一类白介素-1受体相关激酶的双功能嵌合体杂环化合物及其制备方法和用途 |
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| 申请号 | CN202311527126.X | 申请日 | 2023-11-16 | 公开(公告)号 | CN118047800A | 公开(公告)日 | 2024-05-17 |
| 申请人 | 石药集团中奇制药技术(石家庄)有限公司; | 发明人 | 张璠; 赵传武; 张朝再; 柴晓玲; 张雪娇; 郭文敏; 张安琪; 张佳楠; 杨金路; 董胜昆; | ||||
| 摘要 | 本 发明 涉及一种白介素‑1受体相关激酶4(IRAK4)的双功能嵌合体杂环化合物、其制备方法及其用途。本发明设如式(I)所示的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、 溶剂 合物、氘代化物结构新颖，通过招募IRAK4到泛素连接酶，从而促进IRAK4的泛素化及蛋白酶体对其的降解。研究结果显示，这些化合物表现出较好的IRAK4降解活性，可用于 治疗 由IRAK4介导的 疾病 ，属于该靶点比较有应用前景的化合物。 | ||||||
| 权利要求 | 1.一种如式(I)所示的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物、 |
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| 说明书全文 | 一类白介素‑1受体相关激酶的双功能嵌合体杂环化合物及其制备方法和用途 技术领域[0001] 本发明涉及一种泛素连接酶(E3)配体及其所合成的白介素‑1受体相关激酶4(IRAK4)双功能嵌合体的杂环化合物、其制备方法及其用途。 背景技术[0002] 泛素‑蛋白酶体系统(UPS)是细胞内蛋白质降解的主要途径，可以参与人体细胞内80％的蛋白降解过程。利用UPS系统降解蛋白分为三步：第一步腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)被 泛素激活酶(E1)消耗，产生活化的泛素腺苷酸，该泛素腺苷酸在E1活性位点内通过共价键 附着在催化的半胱氨酸上，然后转化为硫脂中间体；随后发生转硫醇反应，泛素从E1的催化 的半胱氨酸上转移到泛素偶联酶(E2)的催化的半胱氨酸上；最后，泛素通过泛素连接酶 (E3)的作用转移到底物蛋白上，在泛素的羟基端和靶蛋白的赖氨酸侧链之间形成一个异肽 键。上述过程叫做蛋白的泛素化，最终被泛素分子标记的底物蛋白被26S蛋白酶复合体识别 并酶解。 [0003] E3是蛋白质泛素化途径中的第三个酶，它有连接靶蛋白和特定E2的能力并将靶蛋白泛素化，最终达到将靶蛋白降解的目的。通常情况下，E3可以将靶蛋白多泛素化，即加上 多个泛素分子，形成多泛素链，而带有多泛素链的蛋白质可以被蛋白酶体所识别并降解。根 据作用机制，E3主要分为两大类，HECT(homologous to E6AP C terminus)结构域家族和 RING‑finger结构域家族。HECT结构域在将泛素转移到底物之前与泛素形成催化作用所必 须的硫酯键从而发挥作用。RING结构域为E2和底物提供居留位点，催化E2直接将泛素转移 到底物上。 [0004] E3很重要的一个特性是它能够特异性的识别靶蛋白。在此特性基础上，蛋白降解靶向嵌合体(PROTACs)技术被开发并受到广泛关注。PROTAC是一种利用泛素‑蛋白酶体系统 对靶蛋白进行降解的药物开发技术。在结构上，PROTAC包括三个部分：一是E3配体，二是靶 蛋白配体，三是将前两个活性配体连接起来的连接子(Linker)。PROTAC的靶蛋白配体和靶 蛋白结合，E3配体和细胞内的E3的底物结合区结合，通过连接子将靶蛋白拉近到泛素连接 酶旁，通过泛素‑蛋白酶体系统(UPS)将靶蛋白降解。 [0005] 近期，应用最为广泛的E3配体之一是cereblon(CRBN)配体。2010年，cereblon(CRBN)作为DDBI‑CRBNE3复合物的一个组成部分，被发现是沙利度胺、来那度胺和泊马度胺 的主要分子靶点。由此可以将度胺类分子作为CRBN类E3的配体，通过合理设计合成PROTAC 分子。沙利度胺是目前使用最广泛的E3配体，但它在体内会被缓慢水解。另外，沙利度胺作 为一种分子胶，会募集IKZF1和GSPT1等底物，会导致PROTAC分子在免疫类应用中的脱靶效 应。因此新型E3配体的开发势在必行。 [0006] 目前，C4 Therapeutics公司开发了一类由酰胺基、磺酰胺基或含氮杂环连接戊二酰亚胺的E3配体，可用于靶蛋白的降解(WO2017197051A1、WO2017197046A1)。以及一类由N/ O‑连接的降解决定子，用此E3配体合成的BRD9降解剂展现了良好的口服生物利用度 (WO2018237026 A1)。另外，C4Therapeutics公司还开发了一类对CRBN有高亲和力的桥环戊 二酰亚胺衍生物(WO2019099868 A1、WO2021178920A1)。 [0007] Arvinas公司开发的E3配体包含杂芳基戊二酰亚胺和带有N链的脲嘧啶。这类E3配体与CRBN有一定的亲和力(US20180215731 A1)。 [0008] Kymera公司开发了N取代的喹唑啉二酮结构的独特E3配体，及与戊二酰亚胺连接双并环和三并环的结构(WO2020173440 A1、WO2020010177 A1)。 [0009] IRAK4是白细胞介素‑1受体(IL‑1R)和toll样受体(Toll‑Like Receptors，TLRs)信号通路下游的关键调节因子。其通过IL‑1R/TLRs信号通路引起促炎细胞因子基因的转录 和表达，触发先天性免疫反应，而异常的IL‑1R/TLRs传导涉及多种自身免疫性疾病，因此 IRAK4成为自身免疫疾病的有效靶点；且MyD88作为IL‑1R/TLRs信号通路的关键调节因子， 使得IRAK4在MyD88突变的淋巴系统肿瘤中发挥重要作用。IRAK4作为降解靶点可为治疗自 身免疫性疾病、炎症和肿瘤相关的疾病提供新的治疗方案。 [0010] 近几年，蛋白降解靶向嵌合体(PROTACs)作为能够诱导靶蛋白降解的双功能小分子受到了广泛关注。IRAK4的特异性降解可通过应用能够诱导靶蛋白降解的PROTACs双功能 小分子招募IRAK4到E3泛素连接酶。 [0011] 因此，研发出一款新的与CRBN有良好亲和力的E3配体，并合成出IRAK4‑PROTAC分子，在治疗IRAK4介导的相关疾病上具有良好的应用前景。 发明内容[0012] 本发明的目的一方面在于提供一种白介素‑1受体相关激酶4(IRAK4)双功能嵌合体的杂环化合物、其制备方法和用途；另一方面还提供了一种与普遍表达的E3连接酶蛋白 cereblon(CRBN)结合的化合物及其制备方法和用途。 [0013] 第一方面，本发明提供了一种如下式(Ⅰ)所示的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物、氘代化物： [0014] [0015] 其中，式(Ⅰ)化合物任选自如下式(I‑1)化合物或式(I‑2)化合物： [0016] [0017] 其中： [0018] 环A、A'分别独立地选自3‑14元杂环基、3‑14元环烷基、6‑14元芳基或5‑14元杂芳基，所述杂环基、杂芳基具有1‑4个独立的选自N、O、S的杂原子； [0019] 环B、B'分别独立地选自6‑14元芳基或5‑14元杂芳基，所述杂芳基具有1‑4个独立的选自N、O、S的杂原子； [0020] W1、W2、W1'、W2'分别独立地选自CH或N； [0021] 每一R1、R2、R1’、R2’分别独立地选自氢、C1‑6烷基、卤素、‑RfC(O)R、‑RfNR2、氰基、‑NO2、‑COOH、‑RfC(O)OH、‑OR、‑SR、‑N(R)2、‑S(O)2R、‑S(O)2N(R)2、‑S(O)R、‑S(O)(NR)R、‑P(O)(OR)2、‑P(O)(N(R)2)2、‑CF2(R)、‑CF3、‑CR2(OR)、‑CR2(N(R)2)、‑C(O)R、‑C(O)OR、‑C(O)N(R)2、‑C(O)N(R)OR、‑OC(O)R、‑OC(O)N(R)2、‑N(R)C(O)OR、‑N(R)C(O)R、‑N(R)C(O)N(R)2、‑N(R)S(O)2R、3‑7元环烷基、3‑7元杂环基、6‑12元芳基或5‑12元杂芳基； [0022] m、m'分别独立地选自0、1、2、3、4、5、6、7或8； [0023] n、n'分别独立地选自0、1、2、3、4、5或6； [0024] 每一R分别独立地选自氢、C1‑6烷基、C2‑12烯基、C2‑12炔基、苯基、3‑7元环烷基、3‑6元环烯基、4‑7元杂环基或5‑6元杂芳基；其中所述的杂环基或杂芳基具有1‑4个选自N、O、S的杂原子； [0025] Rf选自氢、C1‑6烷基、C2‑12烯基、C2‑12炔基、苯基、3‑7元环烷基、3‑6元环烯基、4‑7元杂环基或5‑6元杂芳基；其中所述的杂环基或杂芳基具有1‑4个选自N、O、S的杂原子； [0026] L、L'表示‑L1‑L2‑L3‑L4‑L5‑L6‑L7‑L8‑，其中L8连接LBM，所述的L1、L2、L3、L4、L5、L6、L7、L8分别独立地选自键、3‑12元环烷基、6‑12元芳基、3‑12元杂环基、5‑12元杂芳基、C1‑12亚烷基、C2‑12亚烯基、C2‑12亚炔基、‑C(O)‑、‑C(O)O‑、‑OC(O)‑、‑O‑、‑N(Rb)‑、‑N(Rb)‑(CH2)p‑、‑S‑、‑C(S)‑、‑C(S)‑O‑、‑S(O)2‑、‑S(O)(Rb)＝N‑、‑S(O)2NH‑、‑C(O)‑N(Rb)‑、‑C＝N‑、‑O‑C(O)‑N(Rb)‑、‑O‑C(O)‑O‑、‑CF2‑、‑CF(Rb)‑、其中所述的3‑12元环烷基、6‑ 12元芳基、3‑12元杂环基和5‑12元杂芳基可任选地分别独立地被一个或多个Rc取代，所述 的C1‑12亚烷基、C2‑12亚烯基和C2‑12亚炔基可任选地分别独立地被一个或多个Rd取代；且不同时为键； [0027] Rb选自氢或C1‑6烷基； [0028] 每一Rc分别独立地选自氧代、‑N＝Rg、‑C(Rh)＝N、‑S(O)＝N‑、亚磺酰胺、卤素、硝基、氰基、C1‑6烷基、C2‑6烯基、C2‑6炔基、3‑15元环烷基、C1‑8卤代烷基、6‑12元芳基、5‑12元杂芳基、3‑12元杂环基、‑O‑Rc1、‑C(O)‑Rc1、‑C(O)O‑Rc1、‑C(O)‑N(Rc1)(Rc1)、‑N(Rc1)(Rc1)、‑N(Rc1)C(O)O‑Rc1、‑N(Rc1)C(O)‑Rc1、‑N(Rc1)C(O)N(Rc1)(Rc1)、‑N(Rc1)S(O)2(Rc1)、‑N(Rc1)S(O)2N(Rc1)(Rc1)、‑N(Rc1)S(O)2O(Rc1)、‑OC(O)Rc1、‑OC(O)N(Rc1)(Rc1)、‑Si(Rc1)3、‑S‑Rc1、‑S(O)Rc1、‑S(O)(NH)Rc1、‑S(O)2Rc1或‑S(O)2N(Rc1)(Rc1)，其中所述C1‑6烷基、C2‑6烯基、C2‑6炔基、3‑ 15元环烷基、C1‑8卤代烷基、6‑12元芳基、5‑12元杂芳基、3‑12元杂环基可被1‑3个Rc2取代； [0029] 每一Rc1分别独立地选自H或C1‑6烷基； [0030] 每一Rc2分别独立地选自卤素、氧代、氰基、羟基、C1‑6烷基、3‑8元环烷基或‑O‑C1‑6烷基，其中所述C1‑6烷基、‑O‑C1‑6烷基、3‑8元环烷基可被1‑3个氟原子取代； [0031] 每一Rd分别独立地选自卤素、氧代、氰基、羟基、C1‑6烷基、3‑8元环烷基或‑O‑C1‑6烷基，其中所述C1‑6烷基、‑O‑C1‑6烷基可被1‑3个氟原子取代； [0032] Rg选自C1‑6烷基或4‑12元环烷基； [0033] Rh选自氢、C1‑6烷基、4‑6元环烷基、6‑8元芳基、4‑11元杂环基或5‑8元杂芳基； [0034] p选自0、1、2、3、4、5、6、7或8； [0035] IRAK4为与IRAK4靶蛋白结合部分。 [0036] 在本发明的一个优选实施方式中，所述环A、A'分别独立地选自3‑12元杂环基、4‑7元单环烷基或6‑11元并环烷基。 [0037] 在本发明的一个优选实施方式中，所述环A、A'分别独立地选自3‑7元杂环基、4‑6元单环烷基或8‑10元并环烷基。 [0038] 在本发明的一个优选实施方式中，所述环A、A'分别独立地选自饱和的3‑7元杂环基、4‑6元单环烷基或部分饱和的8‑10元并环烷基。 [0039] 在本发明的一个优选实施方式中，所述环A、A'分别独立地选自饱和的4‑6元杂环基、4‑6元单环烷基或部分饱和的9‑10元并环烷基。 [0040] 在本发明的一个优选实施方式中，所述环A、A'分别独立地选自： [0041] [0042] 其中环A**端与L相连，环A'中**端不存在。 [0043] 在本发明的一个优选实施方式中，所述环A、A'分别独立地选自： [0044] [0045] 其中环A**端与L相连，环A'中**端不存在。 [0046] 在本发明的一个优选实施方式中，所述环B、B'分别独立地选自6‑12元芳基或5‑12元杂芳基。 [0047] 在本发明的一个优选实施方式中，所述环B、B'分别独立地选自6‑10元芳基或5‑10元杂芳基。 [0048] 在本发明的一个优选实施方式中，所述环B、B'分别独立地选自6‑8元芳基或5‑6元杂芳基。 [0049] 在本发明的一个优选实施方式中，所述环B、B'分别独立地选自苯基或吡啶。 [0050] 在本发明的一个优选实施方式中，所述W1、W1'选自N，W2、W2'选自CH。 [0051] 在本发明的一个优选实施方式中，所述R1、R2、R1’、R2’分别独立地选自氢、卤素、氰基、‑NO2、‑COOH、‑CF2C1‑6烷基、‑CF3、C1‑6烷基、‑OC1‑6烷基、‑C(O)OC1‑6烷基、‑C(O)C1‑6烷基、‑N(C1‑6烷基)2；m、m'分别独立地选自0、1、2、3、4或5；n、n'分别独立地选自0、1、2、3或4。 [0052] 在本发明的一个优选实施方式中，所述R1、R2、R1’、R2’分别独立地选自氢、卤素、氰基、‑NO2、‑COOH、‑CF2C1‑3烷基、‑CF3、C1‑3烷基、‑OC1‑3烷基、‑C(O)OC1‑3烷基、‑C(O)C1‑3烷基、‑N(C1‑3烷基)2；m、m'分别独立地选自0、1或2；n、n'分别独立地选自0、1或2。 [0053] 在本发明的一个优选实施方式中，所述R1、R2、R1’、R2’分别独立地选自氢、卤素、氰基、C1‑3烷基；m、m'分别独立地选自1；n、n'分别独立地选自1。 [0054] 在本发明的一个优选实施方式中，所述R1、R2、R1’、R2’分别独立地选自氢、氟、氯、溴、氰基或甲基，m、m'分别独立地选自1，n、n'分别独立地选自1。 [0055] 在本发明的一个优选实施方式中，所述R1、R1’选自氢，m、m'选自1，R2、R2’分别独立地选自氢、氟、氯、溴、氰基或甲基，n、n'分别独立地选自1。 [0056] 在本发明的一个优选实施方式中，所述LBM选自如下结构式或其立体异构体： [0057] [0058] 在本发明的一个优选实施方式中，所述LBM选自如下结构式或其立体异构体： [0059] [0060] 在本发明的一个优选实施方式中，所述的L、L'分别独立地表示‑L1‑L2‑L3‑L4‑L5‑L6‑L7‑L8‑，其中L8连接LBM，所述的L1、L2、L3、L4、L5、L6、L7和L8分别独立地选自键、3‑12元环烷基、6‑8元芳基、3‑12元杂环基、5‑8元杂芳基、C1‑8亚烷基、C2‑8亚烯基、C2‑8亚炔基、‑C(O)‑、‑C(O)O‑、‑OC(O)‑、‑O‑、‑N(Rb)‑、‑N(Rb)‑(CH2)p‑、‑S‑、‑C(S)‑、‑C(S)‑O‑、‑S(O)2‑、‑S(O)(Rb)＝N‑、‑S(O)2NH‑、‑C(O)‑N(Rb)‑、‑C＝N‑、‑O‑C(O)‑N(Rb)‑、‑O‑C(O)‑O‑、‑CF2‑、‑CF(Rb)‑、其中所述的3‑7元环烷基、6‑8元芳基、3‑12元杂环基和5‑ 8元杂芳基可任选地分别独立地被一个或多个Rc取代，所述的C1‑6亚烷基、C2‑8亚烯基和C2‑8 亚炔基可任选地分别独立地被一个或多个Rd取代； [0061] Rb选自氢或C1‑6烷基； [0062] 每一Rc分别独立地选自氧代、‑N＝Rg、‑C(Rh)＝N、‑S(O)＝N‑、亚磺酰胺、卤素、硝基、氰基、C1‑6烷基、C2‑6烯基、C2‑6炔基、3‑7元环烷基、C1‑6卤代烷基、6‑8元芳基、5‑8元杂芳基、3‑8元杂环基； [0063] 每一Rd分别独立地选自卤素、氧代、氰基、羟基、C1‑6烷基、3‑8元环烷基或‑O‑C1‑6烷基，其中所述C1‑6烷基、‑O‑C1‑6烷基可被1‑3个氟原子取代； [0064] Rg选自C1‑6烷基或4‑12元环烷基； [0065] Rh选自氢、C1‑6烷基、4‑6元环烷基、6‑8元芳基、4‑11元杂环基或5‑8元杂芳基； [0066] p选自0、1、2、3、4或5。 [0067] 在本发明的一个优选实施方式中，所述的L1、L2、L3、L4、L5、L6、L7和L8分别独立地选自键、3‑7元环烷基、7‑11元螺环烷基、6‑8元芳基、4‑11元杂环基、5‑8元杂芳基、C1‑8亚烷基、C2‑4亚烯基、C2‑4亚炔基、‑C(O)‑、‑C(O)O‑、‑O‑、‑N(Rb)‑、‑N(Rb)‑(CH2)p‑、‑C(O)‑N(Rb)‑，其中所述的4‑7元环烷基、6‑8元芳基、4‑11元杂环基和5‑8元杂芳基可任选地分别独立地被一个或多个Rc取代，所述的亚烷基、亚烯基和亚炔基可任选地分别独立地被一个或多个Rd取代； [0068] Rb选自氢或C1‑6烷基； [0069] 每一Rc分别独立地选自氧代、‑N＝Rg、‑C(Rh)＝N、‑S(O)＝N‑、亚磺酰胺、卤素、硝基、氰基、C1‑6烷基、C2‑6烯基、C2‑6炔基、3‑7元环烷基、C1‑6卤代烷基、6‑8元芳基、5‑8元杂芳基、3‑8元杂环基； [0070] 每一Rd分别独立地选自卤素、氧代、氰基、羟基、C1‑6烷基、3‑8元环烷基或‑O‑C1‑6烷基，其中所述C1‑6烷基、‑O‑C1‑6烷基可被1‑3个氟原子取代； [0071] Rg选自C1‑3烷基或4‑8元环烷基； [0072] Rh选自氢、C1‑3烷基、4‑6元环烷基、6‑8元芳基、4‑7元杂环基或5‑6元杂芳基； [0073] p选自0、1、2或3。 [0074] 在本发明的一个优选实施方式中，所述的L1、L2、L3、L4、L5、L6、L7和L8分别独立地选自键、3‑7元单环烷基、7‑11元螺环烷基、6‑8元芳基、4‑7元单杂环基、7‑11元杂螺环基、5‑8元杂芳基、C1‑8亚烷基、C2‑4亚烯基、C2‑4亚炔基、‑C(O)‑、‑C(O)O‑、‑O‑、‑N(Rb)‑、‑N(Rb)‑(CH2)2‑、‑C(O)‑N(Rb)‑，Rb选自氢或C1‑6烷基。 [0075] 在本发明的一个优选实施方式中，所述的L1、L2、L3、L4、L5、L6、L7和L8分别独立地选自键、4‑7元单环烷基、7‑9元螺环烷基、6‑8元芳基、4‑7元单杂环基、7‑9元杂螺环基、C1‑7亚b烷基、C2‑4亚炔基、‑C(O)‑、‑O‑、‑N(R)‑、‑NH‑(CH2)2‑或‑C(O)‑NH‑，且L1、L2、L3、L4、L5、L6、L7和L8中至少2个不选自键，至少1个选自键4‑7元单环烷基、7‑11元螺环烷基或4‑11元杂环 基；Rb选自氢或C1‑3烷基。 [0076] 在本发明的一个优选实施方式中，所述的L1、L2、L3、L4、L5、L6、L7和L8分别独立地选自键、4‑7元单环烷基、7‑9元螺环烷基、6‑8元芳基、4‑7元单杂环基、7‑9元杂螺环基、C1‑7亚b烷基、C2‑4亚炔基、‑C(O)‑、‑O‑、‑N(R)‑、‑NH‑(CH2)2‑或‑C(O)‑NH‑，且L1、L2、L3、L4、L5、L6、L7和L8中至少2个不选自键，至少1个选自键4‑7元单环烷基、7‑11元螺环烷基、4‑11元杂环基 或C1‑6亚烷基；Rb选自氢或C1‑3烷基。 [0077] 在本发明的一个优选实施方式中，所述L1选自4‑7元单环烷基、7‑9元螺环烷基、4‑6元单杂环基、7‑9元杂螺环基或C1‑3亚烷基； [0078] L2、L3、L4、L5、L6、L7和L8分别独立地选自键、C1‑7亚烷基、C2‑4亚炔基、4‑7元单环烷b基、苯基、4‑6元单杂环基、7‑9元杂螺环基、‑C(O)‑、‑O‑、‑N(R)‑、‑NH‑(CH2)2‑或‑C(O)‑NH‑，且L2、L3、L4、L5、L6、L7和L8中至少1个不选自键； [0079] Rb选自氢、甲基或乙基。 [0080] 在本发明的一个优选实施方式中，所述L1选自4‑7元单环烷基、7‑9元螺环烷基、4‑6元单杂环基、7‑9元杂螺环基或C1‑3亚烷基； [0081] L2、L3、L4、L5、L6、L7和L8分别独立地选自键、C1‑7亚烷基、4‑7元单环烷基、苯基、4‑6b元单杂环基、7‑9元杂螺环基、‑C(O)‑、‑O‑、‑N(R)‑、‑NH‑(CH2)2‑或‑C(O)‑NH‑，且L2、L3、L4、L5、L6、L7和L8中至少1个不选自键； [0082] Rb选自氢或甲基。 [0083] 在本发明的一个优选实施方式中，所述L1选自4‑7元单环烷基、7‑9元螺环烷基、4‑6元单杂环基、7‑9元杂螺环基或C1‑3亚烷基； [0084] L2、L3、L4、L5、L6、L7和L8分别独立地选自键、C1‑6亚烷基、4‑7元单环烷基、苯基、4‑6b元单杂环基、7‑9元杂螺环基、‑C(O)‑、‑O‑、‑N(R)‑、‑NH‑(CH2)2‑或‑C(O)‑NH‑，且L2、L3、L4、L5、L6、L7和L8中至少1个不选自键； [0085] Rb选自氢或甲基。 [0086] 在本发明的一个优选实施方式中，所述L1选自5‑6元单环烷基、7‑8元螺环烷基、4‑6元单杂环基、7‑9元杂螺环基或C1‑3亚烷基； [0087] L2、L3、L4、L5、L6、L7和L8分别独立地选自键、C1‑3亚烷基、5‑6元单环烷基、苯基、4‑6b元单杂环基、7‑9元杂螺环基、‑C(O)‑、‑O‑、‑N(R)‑、‑NH‑(CH2)2‑或‑C(O)‑NH‑，且L2、L3、L4、L5、L6、L7和L8中至少1个不选自键； [0088] Rb选自氢或甲基。 [0089] 在本发明的一个优选实施方式中，所述L、L'选自如下所示的结构及其立体异构体： [0090] [0091] [0092] [0093] 在本发明的一个优选实施方式中，所述L、L'选自如下所示的结构及其立体异构体： [0094] [0095] [0096] 在本发明的一个优选实施方式中，所述IRAK4是式(II)化合物： [0097] [0098] 其中， [0099] X、Z1分别独立地选自CH或N； [0100] Z2选自O或S； [0101] 环C、环D分别独立地选自3‑12元杂环基、6‑14元芳基或5‑12元杂芳基，所述杂环基、杂芳基具有1‑4个独立的选自N、O、S的杂原子； [0102] 每一R3分别独立地选自氢、氰基、C1‑6烷基、卤素、‑NO2、‑ORa1、‑SRa1、‑N(Ra1)2、‑Sa1 a1 a1 a1 a1 a1 a1(O)2R 、‑S(O)2N(R )2、‑S(O)R 、‑S(O)(NR )R 、‑P(O)(OR )2、‑P(O)(N(R )2)2、‑CF2 a1 a1 a1 a1 a1 a1 a1 a1 (R )、‑CF3、‑C(R )2(OR )、‑C(R )2(N(R )2)、‑C(O)R 、‑C(O)OR 、‑C(O)N(R )2、‑C(O)Na1 a1 a1 a1 a1 a1 a1 a1 a1 (R )OR 、‑OC(O)R 、‑OC(O)N(R )2、‑N(R )C(O)OR 、‑N(R )C(O)R 、‑N(R )C(O)N a1 a1 a1 (R )2、‑N(R )S(O)2R 、3‑7元环烷基、3‑7元杂环基、6‑12元芳基或5‑12元杂芳基； [0103] f选自0、1、2、3、4、5、6、7或8； [0104] 每一Ra1分别独立地选自氢、C1‑6烷基、C2‑12烯基、C2‑12炔基、苯基、4‑7元环烷基、3‑6元环烯基、4‑7元杂环基或5‑6元杂芳基；其中所述的杂环基或杂芳基具有1‑4个选自N、O、S的杂原子； [0105] R4选自氢、C1‑6烷基、3‑8元环烷基、4‑8元杂环基、6‑12元芳基、5‑12元杂芳基、氨基或‑O‑C1‑6烷基，其中所述的C1‑6烷基、3‑8元环烷基、4‑8元杂环基、6‑12元芳基、5‑12元杂芳基、‑O‑C1‑6烷基可被一个或多个氟原子取代； [0106] 表示单键或双键。 [0107] 在本发明的一个优选实施方式中，所述IRAK4是式(II)化合物： [0108] 其中，环C选自5元杂环基或5元杂芳基，环D选自苯基或6元杂芳基； [0109] R3选自氢、氰基、甲基、F、羟基、氨基、‑C(O)NH2、‑C(O)N(CH3)2或7‑9元杂环烷基； [0110] f选自0或1； [0111] X、Z1各自独立地选自CH或N； [0112] R4选自氢、C1‑3烷基、氨基或甲氧基，其中，C1‑3烷基优选甲基、乙基、正丙基或异丙基。 [0113] 在本发明的一个优选实施方式中，所述IRAK4是式(II)化合物： [0114] 其中，环C选自吡咯，环D选自吡啶； [0115] R3选自氢或氰基； [0116] f选自0或1； [0117] X选自CH，Z1选自N； [0118] R4选自氢、甲基或乙基。 [0119] 在本发明的一个优选实施方式中，所述IRAK4是如下所示的结构或其立体异构体： [0120] [0121] 在本发明的一个优选实施方式中，所述IRAK4是式(III)化合物： [0122] [0123] 其中， [0124] 环E选自4‑10元环烷基、6‑8元芳基或4‑10元杂环基，所述杂环基具有1‑3个独立的选自N、O、S的杂原子； [0125] 环F选自苯基、4‑10元杂环基或5‑9元杂芳基，所述杂环基具有1‑3个独立的选自N、O、S的杂原子，杂芳基具有1‑4个独立的选自N、O、S的杂原子； [0126] 环G选自苯基或5‑10元杂芳基，所述杂芳基具有1‑5个独立的选自N、O、S的杂原子； [0127] 环H选自苯基、4‑10元环烷基、4‑11元杂环基或5‑6元杂芳基，所述杂环基具有1‑3个独立的选自N、O、S的杂原子，杂芳基具有1‑4个独立的选自N、O、S的杂原子； [0128] 每一R5、R6或R7分别独立地选自氢、氘、C1‑6烷基、卤素、氰基、‑NO2、‑COOH、‑Rb1C(O)b1 b1 b1 b1 b1 b1 b1 b1OH、‑OR 、‑SR 、‑N(R )2、‑S(O)2R 、‑S(O)2N(R )2、‑S(O)R 、‑S(O)(NR )R 、‑P(O)b1 b1 b1 b1 b1 b1 b1 (OR )2、‑P(O)(N(R )2)2、‑CF2(R )、‑CF3、‑CR2(OR )、‑CR 2(N(R )2)、‑C(O)R 、‑C(O)b1 b1 b1 b1 b1 b1 b1 b1 b1 OR 、‑C(O)N(R )2、‑C(O)N(R )OR 、‑OC(O)R 、‑OC(O)N(R )2、‑N(R )C(O)OR 、‑N(R )Cb1 b1 b1 b1 b1 (O)R 、‑N(R )C(O)N(R )2、‑N(R )S(O)2R ； [0129] 每一Rb1分别独立地选自氢、C1‑6烷基、C2‑12烯基、C2‑12炔基、苯基、3‑7元环烷基、3‑6元环烯基、4‑7元杂环基或5‑6元杂芳基；其中所述的杂环基或杂芳基具有1‑4个选自N、O、S的杂原子； [0130] g选自0、1或2； [0131] o选自0、1、2、3或4； [0132] Lc和Ld分别独立地选自键、C1‑3亚烷基、C2‑3亚烯基或C2‑3亚炔基，其中所述亚烷基、b2 b2亚烯基或亚炔基任选地被一个或多个‑O‑、‑C(O)‑、‑C(S)‑、‑C(R )2‑、‑CH(R )‑、‑CF2‑、‑Nb2 b2 b2 (R )‑、‑S‑、‑S(O)2‑或‑CR ＝CR ‑基团取代； [0133] 每一Rb2分别独立地选自氢、C1‑6烷基、C2‑12烯基或C2‑12炔基。 [0134] 在本发明的一个优选实施方式中，所述IRAK4是式(III)化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物、氘代化物： [0135] 其中：环E选自4‑8元环烷基、苯基或4‑8元杂环基，所述杂环基具有1‑3个独立的选自N、O、S的杂原子； [0136] 环F选自苯基、4‑7元杂环基或5‑6元杂芳基，所述杂环基具有1‑3个独立的选自N、O、S的杂原子，杂芳基具有1‑4个独立的选自N、O、S的杂原子； [0137] 环G选自苯基或9‑10元杂芳基，所述杂芳基具有1‑5个独立的选自N、O、S的杂原子； [0138] 环H选自5‑7元单杂环基、7‑9元杂桥环基或5‑6元杂芳基，所述单杂环基、杂桥环基具有1‑3个独立的选自N、O、S的杂原子，杂芳基具有1‑4个独立的选自N、O、S的杂原子； [0139] 每一R5、R6或R7分别独立地选自氢、氘、C1‑6烷基、卤素、氰基、‑NO2、‑COOH、‑CHF2或‑CF3； [0140] g选自0、1或2； [0141] o选自0、1、2、3或4； [0142] Lc和Ld分别独立地选自键、C1‑3亚烷基、C2‑3亚烯基或C2‑3亚炔基。 [0143] 在本发明的一个优选实施方式中，所述IRAK4是式(III)化合物， [0144] 其中：环E选自5‑6元环烷基或苯基； [0145] 环F选自5‑6元杂芳基，所述杂芳基具有1‑4个独立的选自N、O、S的杂原子； [0146] 环G选自9‑10元杂芳基，所述杂芳基具有1‑5个独立的选自N、O、S的杂原子； [0147] 环H选自5‑7元单杂环基或7‑9元杂桥环基，所述单杂环基、杂桥环基具有1‑3个独立的选自N、O、S的杂原子； [0148] 每一R5、R6或R7分别独立地选自氢、氘、甲基、乙基、异丙基、氟、氯、溴、氰基、‑NO2、‑COOH、‑CHF2或‑CF3； [0149] g选自1； [0150] o选自1； [0151] Lc和Ld分别独立地选自键、亚甲基、亚乙基、亚乙烯基或亚乙炔基。 [0152] 在本发明的一个优选实施方式中，所述IRAK4是式(III)化合物， [0153] 其中：环E选自5‑6元环烷基或苯基； [0154] 环F选自5‑6元杂芳基，所述杂芳基具有1‑4个独立的选自N、O、S的杂原子； [0155] 环G选自9‑10元杂芳基，所述杂芳基具有1‑5个独立的选自N、O、S的杂原子； [0156] 环H选自5‑7元单杂环基或7‑8元杂桥环基，所述单杂环基、杂桥环基具有1‑3个独立的选自N、O、S的杂原子； [0157] R5选自氢、氟、氯、溴、氰基、‑OH或‑NH2； [0158] R6选自氢、氘、甲基、乙基、异丙基、‑CHF2或‑CF3； [0159] R7选自氢； [0160] g选自1； [0161] o选自1； [0162] Lc和Ld分别独立地选自键或亚甲基。 [0163] 在本发明的一个优选实施方式中，所述IRAK4是式(III)化合物， [0164] 其中：环E选自5‑6元环烷基； [0165] 环F选自5‑6元杂芳基，所述杂芳基具有1‑4个独立的选自N、O、S的杂原子； [0166] 环G选自9‑10元杂芳基，所述杂芳基具有1‑5个独立的选自N、O、S的杂原子； [0167] 环H选自5‑7元单杂环基、7‑8元杂桥环基，所述单杂环基、杂桥环基具有1‑3个独立的选自N、O、S的杂原子； [0168] R5、R7选自氢； [0169] R6选自氢、氘、甲基、乙基、异丙基、‑CHF2或‑CF3； [0170] g选自1； [0171] o选自1； [0172] Lc和Ld分别独立地选自键或亚甲基。 [0173] 在本发明的一个优选实施方式中，所述IRAK4是式(III‑1)化合物， [0174] [0175] 其中，环E选自 [0176] 环H选自 [0177] R5选自氢、氟、氯、溴、氰基、‑OH或‑NH2； [0178] R6选自氢、氘、甲基、‑CHF2或‑CF3； [0179] 在本发明的一个优选实施方式中，所述IRAK4是式(III‑1)化合物， [0180] 其中，环E选自 [0181] 环H选自 [0182] R5选自氢； [0183] R6选自氢、氘、甲基、‑CHF2或‑CF3。 [0184] 在本发明的一个优选实施方式中，所述IRAK4是如下所示的结构或其立体异构体： [0185] [0186] 在本发明的一个优选实施方式中，所述IRAK4是式(IV)化合物： [0187] [0188] 其中， [0189] 环I选自6‑10元芳基、5‑10元杂芳基、3‑12元环烷基或含有1‑2个选自N、O或S杂原子的3‑12元杂环基，其中所述的芳基、杂芳基、环烷基和杂环基任选被一个或多个选自卤 素、氧代、氰基、氨基、羟基、C1‑6烷基、C1‑6卤代烷基、C1‑6羟基烷基或‑O‑(C1‑6烷基)的取代基取代； [0190] 环J选自6‑10元芳基或5‑10元杂芳基； [0191] R8选自氢、‑O‑(Cl‑6烷基)、‑O‑(3‑8元环烷基)、‑O‑(3‑8元杂环基)、‑O‑(6‑10元芳基)、‑O‑(5‑10元杂芳基)、‑N(C1‑6烷基)1‑2、‑NH(3‑8元环烷基)、‑NH(3‑8元杂环基)、‑NH‑(6‑10元芳基)、‑NH‑(5‑10元杂芳基)、C1‑6烷基、C2‑6烯基、C2‑6炔基、3‑8元环烷基、3‑8元杂环基、 6‑10元芳基或5‑10元杂芳基，所述烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基任选被1个或多个独 立的选自羟基、氨基、卤素或氰基的基团取代； [0192] R9选自氢、‑O‑(Cl‑6烷基)、‑O‑(3‑8元环烷基)、‑O‑(3‑8元杂环基)、‑O‑(6‑10元芳基)、‑O‑(5‑10元杂芳基)、‑N(C1‑6烷基)1‑2、‑NH(3‑8元环烷基)、‑NH(3‑8元杂环基)、‑NH(6‑10元芳基)、‑NH‑(5‑10元杂芳基)、C1‑6烷基、C2‑6烯基、C2‑6炔基、3‑8元环烷基、3‑8元杂环基、 6‑10元芳基或5‑10元杂芳基，所述烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基任选被1个或多个独 立的选自羟基、氨基、卤素或氰基的基团取代； [0193] R10选自氢或者C1‑6烷基； [0194] R11分别独立地选自氢、卤素、氰基、C1‑6烷基、‑O(Cl‑6烷基)、‑O‑(3‑6元环烷基)、3‑6元环烷基或5‑10元杂芳基，所述烷基、环烷基和杂芳基任选的被1个或多个选自卤素、羟基、氨基的基团取代； [0195] i选自1、2、3或4。 [0196] 在本发明的一个优选实施方式中，所述IRAK4是式(V)化合物： [0197] [0198] 其中， [0199] 环Q选自苯基或者5‑6元杂芳基，其中所述的杂芳基具有1‑3个选自N、O、S的杂原子； [0200] 环T选自苯基、4‑11元杂环基、5‑10元杂芳基，所述杂环基、杂芳基具有1‑4个独立的选自N、O、S的杂原子，所述杂环基和杂芳基任选的被1‑2个羰基基团取代； [0201] L9选自C1‑3亚烷基、C2‑3亚烯基、C2‑3亚炔基，其中所述的亚烷基、亚烯基或亚炔基任x z1 z1 z1 z1选的被1‑2个‑Cy ‑、‑O‑、‑S‑、‑C(O)‑、‑C(S)‑、‑CR 2‑、‑CR F‑、‑CF2‑、‑NR ‑、‑N＝CR ‑、‑z1 z1 z1 z1 z1 z1 z1 z1 z1 CR ＝CR ‑或‑S(O)2‑基团取代，其中‑CR 2‑、‑CR F‑、‑NR ‑、‑N＝CR ‑、‑CR ＝CR 中的R 12 13 可以与R 或R 形成饱和的或者部分饱和的4‑7元环烷基或者4‑7元杂环基，其中所述的杂 环基具有1‑3个选自N、O、S的杂原子； [0202] ‑Cyx‑选自3‑5元环烷基、3‑5元杂环基或者5元杂芳基，其中所述杂环基具有1‑3个x 选自N、O、S的杂原子，杂芳基具有1‑4个独立地选自N、O、S的杂原子，其中所述‑Cy ‑选择性地被1‑2个氧代基团取代； [0203] 每一个R12分别独立地选自氢、氘、Rz1、卤素、氰基、‑NO2、‑ORz2、‑SRz2、‑NRz22、‑S(O)z2 z2 z2 z2 z2 z2 z2 z2 z2 z22R 、‑S(O)2NR 2、‑S(O)R 、‑CFR 2、‑CF2R 、‑CF3、‑CR 2(OR )、‑CR 2(NR 2)、‑C(O)R 、‑Cz2 z2 z2 z2 z2 z2 z2 z2 (O)OR 、‑C(O)NR 2、‑C(S)NR 2、‑C(O)N(R )OR 、‑OC(O)R 、‑OC(O)NR 2、‑N(R )C(O) z2 z2 z2 z2 z2 z2 z2 z2 z2 OR 、‑N(R )C(O)R 、‑N(R )C(O)NR 2、‑N(R )S(O)2R 、‑N(O)R 2、‑OP(O)R 2、‑OP(O) z2 z2 z2 z2 z2 z2 z2 (OR )2、‑OP(O)(OR)NR 2、‑OP(O)(NR 2)2、‑P(O)R 2、‑SiR 3、‑Si(OR )R 2或 或 12 者两个R 选择性地连接形成一个5‑7元杂环基或5‑7元杂芳基，其中所述的杂环基或杂芳基 具有1‑3个独立地选自N、O、S的杂原子； [0204] 每一个R13分别独立地选自氢、氘、RZ1、卤素、氰基、‑NO2、‑ORz2、‑SRz2、‑NRz22、‑S(O)z2 z2 z2 z2 z2 z2 z2 z2 z2 z22R 、‑S(O)2NR 2、‑S(O)R 、‑CF2R 、‑CF3、‑CR 2(OR )、‑CR 2(NR 2)、‑C(O)R 、‑C(O)OR 、‑z2 z2 z2 z2 z2 z2 z2 z2 z2 C(O)NR 2、‑C(S)NR 2、‑C(O)N(R )OR 、‑OC(O)R 、‑OC(O)NR 2、‑N(R )C(O)OR 、‑N(R )Cz2 z2 z2 z2 z2 z2 z2 z2 z2 (O)R 、‑N(R )C(O)NR 2、‑N(R )S(O)2R 、‑OP(O)R 2、‑OP(O)(OR )2、‑OP(O)(OR )NR 2、‑z2 z2 OP(O)(NR 2)2、‑SiR 3、‑SF5或 [0205] Rz1分别独立地选自C1‑6烷基、C2‑6烯基、C2‑6炔基、苯基、4‑7元杂环基或5‑6元杂芳基，其中所述杂环基具有1‑2个选自N、O、S的杂原子，杂芳基具有1‑4个独立地选自N、O、S的杂原子； [0206] Rz2分别独立地选自C1‑6烷基、C2‑6烯基、C2‑6炔基、苯基、3‑7元杂环基或5‑6元杂芳基，其中所述杂环基具有1‑2个选自N、O、S的杂原子，杂芳基具有1‑4个独立地选自N、O、S的杂原子，或者同一个C或N上的两个基团结合形成一个4‑7元杂环基，此杂环基具有0‑3个选 自N、O、S的杂原子； [0207] x选自0、1、2、3或4； [0208] y选自0、1、2、3或4。 [0209] 在本发明的一个优选实施方式中，IRAK4选自： [0210] [0211] 第二方面，本发明提供了所述的化合物，及其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物、氘代化物，优选自如下化合物： [0212] [0213] [0214] [0215] [0216] 第三方面，本发明还提供一种药用组合物，其包含本发明所示化合物，或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物、氘代化物。 [0217] 本发明还提供一种药用组合物，其包含本发明所示化合物，或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物、氘代化物，以及药学上可接受的辅料。 [0219] 本发明所述化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物、氘代化物或者本发明所述药用组合物在用于制备预防和/或治疗由IRAK4介导的疾病、病症或病况 的药物时，其可单独使用或与其他药物活性成分组合使用。 [0220] 第五方面，本发明的目的还包括提供一种降解和/或抑制患者或生物样品中IRAK4蛋白激酶的方法，包括给予所述患者，或使所述生物样品与本发明所述化合物或其立体异 构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物、氘代化物或者本发明所述药用组合物接触。 [0221] 本发明所述化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物、氘代化物或者本发明所述药用组合物在降解和/或抑制患者或生物样品中IRAK蛋白激酶(优选 IRAK4)时，其可单独使用或与其他药物组合使用。 [0222] 第六方面，本发明的目的还包括提供一种预防和/或治疗由IRAK4介导的疾病、病症或病况的方法，其包括向患者施用预防和/或治疗有效剂量的本发明所述化合物或其立 体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物、氘代化物或本发明所述药物组合物。 [0223] 本发明所述化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物、氘代化物或者本发明所述药用组合物在预防和/或治疗由IRAK4介导的疾病、病症或病况时，其可 单独使用或与其他药物组合使用。 [0224] 第七方面，本发明的目的还包括提供本发明所述化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物、氘代化物或本发明所述药物组合物，其用于预防和/或治疗 由IRAK4介导的疾病、病症或病况。 [0225] 在本发明的一些实施方案中，所述由IRAK4介导的疾病、病症或病况为癌症、神经退化性疾病、病毒性疾病、自身免疫疾病、炎症性病症、遗传性病症、激素相关疾病、代谢病 症、与器官移植相关的病况、免疫缺陷病症、破坏性骨病、增生性病症、感染性疾病、与细胞 死亡相关的病况、凝血酶诱发的血小板凝集、肝病、涉及T细胞活化的病理性免疫病况、心血 管病症或中枢神经系统(CNS)病症。 [0226] 在本发明的一些实施方案中，所述癌症包括：良性或恶性肿瘤、实体肿瘤、脑癌、肾癌、肝癌、肾上腺癌、膀胱癌、乳癌、胃癌、胃肿瘤、卵巢癌、结肠癌、直肠癌、前列腺癌、胰腺癌、肺癌、阴道癌、宫颈癌、睾丸癌、泌尿生殖道癌、食道癌、喉癌、皮肤癌、骨癌、甲状腺癌、肉瘤、神经胶母细胞瘤、神经母细胞瘤、多发性骨髓瘤、胃肠癌、结肠直肠腺瘤、颈部和头部的 肿瘤、表皮过度增生、前列腺增生、瘤形成、上皮特征的瘤形成、腺瘤、腺癌、角化棘皮瘤、表 皮样癌、大细胞癌、非小细胞肺癌、淋巴瘤、霍奇金氏或非霍奇金氏淋巴瘤、滤泡癌、未分化 性瘤、乳头状癌、精原细胞瘤、黑素瘤、IL‑1驱动病症、MyD88驱动病症、冒烟型或惰性多发性 骨髓瘤以及血液恶性肿瘤。 [0227] 在本发明的一些实施方案中，所述血液恶性肿瘤包括：白血病、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性淋巴细胞性淋巴瘤、原发性渗出性淋巴 瘤、伯基特淋巴瘤/白血病、急性淋巴细胞性白血病、B细胞前淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞 淋巴瘤、瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症(WM)、脾边缘区淋巴瘤、多发性骨髓瘤、浆细胞瘤或 血管内大B细胞淋巴瘤、瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症、霍奇金氏淋巴瘤、原发性皮肤T细胞 淋巴瘤以及惰性多发性骨髓瘤。 [0228] 在本发明的一些实施方案中，所述神经退化性疾病包括：阿尔茨海默氏病、帕金森氏病、肌肉萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病、脑缺血以及由创伤性损伤、谷氨酸神经毒性、低氧 症、癫痫症、糖尿病治疗、代谢综合征、肥胖、器官移植和移植物抗宿主疾病造成的神经退化 性疾病； [0229] 在本发明的一些实施方案中，所述炎症性病症包括：眼过敏、结膜炎、干燥性角膜结膜炎、春季结膜炎、过敏性鼻炎；溶血性贫血、再生障碍性贫血、纯红细胞贫血、特发性血 小板减少或其中涉及自身免疫反应或具有自身免疫组分或病因的其它疾病：全身性红斑狼 疮、类风湿性关节炎、多软骨炎、硬皮病、韦格纳肉牙肿病、皮肌炎、慢性活动性肝炎、重症肌 无力、斯蒂文强森综合征、特发性脂肪泻、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病或其它自身免疫炎症 性肠病、肠易激综合征、乳糜泻、牙周炎、透明膜病、肾病、肾小球疾病、酒精性肝病、内分泌 眼病变、格雷夫斯病、结节病、肺泡炎、慢性过敏性肺炎、多发性硬化症、原发性胆汁性肝硬 化、葡萄膜炎(前葡萄膜炎和后葡萄膜炎)、舍格伦综合征、春季角膜结膜炎、肺间质纤维化、 牛皮癣性关节炎、全身性青少年性特发性关节炎、肾炎、憩室炎、间质性膀胱炎、肾小球肾炎 (具有和不具有肾病综合征，任选地包括特发性肾病综合征或微小变化肾病变)、慢性肉芽 肿病、子宫内膜异位症、钩端螺旋体病肾病、青光眼、视网膜病、胰腺炎、遗传性周期性发热 综合征、哮喘(过敏性、非过敏性、轻度、中度、重度、支气管炎或锻炼诱发的)、急性肺损伤、 急性呼吸窘迫综合征、嗜酸性粒细胞增多症、超敏反应、过敏反应、鼻窦炎、二氧化硅诱导的 疾病、慢性阻塞性肺病COPD(包括COPD引起的减少损伤、气道炎症、支气管高反应性、重塑或 疾病进展等症状)、肺病、囊性纤维化、酸诱导的肺损伤、肺高血压、多发性神经病、白内障、 肌肉炎症伴随全身性硬化症、包涵体肌炎、重症肌无力、甲状腺炎、爱迪生氏病、扁平苔癣、 阑尾炎、异位性皮肤炎、过敏、睑缘炎、细支气管炎、支气管炎、滑囊炎、子宫颈炎、胆管炎、胆囊炎、慢性移植排斥、结肠炎、结膜炎、膀胱炎、泪腺炎、皮肤炎、皮肌炎、脑炎、心内膜炎、子宫内膜炎、肠炎、小肠结肠炎、上髁炎、附睾炎、筋膜炎、纤维组织炎、胃炎、肠胃炎、过敏性紫癜、肝炎、化脓性汗腺炎、免疫球蛋白A型肾病、间质性肺病、喉炎、乳腺炎、脑膜炎、脊髓炎、心肌炎、肌炎、肾炎、卵巢炎、睾丸炎、骨炎、耳炎、胰脏炎、腮腺炎、心包炎、腹膜炎、咽炎、胸膜炎、静脉炎、肺炎、多发性肌炎、直肠炎、前列腺炎、肾盂肾炎、鼻炎、咽鼓管炎、鼻窦炎、口腔炎、滑膜炎、肌腱炎、扁桃体炎、阴道炎、血管炎、外阴炎、斑秃、多形红斑、疱疹样皮炎、硬皮病、白斑病、超敏性血管炎、荨麻疹、大疱性类天疱疮、寻常天疱疮、落叶型天疱疮、副肿瘤 性天疱疮、获得性大疱性表皮松解症、急慢性痛风、慢性痛风性关节炎、牛皮癣、牛皮癣性关 节炎、类风湿性关节炎、银屑病、强直性脊柱炎、过敏性皮炎、青少年类风湿性关节炎、冷吡 啉相关周期性综合征(CAPS)和骨关节炎。 [0230] 在本发明的一些优选实施方案中，所述炎症性病症包括涉及自身免疫反应或具有自身免疫组分或病因的其它疾病：全身性红斑狼疮、类风湿性关节炎、青少年类风湿性关节 炎、多软骨炎、硬皮病、韦格纳肉牙肿病、皮肌炎、慢性活动性肝炎、重症肌无力、斯蒂文强森 综合征、特发性脂肪泻、炎症性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、银屑病、强直性脊柱炎、过 敏性皮炎、化脓性汗腺炎(HS)、特应性皮炎、化脓性汗腺炎、痛风、哮喘、慢性阻塞性肺病以 及慢性鼻‑鼻窦炎伴鼻息肉。 [0231] 第八方面，本发明的目的还包括提供一种预防和/或治疗由IRAK4介导的疾病的方法，其包括向患者施用治疗有效剂量的本发明所示化合物，或其立体异构体、光学异构体、 药用盐、前药、溶剂合物、氘代化物或本发明所述药物组合物。 [0232] 第九方面，本发明还提供了本发明化合物以下3种通用制备方法： [0233] 合成方案1 [0234] [0235] 其中，R1、R2、W1、W2、m、n各基团定义如本发明所述。 [0236] i)化合物I‑a1发生化学转化得到化合物I‑a2； [0237] 如以化合物I‑a1和3‑溴哌啶‑2,6‑二酮等为基本原料，得到化合物I‑a2； [0238] ii)化合物I‑a2发生化学转化得到化合物I‑a3； [0239] 如以化合物I‑a2和三氟乙酸等为基本原料，得到化合物I‑a3； [0240] iii)化合物I‑a3发生化学转化得到化合物I‑a4； [0241] 如以化合物I‑a3和和L配体结合部分等为基本原料，反应得到化合物I‑a4； [0242] iv)化合物I‑a3或I‑a4发生化学转化得到化合物I‑a； [0243] 如以化合物I‑a3或I‑a4和IRAK4靶蛋白结合部分等为基本原料，通过缩合、还原胺化等反应得到通式化合物I‑a，即通式化合物(I‑1)。 [0244] 合成方案2 [0245] [0246] 其中，R1、R2、W1、W2、m、n各基团定义如本发明所述。 [0247] i)化合物I‑b1发生化学转化得到化合物I‑b2； [0248] 如以化合物I‑b1和4‑溴‑1,2‑双(溴甲基)苯等为基本原料，得到化合物I‑b2； [0249] ii)化合物I‑b2发生化学转化得到化合物I‑b3； [0250] 如以化合物I‑b2和3‑溴哌啶‑2,6‑二酮等为基本原料，得到化合物I‑b3； [0251] iii)化合物I‑b3发生化学转化得到化合物I‑b4； [0252] 如以化合物I‑b3和L配体结合部分等为基本原料，通过取代反应或偶联反应等得到化合物I‑b4； [0253] iv)化合物I‑b4发生化学转化得到化合物I‑a； [0254] 如以化合物I‑b4和IRAK4靶蛋白结合部分等为基本原料，通过缩合、还原胺化反应得到通式化合物I‑a，即通式化合物(I‑1)。 [0255] 合成方案3 [0256] [0257] 其中，R1'、R2'、W1'、W2'、m'、n'各基团定义如本发明所述。 [0258] i)化合物I‑c1发生化学转化得到化合物I‑c2； [0259] 如以化合物I‑c1和L配体结合部分等为基本原料，通过取代反应或偶联反应等得到化合物I‑c2； [0260] ii)化合物I‑c2发生化学转化得到化合物I‑c3； [0261] 如以化合物I‑c2和3‑溴哌啶‑2,6‑二酮等为基本原料，得到化合物I‑c3； [0262] iii)化合物I‑c3发生化学转化得到化合物(I‑2)； [0263] 如以化合物I‑b3和IRAK4靶蛋白结合部分等为基本原料，通过缩合、还原胺化反应得到通式化合物(I‑2)。 [0264] 本发明另一方面提供了式(VI‑1)和(VI‑2)化合物，或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物、氘代化物： [0265] [0266] 其中，Rx、Rx'选自氢、卤素、叔丁氧羰基、‑CH2COOH或C1‑3烷基；其它各取代基如本发明式(I)所述。 [0267] 在本发明的一个优选实施方式中，所述式(VI‑1)化合物选自如下化合物，或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物、氘代化物： [0268] [0269] 在本发明的一个优选实施方式中，所述式(VI‑1)化合物选自如下化合物，或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物、氘代化物： [0270] [0271] 本发明还提供了式(VII‑1)和(VII‑2)化合物，或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物、氘代化物： [0272] [0273] 其中，Rx、Rx'分别独立地选自氢、卤素、叔丁氧羰基、‑CH2COOH或C1‑3烷基，优选氢、氟、氯、溴、叔丁氧羰基、‑CH2COOH或甲基；其它各取代基如本发明式(I)所述。 [0274] 在本发明的一个优选实施方式中，所述式(VII‑1)选自如下化合物，或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物、氘代化物： [0275] [0276] [0277] 本发明的目的还包括提供本发明所示(VI‑1)、(VI‑2)、(VII‑1)或(VII‑2)化合物，或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物、氘代化物用于制备本发明式(I)化 合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物、氘代化物的用途。 [0278] 术语解释 [0279] 术语“任选”、“任意”、“任选地”或“任意地”指的是随后描述的事件或状况可能但不是必需出现的，并且该描述包括其中所述事件或状况发生的情况以及所述事件或状况不发生的情况。 [0280] 除另有规定外，术语“烷基”指一价饱和脂肪族烃基团，包含1至20个碳原子的直链或支链基团，例如“C1‑12烷基”、“C1‑10烷基”、“C1‑8烷基”、“C1‑6烷基”、“C1‑3烷基”指的是该基团为烷基，且碳链上的碳原子数量分别在1‑10、1‑6、1‑3之间。包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、新戊基、1,1‑二甲基丙基、1,2‑二甲基丙基、2, 2‑二甲基丙基、1‑乙基丙基、2‑甲基丁基、3‑甲基丁基、正己基、正庚基、正辛基等。 [0281] 除另有规定外，术语“环烷基”指的是具有特定碳原子数的单环、双环或者多环饱和或部分饱和的脂烃基。在不特别指明的情况下，本申请包括可能形成的所有单环、稠环 (包括以并、螺、桥的形式稠合)的情形，包括C3‑15环烷基(3‑15元环烷基)，优选C3‑12环烷基(3‑12元环烷基)，优选C3‑11环烷基(3‑11元环烷基)，进一步优选C3‑9环烷基(3‑9元环烷基)，进一步优选C3‑8环烷基(3‑8元环烷基)，更进一步优选C3‑7环烷基(3‑7元环烷基)；优选C4‑12环烷基(4‑12元环烷基)，优选C4‑8环烷基(4‑8元环烷基)，进一步优选C5‑7环烷基(5‑7元环烷基)，或C4‑6环烷基(4‑6元环烷基)。单环环烷基通常指的是优选C3‑12单环烷基(3‑12元单环 烷基)，更优选C3‑10单环烷基(3‑10元单环烷基)，进一步优选C3‑8单环烷基(3‑8元单环烷 基)，C3‑7单环烷基(3‑7元单环烷基)，C4‑7单环烷基(4‑7元单环烷基)，C3‑6单环烷基(3‑6元单环烷基)，其实例包括但不限于：环丙基、环己基、甲基环丙基、2‑乙基‑环戊基、二甲基环丁 基等。稠环环烷基包括螺环烷基、并环烷基、桥环烷基。螺环烷基可以为7‑12元螺环烷基，优 选7‑11元螺环烷基，进一步优选7‑9元螺环烷基，其实例包括但不限于： 基。并环 烷基可以为6‑11元并环烷基，优选7‑10元并环烷基，更优选8‑10元并环烷基，进一步优选9‑ 10元并环烷基，其代表性例子包括但不限于 其中部分饱和的并环 烷基优选实例包括但不限于 桥环烷基可以是6‑10元桥环 烷基，优选7‑10元桥环烷基，其实例包括但不限于： [0282] 除另有规定外，术语“杂环基”或“杂环”指具有环碳原子和1到多个环杂原子的饱和或部分饱和单环或多环环状非芳香族取代基，包含3‑20个环原子(“3‑20元杂环基”)，其 中1个、2个、3个或更多个环原子选自N、O或S，其余环原子为C，杂原子优选1‑5个(即1个、2 个、3个、4个或5个)，更优选1‑4个，进一步优选1‑3个，更进一步优选1‑2个。优选包含3‑14个环原子(“3‑14元杂环基”)，进一步优选包含3‑12个环原子(“3‑12元杂环基”)，进一步优选包含4‑11个环原子(“4‑11元杂环基”)，或进一步优选包含3‑8个环原子(“3‑8元杂环基”)，更进一步优选包含4‑7个环原子(“4‑7元杂环基”)，更进一步优选地包含5‑10个环原子(“5‑ 10元杂环基”)，更进一步优选包含5‑6个环原子(“5‑6元杂环基”)；杂原子数量优选1、2个或 3个。“杂环基”可以是单环的(“单环杂环基”或“单杂环基”)或一种稠合的(“稠杂环基”或 “杂稠环基”)、桥接的(“杂桥环基”或“桥环杂环基”)或螺接‑稠合(“杂螺环基”或“螺环杂环基”)的环系统，如一个双环系统(“双环杂环基”)，并且可以是饱和的或可以是部分不饱和 的。所述单杂环基包含饱和或部分饱和的杂螺环基，包含3‑9元单杂环基，优选3‑7元单杂环 基，更优选4‑7元单杂环基，进一步优选4‑6元单杂环基。所述杂螺环基包含饱和或部分饱和 的杂螺环基，包含7‑11元杂螺环基，优选7‑9元杂螺环基，更优选7‑8元杂螺环基，进一步优 选7元杂螺环基。所述杂桥环基包含包含饱和或部分饱和的杂桥环基，优选7‑9元杂桥环基， 更优选7‑8元杂桥环基，进一步优选7元杂桥环基。杂环基双环系统可以在一个或两个环中 包括一个或多个杂原子。“杂环基”还包括其中如上所定义的该杂环基环被一个或多个碳环 基或杂芳基基团稠合的环系统，或者其中如上所定义的该杂环基环被一个或多个芳基或杂 芳基基团稠合的环系统上，并且在此类情况下，环成员的数目继续指示该杂环基环系统中 的环成员的数目。在某些实施例中，杂环基的每个例子独立地是可任选取代的，例如，未取 代的(一种“未取代的杂环基”)或被一个或多个取代基取代的(一种“取代的杂环基”)。 [0283] 含有1个杂原子的示例性3元杂环基基团包括，但不限于氮杂环丙烷基、氧杂环丙烷基(oxiranyl)和硫杂环丙烷基(thiorenyl)。含有1个杂原子的示例性4元杂环基基团包 括，但不限于氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基和硫杂环丁烷基。含有1个杂原子的示例性5元杂 环基基团包括，但不限于四氢呋喃基、二氢呋喃基、四氢苯硫基、二氢苯硫基、吡咯烷基、二 氢吡咯基以及吡咯基‑2,5‑二酮。含有2个杂原子的示例性5元杂环基基团包括，但不限于咪 唑烷基、二氧戊环基、氧杂硫杂环戊烷基、二硫杂环戊烷基以及噁唑烷‑2‑酮。含有3个杂原 子的示例性5元杂环基基团包括，但不限于三唑啉基、噁二唑啉基和噻二唑啉基。含有1个杂 原子的示例性6元杂环基基团包括，但不限于哌啶基、四氢吡喃基、二氢吡啶基以及硫杂环 己烷基(thianyl)。含有2个杂原子的示例性6元杂环基基团包括，但不限于哌嗪基、吗啉基、 二硫杂环己烷基以及二氧杂环己烷基。含有3个杂原子的示例性6元杂环基基团包括，但不 限于三氮杂环己烷基、氧杂二嗪烷基、噻二嗪烷基、氧杂噻嗪烷基以及二氧杂氮杂环己烷基 (dioxazinanyl)。含有1个杂原子的示例性7元杂环基基团包括，但不限于氮杂环庚烷基、氧 杂环庚烷基和硫杂环庚烷基。含有1个杂原子的示例性8元杂环基基团包括，但不限于氮杂 环辛烷基、氧杂环辛烷基和硫杂环辛烷基。稠合到一个C6芳基环上的示例性5元杂环基基团 (在此又称为一种5,6‑双环杂环)包括，但不限于二氢吲哚基、异二氢吲哚基、二氢苯并呋喃 基、二氢苯并噻吩基、苯并噁唑啉酮基等。稠合到一个芳基环上的示例性6元杂环基基团(在 此又称为一种6,6‑双环杂环)包括，但不限于四氢喹啉基、四氢异喹啉基等。杂桥环基示例 性结构包括但不限于以下结构： 杂螺环基示例性结构包括但 不限于以下结构： [0284] 除另有规定外，术语“芳基”或“芳环基”表示含有6‑16个碳原子(C6‑16芳基或6‑16元芳基)，或6‑14个碳原子(C6‑14芳基或6‑14元芳基)，或6‑12个碳原子(C6‑12芳基或6‑12元芳基)，或6‑10个碳原子(C6‑10芳基或6‑10元芳基)或6‑8个碳原子(C6‑8芳基或6‑8元芳基)的单环、双环和三环的芳香碳环体系，术语“芳基”可以和术语“芳香环”交换使用。芳基基团的实 例可以包括苯基、萘基、蒽基、菲基或芘基等。 [0285] 除另有规定外，术语“杂芳基”或“杂芳环基”表示含有5‑14元结构(5‑14元杂芳基)，或5‑12元结构(5‑12元杂芳基)，或5‑10元结构(或5‑10元杂芳基)，优选5‑8元结构(5‑8元杂芳基)，更优选5‑6元结构(5‑6元杂芳基)的芳香单环或者多环环状系统，其中至少一个 环原子为杂原子且其余原子为碳，杂原子独立地选自O、N或S，杂原子数量优选为1个、2个或 3个。杂芳基的实例包括呋喃基、噻吩基、噁唑基、噻唑基、异噁唑基、噁二唑基、噻二唑基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、三唑基、四唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、硫代二唑基、三嗪基、酞嗪基、喹啉基、异喹啉基、喋啶基、嘌呤基、吲哚基、异吲哚基、吲唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并吡啶基、苯并嘧啶基、苯并吡嗪基、苯并咪唑基、苯并酞嗪基、吡咯并[2,3‑b] 吡啶基、咪唑并[1,2‑a]吡啶基、吡唑并[1,5‑a]吡啶基、吡唑并[1,5‑a]嘧啶基、咪唑并[1, 2‑b]哒嗪基、[1,2,4]三唑并[4,3‑b]哒嗪基、[1,2,4]三唑并[1,5‑a]嘧啶基、[1,2,4]三唑 并[1,5‑a]吡啶基等。 [0286] 除另有规定外，术语“烯基”是指由碳原子和氢原子组成的直链或支链的具有至少一个双键的不饱和脂肪族烃基。烯基可以包含2‑20个碳原子，优选包含2‑12个碳原子(即 C2‑12烯基)，优选包含2‑10个碳原子(即C2‑10烯基)，进一步优选包含2‑8个碳原子(即C2‑8烯基)，更优选包含2‑6个碳原子(即C2‑6烯基)、2‑5个碳原子(即C2‑5烯基)、2‑4个碳原子(即C2‑4烯基)、2‑3个碳原子(即C2‑3烯基)、2个碳原子(即C2烯基)，例如“C2‑6烯基”指的是该基团为烯基，且碳链上的碳原子数量在2‑6之间(具体地为2个、3个、4个、5个或6个)。烯基的非限制 性实例包括但不限于乙烯基、1‑丙烯基、2‑丙烯基、1‑丁烯基、异丁烯基和1,3‑丁二烯基等。 [0287] 除另有规定外，术语“炔基”是指由碳原子和氢原子组成的直链或支链的具有至少一个叁键的不饱和脂肪族烃基。炔基可以包含2‑20个碳原子，优选包含2‑12个碳原子(即 C2‑12炔基)，优选包含2‑10个碳原子(即C2‑10炔基)，进一步优选包含2‑8个碳原子(即C2‑8炔基)，更优选包含2‑6个碳原子(即C2‑6炔基)、2‑5个碳原子(即C2‑5炔基)、2‑4个碳原子(即C2‑4炔基)、2‑3个碳原子(即C2‑3炔基)、2个碳原子(即C2炔基)，例如“C2‑6炔基”指的是该基团为炔基，且碳链上的碳原子数量在2‑6之间(具体地为2个、3个、4个、5个或6个)。炔基的非限制 性实例包括但不限于乙炔基、1‑丙炔基、2‑丙炔基和1‑丁炔基等。 [0288] 除另有规定外，单独或组合使用的术语“亚烷基”(其与“亚烷基链”可互换使用)是指由碳和氢原子组成的直链或支链的二价饱和烃基团。术语“Cx‑y亚烷基”(x及y各自为整 数)是指含有x至y个碳原子的直链或支链的亚烷基，包括C1‑30亚烷基，优选为C1‑15亚烷基， C1‑12亚烷基，C1‑8亚烷基，C1‑7亚烷基，C1‑6亚烷基，C1‑5亚烷基，C1‑4亚烷基，C1‑3亚烷基。代表性实例包括但不限于亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚异丙基、亚丁基、亚异丁基、亚仲丁基、亚叔丁 基、亚戊基、亚异戊基、亚新戊基、亚特戊基、亚己基、亚庚基、亚辛基、亚壬基、亚癸基、亚十一烷基、亚十二烷基、亚十三烷基、亚十四烷基、亚十五烷基、亚十六烷基、亚十七烷基、亚十 八烷基、亚十九烷基、亚二十烷基、亚二十一烷基、亚二十二烷基、亚二十三烷基、亚二十四 烷基、亚二十五烷基、亚二十六烷基、亚二十七烷基、亚二十八烷基、亚二十九烷基、和亚三 十烷基。 [0289] 除另有规定外，所述“亚烷基”是任选地取代的，取代基优选是一或多个选自羟基、氨基、巯基、卤素、氰基、C1‑3烷基、C1‑3烷氧基、三氟甲基、杂环基或其组合的取代基。 [0290] 除另有规定外，单独或组合使用的术语“亚炔基”是指具有一个或多个碳碳叁键的包含2至12个(C2‑12亚炔基)，优选2至8个(C2‑8亚炔基)，优选2至6个(C2‑6亚炔基)，更进一步优选2至4个(C2‑4亚炔基)碳原子的直链或支链二价烃基。优选亚炔基的实例包括但不限于 亚乙炔基、1‑丙炔亚基、1‑丁炔亚基和1,3‑二炔亚基。 [0291] 除另有规定外，单独或组合使用的术语“亚烯基”是指具有一个或多个碳碳双键的包含2至12个(C2‑12亚烯基)，优选2至8个(C2‑8亚烯基)，优选2至6个(C2‑6亚烯基)，更进一步优选2至4个(C2‑4亚烯基)碳原子的直链或支链二价烃基。优选亚烯基的实例包括但不限于 亚乙烯基(例如‑CH＝CH‑)、1‑丙烯亚基、1‑丁烯亚基。 [0292] 除另有规定外，术语“卤素”或“卤代”是指F(氟)、Cl(氯)、Br(溴)、I(碘)。术语“卤代烷基”是指如上所定义的烷基中一个、两个或多个氢原子或全部氢原子被卤素取代。卤代烷基的代表性例子包括CCl3、CF3、CHCl2、CH2Cl、CH2Br、CH2I、CH2CF3、CF2CF3等。 [0293] 除另有规定外，术语“烷氧基”指‑O‑烷基，所述烷基如上文所定义。优选地，具有1～10个碳原子，优选1～6个碳原子。代表的例子包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、叔丁氧基、戊 氧基、1‑甲基丁氧基、2‑甲基丁氧基、3‑甲基丁氧基、1,1‑二甲基丙氧基、1,2‑二甲基丙氧基、2,2‑二甲基丙氧基、1‑乙基丙氧基等。 [0294] 除另有规定外，“环烯基”是指由子基团单环烃环、双环烃环和螺‑烃环构成，然而，体系是不饱和的，即存在至少一个C‑C双键但没有芳香族体系。优选地包含3‑12个碳原子 (即C3‑12环烯基)，更优选包含3‑10个碳原子(C3‑10环烯基)，进一步优选3‑6个碳原子(C3‑6环烯基)、4‑6个碳原子(C4‑6环烯基)、5‑6个碳原子(C5‑6环烯基)。 [0295] 除另有规定外，术语“药物上可接受的盐”、“药用盐”是指在合理医学判断范围内适用于与哺乳动物特别是人的组织接触而无过度毒性、刺激、过敏反应等并与合理的效益/ 风险比相称的盐，比如胺、羧酸和其他类型化合物的医学上可接受的盐在所属领域中是被 熟知的。 [0297] 除另有规定外，术语“溶剂合物”意指本发明化合物与一个或多个溶剂分子(无论有机的还是无机的)的物理缔合。该物理缔合包括氢键。在某些情形中，例如当一个或多个 溶剂分子纳入结晶固体的晶格中时，溶剂化物将能够被分离。溶剂化物中的溶剂分子可按 规则排列和/或无序排列存在。溶剂合物可包含化学计量或非化学计量的溶剂分子。“溶剂 合物”涵盖溶液相和可分离的溶剂合物。示例性溶剂合物包括但不限于水合物、乙醇合物、 甲醇合物和异丙醇合物。溶剂化方法是本领域公知的。 [0298] 除另有规定外，术语“光学异构体”是指分子结构完全相同，物理化学性质相近，但旋光性不同的物质。 [0299] 除另有规定外，术语“立体异构体”是指具有相同化学构造，但原子或基团在空间上排列方式不同的化合物。立体异构体包括对映异构体、非对映异构体、构象异构体(旋转 异构体)、几何异构体(顺/反)异构体、阻转异构体等。所得的任何立体异构体的混合物可以 依据组分物理化学性质上的差异被分离成纯的或基本纯的几何异构体，对映异构体，非对 映异构体，例如，通过色谱法和/或分步结晶法。 [0300] 除非其他方面表明，本发明所描述的结构式包括所有的同分异构形式(如对映异构，非对映异构，和几何异构(或构象异构))：例如含有不对称中心的R、S构型，双键的(Z)、 (E)异构体，和(Z)、(E)的构象异构体。因此，本发明的化合物的单个立体化学异构体或其对 映异构体，非对映异构体，或几何异构体(或构象异构体)的混合物都属于本发明的范围。 [0301] 除另有规定外，术语“前药”是指在体内转化为母体药物的药物。前药通常是有用的，因为在某些情况下，它们可能比母体药物更容易给药。例如，它们可以通过口服而被生 物利用，而母体则不能。与母体药物相比，前药在药物组合物中的溶解度也有所提高。前药 的一个例子，但不限于此，可以是任何式(I)或式(Ⅲ)的化合物，其作为酯(“前药”)给药，以 促进穿过细胞膜的传递，其中水溶性对迁移性有害，但一旦进入细胞内水溶性是有益的，其 随后被代谢水解成羧酸，即活性实体。前药的另一个例子可以是与酸基团结合的短肽(聚氨 基酸)，其中肽被代谢以显示活性部分。 [0302] 除另有规定外，术语“同位素标记的类似物”、“同位素衍生物”是指化合物中被同位素标记的分子，从而提供可能具有改善的药理活性的同位素标记的类似物。通常用作同 2 3 11 13 14 35 位素标记的同位素是：氢同位素：氘( H)和氚( H)；碳同位素：C, C和 C；氯同位素：Cl 37 18 123 125 13 15 15 17 18 和 Cl；氟同位素：F；碘同位素： I和 I；氮同位素：N和 N；氧同位素：O, O和 O和硫 35 同位素 S。这些同位素标记化合物可以用来研究药用分子在组织中的分布情况。尤其是氘 13 2 和碳 C，由于它们容易标记且方便检测，运用更为广泛。某些重同位素，比如重氢(H)，的取 代能增强代谢的稳定性，延长半衰期从而达到减少剂量的目而提供疗效优势的。本发明所 述化合物包含其同位素衍生物，如氘代化物、氘代物。 [0303] 除另有规定外，术语“任选取代”指所述基团的可取代位点的氢未被取代，或被一个或多个取代基所取代，所述取代基优先选自下组的取代基：卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、 氨基、叠氮基、氧代基、羧基、C2‑6烯基、C2‑6炔基、C1‑6烷基、C1‑6烷氧基、3‑10元环烷基、3‑10元环烷基磺酰基、3‑10元杂环烷基、6‑14元芳基或5‑10元杂芳环基，其中，所述C2‑6烯基、C2‑6炔基、C1‑6烷基、C1‑6烷氧基、3‑10元环烷基、3‑10元环烷基磺酰基、3‑10元杂环烷基、6‑14元芳基或5‑10元杂芳环基可任选地被选自卤素、羟基、氨基、氰基、C1‑6烷基或C1‑6烷氧基中的一个或多个所取代。 [0304] 除另有规定外，术语“一个或多个所取代”中的“多个”选自2、3、4、5、6、7或8，优选2、3、4或5，进一步优选2、3或4。 [0305] 本发明的有益效果为： [0306] 本发明一方面提供的一类白介素‑1受体相关激酶4(IRAK4)的新型泛素连接酶配体及其合成的双功能嵌合体杂环化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂 合物、氘代化物，为IRAK4降解剂类的药物的发展提供了一个新的方向。IRAK4降解实验研究 显示，这些化合物对IRAK4具有良好的降解活性、对LPS诱导的PBMC细胞中的IL‑6具有较强 的抑制作用、对LPS诱导的PBMC细胞中的TNF‑α具有显著的抑制作用及在小鼠体内吸收较 好，可作为治疗IRAK4相关的疾病的前景化合物。此外，本发明研究了该类化合物特定的合 成方法，该合成方法工艺简单，操作便捷，利于规模化工业生产和应用。 [0307] 本发明另一方面还提供了一类与普遍表达的E3连接酶蛋白cereblon(CRBN)结合的化合物,其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物、氘代化物，此类化合物结构 新颖，由其制备的双功能嵌合体的杂环化合物具有如上所述的良好的IRAK4降解活性等优 良效果 具体实施方式[0308] 下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条 件或者按照制造厂商所建议的条件。除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与 本领域专业人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆 可应用于本发明方法之中。文中所示的较佳实施方法与材料仅做示范之用。 [0309] 本发明的化合物结构是通过核磁共振(NMR)或/和液质联用色谱(LC‑MS)或/和液相色谱(HPLC)来确定的。NMR的测定使用的仪器是BrukerAVANCE III 600MHz，LC‑MS使用的 仪器是Waters arc/QDa；HPLC使用的仪器是Waters e2695_2998。 [0310] 本发明实施例中的起始原料是已知的并且可以在市场上买到，或者可以采用或按照本领域已知的方法来合成。 [0311] 制备实施例、实施例、试验例及本文其他地方使用的缩写词是： [0312] DCM 二氯甲烷 [0313] TEA 三乙胺 [0314] DIPEA N,N‑二异丙基乙胺 [0315] DMF N,N‑二甲基甲酰胺 [0316] EA 乙酸乙酯 [0317] h 小时 [0318] mL 毫升 [0319] MeOH 甲醇 [0320] EtOH 乙醇 [0321] NaH 氢化钠 [0322] TFA 三氟乙酸 [0323] NBS N‑溴代丁二酰亚胺 [0324] NIS N‑碘代丁二酰亚胺 [0325] THF 四氢呋喃 [0327] TBTU 2‑(1H‑苯并三偶氮L‑1‑基)‑1,1,3,3‑四甲基脲四氟硼酸酯 [0328] DMSO‑d6 氘代二甲基亚砜 [0329] Toluene 甲苯 [0330] DBU 1,8‑二氮杂二环[5.4.0]十一碳‑7‑烯 [0331] HATU 2‑(7‑偶氮苯并三氮唑)‑N,N,N',N'‑四甲基脲六氟磷酸酯 [0332] CDI N,N'‑羰基二咪唑 [0333] PE 石油醚 [0334] FBS 胎牛血清 [0335] PBS 磷酸盐缓冲液 [0336] pH 氢离子浓度指数 [0337] TLC 薄层色谱 [0338] M 摩尔每升 [0339] LiHMDS 双三甲基硅基胺基锂 [0340] CH3CN 乙腈 [0341] Xantphos 4,5‑双二苯基膦‑9,9‑二甲基氧杂蒽 [0342] DMAC N,N‑二甲基乙酰胺 [0343] nBuLi 正丁基锂 [0344] TMEDA 四甲基乙二胺 [0345] Ruphos 2‑二环己基磷‑2',6'‑二异丙氧基‑1,1'‑联苯 [0346] tBuONa 叔丁醇钠 [0347] 1,4‑dioxane 1,4‑二氧六环 [0348] Boc 叔丁氧羰基 [0349] DAST 二乙胺基三氟化硫 [0350] TCFH 四甲基氯代脲六氟磷酸酯 [0351] 中间体制备例1：2‑(1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2‑氧螺[吲哚啉‑3,3'‑吡咯烷]‑1'‑基)乙酸叔丁酯的合成。 [0352] [0353] 步骤1：1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2‑氧螺[吲哚啉‑3,3'‑吡咯烷]‑1'‑羧酸叔丁酯的合成 [0354] 在50mL反应瓶中将2‑氧螺[吲哚啉‑3,3'‑吡咯烷]‑1'‑羧酸叔丁酯(500mg，1.74mmol)溶于四氢呋喃(5mL)中，然后滴加1mol/L的双三甲基硅基胺基锂溶液(4.3mL, 4.34mmol)，室温反应0.5h，然后加入3‑溴哌啶‑2,6‑二酮(663mg,3.47mmol)，60℃下继续反 应3h。反应完毕后，用氯化铵溶液淬灭反应，然后加入乙酸乙酯(20mL)萃取，分液，得到的有 机相分别用水以及饱和氯化钠水溶液洗涤一次后，减压浓缩拌样，然后进行中压制备(快速 制备液相色谱仪，型号：BiotageSelekt，PE:EA＝3:10)得到1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2‑氧+ 螺[吲哚啉‑3,3'‑吡咯烷]‑1'‑羧酸叔丁酯(400mg)。ESI‑MS(m/z):400.45[M+H]。 [0355] 步骤2：3‑(2‑氧螺[吲哚啉‑3,3'‑吡咯烷]‑1‑基)哌啶‑2,6‑二酮的合成 [0356] 在50mL反应瓶中加入1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2‑氧螺[吲哚啉‑3,3'‑吡咯烷]‑1'‑羧酸叔丁酯(400mg,1.00mmol)和三氟乙酸(5mL)；室温反应2h，LC‑MS显示反应完毕。减 压浓缩得到3‑(2‑氧螺[吲哚啉‑3,3'‑吡咯烷]‑1‑基)哌啶‑2,6‑二酮粗品(430mg)。ESI‑MS+ (m/z):300.33[M+H]。 [0357] 步骤3：2‑(1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2‑氧螺[吲哚啉‑3,3'‑吡咯烷]‑1'‑基)乙酸叔丁酯的合成 [0358] 在50mL反应瓶中将3‑(2‑氧螺[吲哚啉‑3,3'‑吡咯烷]‑1‑基)哌啶‑2,6‑二酮粗品(430mg)溶于乙腈(10mL)然后加入N,N‑二异丙基乙胺(0.7mL,4.01mmol)和溴乙酸叔丁酯 (217mg,1.10mmol)。该反应液在80℃下反应3h，LC‑MS显示反应完毕。将反应液减压浓缩拌 样，然后进行中压制备(PE:EA＝3:10)得到2‑(1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2‑氧螺[吲哚啉‑3,+ 3'‑吡咯烷]‑1'‑基)乙酸叔丁酯(230mg)。ESI‑MS(m/z):414.47[M+H]。 [0359] 中间体制备例2：2‑(1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑5‑氟‑2‑氧螺[吲哚啉‑3,4'‑哌啶]‑1'‑基)乙酸叔丁酯的合成。 [0360] [0361] 参照中间体制备例1制备方法，仅将步骤1中2‑氧螺[吲哚啉‑3,3'‑吡咯烷]‑1'‑羧酸叔丁酯替换为5‑氟‑2‑氧螺[吲哚啉‑3,4'‑哌啶]‑1'‑羧酸叔丁酯，得到2‑(1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑5‑氟‑2‑氧螺[吲哚啉‑3,4'‑哌啶]‑1'‑基)乙酸叔丁酯(110mg)。ESI‑MS(m/z): + 446.49[M+H]。 [0362] 中间体制备例3：2‑(1’‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2’‑氧螺[氮杂环丁烷‑3,3’‑吲哚啉]‑1‑基)乙酸叔丁酯的合成。 [0363] [0364] 参照中间体制备例1制备方法，仅将步骤1中2‑氧螺[吲哚啉‑3,3'‑吡咯烷]‑1'‑羧酸叔丁酯替换为2’‑氧螺[氮杂环丁烷‑3,3’‑吲哚啉]‑1'‑羧酸叔丁酯，得到2‑(1’‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2’‑氧螺[氮杂环丁烷‑3,3’‑吲哚啉]‑1‑基)乙酸叔丁酯(25mg)。ESI‑MS(m/+ z):400.45[M+H]。 [0365] 中间体制备例4：2‑(1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2‑氧螺[吲哚啉‑3,4'‑哌啶]‑1'‑基)乙酸叔丁酯的合成。 [0366] [0367] 参照中间体制备例1制备方法，仅将步骤1中2‑氧螺[吲哚‑3,3'‑吡咯烷]‑1'‑羧酸叔丁酯替换为2‑氧螺[吲哚啉‑3,4'‑哌啶]‑1'‑羧酸叔丁酯，得到2‑(1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑+ 2‑氧螺[吲哚啉‑3,4'‑哌啶]‑1'‑基)乙酸叔丁酯(100mg)。ESI‑MS(m/z):428.21[M+H]。 [0368] 中间体制备例5：1‑(5‑(5‑((1r,4r)‑4‑甲酰基环己基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑2‑基)‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑5‑甲腈的合成 [0369] [0370] 步骤1：6‑氯‑4‑(甲基氨基)烟酸甲酯的合成 [0371] 在反应瓶中加入乙腈(320mL)和水(9.6mL)，然后室温下向反应瓶中加入4,6‑二氯烟酸甲酯(16.0g，77.66mmol)和盐酸甲胺(26.2g，388.29mmol)，再向反应瓶中加入DBU (59.1g，388.29mmol)，加入完毕后，在25℃下搅拌3h。将反应液减压浓缩，将浓缩物倒入冰 水(300mL)中，室温搅拌10min，析出白色固体，过滤得白色滤饼，滤饼用水(50mL×3)淋洗后 干燥，得到6‑氯‑4‑(甲基氨基)烟酸甲酯(10.00g)。 [0372] 步骤2：6‑氯‑4‑(甲基氨基)烟酰肼的合成 [0373] 在反应瓶中加入EtOH(250mL)，然后室温下向反应瓶中加入6‑氯‑4‑(甲基氨基)烟酸甲酯(24.0g，119.63mmol)和水合肼(47.9g，957.04mmol)。加入完毕后80℃搅拌3h。将反 应液减压浓缩，将浓缩物倒入冰水(500mL)，用EA(300mL×4)萃取水相，有机相合并后用水 (300mL)和氯化钠水溶液(300mL)各洗一次，经无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，得到6‑氯‑4‑ (甲基氨基)烟酰肼(24.00g)。 [0374] 步骤3：(1r,4r)‑4‑(2‑(6‑氯‑4‑(甲基氨基)烟酰基)肼‑1‑羰基)环己烷‑1‑羧酸甲酯的合成 [0375] 将6‑氯‑4‑(甲基氨基)烟酰肼(10.0g，49.84mmol)，反式‑1,4‑环己烷二甲酸单甲酯(9.3g，49.84mmol)加入到N,N‑二甲基甲酰胺(100mL)中，然后加2‑(7‑偶氮苯并三氮唑)‑ N,N,N',N'‑四甲基脲六氟磷酸酯(22.74g，59.81mmol)，降温0‑5℃下滴加N,N‑二异丙基乙 胺(19.32g，149.52mmol)，滴加完毕20℃搅拌2h。TLC(DCM：MeOH＝10：1)确认原料消失。将反 应液倒入水(400mL)中，搅拌半小时，析出白色固体，过滤，滤饼真空干燥得白色固体产品 (13.60g)。 [0376] 步骤4：(1r,4r)‑4‑(5‑(6‑氯‑4‑(甲基氨基)吡啶‑3‑基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)环己烷‑1‑羧酸甲酯的合成 [0377] 将(1r,4r)‑4‑(2‑(6‑氯‑4‑(甲基氨基)烟酰基)肼‑1‑羰基)环己烷‑1‑羧酸甲酯(5.7g，15.45mmol)溶解于四氢呋喃(100mL)中，加入劳森试剂(10.9g，27.04mmol)。反应液 于65℃搅拌1h。TLC(DCM：MeOH＝15：1)确认原料消失。将反应液倒入饱和碳酸氢钠溶液 (300mL)中，用二氯甲烷(100mL×3)萃取，有机相用氯化钠水溶液(100mL)洗涤两次，减压浓 缩，经硅胶柱层析纯化(DCM：MeOH＝200：1‑100：1)，纯化后加乙酸乙酯(50mL)打浆得到(1r, 4r)‑4‑(5‑(6‑氯‑4‑(甲基氨基)吡啶‑3‑基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)环己烷‑1‑羧酸甲酯(1.80g)。 [0378] 步骤5：(1r,4r)‑4‑(5‑(6‑(5‑氰基‑1H‑吡咯[2,3‑b]吡啶‑1‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑3‑基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)环己烷‑1‑羧酸甲酯的合成 [0379] 将(1r,4r)‑4‑(5‑(6‑氯‑4‑(甲基氨基)吡啶‑3‑基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)环己烷‑1‑羧酸甲酯(4.8g，12.95mmol)和5‑氰基‑7‑氮杂吲哚(1.9g，12.95mmol)溶解于N,N‑二甲基 乙酰胺(50mL)，加入碳酸铯(12.7g，38.84mmol)，4,5‑双二苯基膦‑9,9‑二甲基氧杂蒽 (1.5g，2.59mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(1.2g，1.29mmol)。升温至140℃搅拌16h。LC‑MS 确认反应结束，将反应液经硅藻土过滤，滤饼用乙酸乙酯(100mL)淋洗，母液倒入水(200mL) 中，分出有机相，水相继续用乙酸乙酯(50mL×4)萃取，合并有机相，用氯化钠水溶液 (100mL)洗涤两次，干燥浓缩得粗品，经硅胶柱层析纯化(PE:EA＝10:1‑2:1)，得到(1r,4r)‑ 4‑(5‑(6‑(5‑氰基‑1H‑吡咯[2,3‑b]吡啶‑1‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑3‑基)‑1,3,4‑噻二唑‑ 2‑基)环己烷‑1‑羧酸甲酯(2.2g)。 [0380] 步骤6：1‑(5‑(5‑((1r,4r)‑4‑(羟甲基)环己基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑2‑基)‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑5‑甲腈的合成 [0381] 将(1r,4r)‑4‑(5‑(6‑(5‑氰基‑1H‑吡咯[2,3‑b]吡啶‑1‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑3‑基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)环己烷‑1‑羧酸甲酯(1.2g，2.53mmol)加入到四氢呋喃(60mL) 中，然后加硼氢化锂(83mg，3.81mmol)，20℃搅拌6h后升温65℃搅拌10h至反应完全。TLC (DCM：MeOH＝15：1)确认原料消失。将反应液倒入饱和氯化铵溶液中(200mL)中，用二氯甲烷 (50mL×3)萃取，有机相用饱和氯化钠水溶液(50mL)洗涤一次，减压浓缩得粗品，经过柱纯 化(DCM：MeOH＝150：1‑90：1)，得到1‑(5‑(5‑((1r,4r)‑4‑(羟甲基)环己基)‑1,3,4‑噻二唑‑ 2‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑2‑基)‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑5‑甲腈(0.2g)。 [0382] 步骤7：1‑(5‑(5‑((1r,4r)‑4‑甲酰基环己基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑2‑基)‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑5‑甲腈的合成 [0383] 将1‑(5‑(5‑((1r,4r)‑4‑(羟甲基)环己基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑2‑基)‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑5‑甲腈(0.2g，0.34mmol)溶解于二氯甲烷(5mL)中，加入戴斯马丁氧化剂(0.2g，0.51mmol)。反应液于25℃搅拌2h。LC‑MS确认原料消失。将反应液倒入饱和碳酸氢钠溶液(20mL)中和至pH值为8‑9，用二氯甲烷(30mL×3)萃取，减压浓缩得 到1‑(5‑(5‑((1r,4r)‑4‑甲酰基环己基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑2‑基)‑+ 1 1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑5‑甲腈(0.10g)。ESI‑MS(m/z):444.5[M+H]。H NMR(600MHz，DMSO‑d6)δ：9.71(s,1H),8.91(d,1H,J＝4.4Hz),8.69(d,1H,J＝2.0Hz),8.55(d,1H,J＝2.0Hz), 8.46(s,1H),8.30(s,1H),8.24(d,1H,J＝2.0Hz),6.73(d,1H,J＝4.0Hz),8.42(d,3H,J＝ 4.8Hz),2.35‑2.42(m,3H),2.23(dd,2H,J＝17.2Hz),1.69‑1.79(m,2H),1.46‑1.59(m,3H)。 [0384] 中间体制备例6：2‑(4‑(1'‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2'‑氧代‑1,3‑二氢螺[茚‑2,3'‑吲哚啉]‑5‑基)哌嗪‑1‑基)乙酸叔丁酯的合成 [0385] [0386] 步骤1：5‑溴‑1,3‑二氢螺[茚‑2,3'‑吲哚啉]‑2'‑酮的合成 [0387] 在100mL三口反应瓶中加入吲哚‑2‑酮(1.0g，7.51mmol)、THF(30mL)，氮气保护下降温至‑78℃，缓慢滴加2.2mol/L正丁基锂的正己烷溶液(7.0mL)，滴加完毕后再滴加四甲 基乙二胺(1.9g，16.35mmol)，然后保持‑78℃继续反应1h。取另一反应瓶，加入4‑溴‑1,2‑双(溴甲基)苯(5.1g，14.88mmol)，再加入THF(10mL)溶解，然后将得到的溶液滴加至上述反应 液中，滴加完毕，维持温度‑20℃反应2h。之后恢复至室温过夜反应。LC‑MS显示反应完毕，后 处理，加入饱和氯化铵溶液进行淬灭反应，再加入乙酸乙酯，萃取分液，将有机相减压浓缩， 再将浓缩物经硅胶柱层析纯化(PE:EA＝3:1)，得到5‑溴‑1,3‑二氢螺[茚‑2,3'‑吲哚啉]‑ + 2'‑酮(0.86g)。ESI‑MS(m/z):314.01[M+H]。 [0388] 步骤2：4‑(2’‑氧代‑1,3‑二氢螺[茚‑2,3’‑吲哚啉]‑5‑基)哌嗪‑1‑羧酸叔丁酯的合成 [0389] 在100mL的反应瓶中加入5‑溴‑1,3‑二氢螺[茚‑2,3'‑吲哚啉]‑2'‑酮(700mg，2.23mmol)、1‑叔丁氧羰基哌嗪(623mg，3.34mmol)、三二亚苄基丙酮二钯(410mg， 0.45mmol)、2‑二环己基磷‑2',6'‑二异丙基联苯(210mg，0.45mmol)、叔丁醇钠(650mg， 3.76mmol)和1,4‑二氧六环(20mL)。反应体系在氮气保护下100℃反应8h。LC‑MS检测反应结 束后，将反应液冷却至室温，随后经硅藻土过滤，滤饼用乙酸乙酯洗涤。收集滤液，减压浓 缩。将浓缩物经硅胶柱纯化(DCM：MeOH＝50:1)，得到4‑(2’‑氧代‑1,3‑二氢螺[茚‑2,3’‑吲+ 哚啉]‑5‑基)哌嗪‑1‑羧酸叔丁酯(500mg)。ESI‑MS(m/z):420.22[M+H]。 [0390] 步骤3：4‑(1’‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2’‑氧代‑1,3‑二氢螺[茚‑2,3’‑吲哚啉]‑5‑基)哌嗪‑1‑羧酸叔丁酯的合成 [0391] 在100mL反应瓶中加入4‑(2’‑氧代‑1,3‑二氢螺[茚‑2,3’‑吲哚啉]‑5‑基)哌嗪‑1‑羧酸叔丁酯(400mg，0.95mmol)、THF(10mL)，然后缓慢加入60％氢化钠(382mg)，将该反应在室温下搅拌0.5h，加入3‑溴哌啶‑2,6‑二酮(916mg，4.77mmol)，升温至60℃反应4h。LC‑MS显示反应完毕，后处理，加入饱和氯化铵溶液淬灭反应，再加入乙酸乙酯，萃取分液，得到的有 机相减压浓缩后，将浓缩物经柱层析进行纯化(DCM：MeOH＝50:1)，得到4‑(1’‑(2,6‑二氧哌 啶‑3‑基)‑2’‑氧代‑1,3‑二氢螺[茚‑2,3’‑吲哚啉]‑5‑基)哌嗪‑1‑羧酸叔丁酯(220mg)。 + ESI‑MS(m/z):531.25[M+H]。 [0392] 步骤4：3‑(2'‑氧代‑5‑(哌嗪‑1‑基)‑1,3‑二氢螺[茚‑2,3'‑吲哚啉]‑1'‑基)哌啶‑2，6‑二酮的合成 [0393] 在100mL的反应瓶中加入4‑(1’‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2’‑氧代‑1,3‑二氢螺[茚‑2,3’‑吲哚啉]‑5‑基)哌嗪‑1‑羧酸叔丁酯(120mg，0.23mmol)、二氯甲烷(5mL)和三氟乙酸 (2mL)。反应液在室温下反应2h。LC‑MS检测反应结束后，减压浓缩，得到3‑(2'‑氧代‑5‑(哌嗪‑1‑基)‑1,3‑二氢螺[茚‑2,3'‑吲哚啉]‑1'‑基)哌啶‑2,6‑二酮粗品(130mg)。ESI‑MS(m/+ z):431.20[M+H]。 [0394] 步骤5：2‑(4‑(1’‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2’‑氧代‑1,3‑二氢螺[茚‑2,3’‑吲哚啉]‑5‑基)哌嗪‑1‑基)乙酸叔丁酯的合成 [0395] 在100mL的反应瓶中加入3‑(2'‑氧代‑5‑(哌嗪‑1‑基)‑1,3‑二氢螺[茚‑2,3'‑吲哚啉]‑1'‑基)哌啶‑2,6‑二酮粗品(130mg)、2‑溴乙酸叔丁酯(53mg)、N,N‑二异丙基乙胺(150mg)和乙腈(20mL)。反应液在70℃下反应6h。LC‑MS检测反应结束后，减压浓缩，将浓缩 物经硅胶柱层析纯化(DCM:MeOH＝50:1)，得到2‑(4‑(1’‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2’‑氧代‑ 1,3‑二氢螺[茚‑2,3’‑吲哚啉]‑5‑基)哌嗪‑1‑基)乙酸叔丁酯(120mg)。ESI‑MS(m/z): + 545.27[M+H]。 [0396] 中间体制备例7：1‑(5‑(5‑((1r,4r)‑4‑氨基环己基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑2‑基]‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑5‑甲腈的合成 [0397] [0398] 步骤1：6‑氯‑4‑(甲基氨基)烟酸甲酯的合成 [0399] 在反应瓶中加入乙腈(320mL)和水(9.6mL)，然后室温下向反应瓶中加入4,6‑二氯烟酸甲酯(16.0g，77.66mmol)和盐酸甲胺(26.2g，388.29mmol)，再向反应瓶中加入DBU (59.1g，388.29mmol)，加入完毕后，在25℃下搅拌3h。将反应液减压浓缩，将浓缩物倒入冰 水(300mL)中，室温搅拌10min，析出白色固体，过滤得白色滤饼，滤饼用水(50mL×3)淋洗后 干燥，得到6‑氯‑4‑(甲基氨基)烟酸甲酯(10.00g)。 [0400] 步骤2：6‑氯‑4‑(甲基氨基)烟酰肼的合成 [0401] 在反应瓶中加入EtOH(250mL)，然后室温下向反应瓶中加入6‑氯‑4‑(甲基氨基)烟酸甲酯(24.0g，119.63mmol)和水合肼(47.9g，957.04mmol)。加入完毕后80℃搅拌3h。将反 应液减压浓缩，将浓缩物倒入冰水(500mL)，用EA(300mL×4)萃取水相，有机相合并后用水 (300mL)和氯化钠水溶液(300mL)各洗一次，经无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，得到6‑氯‑4‑ (甲基氨基)烟酰肼(24.00g)。 [0402] 步骤3：((1r,4r)‑4‑(2‑(6‑氯‑4‑(甲基氨基)烟酰基)肼‑1‑羰基)环己基)氨基羧酸叔丁酯的合成 [0403] 在反应瓶中加入DMF(250mL)和6‑氯‑4‑(甲基氨基)烟酰肼(24.00g，119.62mmol)，室温搅拌下加入反式‑4‑(叔丁氧羰基氨基甲基)环己基羧酸(53.22g，131.58mmol)、DIPEA (37.10g，288mmol)和HATU(43.70g，115.2mmol)。加入完毕后室温下搅拌2h。将反应液倒入 冰水(2L)，有固体析出，过滤得到滤饼，用DCM洗涤数次后旋干，得到((1r,4r)‑4‑(2‑(6‑氯‑ 4‑(甲基氨基)烟酰基)肼‑1‑羰基)环己基)氨基羧酸叔丁酯(24.00g) [0404] 步骤4：((1r,4r)‑4‑(5‑(6‑氯‑4‑(甲基氨基)吡啶‑3‑基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)环己基)氨基羧酸叔丁酯的合成 [0405] 在反应瓶中加入甲苯(600mL)，室温下加入((1r,4r)‑4‑(2‑(6‑氯‑4‑(甲基氨基)烟酰基)肼‑1‑羰基)环己基)氨基羧酸叔丁酯(20.00g，46.96mmol)，向上述溶液中加入劳森 试剂(20.89g，51.66mmol)，加入完毕后将反应体系温度升至120℃，回流2h。将反应体系倒 入水(500mL)中，用DCM(400mL×4)萃取，并用饱和氯化钠水(500mL)洗涤合并的有机相，无 水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗品。用EA打浆，得到((1r,4r)‑4‑(5‑(6‑氯‑4‑(甲基氨基)吡啶‑3‑基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)环己基)氨基羧酸叔丁酯(7.00g)。 [0406] 步骤5：((1r,4r)‑4‑(5‑(6‑(5‑氰基‑1H‑吡咯[2,3‑b]吡啶‑1‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑3‑基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)环己基)氨基羧酸叔丁酯的合成 [0407] 在50mL的反应瓶中加入((1r,4r)‑4‑(5‑(6‑氯‑4‑(甲基氨基)吡啶‑3‑基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)环己基)氨基羧酸叔丁酯(0.40g，0.9mmol)、5‑氰基‑7‑氮杂吲哚(0.15g，1.0mmol)、三二亚苄基丙酮二钯(0.35g，0.4mmol)、4,5‑双二苯基膦‑9,9‑二甲基氧杂蒽 (0.22g，0.4mmol)、碳酸铯(0.92g，2.8mmol)和1,4‑二氧六环(16mL)。反应体系在氮气保护 下105℃反应16h。LCMS检测反应结束后，将反应液冷却至室温，随后经硅藻土过滤，滤饼用 乙酸乙酯洗涤。收集滤液，减压浓缩。浓缩物经硅胶柱纯化(DCM：MeOH＝10:1)，得到((1r, 4r)‑4‑(5‑(6‑(5‑氰基‑1H‑吡咯[2,3‑b]吡啶‑1‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑3‑基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)环己基)氨基羧酸叔丁酯(0.47g)。 [0408] 步骤6：1‑(5‑(5‑((1r,4r)‑4‑氨基环己基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑2‑基]‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑5‑甲腈的合成 [0409] 在50mL的反应瓶中加入((1r,4r)‑4‑(5‑(6‑(5‑氰基‑1H‑吡咯[2,3‑b]吡啶‑1‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑3‑基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)环己基)氨基羧酸叔丁酯(0.47g， 0.8mmol)、三氟乙酸(5mL)和二氯甲烷(5mL)。反应液在25℃下反应3h。减压浓缩得到1‑(5‑ (5‑((1r,4r)‑4‑氨基环己基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑2‑基]‑1H‑吡咯并+ [2,3‑b]吡啶‑5‑甲腈粗品(0.32g)。ESI‑MS(m/z):431.17[M+H]。 [0410] 中间体制备例8：1‑(5‑(5‑(7‑氮杂螺[3.5]壬烷‑2‑基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基]‑4‑(甲基氨基)吡啶‑2‑基]‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑5‑甲腈的合成 [0411] [0412] 参照中间体制备例7制备方法，仅将步骤3中反式‑4‑(叔丁氧羰基氨基甲基)环己基羧酸替换为7‑(叔丁氧羰基)‑7‑氮杂螺[3.5]壬烷‑2‑羧酸，得到1‑(5‑(5‑(7‑氮杂螺 [3.5]壬烷‑2‑基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基]‑4‑(甲基氨基)吡啶‑2‑基]‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡+ 啶‑5‑甲腈(0.28g)。ESI‑MS(m/z):457.18[M+H]。 [0413] 中间体制备例9：1‑(5‑(5‑(6‑氨基螺[3.3]庚烷‑2‑基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基]‑4‑(甲基胺基)吡啶‑2‑基]‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑5‑甲腈的合成 [0414] [0415] 参照中间体制备例7制备方法，仅将步骤3中反式‑4‑(叔丁氧羰基氨基甲基)环己基羧酸替换为6‑((叔丁氧羰基)氨基)螺[3.3]庚烷‑2‑羧酸，得到1‑(5‑(5‑(6‑氨基螺[3.3]庚烷‑2‑基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基]‑4‑(甲基胺基)吡啶‑2‑基]‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑5‑+ 甲腈(0.21g)。ESI‑MS(m/z):443.17[M+H]。 [0416] 中间体制备例10：5‑((1R,4R)‑2‑氧杂‑5‑氮杂双环[2.2.1]庚烷‑5‑基)‑N‑(3‑(二氟甲基)‑1‑((1r,4R)‑4‑甲酰基环己基)‑1H‑吡唑‑4‑基)吡唑并[1,5‑a]嘧啶‑3‑甲酰胺的合成 [0417] [0418] [0419] 步骤1：1‑苄基‑1H‑吡唑‑3‑甲醛的合成 [0420] 在250mL反应瓶，将1H‑吡唑‑3‑甲醛(20.0g，208.1mmol)溶于DMF(120mL)中，加入碳酸铯(271.3g，832.5mmol)和溴化苄(35.6g，208.1mmol)，室温反应1h。反应完毕后，抽滤， 滤液倒入200mL水中，用200mL EA萃取三次。