴添加22mL的1,4‑二噁烷。向溶液中添加4‑(氨基甲基)苯甲酸2‑((2S, 6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1, 3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐(124mg,0.2mmol)、N‑羟基琥珀酰亚胺(46mg, 0.4mmol)和1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺(38mg,0.2mmol),从而使粘度暂时增加。用5%NaHCO3溶液将反应混合物的pH调节到6~6.5。然后在室温下搅拌反应混合物持续 24小时。将5% NaHCO3溶液(2mL)添加到反应混合物中,在搅拌1小时之后,添加1M HCl溶液(1mL)。然后将NaCl(293mg,5mmol)添加到反应混合物中,将所述反应混合物搅拌1小时,并且随后在‑10℃搅拌时逐滴添加无水醇(270mL)。将混合物过滤。收集滤饼,用无水醇洗涤,并且在真空中干燥以得到呈白色固体的标题化合物(透明质酸钠MW 50KDa 0.218g,产率: 1 68%,DSR=35%);H NMR(400MHz,氧化氘)δ8.20–8.04(m,0.7H),7.67–7.41(m,1.05H), 6.57–6.38(m,0.7H),5.81–5.42(m,1.05H),5.31–5.02(m,0.7H),4.76–4.31(m,2.7H), 4.14–3.02(m,10H),2.59–1.66(m,5.8H),1.65–1.43(m,2.1H),1.40–1.27(m,1.05H),1.07– 0.87(m,1.05H)。 [0578] 实施例23 [0579] HA和6‑氨基己酸2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备[0580] [0581] 步骤1:6‑((叔丁氧基羰基)氨基)己酸2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αaS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的制备 [0582] [0583] 将(6α,9α,11β,16β)‑6,9‑二氟‑11,21‑二羟基‑16,17‑[(1‑甲基亚乙基)双(氧基)]孕‑1,4‑二烯‑3,20‑二酮(679mg,1.5mmol)、6‑((叔丁氧基羰基)氨基)己酸(451mg,1.95mmol)、1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺(432mg,2.25mmol)、N,N‑二甲基吡啶‑ 4‑胺(18mg,0.15mmol)溶解于DCM(20mL)中。在室温下搅拌反应混合物3小时。将溶液用DCM稀释,并用水和饱和盐水溶液洗涤。将有机层经硫酸钠干燥,过滤并且然后在减压下浓缩。 通过柱色谱法(PE/乙酸乙酯=2:1~1:1)纯化粗残余物,以提供标题化合物(922mg,产率: + 1 92%)。MS(m/z):C35H49F2NO9的[M+H] 计算值,666.34;实验值,566.3(M+H‑100)。H NMR(400MHz,氯仿‑d)δ7.15(dd,J=10.1,1.4Hz,1H),6.44(d,J=2.2Hz,1H),6.37(dd,J= 10.2,1.9Hz,1H),5.33(ddd,J=11.6,6.6,1.9Hz,1H),4.99(d,J=4.8Hz,1H),4.90(s,2H), 4.62(s,1H),4.42(dt,J=8.5,2.9Hz,1H),3.12(q,J=6.8Hz,2H),2.67(s,1H),2.58–2.34 (m,4H),2.33–2.25(m,1H),2.24–2.13(m,1H),1.84–1.74(m,2H),1.73–1.59(m,4H),1.57– 1.49(m,5H),1.48–1.36(m,14H),1.22(s,3H),0.94(s,3H)。 [0584] 步骤2:6‑氨基己酸2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐的制备[0585] [0586] 在冰浴下向6‑((叔丁氧基羰基)氨基)己酸2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αaS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α, 12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯(800mg,1.2mmol)于EtOAc(32mL)中的搅拌溶液中缓慢添加含4M HCl的乙酸乙酯 (6.4mL)。使反应混合物冷却到室温,并且然后在室温下搅拌18小时。将溶液用EtOAc稀释,并且在减压下浓缩以提供呈白色固体的标题化合物(0.669g,产率:98%),所述标题化合物+ 无需进一步纯化即可使用。MS(m/z):C30H41F2NO7的[M+H]计算值,566.29;实验值,566.3。 [0587] 步骤3:HA和6‑氨基己酸2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0588] [0589] 在100mL圆底烧瓶中,将透明质酸(101mg,0.25mmol羧酸)溶解于11mL的去离子水中,随后在搅拌时逐滴添加11mL的1,4‑二噁烷。向溶液中添加6‑氨基己酸2‑((2S,6αS,6βR, 7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐(150mg,0.25mmol)、N‑羟基琥珀酰亚胺(58mg,0.5mmol)和 1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺(48mg,0.25mmol),从而使粘度暂时增加。用5%NaHCO3溶液将反应混合物的pH调节到6~6.5。然后在室温下搅拌反应混合物持续24小时。 将5% NaHCO3溶液(2mL)添加到反应混合物中,在搅拌1小时之后,添加1M HCl溶液(1mL)。 然后将NaCl(293mg,5mmol)添加到反应混合物中,将所述反应混合物搅拌1小时并且随后 在‑10℃下搅拌时逐滴添加无水醇(140mL)。将混合物过滤。收集滤饼,用无水醇洗涤,并且在真空中干燥以得到呈白色固体的标题化合物。(透明质酸钠MW 50KDa 0.09g,产率:37%, 1 DSR=21%);H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.56–7.38(m,0.21H),6.55–6.34(m,0.42H),5.78– 5.53(m,0.21H),5.33–5.18(m,0.42H),5.13–4.90(m,0.42H),4.70–4.26(m,2.21H),4.19– 2.99(m,10.42H),2.60–2.35(m,1.05H),2.28–1.92(m,3.21H),1.90–1.32(m,3.15H),1.31– 1.24(m,0.63H),1.00–0.82(m,0.63H)。 [0590] 实施例24 [0591] HA和5‑氨基戊酸2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备[0592] [0593] 步骤1:5‑((叔丁氧基羰基)氨基)戊酸2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的制备 [0594] [0595] 将(6α,9α,11β,16β)‑6,9‑二氟‑11,21‑二羟基‑16,17‑[(1‑甲基亚乙基)双(氧基)]孕‑1,4‑二烯‑3,20‑二酮(679mg,1.5mmol)、5‑((叔丁氧基羰基)氨基)戊酸(424mg,1.95mmol)、1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺(432mg,2.25mmol)、N,N‑二甲基吡啶‑ 4‑胺(18mg,0.15mmol)溶解于DCM(20mL)中。在室温下搅拌反应混合物3小时。将溶液用DCM稀释,并用水和饱和盐水溶液洗涤。将有机层经硫酸钠干燥,过滤并且然后在减压下浓缩。 通过柱色谱法(PE/EtOAc=2:1~1:1)纯化粗残余物,以提供标题化合物(950mg,产率: + 1 97%)。MS(m/z):C34H47F2NO9的[M+H] 计算值,652.32;实验值,596.3(M+H‑56)。H NMR(400MHz,氯仿‑d)δ7.15(dd,J=10.1,1.5Hz,1H),6.43(d,J=2.1Hz,1H),6.37(dd,J= 10.2,1.9Hz,1H),5.50–5.31(m,1H),4.99(d,J=4.8Hz,1H),4.90(d,J=6.5Hz,2H),4.65 (s,1H),4.42(dt,J=8.7,2.8Hz,1H),3.14(q,J=6.8Hz,2H),2.69(s,1H),2.58–2.40(m, 3H),2.40–2.33(m,1H),2.33–2.25(m,1H),2.24–2.13(m,1H),1.86–1.66(m,6H),1.61–1.51(m,5H),1.49–1.39(m,12H),1.22(s,3H),0.94(s,3H)。 [0596] 步骤2:5‑氨基戊酸2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐的制备[0597] [0598] 在冰浴下,向5‑((叔丁氧基羰基)氨基)戊酸2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α, 12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯(800mg,1.23mmol)于EtOAc(32mL)中的搅拌溶液中缓慢添加含4M HCl的乙酸乙酯 (6.4mL)。使反应混合物冷却到室温,并且然后在室温下搅拌18小时。将溶液用EtOAc稀释,并且在减压下浓缩,以提供呈白色固体的标题化合物(0.67g,产率:98%),所述标题化合物无需进一步纯化即可使用。MS(m/z):C29H39F2NO7的[M+H]+计算值,552.27;实验值,552.3。 [0599] 步骤3:HA和5‑氨基戊酸2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0600] [0601] 在100mL圆底烧瓶中,将透明质酸(201mg,0.5mmol羧酸)溶解于22mL的去离子水中,随后在搅拌时逐滴添加22mL的1,4‑二噁烷。向溶液中添加5‑氨基戊酸2‑((2S,6αS,6βR, 7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐(118mg,0.2mmol)、N‑羟基琥珀酰亚胺(46mg,0.4mmol)和 1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺(38mg,0.2mmol),从而使粘度暂时增加。用5%NaHCO3溶液将反应混合物的pH调节到6~6.5。然后在室温下搅拌反应混合物持续24小时。 将5% NaHCO3溶液(2mL)添加到反应混合物中,在搅拌1小时之后,添加1M HCl溶液(1mL)。 然后将NaCl(293mg,5mmol)添加到反应混合物中,将所述反应混合物搅拌1小时,并且随后在‑10℃下搅拌时逐滴添加无水醇(270mL)。将混合物过滤。收集滤饼,用无水醇洗涤,并且在真空中干燥以得到呈白色固体的标题化合物。(透明质酸钠MW 50KDa 0.19g,产率:61%, 1 DSR=22%);H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.59–7.45(m,0.22H),6.59–6.41(m,0.44H),5.82– 5.55(m,0.22H),5.36–5.23(m,0.22H),5.16–4.93(m,0.66H),4.73–4.34(m,2H),4.19–3.10(m,10.44H),2.68–2.36(m,0.66H),2.32–1.92(m,3.66H),1.91–1.56(m,2.42H),1.55–1.42(m,0.66H),1.36–1.25(m,0.66H),1.02–0.85(m,0.66H)。 [0602] 实施例25 [0603] HA和(2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸5‑氨基戊酯的缀合物的制备 [0604] [0605] [0606] 步骤1:1H‑咪唑‑1‑甲酸5‑((叔丁氧基羰基)氨基)戊酯的制备 [0607] [0608] 向(5‑羟基戊基)氨基甲酸叔丁酯(407mg,2mmol)于DCM(30mL)中的溶液中添加1,1'‑羰基二咪唑(648mg,4mmol)。在室温下将所得混合物搅拌16小时。将溶液用DCM稀释,并且用饱和NaHCO3溶液、水和饱和盐水溶液洗涤。将有机层经硫酸钠干燥,过滤,并且然后在减压下浓缩以提供呈黄色油的标题化合物(0.58g,产率:97%),所述标题化合物无需进一+ 步纯化即可使用。MS(m/z):C14H23N3O4的[M+H]计算值,298.17;实验值,298.4。 [0609] 步骤2:(5‑(((2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)戊基)氨基甲酸叔丁酯的制备 [0610] [0611] 在N2下,向(6α,9α,11β,16β)‑6,9‑二氟‑11,21‑二羟基‑16,17‑[(1‑甲基亚乙基)双(氧基)]孕‑1,4‑二烯‑3,20‑二酮(905mg,2mmol)于DMF(20mL)中的溶液中添加1H‑咪唑‑1‑甲酸5‑((叔丁氧基羰基)氨基)戊酯(594mg,2mmol)和K2CO3(276mg,2mmol)。在室温下将所得混合物搅拌16小时。在室温下将反应混合物倒入水(90mL)中,过滤并且将滤饼溶解于DCM(40mL)中。将溶液经硫酸钠干燥,过滤并且然后在减压下浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物+ 以得到标题产物(0.8g,产率:58%);MS(m/z):C35H49F2NO10的[M+H]计算值,682.33;实验值, 1 626.3(M+H‑56)。H NMR(400MHz,氯仿‑d)δ7.19–7.11(m,1H),6.44(d,J=2.2Hz,1H),6.37(dd,J=10.1,1.9Hz,1H),5.50–5.28(m,1H),5.04–4.94(m,2H),4.84(d,J=17.9Hz,1H), 4.60(s,1H),4.42(dq,J=8.8,2.7Hz,1H),4.19(t,J=6.4Hz,2H),3.12(q,J=6.7Hz,2H), 2.68(s,1H),2.59–2.41(m,1H),2.40–2.25(m,2H),2.23–2.12(m,1H),1.84–1.59(m,6H), 1.58–1.49(m,5H),1.48–1.39(m,14H),1.21(s,3H),0.95(s,3H)。 [0612] 步骤3:(2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2', 1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸5‑氨基戊酯盐酸盐的制备 [0613] [0614] 在冰浴下,向(5‑(((2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)戊基)氨基甲酸叔丁酯(600mg,0.88mmol)于EtOAc(24mL)中的搅拌溶液中缓慢添加含4M HCl的乙酸乙酯(4.8mL)。使反应混合物冷却到室温,并且然后在室温下搅拌20小时。将溶液用EtOAc稀释,并且在减压下浓缩,以提供呈白色固体的标题化合物(0.5g,产率:97%),所+ 述标题化合物无需进一步纯化即可使用。MS(m/z):C30H41F2NO8的[M+H]计算值,582.28;实验值,582.3。 [0615] 步骤4:HA和(2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸5‑氨基戊酯的缀合物的制备 [0616] [0617] 在100mL圆底烧瓶中,将透明质酸(201mg,0.5mmol羧酸)溶解于22mL的去离子水中,随后在搅拌时逐滴添加22mL的1,4‑二噁烷。向溶液中添加(2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8, 8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸5‑氨基戊酯盐酸盐(124mg,0.2mmol)、N‑羟基琥珀酰亚胺(46mg, 0.4mmol)和1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺(38mg,0.2mmol),从而使粘度暂时增加。用5% NaHCO3溶液将反应混合物的pH调节到6~6.5。然后在室温下搅拌反应混合物持 续24小时。将5% NaHCO3溶液(2mL)添加到反应混合物中,在搅拌1小时之后,添加1M HCl溶液(1mL)。然后将NaCl(293mg,5mmol)添加到反应混合物中,将所述反应混合物搅拌1小时,并且随后在‑10℃下搅拌时逐滴添加无水醇(270mL)。将混合物过滤。收集滤饼,用无水醇洗涤,并且在真空中干燥以得到呈白色固体的标题化合物。(透明质酸钠MW 50KDa 0.19g,产 1 率:59%,DSR=22%);H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.58–7.43(m,0.22H),6.59–6.40(m, 0.44H),5.82–5.56(m,0.22H),5.39–5.25(m,0.22H),5.17–4.92(m,0.44H),4.72–4.39(m, 2.66H),4.37–3.02(m,10.44H),2.61–2.37(m,0.66H),2.30–1.92(m,3.22H),1.91–1.38(m, 3.52H),1.37–1.24(m,0.66H),1.02–0.83(m,0.66H)。 [0618] 实施例26 [0619] HA和(2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸6‑氨基己酯的缀合物的制备 [0620] [0621] 步骤1:1H‑咪唑‑1‑甲酸6‑((叔丁氧基羰基)氨基)己酯的制备 [0622] [0623] 向1H‑咪唑‑1‑甲酸6‑((叔丁氧基羰基)氨基)己酯(435mg,2mmol)于DCM(20mL)中的溶液中添加1,1'‑羰基二咪唑(648mg,4mmol)。在室温下将所得混合物搅拌16小时。将溶液用DCM稀释并且用水洗涤。将有机层经硫酸钠干燥,过滤并且然后在减压下浓缩以提供呈黄色油的标题化合物(0.61g,产率:97%),所述标题化合物无需进一步纯化即可使用。MS+(m/z):C15H25N3O4的[M+H]计算值,312.18;实验值,312.2。 [0624] 步骤2:(6‑(((2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)己基)氨基甲酸叔丁酯的制备 [0625] [0626] 在N2下,向(6α,9α,11β,16β)‑6,9‑二氟‑11,21‑二羟基‑16,17‑[(1‑甲基亚乙基)双(氧基)]孕‑1,4‑二烯‑3,20‑二酮(311mg,1mmol)于DMF(8mL)中的溶液中添加1H‑咪唑‑1‑甲酸6‑((叔丁氧基羰基)氨基)己酯(452mg,1mmol)和K2CO3(138mg,1mmol)。在室温下将所得混合物搅拌16小时。在室温下将反应混合物倒入水(24mL)中,过滤并且将滤饼溶解于DCM(20mL)中。将溶液经硫酸钠干燥,过滤并且然后在减压下浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物+ 以得到标题产物(0.45g,产率:64%);MS(m/z):C36H51F2NO10的[M+H]计算值,696.35;实验 1 值,640.4(M+H‑56)。H NMR(400MHz,氯仿‑d)δ7.19–7.10(m,1H),6.44(d,J=2.1Hz,1H), 6.37(dd,J=10.1,1.9Hz,1H),5.50–5.31(m,1H),5.05–4.94(m,2H),4.83(d,J=17.8Hz, 1H),4.57(t,J=5.9Hz,1H),4.48–4.36(m,1H),4.19(t,J=6.4Hz,2H),3.11(q,J=6.6Hz, 2H),2.65–2.42(m,2H),2.37(d,J=13.9Hz,1H),2.34–2.25(m,1H),2.24–2.13(m,1H), 1.88–1.58(m,8H),1.54(s,3H),1.52–1.31(m,16H),1.21(s,3H),0.96(s,3H)。 [0627] 步骤3:(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸6‑氨基己酯的制备 [0628] [0629] 在冰浴下,向(6‑(((2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)己基)氨基甲酸叔丁酯(430mg,0.62mmol)于EtOAc(17.2mL)中的搅拌溶液中缓慢添加含4M HCl的乙酸乙酯(3.4mL)。使反应混合物冷却到室温,并且然后在室温下搅拌21小时。将溶液用EtOAc稀释,并且在减压下浓缩,以提供呈白色固体的标题化合物(0.39g,产率:99%),所+ 述标题化合物无需进一步纯化即可使用。MS(m/z):C31H43F2NO8的[M+H]计算值,596.30;实验值,596.3。 [0630] 步骤4:HA和(2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸6‑氨基己酯的缀合物的制备 [0631] [0632] 在100mL圆底烧瓶中,将透明质酸(201mg,0.5mmol羧酸)溶解于22mL的去离子水中,随后在搅拌时逐滴添加22mL的1,4‑二噁烷。向溶液中添加(2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8, 8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸6‑氨基己酯盐酸盐(126mg,0.2mmol)、N‑羟基琥珀酰亚胺(46mg, 0.4mmol)和1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺(38mg,0.2mmol),从而使粘度暂时增加。用5% NaHCO3溶液将反应混合物的pH调节到6~6.5。然后在室温下搅拌反应混合物持 续24小时。将5% NaHCO3溶液(2mL)添加到反应混合物中,在搅拌1小时之后,添加1M HCl溶液(1mL)。然后将NaCl(293mg,5mmol)添加到反应混合物中,将所述反应混合物搅拌1小时,并且随后在‑10℃下搅拌时逐滴添加无水醇(300mL)。将混合物过滤。收集滤饼,用无水醇洗涤,并且在真空中干燥,以得到呈白色固体的标题化合物。(透明质酸钠MW 500KDa 0.19g, 1 产率:59%,DSR=15%);H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.59–7.47(m,0.15H),6.59–6.43(m, 0.3H),5.79–5.58(m,0.15H),5.39–5.25(m,0.15H),5.16–4.91(m,0.3H),4.71–4.37(m, 2.45H),4.36–2.88(m,10.3H),2.59–2.39(m,0.45H),2.32–1.66(m,3.15H),1.65–1.34(m, 2.7H),1.33–1.26(m,0.45H),1.02–0.86(m,0.45H)。 [0633] 实施例27 [0634] HA和(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸6‑氨基己酯的缀合物的制备[0635] [0636] 步骤1:1H‑咪唑‑1‑甲酸6‑((叔丁氧基羰基)氨基)己酯的制备 [0637] [0638] 向1H‑咪唑‑1‑甲酸6‑((叔丁氧基羰基)氨基)己酯(435mg,2mmol)于DCM(20mL)中的溶液中添加1,1'‑羰基二咪唑(648mg,4mmol)。在室温下将所得混合物搅拌16小时。将溶液用DCM稀释,并且用水洗涤。将有机层经硫酸钠干燥,过滤并且然后在减压下浓缩以提供呈黄色油的标题化合物(0.61g,产率:97%),所述标题化合物无需进一步纯化即可使用。MS+(m/z):C15H25N3O4的[M+H]计算值,312.18;实验值,312.2。 [0639] 步骤2:(6‑(((2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)己基)氨基甲酸叔丁酯的制备 [0640] [0641] 在N2下,向9α‑氟‑11β,16α,17,21‑四羟基‑1,4‑孕二烯‑3,20‑二酮(435mg,1mmol)于DMF(8mL)中的溶液中添加1H‑咪唑‑1‑甲酸6‑((叔丁氧基羰基)氨基)己酯(311mg,1mmol)和K2CO3(414mg,13mmol),在室温下将所得混合物搅拌16小时。在室温下将反应混合物倒入水(25mL)中,过滤并且将滤饼溶解于DCM(20mL)中。将溶液经硫酸钠干燥,过滤并且然后在减压下浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物以得到标题产物(0.35g,产率:51%);MS(m/z):+ 1 C36H52FNO10的[M+H]计算值,678.36;实验值,622.4(M+H‑56)。H NMR(400MHz,氯仿‑d)δ7.21(d,J=10.1Hz,1H),6.34(dd,J=10.2,1.9Hz,1H),6.14(t,J=1.7Hz,1H),5.05–4.95(m, 2H),4.83(d,J=17.8Hz,1H),4.55(s,1H),4.42(d,J=8.8Hz,1H),4.19(t,J=6.5Hz,2H), 3.11(q,J=6.7Hz,2H),2.72–2.59(m,1H),2.55–2.34(m,3H),2.21(s,1H),2.16–2.06(m, 5.9Hz,1H),1.92–1.82(m,1H),1.75–1.59(m,8H),1.55(s,3H),1.52–1.32(m,16H),1.21(s, 3H),0.96(s,3H)。 [0642] 步骤3:(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸6‑氨基己酯的制备 [0643] [0644] 在冰浴下向(6‑(((2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)己基)氨基甲酸叔丁酯(330mg,0.48mmol)于EtOAc(13.2mL)中的搅拌溶液中缓慢添加含4M HCl的乙酸乙酯(2.6mL)。使反应混合物冷却到室温,并且然后在室温下搅拌21小时。将溶液用EtOAc稀释,并且在减压下浓缩以提供呈白色固体的标题化合物(0.28g,产率:94%),所述标题化+ 合物无需进一步纯化即可使用。MS(m/z):C31H44FNO8的[M+H] 计算值,578.31;实验值, 578.3。 [0645] 步骤4:HA和(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1': 4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸6‑氨基己酯的缀合物的制备 [0646] [0647] 在100mL圆底烧瓶中,将透明质酸(201mg,0.5mmol羧酸)溶解于22mL的去离子水中,随后在搅拌时逐滴添加22mL的1,4‑二噁烷。向溶液中添加(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS, 11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸6‑氨基己酯盐酸盐(123mg,0.2mmol)、N‑羟基琥珀酰亚胺(46mg,0.4mmol)和 1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺(38mg,0.2mmol),从而使粘度暂时增加。用5% NaHCO3溶液将反应混合物的pH调节到6~6.5。然后在室温下搅拌反应混合物持续24小时。 将5% NaHCO3溶液(2mL)添加到反应混合物中,在搅拌1小时之后,添加1M HCl溶液 (1.7mL)。然后将NaCl(293mg,5mmol)添加到反应混合物中,将所述反应混合物搅拌1小时,并且随后在‑10℃下搅拌时逐滴添加无水醇(300mL)。将混合物过滤。收集滤饼,用无水醇洗涤,并且在真空中干燥,以得到呈白色固体的标题化合物。(透明质酸钠MW 500KDa 0.21g, 1 产率:66%,DSR=15%);H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.62–7.51(m,0.15H),6.53–6.42(m, 0.15H),6.33–6.22(m,0.15H),5.38–5.24(m,0.15H),5.15–4.92(m,0.3H),4.74–4.21(m, 2.45H),4.20–3.00(m,10.3H),2.87–2.45(m,0.6H),2.34–1.66(m,3H),1.65–1.35(m,3H), 1.34–1.27(m,0.45H),1.02–0.86(m,0.45H)。 [0648] 实施例28 [0649] HA和2‑(2‑氨基乙氧基)乙酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备[0650] [0651] 步骤1:2‑(2‑((叔丁氧基羰基)氨基)乙氧基)乙酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的制备 [0652] [0653] 将9α‑氟‑11β,16α,17,21‑四羟基‑1,4‑孕二烯‑3,20‑二酮(652mg,1.5mmol)、2‑(2‑((叔丁氧基羰基)氨基)乙氧基)乙酸(428mg,1.95mmol)、1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺(432mg,2.25mmol)、N,N‑二甲基吡啶‑4‑胺(18mg,0.15mmol)的混合物溶解于DCM(20mL)中。在室温下搅拌反应混合物3小时。将溶液用DCM稀释,并用水和饱和盐水溶液洗涤。将有机层经硫酸钠干燥,过滤并且然后在减压下浓缩。通过柱色谱法(PE/EtOAc=2:1~+1:1)纯化粗残余物,以提供标题化合物(900mg,产率:95%)。MS(m/z):C33H46FNO10的[M+H]计算 1 值,636.31;实验值,580.3(M+H‑56)。H NMR(400MHz,氯仿‑d)δ7.22(d,J=10.3Hz,1H), 6.35(dd,J=10.1,1.9Hz,1H),6.13(t,J=1.8Hz,1H),5.17–4.87(m,3H),4.53–4.37(m, 1H),4.26(d,J=4.3Hz,2H),3.65(t,J=5.0Hz,2H),3.36(s,2H),2.72–2.57(m,1H),2.54– 2.26(m,3H),2.17–2.06(m,1H),1.96–1.81(m,1H),1.79–1.59(m,6H),1.56(s,3H),1.49– 1.40(m,12H),1.22(s,3H),0.95(s,3H)。 [0654] 步骤2:2‑(2‑氨基乙氧基)乙酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的制备[0655] [0656] 在冰浴下,向2‑(2‑((叔丁氧基羰基)氨基)乙氧基)乙酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑ 2‑氧代乙酯(600mg,0.94mmol)于EtOAc(24mL)中的搅拌溶液中缓慢添加含4M HCl的乙酸乙酯(4.8mL)。使反应混合物冷却到室温,并且然后在室温下搅拌21小时。将溶液用EtOAc稀 释,并且在减压下浓缩,以提供呈白色固体的标题化合物(0.46g,产率:91%),所述标题化+ 合物无需进一步纯化即可使用。MS(m/z):C28H38FNO8的[M+H] 计算值,536.26;实验值, 536.1。 [0657] 步骤3:2‑(2‑氨基乙氧基)乙酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的制备[0658] [0659] 在100mL圆底烧瓶中,将透明质酸(201mg,0.5mmol羧酸)溶解于22mL的去离子水中,随后在搅拌时逐滴添加22mL的1,4‑二噁烷。向溶液中添加2‑(2‑氨基乙氧基)乙酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2, 4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐(114mg,0.2mmol)、N‑羟基琥珀酰亚胺(46mg, 0.4mmol)和1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺(38mg,0.2mmol),从而使粘度暂时增加。用5%NaHCO3溶液将反应混合物的pH调节到6~6.5。然后在室温下搅拌反应混合物持续 24小时。将5% NaHCO3溶液(2mL)添加到反应混合物中,在搅拌1小时之后,添加1M HCl溶液(1.3mL)。然后将NaCl(293mg,5mmol)添加到反应混合物中,将所述反应混合物搅拌1小时,并且随后在‑10℃下搅拌时逐滴添加无水醇(300mL)。将混合物过滤。收集滤饼,用无水醇洗涤,并且在真空中干燥以得到呈白色固体的标题化合物。(透明质酸钠MW 50KDa 0.199g,产 1 率:64%,DSR=15%);H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.65–7.55(m,0.15H),6.55–6.44(m, 0.15H),6.34–6.21(m,0.15H),5.45–5.32(m,0.15H),5.17–5.01(m,0.3H),4.71–4.37(m, 2.45H),4.23–3.03(m,10.6H),2.89–2.45(m,0.6H),2.32–1.69(m,3.9H),1.66–1.46(m, 0.9H),1.38–1.29(m,0.45H),1.03–0.89(m,0.45H)。 [0660] 实施例29 [0661] HA和(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸4‑(2‑氨基乙基)苯酯的缀合物的制备 [0662] [0663] 步骤1:(4‑(((2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)苯乙基)氨基甲酸叔丁酯的制备 [0664] [0665] 在N2下,向(4‑羟基苯乙基)氨基甲酸叔丁酯(711mg,3mmol)和碳酸双(4‑硝基苯基)酯(1094mg,3.6mmol)于二氯甲烷(30mL)中的混合物中添加三乙胺(758mg,7.5mmol),将反应混合物加热至回流持续7小时。