合并有机相，用水洗3次，氯化钠水溶液洗1次， 加入硫酸钠干燥，减压浓缩有机相得粗品，经硅胶柱层析纯化(PE:EA＝30:1)得到1‑苄基‑ 1H‑吡唑‑3‑甲醛(18.0g)。 [0421] 步骤2：1‑苄基‑3‑(二氟甲基)‑1H‑吡唑的合成 [0422] 取100mL反应瓶，将1‑苄基‑1H‑吡唑‑3‑甲醛(10.0g，53.7mmol)溶于50mL二氯甲烷中，0℃下加入DAST(43.3g，268.5mmol)，25℃反应12h。LC‑MS确认反应结束，缓慢倒入冰水 中，EA萃取2次，合并有机相，用氯化钠水溶液洗，硫酸钠干燥，减压浓缩有机相。经硅胶柱层 析纯化(PE:EA＝50:1)得到1‑苄基‑3‑(二氟甲基)‑1H‑吡唑(8.5g)。 [0423] 步骤3：3‑(二氟甲基)‑1H‑吡唑的合成 [0424] 取500mL反应瓶,，将1‑苄基‑3‑(二氟甲基)‑1H‑吡唑(16.0g，76.8mmol)溶于MeOH(160mL)和HCl(16mL，9.09％)混合溶剂中，加入Pd(OH)2/C(1.6g,10％纯度)，氢气置换三 次，保持氢气环境下40℃反应12h。过滤，减压浓缩滤液得到3‑(二氟甲基)‑1H‑吡唑(9.0g)。 [0425] 步骤4：3‑(二氟甲基)‑4‑硝基‑1H‑吡唑的合成 [0426] 取250mL反应瓶，将3‑(二氟甲基)‑1H‑吡唑(9.0g，76.2mmol)溶于硫酸(90mL)中，降温到0℃，缓慢加入浓硝酸(18mL，285.6mmol，65％)，升温到115℃反应12h。将反应液倒入 300mL冰水中，用300mL EA萃取3次，合并有机相后硫酸钠干燥，减压浓缩有机相，得到3‑(二 1 氟甲基)‑4‑硝基‑1H‑吡唑(9.0g)。H NMR(600MHz，CDCl3)δ:11.78‑12.02(br s，1H)，8.49(s，1H)，7.27‑7.50(m，1H). [0427] 步骤5：5‑((1R,4R)‑2‑氧杂‑5‑氮杂双环[2.2.1]庚‑5‑基)吡唑并[1,5‑a]嘧啶‑3‑羧酸乙酯的合成 [0428] 将5‑氯吡唑并[1,5‑a]嘧啶‑3‑羧酸乙酯(2.0g，8.9mmol)溶于乙腈(20mL)中，然后依次加入(1R,4R)‑2‑氧杂‑5‑氮杂双环[2.2.1]庚烷盐酸盐(1.5g，10.6mmol)、N,N‑二异丙 基乙胺(3.5g，26.7mmol)。反应液在60℃反应3h。LC‑MS确认反应结束，将反应液减压浓缩后 用乙酸乙酯(100mL)溶解，用水(50mL)洗两次，有机相经无水硫酸钠干燥后，减压浓缩得到 5‑((1R,4R)‑2‑氧杂‑5‑氮杂双环[2.2.1]庚‑5‑基)吡唑并[1,5‑a]嘧啶‑3‑羧酸乙酯 + (2.5g)。ESI‑MS(m/z):289.1[M+H]。 [0429] 步骤6：5‑((1R,4R)‑2‑氧杂‑5‑氮杂双环[2.2.1]庚烷‑5‑基)吡唑并[1,5‑a]嘧啶‑3‑羧酸的合成 [0430] 将5‑((1R,4R)‑2‑氧杂‑5‑氮杂双环[2.2.1]庚‑5‑基)吡唑并[1,5‑a]嘧啶‑3‑羧酸乙酯(2.5g，8.7mmol)溶于甲醇(60ml)和水(20mL)中，然后加入一水合氢氧化锂(0.7g，17.4mmol)。加入完毕后，60℃反应16h。LC‑MS确认反应结束，减压浓缩后，倒入冰水中 (200mL)，水相用醋酸调节pH＝4‑5，然后用乙酸乙酯(100mL)萃取三次，有机相用氯化钠水 溶液(50mL)洗一次，然后经无水硫酸钠干燥后，减压浓缩得到5‑((1R,4R)‑2‑氧杂‑5‑氮杂 + 双环[2.2.1]庚烷‑5‑基)吡唑并[1,5‑a]嘧啶‑3‑羧酸(1.8g)。ESI‑MS(m/z):261.0[M+H]。 [0431] 步骤7：4‑((甲基磺酰基)氧基)环己烷‑1‑羧酸甲酯的合成 [0432] 将(1s,4s)‑4‑羟基环己烷‑1‑羧酸甲酯(10.0g，63.3mmol)溶于二氯甲烷(70ml)中，加入三乙胺(12.8g,126.6mmol)，0℃滴加甲基磺酰氯(9.4g,82.3mmol),室温下反应3h。 反应完毕后，加水(50mL)淬灭反应，二氯甲烷(50mL)萃取2次，有机相经无水硫酸钠干燥后， 减压浓缩得到4‑((甲基磺酰基)氧基)环己烷‑1‑羧酸甲酯(14.6g)。 [0433] 步骤8：(1r,4r)‑4‑(3‑(二氟甲基)‑4‑硝基‑1H‑吡唑‑1‑基)环己烷‑1‑羧酸甲酯的合成 [0434] 将3‑(二氟甲基)‑4‑硝基‑1H‑吡唑(5.0g，30.6mmol)溶于DMF(25mL)中，加入碳酸铯(20.0g,61.3mmol)。将4‑((甲基磺酰基)氧基)环己烷‑1‑羧酸甲酯(9.4g,39.3mmol)溶于 DMF(25mL)，滴入反应液中，经12‑13h滴加完毕，80℃反应16h。抽滤，滤液用乙酸乙酯 (100mL)稀释，用水(100mL)洗两次，饱和氯化钠洗涤，硫酸钠干燥，减压浓缩有机相。经硅胶 柱层析纯化(PE:EA＝8:1)得到产品(3.7g)。 [0435] 步骤9：((1r,4r)‑4‑(4‑氨基‑3‑(二氟甲基)‑1H‑吡唑‑1‑基)环己烷‑1‑羧酸甲酯的合成 [0436] 将((1r,4r)‑4‑(3‑(二氟甲基)‑4‑硝基‑1H‑吡唑‑1‑基)环己烷‑1‑羧酸甲酯(3.7g，12.2mmol)溶于THF(25mL)中，加入Pd/C(0.37g,10％纯度)，氢气置换三次，保持氢气 环境下室温反应12h。过滤，滤液减压浓缩得到((1r,4r)‑4‑(4‑氨基‑3‑(二氟甲基)‑1H‑吡+ 唑‑1‑基)环己烷‑1‑羧酸甲酯(3.1g)。ESI‑MS(m/z):274.1[M+H]。 [0437] 步骤10：(((1r,4r)‑4‑(4‑氨基‑3‑(二氟甲基)‑1H‑吡唑‑1‑基)环己基)甲醇的合成 [0438] 将((1r,4r)‑4‑(4‑氨基‑3‑(二氟甲基)‑1H‑吡唑‑1‑基)环己烷‑1‑羧酸甲酯(3.1g，10.2mmol)溶于THF(24mL)和甲醇(3mL)中，加入硼氢化锂(0.5g,20.4mmol),室温下 反应2h。反应完毕后，加入饱和氯化铵(10mL)淬灭反应，乙酸乙酯(20mL)萃取2次，饱和氯化 钠洗涤，硫酸钠干燥，减压浓缩有机相得到(((1r,4r)‑4‑(4‑氨基‑3‑(二氟甲基)‑1H‑吡唑‑ 1‑基)环己基)甲醇(2.5g)。 [0439] 步骤11：5‑((1R,4R)‑2‑氧杂‑5‑氮杂双环[2.2.1]庚烷‑5‑基)‑N‑(3‑(二氟甲基)‑1‑((1r,4R)‑4‑(羟甲基)环己基)‑1H‑吡唑‑4‑基)吡唑并[1,5‑a]嘧啶‑3‑甲酰胺的合成 [0440] 将5‑((1R,4R)‑2‑氧杂‑5‑氮杂双环[2.2.1]庚烷‑5‑基)吡唑并[1,5‑a]嘧啶‑3‑羧酸(2.7g,10.2mmol)溶于乙腈(12mL)，加入四甲基氯代脲六氟磷酸酯(3.4g,12.2mmol)和N‑甲基咪唑(3.4g,40.8mmol)，30℃下反应1h，然后加入((1r,4r)‑4‑(4‑氨基‑3‑(二氟甲基)‑ 1H‑吡唑‑1‑基)环己基)甲醇(2.5g,10.2mmol)30℃反应2h。反应完毕后，过滤，得到5‑((1R, 4R)‑2‑氧杂‑5‑氮杂双环[2.2.1]庚烷‑5‑基)‑N‑(3‑(二氟甲基)‑1‑((1r,4R)‑4‑(羟甲基)环己基)‑1H‑吡唑‑4‑基)吡唑并[1,5‑a]嘧啶‑3‑甲酰胺(2.5g)。 [0441] 步骤12：5‑(1R,4R)‑2‑氧杂‑5‑氮杂双环[2.2.1]庚烷‑5‑基)‑N‑(3‑(二氟甲基)‑1‑((1r,4R)‑4‑甲酰基环己基)‑1H‑吡唑‑4‑基)吡唑并[1,5‑a]嘧啶‑3‑甲酰胺的合成 [0442] 将5‑((1R,4R)‑2‑氧杂‑5‑氮杂双环[2.2.1]庚烷‑5‑基)‑N‑(3‑(二氟甲基)‑1‑((1r,4R)‑4‑(羟甲基)环己基)‑1H‑吡唑‑4‑基)吡唑并[1,5‑a]嘧啶‑3‑甲酰胺(2.5g,5.1mmol)溶于二氯甲烷(25mL)中，加入戴斯马丁氧化剂(2.8g,6.6mmol)。室温下反应1h。用 饱和硫代硫酸钠(10mL)淬灭，二氯甲烷萃取2次，饱和碳酸氢钠溶液洗，饱和氯化钠洗，硫酸 钠干燥，减压浓缩有机相得到5‑(1R,4R)‑2‑氧杂‑5‑氮杂双环[2.2.1]庚烷‑5‑基)‑N‑(3‑(二氟甲基)‑1‑((1r,4R)‑4‑甲酰基环己基)‑1H‑吡唑‑4‑基)吡唑并[1,5‑a]嘧啶‑3‑甲酰胺+ (2.5g)。ESI‑MS(m/z):486.2[M+H] . [0443] 中间体制备例11：3‑(2'‑氧代‑1‑(哌啶‑4‑甲基)螺[氮杂环丁烷‑3,3'‑吲哚啉]‑1'‑基)哌啶‑2,6‑二酮的合成 [0444] [0445] 步骤1：3‑(2'‑氧螺[氮杂环丁烷‑3,3'‑吲哚啉]‑1'‑基)哌啶‑2,6‑二酮的合成 [0446] 将1’‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2’‑氧螺[氮杂环丁烷‑3,3’‑吲哚啉]‑1‑羧酸叔丁酯(80mg,0.21mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(1mL),室温下反应2h。LC‑MS监控反应结束后，减压浓缩得到3‑(2'‑氧螺[氮杂环丁烷‑3,3'‑吲哚啉]‑1'‑基)哌啶‑2,6‑二酮粗品(90mg)。 [0447] 步骤2：4‑((1'‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2'‑氧螺[氮杂环丁烷‑3,3'‑吲哚啉]‑1‑基)甲基)哌啶‑1‑羧酸叔丁酯的合成 [0448] 将3‑(2'‑氧螺[氮杂环丁烷‑3,3'‑吲哚啉]‑1'‑基)哌啶‑2,6‑二酮(90mg,粗品)溶于四氢呋喃中，加入三乙胺调节pH到7‑8。室温下搅拌5min，随后加入冰醋酸调pH＝4‑5，将 4‑甲酰基哌啶‑1‑羧酸叔丁酯(44mg，0.21mmol)加入到反应体系中，室温下搅拌1h，随后再 加入三乙酰氧基硼氢化钠(79mg,0.38mmol)，室温下度反应过夜，LC‑MS监控反应结束。向体 系中加入水(1mL)淬灭。减压浓缩，经硅胶柱层析(DCM:MeOH＝15:1)纯化得到4‑((1'‑(2,6‑ 二氧哌啶‑3‑基)‑2'‑氧螺[氮杂环丁烷‑3,3'‑吲哚啉]‑1‑基)甲基)哌啶‑1‑羧酸叔丁酯 + (80mg)。ESI‑MS(m/z):483.2[M+H] . [0449] 中间体制备例12：2‑(4‑(1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2‑氧代‑2',3',5',6'‑四氢螺[吲哚啉‑3,4'‑吡喃]‑6‑基)哌嗪‑1‑基)乙酸叔丁酯的合成 [0450] [0451] 步骤1：4‑(2‑氧代‑2',3',5',6'‑四氢螺[吲哚啉‑3,4'‑吡喃]‑6‑基)哌嗪‑1‑羧酸叔丁酯的合成 [0452] 在100mL的反应瓶中加入6‑溴‑2',3',5',6'‑四氢螺[吲哚啉‑3,4'‑吡喃]‑2‑酮(800mg，2.84mmol)、1‑叔丁氧羰基哌嗪(792mg，4.25mmol)、三二亚苄基丙酮二钯(779mg， 0.85mmol)、2‑二环己基磷‑2',6'‑二异丙基联苯(397mg，0.85mmol)、叔丁醇钠(817mg， 8.51mmol)和1,4‑二氧六环(20mL)。反应体系在氮气保护下80℃反应8h。LC‑MS检测反应结 束后，将反应液冷却至室温，随后经硅藻土过滤，滤饼用乙酸乙酯洗涤。收集滤液，减压浓 缩。将浓缩物经硅胶柱纯化(DCM:MeOH＝100:1)，得到4‑(2‑氧代‑2',3',5',6'‑四氢螺[吲 + 哚啉‑3,4'‑吡喃]‑6‑基)哌嗪‑1‑羧酸叔丁酯(237mg)。ESI‑MS(m/z):388.48[M+H]。 [0453] 步骤2：4‑1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2‑氧代‑2',3',5',6'‑四氢螺[吲哚啉‑3,4'‑吡喃]‑6‑基)哌嗪‑1‑羧酸叔丁酯的合成 [0454] 在100mL反应瓶中加入4‑(2‑氧代‑2',3',5',6'‑四氢螺[吲哚啉‑3,4'‑吡喃]‑6‑基)哌嗪‑1‑羧酸叔丁酯(207mg，0.53mmol)、THF(10mL)，然后缓慢加入60％氢化钠(214mg, 5.34mmol)，将该反应在室温下搅拌0.5h，加入3‑溴哌啶‑2，6‑二酮(513mg，2.67mmol)，升温至60℃反应4h。LC‑MS显示反应完毕，后处理，加入饱和氯化铵溶液淬灭反应，再加入乙酸乙 酯，萃取分液，得到的有机相减压浓缩后，将浓缩物经柱层析进行纯化(DCM：MeOH＝50:1)， 得到4‑1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2‑氧代‑2',3',5',6'‑四氢螺[吲哚啉‑3,4'‑吡喃]‑6‑基)+ 哌嗪‑1‑羧酸叔丁酯(188mg)。ESI‑MS(m/z):499.48[M+H]。 [0455] 步骤3：3‑(2‑氧代‑6‑(哌嗪‑1‑基)‑2',3',5',6'‑四氢螺[吲哚啉‑3,4'‑吡喃]‑1‑基)哌啶‑2,6‑二酮的合成 [0456] 在50mL的反应瓶中加入4‑1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2‑氧代‑2',3',5',6'‑四氢螺[吲哚啉‑3,4'‑吡喃]‑6‑基)哌嗪‑1‑羧酸叔丁酯(94mg，0.19mmol)、二氯甲烷(2mL)和三氟乙酸(2mL)。反应液在室温下反应3h。LC‑MS检测反应结束后，减压浓缩，得到3‑(2‑氧代‑6‑(哌嗪‑1‑基)‑2',3',5',6'‑四氢螺[吲哚啉‑3,4'‑吡喃]‑1‑基)哌啶‑2,6‑二酮粗品 + (75mg)。ESI‑MS(m/z):513.54[M+H]。 [0457] 步骤4：2‑(4‑(1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2‑氧代‑2',3',5',6'‑四氢螺[吲哚啉‑3,4'‑吡喃]‑6‑基)哌嗪‑1‑基)乙酸叔丁酯的合成 [0458] 在50mL的反应瓶中加入3‑(2‑氧代‑6‑(哌嗪‑1‑基)‑2',3',5',6'‑四氢螺[吲哚啉‑3,4'‑吡喃]‑1‑基)哌啶‑2,6‑二酮粗品(75mg，0.19mmol)、2‑溴乙酸叔丁酯(48mg, 0.25mmol)、N,N‑二异丙基乙胺(86mg,0.66mmol)和乙腈(10mL)。反应液在70℃下反应8h。 LC‑MS检测反应结束后，减压浓缩，将浓缩物经硅胶柱层析纯化(DCM:MeOH＝50:1)，得到2‑ (4‑(1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2‑氧代‑2',3',5',6'‑四氢螺[吲哚啉‑3,4'‑吡喃]‑6‑基)哌+ 嗪‑1‑基)乙酸叔丁酯(52mg)。ESI‑MS(m/z):513.54[M+H]。 [0459] 中间体制备例13：2‑((1'‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2'‑氧螺[氮杂环丁烷‑3,3'‑吲哚啉]‑1‑基)甲基)‑7‑氮螺[3.5]壬‑7‑羧酸叔丁酯的合成 [0460] [0461] 参照中间体制备例11制备方法，将中间体制备例11步骤2中的4‑甲酰基哌啶‑1‑羧酸叔丁酯替换为2‑甲酰基‑7‑氮杂螺[3.5]壬烷‑7‑羧酸叔丁酯，得到2‑((1'‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2'‑氧螺[氮杂环丁烷‑3,3'‑吲哚啉]‑1‑基)甲基)‑7‑氮螺[3.5]壬‑7‑羧酸叔丁+ 酯(70mg)。ESI‑MS(m/z):523.3[M+H]。 [0462] 实施例1:1‑(5‑(5‑(7‑(2‑(1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2‑氧螺[吲哚啉‑3,3'‑吡咯烷]‑1'‑基)乙酰基)‑7‑氮杂螺环[3.5]壬烷‑2‑基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑2‑酰基)‑1H‑吡咯[2,3‑b]吡啶‑5‑甲腈(化合物1)的合成 [0463] [0464] 步骤1：2‑(1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2‑氧螺[吲哚啉‑3,3'‑吡咯烷]‑1'‑基)乙酸的合成 [0465] 在25mL的反应瓶中,将2‑(1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2‑氧螺[吲哚啉‑3,3'‑吡咯烷]‑1'‑基)乙酸叔丁酯(40mg,0.1mmol)溶于二氯甲烷(2mL)中，加入三氟乙酸(1mL)。室温 反应3h,LC‑MS检测反应结束后，将反应液减压浓缩，得到2‑(1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2‑氧+ 螺[吲哚啉‑3,3'‑吡咯烷]‑1'‑基)乙酸粗品(50mg)。ESI‑MS(m/z):358.37[M+H]。 [0466] 步骤2：1‑(5‑(5‑(7‑(2‑(1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2‑氧螺[吲哚啉‑3,3'‑吡咯烷]‑1'‑基)乙酰基)‑7‑氮杂螺环[3.5]壬烷‑2‑基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑2‑酰基)‑1H‑吡咯[2,3‑b]吡啶‑5‑甲腈的合成 [0467] 在25mL的反应瓶中,将粗品2‑(1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2‑氧螺[吲哚啉‑3,3'‑吡咯烷]‑1'‑基)乙酸(50mg)和1‑(5‑(5‑(7‑氮杂螺[3.5]壬烷‑2‑基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑2‑基)‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑5‑甲腈(44mg,0.1mmol)溶于DMF(2mL) 中，然后加入N,N‑二异丙基乙胺(0.078ml,0.4mmol)和HATU(64mg,0.8mmol)。室温反应2h， LC‑MS检测反应结束后，将反应液倒入水中析出固体过滤收集固体，烘干进行TLC制备(DCM: MeOH＝15:1)，得到1‑(5‑(5‑(7‑(2‑(1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2‑氧螺[吲哚啉‑3,3'‑吡咯烷]‑1'‑基)乙酰基)‑7‑氮杂螺环[3.5]壬烷‑2‑基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)‑4‑(甲基氨基)吡+ 1 啶‑2‑酰基)‑1H‑吡咯[2,3‑b]吡啶‑5‑甲腈(31mg)。ESI‑MS(m/z):796.31[M+H] 。H NMR (600MHz，DMSO‑d6)δ：1.08(s,1H),8.82(s,1H),8.72(s,1H),8.66(s,1H),8.55(d,J＝ 3.7Hz,1H),8.52(s,1H),8.21(s,1H),7.50–7.40(m,1H),7.30–7.20(m,1H),7.16–7.04(m, 1H),6.97(s,1H),6.89(d,J＝3.7Hz,1H),5.24(s,1H),4.26–3.97(m,1H),3.64–3.43(m, 4H),3.17(d,J＝5.1Hz,1H),3.10(d,J＝2.6Hz,3H),2.92–2.81(m,2H),2.74–2.61(m,4H), 2.49–2.39(m,4H),2.24–2.11(m,3H),2.02–1.91(m,2H),1.79(s,1H),1.65(s,2H),1.51(s, 1H). [0468] 实施例2:1‑(5‑(5‑(7‑(2‑(1’‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2’‑氧螺[氮杂环丁烷‑3,3’‑吲哚啉]‑1‑基)乙酰基)‑7‑氮杂螺[3.5]壬烷‑2‑基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑2‑基)‑1H‑吡咯[2,3‑b]吡啶‑5‑甲腈(化合物2)的合成 [0469] [0470] 参照实施例1制备方法，将实施例1步骤1中的2‑(1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2‑氧螺[吲哚啉‑3,3'‑吡咯烷]‑1'‑基)乙酸叔丁酯替换为2‑(1’‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2’‑氧螺[氮杂环丁烷‑3,3’‑吲哚啉]‑1‑基)乙酸叔丁酯得到1‑(5‑(5‑(7‑(2‑(1’‑(2,6‑二氧哌啶‑ 3‑基)‑2’‑氧螺[氮杂环丁烷‑3,3’‑吲哚啉]‑1‑基)乙酰基)‑7‑氮杂螺[3.5]壬烷‑2‑基)‑1, 3,4‑噻二唑‑2‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑2‑基)‑1H‑吡咯[2,3‑b]吡啶‑5‑甲腈(21mg)。ESI‑+ 1 MS(m/z):782.29[M+H]；H NMR(600MHz，DMSO‑d6)δ：11.09(s,1H),8.85(d,J＝1.5Hz,1H), 8.75(s,1H),8.69(s,1H),8.57(d,J＝5.6Hz,2H),8.24(s,1H),7.74(t,J＝7.5Hz,1H),7.26 (d,J＝32.3Hz,1H),7.16(dd,J＝12.5,7.2Hz,1H),6.96(s,1H),6.92(d,J＝3.8Hz,1H), 5.26(s,1H),4.09(dt,J＝29.9,15.1Hz,1H),3.62–3.51(m,5H),3.48(d,J＝14.8Hz,4H), 3.12(d,J＝4.5Hz,3H),2.90(t,J＝34.3Hz,1H),2.61(d,J＝15.3Hz,3H),2.45(dd,J＝ 28.8,19.6Hz,2H),2.20(dd,J＝19.9,10.5Hz,2H),1.98(d,J＝23.0Hz,1H),1.80(s,1H), 1.66(s,2H),1.53(s,1H)。 [0471] 实施例3：N‑(6‑(6‑(6‑(5‑氰基‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑1‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑3‑基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)螺[3.3]庚烷‑2‑基)‑2‑(1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2‑氧螺[吲哚啉‑3.3’‑吡咯烷]‑1‑基)乙酰胺(化合物3)的合成 [0472] [0473] 参照实施例1制备方法，将实施例1步骤2中的1‑(5‑(5‑(7‑氮杂螺[3.5]壬烷‑2‑基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑2‑基)‑1H‑吡咯[2,3‑b]吡啶‑5‑甲腈替换为 1‑(5‑(5‑(6‑氨基螺[3.3]庚烷‑2‑基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑2‑基)‑ 1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑5‑甲腈，得到N‑(6‑(6‑(6‑(5‑氰基‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑1‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑3‑基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)螺[3.3]庚烷‑2‑基)‑2‑(1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2‑氧螺[吲哚啉‑3.3’‑吡咯烷]‑1‑基)乙酰胺(30mg)。ESI‑MS(m/z):782.7[M++ 1 H]。H NMR(600MHz，DMSO‑d6)δ：11.10(s,1H),8.82(s,1H),8.71(d,J＝4.5Hz,1H),8.66(s, 1H),8.55(d,J＝3.7Hz,1H),8.52(s,1H),8.21(s,1H),8.02(d,J＝7.8Hz,1H),7.53(d,J＝ 7.2Hz,1H),7.26(t,J＝7.5Hz,1H),7.10(t,J＝7.4Hz,1H),6.99(s,1H),6.90(d,J＝3.7Hz, 1H),5.24(s,1H),4.16(dt,J＝15.9,7.9Hz,1H),3.97–3.89(m,1H),3.16(s,2H),3.10(d,J ＝4.7Hz,3H),2.88(dd,J＝12.4,6.3Hz,2H),2.80(dd,J＝10.7,7.1Hz,2H),2.68–2.58(m, 5H),2.39(dt,J＝16.1,9.3Hz,3H),2.25(ddd,J＝18.0,12.0,4.7Hz,2H),2.11–1.98(m, 4H)。 [0474] 实施例4：N‑(1r,4r)‑4‑(5‑(6‑(5‑氰基‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑1‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑3‑基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)环己基)‑2‑(1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑5‑氟‑2‑氧螺[吲哚啉‑3,4’‑哌啶]‑1’‑基)乙酰(化合物4)胺的合成 [0475] [0476] 参照实施例1制备方法，将实施例1步骤1中的2‑(1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2‑氧螺[吲哚啉‑3,3'‑吡咯烷]‑1'‑基)乙酸叔丁酯替换为2‑(1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑5‑氟‑2‑氧螺[吲哚啉‑3,4'‑哌啶]‑1'‑基)乙酸叔丁酯，将实施例1步骤2中的1‑(5‑(5‑(7‑氮杂螺环 [3.5]壬烷‑2‑基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑2‑基)‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑5‑甲腈替换为1‑(5‑(5‑((1r,4r)‑4‑氨基环己基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑2‑基)‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑5‑甲腈，得到N‑(1r,4r)‑4‑(5‑(6‑(5‑氰基‑1H‑吡咯[2,3‑b]吡啶‑1‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑3‑基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)环己基)‑2‑(1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑5‑氟‑2‑氧螺[吲哚啉‑3,4’‑哌啶]‑1’‑基)乙酰胺(40mg)。ESI‑MS(m/z): + 1 802.7[M+H] 。H NMR(600MHz，DMSO‑d6)δ：11.09(s,1H),8.86(s,1H),8.76(d,J＝4.5Hz, 1H),8.70(s,1H),8.61–8.56(m,2H),8.25(s,1H),7.69(d,J＝8.1Hz,1H),7.53(d,J＝ 7.8Hz,1H),7.12(d,J＝8.2Hz,1H),7.03(s,1H),6.93(d,J＝3.7Hz,1H),5.23(s,1H),3.74 (d,J＝7.7Hz,2H),3.12(d,J＝4.7Hz,3H),3.10(s,2H),2.86(d,J＝5.7Hz,3H),2.76(s, 2H),2.22(d,J＝11.8Hz,2H),1.95(d,J＝10.1Hz,3H),1.83(s,4H),1.71(dd,J＝24.2, 11.7Hz,3H),1.53(dd,J＝23.0,11.3Hz,3H)。 [0477] 实施例5:1‑(5‑(5‑(7‑(2‑(1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑5‑氟‑2‑氧螺[吲哚啉‑3,4'‑哌啶]‑1'‑基)乙酰基)‑7‑氮杂螺环[3.5]壬烷‑2‑基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑2‑酰基)‑1H‑吡咯[2,3‑b]吡啶‑5‑甲腈(化合物5)的合成 [0478] [0479] 参照实施例1制备方法，将实施例1步骤1中的2‑(1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2‑氧螺[吲哚啉‑3,3'‑吡咯烷]‑1‑基)乙酸叔丁酯替换为2‑(1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑5‑氟‑2‑氧螺[吲哚啉‑3,4'‑哌啶]‑1'‑基)乙酸叔丁酯，得到(1‑(5‑(5‑(7‑(2‑(1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑5‑氟‑2‑氧螺[吲哚啉‑3,4'‑哌啶]‑1'‑基)乙酰基)‑7‑氮杂螺环[3.5]壬烷‑2‑基)‑1, 3,4‑噻二唑‑2‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑2‑酰基)‑1H‑吡咯[2,3‑b]吡啶‑5‑甲腈(27mg,)。 + 1 ESI‑MS(m/z):828.31[M+H]；H NMR(600MHz，DMSO‑d6)δ：11.09(s,1H),8.79(s,1H),8.70 (s,1H),8.63(s,1H),8.53(d,J＝3.0Hz,1H),8.47(s,1H),8.18(s,1H),7.56(s,1H),7.12 (s,1H),7.03(s,1H),6.88(d,J＝2.9Hz,1H),5.24(s,1H),4.17–3.95(m,1H),3.61–3.38(m, 6H),3.09(d,J＝3.9Hz,3H),2.92–2.74(m,5H),2.65–2.58(m,2H),2.47–2.41(m,2H),2.18 (d,J＝9.4Hz,2H),2.01–1.90(m,1H),1.88–1.75(m,3H),1.80–1.71(m,2H),1.74–1.60(m, 4H),1.53(s,1H). [0480] 实施例6：1‑(5‑(5‑((1r,4r)‑4‑(1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑5‑氟‑2‑氧螺[吲哚啉‑3,4’‑哌啶]‑1’‑基)甲基)环己基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑2‑基)‑1H‑吡咯[2,3‑b]吡啶‑5‑甲腈(化合物6)的合成 [0481] [0482] 步骤1：3‑(5‑氟‑2‑氧螺[吲哚啉‑3,4’‑哌啶]‑1‑基)哌啶‑2,6‑二酮的合成 [0483] 在50mL的反应瓶中加入1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑5‑氟‑2‑氧螺[吲哚啉‑3,4’‑哌啶]‑1’‑羧酸叔丁酯(50mg，0.09mmol)、三氟乙酸(1mL)和二氯甲烷(5mL)。反应液在25℃下反应3h。LC‑MS监控反应结束，减压浓缩，得到3‑(5‑氟‑2‑氧螺[吲哚啉‑3,4’‑哌啶]‑1‑基)+ 哌啶‑2,6‑二酮粗品(0.1g)。ESI‑MS(m/z):332.1[M+H]。 [0484] 步骤2：1‑(5‑(5‑((1r,4r)‑4‑(1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑5‑氟‑2‑氧螺[吲哚啉‑3,4’‑哌啶]‑1’‑基)甲基)环己基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑2‑基)‑1H‑吡咯[2,3‑b]吡啶‑5‑甲腈的合成 [0485] 将3‑(5‑氟‑2‑氧螺[吲哚啉‑3,4’‑哌啶]‑1‑基)哌啶‑2,6‑二酮粗品(100mg)溶于四氢呋喃(2.0ml)和N,N‑二甲基甲酰胺(2mL)中，加入三乙胺调节pH到7‑8。室温下搅拌5分钟，随后加入冰醋酸调pH到4‑5，将1‑(5‑(5‑((1r,4r)‑4‑甲酰基环己基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑2‑基)‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑5‑甲腈(51mg，0.09mmol)加入到反应体系中，室温下搅拌1h，随后再加入三乙酰氧基硼氢化钠(49mg,0.18mmol)，室温下反应 2h，LC‑MS监控反应结束。向体系中加入水(1mL)淬灭。减压浓缩，粗品经Prep‑TLC(DCM/MeOH ＝15/1)纯化得到1‑(5‑(5‑((1r,4r)‑4‑(1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑5‑氟‑2‑氧螺[吲哚啉‑ 3,4’‑哌啶]‑1’‑基)甲基)环己基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑2‑基)‑1H‑吡+ 1 咯[2,3‑b]吡啶‑5‑甲腈(50mg)。ESI‑MS(m/z):759.3[M+H]。H NMR(600MHz，DMSO‑d6)δ： 11.09(s,1H),8.86(s,1H),8.77(s,1H),8.70(s,1H),8.58(s,2H),8.25(s,1H),7.45(s, 1H),7.11(s,1H),7.01(s,1H),6.93(d,J＝3.6Hz,1H),3.12(d,J＝4.4Hz,3H),2.21(d,J＝ 10.4Hz,4H),1.99(d,J＝12.0Hz,4H),1.81(s,5H),1.69(s,1H),1.62(d,J＝12.0Hz,3H), 1.24(s,4H),1.15(s,4H)。 [0486] 实施例7:N‑(6‑(5‑(6‑(5‑氰基‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑1‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑3‑基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)螺[3.3]庚‑2‑基)‑2‑(4‑(1’‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2’‑氧代‑1,3‑二氢螺[茚‑2,3’‑吲哚啉]‑5‑基)哌嗪‑1‑基)乙酰胺(化合物7)的合成 [0487] [0488] 步骤1：2‑(4‑(1'‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2'‑氧代‑1,3‑二氢螺[茚‑2,3'‑吲哚啉]‑5‑基)哌嗪‑1‑基)乙酸的合成 [0489] 在100mL的反应瓶中加入2‑(4‑(1’‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2’‑氧代‑1,3‑二氢螺[茚‑2,3’‑吲哚啉]‑5‑基)哌嗪‑1‑基)乙酸叔丁酯(120mg，0.22mmol)、三氟乙酸(2mL)和二氯甲烷(5mL)。反应液在25℃下反应2h。LC‑MS检测反应结束后，减压浓缩，得到2‑(4‑(1'‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2'‑氧代‑1,3‑二氢螺[茚‑2,3'‑吲哚啉]‑5‑基)哌嗪‑1‑基)乙酸粗+ 品(130mg)。ESI‑MS(m/z):489.21[M+H]。 [0490] 步骤2：N‑(6‑(5‑(6‑(5‑氰基‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑1‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑3‑基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)螺[3.3]庚‑2‑基)‑2‑(4‑(1’‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2’‑氧代‑ 1,3‑二氢螺[茚‑2,3’‑吲哚啉]‑5‑基)哌嗪‑1‑基)乙酰胺的合成： [0491] 将1‑(5‑(5‑(6‑氨基螺[3.3]庚‑2‑基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑2‑基)‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑5‑甲腈粗品(70mg)、2‑(4‑(1'‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2'‑氧代‑1,3‑二氢螺[茚‑2,3'‑吲哚啉]‑5‑基)哌嗪‑1‑基)乙酸粗品(70mg)、TEA(50mg, 0.49mmol)的DMF(5mL)溶液降温至0℃，向反应液中加入HATU(51mg,0.13mmol)，恢复室温反 应2h，LC‑MS监测反应完全。向反应液中加入EA(50mL)和水(50mL)，混合搅拌，分液，水相用 EA(10mL×2)萃取，并用饱和氯化钠水溶液(30mL)洗涤合并的有机相，将有机相减压浓缩至 干，浓缩物经硅胶柱层析纯化(DCM:MeOH＝50:1‑20:1)得到N‑(6‑(5‑(6‑(5‑氰基‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑1‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑3‑基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)螺[3.3]庚‑2‑基)‑ 2‑(4‑(1’‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2’‑氧代‑1,3‑二氢螺[茚‑2,3’‑吲哚啉]‑5‑基)哌嗪‑1‑+ 1 基)乙酰胺(35mg)。ESI‑MS(m/z):913.36[M+H]。H NMR(600MHz，DMSO‑d6)δ：11.10(s,1H), 8.85(d,J＝1.7Hz,1H),8.73(d,J＝4.6Hz,1H),8.68(d,J＝1.7Hz,1H),8.60–8.52(m,2H), 8.23(s,1H),7.95(d,J＝7.9Hz,1H),7.25(d,J＝3.9Hz,1H),7.13(d,J＝8.3Hz,1H),7.01 (s,1H),6.97(d,J＝4.1Hz,2H),6.91(d,J＝3.9Hz,2H),6.84(d,J＝8.2Hz,1H),5.27(s, 1H),4.19(dt,J＝16.4,8.1Hz,1H),4.00–3.91(m,1H),3.27(d,J＝4.3Hz,3H),3.19(s,4H), 3.11(d,J＝4.9Hz,3H),3.09–2.99(m,2H),2.96(s,2H),2.90(s,1H),2.75–2.62(m,3H), 2.59(s,4H),2.46–2.33(m,3H),2.31–2.22(m,1H),2.17–2.10(m,1H),2.04(dd,J＝22.6, 11.6Hz,2H). [0492] 实施例8：1‑(5‑(5‑((1r,4r)‑4‑(1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2‑氧螺[吲哚啉‑3,4’‑哌啶]‑1’‑基)甲基)环己基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑2‑基)‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑5‑甲腈(化合物8)的合成 [0493] [0494] 参照实施例6制备方法，将实施例6步骤1中的1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑5‑氟‑2‑氧螺[吲哚啉‑3,4’‑哌啶]‑1’‑羧酸叔丁酯替换为1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2‑氧螺[吲哚啉‑3,4'‑哌啶]‑1'‑羧酸叔丁酯，得到1‑(5‑(5‑((1r,4r)‑4‑(1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2‑氧螺[吲哚啉‑3,4’‑哌啶]‑1’‑基)甲基)环己基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑2‑+ 1 基)‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑5‑甲腈(14mg)。ESI‑MS(m/z):740.7[M+H] 。H NMR(600MHz， DMSO‑d6)δ：11.08(s,1H),8.86(d,J＝1.6Hz,1H),8.77(d,J＝4.5Hz,1H),8.70(d,J＝ 1.7Hz,1H),8.61–8.57(m,2H),8.25(s,1H),7.54(s,1H),7.26(d,J＝7.2Hz,1H),7.06(t,J ＝7.4Hz,1H),6.99(s,1H),6.93(d,J＝3.9Hz,1H),3.12(d,J＝4.8Hz,3H),2.92–2.76(m, 4H),2.21(d,J＝10.8Hz,2H),1.99(d,J＝11.5Hz,3H),1.85–1.67(m,6H),1.62(dd,J＝ 23.4,12.1Hz,3H),1.26(d,J＝14.5Hz,4H),1.14(d,J＝13.1Hz,3H)。 [0495] 实施例9：N‑((1r,4r)‑4‑(5‑(6‑(5‑氰基‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑1‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑3‑基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)环己基)‑2‑(4‑(1'‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2'‑氧代‑1,3‑二氢螺[茚‑2,3'‑吲哚啉]‑5‑基)哌嗪‑1‑基)乙酰胺(化合物10)的合成 [0496] [0497] 参照实施例1制备方法，将实施例1步骤1中的2‑(1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2‑氧螺[吲哚啉‑3,3'‑吡咯烷]‑1'‑基)乙酸叔丁酯替换为2‑(4‑(1’‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2’‑氧代‑1,3‑二氢螺[茚‑2,3’‑吲哚啉]‑5‑基)哌嗪‑1‑基)乙酸叔丁酯，将实施例1步骤2中的1‑(5‑(5‑(7‑氮杂螺[3.5]壬烷‑2‑基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑2‑基)‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑5‑甲腈替换为1‑(5‑(5‑((1r,4r)‑4‑氨基环己基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑2‑基)‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑5‑甲腈，得到N‑((1r,4r)‑4‑(5‑(6‑(5‑氰基‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑1‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑3‑基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)环己基)‑2‑(4‑(1'‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2'‑氧代‑1,3‑二氢螺[茚‑2,3'‑吲哚啉]‑5‑+ 1 基)哌嗪‑1‑基)乙酰胺(40mg)。ESI‑MS(m/z):901.36[M+H] ；H NMR(600MHz，DMSO‑d6)δ: 11.10(s,1H),8.84(d,J＝1.8Hz,1H),8.74(d,J＝4.7Hz,1H),8.68(d,J＝1.8Hz,1H),8.58– 8.54(m,2H),8.23(s,1H),7.69(s,1H),7.25(s,1H),7.14(d,J＝8.3Hz,1H),6.99(t,J＝ 13.3Hz,3H),6.92(d,J＝3.6Hz,2H),6.85(d,J＝7.8Hz,1H),5.26(s,1H),4.08–3.99(m, 1H),3.72(d,J＝8.2Hz,1H),3.20(s,4H),3.11(d,J＝4.8Hz,4H),2.88(d,J＝13.4Hz,2H), 2.66(dd,J＝25.0,11.9Hz,5H),2.20(d,J＝11.1Hz,3H),2.08(s,2H),2.00(s,3H),1.94(d, J＝10.4Hz,2H),1.69(dd,J＝23.3,11.7Hz,2H),1.50(dd,J＝23.2,10.9Hz,2H)。 [0498] 实施例10：1‑(5‑(5‑(2‑(2‑(1’‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2’‑氧螺[吲哚啉‑3,3’‑氮杂环丁烷]‑1‑基)乙酰基)‑2‑氮杂螺[3.3]庚烷‑6‑基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑2‑基)‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑5‑甲腈(化合物11)的合成 [0499] [0500] 参照实施例1制备方法，将实施例1步骤1中的2‑(1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2‑氧螺[吲哚啉‑3,3'‑吡咯烷]‑1'‑基)乙酸叔丁酯替换为2‑(1'‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2'‑氧螺[吲哚啉‑3,3'‑氮杂环丁烷]‑1‑基)乙酸叔丁酯，将实施例1步骤2中的1‑(5‑(5‑(7‑氮杂螺环[3.5]壬烷‑2‑基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑2‑基)‑1H‑吡咯[2,3‑b]吡啶‑5‑甲腈替换为1‑(5‑(5‑(2‑氮杂螺[3.3]庚烷‑6‑基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑2‑基)‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑5‑甲腈，得到1‑(5‑(5‑(2‑(2‑(1’‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2’‑氧螺[吲哚啉‑3,3’‑氮杂环丁烷]‑1‑基)乙酰基)‑2‑氮杂螺[3.3]庚烷‑6‑基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑2‑基)‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑5‑甲腈+ 1 (30mg)。ESI‑MS(m/z):754.3[M+H]。H NMR(600MHz,DMSO)δ11.09(s,1H),8.85(s,1H),8.74 (s,1H),8.69(s,1H),8.57(d,J＝3.5Hz,2H),8.24(s,1H),7.78–7.70(m,1H),7.30–7.25(m, 1H),7.15(dd,J＝16.7,8.0Hz,1H),6.95(s,1H),6.92(d,J＝3.6Hz,1H),5.25(s,1H),4.37 (s,1H),4.24(s,1H),4.03(s,1H),4.02–3.97(m,1H),3.89(s,1H),3.57(d,J＝11.0Hz,2H), 3.54(d,J＝8.6Hz,2H),3.24(d,J＝13.1Hz,3H),3.12(d,J＝4.3Hz,3H),2.87(s,1H),2.81 (dd,J＝21.4,12.2Hz,3H),2.62(d,J＝4.6Hz,2H),1.96(s,1H)。 [0501] 实施例11：1‑(5‑(5‑(2‑(2‑(1‑(1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2‑氧螺[吲哚啉‑3,4'‑哌啶]‑1'‑基)乙酰基)‑2‑氮杂螺[3.3]庚烷‑6‑基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑2‑基)‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑5‑甲腈(化合物12)的合成 [0502] [0503] 参照实施例1制备方法，将实施例1步骤1中的2‑(1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2‑氧螺[吲哚啉‑3,3'‑吡咯烷]‑1'‑基)乙酸叔丁酯替换为2‑(1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2‑氧螺[吲哚啉‑3,4'‑哌啶]‑1'‑基)乙酸叔丁酯，将实施例1步骤2中的1‑(5‑(5‑(7‑氮杂螺[3.5]壬 烷‑2‑基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑2‑基)‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑5‑甲腈替换为1‑(5‑(5‑(2‑氮杂螺[3.3]庚烷‑6‑基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑ 2‑基)‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑5‑甲腈，得到1‑(5‑(5‑(2‑(2‑(1‑(1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2‑氧螺[吲哚啉‑3,4'‑哌啶]‑1'‑基)乙酰基)‑2‑氮杂螺[3.3]庚烷‑6‑基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑2‑基)‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑5‑甲腈(35mg)。