然后添加9α‑氟‑11β,16α,17,21‑四羟基‑1,4‑孕二烯‑ 3,20‑二酮(1042mg,2.4mmol),并且在室温下将所得混合物搅拌16小时。将溶液用DCM稀释,并且用饱和NaHCO3溶液、水和饱和盐水溶液洗涤。将有机层经硫酸钠干燥,过滤并且然后在减压下浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物以得到标题产物(0.65g,产率:38%);MS(m/z): + 1 C38H48FNO10的[M+H]计算值,698.33;实验值,642.3(M+H‑56)。H NMR(400MHz,氯仿‑d)δ 7.25–7.10(m,5H),6.34(dd,J=10.1,2.0Hz,1H),6.13(t,J=1.8Hz,1H),5.13(d,J= 17.7Hz,1H),5.02(d,J=4.9Hz,1H),4.90(d,J=17.7Hz,1H),4.57(s,1H),4.47–4.35(m, 1H),3.36(d,J=7.5Hz,2H),2.80(t,J=7.0Hz,2H),2.63(td,J=13.6,5.9Hz,1H),2.55– 2.30(m,3H),2.18–2.02(m,2H),1.92–1.82(m,1H),1.75–1.60(m,4H),1.53(s,3H),1.48– 1.39(m,12H),1.23(s,3H),0.95(s,3H)。 [0666] 步骤2:(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸4‑(2‑氨基乙基)苯酯的制备[0667] [0668] 在冰浴下,向(4‑(((2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)苯乙基)氨基甲酸叔丁酯(488mg,0.7mmol)于EtOAc(20mL)中的搅拌溶液中缓慢添加含4M HCl的乙 酸乙酯(5mL)。使反应混合物冷却到室温,并且然后在室温下搅拌16小时。将溶液用EtOAc稀释,并且在减压下浓缩以提供呈白色固体的标题化合物(0.4g,产率:95%),所述标题化合+ 物无需进一步纯化即可使用。MS(m/z):C33H40FNO8的[M+H]计算值,598.27;实验值,598.3。 [0669] 步骤3:HA和碳酸4‑(2‑氨基乙基)苯基(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)酯的缀合物的制备 [0670] [0671] 在100mL圆底烧瓶中,将透明质酸(201mg,0.5mmol羧酸)溶解于22.5mL的去离子水中,随后在搅拌时逐滴添加22.5mL的1,4‑二噁烷。向溶液中添加(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α, 11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑ 2‑氧代乙基)碳酸4‑(2‑氨基乙基)苯酯盐酸盐(127mg,0.2mmol)、N‑羟基琥珀酰亚胺(46mg, 0.4mmol)和1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺(38mg,0.2mmol),从而使粘度暂时增加。用5% NaHCO3溶液将反应混合物的pH调节到6~6.5。然后在室温下搅拌反应混合物持 续24小时。将5% NaHCO3溶液(7.5mL)添加到反应混合物中,在搅拌1小时之后,添加1M HCl溶液(4.3mL)。然后将NaCl(293mg,5mmol)添加到反应混合物中,将所述反应混合物搅拌1小时,并且随后在‑10℃下搅拌时逐滴添加无水醇(300mL)。将混合物过滤。收集滤饼,用无水醇洗涤,并且在真空中干燥,以得到呈白色固体的标题化合物。(透明质酸钠MW 500KDa 1 0.19g,产率:59%,DSR=20%);H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.64–7.52(m,0.2H),7.51–7.36(m,0.2H),7.35–7.14(m,0.4H),6.98–6.85(m,0.2H),6.55–6.42(m,0.2H),6.35–6.21(m, 0.2H),5.53–5.41(m,0.2H),5.19–5.04(m,0.4H),4.70–4.32(m,2.2H),4.25–3.03(m, 10.4H),3.01–2.40(m,1.2H),2.33–1.66(m,4.2H),1.65–1.41(m,1.2H),1.36–1.20(m, 0.6H),1.03–0.87(m,0.6H)。 [0672] 实施例30 [0673] HA和(1S,2S)‑(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸2‑氨基环己酯的缀合物的制备 [0674] [0675] 步骤1:(1S,2S)‑1H‑咪唑‑1‑甲酸2‑((叔丁氧基羰基)氨基)环己酯的制备 [0676] [0677] 向((1S,2S)‑2‑羟基环己基)氨基甲酸叔丁酯(215mg,1mmol)于DCM(10mL)中的溶液中添加1,1'‑羰基二咪唑(324mg,2mmol)。在室温下将所得混合物搅拌19小时。将溶液用DCM稀释并且用水洗涤。将有机层经硫酸钠干燥,过滤并且然后在减压下浓缩以提供呈白色固体的标题化合物(0.3g,产率:48%),所述标题化合物无需进一步纯化即可使用。MS(m/+ z):C15H23N3O4的[M+H]计算值,310.17;实验值,310.2。 [0678] 步骤2:((1S,2S)‑2‑(((2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)环己基)氨基甲酸叔丁酯的制备 [0679] [0680] 在N2下向9α‑氟‑11β,16α,17,21‑四羟基‑1,4‑孕二烯‑3,20‑二酮(435mg,1mmol)于DMF(10mL)中的溶液中添加(1S,2S)‑1H‑咪唑‑1‑甲酸2‑((叔丁氧基羰基)氨基)环己酯(309mg,1mmol)和K2CO3(138mg,1mmol),在室温下将所得混合物搅拌19小时。在室温下将反应混合物倒入水(40mL)中,过滤并且将滤饼溶解于DCM(40mL)中。将溶液经硫酸钠干燥,过滤并且然后在减压下浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物以得到标题产物(0.3g,产率:+ 1 44%);MS(m/z):C36H50FNO10的[M+H] 计算值,676.34;实验值,620.4(M+H‑56)。H NMR(400MHz,氯仿‑d)δ7.24(d,J=10.3Hz,1H),6.33(dd,J=10.1,1.9Hz,1H),6.12(d,J= 1.8Hz,1H),5.09–4.95(m,2H),4.76(d,J=17.7Hz,1H),4.64(s,1H),4.51–4.38(m,2H), 3.59(s,1H),2.81–2.75(m,1H),2.69–2.57(m,1H),2.54–2.29(m,3H),2.15–2.01(m,3H), 1.91–1.74(s,2H),1.72–1.51(m,8H),1.48–1.40(m,12H),1.38–1.28(m,4H),1.20(s,3H), 0.94(s,3H)。 [0681] 步骤3:(1S,2S)‑(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸2‑氨基环己酯的制备 [0682] [0683] 在冰浴下,向((1S,2S)‑2‑(((2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(300mg,0.44mmol)于EtOAc(10mL)中的搅拌溶液中缓慢添加含 4M HCl的乙酸乙酯(2mL)。使反应混合物冷却到室温,并且然后在室温下搅拌21小时。将溶液用EtOAc稀释,并且在减压下浓缩以提供呈白色固体的标题化合物(0.26g,产率:96%),+ 所述标题化合物无需进一步纯化即可使用。MS(m/z):C31H42FNO8的[M+H]计算值,576.29;实验值,576.2。 [0684] 步骤4:(1S,2S)‑(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸2‑氨基环己酯的制备 [0685] [0686] 在100mL圆底烧瓶中,将透明质酸(202mg,0.5mmol羧酸)溶解于22.5mL的去离子水中,随后在搅拌时逐滴添加22.5mL的1,4‑二噁烷。向溶液中添加(1S,2S)‑(2‑((6αS,6βR, 7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸2‑氨基环己酯盐酸盐(122mg,0.2mmol)、N‑羟基琥珀酰亚胺(46mg,0.4mmol)和1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺(38mg,0.2mmol),从而使粘度暂时增加。用5% NaHCO3溶液将反应混合物的pH调节到6~6.5。然后在室温下搅拌反应混 合物持续24小时。将5% NaHCO3溶液(7.5mL)添加到反应混合物中,在搅拌1小时之后,添加 1M HCl溶液(4.3mL)。然后将NaCl(293mg,5mmol)添加到反应混合物中,将所述反应混合物搅拌1小时,并且随后在‑10℃下搅拌时逐滴添加无水醇(225mL)。将混合物过滤。收集滤饼,用无水醇洗涤,并且在真空中干燥以得到呈白色固体的标题化合物。(透明质酸钠MW 1 500KDa 0.195g,产率:61%,DSR=11%);H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.67–7.53(m,0.11H), 6.58–6.43(m,0.11H),6.33–6.21(m,0.11H),5.39–5.24(m,0.11H),5.15–4.91(m,0.22H), 4.74–4.33(m,2.22H),4.32–3.01(m,10.11H),2.95–2.41(m,0.55H),2.40–1.66(m,3.99H), 1.65–1.47(m,0.66H),1.46–1.25(m,0.77H),1.03–0.87(m,0.33H)。 [0687] 实施例31 [0688] HA和(7‑氮杂螺[3.5]壬‑2‑基)碳酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0689] [0690] [0691] 步骤1:2‑((1H‑咪唑‑1‑羰基)氧基)‑7‑氮杂螺[3.5]壬烷‑7‑甲酸叔丁酯的制备[0692] [0693] 向2‑羟基‑7‑氮杂螺[3.5]壬烷‑7‑甲酸叔丁酯(362mg,1.5mmol)于DCM(10mL)中的溶液中添加1,1'‑羰基二咪唑(486mg,3mmol)。在室温下将所得混合物搅拌18小时。将溶液用DCM稀释,并且用水洗涤。将有机层经硫酸钠干燥,过滤并且然后在减压下浓缩以提供呈黄色油的标题化合物(0.5g,产率:99%),所述标题化合物无需进一步纯化即可使用。MS(m/+z):C17H25N3O4的[M+H]计算值,336.18;实验值,336.3。 [0694] 步骤2:2‑(((2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1': 4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)‑7‑氮杂螺[3.5]壬烷‑7‑甲酸叔丁酯的制备 [0695] [0696] 在N2下向9α‑氟‑11β,16α,17,21‑四羟基‑1,4‑孕二烯‑3,20‑二酮(652mg,1.5mmol)于DMF(15mL)中的溶液中添加2‑((1H‑咪唑‑1‑羰基)氧基)‑7‑氮杂螺[3.5]壬烷‑ 7‑甲酸叔丁酯(503mg,1.5mmol)和K2CO3(207mg,1.5mmol),在室温下将所得混合物搅拌3小时。在室温下将反应混合物倒入水(45mL)中,过滤并且将滤饼溶解于DCM(40mL)中。将溶液经硫酸钠干燥,过滤并且然后在减压下浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物以得到标题产物 + (0.27g,产率:25%);MS(m/z):C38H52FNO10的[M+H] 计算值,702.36;实验值,646.3(M+H‑ 1 56)。H NMR(400MHz,氯仿‑d)δ7.19(d,J=10.2Hz,1H),6.34(dd,J=10.2,1.9Hz,1H),6.13(t,J=1.7Hz,1H),5.13–4.92(m,3H),4.77(d,J=17.8Hz,1H),4.42(dt,J=9.2,2.9Hz, 1H),3.44–3.22(m,4H),2.71–2.56(m,1H),2.55–2.27(m,5H),2.15–2.04(m,2H),2.01–1.93(m,2H),1.91–1.83(m,1H),1.73–1.66(m,4H),1.65–1.51(m,7H),1.45(s,9H),1.43(s,3H), 1.21(s,3H),0.94(s,3H)。 [0697] 步骤3:(7‑氮杂螺[3.5]壬‑2‑基)碳酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的制备 [0698] [0699] 在冰浴下向2‑(((2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)‑7‑氮杂螺[3.5]壬烷‑7‑甲酸叔丁酯(270mg,0.38mmol)于EtOAc(10.8mL)中的搅拌溶液中缓慢添加含4M HCl的乙酸乙酯(2.2mL)。使反应混合物冷却到室温,并且然后在室温下搅拌21小时。将溶液用EtOAc稀释并且在减压下浓缩以提供呈白色固体的标题化合物(0.23g,产率: + 95%),所述标题化合物无需进一步纯化即可使用。MS(m/z):C33H44FNO8的[M+H]计算值, 602.31;实验值,602.4。 [0700] 步骤4:HA和(7‑氮杂螺[3.5]壬‑2‑基)碳酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0701] [0702] 在100mL圆底烧瓶中,将透明质酸(161mg,0.4mmol羧酸)溶解于17.8mL的去离子水中,随后在搅拌时逐滴添加17.8mL的1,4‑二噁烷。向溶液中添加(7‑氮杂螺[3.5]壬‑2‑基)碳酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐(102mg,0.16mmol)、N‑羟基琥珀酰亚胺(37mg,0.32mmol)和1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺(31mg,0.16mmol),从而使粘度暂时增加。用5%NaHCO3溶液将反应混合物的pH调节到6~6.5。然后在室温下搅拌反应混合物持续24小时。将5% NaHCO3溶液(2mL)添加到反应混合物中,在搅拌1小时之后,添加1M HCl溶液(1mL)。然后将NaCl(293mg,5mmol)添加到反应混合物中,将所述反应混合物搅拌1小时,并且随后在‑10℃搅拌时逐滴添加无水醇(250mL)。将混合物过滤。收集滤饼,用无水醇洗涤,并且在真空中干燥,以得到呈白色固体的标题化合物。(透明质酸钠MW 500KDa 1 0.129g,产率:50%,DSR=6%);H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.63–7.52(m,0.06H),6.51–6.44(m,0.06H),6.31–6.24(m,0.06H),5.37–5.26(m,0.06H),5.15–4.94(m,0.12H),4.74–4.31(m,2.06H),4.29–3.02(m,10.24H),2.88–2.42(m,0.36H),2.32–1.64(m,3.3H),1.63–1.46(m,0.84H),1.34–1.24(m,0.18H),1.02–0.88(m,0.18H)。 [0703] 实施例32 [0704] HA和(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸2‑(2‑氨基乙氧基)乙酯的缀合物的制备 [0705] [0706] 步骤1:1H‑咪唑‑1‑甲酸2‑(2‑((叔丁氧基羰基)氨基)乙氧基)乙酯的制备 [0707] [0708] 向(2‑(2‑羟基乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(308mg,1.5mmol)于DCM(10mL)中的溶液中添加1,1'‑羰基二咪唑(486mg,3mmol)。在室温下将所得混合物搅拌18小时。将溶液用DCM稀释并且用水洗涤。将有机层经硫酸钠干燥,过滤并且然后在减压下浓缩以提供呈黄色油的标题化合物(0.44g,产率:98%),所述标题化合物无需进一步纯化即可使用。MS(m/+ z):C13H21N3O5的[M+H]计算值,300.15;实验值,300.2。 [0709] 步骤2:(2‑(2‑(((2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯的制备 [0710] [0711] 在N2下向9α‑氟‑11β,16α,17,21‑四羟基‑1,4‑孕二烯‑3,20‑二酮(652mg,1.5mmol)于DMF(15mL)中的溶液中添加1H‑咪唑‑1‑甲酸2‑(2‑((叔丁氧基羰基)氨基)乙氧基)乙酯(449mg,1.5mmol)和K2CO3(207mg,1.5mmol),在室温下将所得混合物搅拌3小时。在室温下将反应混合物倒入水(45mL)中,过滤并且将滤饼溶解于DCM(40mL)中。将溶液经硫酸钠干燥,过滤并且然后在减压下浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物以得到标题产物(0.36g,+ 1 产率:36%);MS(m/z):C34H48FNO11的[M+H]计算值,666.32;实验值,610.3(M+H‑56)。H NMR(400MHz,氯仿‑d)δ7.20(d,J=10.1Hz,1H),6.34(dd,J=10.1,1.9Hz,1H),6.13(t,J= 1.8Hz,1H),4.92(dd,J=71.2,11.0Hz,4H),4.38(d,J=30.1Hz,2H),3.72(s,2H),3.56(dt, J=5.5,3.8Hz,2H),3.33(s,2H),2.70–2.57(m,1H),2.55–2.34(m,3H),2.19–2.07(m,1H), 1.93–1.78(m,1H),1.73–1.59(m,6H),1.56(s,3H),1.46(s,9H),1.43(s,3H),1.21(s,3H), 0.97(s,3H)。 [0712] 步骤3:2‑(2‑氨基乙氧基)乙基(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸酯的制备 [0713] [0714] 在冰浴下,向(2‑(2‑(((2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(360mg,0.54mmol)于EtOAc(14.4mL)中的搅拌溶液中缓慢添加含4M HCl的乙酸乙酯(2.9mL)。使反应混合物冷却到室温,并且然后在室温下搅拌20小时。将溶液用EtOAc稀释,并且在减压下浓缩,以提供呈白色固体的标题化合物(0.3g,产率: + 92%),所述标题化合物无需进一步纯化即可使用。MS(m/z):C29H40FNO9的[M+H]计算值, 566.27;实验值,566.4。 [0715] 步骤4:HA和(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1': 4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸2‑(2‑氨基乙氧基)乙酯的缀合物的制备 [0716] [0717] 在100mL圆底烧瓶中,将透明质酸(161mg,0.4mmol羧酸)溶解于17.8mL的去离子水中,随后在搅拌时逐滴添加17.8mL的1,4‑二噁烷。向溶液中添加(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α, 11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑ 2‑氧代乙基)碳酸2‑(2‑氨基乙氧基)乙酯盐酸盐(96mg,0.16mmol)、N‑羟基琥珀酰亚胺(37mg,0.32mmol)和1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺(31mg,0.16mmol),从而使粘度暂时增加。用5% NaHCO3溶液将反应混合物的pH调节到6~6.5。然后在室温下搅拌反应 混合物持续24小时。将5% NaHCO3溶液(2mL)添加到反应混合物中,在搅拌1小时之后,添加 1M HCl溶液(1mL)。然后将NaCl(293mg,5mmol)添加到反应混合物中,将所述反应混合物搅拌1小时,并且随后在‑10℃下搅拌时逐滴添加无水醇(250mL)。将混合物过滤。收集滤饼,用无水醇洗涤,并且在真空中干燥,以得到呈白色固体的标题化合物。(透明质酸钠MW 500KDa 1 0.13g,产率:51%,DSR=8%);H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.63–7.50(m,0.08H),6.52–6.43(m,0.08H),6.33–6.21(m,0.08H),5.40–5.28(m,0.08H),5.17–4.94(m,0.16H),4.73–4.34(m,2.16H),4.19–2.98(m,10.48H),2.85–2.42(m,0.32H),2.33–1.65(m,3.16H),1.64–1.42(m,0.88H),1.35–1.24(m,0.24H),1.02–0.87(m,0.24H)。 [0718] 实施例33 [0719] HA和(S)‑2‑氨基‑3‑(4‑(((2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)苯基)丙酸甲酯的缀合物的制备 [0720] [0721] 步骤1:(S)‑2‑((叔丁氧基羰基)氨基)‑3‑(4‑(((2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12, 12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)苯基)丙酸甲酯的制备 [0722] [0723] 在N2下向9α‑氟‑11β,16α,17,21‑四羟基‑1,4‑孕二烯‑3,20‑二酮(694mg,1.6mmol)和碳酸双(4‑硝基苯基)酯(730mg,2.4mmol)于二氯甲烷(20mL)中的混合物中添加三乙胺(0.7mL,5mmol),将反应混合物加热至回流持续18小时。然后添加(叔丁氧基羰基)‑L‑酪氨酸甲酯(590mg,2mmol),并且在室温下将所得混合物搅拌7小时。将溶液用DCM稀释,并且用饱和NaHCO3溶液、水和饱和盐水溶液洗涤。将有机层经硫酸钠干燥,过滤并且然后在减压下浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物以得到标题产物(0.4g,产率:33%);MS(m/z): + 1 C40H50FNO12的[M+H]计算值,756.33;实验值,700.3(M+H‑56)。H NMR(400MHz,氯仿‑d)δ 7.23–7.09(m,5H),6.34(dd,J=10.1,1.9Hz,1H),6.13(t,J=1.7Hz,1H),5.11(d,J= 17.6Hz,1H),5.02(d,J=4.9Hz,2H),4.91(d,J=17.6Hz,1H),4.63–4.52(m,1H),4.45–4.35(m,1H),3.73(s,3H),3.20–2.95(m,2H),2.69–2.56(m,1H),2.55–2.30(m,3H),2.20–2.07(m,2H),1.93–1.82(m,1H),1.75–1.56(m,4H),1.54(s,3H),1.47–1.36(m,12H),1.23(s, 3H),0.95(s,3H)。 [0724] 步骤2:(S)‑2‑氨基‑3‑(4‑(((2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)苯基)丙酸甲酯的制备 [0725] [0726] 在冰浴下向(S)‑2‑((叔丁氧基羰基)氨基)‑3‑(4‑(((2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)苯基)丙酸甲酯(378mg,0.5mmol)于EtOAc(15mL)中的搅拌溶液中 缓慢添加含4M HCl的乙酸乙酯(3mL)。使反应混合物冷却到室温,并且然后在室温下搅拌20小时。将溶液用EtOAc稀释,并且在减压下浓缩以提供呈白色固体的标题化合物(0.34g,产+ 率:98%),所述标题化合物无需进一步纯化即可使用。MS(m/z):C35H42FNO10的[M+H]计算值,656.28;实验值,656.3。 [0727] 步骤3:HA和(S)‑2‑氨基‑3‑(4‑(((2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)苯基)丙酸甲酯的缀合物的制备 [0728] [0729] 在100mL圆底烧瓶中,将透明质酸(201mg,0.5mmol羧酸)溶解于22.5mL的去离子水中,随后在搅拌时逐滴添加22.5mL的1,4‑二噁烷。向溶液中添加(S)‑2‑氨基‑3‑(4‑(((2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑ 1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)苯基)丙酸甲酯盐酸盐(138mg, 0.2mmol)、N‑羟基琥珀酰亚胺(46mg,0.4mmol)和1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺(38mg,0.2mmol),从而使粘度暂时增加。用5% NaHCO3溶液将反应混合物的pH调节到6~ 6.5。然后在室温下搅拌反应混合物持续24小时。将5% NaHCO3溶液(7.5mL)添加到反应混 合物中,在搅拌1小时之后,添加1M HCl溶液(4.3mL)。然后将NaCl(293mg,5mmol)添加到反应混合物中,将所述反应混合物搅拌1小时,并且随后在‑10℃下搅拌时逐滴添加无水醇 (300mL)。将混合物过滤。收集滤饼,用无水醇洗涤,并且在真空中干燥以得到呈白色固体的 1 标题化合物。(透明质酸钠MW 500KDa 0.19g,产率:57%,DSR=30%);H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.61–7.50(m,0.3H),7.47–7.14(m,1.2H),6.51–6.42(m,0.3H),6.32–6.20(m,0.3H), 5.51–5.34(m,0.3H),5.17–5.02(m,0.9H),4.72–4.35(m,2.3H),4.18–2.98(m,11.5H), 2.82–2.39(m,1.2H),2.30–1.64(m,4.8H),1.63–1.41(m,1.8H),1.34–1.23(m,0.9H),1.02– 0.82(m,0.9H)。 [0730] 实施例34 [0731] HA和4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0732] [0733] [0734] 步骤1:4‑((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑ 17‑基)‑2‑氧代乙酯的制备 [0735] 以与实施例2步骤1类似的方式,使用(8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑17‑(2‑羟基乙酰基)‑10,13‑二甲基‑7,8,9,10,12,13,14,15,16,17‑十氢‑3H‑环戊[a]菲‑3,11(6H)‑二酮而非9α‑氟‑11β,16α,17,21‑四羟基‑1,4‑孕二烯‑3,20‑二酮制备标题化合物,获+得了白色固体(0.274g,产率:50.4%)。MS(m/z):C30H41NO8的[M+H]计算值,544.28;实验值,+ 566.2[M+Na]。 [0736] 步骤2:4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐的制备 [0737] 以与实施例2步骤2类似的方式,使用4‑((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15, 16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯而非4‑((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑ 1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体(0.21g,产率:98%)。 + 1 MS(m/z):C25H33NO6的[M+H]计算值,444.23;实验值,444.2。H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.88(d,J=10.2Hz,1H),6.32(dd,J=10.2,2.0Hz,1H),6.24(t,J=1.6Hz,1H),5.15(d,J= 18.1Hz,1H),5.03(d,J=18.1Hz,1H),3.12(t,J=7.8Hz,2H),2.94(d,J=12.1Hz,1H), 2.72–2.64(m,3H),2.58–2.48(m,1H),2.46–2.15(m,5H),2.14–1.90(m,3H),1.83(ddd,J= 15.1,9.5,5.6Hz,1H),1.58(qd,J=12.1,5.7Hz,1H),1.48(s,3H),1.42–1.20(m,2H),0.69 (s,3H)。 [0738] 步骤3:HA和4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0739] 在100mL圆底烧瓶中,将透明质酸(227mg,0.564mmol羧酸)溶解于25mL的去离子水中,随后在搅拌时逐滴添加25mL的1,4‑二噁烷。向溶液中添加4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R, 13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16, 17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐(100mg,0.226mmol)、N‑羟基琥珀酰亚胺(452mg,0.451mmol)和1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺(45mg,0.226mmol),从而使粘度暂时增加。用5% NaHCO3溶液将反应混合物的pH调节到6~6.5。然后在室温下搅 拌反应混合物持续24小时。将5% NaHCO3溶液(2mL)添加到反应混合物中,在搅拌1小时之 后,添加1M HCl溶液(1mL)。然后将NaCl(340mg)添加到反应混合物中,将所述反应混合物搅拌1小时,并且随后在‑10℃下搅拌时逐滴添加无水醇(300mL)。将混合物过滤。收集滤饼,用无水醇洗涤,并且在真空中干燥以得到呈白色固体的标题化合物。(透明质酸钠MW 500KDa 1 0.255g,产率:83.9%,DSR=17%)。H NMR(400MHz,D2O)δ7.89(d,J=9.8Hz,0.17H),6.32(d,J=10.1Hz,0.17H),6.23(s,0.17H),5.20–4.91(m,0.34H),4.68–4.33(m,2H),4.27– 3.05(m,10H),2.95–2.83(m,0.34H),2.72–2.14(m,1.7H),2.13–1.67(m,3.68H),1.66–1.26(m,1.02H),0.69(s,0.51H)。 [0740] 经此步骤,透明质酸钠(MW 50KDa)的反应提供了对应的产物(0.251g,产率:1 82.6%,DSR=20%)。H NMR(400MHz,D2O)δ7.89(d,J=9.7Hz,0.2H),6.31(d,J=10.0Hz, 0.2H),6.20(s,0.2H),5.07(dd,J=46.2,18.0Hz,0.4H),4.68–4.33(m,2H),4.22–3.10(m, 10H),2.93(d,J=11.5Hz,0.4H),2.73–2.13(m,2H),2.12–1.65(m,3.8H),1.64–1.24(m, 1.2H),0.68(s,0.6H)。 [0741] 实施例35 [0742] CS和4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0743] [0744] 以与实施例34步骤3类似的方式,使用CS(硫酸软骨素)而非HA(透明质酸)制备标1 题化合物,获得了白色固体(0.238g,产率:70%,DSR=32%)。H NMR(400MHz,D2O)δ7.89(d,J=9.6Hz,0.32H),6.31(d,J=10.1Hz,0.32H),6.23(s,0.32H),5.10(dd,J=34.0,21.8Hz, 0.64H),4.69–4.38(m,2H),4.31–3.13(m,10H),3.04–2.82(m,0.64H),2.77–2.14(m,3.2H), 2.13–1.75(m,4.28H),1.70–1.15(m,1.92H),0.68(d,J=8.5Hz,0.96H)。 [0745] 实施例36 [0746] HA和4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0747] [0748] 步骤1:4‑((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的制备 [0749] 以与实施例2步骤1类似的方式,使用(8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑17‑(2‑羟基乙酰基)‑10,13‑二甲基‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑3‑酮而非9α‑氟‑11β,16α,17,21‑四羟基‑1,4‑孕二烯‑3,20‑二酮制备标题化合+物,获得了白色固体(0.283g,产率:78.6%)。MS(m/z):C30H43NO8的[M+H]计算值,546.30;实+ 验值,568.2[M+Na]。 [0750] 步骤2:4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐的制备 [0751] 以与实施例2步骤2类似的方式,使用4‑((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14, 15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯而非4‑((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸 2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1, 3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体(0.22g,产率: + 1 99%)。MS(m/z):C25H35NO6的[M+H]计算值,446.25;实验值,446.2。H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.60(d,J=10.0Hz,1H),6.39(dd,J=10.0,1.9Hz,1H),6.16(s,1H),5.19(d,J=18.0Hz, 1H),5.06(d,J=18.0Hz,1H),4.54(d,J=3.5Hz,1H),3.12(q,J=6.3,4.9Hz,2H),2.72– 2.55(m,4H),2.46(d,J=12.2Hz,1H),2.21(d,J=10.5Hz,1H),2.10–1.96(m,3H),1.83(d,J =13.5Hz,2H),1.73–1.52(m,3H),1.46(s,3H),1.38–1.29(m,1H),1.17–1.12(m,2H),0.90(s,3H)。 [0752] 步骤3:HA和4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑ 2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0753] 以与实施例34步骤3类似的方式,使用4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑ 3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯而非4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体。(透明质酸钠MW 500KDa 1 0.204g,产率:67%,DSR=18%);H NMR(400MHz,D2O)δ7.61(d,J=10.0Hz,0.18H),6.39(d,J=10.6Hz,0.18H),6.17(s,0.18H),5.20–4.96(m,0.36H),4.69–4.35(m,2.18H),4.06– 2.97(m,10.36H),2.76–2.41(m,0.9H),2.25–1.82(m,4.26H),1.73–1.40(m,1.08H),1.26– 1.10(m,0.36H),0.91(s,0.54H)。 [0754] 经此步骤,透明质酸钠(MW 50KDa)的反应提供了对应的产物(0.224g,产率:1 73.6%,DSR=23%)。H NMR(400MHz,D2O)δ7.61(d,J=10.1Hz,0.23H),6.39(d,J=10.1Hz, 0.23H),6.16(s,0.23H),5.21–4.95(m,0.46H),4.68–4.43(m,2.23H),4.15–3.13(m, 10.46H),2.72–2.39(m,1.15H),2.31–1.77(m,4.61H),1.72–1.43(m,1.38H),1.26–1.10(m, 0.46H),0.91(s,0.69H)。 [0755] 实施例37 [0756] CS和4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0757] [0758] 以与实施例36步骤3类似的方式,使用CS(硫酸软骨素)而非HA(透明质酸)制备标1 题化合物,获得了白色固体(0.232g,产率:68.5%,DSR=34%)。H NMR(400MHz,D2O)δ7.68– 7.57(m,0.34H),6.41–6.34(m,0.34H),6.16(s,0.34H),5.24–4.95(m,0.68H),4.68–4.43 (m,2.34H),4.27–3.18(m,10.68H),2.70–2.41(m,1.7H),2.24–1.82(m,5.38H),1.71–1.41(m,2.04H),1.22–1.15(m,0.68H),0.91(s,1.02H)。 [0759] 实施例38 [0760] HA和4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0761] [0762] 步骤1:4‑((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的制备 [0763] 以与实施例2步骤1类似的方式,使用(8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑17‑(2‑羟基乙酰基)‑10,13‑二甲基‑1,2,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑3H‑环戊[a]菲‑3‑酮而非9α‑氟‑11β,16α,17,21‑四羟基‑1,4‑孕二烯‑3,20‑二酮制备标题+ 化合物,获得了白色固体(0.327g,产率:59.7%)。MS(m/z):C30H45NO8的[M+H] 计算值,+ 548.31;实验值,570.2[M+Na]。 [0764] 步骤2:4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐的制备 [0765] 以与实施例2步骤2类似的方式,使用4‑((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12, 13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯而非4‑((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1, 2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体(0.28g,产+ 1 率:97%)。MS(m/z):C25H37NO6的[M+H]计算值,448.26;实验值,448.2。H NMR(400MHz,D2O)δ 5.81(s,1H),5.20(d,J=18.0Hz,1H),5.07(d,J=18.0Hz,1H),4.53(d,J=2.8Hz,1H), 3.19–3.08(m,2H),2.78–2.53(m,5H),2.47–2.30(m,2H),2.22(dt,J=13.2,4.6Hz,1H), 2.19–1.81(m,8H),1.80–1.70(m,1H),1.62(ddd,J=13.9,8.5,5.5Hz,1H),1.56–1.37(m, 4H),1.21–1.10(m,2H),0.88(s,3H)。 [0766] 步骤3:HA和4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0767] 以与实施例34步骤3类似的方式,使用4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯而非4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑ 17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体。(透明质酸钠MW 500KDa 1 0.237g,产率:77.7%,DSR=28%)。H NMR(400MHz,D2O)δ5.79(s,0.28H),5.26–4.95(m, 0.56H),4.71–4.33(m,2.28H),4.12–3.06(m,10H),2.95–2.83(m,0.56H),2.70–2.28(m, 1.96H),2.26–1.56(m,6.08H),1.54–1.35(m,1.12H),1.23–1.09(m,0.56H),0.87(s, 0.84H)。 [0768] 经此步骤,透明质酸钠(MW 50KDa)的反应提供了对应的产物(0.196g,产率:1 64.3%,DSR=11%)。H NMR(400MHz,D2O)δ5.79(s,0.11H),5.11(dd,J=51.2,17.7Hz, 0.22H),4.66–4.24(m,2.11H),4.17–3.02(m,10H),2.97–2.80(m,0.22H),2.72–2.27(m, 0.77H),2.26–1.56(m,4.21H),1.54–1.37(m,0.44H),1.23–1.11(m,0.22H),0.87(s, 0.33H)。 [0769] 实施例39 [0770] CS和4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0771] [0772] 以与实施例38步骤3类似的方式,使用CS(硫酸软骨素)而非HA(透明质酸)制备标1 题化合物,获得了白色固体(0.275g,产率:81.1%,DSR=30%)。H NMR(400MHz,D2O)δ5.80(s,0.3H),5.13(dd,J=47.6,17.8Hz,0.6H),4.68–4.38(m,2.3H),4.30–3.15(m,10H), 2.97–2.88(m,0.6H),2.68–2.29(m,2.1H),2.28–1.58(m,6.3H),1.52–1.33(m,1.2H),1.29– 1.06(m,0.6H),0.87(s,0.9H)。 [0773] 实施例40 [0774] HA和4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0775] [0776] 步骤1:4‑((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的制备 [0777] 以与实施例2步骤1类似的方式,使用(8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑17‑(2‑羟基乙酰基)‑10,13‑二甲基‑1,6,7,8,9,10,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑3,11(2H)‑二酮而非9α‑氟‑11β,16α,17,21‑四羟基‑1,4‑孕二烯‑3,20‑二酮制备标题化合+ 物,获得了白色固体(0.68g,产率:89.7%)。MS(m/z):C30H43NO8的[M+H]计算值,546.30;实+ 验值,568.2[M+Na]。 [0778] 步骤2:4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐的制备 [0779] 以与实施例2步骤2类似的方式,使用4‑((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14, 15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯而非4‑((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸 2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1, 3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体(0.48g,产率: + 1 98%)。MS(m/z):C25H35NO6的[M+H] 计算值,446.25;实验值,446.2。H NMR(400MHz,D2O)δ 5.85(s,1H),5.16(d,J=18.1Hz,1H),5.03(d,J=18.1Hz,1H),3.19–3.07(m,2H),2.97(d,J =12.2Hz,1H),2.70–2.51(m,6H),2.43–2.25(m,5H),2.22–1.94(m,5H),1.87–1.66(m,2H), 1.56(ddd,J=18.5,12.2,6.1Hz,1H),1.51–1.32(m,4H),0.66(s,3H)。 [0780] 步骤3:HA和4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0781] 以与实施例34步骤3类似的方式,使用4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑ 1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯而非4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体。(透明质酸钠MW 500KDa 1 0.243g,产率:79.8%,DSR=12%)。HNMR(400MHz,D2O)δ5.84(s,0.12H),5.19–4.98(m, 0.24H),4.64–4.35(m,2H),4.09–2.98(m,10.24H),2.92–2.85(m,0.12H),2.73–2.27(m, 1.32H),2.26–1.49(m,3.96H),1.48–1.25(m,0.48H),0.64(s,0.36H)。 [0782] 经此步骤,透明质酸钠(MW 50KDa)的反应提供了对应的产物(0.262g,产率:1 86.1%,DSR=8%)。H NMR(400MHz,D2O)δ5.85(s,0.08H),5.18–4.95(m,0.16H),4.66–4.29(m,2H),4.23–3.13(m,10.16H),3.00–2.93(m,0.08H),2.74–2.28(m,0.88H),2.27–1.46(m, 3.64H),1.45–1.25(m,0.32H),0.65(s,0.24H)。 [0783] 实施例41 [0784] CS和4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0785] [0786] 以与实施例40步骤3类似的方式,使用CS(硫酸软骨素)而非HA(透明质酸)制备标1 题化合物,获得了白色固体(0.235g,产率:69.4%,DSR=16%)。H NMR(400MHz,D2O)δ5.77(s,0.16H),5.13–4.89(m,0.32H),4.65–4.33(m,2H),4.21–3.02(m,10.32H),2.96–2.88(m, 0.16H),2.65–2.22(m,1.76H),2.19–1.41(m,4.28H),1.40–1.25(m,0.64H),0.58(s, 0.48H)。 [0787] 实施例42 [0788] HA和4‑氨基丁酸2‑((6S,8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑6,10,13‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0789] [0790] [0791] 步骤1:4‑((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸2‑((6S,8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑6,10,13‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的制备 [0792] 以与实施例2步骤1类似的方式,使用(6S,8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑17‑(2‑羟基乙酰基)‑6,10,13‑三甲基‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑3‑酮而非9α‑氟‑11β,16α,17,21‑四羟基‑1,4‑孕二烯‑3,20‑二酮制备标+ 题化合物,获得了白色固体(0.612g,产率:81.9%)。MS(m/z):C31H45NO8的[M+H]计算值,+ 560.31;实验值,582.2[M+Na]。 [0793] 步骤2:4‑氨基丁酸2‑((6S,8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑6,10,13‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑ 2‑氧代乙酯盐酸盐的制备 [0794] 以与实施例2步骤2类似的方式,使用4‑((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸2‑((6S,8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑6,10,13‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12, 13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯而非4‑((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1, 2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体(0.52g,产+ 1 率:97.8%)。MS(m/z):C26H37NO6的[M+H] 计算值,460.26;实验值,460.2。H NMR(400MHz,DMSO)δ7.57(d,J=10.0Hz,1H),6.37(d,J=10.1Hz,1H),6.14–6.01(m,1H),5.24–5.11(m, 1H),5.03(d,J=17.9Hz,1H),4.54–4.38(m,1H),3.16–3.04(m,2H),2.78–2.54(m,4H), 2.28–1.92(m,5H),1.86–1.38(m,8H),1.13(d,J=5.6Hz,3H),1.02–0.71(m,5H)。 [0795] 步骤3:HA和4‑氨基丁酸2‑((6S,8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑6,10,13‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0796] 以与实施例34步骤3类似的方式,使用4‑氨基丁酸2‑((6S,8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑6,10,13‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯而非4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S, 17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑ 3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体。(透明质酸钠MW 1 500KDa 0.28g,产率:91%,DSR=22%)。H NMR(400MHz,D2O)δ7.67–7.55(m,0.22H),6.46– 6.32(m,0.22H),6.14–6.08(m,0.22H),5.21–5.00(m,0.44H),4.65–4.24(m,2.22H),4.10– 3.05(m,10.44H),2.85–2.44(m,0.88H),2.34–1.75(m,4.54H),1.71–1.39(m,1.32H),1.21– 1.09(m,0.66H),0.98–0.81(m,1.1H)。 [0797] 经此步骤,透明质酸钠(MW 50KDa)的反应提供了对应的产物(0.277g,产率:90%,1 DSR=26%)。H NMR(400MHz,D2O)δ7.67–7.56(m,0.26H),6.44–6.35(m,0.26H),6.15–6.08(m,0.26H),5.17–4.97(m,0.52H),4.65–4.40(m,2.26H),4.16–3.12(m,10.52H),2.86–2.39(m,1.04H),2.35–1.72(m,4.82H),1.71–1.38(m,1.56H),1.20–1.08(m,0.78H),0.98–0.81(s,1.3H)。 [0798] 实施例43 [0799] CS和4‑氨基丁酸2‑((6S,8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑6,10,13‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0800] [0801] 以与实施例42步骤3类似的方式,使用CS(硫酸软骨素)而非HA(透明质酸)制备标1 题化合物,获得了白色固体(0.27g,产率:79%,DSR=32%)。H NMR(400MHz,D2O)δ7.66– 7.54(m,0.32H),6.45–6.34(m,0.32H),6.15–6.06(m,0.32H),5.22–4.96(m,0.64H),4.67– 4.41(m,2.32H),4.32–3.13(m,10.64H),2.83–2.41(m,1.28H),2.33–1.70(m,5.24H),1.68– 1.32(m,1.92H),1.19–1.06(m,0.96H),0.98–0.80(m,1.6H)。 [0802] 实施例44 [0803] HA和4‑氨基丁酸2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑ 17‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0804] [0805] 步骤1:4‑((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的制备 [0806] 以与实施例2步骤1类似的方式,使用(8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑17‑(2‑羟基乙酰基)‑10,13,16‑三甲基‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16, 17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑3‑酮而非9α‑氟‑11β,16α,17,21‑四羟基‑1,4‑孕二烯‑3,20‑二+ 酮制备标题化合物,获得了白色固体(0.61g,产率:82.8%)。MS(m/z):C31H44FNO8的[M+H]计+ 算值,578.31;实验值,600.2[M+Na]。 [0807] 步骤2:4‑氨基丁酸2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑ 17‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐的制备 [0808] 以与实施例2步骤2类似的方式,使用4‑((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10, 11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯而非4‑((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体+ 1 (0.52g,产率:98.9%)。MS(m/z):C26H36FNO6的[M+H]计算值,478.25;实验值,478.2。H NMR(400MHz,D2O)δ7.55(d,J=10.1Hz,1H),6.45(dd,J=10.2,2.0Hz,1H),6.26(s,1H),5.10 (s,2H),4.48–4.30(m,1H),3.12(t,J=7.7Hz,2H),2.90–2.43(m,5H),2.29–1.91(m,7H), 1.58(s,4H),1.34–1.17(m,2H),1.12(d,J=7.3Hz,3H),1.02(s,3H)。 [0809] 步骤3:HA和4‑氨基丁酸2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0810] 以与实施例34步骤3类似的方式,使用4‑氨基丁酸2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15, 16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯而非4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,13S, 14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体。(透明质酸钠 1 MW 500KDa 0.251g,产率:80.5%,DSR=22%)。H NMR(400MHz,D2O)δ7.56(d,J=9.8Hz, 0.22H),6.45(d,J=9.8Hz,0.22H),6.25(s,0.22H),5.08(s,0.44H),4.66–4.29(m,2.22H), 4.17–3.03(m,10.44H),2.95–2.35(m,1.1H),2.31–1.73(m,4.54H),1.72–1.44(m,0.88H), 1.33–1.27(m,0.44H),1.11(d,J=7.0Hz,0.66H),1.03(s,0.66H)。 [0811] 经此步骤,透明质酸钠(MW 50KDa)的反应提供了对应的产物(0.262g,产率:1 84.1%,DSR=15%)。H NMR(400MHz,D2O)δ7.57(d,J=9.9Hz,0.15H),6.45(d,J=10.0Hz, 0.15H),6.25(s,0.15H),5.13(s,0.3H),4.65–4.21(m,2.15H),4.19–3.06(m,10.3H),3.01– 2.43(m,0.75H),2.37–1.74(m,4.05H),1.72–1.44(m,0.6H),1.27–1.19(m,0.3H),1.12(d,J=7.1Hz,0.45H),1.03(s,0.45H)。 [0812] 实施例45 [0813] CS和4‑氨基丁酸2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑ 17‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0814] [0815] 以与实施例44步骤3类似的方式,使用CS(硫酸软骨素)而非HA(透明质酸)制备标1 题化合物,获得了白色固体(0.223g,产率:64.5%,DSR=25%)。H NMR(400MHz,D2O)δ7.57(d,J=9.8Hz,0.25H),6.45(d,J=9.9Hz,0.25H),6.25(s,0.25H),5.08(s,0.5H),4.68– 4.35(m,2.25H),4.32–3.16(m,10.5H),3.00–2.42(m,1.25H),2.38–1.80(m,4.75H),1.74– 1.47(m,1H),1.32–1.17(m,0.5H),1.12(d,J=6.5Hz,0.75H),1.02(s,0.75H)。 [0816] 实施例46 [0817] HA和4‑氨基丁酸2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16S,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑ 17‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0818] [0819] 步骤1:4‑((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16S,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的制备 [0820] 以与实施例2步骤1类似的方式,使用(8S,9R,10S,11S,13S,14S,16S,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑17‑(2‑羟基乙酰基)‑10,13,16‑三甲基‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16, 17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑3‑酮而非9α‑氟‑11β,16α,17,21‑四羟基‑1,4‑孕二烯‑3,20‑二+ 酮制备标题化合物,获得了白色固体(0.37g,产率:94.2%)。MS(m/z):C31H44FNO8的[M+H]计+ 算值,578.31;实验值,600.2[M+Na]。 [0821] 步骤2:4‑氨基丁酸2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16S,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑ 17‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐的制备 [0822] 以与实施例2步骤2类似的方式,使用4‑((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16S,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10, 11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯而非4‑((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体+ 1 (0.29g,产率:95.7%)。MS(m/z):C26H36FNO6的[M+H]计算值,478.25;实验值,478.2。H NMR(400MHz,D2O)δ7.56(d,J=10.1Hz,1H),6.46(dd,J=10.1,1.4Hz,1H),6.26(s,1H),5.17– 5.02(m,2H),4.43(d,J=9.6Hz,1H),3.19–3.04(m,2H),2.82–2.42(m,5H),2.37–1.96(m, 5H),1.95–1.71(m,2H),1.70–1.44(m,4H),1.29(d,J=6.6Hz,2H),1.01(s,3H),0.91(d,J= 7.2Hz,3H)。 [0823] 步骤3:HA和4‑氨基丁酸2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16S,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0824] 以与实施例34步骤3类似的方式,使用4‑氨基丁酸2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16S,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15, 16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯而非4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,13S, 14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体。(透明质酸钠 1 MW 500KDa 0.238g,产率:76.3%,DSR=22%)。H NMR(400MHz,D2O)δ7.57(d,J=9.8Hz, 0.22H),6.45(d,J=10.1Hz,0.22H),6.25(s,0.22H),5.09(dd,J=32.2,17.9Hz,0.44H), 4.65–4.21(m,2.22H),4.20–2.82(m,10.44H),2.58(m,1.1H),2.37–1.67(m,4.54H),1.64– 1.40(m,0.88H),1.35–1.21(m,0.44H),1.01(s,0.66H),0.90(d,J=7.0Hz,0.66H)。 [0825] 经此步骤,透明质酸钠(MW 50KDa)的反应提供了对应的产物(0.224g,产率:1 71.9%,DSR=12%)。H NMR(400MHz,D2O)δ7.57(d,J=10.0Hz,0.12H),6.45(d,J=9.8Hz, 0.12H),6.25(s,0.12H),5.08(q,J=18.0Hz,0.24H),4.68–4.25(m,2.12H),4.22–2.86(m, 10.24H),2.85–2.39(m,0.6H),2.38–1.68(m,3.84H),1.65–1.41(m,0.48H),1.37–1.24(m, 0.24H),1.01(s,0.36H),0.90(d,J=7.0Hz,0.36H)。 [0826] 实施例47 [0827] CS和4‑氨基丁酸2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16S,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑ 17‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0828] [0829] 以与实施例46步骤3类似的方式,使用CS(硫酸软骨素)而非HA(透明质酸)制备标1 题化合物,获得了白色固体(0.243g,产率:70.3%,DSR=29%)。H NMR(400MHz,D2O)δ7.58(d,J=9.9Hz,0.29H),6.45(d,J=9.6Hz,0.29H),6.25(s,0.29H),5.09(dd,J=33.2, 22.1Hz,0.58H),4.68–4.34(m,2.29H),4.32–2.84(m,10.58H),2.83–2.36(m,1.45H),2.35– 1.66(m,5.03H),1.65–1.38(m,1.16H),1.34–1.12(m,0.58H),1.01(s,0.87H),0.90(d,J= 6.5Hz,0.87H)。 [0830] 实施例48 [0831] HA和7‑氮杂螺[3.5]壬烷‑2‑甲酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0832] [0833] [0834] 步骤1:2‑(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1': 4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)7‑氮杂螺[3.5]壬烷‑2,7‑二甲酸7‑(叔丁基)酯的制备 [0835] 以与实施例1步骤1类似的方式,使用7‑(叔丁氧基羰基)‑7‑氮杂螺[3.5]壬烷‑2‑甲酸而非(叔丁氧基羰基)甘氨酸制备标题化合物,获得了白色固体(0.525g,产率:97%)。+ + 1 MS(m/z):C38H52FNO9的[M+H]计算值,686.36;实验值,708.3[M+Na]。H NMR(400MHz,DMSO)δ 7.32(d,J=10.1Hz,1H),6.24(dd,J=10.1,1.8Hz,1H),6.06–5.88(m,2H),5.53(d,J= 4.0Hz,1H),5.15(d,J=17.9Hz,1H),4.86(d,J=4.7Hz,1H),4.76(d,J=17.9Hz,1H),4.20 (s,1H),3.08–2.90(m,4H),2.69–2.57(m,1H),2.49–2.29(m,4.3Hz,2H),2.16–1.79(m,7H), 1.77–1.64(m,3H),1.63–1.47(m,5H),1.46–1.28(m,15H),1.19–1.08(m,3H),0.90–0.75(m, 3H)。 [0836] 步骤2:7‑氮杂螺[3.5]壬烷‑2‑甲酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐的制备 [0837] 以与实施例1步骤1类似的方式,使用2‑(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)7‑氮杂螺[3.5]壬烷‑2,7‑二甲酸7‑(叔丁基)酯而非(叔丁氧基羰基)甘氨酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体(0.28g,产率:97%)。MS(m/z):C33H44FNO7+ 的[M+H]计算值,586.31;实验值,586.3。 [0838] 步骤3:HA和7‑氮杂螺[3.5]壬烷‑2‑甲酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0839] 以与实施例34步骤3类似的方式,使用7‑氮杂螺[3.5]壬烷‑2‑二甲酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯而非4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑ 2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体(透明质酸钠MW 500KDa 0.358g,产率: 1 48.7%,DSR=9%)。H NMR(400MHz,D2O)δ7.58–7.51(m,0.09H),6.49–6.41(m,0.09H),6.26(s,0.09H),5.36–4.85(m,0.36H),4.70–4.29(m,2.09H),4.28–3.05(m,10.36H),3.04–2.32(m,0.27H),2.31–1.65(m,4.08H),1.64–1.43(m,0.81H),1.28(s,0.27H),0.93(s,0.27H)。 [0840] 实施例49 [0841] CS和7‑氮杂螺[3.5]壬烷‑2‑甲酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0842] [0843] 以与实施例48步骤3类似的方式,使用CS(硫酸软骨素)而非HA(透明质酸)制备标1 题化合物,获得了白色固体(0.18g,产率:62.9%,DSR=20%)。H NMR(400MHz,D2O)δ7.63– 7.50(m,0.2H),6.47–6.40(m,0.2H),6.33–6.23(m,0.2H),5.21–4.87(m,0.8H),4.69–4.39(m,2.2H),4.38–3.02(m,10.8H),3.00–2.30(m,0.6H),2.29–1.67(m,5.4H),1.66–1.44(m, 1.8H),1.29(s,0.6H),0.94(s,0.6H)。 [0844] 实施例50 [0845] HA和14‑氨基‑3,6,9,12‑四氧杂十四烷酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0846] [0847] 步骤1:2,2‑二甲基‑4‑氧代‑3,8,11,14,17‑五氧杂‑5‑氮杂十九烷‑19‑酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的制备 [0848] 以与实施例1步骤1类似的方式,使用2,2‑二甲基‑4‑氧代‑3,8,11,14,17‑五氧杂‑5‑氮杂十九烷‑19‑酸而非(叔丁氧基羰基)甘氨酸制备标题化合物,获得了白色固体(1.1g,+ + 产率:95.9%)。MS(m/z):C39H58FNO13的[M+H]计算值,768.39;实验值,790.3[M+Na]。 [0849] 步骤2:14‑氨基‑3,6,9,12‑四氧杂十九烷酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐的制备 [0850] 以与实施例1步骤1类似的方式,使用2,2‑二甲基‑4‑氧代‑3,8,11,14,17‑五氧杂‑5‑氮杂十九烷‑19‑酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α, 10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1': 4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯而非(叔丁氧基羰基)甘氨酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑ 1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体(0.6g,产率: + 1 98.6%)。MS(m/z):C34H50FNO11的[M+H] 计算值,668.34;实验值,668.3。H NMR(400MHz,DMSO)δ7.91(s,4H),7.34(d,J=10.1Hz,1H),6.24(dd,J=10.1,1.7Hz,1H),6.02(s,1H), 5.58(d,J=4.5Hz,1H),5.23(d,J=17.9Hz,1H),5.00–4.73(m,2H),4.35–4.20(m,3H), 3.73–3.58(m,14H),3.09–2.92(m,2H),2.64(td,J=13.6,5.8Hz,1H),2.47–2.30(m,2H), 2.05(d,J=13.5Hz,1H),2.01–1.88(m,1H),1.87–1.78(m,1H),1.72(d,J=13.2Hz,1H), 1.66–1.45(m,5H),1.42–1.29(m,4H),1.21–1.11(m,3H),0.85(d,J=8.4Hz,3H)。 [0851] 步骤3:HA和14‑氨基‑3,6,9,12‑四氧杂十四烷酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12, 12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0852] 以与实施例34步骤3类似的方式,使用14‑氨基‑3,6,9,12‑四氧杂十四烷酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯而非4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑ 10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑ 17‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体。(透明质酸钠MW 500KDa 0.235g,产 1 率:93.6%,DSR=18%)。H NMR(400MHz,D2O)δ7.62–7.52(m,0.18H),6.53–6.43(m,0.18H), 6.27(s,0.18H),5.42–5.27(m,0.18H),5.19–4.90(m,0.36H),4.72–4.31(m,2.54H),4.30– 3.05(m,12.88H),3.04–2.28(m,0.54H),2.27–1.65(m,3.72H),1.64–1.44(m,1.62H),1.26(s,0.54H),0.93(s,0.54H)。 [0853] 实施例51 [0854] CS和14‑氨基‑3,6,9,12‑四氧杂十四烷酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0855] [0856] 以与实施例50步骤3类似的方式,使用CS(硫酸软骨素)而非HA(透明质酸)制备标1 题化合物,获得了白色固体(0.268g,产率:97.8%,DSR=38%)。H NMR(400MHz,D2O)δ7.62– 7.52(m,0.38H),6.53–6.42(m,0.38H),6.26(s,0.38H),5.41–5.28(m,0.38H),5.20–4.91 (m,0.76H),4.75–4.37(m,3.14H),4.35–3.00(m,16.08H),2.98–2.28(m,1.14H),2.27–1.67(m,4.52H),1.66–1.44(m,3.42H),1.26(s,1.14H),0.92(s,1.14H)。 [0857] 实施例52 [0858] HA和(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸2‑氨基丙酯的缀合物的制备[0859] [0860] 步骤1:1H‑咪唑‑1‑甲酸2‑((叔丁氧基羰基)氨基)丙酯的制备 [0861] 以与实施例20步骤1类似的方式,使用(1‑羟基丙‑2‑基)氨基甲酸叔丁酯而非(2‑羟基丙基)氨基甲酸叔丁酯制备标题化合物,获得了白色固体(0.716g,产率:88.7%)。MS+(m/z):C12H19N3O4的[M+H]计算值,270.34;实验值,270.2。 [0862] 步骤2:(1‑(((2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',β1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)丙‑2‑基)氨基甲酸叔丁酯的制备 [0863] 以与实施例20步骤2类似的方式,使用1H‑咪唑‑1‑甲酸2‑((叔丁氧基羰基)氨基)丙酯而非1H‑咪唑‑1‑甲酸1‑((叔丁氧基羰基)氨基)丙‑2‑基酯制备标题化合物,获得了白+ +色固体(0.58g,产率:39.7%)。C33H46FNO10的[M+H]计算值,636.31;实验值,658.3[M+Na]。 [0864] 步骤3:(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸2‑氨基丙酯盐酸盐的制备[0865] 以与实施例20步骤3类似的方式,使用(1‑(((2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α, 12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',β1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)丙‑2‑基)氨基甲酸叔丁酯而非(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸 1‑氨基丙‑2‑基酯制备标题化合物,获得了白色固体(0.5g,产率:98%)。MS(m/z):C28H38FNO8+ 1 的[M+H]计算值,536.26;实验值,536.1。H NMR(400MHz,DMSO)δ8.19(s,2H),7.38(d,J= 10.1Hz,1H),6.30(dd,J=10.1,1.4Hz,1H),6.08(s,1H),5.61(s,1H),5.30(dd,J=18.0, 3.4Hz,1H),4.94(d,J=4.5Hz,1H),4.87(dd,J=18.1,2.3Hz,1H),4.29(dt,J=17.4, 9.6Hz,3H),3.59(d,J=4.6Hz,1H),2.76–2.64(m,1H),2.62–2.45(m,1H),2.40(d,J= 9.6Hz,1H),2.14–1.95(m,2H),1.92–1.82(m,1H),1.76(d,J=13.1Hz,1H),1.70–1.48(m, 5H),1.42(s,3H),1.30(t,J=8.8Hz,4H),1.23–1.17(m,3H),0.91(d,J=7.7Hz,3H)。 [0866] 步骤4:HA和(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1': 4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸2‑氨基丙酯的缀合物的制备 [0867] 以与实施例34步骤3类似的方式,使用(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸2‑氨基丙酯而非4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体(透明质酸钠MW 500KDa 0.206g,产率:67.1%,DSR= 1 15%)。H NMR(400MHz,氧化氘)δ7.65–7.51(m,0.15H),6.57–6.43(m,0.15H),6.38–6.34(m,0.15H),5.48–5.27(m,0.15H),5.20–4.97(m,0.3H),4.76–4.31(m,2.45H),4.30–3.06(m,10.15H),3.01–2.47(m,0.45H),2.41–1.70(m,3.6H),1.69–1.39(m,1.2H),1.38–1.14(m,1.05H),1.10–0.87(m,0.45H)。 [0868] 实施例53 [0869] CS(硫酸软骨素)和(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸2‑氨基丙酯的缀合物的制备 [0870] [0871] 以与实施例52步骤4类似的方式,使用CS(硫酸软骨素)而非HA(透明质酸)制备标1 题化合物,获得了白色固体(0.188g,产率:61.4%,DSR=25%)。H NMR(400MHz,氧化氘)δ 7.65–7.51(m,0.25H),6.53–6.41(m,0.25H),6.31–6.19(m,0.25H),5.43–5.20(m,0.25H), 5.16–4.91(m,0.5H),4.75–4.41(m,2.75H),4.38–3.20(m,10.25H),3.02–2.47(m,0.75H), 2.29–1.64(m,4H),1.63–1.39(m,2H),1.38–1.17(m,1.75H),1.02–0.87(m,0.75H)。 [0872] 实施例54 [0873] HA和(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸2‑(2‑(2‑(2‑氨基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙酯的缀合物的制备 [0874] [0875] [0876] 步骤1:1H‑咪唑‑1‑甲酸2,2‑二甲基‑4‑氧代‑3,8,11,14‑四氧杂‑5‑氮杂十六烷‑16‑基酯的制备 [0877] 以与实施例20步骤1类似的方式,使用(2‑(2‑(2‑(2‑羟基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯而非(2‑羟基丙基)氨基甲酸叔丁酯制备标题化合物,获得了白色固体(1g,产率:98%)。MS(m/z):C17H29N3O7的[M+H]+计算值,388.20;实验值,388.2。 [0878] 步骤2:(1‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑1,4‑二氧代‑3,5,8,11,14‑五氧杂十六烷‑16‑基)氨基甲酸叔丁酯的制备 [0879] 以与实施例20步骤2类似的方式,使用1H‑咪唑‑1‑甲酸2,2‑二甲基‑4‑氧代‑3,8,11,14‑四氧杂‑5‑氮杂十六烷‑16‑基酯而非1H‑咪唑‑1‑甲酸1‑((叔丁氧基羰基)氨基)丙‑+ 2‑基酯制备标题化合物,获得了白色固体(0.48g,产率:92.3%)。C38H56FNO13的[M+H]计算+ 值,754.37;实验值,776.3[M+Na]。 [0880] 步骤3:(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸2‑(2‑(2‑(2‑氨基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙酯盐酸盐的制备 [0881] 以与实施例20步骤3类似的方式,使用(1‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑1,4‑二氧代‑3,5,8,11,14‑五氧杂十六烷‑16‑基)氨基甲酸叔丁酯而非(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α, 12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸1‑氨基丙‑2‑基酯制备标题化合物,获得了白色固体(0.4g,产率:96%)。MS(m/z): + 1 C33H48FNO11的[M+H] 计算值,654.32;实验值,654.2。H NMR(400MHz,DMSO)δ7.90(s,4H), 7.32(d,J=9.6Hz,1H),6.23(d,J=9.9Hz,1H),6.01(s,1H),5.56(d,J=4.2Hz,1H),5.18 (d,J=18.0Hz,1H),4.87(t,J=6.3Hz,1H),4.75(d,J=18.2Hz,1H),4.30–4.07(m,3H), 3.76–3.45(m,12H),2.92(d,J=28.1Hz,2H),2.62(s,1H),2.30(d,J=38.0Hz,2H),2.16– 1.86(m,2H),1.73(dd,J=33.1,16.7Hz,1H),1.64–1.43(m,3H),1.42–1.20(m,7H),1.14(s, 3H),0.87–0.72(m,3H)。 [0882] 步骤4:HA和(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1': 4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸2‑(2‑(2‑(2‑氨基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙酯的缀合物的制备 [0883] 以与实施例34步骤3类似的方式,使用(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸2‑(2‑(2‑(2‑氨基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙酯而非4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S, 17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑ 3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体(透明质酸钠MW 1 500KDa 0.262g,产率:84.5%,DSR=7%)。H NMR(400MHz,D2O)δ7.63–7.48(m,0.07H), 6.53–6.42(m,0.07H),6.26(s,0.07H),5.40–4.98(m,0.21H),4.78–4.30(m,2.21H),4.13– 2.84(m,10.84H),2.83–2.23(m,0.35H),2.21–1.67(m,3.42H),1.66–1.42(m,0.49H),1.27(s,0.21H),0.94(s,0.21H)。 [0884] 实施例55 [0885] CS和(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸2‑(2‑(2‑(2‑氨基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙酯的缀合物的制备 [0886] [0887] 以与实施例54步骤3类似的方式,使用CS(硫酸软骨素)而非HA(透明质酸)制备标1 题化合物,获得了白色固体(0.252g,产率:77.3%,DSR=17%)。H NMR(400MHz,D2O)δ7.64– 7.49(m,0.17H),6.54–6.42(m,0.17H),6.27(s,0.17H),5.40–4.98(m,0.51H),4.77–4.33 (m,2.51H),4.31–3.02(m,12.04H),3.01–2.23(m,0.85H),2.21–1.67(m,4.02H),1.66–1.42(m,1.19H),1.29(s,0.51H),0.95(s,0.51H)。 [0888] 实施例56 [0889] HA和哌嗪‑1‑甲酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0890] [0891] 步骤1:4‑(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1': 4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)哌嗪‑1,4‑二甲酸1‑(叔丁基)酯的制备 [0892] 以与实施例4步骤1类似的方式,使用哌嗪‑1‑甲酸叔丁酯而非(4‑氨基丁基)氨基甲酸叔丁酯制备标题化合物,获得了白色固体(0.44g,产率:98.6%)。MS(m/z):C34H47FN2O9+ + 1的[M+H] 计算值,647.33;实验值,669.1[M+Na] 。H NMR(400MHz,DMSO)δ7.28(d,J= 10.1Hz,1H),6.23(dd,J=10.1,1.7Hz,1H),6.01(s,1H),5.47(d,J=4.2Hz,1H),5.11(d,J =18.1Hz,1H),4.86(t,J=9.4Hz,1H),4.73(d,J=18.1Hz,1H),4.19(s,1H),3.52–3.29(m, 8H),2.62(td,J=13.3,5.3Hz,1H),2.48–2.27(m,2H),2.03(d,J=13.5Hz,1H),1.98–1.88 (m,1H),1.87–1.76(m,1H),1.71(d,J=13.1Hz,1H),1.61–1.45(m,5H),1.44–1.20(m,13H), 1.16–1.08(m,3H),0.83(s,3H)。 [0893] 步骤2:哌嗪‑1‑甲酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐的制备 [0894] 以与实施例4步骤2类似的方式,使用4‑(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)哌嗪‑1,4‑二甲酸1‑(叔丁基)酯而非(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)丁烷‑1,4‑二基氨基甲酸叔丁酯制备标题化合物,获得了白色固体(0.218g,产率:80%)。MS(m/z):C29H39FN2O7+ 1的[M+H]计算值,547.27;实验值,547.2。H NMR(400MHz,DMSO)δ9.31(s,3H),7.38–7.27(m, 1H),6.24(dd,J=10.1,1.8Hz,1H),6.02(s,1H),5.58(d,J=4.6Hz,1H),5.15(d,J= 18.1Hz,1H),4.87(d,J=4.6Hz,1H),4.76(d,J=18.1Hz,1H),4.20(s,1H),3.65(s,4H), 3.11(s,4H),2.70–2.57(m,1H),2.49–2.39(m,2H),2.34(dd,J=13.6,3.6Hz,1H),2.10– 1.89(m,2H),1.87–1.77(m,1H),1.71(d,J=13.3Hz,1H),1.64–1.44(m,5H),1.43–1.27(m, 4H),1.24(s,3H),0.82(s,3H)。 [0895] 步骤3:HA和哌嗪‑1‑甲酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备[0896] 以与实施例34步骤3类似的方式,使用哌嗪‑1‑甲酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯而非4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体(透明质酸钠MW 500KDa 0.16g,产率:69.5%,DSR=30%)。 1 HNMR(400MHz,D2O)δ7.61–7.48(m,0.3H),6.51–6.36(m,0.3H),6.23(s,0.3H),5.39–4.88(m,0.9H),4.68–4.37(m,2.3H),4.11–3.00(m,12.4H),2.87–2.14(m,0.9H),2.13–1.62(m, 4.2H),1.60–1.31(m,2.7H),1.26(s,0.9H),0.91(s,0.9H)。 [0897] 实施例57 [0898] CS和哌嗪‑1‑甲酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0899] [0900] 以与实施例56步骤3类似的方式,使用CS(硫酸软骨素)而非HA(透明质酸)制备标1 题化合物,获得了白色固体(0.15g,产率:60%,DSR=25%)。H NMR(400MHz,D2O)δ7.61– 7.49(m,0.25H),6.50–6.42(m,0.25H),6.26(s,0.25H),5.38–4.95(m,0.75H),4.73–4.38 (m,2.25H),4.35–3.11(m,12H),3.01–2.21(m,0.75H),2.17–1.67(m,1H),1.66–1.42(m, 2.25H),1.29(s,0.75H),0.94(s,0.75H)。 [0901] 实施例58 [0902] HA和2,5‑二氮杂双环[2.2.1]庚烷‑2‑甲酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0903] [0904] 步骤1:5‑(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1': 4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)2,5‑二氮杂双环[2.2.1]庚烷‑ 2,5‑二甲酸2‑(叔丁基)酯的制备 [0905] 以与实施例4步骤1类似的方式,使用2,5‑二氮杂双环[2.2.1]庚烷‑2‑甲酸叔丁酯而非(4‑氨基丁基)氨基甲酸叔丁酯制备标题化合物,获得了白色固体(0.442g,产率:+ + 1 97.3%)。MS(m/z):C35H47FN2O9的[M+H] 计算值,659.33;实验值,681.2[M+Na] 。H NMR(400MHz,D2O)δ7.28(d,J=10.1Hz,1H),6.22(dd,J=10.1,1.8Hz,1H),6.00(s,1H),5.45 (s,1H),5.08(dd,J=32.7,18.4Hz,1H),4.93–4.60(m,2H),4.53–4.31(m,2H),4.18(s,1H), 3.49–3.36(m,1H),3.21(d,J=10.6Hz,3H),2.62(td,J=13.3,5.9Hz,1H),2.48–2.28(m, 2H),2.08–1.89(m,2H),1.84(dd,J=17.7,10.6Hz,3H),1.71(d,J=13.6Hz,1H),1.62–1.46(m,5H),1.40(s,8H),1.37–1.29(m,4H),1.22(s,1H),1.14(d,J=6.6Hz,3H),0.88–0.74(m, 3H)。 [0906] 步骤2:2,5‑二氮杂双环[2.2.1]庚烷‑2‑甲酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐的制备 [0907] 以与实施例4步骤2类似的方式,使用5‑(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)2,5‑二氮杂双环[2.2.1]庚烷‑2,5‑二甲基2‑(叔丁基)酯而非(2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12, 12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙基)丁烷‑1,4‑二基二氨基甲酸叔丁酯制备标题化合物,获得了白色固体(0.25g,产率: + 98%)。MS(m/z):C30H39FN2O7的[M+H]计算值,559.27;实验值,559.1。 [0908] 步骤3:HA和2,5‑二氮杂双环[2.2.1]庚烷‑2‑甲酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0909] 以与实施例34步骤3类似的方式,使用2,5‑二氮杂双环[2.2.1]庚烷‑2‑甲酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯而非4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑ 10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑ 17‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体。(透明质酸钠MW 500KDa 0.203g,产 1 率:70.9%,DSR=33%)。H NMR(400MHz,D2O)δ7.57–7.46(m,0.33H),6.45–6.36(m,0.33H), 6.22(s,0.33H),5.33–4.92(m,0.99H),4.71–4.30(m,2.99H),4.11–2.97(m,11.32H),2.91– 2.10(m,0.99H),2.09–1.61(m,4.98H),1.60–1.38(m,2.97H),1.24(s,0.99H),0.89(s, 0.99H)。 [0910] 实施例59 [0911] CS和2,5‑二氮杂双环[2.2.1]庚烷‑2‑甲酸2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [0912] [0913] 以与实施例58步骤3类似的方式,使用CS(硫酸软骨素)而非HA(透明质酸)制备标1 题化合物,获得了白色固体(0.236g,产率:75.3%,DSR=26%)。H NMR(400MHz,D2O)δ7.62– 7.47(m,0.26H),6.51–6.36(m,0.26H),6.26(s,0.26H),5.36–4.97(m,0.78H),4.73–4.38 (m,2.78H),4.33–3.11(m,11.04H),2.94–2.18(m,0.78H),2.17–1.65(m,4.56H),1.64–1.39(m,2.34H),1.28(s,0.78H),0.94(s,0.78H)。 [0914] 实施例60 [0915] HA和(2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸4‑氨基丁酯的缀合物的制备 [0916] [0917] 步骤1:1H‑咪唑‑1‑甲酸4‑((叔丁氧基羰基)氨基)丁酯的制备 [0918] 以与实施例20步骤1类似的方式,使用(4‑羟基丁基)氨基甲酸叔丁酯而非(2‑羟基丙基)氨基甲酸叔丁酯制备标题化合物,获得了白色固体(10g,产率:95.4%)。MS(m/z):+ C13H21N3O4的[M+H]计算值,284.15;实验值,284.2。 [0919] 步骤2:(4‑(((2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)丁基)氨基甲酸叔丁酯的制备 [0920] 在N2下向(8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑17‑(2‑羟基乙酰基)‑10,13‑二甲基‑7,8,9,10,12,13,14,15,16,17‑十氢‑3H‑环戊[a]菲‑3,11(6H)‑二酮(600mg,1.67mmol)于DMF(20mL)中的溶液中添加1H‑咪唑‑1‑甲酸4‑((叔丁氧基羰基)氨基)丁酯(569mg,2mmol)和K2CO3(1298mg,8.37mmol)。在室温下将所得混合物搅拌16小时。在室温下将反应混合物倒入水(80mL)中,过滤并且将滤饼溶解于EtOAc(50mL X 3)中。将溶液经硫酸钠干燥,过滤并且然后在减压下浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物以得到标题产物(0.8g,产率: + 1 83.5%);MS(m/z):C31H43NO9的[M+H] 计算值,574.29;实验值,474.2(M+H‑100)。H NMR(400MHz,DMSO)δ7.60(t,J=10.0Hz,1H),6.81(dd,J=19.6,14.2Hz,1H),6.12(dd,J= 10.3,1.9Hz,1H),6.03(d,J=9.5Hz,1H),5.84(s,1H),4.98(d,J=17.9Hz,1H),4.80(d,J= 17.9Hz,1H),4.21–4.00(m,2H),3.44–3.35(m,2H),3.03–2.85(m,2H),2.57(s,1H),2.42– 2.26(m,2H),2.25–2.15(m,2H),2.14–1.93(m,2H),1.85–1.72(m,1H),1.71–1.53(m,3H), 1.52–1.32(m,15H),1.31–1.17(m,1H),0.53(s,3H)。 [0921] 步骤3:(2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸4‑氨基丁酯盐酸盐的制备 [0922] 以与实施例3步骤2类似的方式,使用(4‑(((2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)丁基)氨基甲酸叔丁酯而非(4‑(((2‑((6αS,6βR,7S,8αS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑6β‑氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7, 8,8α,11α,12,12α,12b‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)丁基)氨基甲酸叔丁酯制备标题化合物,获得了白色固体+ 1 (0.66g,产率:99%)。MS(m/z):C26H35NO7的[M+H]计算值,474.24;实验值,474.2。