ESI‑MS(m/+ 1 z):782.3[M+H]。H NMR(600MHz,DMSO)δ11.05(s,1H),8.81(s,1H),8.70(s,1H),8.65(s, 1H),8.56–8.51(m,2H),8.20(s,1H),7.59(t,J＝7.7Hz,1H),7.24(d,J＝6.2Hz,1H),7.04 (dd,J＝15.6,7.8Hz,1H),6.97(s,1H),6.88(d,J＝3.5Hz,1H),5.20(s,1H),4.38(s,1H), 4.24(s,1H),4.02(s,1H),3.96(dd,J＝17.2,8.6Hz,1H),3.88(s,1H),3.12(d,J＝14.0Hz, 2H),3.08(d,J＝4.6Hz,3H),2.77(s,6H),2.63–2.53(m,5H),1.94(s,1H),1.78(s,2H),1.69 (s,2H)。 [0504] 实施例12：5‑((1R,4R)‑2‑氧杂‑5‑偶氮双环[2.2.1]庚烷‑5‑基)‑N‑(3‑(二氟甲基)‑1‑((1r,4R)‑4‑(4‑(1‑(1'‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2'‑氧螺[吲哚啉‑3,3'‑氮杂环丁烷]‑1‑基)哌啶‑1‑基)甲基)环己基)‑1H‑吡唑‑4‑基)吡唑并[1,5‑a]嘧啶‑3‑甲酰胺(化合物13)的合成 [0505] [0506] 参照实施例6制备方法，将实施例6步骤1中的1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑5‑氟‑2‑氧螺[吲哚啉‑3,4’‑哌啶]‑1’‑羧酸叔丁酯替换为4‑(1'‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2'‑氧螺[吲哚啉‑3,3'‑氮杂环丁烷]‑1‑基)哌啶‑1‑羧酸叔丁酯，将实施例6步骤2中的1‑(5‑(5‑((1r,4r)‑4‑甲酰基环己基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑2‑基)‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑5‑甲腈替换为5‑((1R,4R)‑2‑氧杂‑5‑氮杂双环[2.2.1]庚烷‑5‑基)‑N‑(3‑(二氟甲基)‑1‑((1r,4R)‑4‑甲酰基环己基)‑1H‑吡唑‑4‑基)吡唑并[1,5‑a]嘧啶‑3‑甲酰胺，得到5‑((1R,4R)‑2‑氧杂‑5‑偶氮双环[2.2.1]庚烷‑5‑基)‑N‑(3‑(二氟甲基)‑1‑((1r,4R)‑4‑(4‑(1‑(1'‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2'‑氧螺[吲哚啉‑3,3'‑氮杂环丁烷]‑1‑基)哌啶‑1‑基)甲基)环己基)‑1H‑吡唑‑4‑基)吡唑并[1,5‑a]嘧啶‑3‑甲酰胺(25mg)。ESI‑MS(m/z):838.6[M++ 1 H]。H NMR(600MHz,DMSO)δ：11.11(s,1H),9.53(d,J＝10.1Hz,1H),8.80(d,J＝7.6Hz,1H), 8.42(s,1H),8.27(d,J＝8.3Hz,1H),7.81(dd,J＝51.6,42.4Hz,1H),7.32(s,1H),7.17(t,J ＝24.7Hz,2H),7.02(d,J＝18.8Hz,1H),6.88‑6.47(m,1H),5.26‑5.09(m,J＝39.5Hz,2H), 4.78(d,J＝31.9Hz,1H),4.26(s,1H),3.83‑3.75(m,2H),3.65(d,J＝9.8Hz,1H),3.61(s, 1H),3.46(d,J＝9.5Hz,2H),3.22(s,1H),3.08(s,1H),2.98(s,2H),2.89(d,J＝11.9Hz, 2H),2.62(d,J＝11.6Hz,4H),2.09(d,J＝31.9Hz,3H),2.02–1.89(m,8H),1.86–1.77(m, 3H),1.50(s,1H),1.27–1.16(m,3H)。 [0507] 实施例13：5‑((1R,4R)‑2‑氧杂‑5‑氮杂双环[2.2.1]庚烷‑5‑基)‑N‑(3‑(二氟甲基)‑1‑((1r,4R)‑4‑(4‑(1‑(1'‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2'‑氧螺[氮杂环丁烷‑3,3'‑吲哚啉]‑1‑基)甲基)哌啶‑1‑基)甲基)环己基)‑1H‑吡唑‑4‑基)吡唑并[1,5‑a]嘧啶‑3‑甲酰胺(化合物16)的合成 [0508] [0509] 参照实施例6制备方法，将实施例6步骤1中的1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑5‑氟‑2‑氧螺[吲哚啉‑3,4’‑哌啶]‑1’‑羧酸叔丁酯替换为4‑((1'‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2'‑氧螺[吲哚啉‑3,3'‑氮杂环丁烷]‑1‑基)甲基)哌啶‑1‑羧酸叔丁酯，将实施例6步骤2中的1‑(5‑(5‑((1r,4r)‑4‑甲酰基环己基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑2‑基)‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑5‑甲腈替换为5‑((1R,4R)‑2‑氧杂‑5‑氮杂双环[2.2.1]庚烷‑5‑基)‑N‑(3‑(二氟甲基)‑1‑((1r,4R)‑4‑甲酰基环己基)‑1H‑吡唑‑4‑基)吡唑并[1,5‑a]嘧啶‑3‑甲酰胺，得到5‑((1R,4R)‑2‑氧杂‑5‑氮杂双环[2.2.1]庚烷‑5‑基)‑N‑(3‑(二氟甲基)‑1‑((1R,4R)‑4‑(4‑(1‑(1'‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2'‑氧螺[氮杂环丁烷‑3,3'‑吲哚啉]‑1‑基)甲基)哌啶‑1‑基)甲基)环己基)‑1H‑吡唑‑4‑基)吡唑并[1,5‑a]嘧啶‑3‑甲酰胺(31mg)。ESI‑+ 1 MS(m/z):852.8[M+H]。H NMR(600MHz,DMSO)δ11.10(s,1H),9.52(d,J＝9.8Hz,1H),9.09 (s,1H),8.80(d,J＝7.7Hz,1H),8.41(d,J＝6.2Hz,1H),8.27(d,J＝8.4Hz,1H),7.72(s, 1H),7.30(s,1H),7.18–7.11(m,1H),6.97(s,1H),6.88‑6.47(m,1H),5.29‑5.09(m,2H), 4.78(d,J＝31.4Hz,1H),4.24(s,1H),3.83(d,J＝14.0Hz,1H),3.75‑3.65(m,1H),3.61(s, 1H),3.54(s,1H),3.47(s,3H),3.09(s,3H),2.92(d,J＝44.0Hz,3H),2.61(d,J＝14.9Hz, 2H),2.47–2.43(m,2H),2.40(s,1H),2.06(d,J＝19.5Hz,3H),2.02–1.86(m,6H),1.81(s, 2H),1.55(s,2H),1.20(t,J＝7.2Hz,5H)。 [0510] 实施例14：5‑((1R,4R)‑2‑氧杂‑5‑氮杂双环[2.2.1]庚烷‑5‑基)‑N‑(3‑(二氟甲基)‑1‑((1r,4R)‑4‑(4‑(1‑(1'‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2'‑氧螺[吲哚啉‑3,3'‑氮杂环丁烷]‑1‑基)甲基)‑7‑氮杂螺[3.5]壬烷‑7‑基)甲基)环己基)‑1H‑吡唑‑4‑基)吡唑并[1,5‑a]嘧啶‑3‑甲酰胺(化合物21)的合成 [0511] [0512] 参照实施例6制备方法，将实施例6步骤1中的1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑5‑氟‑2‑氧螺[吲哚啉‑3,4’‑哌啶]‑1’‑羧酸叔丁酯替换为2‑((1'‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2'‑氧螺[氮杂环丁烷‑3,3'‑吲哚啉]‑1‑基)甲基)‑7‑氮杂螺[3.5]壬烷‑7‑羧酸叔丁酯，将实施例6步骤2中的1‑(5‑(5‑((1r,4r)‑4‑甲酰基环己基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑2‑基)‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑5‑甲腈替换为5‑((1R,4R)‑2‑氧杂‑5‑氮杂双环[2.2.1]庚烷‑ 5‑基)‑N‑(3‑(二氟甲基)‑1‑((1r,4R)‑4‑甲酰基环己基)‑1H‑吡唑‑4‑基)吡唑并[1,5‑a]嘧啶‑3‑甲酰胺，得到5‑((1R,4R)‑2‑氧杂‑5‑氮杂双环[2.2.1]庚烷‑5‑基)‑N‑(3‑(二氟甲基)‑1‑((1r,4R)‑4‑(4‑(1‑(1'‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2'‑氧螺[吲哚啉‑3,3'‑氮杂环丁烷]‑1‑基)甲基)‑7‑氮杂螺[3.5]壬烷‑7‑基)甲基)环己基)‑1H‑吡唑‑4‑基)吡唑并[1,5‑a]+ 1 嘧啶‑3‑甲酰胺(24mg)。ESI‑MS(m/z):892.4[M+H] 。H NMR(600MHz,DMSO)δ11.10(s,1H), 9.52(d,J＝9.8Hz,1H),8.80(d,J＝7.1Hz,1H),8.41(s,1H),8.27(d,J＝7.6Hz,1H),7.70 (s,1H),7.29(s,1H),7.18(d,J＝39.0Hz,2H),7.01(d,J＝35.9Hz,1H),6.89‑6.47(m,1H), 5.29‑5.09(m,2H),4.78(d,J＝31.2Hz,1H),4.23(s,1H),3.82(s,1H),3.75‑3.65(m,1H), 3.61(s,1H),3.40(s,5H),3.08(s,3H),2.88(s,3H),2.64–2.58(m,4H),2.40(s,1H),2.37– 2.31(m,1H),2.06(s,3H),1.99(s,1H),1.94(d,J＝18.4Hz,4H),1.88(s,2H),1.81(s,2H), 1.55(s,2H),1.25(s,1H),1.20(s,5H)。 [0513] 实施例15：5‑((1R,4R)‑2‑氧杂‑5‑氮杂双环[2.2.1]庚烷‑5‑基)‑N‑(3‑(二氟甲基)‑1‑((1r,4R)‑4‑(4‑(1‑(1'‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2'‑氧螺[吲哚啉‑3,3'‑氮杂环丁烷]‑1‑基)甲基)‑2‑氮杂螺[3.3]庚烷‑2‑基)甲基)环己基)‑1H‑吡唑‑4‑基)吡唑并[1,5‑a]嘧啶‑3‑甲酰胺(化合物22)的合成 [0514] [0515] 参照实施例6制备方法，将实施例6步骤1中的1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑5‑氟‑2‑氧螺[吲哚啉‑3,4’‑哌啶]‑1’‑羧酸叔丁酯替换为6‑((1'‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2'‑氧螺[吲哚啉‑3,3'‑氮杂环丁烷]‑1‑基)甲基)‑2‑氮杂螺[3.3]庚烷‑2‑羧酸叔丁酯，将实施例6步骤2中的1‑(5‑(5‑((1r,4r)‑4‑甲酰基环己基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑2‑基)‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑5‑甲腈替换为5‑((1R,4R)‑2‑氧杂‑5‑氮杂双环[2.2.1]庚烷‑ 5‑基)‑N‑(3‑(二氟甲基)‑1‑((1r,4R)‑4‑甲酰基环己基)‑1H‑吡唑‑4‑基)吡唑并[1,5‑a]嘧啶‑3‑甲酰胺，得到5‑((1R,4R)‑2‑氧杂‑5‑氮杂双环[2.2.1]庚烷‑5‑基)‑N‑(3‑(二氟甲基)‑1‑((1r,4R)‑4‑(4‑(1‑(1'‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2'‑氧螺[吲哚啉‑3,3'‑氮杂环丁烷]‑1‑基)甲基)‑2‑氮杂螺[3.3]庚烷‑2‑基)甲基)环己基)‑1H‑吡唑‑4‑基)吡唑并[1,5‑a]+ 1 嘧啶‑3‑甲酰胺(26mg)。ESI‑MS(m/z):864.40[M+H] 。H NMR(600MHz，DMSO‑d6)δ:11.08(s, 1H),9.52(d,J＝9.5Hz,1H),8.80(d,J＝7.7Hz,1H),8.43(t,J＝6.8Hz,1H),8.28(t,J＝ 14.3Hz,1H),7.24(dd,J＝21.3,13.5Hz,1H),7.12(d,J＝5.7Hz,1H),7.03(s,1H),6.88(d,J ＝8.0Hz,1H),6.50–6.43(m,1H),5.29(s,1H),5.11–5.02(m,1H),4.81(s,1H),4.75(s,1H), 4.25(d,J＝13.9Hz,2H),3.87–3.78(m,2H),3.75(d,J＝7.6Hz,1H),3.67(dd,J＝23.1, 10.4Hz,2H),3.61(s,2H),3.09(s,1H),3.00(s,1H),2.91–2.78(m,2H),2.74(s,2H),2.61 (d,J＝12.9Hz,2H),2.40(s,2H),2.22(s,2H),2.11(s,2H),2.05(d,J＝9.3Hz,1H),2.03– 1.92(m,3H),1.89(s,2H),1.76(d,J＝7.4Hz,3H),1.22(d,J＝27.4Hz,3H),1.17(dd,J＝ 24.9,8.5Hz,2H)。 [0516] 实施例16：5‑(1R,4R)‑2‑氧杂‑5‑氮杂双环[2.2.1]庚烷‑5‑基)‑N‑(3‑二氟甲基)‑1‑(1r,4R)‑4‑((4‑(1'‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2'‑氧螺[氮杂环丁烷‑3,3'‑吲哚啉]‑1‑基)‑4‑氧代丁基)氨基)甲基)环己基)‑1H‑吡唑‑4‑基)吡唑并[1,5‑a]嘧啶‑3‑甲酰胺(化合物32)的合成 [0517] [0518] 参照实施例18中方法，将实施例18步骤2中的N‑叔丁氧羰基‑8‑氨基辛酸替换为N‑叔丁氧羰基‑4‑氨基丁酸，得到5‑(1R,4R)‑2‑氧杂‑5‑氮杂双环[2.2.1]庚烷‑5‑基)‑N‑(3‑二氟甲基)‑1‑(1r,4R)‑4‑((4‑(1'‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2'‑氧螺[氮杂环丁烷‑3,3'‑吲哚啉]‑1‑基)‑4‑氧代丁基)氨基)甲基)环己基)‑1H‑吡唑‑4‑基)吡唑并[1,5‑a]嘧啶‑3‑甲+ 1 酰胺(35mg)。ESI‑MS(m/z):840.84[M+H]；H NMR(600MHz,DMSO‑d6)δ11.11(s,1H),9.50(d, J＝9.1Hz,1H),8.78(d,J＝7.7Hz,1H),8.69(s,1H),8.41(d,J＝6.7Hz,1H),8.25(d,J＝ 8.4Hz,1H),7.72(d,J＝7.3Hz,1H),7.32(t,J＝6.9Hz,1H),7.18–7.09(m,1H),7.06–6.94 (m,1H),6.87(d,J＝7.8Hz,0.5H),6.46(d,J＝7.7Hz,0.5H),5.28(s,1.4H),5.08(s,0.5H), 4.79(s,0.5H),4.74(s,0.5H),4.38–4.35(m,2H),4.25–4.21(m,1H),4.14‑4.10(m,2H), 3.86–3.77(m,1H),3.73(d,J＝7.6Hz,1H),3.67–3.54(m,1.5H),3.48–3.42(m,0.5H),3.02– 2.94(m,2.5H),2.89–2.82(m,2.5H),2.66–2.56(m,2H),2.33(t,J＝6.2Hz,2H),2.13–1.87 (m,8H),1.82–1.64(m,3H),1.24–1.13(m,4H). [0519] 实施例17：5‑(1R,4R)‑2‑氧杂‑5‑氮杂双环[2.2.1]庚烷‑5‑基)‑N‑(3‑二氟甲基)‑1‑(1r,4R)‑4‑((5‑(1'‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2'‑氧螺[氮杂环丁烷‑3,3'‑吲哚啉]‑1‑基)‑5‑氧代戊基)氨基)甲基)环己基)‑1H‑吡唑‑4‑基)吡唑并[1,5‑a]嘧啶‑3‑甲酰胺(化合物33)的合成 [0520] [0521] 参照实施例18制备方法，将实施例18步骤2中的N‑叔丁氧羰基‑8‑氨基辛酸替换为N‑叔丁氧羰基‑8‑氨基戊酸，得到5‑(1R,4R)‑2‑氧杂‑5‑氮杂双环[2.2.1]庚烷‑5‑基)‑N‑(3‑二氟甲基)‑1‑(1r,4R)‑4‑((5‑(1'‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2'‑氧螺[氮杂环丁烷‑3,3'‑吲哚啉]‑1‑基)‑5‑氧代戊基)氨基)甲基)环己基)‑1H‑吡唑‑4‑基)吡唑并[1,5‑a]嘧啶‑3‑+ 1 甲酰胺(32mg)。ESI‑MS(m/z):854.84[M+H]；H NMR(600MHz,DMSO‑d6)δ11.11(s,1H),9.50 (d,J＝9.2Hz,1H),8.78(d,J＝7.5Hz,1H),8.63(s,1H),8.41(d,J＝6.7Hz,1H),8.25(d,J＝ 8.4Hz,1H),7.70(d,J＝7.3Hz,1H),7.31(d,J＝7.2Hz,1H),7.17–7.09(m,1H),7.06–6.97 (m,1H),6.87(d,J＝7.8Hz,0.5H),6.46(d,J＝7.7Hz,0.5H),5.28(s,1.4H),5.08(s,0.5H), 4.77(d,J＝28.8Hz,1H),4.41–4.35(m,2H),4.23–4.20(m,1H),4.12‑4.08(m,2H),3.86– 3.77(m,1.4H),3.73(d,J＝7.6Hz,0.5H),3.63(d,J＝10.0Hz,0.5H),3.58(d,J＝16.3Hz, 1H),3.46–3.42(m,0.5H),3.04–2.97(m,1H),2.94–2.85(m,2.5H),2.81(d,J＝6.5Hz, 1.4H),2.66–2.57(m,2H),2.22(t,J＝6.2Hz,2H),2.08(d,J＝10.9Hz,2H),2.03‑1.93(m, 4H),1.85–1.74(m,3H),1.72–1.66(m,2H),1.64–1.54(m,2H),1.23–1.07(m,4H). [0522] 实施例18：5‑(1R,4R)‑2‑氧杂‑5‑氮杂双环[2.2.1]庚烷‑5‑基)‑N‑(3‑二氟甲基)‑1‑(1r,4R)‑4‑((8‑(1'‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2'‑氧螺[氮杂环丁烷‑3,3'‑吲哚啉]‑1‑基)‑8‑氧代辛基)氨基)甲基)环己基)‑1H‑吡唑‑4‑基)吡唑并[1,5‑a]嘧啶‑3‑甲酰胺(化合物36)的合成 [0523] [0524] 步骤1:3‑(5‑氟‑2‑氧螺[氮杂环丁烷‑3,3’‑吲哚啉]‑1‑基)哌啶‑2,6‑二酮的合成[0525] 在50mL的反应瓶中加入1'‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2'‑氧螺[氮杂环丁烷‑3,3'‑吲哚啉]‑1‑羧酸叔丁酯(80mg,0.2mmol)，在0℃环境下加入盐酸1,4‑二氧六环溶液(10mL， 1M)，反应半小时，LC‑MS检测原料反应完全，减压浓缩得到3‑(5‑氟‑2‑氧螺[氮杂环丁烷‑3, 3’‑吲哚啉]‑1‑基)哌啶‑2,6‑二酮粗品(59mg)。 [0526] 步骤2:(8‑(1'‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2'‑氧螺[氮杂环丁烷‑3,3'‑吲哚啉]‑1‑基)‑8‑氧代辛基)氨基羧酸叔丁酯合成 [0527] 在50mL的反应瓶中加入3‑(5‑氟‑2‑氧螺[氮杂环丁烷‑3,3’‑吲哚啉]‑1‑基)哌啶‑2,6‑二酮粗品(59mg,0.2mmol)、O‑苯并三氮唑‑N,N,N',N'‑四甲基脲四氟硼酸(104mg， 0.3mmol)、N,N‑二异丙基乙胺(84μL，0.5mmol)、N‑叔丁氧羰基‑8‑氨基辛酸(84mg,0.3mmol)和N,N‑二甲基甲酰胺(20mL)，25℃反应6h，LC‑MS检测原料反应完全。加入水和EA进行萃取 分液，收集有机相，减压浓缩经硅胶柱层析分离(DCM：MeOH＝40:1)，得到(8‑(1'‑(2,6‑二氧 哌啶‑3‑基)‑2'‑氧螺[氮杂环丁烷‑3,3'‑吲哚啉]‑1‑基)‑8‑氧代辛基)氨基羧酸叔丁酯 + (61mg)。ESI‑MS(m/z):577.29[M+H]。 [0528] 步骤3：3‑(1‑(氨基辛酰基)‑2’氧螺[氮杂环丁烷‑3,3'‑吲哚啉]‑1’‑基)哌啶‑2,6‑酮的合成 [0529] 在50mL的反应瓶中加入(8‑(1'‑(2，6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2'‑氧螺[氮杂环丁烷‑3,3'‑吲哚啉]‑1‑基)‑8‑氧代辛基)氨基羧酸叔丁酯(61mg，0.1mmol)，在0℃环境下加入三氟 乙酸(10mL)，反应半小时，LC‑MS检测原料反应完全，减压浓缩得到3‑(1‑(氨基辛酰基)‑2’ 氧螺[氮杂环丁烷‑3,3'‑吲哚啉]‑1’‑基)哌啶‑2,6‑酮粗品(49mg)。 [0530] 步骤4：5‑(1R,4R)‑2‑氧杂‑5‑氮杂双环[2.2.1]庚烷‑5‑基)‑N‑(3‑二氟甲基)‑1‑(1r,4R)‑4‑((8‑(1'‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2'‑氧螺[氮杂环丁烷‑3,3'‑吲哚啉]‑1‑基)‑8‑氧代辛基)氨基)甲基)环己基)‑1H‑吡唑‑4‑基)吡唑并[1,5‑a]嘧啶‑3‑甲酰胺的合成 [0531] 在50mL的反应瓶中加入3‑(1‑(氨基辛酰基)‑2’氧螺[氮杂环丁烷‑3,3'‑吲哚啉]‑1’‑基)哌啶‑2,6‑酮粗品(49mg，0.1mmol)，加入四氢呋喃(20mL)溶解，少量三乙胺调节pH至 7‑8，冰醋酸再调节pH至4‑5，加入5‑((1R,4R)‑2‑氧杂‑5‑氮杂双环[2.2.1]庚烷‑5‑基)‑N‑(3‑二氟甲基)‑1‑(1R,4R)‑4‑甲酰基环己基)‑1H‑吡唑‑4‑基)吡唑并[1,5‑a]嘧啶‑3‑甲酰胺(57mg，0.1mmol)，反应半小时，加入三乙酰氧基硼氢化钠(37mg，0.2mmol)，在25℃下反应 12h，LC‑MS检测原料反应完全。减压浓缩经硅胶柱层析分离(DCM：MeOH＝10:1)，得到5‑(1R, 4R)‑2‑氧杂‑5‑氮杂双环[2.2.1]庚烷‑5‑基)‑N‑(3‑二氟甲基)‑1‑(1r,4R)‑4‑((8‑(1'‑(2, 6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2'‑氧螺[氮杂环丁烷‑3,3'‑吲哚啉]‑1‑基)‑8‑氧代辛基)氨基)甲基)+ 环己基)‑1H‑吡唑‑4‑基)吡唑并[1,5‑a]嘧啶‑3‑甲酰胺(25mg)。