H NMR(400MHz,DMSO)δ8.03(s,4H),7.59(t,J=9.4Hz,1H),6.11(dd,J=10.3,1.8Hz,1H),6.02 (s,2H),5.03(d,J=17.9Hz,1H),4.81(d,J=17.9Hz,1H),4.17–4.08(m,2H),2.89(t,J= 14.7Hz,1),2.85–2.72(m,3H),2.38(dd,J=20.2,9.0Hz,2H),2.19(dd,J=11.7,6.7Hz, 2H),2.11–1.96(m,3H),1.82–1.62(m,6H),1.42–1.32(m,4H),1.24(s,1H),0.52(s,3H)。 [0923] 步骤4:HA和(2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸4‑氨基丁酯的缀合物的制备 [0924] 以与实施例34步骤3类似的方式,使用(2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑ 17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸4‑氨基丁酯而非4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体。(透明质酸钠MW 500KDa 1 0.228g,产率:67.8%,DSR=7%)。H NMR(400MHz,D2O)δ7.88(d,J=10.3Hz,0.07H),6.31(d,J=9.7Hz,0.07H),6.23(s,0.07H),5.22–4.93(s,0.14H),4.78–4.30(m,2H),4.29–2.79(m,10.42H),2.77–2.13(m,0.28H),2.12–1.52(m,3.63H),1.47(s,0.21H),1.46–1.11(m, 0.14H),0.69(s,0.21H)。 [0925] 经此步骤,透明质酸钠(MW 50KDa)的反应提供了对应的产物(0.07g,产率:1 20.8%,DSR=10%)。H NMR(400MHz,D2O)δ7.89(d,J=10.1Hz,0.1H),6.30(s,0.1H),6.24(s,0.1H),5.24–4.94(m,0.2H),4.69–4.40(m,2H),4.35–2.84(m,10.6H),2.74–2.16(m, 0.4H),2.15–1.54(m,3.9H),1.48(s,0.3H),1.46–1.11(m,0.2H),0.70(s,0.3H)。 [0926] 实施例61 [0927] CS和(2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸4‑氨基丁酯的缀合物的制备 [0928] [0929] 以与实施例60步骤4类似的方式,使用CS(硫酸软骨素)而非HA(透明质酸)制备标1 题化合物,获得了白色固体(0.186g,产率:62%,DSR=10%)。H NMR(400MHz,D2O)δ7.87(s, 0.1H),6.31(d,J=10.8Hz,0.1H),6.23(s,0.1H),5.23–4.95(m,0.2H),4.70–4.41(m,2H), 4.33–3.07(m,10.6H),2.92–2.15(m,0.4H),2.14–1.51(m,3.9H),1.47(s,0.3H),1.41–0.85(m,0.2H),0.69(s,0.3H). [0930] 实施例62 [0931] HA和(2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸4‑氨基丁酯的缀合物的制备 [0932] [0933] 步骤1:(4‑(((2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)丁基)氨基甲酸叔丁酯的制备 [0934] 以与实施例60步骤2类似的方式,使用(8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑17‑(2‑羟基乙酰基)‑10,13‑二甲基‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑ 3H‑环戊[a]菲‑3‑酮而非(8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑17‑(2‑羟基乙酰基)‑10,13‑二甲基‑7,8,9,10,12,13,14,15,16,17‑十氢‑3H‑环戊[a]菲‑3,11(6H)‑二酮制备标题化合+ 物,获得了白色固体(0.8g,产率:83.4%)。MS(m/z):C31H45NO9的[M+H]计算值,576.31;实验+ 1 值,598.2[M+Na]。H NMR(400MHz,DMSO)δ7.33(d,J=10.1Hz,1H),6.83(t,J=5.5Hz,1H), 6.18(dd,J=10.1,1.6Hz,1H),5.83(s,1H),5.42(s,1H),5.08(d,J=17.7Hz,1H),4.77(dd, J=28.3,13.2Hz,2H),4.29(s,1H),4.15–3.99(m,2H),3.41–3.33(m,2H),3.03–2.81(m, 1H),2.70–2.56(m,1H),2.50–2.42(m,1H),2.19–2.01(m,2H),1.88(dd,J=13.3,3.1Hz, 1H),1.70–1.52(m,5H),1.51–1.25(m,16H),0.88–0.61(m,5H)。 [0935] 步骤2:(2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸4‑氨基丁酯盐酸盐的制备 [0936] 以与实施例60步骤3类似的方式,使用(4‑(((2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)丁基)氨基甲酸叔丁酯而非(4‑(((2‑((8S,9S, 10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15, 16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)丁基)氨基甲酸叔丁酯制+ 备标题化合物,获得了白色固体(0.65g,产率:98%)。MS(m/z):C26H37NO7的[M+H] 计算值, 476.26;实验值,476.2。 [0937] 步骤3:HA和(2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸4‑氨基丁酯的缀合物的制备 [0938] 以与实施例34步骤3类似的方式,使用(2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸4‑氨基丁酯而非4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S, 17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑ 3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体。(透明质酸钠MW 1 500KDa 0.176g,产率:58.6%,DSR=9%)。HNMR(400MHz,D2O)δ7.62(s,0.09H),6.41–6.35(m,0.09H),6.13(s,0.09H),5.19–5.03(m,0.18H),4.71–4.34(m,2H),4.30–2.95(m, 10.18H),2.84–2.16(m,0.45H),2.15–1.40(m,4.35H),0.94–0.85(m,0.45H)。 [0939] 经此步骤,透明质酸钠(MW 50KDa)的反应提供了对应的产物(0.209g,产率:1 69.6%,DSR=10%)。H NMR(400MHz,D2O)δ7.62(d,J=10.0Hz,0.1H),6.40(d,J=9.5Hz, 0.1H),6.15(s,0.1H),5.12–4.99(m,0.2H),4.65–4.38(m,2H),4.35–2.86(m,10.2H),2.85– 2.34(m,0.5H),2.33–1.42(m,4.5H),0.96–0.84(m,0.5H)。 [0940] 实施例63 [0941] CS和(2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸4‑氨基丁酯的缀合物的制备 [0942] [0943] 以与实施例62类步骤3似的方式,使用CS(硫酸软骨素)而非HA(透明质酸)制备标1 题化合物,获得了白色固体(0.213g,产率:71%,DSR=6%)。H NMR(400MHz,D2O)δ7.61(s, 0.06H),6.39(d,J=11.0Hz,0.06H),6.13(s,0.06H),5.25–4.99(m,0.12H),4.69–4.39(m, 2H),4.38–2.98(m,10.12H),2.97–2.35(m,0.3H),2.34–1.33(m,3.9H),0.99–0.82(m, 0.3H)。 [0944] 实施例64 [0945] HA和(2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸4‑氨基丁酯的缀合物的制备 [0946] [0947] 步骤1:(4‑(((2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)丁基)氨基甲酸叔丁酯的制备 [0948] 以与实施例60步骤2类似的方式,使用(8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑17‑(2‑羟基乙酰基)‑10,13‑二甲基‑1,2,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑3H‑环戊[a]菲‑3‑酮而非(8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑17‑(2‑羟基乙酰基)‑10, 13‑二甲基‑7,8,9,10,12,13,14,15,16,17‑十氢‑3H‑环戊[a]菲‑3,11(6H)‑二酮制备标题+ 化合物,获得了白色固体(0.7g,产率:87.7%)。MS(m/z):C31H47NO9的[M+H]计算值,578.33; + 实验值,600.2[M+Na]。 [0949] 步骤2:(2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸4‑氨基丁酯盐酸盐的制备 [0950] 以与实施例60步骤3类似的方式,使用(4‑(((2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑ 1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)丁基)氨基甲酸叔丁酯而非(4‑(((2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12, 13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)丁基)氨基甲酸叔丁酯制备标题化合物,获得了白色固体(0.57g,产率:98.9%)。MS(m/z):C26H39NO7的[M++ 1 H]计算值,478.27;实验值,478.2。H NMR(400MHz,DMSO)δ7.98(s,2H),5.57(s,1H),5.50(s,1H),5.13(d,J=17.7Hz,1H),4.77(d,J=17.7Hz,1H),4.40(d,J=3.9Hz,1H),4.27(s, 1H),4.13(t,J=5.9Hz,2H),2.81(m,3H),2.47–2.29(m,2H),2.25–2.08(m,3H),1.98–1.84(m,3H),1.86–1.55(m,8H),1.54–1.43(m,1H),1.42–1.34(m,3H),1.33–1.23(m,1H),1.09– 0.95(m,1H),0.94–0.84(m,1H),0.83–0.70(m,3H)。 [0951] 步骤3:HA和(2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸4‑氨基丁酯的缀合物的制备 [0952] 以与实施例34步骤3类似的方式,使用(2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸4‑氨基丁酯而非4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,13S, 14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体。(透明质酸钠 1 MW 500KDa 0.22g,产率:73.3%,DSR=10%)。H NMR(400MHz,D2O)δ5.87(s,0.1H),5.32– 5.04(m,0.2H),4.78–4.29(m,2.1H),4.21–2.91(m,10.4H),2.78–2.22(m,0.5H),2.21–1.58(m,4.2H),1.53–1.46(m,0.3H),1.42–1.18(m,0.3H),1.01–0.89(m,0.3H)。 [0953] 经此步骤,透明质酸钠(MW 50KDa)的反应提供了对应的产物(0.23g,产率:1 76.6%,DSR=8%)。H NMR(400MHz,D2O)δ5.80(s,0.08H),5.28–4.97(m,0.16H),4.67–4.24(m,2.08H),4.15–2.87(m,10.32H),2.72–2.18(m,0.4H),2.17–1.48(m,3.96H),1.46–1.40(m,0.24H),1.26–1.09(m,0.24H),0.94–0.86(m,0.24H)。 [0954] 实施例65 [0955] CS和(2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸4‑氨基丁酯的缀合物的制备 [0956] [0957] 以与实施例64步骤3类似的方式,使用CS(硫酸软骨素)而非HA(透明质酸)制备标1 题化合物,获得了白色固体(0.436g,产率:72.6%,DSR=11%)。H NMR(400MHz,D2O)δ5.80(s,0.11H),5.25–4.97(m,0.22H),4.66–4.36(m,2.11H),4.32–2.91(m,10.44H),2.87–2.27(m,0.55H),2.24–1.53(m,4.32H),1.47–1.39(m,0.33H),1.24–1.10(m,0.33H),0.99–0.84(m,0.33H)。 [0958] 实施例66 [0959] HA和(2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸4‑氨基丁酯的缀合物的制备 [0960] [0961] 步骤1:(4‑(((2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)丁基)氨基甲酸叔丁酯的制备 [0962] 以与实施例60步骤2类似的方式,使用(8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑17‑(2‑羟基乙酰基)‑10,13‑二甲基‑1,6,7,8,9,10,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑3,11(2H)‑二酮而非(8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑17‑(2‑羟基乙酰基)‑10,13‑二甲基‑7,8,9,10,12,13,14,15,16,17‑十氢‑3H‑环戊[a]菲‑3,11(6H)‑二酮制备标题化合+物,获得了白色固体(0.6g,产率:75%)。MS(m/z):C31H45NO9的[M+H]计算值,576.31;实验+ 1 值,598.2[M+Na] 。H NMR(400MHz,DMSO)δ6.83–6.79(m,1H),5.84(s,1H),5.65(d,J= 9.2Hz,1H),4.98(d,J=17.9Hz,1H),4.80(d,J=17.9Hz,1H),4.09(t,J=6.5Hz,2H),3.38 (t,J=5.6Hz,2H),2.98–2.87(m,1H),2.61–2.53(m,1H),2.48–2.33(m,3H),2.31–2.21(m, 1H),2.19–2.07(m,3H),1.96–1.75(m,3H),1.73–1.52(m,3H),1.47–1.35(m,18H),0.49(s, 3H)。 [0963] 步骤2:(2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸 4‑氨基丁酯盐酸盐的制备 [0964] 以与实施例60步骤3类似的方式,使用(4‑(((2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)丁基)氨基甲酸叔丁酯而非(4‑(((2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14, 15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)丁基)氨基甲酸叔丁+ 酯制备标题化合物,获得了白色固体(0.5g,产率:97%)。MS(m/z):C26H37NO7的[M+H]计算值,476.26;实验值,476.3。 [0965] 步骤3:HA和(2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸4‑氨基丁酯的缀合物的制备 [0966] 以与实施例34步骤3类似的方式,使用(2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸4‑氨基丁酯而非4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S, 17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑ 3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体(透明质酸钠MW 1 500KDa 0.196g,产率:65.3%,DSR=4%)。H NMR(400MHz,D2O)δ5.82(s,0.04H),5.20–4.94(m,0.08H),4.67–4.21(m,2.04H),4.23–3.06(m,10.08H),2.91–2.38(m,0.4H),2.28–1.60(m,3.24H),1.50–1.25(m,0.36H),0.66(s,0.12H)。 [0967] 经此步骤,透明质酸钠(MW 50KDa)的反应提供了对应的产物(0.23g,产率:1 76.6%,DSR=10%)。H NMR(400MHz,D2O)δ5.83(s,0.1H),5.24–5.02(m,0.2H),4.67–4.21(m,2.1H),4.19–3.04(m,10.2H),3.00–2.25(m,1H),2.21–1.51(m,3.6H),1.47–1.25(m, 0.9H),0.65(s,0.3H)。 [0968] 实施例67 [0969] CS和(2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸4‑氨基丁酯的缀合物的制备 [0970] [0971] 以与实施例66步骤3类似的方式,使用CS(硫酸软骨素)而非HA(透明质酸)制备标1 题化合物,获得了白色固体(0.433g,产率:72.1%,DSR=15%)。H NMR(400MHz,D2O)δ5.83(s,0.15H),4.97–4.91(m,0.3H),4.68–4.39(m,2.15H),4.29–3.08(m,10.3H),2.95–2.26(m,1.5H),2.21–1.50(m,3.9H),1.46–1.13(m,1.35H),0.64(s,0.45H)。 [0972] 实施例68 [0973] HA和(2‑((6S,8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑6,10,13‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸4‑氨基丁酯的缀合物的制备 [0974] [0975] [0976] 步骤1:(4‑(((2‑((6S,8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑6,10,13‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)丁基)氨基甲酸叔丁酯的制备 [0977] 以与实施例60步骤2类似的方式,使用(6S,8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑17‑(2‑羟基乙酰基)‑6,10,13‑三甲基‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑3‑酮而非(8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑17‑(2‑羟基乙酰基)‑10,13‑二甲基‑7,8,9,10,12,13,14,15,16,17‑十氢‑3H‑环戊[a]菲‑3,11(6H)‑二酮制备标题+ 化合物,获得了白色固体(0.7g,产率:88.9%)。MS(m/z):C32H47NO9的[M+H]计算值,590.33; + 1 实验值,611.2[M+Na]。H NMR(400MHz,DMSO)δ7.33(d,J=10.1Hz,1H),6.81–6.70(m,1H), 6.18(dd,J=10.1,1.6Hz,1H),5.83(s,1H),5.42(s,1H),5.08(d,J=17.7Hz,1H),4.79– 4.70(m,2H),4.29(s,1H),4.10(t,J=6.5Hz,2H),3.44–3.34(m,2H),2.99–2.86(m,1H), 2.72–2.60(m,1H),2.17–2.03(m,2H),1.88(dd,J=13.3,3.1Hz,1H),1.70–1.52(m,5H), 1.51–1.30(m,16H),1.11–1.00(m,3H),0.91–0.67(m,5H)。 [0978] 步骤2:(2‑((6S,8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑6,10,13‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸4‑氨基丁酯盐酸盐的制备 [0979] 以与实施例60步骤3类似的方式,使用(4‑(((2‑((6S,8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑6,10,13‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)丁基)氨基甲酸叔丁酯而非(4‑(((2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12, 13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)丁基)氨基甲酸叔丁酯制备标题化合物,获得了白色固体(0.55g,产率:98%)。MS(m/z):C27H39NO7的[M+H+ ]计算值,490.27;实验值,490.2。 [0980] 步骤3:HA和(2‑((6S,8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑6,10,13‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸4‑氨基丁酯的缀合物的制备 [0981] 以与实施例34步骤3类似的方式,使用(2‑((6S,8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑6,10,13‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸4‑氨基丁酯而非4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,13S, 14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体。(透明质酸钠 1 MW 500KDa 0.203g,产率:67.6%,DSR=11%)。H NMR(400MHz,D2O)δ7.65–7.56(m,0.11H), 6.45–6.34(m,0.11H),6.19–6.09(m,0.11H),5.27–5.08(m,0.22H),4.71–4.30(m,2.11H), 4.31–2.95(m,10.22H),2.94–2.20(m,0.44H),2.16–1.39(m,4.65H),1.24–1.05(m,0.33H), 0.97–0.79(m,0.55H)。 [0982] 经此步骤,透明质酸钠(MW 50KDa)的反应提供了对应的产物(0.239g,产率:1 79.6%,DSR=4%)。H NMR(400MHz,D2O)δ7.63–7.56(m,0.04H),6.42–6.34(m,0.04H),6.13(s,0.04H),5.27–5.00(m,0.08H),4.68–4.24(m,2.04H),4.20–3.06(m,10.08H),2.83–2.33(m,0.16H),2.32–1.41(m,3.6H),1.15–1.08(m,0.12H),0.94–0.82(m,0.2H)。 [0983] 实施例69 [0984] CS和(2‑((6S,8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑6,10,13‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸4‑氨基丁酯的缀合物的制备 [0985] [0986] 以与实施例68步骤3类似的方式,使用CS(硫酸软骨素)而非HA(透明质酸)制备标1 题化合物,获得了白色固体(0.521g,产率:86.8%,DSR=12%)。H NMR(400MHz,D2O)δ7.66– 7.56(m,0.12H),6.45–6.36(m,0.12H),6.10(s,0.12H),5.28–4.96(m,0.24H),4.69–4.37 (m,2.12H),4.36–2.99(m,10.24H),2.98–2.35(m,0.48H),2.34–1.53(m,4.8H),1.49–1.31(m,0.36H),1.09–0.83(m,0.6H)。 [0987] 实施例70 [0988] HA和(2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸4‑氨基丁酯的缀合物的制备 [0989] [0990] 步骤1:(4‑(((2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)丁基)氨基甲酸叔丁酯的制备 [0991] 以与实施例60步骤2类似的方式,使用(8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑17‑(2‑羟基乙酰基)‑10,13,16‑三甲基‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16, 17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑3‑酮而非(8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑17‑(2‑羟基乙酰基)‑10,13‑二甲基‑7,8,9,10,12,13,14,15,16,17‑十氢‑3H‑环戊[a]菲‑3,11(6H)‑二酮制+ 备标题化合物,获得了白色固体(0.6g,产率:77.5%)。MS(m/z):C32H46FNO9的[M+H]计算值,+ 608.32;实验值,630.2[M+Na]。 [0992] 步骤2:(2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸4‑氨基丁酯盐酸盐的制备 [0993] 以与实施例60步骤3类似的方式,使用(4‑(((2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16, 17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)丁基)氨基甲酸叔丁酯而非(4‑(((2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10, 11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)丁基)氨基甲酸叔丁酯制备标题化合物,获得了白色固体(0.48g,产率:98%)。MS(m/z):C27H38FNO7+ 1 的[M+H]计算值,508.26;实验值,508.2。H NMR(400MHz,DMSO)δ7.98(s,4H),7.35(d,J= 10.1Hz,1H),6.22(dd,J=10.1,1.8Hz,1H),6.01(s,1H),5.52(d,J=4.9Hz,1H),5.22(s, 1H),5.10(d,J=17.7Hz,1H),4.79(d,J=17.7Hz,1H),4.19–3.99(m,3H),2.97–2.74(m, 2H),2.62(td,J=13.4,6.0Hz,1H),2.45–2.27(m,2H),2.22–2.07(m,2H),1.83–1.74(m, 1H),1.73–1.44(m,10H),1.42–1.22(m,1H),1.13–1.03(m,1H),0.90(s,3H),0.80(d,J= 7.2Hz,3H)。 [0994] 步骤3:HA和(2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸4‑氨基丁酯的缀合物的制备 [0995] 以与实施例34步骤3类似的方式,使用(2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸4‑氨基丁酯而非4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R, 13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16, 17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体。(透明质 1 酸钠MW 500KDa 0.196g,产率:65.3%,DSR=8%)。H NMR(400MHz,D2O)δ7.56(d,J= 10.1Hz,0.08H),6.45(d,J=9.7Hz,0.08H),6.25(s,0.08H),5.21–4.99(m,0.16H),4.70– 4.34(m,2.08H),4.32–2.90(m,10.16H),2.81–2.36(m,0.4H),2.35–1.41(m,4.04H),1.35– 1.17(m,0.08H),1.01(s,0.24H),0.94–0.83(m,0.24H)。 [0996] 经此步骤,透明质酸钠(MW 50KDa)的反应提供了对应的产物(0.167g,产率:1 55.6%,DSR=11%)。H NMR(400MHz,D2O)δ7.57(d,J=10.7Hz,0.11H),6.46(d,J=8.5Hz, 0.11H),6.26(s,0.11H),5.21–4.96(m,0.22H),4.70–4.39(m,2.11H),4.38–2.87(m, 10.22H),2.86–2.34(m,0.55H),2.33–1.39(m,4.43H),1.38–1.12(m,0.22H),1.02(s, 0.33H),0.94–0.85(m,0.33H)。 [0997] 实施例71 [0998] CS和(2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸4‑氨基丁酯的缀合物的制备 [0999] [1000] 以与实施例70步骤3类似的方式,使用CS(硫酸软骨素)而非HA(透明质酸)制备标1 题化合物,获得了白色固体(0.456g,产率:76%,DSR=24%)。H NMR(400MHz,D2O)δ7.56(d,J=10.1Hz,0.24H),6.44(d,J=10.4Hz,0.24H),6.24(s,0.24H),5.25–4.94(m,0.48H), 4.70–4.37(m,2.24H),4.34–2.90(m,10.48H),2.89–2.22(m,1.2H),2.21–1.37(m,6.12H), 1.34–1.16(m,0.48H),1.01(s,0.72H),0.93–0.83(m,0.72H)。 [1001] 实施例72 [1002] HA和(2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16S,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸4‑氨基丁酯的缀合物的制备 [1003] [1004] 步骤1:(4‑(((2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16S,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)丁基)氨基甲酸叔丁酯的制备 [1005] 以与实施例60步骤2类似的方式,使用(8S,9R,10S,11S,13S,14S,16S,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑17‑(2‑羟基乙酰基)‑10,13,16‑三甲基‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16, 17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑3‑酮而非(8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑17‑(2‑羟基乙酰基)‑10,13‑二甲基‑7,8,9,10,12,13,14,15,16,17‑十氢‑3H‑环戊[a]菲‑3,11(6H)‑二酮制+ 备标题化合物,获得了白色固体(0.6g,产率:95%)。MS(m/z):C32H46FNO9的[M+H] 计算值,+ 1 608.32;实验值,629.2[M+Na]。H NMR(400MHz,DMSO)δ7.29(d,J=10.1Hz,1H),6.81–6.70(m,1H),6.23(dd,J=10.1,1.6Hz,1H),6.08–5.89(m,1H),5.42–5.22(m,2H),4.97(t,J= 16.3Hz,1H),4.83–4.74(m,1H),4.24–4.05(m,3H),3.37(q,J=5.8Hz,2H),2.64(td,J= 13.2,5.5Hz,1H),2.42–2.27(m,1H),2.12(dd,J=16.0,7.7Hz,2H),1.96–1.76(m,2H), 1.70–1.14(m,20H),1.10–0.80(m,7H)。 [1006] 步骤2:(2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16S,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸4‑氨基丁酯盐酸盐的制备 [1007] 以与实施例60步骤3类似的方式,使用(4‑(((2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16S,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16, 17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)丁基)氨基甲酸叔丁酯而非(4‑(((2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10, 11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)丁基)氨基甲酸叔丁酯制备标题化合物,获得了白色固体(0.4g,产率:98%)。MS(m/z):C27H38FNO7+ 的[M+H]计算值,508.26;实验值,508.2。 [1008] 步骤3:HA和(2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16S,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸4‑氨基丁酯的缀合物的制备 [1009] 以与实施例34步骤3类似的方式,使用(2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16S,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸4‑氨基丁酯而非4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R, 13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16, 17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体。(透明质 1 酸钠MW 500KDa 0.19g,产率:63.3%,DSR=8%)。H NMR(400MHz,D2O)δ7.54(d,J=10.1Hz, 0.08H),6.42(d,J=9.7Hz,0.08H),6.16(s,0.08H),5.20–4.98(m,0.16H),4.70–4.36(m, 2.08H),4.32–3.00(m,10.16H),2.89–2.36(m,0.4H),2.33–1.41(m,4.04H),1.35–1.17(m, 0.08H),1.01(s,0.24H),0.94–0.85(m,0.24H)。 [1010] 实施例73 [1011] CS和(2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16S,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸4‑氨基丁酯的缀合物的制备 [1012] [1013] 以与实施例72步骤3类似的方式,使用CS(硫酸软骨素)而非HA(透明质酸)制备标1 题化合物,获得了白色固体(0.202g,产率:67.3%,DSR=8%)。H NMR(400MHz,D2O)δ7.54(d,J=10.1Hz,0.08H),6.42(d,J=9.7Hz,0.08H),6.17(s,0.08H),5.22–4.97(m,0.16H), 4.76–4.36(m,2.08H),4.33–3.00(m,10.16H),2.88–2.35(m,0.4H),2.32–1.38(m,4.04H), 1.34–1.17(m,0.08H),1.01(s,0.24H),0.94–0.85(m,0.24H)。 [1014] 实施例74 [1015] HA和5‑氨基戊酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [1016] [1017] 步骤1:5‑((叔丁氧基羰基)氨基)戊酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑ 17‑基)‑2‑氧代乙酯的制备 [1018] 以与实施例24步骤1类似的方式,使用(8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑17‑(2‑羟基乙酰基)‑10,13‑二甲基‑7,8,9,10,12,13,14,15,16,17‑十氢‑3H‑环戊[a]菲‑3,11(6H)‑二酮而非(6α,9α,11β,16β)‑6,9‑二氟‑11,21‑二羟基‑16,17‑[(1‑甲基亚乙基)双(氧基)]孕‑1,4‑二烯‑3,20‑二酮制备标题化合物,获得了白色固体(0.446g,产率:71.7%)。MS+ + 1(m/z):C31H43NO8的[M+H] 计算值,558.30;实验值,580.4[M+Na]。H NMR(400MHz,DMSO)δ 7.61(d,J=10.3Hz,1H),6.78(t,J=5.2Hz,1H),6.11(dd,J=10.3,1.9Hz,1H),6.02(s, 1H),5.80(s,1H),4.92(d,J=17.7Hz,1H),4.80(d,J=17.7Hz,1H),2.91(dd,J=13.7, 7.9Hz,3H),2.58–2.52(m,3H),2.42–2.32(m,4H),2.25–2.13(m,2H),2.10–1.93(m,2H), 1.82–1.72(m,1H),1.70–1.60(m,1H),1.52(dd,J=15.0,7.4Hz,2H),1.45–1.32(m,14H), 1.25–1.12(m,1H),0.51(s,3H)。 [1019] 步骤2:5‑氨基戊酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐的制备 [1020] 以与实施例24步骤2类似的方式,使用5‑氨基戊酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯而非6‑((叔丁氧基羰基)氨基)己酸2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αaS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体(0.26g,产率:96.2%)。MS(m/z): + C26H35NO6的[M+H]计算值,458.25;实验值,458.4。 [1021] 步骤3:HA和5‑氨基戊酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [1022] 以与实施例34步骤3类似的方式,使用5‑氨基戊酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯而非4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10, 13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体。(透明质酸钠MW 500KDa 0.543g,产率: 1 86.8%,DSR=34%)。H NMR(400MHz,D2O)δ7.90(d,J=10.0Hz,0.34H),6.32(d,J=10.4Hz, 0.34H),6.24(s,0.34H),5.24–4.88(m,0.68H),4.67–4.43(m,2H),4.14–2.78(m,11.02H), 2.75–2.13(m,3.06H),2.07–1.26(m,7.08H),0.70(s,1.02H)。 [1023] 实施例75 [1024] HA和5‑氨基戊酸2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [1025] [1026] 步骤1:5‑((叔丁氧基羰基)氨基)戊酸2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的制备 [1027] 以与实施例24步骤1类似的方式,使用(8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑17‑(2‑羟基乙酰基)‑10,13‑二甲基‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑ 3H‑环戊[a]菲‑3‑酮而非(6α,9α,11β,16β)‑6,9‑二氟‑11,21‑二羟基‑16,17‑[(1‑甲基亚乙基)双(氧基)]孕‑1,4‑二烯‑3,20‑二酮制备标题化合物,获得了白色固体(0.556g,产率: + + 1 89.5%)。MS(m/z):C31H45NO8的[M+H] 计算值,560.31;实验值,582.3[M+Na] 。H NMR (400MHz,DMSO)δ7.33(d,J=10.1Hz,1H),6.80(t,J=5.3Hz,1H),6.17(dd,J=10.1,1.7Hz, 1H),5.92(s,1H),5.76(s,1H),5.40(s,1H),5.07(d,J=17.6Hz,1H),4.74(dd,J=13.3, 10.8Hz,2H),4.29(s,1H),2.92(q,J=6.5Hz,2H),2.59–2.42(m,2H),2.39(t,J=7.3Hz, 2H),2.34–2.25(m,1H),2.10–1.99(m,2H),1.95–1.82(m,1H),1.73–1.60(m,3H),1.59–1.49(m,2H),1.48–1.22(m,15H),1.10–0.95(m,1H),0.94–0.82(m,1H),0.79(s,3H)。 [1028] 步骤2:5‑氨基戊酸2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐的制备 [1029] 以与实施例24步骤2类似的方式,使用5‑((叔丁氧基羰基)氨基)戊酸2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14, 15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯而非6‑((叔丁氧基羰基)氨基)己酸 2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αaS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1, 2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体(0.34g,产+ 率:97.7%)。MS(m/z):C26H37NO6的[M+H]计算值,460.26;实验值,460.2。 [1030] 步骤3:HA和5‑氨基戊酸2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑ 2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [1031] 以与实施例34步骤3类似的方式,使用5‑氨基戊酸2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑ 3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯而非4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体。(透明质酸钠MW 500KDa 1 0.565g,产率:75.3%,DSR=22%)。H NMR(400MHz,D2O)δ7.61(d,J=10.0Hz,0.22H),6.39(d,J=9.9Hz,0.22H),6.17(s,0.22H),5.20–4.84(m,0.66H),4.70–4.36(m,2.22H),4.28– 2.99(m,10.44H),2.75–2.14(m,1.1H),2.13–1.41(m,6.08H),1.19(d,J=12.2Hz,0.44H), 0.91(s,0.66H)。 [1032] 实施例76 [1033] HA和5‑氨基戊酸2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [1034] [1035] 步骤1:5‑((叔丁氧基羰基)氨基)戊酸2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的制备 [1036] 以与实施例24步骤1类似的方式,使用(8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑17‑(2‑羟基乙酰基)‑10,13‑二甲基‑1,2,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑3H‑环戊[a]菲‑3‑酮而非(6α,9α,11β,16β)‑6,9‑二氟‑11,21‑二羟基‑16,17‑[(1‑甲基亚乙基)双(氧基)]孕‑1,4‑二烯‑3,20‑二酮制备标题化合物,获得了白色固体(0.345g,产+ + 1 率:55.5%)。MS(m/z):C31H47NO8的[M+H] 计算值,562.33;实验值,584.3[M+Na]。H NMR(400MHz,DMSO)δ6.78(s,1H),5.56(s,1H),5.38(s,1H),5.08(d,J=17.5Hz,1H),4.75(d,J =17.5Hz,1H),4.34(d,J=3.9Hz,1H),4.27(s,1H),2.91(q,J=6.6Hz,2H),2.50–2.44(m, 2H),2.42–2.31(m,3H),2.25–2.14(m,2H),2.12–2.06(m,1H),1.98–1.85(m,3H),1.84–1.72(m,1H),1.71–1.60(m,3H),1.59–1.49(m,2H),1.48–1.32(m,15H),1.31–1.20(m,1H),1.07– 0.91(m,1H),0.87(dd,J=10.7,2.3Hz,1H),0.77(s,3H)。 [1037] 步骤2:5‑氨基戊酸2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐的制备 [1038] 以与实施例24步骤2类似的方式,使用5‑((叔丁氧基羰基)氨基)戊酸2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12, 13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯而非6‑((叔丁氧基羰基)氨基)己酸2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αaS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10, 10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体+ 1 (0.2g,产率:94.7%)。MS(m/z):C26H39NO6的[M+H] 计算值,462.28;实验值,462.2。H NMR(400MHz,D2O)δ5.82(s,1H),5.19(d,J=18.0Hz,1H),5.08(d,J=17.9Hz,1H),4.54(d,J= 2.7Hz,1H),3.08(d,J=6.5Hz,2H),2.73–2.55(m,5H),2.47–2.33(m,2H),2.23(dt,J= 13.1,4.5Hz,1H),2.18–2.07(m,2H),2.06–1.71(m,9H),1.70–1.43(m,5H),1.26–1.08(m, 2H),0.89(s,3H)。 [1039] 步骤3:HA和5‑氨基戊酸2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [1040] 以与实施例34步骤3类似的方式,使用5‑氨基戊酸2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯而非4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑ 17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体。(透明质酸钠MW 500KDa 1 0.205g,产率:68.3%,DSR=18%)。H NMR(400MHz,D2O)δ5.81(s,0.18H),5.23–4.93(m, 0.36H),4.72–4.32(m,2.18H),4.12–2.92(m,10.36H),2.68–2.15(m,1.26H),2.14–1.50(m, 5.16H),1.48–0.99(m,1.26H),0.89(s,0.54H)。 [1041] 实施例77 [1042] HA和5‑氨基戊酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [1043] [1044] 步骤1:5‑((叔丁氧基羰基)氨基)戊酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的制备 [1045] 以与实施例24步骤1类似的方式,使用(8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑17‑(2‑羟基乙酰基)‑10,13‑二甲基‑1,6,7,8,9,10,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑3,11(2H)‑二酮而非(6α,9α,11β,16β)‑6,9‑二氟‑11,21‑二羟基‑16,17‑[(1‑甲基亚乙基)双(氧基)]孕‑1,4‑二烯‑3,20‑二酮制备标题化合物,获得了白色固体(0.5g,产率:+ + 1 81.9%)。MS(m/z):C31H45NO8的[M+H] 计算值,560.31;实验值,582.2[M+Na] 。H NMR (400MHz,DMSO)δ6.78(s,1H),5.80(s,1H),5.64(s,1H),4.93(d,J=17.7Hz,1H),4.80(dd,J =17.7,5.4Hz,1H),2.95–2.85(m,3H),2.62–2.44(m,2H),2.43–2.32(m,4H),2.31–2.21(m, 1H),2.20–2.06(m,4H),1.91(dt,J=17.6,9.1Hz,2H),1.83–1.73(m,1H),1.72–1.60(m, 2H),1.57–1.46(m,2H),1.45–1.28(m,14H),1.27–1.14(m,2H),0.47(s,3H)。 [1046] 步骤2:5‑氨基戊酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐的制备 [1047] 以与实施例24步骤2类似的方式,使用5‑((叔丁氧基羰基)氨基)戊酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14, 15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯而非6‑((叔丁氧基羰基)氨基)己酸 2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αaS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1, 2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体(0.25g,产+ 1 率:95.4%)。MS(m/z):C26H37NO6的[M+H] 计算值,460.26;实验值,460.3。H NMR(400MHz,D2O)δ5.86(s,1H),5.14(d,J=18.1Hz,1H),5.09–4.95(m,1H),3.08(s,2H),2.98(d,J= 12.1Hz,1H),2.74–2.52(m,5H),2.45(dd,J=19.8,11.6Hz,2H),2.33(d,J=12.1Hz,3H), 2.20–1.93(m,3H),1.92–1.65(m,6H),1.56(dt,J=17.3,9.3Hz,1H),1.50–1.19(m,5H), 0.66(s,3H)。 [1048] 步骤3:HA和5‑氨基戊酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [1049] 以与实施例34步骤3类似的方式,使用5‑氨基戊酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑ 1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯而非4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体。(透明质酸钠MW 500KDa 1 0.341g,产率:83.9%,DSR=7%)。H NMR(400MHz,D2O)δ5.89–5.84(m,0.07H),5.22–4.93(m,0.14H),4.79–4.29(m,2H),4.22–3.11(m,10.21H),2.83–2.27(m,0.7H),2.26–1.17(m, 4.05H),0.68(s,0.21H)。 [1050] 实施例78 [1051] HA和5‑氨基戊酸2‑((6S,8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑6,10,13‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [1052] [1053] 步骤1:5‑((叔丁氧基羰基)氨基)戊酸2‑((6S,8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑6,10,13‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的制备 [1054] 以与实施例24步骤1类似的方式,使用(6S,8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑17‑(2‑羟基乙酰基)‑6,10,13‑三甲基‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑3‑酮而非(6α,9α,11β,16β)‑6,9‑二氟‑11,21‑二羟基‑16,17‑[(1‑甲基亚乙基)双(氧基)]孕‑1,4‑二烯‑3,20‑二酮制备标题化合物,获得了白色固体(0.46g,产+ + 1率:75.3%)。MS(m/z):C32H47NO8的[M+H] 计算值,574.33;实验值,596.2[M+Na]。H NMR(400MHz,DMSO)δ7.33(d,J=10.1Hz,1H),6.80(t,J=5.4Hz,1H),6.18(dd,J=10.1,1.6Hz, 1H),5.82(s,1H),5.75(s,2H),5.39(s,1H),5.07(d,J=17.6Hz,1H),4.73(dd,J=13.0, 10.8Hz,2H),4.29(s,1H),2.92(q,J=6.5Hz,2H),2.74–2.60(m,1H),2.54–2.44(m,1H), 2.38(t,J=7.3Hz,2H),2.17–2.02(m,2H),1.94–1.85(m,1H),1.64(dd,J=17.5,9.2Hz, 3H),1.59–1.48(m,2H),1.47–1.22(m,14H),1.05(d,J=6.3Hz,3H),0.86(dd,J=11.1, 3.0Hz,1H),0.78(s,3H),0.76–0.60(m,1H)。 [1055] 步骤2:5‑氨基戊酸2‑((6S,8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑6,10,13‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑ 2‑氧代乙酯盐酸盐的制备 [1056] 以与实施例24步骤2类似的方式,使用5‑((叔丁氧基羰基)氨基)戊酸2‑((6S,8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑6,10,13‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12, 13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯而非6‑((叔丁氧基羰基)氨基)己酸2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αaS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10, 10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体+ 1 (0.31g,产率:96%)。MS(m/z):C27H39NO6的[M+H]计算值,474.28;实验值,474.3。H NMR(400MHz,D2O)δ7.61(d,J=10.0Hz,1H),6.40(d,J=10.1Hz,1H),6.13(s,1H),5.16(d,J= 18.0Hz,1H),5.05(d,J=17.9Hz,1H),4.52(s,1H),3.08(d,J=6.4Hz,2H),2.86–2.75(m, 1H),2.62(d,J=6.3Hz,3H),2.21(dt,J=23.8,15.3Hz,2H),1.97(d,J=11.0Hz,1H),1.80 (dd,J=11.1,7.9Hz,6H),1.75–1.37(m,6H),1.18(t,J=9.8Hz,3H),1.07(dd,J=11.3, 2.5Hz,1H),0.99–0.67(m,4H)。 [1057] 步骤3:HA和5‑氨基戊酸2‑((6S,8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑6,10,13‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [1058] 以与实施例34步骤3类似的方式,使用5‑氨基戊酸2‑((6S,8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑6,10,13‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯而非4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S, 17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑ 3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体。(透明质酸钠MW 1 500KDa 0.546g,产率:88.3%,DSR=49%)。H NMR(400MHz,D2O)δ7.61(d,J=9.8Hz, 0.49H),6.40(d,J=10.6Hz,0.49H),6.14(s,0.49H),5.15–4.79(m,0.98H),4.71–4.31(m, 2.49H),4.26–3.01(m,10.98H),2.87–2.17(m,2.94H),2.16–1.29(m,9.37H),1.16(d,J= 5.7Hz,1.96H),0.90(s,1.96H)。 [1059] 实施例79 [1060] HA和5‑氨基戊酸2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑ 17‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [1061] [1062] [1063] 步骤1:5‑((叔丁氧基羰基)氨基)戊酸2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的制备 [1064] 以与实施例24步骤1类似的方式,使用(8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑17‑(2‑羟基乙酰基)‑10,13,16‑三甲基‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16, 17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑3‑酮而非(6α,9α,11β,16β)‑6,9‑二氟‑11,21‑二羟基‑16,17‑[(1‑甲基亚乙基)双(氧基)]孕‑1,4‑二烯‑3,20‑二酮制备标题化合物,获得了白色固体+ + (0.524g,产率:86.9%)。MS(m/z):C32H46FNO8的[M+H]计算值,592.32;实验值,614.2[M+Na] 。 1 H NMR(400MHz,DMSO)δ7.28(d,J=10.1Hz,1H),6.78(d,J=5.4Hz,1H),6.22(dd,J=10.1, 1.7Hz,1H),6.01(s,1H),5.35–5.27(m,2H),4.97(d,J=17.7Hz,1H),4.81(d,J=17.7Hz, 1H),4.19–4.09(m,1H),2.96–2.85(m,2H),2.63(td,J=13.2,5.4Hz,1H),2.44(dd,J= 11.9,5.0Hz,1H),2.35(dt,J=13.9,5.6Hz,3H),2.15–2.03(m,2H),2.02–1.79(m,3H), 1.61–1.32(m,17H),1.29–1.19(m,1H),1.10–0.95(m,4H),0.94–0.80(m,3H)。 [1065] 步骤2:5‑氨基戊酸2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑ 17‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐的制备 [1066] 以与实施例24步骤2类似的方式,使用5‑((叔丁氧基羰基)氨基)戊酸2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10, 11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯而非6‑((叔丁氧基羰基)氨基)己酸2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αaS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2', 1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白+ 色固体(0.115g,产率:86.4%)。MS(m/z):C27H38FNO6的[M+H] 计算值,492.27;实验值, 1 492.3。H NMR(400MHz,D2O)δ7.57(d,J=10.1Hz,1H),6.47(dd,J=10.1,1.7Hz,1H),6.28 (s,1H),5.18–5.02(m,2H),4.44(d,J=9.0Hz,1H),3.08(d,J=6.6Hz,2H),2.79(td,J= 13.4,5.9Hz,1H),2.73–2.46(m,4H),2.32–1.99(m,5H),1.85–1.65(m,5H),1.64–1.48(m, 4H),1.33–1.22(m,1H),1.13(d,J=7.3Hz,3H),1.04(s,3H)。 [1067] 步骤3:HA和5‑氨基戊酸2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [1068] 以与实施例34步骤3类似的方式,使用5‑氨基戊酸2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15, 16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯而非4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,13S, 14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体。(透明质酸钠 1 MW 500KDa 0.256g,产率:72.9%,DSR=31%)。H NMR(400MHz,D2O)δ7.58(d,J=10.3Hz, 0.31H),6.46(d,J=9.9Hz,0.31H),6.27(s,0.31H),5.09(s,0.62H),4.69–4.32(m,2.31H), 4.14–2.91(m,10.62H),2.85–2.30(m,1.55H),2.29–1.77(m,4.55H),1.76–1.19(m,3.1H), 1.16–0.84(m,1.86H)。 [1069] 实施例80 [1070] HA和5‑氨基戊酸2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16S,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑ 17‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [1071] [1072] 步骤1:5‑((叔丁氧基羰基)氨基)戊酸2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16S,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的制备 [1073] 以与实施例24步骤1类似的方式,使用(8S,9R,10S,11S,13S,14S,16S,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑17‑(2‑羟基乙酰基)‑10,13,16‑三甲基‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16, 17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑3‑酮而非(6α,9α,11β,16β)‑6,9‑二氟‑11,21‑二羟基‑16,17‑[(1‑甲基亚乙基)双(氧基)]孕‑1,4‑二烯‑3,20‑二酮制备标题化合物,获得了白色固体+ + (0.527g,产率:87.4%)。MS(m/z):C32H46FNO8的[M+H]计算值,592.32;实验值,614.2[M+Na] 。 1 H NMR(400MHz,DMSO)δ7.29(d,J=10.1Hz,1H),6.79(s,1H),6.22(dd,J=10.1,1.7Hz, 1H),6.01(s,1H),5.38(d,J=4.3Hz,1H),5.13(s,1H),5.02(d,J=17.6Hz,1H),4.79(d,J= 17.6Hz,1H),4.19–4.11(m,1H),2.97–2.82(m,3H),2.67–2.57(m,1H),2.43–2.27(m,4H), 2.22–2.07(m,2H),1.83–1.72(m,1H),1.70–1.46(m,7H),1.45–1.29(m,12H),1.12–1.01(m, 1H),0.87(d,J=11.8Hz,3H),0.77(t,J=14.3Hz,3H)。 [1074] 步骤2:5‑氨基戊酸2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16S,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑ 17‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐的制备 [1075] 以与实施例24步骤2类似的方式,使用5‑((叔丁氧基羰基)氨基)戊酸2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16S,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10, 11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯而非6‑((叔丁氧基羰基)氨基)己酸2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αaS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2', 1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白+ 1 色固体(0.14g,产率:93.6%)。MS(m/z):C27H38FNO6的[M+H]计算值,492.27;实验值,492.2。H NMR(400MHz,D2O)δ7.58(d,J=10.1Hz,1H),6.47(d,J=10.2Hz,1H),6.28(s,1H),5.11(q,J =18.1Hz,2H),4.45(d,J=8.6Hz,1H),3.09(s,2H),2.84–2.68(m,1H),2.67–2.47(m,4H), 2.32–2.14(m,2H),2.06–1.97(m,1H),1.96–1.71(m,6H),1.70–1.39(m,4H),1.34–1.26(m, 1H),1.03(s,3H),0.92(d,J=7.2Hz,3H)。 [1076] 步骤3:HA和5‑氨基戊酸2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16S,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [1077] 以与实施例34步骤3类似的方式,使用5‑氨基戊酸2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16S,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15, 16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯而非4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,13S, 14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体。(透明质酸钠 1 MW 500KDa 0.475g,产率:83.9%,DSR=24%)。H NMR(400MHz,D2O)δ7.58(d,J=9.9Hz, 0.24H),6.46(d,J=10.3Hz,0.24H),6.26(s,0.24H),5.09(d,J=8.6Hz,0.48H),4.68–4.23 (m,2.24H),4.21–2.90(m,10.72H),2.86–2.37(m,1.2H),2.31–1.77(m,5.16H),1.76–1.17(m,1.2H),1.02(s,0.72H),0.91(d,J=7.2Hz,0.72H)。 [1078] 实施例81 [1079] HA和6‑氨基己酸2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [1080] [1081] 步骤1:6‑((叔丁氧基羰基)氨基)己酸2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的制备 [1082] 以与实施例23步骤1类似的方式,使用(8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑17‑(2‑羟基乙酰基)‑10,13‑二甲基‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑ 3H‑环戊[a]菲‑3‑酮而非(6α,9α,11β,16β)‑6,9‑二氟‑11,21‑二羟基‑16,17‑[(1‑甲基亚乙基)双(氧基)]孕‑1,4‑二烯‑3,20‑二酮制备标题化合物,获得了白色固体(0.436g,产率: + 1 91.2%)。MS(m/z):C32H47NO8的[M+H] 计算值,574.33;实验值,473.2(M+H‑100)。H NMR(400MHz,DMSO)δ7.33(d,J=10.1Hz,1H),6.76(t,J=5.3Hz,1H),6.17(dd,J=10.1,1.7Hz, 1H),5.92(s,1H),5.40(s,1H),5.07(d,J=17.6Hz,1H),4.74(dd,J=15.0,10.7Hz,2H), 4.32(d,J=24.0Hz,1H),2.90(dd,J=12.9,6.6Hz,2H),2.63–2.43(m,2H),2.42–2.26(m, 3H),2.06(dd,J=19.2,8.7Hz,2H),1.89(dd,J=13.2,2.9Hz,1H),1.72–1.51(m,5H),1.50– 1.24(m,18H),1.10–0.98(m,1H),0.97–0.81(m,1H),0.79(s,3H)。 [1083] 步骤2:6‑氨基己酸2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐的制备 [1084] 以与实施例24步骤2类似的方式,使用6‑((叔丁氧基羰基)氨基)己酸2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14, 15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯而非6‑((叔丁氧基羰基)氨基)己酸 2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αaS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1, 2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体(0.34g,产+ 率:94.4%)。MS(m/z):C27H39NO6的[M+H]计算值,474.28;实验值,474.2。 [1085] 步骤3:HA和6‑氨基己酸2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑ 2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [1086] 以与实施例34步骤3类似的方式,使用6‑氨基己酸2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑ 3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯而非4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体。(透明质酸钠MW 500KDa 1 0.236g,产率:78.6%,DSR=5%)。H NMR(400MHz,D2O)δ7.66–7.53(m,0.05H),6.47–6.32(m,0.05H),6.23–6.11(m,0.05H),5.19–4.88(m,0.1H),4.69–4.32(m,2.05H),4.31–3.08(m,10.1H),2.75–2.18(m,0.25H),2.17–1.08(m,3.85H),1.03–0.85(m,0.25H)。 [1087] 实施例82 [1088] HA和6‑氨基己酸2‑((6S,8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑6,10,13‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [1089] [1090] 步骤1:6‑((叔丁氧基羰基)氨基)己酸2‑((6S,8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑6,10,13‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的制备 [1091] 以与实施例23步骤1类似的方式,使用(6S,8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑17‑(2‑羟基乙酰基)‑6,10,13‑三甲基‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑3‑酮而非(6α,9α,11β,16β)‑6,9‑二氟‑11,21‑二羟基‑16,17‑[(1‑甲基亚乙基)双(氧基)]孕‑1,4‑二烯‑3,20‑二酮制备标题化合物,获得了白色固体(0.38g,产+ 1率:80.8%)。MS(m/z):C33H49NO8的[M+H]计算值,588.35;实验值,488.3(M+H‑100)。H NMR(400MHz,DMSO)δ7.33(d,J=10.1Hz,1H),6.76(t,J=5.3Hz,1H),6.18(dd,J=10.1,1.6Hz, 1H),5.83(s,1H),5.39(s,1H),5.06(d,J=17.6Hz,1H),4.74(dd,J=14.2,10.7Hz,2H), 4.29(s,1H),2.90(dd,J=12.9,6.6Hz,2H),2.72–2.60(m,1H),2.51–2.44(m,1H),2.37(t,J=7.3Hz,2H),2.08(ddt,J=12.2,8.8,4.0Hz,2H),1.87(dt,J=16.7,8.5Hz,1H),1.74– 1.51(m,5H),1.50–1.23(m,18H),1.05(d,J=6.3Hz,3H),0.91–0.84(m,1H),0.83–0.76(m, 3H),0.68(dd,J=24.9,12.7Hz,1H)。 [1092] 步骤2:6‑氨基己酸2‑((6S,8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑6,10,13‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑ 2‑氧代乙酯盐酸盐的制备 [1093] 以与实施例24步骤2类似的方式,使用6‑((叔丁氧基羰基)氨基)己酸2‑((6S,8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑6,10,13‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12, 13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯而非6‑((叔丁氧基羰基)氨基)己酸2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αaS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10, 10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体+ (0.27g,产率:85.7%)。MS(m/z):C28H41NO6的[M+H]计算值,488.29;实验值,488.2。 [1094] 步骤3:HA和6‑氨基己酸2‑((6S,8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑6,10,13‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [1095] 以与实施例34步骤3类似的方式,使用6‑氨基己酸2‑((6S,8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑6,10,13‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯而非4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S, 17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑ 3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体。(透明质酸钠MW 1 500KDa 0.096g,产率:32%,DSR=12%)。H NMR(400MHz,D2O)δ7.62–7.51(m,0.12H),6.45– 6.36(m,0.12H),6.12(s,0.12H),5.22–4.94(m,0.24H),4.71–4.38(m,2.12H),4.21–3.02 (m,10.24H),2.94–2.35(m,0.48H),2.34–1.37(m,5.04H),1.25–1.09(m,0.36),1.06–0.81(m,0.6H)。 [1096] 实施例83 [1097] HA和6‑氨基己酸2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑ 17‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [1098] [1099] 步骤1:6‑((叔丁氧基羰基)氨基)己酸2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的制备 [1100] 以与实施例23步骤1类似的方式,使用(8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑17‑(2‑羟基乙酰基)‑10,13,16‑三甲基‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16, 17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑3‑酮而非(6α,9α,11β,16β)‑6,9‑二氟‑11,21‑二羟基‑16,17‑[(1‑甲基亚乙基)双(氧基)]孕‑1,4‑二烯‑3,20‑二酮制备标题化合物,获得了白色固体+ (0.35g,产率:75.5%)。MS(m/z):C33H48FNO8的[M+H]计算值,606.34;实验值,506.3(M+H‑ 1 100)。H NMR(400MHz,DMSO)δ7.29(d,J=10.1Hz,1H),6.75(t,J=5.3Hz,1H),6.22(dd,J= 10.1,1.7Hz,1H),6.01(s,1H),5.42–5.23(m,2H),4.97(d,J=17.7Hz,1H),4.82(d,J= 17.7Hz,1H),4.21–4.10(m,1H),2.90(dd,J=12.9,6.6Hz,2H),2.71–2.54(m,1H),2.48– 2.25(m,4H),2.18–2.04(m,2H),1.98–1.76(m,2H),1.64–1.21(m,21H),1.12–0.98(m,4H), 0.97–0.77(m,3H)。 [1101] 步骤2:6‑氨基己酸2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑ 17‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐的制备 [1102] 以与实施例24步骤2类似的方式,使用6‑((叔丁氧基羰基)氨基)己酸2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10, 11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯而非6‑((叔丁氧基羰基)氨基)己酸2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αaS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2', 1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白+ 1 色固体(0.24g,产率:85.6%)。MS(m/z):C28H40FNO6的[M+H]计算值,506.28;实验值,506.2。H NMR(400MHz,D2O)δ7.45(d,J=10.1Hz,1H),6.35(dd,J=10.1,1.8Hz,1H),6.15(s,1H), 5.07–4.87(m,2H),4.31(d,J=9.3Hz,1H),3.00–2.86(m,2H),2.75–2.62(m,1H),2.58–2.33(m,4H),2.18–2.07(m,2H),1.93(dd,J=20.8,11.5Hz,3H),1.69–1.54(m,5H),1.53–1.34 (m,6H),1.19–1.09(m,1H),1.02(d,J=7.3Hz,3H),0.89(d,J=23.5Hz,3H)。 [1103] 步骤3:HA和6‑氨基己酸2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [1104] 以与实施例34步骤3类似的方式使用6‑氨基己酸2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15, 16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯而非4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,13S, 14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体。(透明质酸钠 1 MW 500KDa 0.223g,产率:74.3%,DSR=8%)。H NMR(400MHz,D2O)δ7.62–7.51(m,0.08H), 6.49–6.40(m,0.08H),6.28(s,0.08H),5.18–4.92(m,0.16H),4.71–4.30(m,2.08H),4.29– 2.88(m,10.16H),2.86–2.31(m,0.4H),2.30–1.21(m,4.36H),1.13(d,J=6.9Hz,0.24H), 1.04(s,0.24H)。 [1105] 实施例84 [1106] HA和6‑氨基己酸2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16S,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑ 17‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [1107] [1108] 步骤1:6‑((叔丁氧基羰基)氨基)己酸2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16S,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的制备 [1109] 以与实施例23步骤1类似的方式,使用(8S,9R,10S,11S,13S,14S,16S,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑17‑(2‑羟基乙酰基)‑10,13,16‑三甲基‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16, 17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑3‑酮而非(6α,9α,11β,16β)‑6,9‑二氟‑11,21‑二羟基‑16,17‑[(1‑甲基亚乙基)双(氧基)]孕‑1,4‑二烯‑3,20‑二酮制备标题化合物,获得了白色固体+ (0.42g,产率:90.7%)。MS(m/z):C33H48FNO8的[M+H]计算值,606.34;实验值,506.3(M+H‑ 1 100)。H NMR(400MHz,DMSO)δ7.30(d,J=10.1Hz,1H),6.76(t,J=5.3Hz,1H),6.23(dd,J= 10.1,1.8Hz,1H),6.01(s,1H),5.40(d,J=4.2Hz,1H),5.15(s,1H),5.02(d,J=17.6Hz, 1H),4.80(d,J=17.6Hz,1H),4.19–4.11(m,1H),2.97–2.83(m,3H),2.61(tt,J=20.7, 10.5Hz,1H),2.44–2.27(m,4H),2.24–2.07(m,2H),1.82–1.72(m,1H),1.71–1.45(m,7H), 1.44–1.23(m,14H),1.10–1.04(m,1H),0.94–0.82(m,3H),0.81–0.73(m,3H)。 [1110] 步骤2:6‑氨基己酸2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16S,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑ 17‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐的制备 [1111] 以与实施例24步骤2类似的方式,使用6‑((叔丁氧基羰基)氨基)己酸2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16S,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10, 11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯而非6‑((叔丁氧基羰基)氨基)己酸2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αaS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2', 1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白+ 色固体(0.3g,产率:85.7%)。MS(m/z):C28H40FNO6的[M+H] 计算值,506.28;实验值,506.2。 1 H NMR(400MHz,D2O)δ7.53(d,J=10.0Hz,1H),6.42(d,J=9.9Hz,1H),6.19(d,J=14.1Hz, 1H),5.04(t,J=11.5Hz,2H),4.36(t,J=17.3Hz,1H),3.03(t,J=7.4Hz,3H),2.66(d,J= 27.1Hz,1H),2.62–2.36(m,4H),2.35–2.05(m,2H),1.88(d,J=32.2Hz,1H),1.84–1.61(m, 6H),1.60–1.37(m,6H),1.23(m,1H),1.12–0.74(m,6H)。 [1112] 步骤3:HA和6‑氨基己酸2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16S,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [1113] 以与实施例34步骤3类似的方式,使用6‑氨基己酸2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16S,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15, 16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯而非4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,13S, 14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体。(透明质酸钠 1 MW 500KDa 0.196g,产率:65.3%,DSR=5%)。H NMR(400MHz,D2O)δ7.60–7.53(m,0.05H), 6.51–6.44(m,0.05H),6.27(s,0.05H),5.12–4.89(m,0.1H),4.69–4.28(m,2.05H),4.27– 2.99(m,10.15H),2.98–2.34(m,0.25H),2.33–1.27(m,3.8H),1.02(s,0.15H),0.93(s, 0.15H)。 [1114] 实施例85 [1115] HA和(2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸5‑氨基戊酯的缀合物的制备 [1116] [1117] 步骤1:(5‑(((2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)戊基)氨基甲酸叔丁酯的制备 [1118] 以与实施例62步骤1类似的方式,使用1H‑咪唑‑1‑甲酸5‑((叔丁氧基羰基)氨基)戊酯而非1H‑咪唑‑1‑甲酸4‑((叔丁氧基羰基)氨基)丁酯制备标题化合物,获得了白色固体+ +(0.227g,产率:48.5%)。MS(m/z):C32H47NO9的[M+H]计算值,590.33;实验值,612.3[M+Na]。 [1119] 步骤2:(2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸5‑氨基戊酯盐酸盐的制备 [1120] 以与实施例24步骤2类似的方式,使用(5‑(((2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)戊基)甲酸叔丁酯而非6‑((叔丁氧基羰基)氨基)己酸2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αaS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10, 10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体+ 1 (0.17g,产率:90%)。MS(m/z):C27H39NO7的[M+H]计算值,490.27;实验值,490.2。H NMR(400MHz,D2O)δ7.56(d,J=10.0Hz,1H),6.35(d,J=9.8Hz,1H),6.13(s,1H),5.16(d,J= 18.1Hz,1H),4.99(d,J=18.2Hz,1H),4.51(s,1H),4.25(s,2H),3.14–2.94(m,2H),2.72– 2.51(m,2H),2.42(d,J=9.7Hz,1H),2.14(t,J=19.6Hz,2H),1.94(d,J=11.7Hz,1H), 1.89–1.06(m,16H),0.87(s,3H)。 [1121] 步骤3:HA和(2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸5‑氨基戊酯的缀合物的制备 [1122] 以与实施例34步骤3类似的方式,使用(2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸5‑氨基戊酯而非4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S, 17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑ 3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体。(透明质酸钠MW 1 500KDa 0.333g,产率:73.6%,DSR=23%)。H NMR(400MHz,D2O)δ7.74–7.56(m,0.23H), 6.54–6.38(m,0.23H),6.19(s,0.23H),5.28–4.96(m,0.46H),4.75–4.18(m,2.69H),4.16– 2.92(m,10.46H),2.91–1.06(m,8.06H),0.94(s,0.69H)。 [1123] 实施例86 [1124] HA和(2‑((6S,8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑6,10,13‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸5‑氨基戊酯的缀合物的制备 [1125] [1126] 步骤1:(5‑(((2‑((6S,8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑6,10,13‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)戊基)氨基甲酸叔丁酯的制备 [1127] 以与实施例68步骤1类似的方式,使用1H‑咪唑‑1‑甲酸5‑((叔丁氧基羰基)氨基)戊酯而非1H‑咪唑‑1‑甲酸4‑((叔丁氧基羰基)氨基)丁酯制备标题化合物,获得了白色固体+ +(0.109g,产率:22.4%)。MS(m/z):C33H49NO9的[M+H]计算值,604.34;实验值,626.4[M+Na]。 [1128] 步骤2:(2‑((6S,8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑6,10,13‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸5‑氨基戊酯盐酸盐的制备 [1129] 以与实施例24步骤2类似的方式,使用(5‑(((2‑((6S,8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑6,10,13‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)戊基)甲酸叔丁酯而非6‑((叔丁氧基羰基)氨基)己酸2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αaS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α, 8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2', 1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白+ 1 色固体(0.09g,产率:99%)。MS(m/z):C28H41NO7的[M+H] 计算值,504.29;实验值,504.2。H NMR(400MHz,D2O)δ7.60(d,J=10.0Hz,1H),6.40(dd,J=10.0,1.7Hz,1H),6.13(s,1H), 5.19(d,J=18.1Hz,1H),5.02(d,J=18.1Hz,1H),4.53(d,J=2.5Hz,1H),4.37–4.22(m, 2H),3.06(dd,J=9.3,5.7Hz,2H),2.82–2.73(m,1H),2.64(t,J=13.3Hz,1H),2.33–2.17 (m,2H),1.96(d,J=10.7Hz,1H),1.89–1.39(m,14H),1.24–1.03(m,4H),0.96–0.80(m,4H)。 [1130] 步骤3:HA和(2‑((6S,8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑6,10,13‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸5‑氨基戊酯的缀合物的制备 [1131] 以与实施例34步骤3类似的方式,使用(2‑((6S,8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑6,10,13‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸5‑氨基戊酯而非4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,13S, 14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体。(透明质酸钠 1 MW 500KDa 0.144g,产率:73.8%,DSR=27%)。H NMR(400MHz,D2O)δ7.72–7.54(m,0.27H), 6.49–6.32(m,0.27H),6.17(s,0.27H),5.30–4.92(m,0.54H),4.78–4.19(m,2.81H),4.18– 3.97(m,10.54H),3.96–1.31(m,8.13H),1.30–1.04(m,1.08H),1.03–0.77(m,1.08H)。 [1132] 实施例87 [1133] HA和(2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸5‑氨基戊酯的缀合物的制备 [1134] [1135] 步骤1:(5‑(((2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)戊基)氨基甲酸叔丁酯的制备 [1136] 以与实施例70步骤1类似的方式,使用1H‑咪唑‑1‑甲酸5‑((叔丁氧基羰基)氨基)戊酯而非1H‑咪唑‑1‑甲酸4‑((叔丁氧基羰基)氨基)丁酯制备标题化合物,获得了白色固体+ +(0.242g,产率:47.4%)。MS(m/z):C33H48FNO9的[M+H]计算值,622.33;实验值,644.3[M+Na] 。 1 H NMR(400MHz,D2O)δ7.28(d,J=10.1Hz,1H),6.75(d,J=5.3Hz,1H),6.21(dd,J=10.1, 1.8Hz,1H),6.00(s,1H),5.34(s,1H),5.29(d,J=3.6Hz,1H),4.97(d,J=17.8Hz,1H),4.79 (d,J=17.8Hz,1H),4.18–4.00(m,3H),3.39–3.24(m,2H),2.62(td,J=13.4,5.9Hz,1H), 2.47–2.28(m,2H),2.16–2.02(m,2H),2.01–1.76(m,3H),1.67–1.54(m,2H),1.50(d,J= 13.8Hz,3H),1.45–1.24(m,15H),1.11–0.97(m,4H),0.92(s,3H)。 [1137] 步骤2:(2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸5‑氨基戊酯盐酸盐的制备 [1138] 以与实施例24步骤2类似的方式,使用(5‑(((2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16, 17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)戊基)甲酸叔丁酯而非6‑((叔丁氧基羰基)氨基)己酸2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αaS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑ 7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合+ 物,获得了白色固体(0.2g,产率:98%)。MS(m/z):C28H40FNO7的[M+H] 计算值,522.28;实验 1 值,522.3。H NMR(400MHz,D2O)δ7.54(d,J=10.0Hz,1H),6.43(d,J=10.1Hz,1H),6.22(s, 1H),5.07(q,J=18.3Hz,2H),4.41(t,J=15.5Hz,1H),4.31–4.19(m,2H),3.05(d,J= 9.7Hz,2H),2.73(dd,J=10.8,5.7Hz,1H),2.66–2.39(m,2H),2.20(t,J=11.1Hz,2H),2.04 (d,J=10.0Hz,3H),1.90–1.67(m,4H),1.66–1.40(m,7H),1.36–1.17(m,1H),1.16–1.06(m, 3H),0.97(d,J=46.3Hz,3H)。 [1139] 步骤3:HA和(2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸5‑氨基戊酯的缀合物的制备 [1140] 以与实施例34步骤3类似的方式,使用(2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸5‑氨基戊酯而非4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R, 13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16, 17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体。(透明质 1 酸钠MW 500KDa 0.277g,产率:68.5%,DSR=12%)。H NMR(400MHz,D2O)δ7.59(d,J= 10.1Hz,0.12H),6.48(d,J=10.2Hz,0.12H),6.29(s,0.12H),5.12(q,J=18.4Hz,0.24H), 4.73–4.22(m,2.36H),4.21–3.01(m,10.24H),3.00–2.49(m,0.36H),2.35–1.90(m,3.6H), 1.86–1.41(m,1.32H),1.36–0.93(m,0.84H)。 [1141] 实施例88 [1142] HA和(2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16S,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸5‑氨基戊酯的缀合物的制备 [1143] [1144] 步骤1:(5‑(((2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16S,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)戊基)氨基甲酸叔丁酯的制备 [1145] 以与实施例72步骤1类似的方式,使用1H‑咪唑‑1‑甲酸5‑((叔丁氧基羰基)氨基)戊酯而非1H‑咪唑‑1‑甲酸4‑((叔丁氧基羰基)氨基)丁酯制备标题化合物,获得了白色固体+ +(0.149g,产率:29.2%)。MS(m/z):C33H48FNO9的[M+H]计算值,622.33;实验值,644.3[M+Na] 。 1 H NMR(400MHz,DMSO)δ7.30(d,J=10.1Hz,1H),6.81–6.69(m,1H),6.23(dd,J=10.1, 1.7Hz,1H),6.01(s,1H),5.41(d,J=4.4Hz,1H),5.18(s,1H),5.07(d,J=17.8Hz,1H),4.77 (d,J=17.7Hz,1H),4.12(dt,J=13.0,5.8Hz,3H),3.42–3.33(m,2H),2.70–2.56(m,1H), 2.44–2.27(m,2H),2.22–2.06(m,2H),1.84–1.73(m,1H),1.72–1.20(m,22H),1.08(ddd,J= 11.7,7.7,3.7Hz,1H),0.90(s,3H),0.80(d,J=7.2Hz,3H)。 [1146] 步骤2:(2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16S,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸5‑氨基戊酯盐酸盐的制备 [1147] 以与实施例24步骤2类似的方式,使用(5‑(((2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16S,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16, 17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)戊基)甲酸叔丁酯而非6‑((叔丁氧基羰基)氨基)己酸2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αaS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑ 7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合+ 物,获得了白色固体(0.12g,产率:96%)。MS(m/z):C28H40FNO7的[M+H]计算值,522.28;实验 1 值,522.3。H NMR(400MHz,D2O)δ7.90(s,4H),7.33(d,J=10.1Hz,1H),6.21(dd,J=10.1, 1.8Hz,1H),5.99(s,1H),5.48(d,J=4.8Hz,1H),5.19(s,1H),5.08(d,J=17.8Hz,1H),4.77 (d,J=17.7Hz,1H),4.19–4.05(m,3H),2.87(ddd,J=11.1,6.6,4.1Hz,1H),2.83–2.70(m, 1H),2.62(ddd,J=18.7,16.3,9.8Hz,1H),2.44–2.26(m,2H),2.24–2.03(m,2H),1.74(dd,J=22.4,16.4Hz,1H),1.68–1.20(m,13H),1.06(ddd,J=11.9,8.1,3.9Hz,1H),0.98–0.83 (m,3H),0.78(d,J=7.2Hz,3H)。 [1148] 步骤3:HA和(2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16S,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸5‑氨基戊酯的缀合物的制备 [1149] 以与实施例34步骤3类似的方式,使用(2‑((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16S,17R)‑9‑氟‑11,17‑二羟基‑10,13,16‑三甲基‑3‑氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸5‑氨基戊酯而非4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R, 13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16, 17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体。(透明质 1 酸钠MW 500KDa 0.223g,产率:74.3%,DSR=22%)。H NMR(400MHz,D2O)δ7.66–7.54(m, 0.22H),6.56–6.44(m,0.22H),6.28(s,0.22H),5.07(d,J=84.3Hz,0.44H),4.79–4.20(m, 2.66H),4.19–2.84(m,10.44H),2.83–1.86(m,4.76H),1.83–1.14(m,2.42H),1.09–0.79(m, 1.54H)。 [1150] 实施例89 [1151] HA和(2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸5‑氨基戊酯的缀合物的制备 [1152] [1153] 步骤1:(5‑(((2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)戊基)氨基甲酸叔丁酯的制备 [1154] 以与实施例60步骤1类似的方式,使用1H‑咪唑‑1‑甲酸5‑((叔丁氧基羰基)氨基)戊酯而非1H‑咪唑‑1‑甲酸4‑((叔丁氧基羰基)氨基)丁酯制备标题化合物,获得了白色固体+ +(0.126g,产率:27%)。MS(m/z):C32H45NO9的[M+H]计算值,588.31;实验值,610.2[M+Na]。 [1155] 步骤2:(2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸5‑氨基戊酯盐酸盐的制备 [1156] 以与实施例24步骤2类似的方式,使用(5‑(((2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)戊基)甲酸叔丁酯而非6‑((叔丁氧基羰基)氨基)己酸2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αaS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体+ 1(0.1g,产率:95%)。MS(m/z):C27H37NO7的[M+H] 计算值,488.26;实验值,488.3。H NMR(400MHz,D2O)δ7.89(d,J=10.2Hz,1H),6.33(d,J=9.9Hz,1H),6.25(s,1H),5.07(dt,J= 37.9,18.9Hz,2H),4.29(m,2H),3.06(t,J=7.5Hz,2H),2.95(d,J=12.3Hz,1H),2.78–2.57 (m,1H),2.53(d,J=13.1Hz,1H),2.49–2.15(m,5H),1.97(s,1H),1.90–1.69(m,4H),1.68– 1.12(m,9H),0.71(s,3H)。 [1157] 步骤3:HA和(2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸5‑氨基戊酯的缀合物的制备 [1158] 以与实施例34步骤3类似的方式,使用(2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑ 17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸5‑氨基戊酯而非4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体。(透明质酸钠MW 500KDa 1 0.159g,产率:62.5%,DSR=24%)。HNMR(400MHz,D2O)δ7.96–7.86(m,0.24H),6.35(d,J= 8.0Hz,0.24H),6.26(s,0.24H),5.30–4.94(m,0.48H),4.79–4.18(m,2.48H),4.15–2.88(m, 10.72H),2.85–1.73(m,5.88H),1.72–1.10(m,2.16H),0.73(s,0.72H)。 [1159] 实施例90 [1160] HA和(2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸5‑氨基戊酯的缀合物的制备 [1161] [1162] [1163] 步骤1:(5‑(((2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)戊基)氨基甲酸叔丁酯的制备 [1164] 以与实施例64步骤1类似的方式,使用1H‑咪唑‑1‑甲酸5‑((叔丁氧基羰基)氨基)戊酯而非1H‑咪唑‑1‑甲酸4‑((叔丁氧基羰基)氨基)丁酯制备标题化合物,获得了白色固体+ +(0.093g,产率:19.7%)。MS(m/z):C32H49NO9的[M+H]计算值,592.34;实验值,614.3[M+Na]。 [1165] 步骤2:(2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸5‑氨基戊酯盐酸盐的制备 [1166] 以与实施例24步骤2类似的方式,使用(5‑(((2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑ 1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)戊基)甲酸叔丁酯而非6‑((叔丁氧基羰基)氨基)己酸2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αaS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2', 1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白+ 1 色固体(0.07g,产率:90%)。MS(m/z):C27H41NO7的[M+H] 计算值,492.29;实验值,492.2。H NMR(400MHz,D2O)δ5.81(s,1H),5.25–5.16(m,1H),5.10–5.00(m,1H),4.53(d,J=2.8Hz, 1H),4.35–4.21(m,2H),3.06(t,J=7.5Hz,2H),2.74–2.54(m,4H),2.53–2.32(m,2H),2.31– 1.68(m,11H),1.67–1.57(m,1H),1.56–1.35(m,6H),1.28–1.09(m,2H),0.92(s,3H)。 [1167] 步骤3:HA和(2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸5‑氨基戊酯的缀合物的制备 [1168] 以与实施例34步骤3类似的方式,使用(2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸5‑氨基戊酯而非4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,13S, 14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体。(透明质酸钠 1 MW 500KDa,0.116g,产率:76.3%,DSR=18%)。H NMR(400MHz,D2O)δ5.83(s,0.18H),5.39– 4.97(m,0.36H),4.73–4.17(m,2.54H),4.15–3.03(m,10.36H),3.01–1.29(m,7.32H),1.28– 1.07(m,0.36H),0.91(s,0.54H)。 [1169] 实施例91 [1170] HA和(2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸5‑氨基戊酯的缀合物的制备 [1171] [1172] 步骤1:(5‑(((2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)戊基)氨基甲酸叔丁酯的制备 [1173] 以与实施例66步骤1类似的方式,使用1H‑咪唑‑1‑甲酸5‑((叔丁氧基羰基)氨基)戊酯而非1H‑咪唑‑1‑甲酸4‑((叔丁氧基羰基)氨基)丁酯制备标题化合物,获得了白色固体+ +(0.068g,产率:14.5%)。MS(m/z):C32H47NO9的[M+H]计算值,590.33;实验值,612.4[M+Na]。 [1174] 步骤2:(2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸 5‑氨基戊酯盐酸盐的制备 [1175] 以与实施例24步骤2类似的方式,使用(5‑(((2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙氧基)羰基)氧基)戊基)甲酸叔丁酯而非6‑((叔丁氧基羰基)氨基)己酸2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αaS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1': 4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固+ 1 体(0.05g,产率:88%)。MS(m/z):C27H39NO7的[M+H]计算值,490.27;实验值,490.3。H NMR(400MHz,D2O)δ5.86(s,1H),5.19(d,J=18.3Hz,1H),5.02(d,J=18.3Hz,1H),4.28(t,J= 5.3Hz,2H),3.06(t,J=7.5Hz,2H),2.98(d,J=12.2Hz,1H),2.77–2.50(m,4H),2.49–2.25 (m,5H),2.24–1.98(m,2H),1.97–1.69(m,6H),1.66–1.34(m,8H),0.68(s,3H)。 [1176] 步骤3:HA和(2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸5‑氨基戊酯的缀合物的制备 [1177] 以与实施例34步骤3类似的方式,使用(2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙基)碳酸5‑氨基戊酯而非4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S, 17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑ 3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体。(透明质酸钠MW 1 500KDa 0.092g,产率:71.8%,DSR=30%)。H NMR(400MHz,D2O)δ5.88(s,0.3H),5.25–4.84(m,0.6H),4.73–4.18(m,2.6H),4.16–3.04(m,10.9H),2.99–0.85(m,10.5H),0.68(s, 0.9H)。 [1178] 实施例92 [1179] HA和6‑氨基己酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [1180] [1181] 步骤1:6‑((叔丁氧基羰基)氨基)己酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑ 17‑基)‑2‑氧代乙酯的制备 [1182] 以与实施例23步骤1类似的方式,使用(8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑17‑(2‑羟基乙酰基)‑10,13‑二甲基‑7,8,9,10,12,13,14,15,16,17‑十氢‑3H‑环戊[a]菲‑3,11(6H)‑二酮而非(6α,9α,11β,16β)‑6,9‑二氟‑11,21‑二羟基‑16,17‑[(1‑甲基亚乙基)双(氧基)]孕‑1,4‑二烯‑3,20‑二酮制备标题化合物,获得了白色固体(0.4g,产率:80.4%)。MS+ + 1(m/z):C32H45NO8的[M+H] 计算值,572.31;实验值,594.2[M+Na]。H NMR(400MHz,DMSO)δ 7.62(d,J=10.2Hz,1H),6.74(s,1H),6.12(dd,J=10.3,1.9Hz,1H),6.02(s,1H),5.81(s, 1H),4.92(d,J=17.7Hz,1H),4.81(d,J=17.7Hz,1H),2.90(dd,J=12.4,5.9Hz,3H),2.57– 2.52(m,1H),2.42–2.31(m,4H),2.20(dd,J=20.1,8.5Hz,2H),2.04(ddd,J=17.7,10.3, 4.4Hz,2H),1.84–1.72(m,1H),1.71–1.63(m,1H),1.59–1.49(m,2H),1.43–1.33(m,15H), 1.32–1.15(m,4H),0.52(s,3H)。 [1183] 步骤2:6‑氨基己酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐的制备 [1184] 以与实施例24步骤2类似的方式,使用6‑((叔丁氧基羰基)氨基)己酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15, 16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯而非6‑((叔丁氧基羰基)氨基)己酸2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αaS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑ 4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体(0.31g,产+ 1 率:93.9%)。MS(m/z):C27H37NO6的[M+H] 计算值,472.26;实验值,472.2。H NMR(400MHz,D2O)δ7.89(d,J=10.2Hz,1H),6.33(dd,J=10.2,2.0Hz,1H),6.24(s,1H),5.12(d,J= 18.1Hz,1H),5.02(d,J=18.1Hz,1H),3.06(t,J=7.5Hz,2H),2.95(d,J=12.2Hz,1H), 2.76–2.50(m,5H),2.48–2.34(m,2H),2.33–2.16(m,3H),1.98(ddd,J=16.2,10.8,3.1Hz, 1H),1.89–1.66(m,5H),1.65–1.43(m,6H),1.42–1.27(m,1H),0.69(d,J=10.3Hz,3H)。 [1185] 步骤3:HA和6‑氨基己酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [1186] 以与实施例34步骤3类似的方式,使用6‑氨基己酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯而非4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10, 13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体。(透明质酸钠MW 500KDa 0.211g,产率: 1 70.3%,DSR=14%)。H NMR(400MHz,D2O)δ7.98–7.80(m,0.14H),6.32(s,0.14H),6.25(s, 0.14H),5.13–4.95(m,0.28H),4.76–4.34(m,2H),4.23–3.00(m,10.42H),2.64–2.37(m, 1.4H),2.36–1.72(m,3.84H),1.67–1.47(m,0.84H),1.46–1.04(m,0.14H),0.72(s,0.42H)。 [1187] 实施例93 [1188] HA和6‑氨基己酸2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [1189] [1190] 步骤1:6‑((叔丁氧基羰基)氨基)己酸2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的制备 [1191] 以与实施例23步骤1类似的方式,使用(8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑17‑(2‑羟基乙酰基)‑10,13‑二甲基‑1,2,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑3H‑环戊[a]菲‑3‑酮而非(6α,9α,11β,16β)‑6,9‑二氟‑11,21‑二羟基‑16,17‑[(1‑甲基亚乙基)双(氧基)]孕‑1,4‑二烯‑3,20‑二酮制备标题化合物,获得了白色固体(0.41g,产+ + 率:82.8%)。MS(m/z):C32H49NO8的[M+H]计算值,576.35;实验值,598.2[M+Na]。 [1192] 步骤2:6‑氨基己酸2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐的制备 [1193] 以与实施例24步骤2类似的方式,使用6‑((叔丁氧基羰基)氨基)己酸2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12, 13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯而非6‑((叔丁氧基羰基)氨基)己酸2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αaS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10, 10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1,2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体+ 1 (0.33g,产率:97.4%)。MS(m/z):C27H41NO6的[M+H]计算值,476.29;实验值,476.2。H NMR(400MHz,D2O)δ5.72(s,1H),5.03(dd,J=36.5,17.9Hz,2H),4.44(t,J=6.5Hz,1H),3.04– 2.89(m,2H),2.65–2.45(m,6H),2.40–2.23(m,2H),2.19–2.10(m,1H),2.09–1.73(m,3H), 1.72–1.61(m,6H),1.59–1.48(m,1H),1.47–1.30(m,7H),1.16–0.98(m,2H),0.83(d,J= 25.7Hz,3H)。 [1194] 步骤3:HA和6‑氨基己酸2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)‑11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [1195] 以与实施例34步骤3类似的方式,使用6‑氨基己酸2‑((8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)11,17‑二羟基‑10,13‑二甲基‑3‑氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯而非4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体。(透明质酸钠MW 500KDa 1 0.228g,产率:76%,DSR=10%)。H NMR(400MHz,D2O)δ5.82(s,0.1H),4.97–4.87(m,0.2H), 4.72–4.29(m,2.1H),4.18–3.12(m,10.2H),2.64–2.34(m,0.6H),2.27–1.69(m,3.6H), 1.66–1.28(m,1.4H),1.24–1.03(m,0.2H),0.89(s,0.3H)。 [1196] 实施例94 [1197] HA和6‑氨基己酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [1198] [1199] 步骤1:6‑((叔丁氧基羰基)氨基)己酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的制备 [1200] 以与实施例23步骤1类似的方式,使用(8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑17‑(2‑羟基乙酰基)‑10,13‑二甲基‑1,6,7,8,9,10,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑3,11(2H)‑二酮而非(6α,9α,11β,16β)‑6,9‑二氟‑11,21‑二羟基‑16,17‑[(1‑甲基亚乙基)双(氧基)]孕‑1,4‑二烯‑3,20‑二酮制备标题化合物,获得了白色固体(0.403g,产率:+ + 81.2%)。MS(m/z):C32H47NO8的[M+H]计算值,574.33;实验值,596.2[M+Na]。 [1201] 步骤2:6‑氨基己酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯盐酸盐的制备 [1202] 以与实施例24步骤2类似的方式,使用6‑((叔丁氧基羰基)氨基)己酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14, 15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯而非6‑((叔丁氧基羰基)氨基)己酸 2‑((2S,6αS,6βR,7S,8αaS,8βS,11αR,12αS,12βS)‑2,6β‑二氟‑7‑羟基‑6α,8α,10,10‑四甲基‑4‑氧代‑1,2,4,6α,6β,7,8,8α,11α,12,12α,12β‑十二氢‑8βH‑萘并[2',1':4,5]茚并[1, 2‑d][1,3]二氧杂环戊烯‑8β‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体(0.317g,+ 1 产率:95.2%)。MS(m/z):C27H39NO6的[M+H]计算值,474.28;实验值,474.2。H NMR(400MHz,D2O)δ5.87(s,1H),5.21–4.90(m,2H),3.10–2.93(m,3H),2.75–2.53(m,6H),2.52–2.28(m, 5H),2.21–1.98(m,3H),1.89–1.70(m,6H),1.65–1.26(m,7H),0.67(s,3H)。 [1203] 步骤3:HA和6‑氨基己酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯的缀合物的制备 [1204] 以与实施例34步骤3类似的方式,使用6‑氨基己酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十四氢‑ 1H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯而非4‑氨基丁酸2‑((8S,9S,10R,13S,14S,17R)‑17‑羟基‑10,13‑二甲基‑3,11‑二氧代‑6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑3H‑环戊[a]菲‑17‑基)‑2‑氧代乙酯制备标题化合物,获得了白色固体。(透明质酸钠MW 500KDa 0.24g, 1 产率:80%,DSR=16%)。H NMR(400MHz,D2O)δ5.87(s,0.16H),4.99–4.86(m,0.32H),4.72– 4.35(m,2H),4.28–2.94(m,10.48H),2.71–2.31(m,1.76H),2.30–1.71(m,4.44H),1.70– 1.12(m,1.12H),0.67(s,0.48H)。 [1205] 实施例95 [1206] 药物递送系统的药物释放 [1207] 方法 [1208] 使用测试化合物进行药物释放和稳定性实验。在Millipore Ultra‑0.5ml 30k超滤离心管中用10mM PBS缓冲液(pH=7.4)制备约2.5±1.0mg/mL(关于缀合物)每种测 试化合物的溶液。将溶液在室温下保持膨胀持续1小时,并且然后在37℃下以100rpm放置在振荡器中进行连续实验。在每天的同一时间点,将样品以10000rpm离心1小时。将等分试样转移到HPLC小瓶中以进行分析。向离心管中添加0.4mL的10mM PBS缓冲液并继续实验。 [1209] 对于每个时间点的HPLC分析,导出色谱图中所有相关峰的峰面积,并计算游离药物的浓度。基于游离药物的总量和实验天数计算游离药物的平均释放。计算方程如下。 [1210] [1211] 样品降解率基于缀合药物的浓度和取代度(NMR)相对于实验的初始起点(在t=0时)进行计算。计算方程如下。 [1212] [1213] 结果 [1214] 表1示出了本公开的示例性药物递送系统的药物释放速率的结果。 [1215] 表1 [1216] [1217] 实施例96 [1218] 体内全身暴露和关节保持测定 [1219] 在此研究中采用LEWIS大鼠。基于体重,对动物进行随机分配并分为G1组(9只大鼠)和G2组(9只大鼠)。通过每个关节单独注射100μl的溶液与1.5mg的实施例2(HA MW 1000KDa)或实施例2(HA MW 2000KDa),分别用实施例2(HA MW 1000KDa)和实施例2(HA MW 2000KDa)的关节内注射处理G1组和G2组中的大鼠。 [1220] 在注射3天、7天、14天、30天和60后,从每组的这些大鼠采集血液样品。用EDTA‑K2抗凝管采集每个关节大约1.0mL血液样品,以分析血浆中的曲安奈德的水平。除了全身暴露评估之外,还采集膝关节样品,以估计关节组织中的曲安奈德的水平。在最后时间点(14天、30天和60天),采集血液样品,然后将动物处死,解剖两个膝关节并取出滑膜。在用生理盐水冲洗,并用滤纸滤干之后,对滑膜进行称重。将所有样品储存在‑70~‑80℃下,直到通过LC‑MS/MS进行分析为止。 [1221] 图1和图2中分别示出了在施用单独IA剂量的实施例2(HA MW 1000KDa)和实施例2(HA MW 2000KDa)之后曲安奈德的单独血浆和滑膜时间‑浓度数据(对于血浆,曲安奈德的 浓度以ng/ml为单位表示;对于滑膜,曲安奈德的浓度以ng/g为单位表示)。结果表明,血浆中的曲安奈德的浓度远低于滑膜中的曲安奈德的浓度,并且仍可以在IA注射2个月后检测 到曲安奈德。 [1222] 前述说明书被认为仅是对本公开的原理的说明。此外,由于许多修改和变化对于所属领域的技术人员来说将显而易见,所以并不期望将本发明限于如上文所述的所示确切 构造和过程。因此,所有合适的修改和等效方案可以被视为属于由所附权利要求书限定的 本发明的范围内。 |