ESI‑MS(m/z):896.94[M+H] ； 1 H NMR(600MHz,DMSO‑d6)δ11.11(s,1H),9.50(d,J＝9.2Hz,1H),8.78(d,J＝7.7Hz,1H), 8.55(d,J＝28.9Hz,1H),8.41(d,J＝6.7Hz,1H),8.25(d,J＝8.4Hz,1H),7.68(d,J＝7.3Hz, 1H),7.31(t,J＝6.5Hz,1H),7.16–7.13(m,1H),7.06–6.97(m,1H),6.87(d,J＝7.9Hz, 0.5H),6.46(d,J＝7.7Hz,0.5H),5.27(s,1.4H),5.08(s,0.6H),4.79(s,0.5H),4.74(s, 0.5H),4.38–4.25(m,2H),4.25–4.16(m,1H),4.11‑4.07(m,2H),3.84–3.77(m,1.5H),3.73 (d,J＝7.6Hz,0.5H),3.65–3.57(m,1.5H),3.45(d,J＝9.9Hz,0.5H),2.97–2.77(m,5H), 2.68–2.55(m,2H),2.16(t,J＝6.1Hz,2H),2.10–2.04(m,2H),1.98–1.94(m,4H),1.86–1.70 (m,3H),1.64(s,2H),1.54(s,2H),1.35–1.23(m,10H). [0532] 实施例19：1‑(5‑(5‑((1r,4r)‑4‑((1'‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2'‑氧螺[吲哚啉‑3,3'‑氮杂环丁烷]‑1‑基)甲基)环己基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑2‑基)‑ 1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑5‑甲腈(化合物37)的合成 [0533] [0534] 参照实施例6制备方法，将实施例6步骤1中的1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑5‑氟‑2‑氧螺[吲哚啉‑3,4’‑哌啶]‑1’‑羧酸叔丁酯替换为1’‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2’‑氧螺[吲哚啉‑3,3’‑氮杂环丁烷]‑1‑羧酸叔丁酯，得到1‑(5‑(5‑((1r,4r)‑4‑((1'‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2'‑氧螺[吲哚啉‑3,3'‑氮杂环丁烷]‑1‑基)甲基)环己基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑2‑基)‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑5‑甲腈(28mg)。ESI‑MS(m/z):713.27[M++ 1H]。H NMR(600MHz,DMSO)δ11.10(s,1H),8.77(d,J＝1.4Hz,1H),8.69(d,J＝4.6Hz,1H), 8.61(d,J＝1.6Hz,1H),8.52(d,J＝3.8Hz,1H),8.44(s,1H),8.15(s,1H),7.73(d,J＝ 7.3Hz,1H),7.29(t,J＝7.6Hz,1H),7.15(t,J＝7.4Hz,1H),6.97(s,1H),6.86(d,J＝3.8Hz, 1H),5.25(s,1H),3.46(s,4H),3.07(d,J＝4.7Hz,3H),2.88(t,J＝12.6Hz,1H),2.61(d,J＝ 14.3Hz,2H),2.41(d,J＝18.2Hz,2H),2.16(d,J＝11.2Hz,2H),1.96(d,J＝10.6Hz,3H), 1.55(dd,J＝23.1,12.1Hz,2H),1.44(s,1H),1.27–1.21(m,1H),1.19–1.10(m,2H)。 [0535] 实施例20：N‑((1r,4r)‑4‑(5‑(6‑(5‑氰基‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑1‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑3‑基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)环己基)‑2‑(1'‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2'‑氧螺[吲哚啉‑3,3'‑氮杂环丁烷]‑1‑基)乙酰胺(化合物38)的合成 [0536] [0537] 参照实施例1制备方法，将实施例1步骤1中的2‑(1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2‑氧螺[吲哚啉‑3,3'‑吡咯烷]‑1'‑基)乙酸叔丁酯替换为2‑(1'‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2'‑氧螺[吲哚啉‑3,3'‑氮杂环丁烷]‑1‑基)乙酸叔丁酯，将实施例1步骤2中的1‑(5‑(5‑(7‑氮杂螺环[3.5]壬烷‑2‑基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑2‑基)‑1H‑吡咯[2,3‑b]吡啶‑5‑甲腈替换为1‑(5‑(5‑((1r,4r)‑4‑氨基环己基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑2‑基)‑1H‑吡咯[2,3‑b]吡啶‑5‑甲腈，得到N‑((1r,4r)‑4‑(5‑(6‑(5‑氰基‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑1‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑3‑基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)环己基)‑2‑(1'‑(2, 6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2'‑氧螺[吲哚啉‑3,3'‑氮杂环丁烷]‑1‑基)乙酰胺(33mg)。ESI‑MS(m/+ 1 z):756.86[M+H]。H NMR(600MHz,DMSO):δ11.09(s,1H),8.83(d,J＝1.9Hz,1H),8.73(d,J ＝4.7Hz,1H),8.67(d,J＝1.9Hz,1H),8.56(d,J＝3.8Hz,1H),8.54(s,1H),8.22(s,1H), 7.83(d,J＝7.3Hz,1H),7.71(d,J＝8.0Hz,1H),7.30(t,J＝7.7Hz,1H),7.17(s,1H),6.97 (d,J＝6.6Hz,1H),6.90(d,J＝3.9Hz,1H),3.59(d,J＝9.7Hz,4H),3.21(d,J＝5.3Hz,4H), 3.10(d,J＝4.9Hz,4H),2.63(s,3H),2.20(s,3H),1.95(dd,J＝19.1,9.7Hz,4H),1.72–1.66 (m,2H)。 [0538] 实施例21：N‑((1r,4r)‑4‑(5‑(6‑(5‑氰基‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑1‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑3‑基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)环己基)‑2‑(4‑(1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2‑氧代‑2’,3’,5’,6’‑四氢螺[吲哚啉‑3,4’‑吡喃]‑6‑基)哌嗪‑1‑基)乙酰胺(化合物39)的合成[0539] [0540] 参照实施例1制备方法，将实施例1步骤1中的2‑(1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2‑氧螺[吲哚啉‑3,3’‑吡咯烷]‑1’‑基)乙酸叔丁酯替换为2‑(4‑(1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2‑氧代‑2’,3’,5’,6’‑四氢螺[吲哚啉‑3,4’‑吡喃]‑6‑基)哌嗪‑1‑基)乙酸叔丁酯，将实施例1步骤2中的1‑(5‑(5‑(7‑氮杂螺环[3.5]壬烷‑2‑基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑2‑基)‑1H‑吡咯[2,3‑b]吡啶‑5‑甲腈替换为1‑(5‑(5‑((1r,4r)‑4‑氨基环己基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑2‑基)‑1H‑吡咯[2,3‑b]吡啶‑5‑甲腈，得到N‑((1r,4r)‑ 4‑(5‑(6‑(5‑氰基‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑1‑基)‑4‑(甲基氨基)吡啶‑3‑基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)环己基)‑2‑(4‑(1‑(2,6‑二氧哌啶‑3‑基)‑2‑氧代‑2',3',5',6'‑四氢螺[吲哚啉‑+ 1 3,4'‑吡喃]‑6‑基)哌嗪‑1‑基)乙酰胺(29mg)。ESI‑MS(m/z):869.88[M+H]。H NMR(600MHz，DMSO‑d6)δ：11.09(s,1H),8.83(d,J＝2.0Hz,1H),8.71–8.75(m,1H),8.67(d,J＝2.0Hz, 1H),8.55(d,J＝3.9Hz,1H),8.54(s,1H),8.22(s,1H),7.65(d,J＝8.2Hz,1H),7.36(d,J＝ 8.2Hz,1H),6.90(d,J＝3.9Hz,1H),6.57(d,J＝8.3Hz,1H),5.75(s,1H),3.96–4.04(m,2H), 3.77–3.83(m,2H),3.66–3.74(m,1H),3.19(s,4H),3.09(d,J＝4.9Hz,3H),2.99(s,2H), 2.62–2.70(m,2H),2.56–2.62(m,4H),2.15–2.21(m,2H),1.94–2.02(m,2H),1.88–1.94(m, 2H),1.63–1.73(m,4H),1.44–1.53(m,2H),1.13–1.31(m,4H)。 [0541] 实施例22‑42：参照上述合适实施例制备方法，制备得到如下化合物： [0542] [0543] [0544] [0545] [0546] 试验例1、基于HiBiT法对OCI‑LY10细胞中IRAK4体外降解试验1.细胞系 [0547] 细胞系来源：南京科佰生物科技有限公司 [0548] 细胞类型：人弥漫大B细胞淋巴瘤OCI‑LY10 [0549] 2.试剂和耗材 [0550] Nano Glo HiBiT Lytic Detection System(Cat.No.N3030，Promega)； [0551] 96孔培养板(Cat.No.3610，Corning Costar)； [0552] 胎牛血清(Cat.No.10099‑141，GIBCO)； [0553] IMDM培养基(Cat.No.12440053，GIBCO)； [0554] Envision 2104酶标仪。 [0555] 3.试验方法 [0556] 在OCI‑LY‑10细胞中将IRAK4蛋白加上HIBIT标签后得到OCI‑LY10‑IRAK4‑HIBIT细胞，将该细胞进行培养，然后收集处于对数生长期的细胞，用完全培养基(IMDM+20％FBS)重 6 新悬浮细胞，采用血小板计数器进行细胞计数，调整细胞浓度为1.5*10个/mL，接种到96孔 板，每孔加50μL的细胞悬液；用DMSO稀释待测化合物成为50mM的储备液，检测前，将储备液 用DMSO稀释至10mM作为起始浓度，4倍梯度稀释8个浓度，由起始浓度开始每个浓度取2μL的 待测化合物加入198μL的PBS中稀释100倍，混匀。再从上述稀释后起始浓度开始取5.5μL的 上述稀释样品溶液或培养基加入到96孔板的细胞悬液中，最终每孔化合物终浓度分别为 10000、2500、625、156.3、39.1、9.8、2.4、0.6、0.15和0nM。每个样品浓度设置2个复孔，37℃、 5％ CO2孵育4小时；按照Nano Glo HiBiT Lytic Buffer：Substate：Protein比例为100:2: 1混合，每孔加入50μL的Nano Glo HiBiT Lytic混合液，室温避光孵育10min；轻微震荡后在 Envision 2104酶标仪上进行检测，计算蛋白降解抑制率。 [0557] 4.数据分析 [0558] 蛋白降解抑制率％＝(1‑As/Ac)×100。 [0559] As:样品的OA(细胞+待测化合物) [0560] Ac:正常生长细胞对照的OA(细胞+DMSO) [0561] 运用软件Graphpad Prism 6并采用计算公式XY‑analysis/Nonlinear regression(curve fit)/Dose response‑Inhibition/log(inhibitor)vs.response‑ Variable slope(four parameters)进行DC50曲线拟合并计算出DC50值，其中inhibitor即 为上述蛋白降解抑制率。 [0562] 表2本发明化合物对OCI‑LY10细胞中IRAK4体外降解活性 [0563] 化合物编号 DC50(nM)2 B 3 C 4 C 6 B 11 B 12 B 16 B 21 B 38 A [0564] 注：A代表IC50≤50nΜ；B代表50nΜ [0565] 试验结果表明，本发明化合物在在弥漫大B细胞淋巴瘤细胞株OCI‑LY10中表现出较好IRAK4降解活性。 [0566] 试验例2、基于ELISA法对PBMC细胞中IL‑6的体外抑制试验 [0567] 1.细胞系 [0568] PBMC细胞系来源：上海澳能生物技术有限公司 [0569] Donor ID:Z0268 [0570] 2.试剂和耗材 [0571] 96‑well IL‑6Pre‑coated ELISA Kit(Cat No.430507，BIOLEGEND)； [0572] LPS(CatNo.L2637，Sigma)； [0573] 96孔培养板(Cat No.3599，Corning Costar)； [0574] 胎牛血清(Cat No.10099‑141，GIBCO)； [0575] RPMI 1640培养基(Cat No.C11875500BT，GIBCO)； [0576] Varioskan Flash荧光酶标仪。 [0577] 3.试验方法 [0578] 铺板及给药：完全培养基(1640+1％FBS)重新悬浮细胞，采用血小板计数器进行细6 5 胞计数，调整细胞浓度为2*10个/mL，100μL/孔接种到96孔板，即2x10个细胞/孔；用DMSO溶 解待测化合物成为0.4mM储备液，化合物现配现用。用完全培养基将待测化合物储备液稀释 至4μM的起始浓度，然后再用完全培养基将化合物进行梯度稀释，前5个浓度梯度稀释5倍， 最后一个浓度稀释50倍，混匀后分别向96孔板每孔的细胞悬液中加入100μL的各浓度样品 或培养基；化合物在96孔板中终浓度为2000,400,80,16,3.2,0.64,0.0128nM，每个药物浓 度设置2个复孔，37℃、5％ CO2孵育20小时； [0579] LPS诱导：用PBS溶解配制成浓度为1100ng/mL工作液，药物孵育细胞20h后，空白对照组加入PBS20μL，模型组(0nM)及样品组加入20uL1100ng/mL LPS，LPS终浓度为100ng/mL， 诱导时间为5h。 [0581] ELISA试剂盒检测：将‑80℃的细胞上清液解冻，细胞上清液严格按照试剂盒说明书进行试剂盒检测。 [0582] (1)标准品及样品配制 [0583] 标准品：30.9ng中加入1.53mL Buffer A配制成20ng/mL的标准储存液，室温放置15～20min，混合均匀。12.5μL标准品储存液+487.5μL Buffer A→500pg/mL为高浓度，2倍 往下稀释为250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125、0(BufferA)pg/mL。 [0584] 样品：将‑80℃的细胞上清液解冻，细胞上清液稀释用于试剂盒检测。 [0585] (2)用每孔不少于300μL的1X洗涤液清洗板4次，然后将剩余的缓冲液倒扣在吸收纸上，将其吸干。然后在每孔中加入50μL用Buffer A。 [0586] (3)在每孔中加入50μL标准品稀释液或样品，封口，并在室温下以200转/分钟的转速摇晃2小时。 [0587] (4)将孔中的液体甩掉，然后用1X洗涤缓冲液清洗4次。每孔加入人IL‑6检测抗体溶液100μL，封板，室温振荡孵育1小时。 [0588] (5)将孔中的液体甩掉，然后用1X洗涤缓冲液清洗4次。每孔加入100μL Avidin‑HRP A溶液，封板，室温振荡孵育30分钟。 [0589] (6)将孔中的液体甩掉，然后用1X洗涤缓冲液清洗5次。最后一次清洗时，将孔浸泡在1X洗涤缓冲液中30秒至1分钟，将有助于背景最小化。每孔加入Substrate Solution F 100μL，避光孵育15分钟，不封板。含人IL‑6的孔应呈蓝色，其强度与浓度成比例。 [0590] (7)每孔加入Stop Solution 100μL，停止反应。溶液的颜色应由蓝色变为黄色。 [0591] (8)在30分钟内读取450nm的吸光度。 [0592] 4.数据分析 [0593] 抑制率％＝{1‑(Con样品‑Con空白)/(Con模型‑Con空白)}*100 [0594] Con空白：空白孔中IL‑6浓度 [0595] Con样品：样品孔中IL‑6浓度 [0596] Con模型：模型孔中IL‑6浓度 [0597] 运用软件Graphpad Prism 5并采用计算公式XY‑analysis/Transform X vulues uses X＝Log[X]/Nonlinear regression(curve fit)/Dose response‑Inhibition/log (inhibitor)vs.response‑Variable slope(four parameters)进行IC50曲线拟合并计算出 IC50值。 [0598] 5.试验结果：结果如表2所示： [0599] 表3本发明化合物对PBMC细胞中IL‑6的体外抑制活性 [0600]化合物编号 Top(％)/IC50(nM) 2 92.17/12.46 [0601] 试验结果表明，本发明化合物上述表2优选化合物对LPS诱导的PBMC细胞中的IL‑6抑制具有较强的抑制作用，其中示例化合物活性如上表3化合物2所示。 [0602] 试验例3、基于ELISA法对PBMC细胞中TNF‑α的体外抑制试验 [0603] 1.细胞系 [0604] PBMC细胞系来源：上海澳能生物技术有限公司 [0605] Donor ID:Z0268 [0606] 2.试剂和耗材 [0607] 96‑well TNF‑αPre‑coated ELISA Kit(Cat No.430207，BIOLEGEND)； [0608] LPS(Cat No.L2637，Sigma)； [0609] 96孔培养板(Cat No.3599，Corning Costar)； [0610] 胎牛血清(Cat No.10099‑141，GIBCO)； [0611] RPMI 1640培养基(Cat No.C11875500BT，GIBCO)； [0612] Varioskan Flash荧光酶标仪。 [0613] 3.试验方法 [0614] 铺板及给药：完全培养基(1640+1％FBS)重新悬浮细胞，采用血小板计数器进行细6 5 胞计数，调整细胞浓度为2*10个/mL，100μL/孔接种到96孔板，即2x10个细胞/孔；用DMSO溶 解待测化合物成为0.4mM储备液，化合物现配现用。用完全培养基将待测化合物储备液稀释 至4μM的起始浓度，然后再用完全培养基将化合物进行梯度稀释，前5个浓度梯度稀释5倍， 最后一个浓度稀释50倍，混匀后分别向96孔板每孔的细胞悬液中加入100μL的各浓度样品 或培养基；化合物在96孔板中终浓度为2000,400,80,16,3.2,0.64,0.0128nM，每个药物浓 度设置2个复孔，37℃、5％ CO2孵育20小时； [0615] LPS诱导：用PBS溶解成配制成浓度为1100ng/mL工作液，药物孵育细胞20h后，空白对照组加入PBS20μL，模型组(0nM)及样品组加入20μL1100ng/mL LPS，LPS终浓度为100ng/ mL，诱导时间为5h。 [0616] 上清液收集：诱导结束后将96孔板在1000rmp离心5min，取上清液于另外一块96孔板上，‑80℃保存待试剂盒检测用。 [0617] ELISA试剂盒检测：将‑80℃的细胞上清液解冻，细胞上清液严格按照试剂盒说明书进行试剂盒检测。 [0618] (1)标准品及样品配制 [0619] 标准品：11.2ng中加入0.56mL Buffer A配制成20ng/mL的标准储存液，室温放置15～20min，混合均匀。25μL标准品储存液+475μL Buffer A→1000pg/mL为高浓度，2倍往下 稀释为500、250、125、62.5、31.25、15.625、0(Buffer A)pg/mL。 [0620] 样品：将‑80℃的细胞上清液解冻，细胞上清液稀释用于试剂盒检测。 [0621] (2)用每孔不少于300μL的1X洗涤液清洗板4次，然后将剩余的缓冲液倒扣在吸收纸上，将其吸干。然后在每孔中加入50μL用Buffer A。 [0622] (3)在每孔中加入50μL标准品稀释液或样品，封口，并在室温下以200转/分钟的转速摇晃2小时。 [0623] (4)将孔中的液体甩掉，然后用1X洗涤缓冲液清洗4次。每孔加入人TNF‑α检测抗体溶液100μL，封板，室温振荡孵育1小时。 [0624] (5)将孔中的液体甩掉，然后用1X洗涤缓冲液清洗4次。每孔加入100μL Avidin‑HRP A溶液，封板，室温振荡孵育30分钟。 [0625] (6)将孔中的液体甩掉，然后用1X洗涤缓冲液清洗5次。最后一次清洗时，将孔浸泡在1X洗涤缓冲液中30秒至1分钟，将有助于背景最小化。每孔加入Substrate Solution F 100μL，避光孵育15分钟，不封板。含人TNF‑α的孔应呈蓝色，其强度与浓度成比例。 [0626] (7)每孔加入Stop Solution 100μL，停止反应。溶液的颜色应由蓝色变为黄色。 [0627] (8)在30分钟内读取450nm的吸光度。 [0628] 4.数据分析 [0629] 抑制率％＝{1‑(Con样品‑Con空白)/(Con模型‑Con空白)}*100 [0630] Con空白：空白孔中TNF‑α浓度 [0631] Con样品：样品孔中TNF‑α浓度 [0632] Con模型：模型孔中TNF‑α浓度 [0633] 运用软件Graphpad Prism 5并采用计算公式XY‑analysis/Transform X vulues uses X＝Log[X]/Nonlinear regression(curve fit)/Dose response‑Inhibition/log (inhibitor)vs.response‑Variable slope(four parameters)进行IC50曲线拟合并计算出 IC50值。 [0634] 5.试验结果：结果如表3所示： [0635] 表4本发明化合物对PBMC细胞中TNF‑α的体外抑制活性 [0636]化合物编号 Top(％)/IC50(nM) 2 93.65/11.80 [0637] 试验结果表明，本发明化合物上述表2优选对LPS诱导的PBMC细胞中的TNF‑α具有显著的抑制作用，其中示例化合物活性如上表4化合物2所示。 [0638] 试验例4、小鼠药代动力学试验 [0639] 1.试验方法： [0640] 血浆样品进行PK检测：ICR小鼠以10mg/kg灌胃或2mg/kg静脉给予化合物，于给药后的不同时间点(灌胃组：0.25h、0.5h、1h、2h、4h、8h、24h；静脉组：0.083h、0.25h、0.5h、1h、 2h、4h、8h、24h)，由小鼠眼眶采血100μL(采用预肝素化100μL毛细采血管)置于肝素钠抗凝 管中，2h内3000g离心10min分离得到小鼠血浆样品，采用甲醇蛋白沉淀，用HPLC‑MS/MS法测 定给药后小鼠血浆中的药物浓度，绘制药‑时曲线并计算药代动力学参数，通过非房室模型 统计矩参数描述化合物给药后小鼠体内的药代动力学行为。 [0641] 全血样品进行PK检测：ICR小鼠以10mg/kg灌胃或2mg/kg静脉给予化合物，于给药后的不同时间点(灌胃组：0.25h、0.5h、1h、2h、4h、8h、24h；静脉组：0.083h、0.25h、0.5h、1h、 2h、4h、8h、24h)，由小鼠眼眶静脉取血100μL(采用预肝素化100μL毛细采血管)置于肝素钠 抗凝管中，即刻取小鼠眼眶静脉血50μL加入含有150μL甲醇(含0.2％甲酸)的1.5mL离心管 中涡旋混匀后，用HPLC‑MS/MS法测定给药后小鼠全血中的药物浓度，绘制药‑时曲线并计算 药代动力学参数，通过非房室模型统计矩参数描述化合物给药后小鼠体内的药代动力学行 为。 [0642] 2.试验结果： [0643] 对本发明化合物进行了上述药代动力学试验，结果见表4。 [0644] 表5本发明化合物的小鼠药代动力学试验 [0645] [0646] 注：1.NC表示未计算； [0647] 2.化合物灌胃组溶媒为2％DMSO+10％ CrEL+88％水； [0648] 3.以上化合物静脉组溶媒均为5％DMSO+95％水 [0649] 试验结果表明，本发明上述表2优选化合物在小鼠体内吸收较好，其中示例如上表5化合物2、16和21所示。 |
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