一种重组抗体细胞上清纯化工艺装置 |
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| 申请号 | CN202322388988.0 | 申请日 | 2023-09-01 | 公开(公告)号 | CN220736316U | 公开(公告)日 | 2024-04-09 |
| 申请人 | 南京京达生物技术有限公司; | 发明人 | 李永刚; 张倩雯; | ||||
| 摘要 | 本实用新型公开了一种重组抗 体细胞 上清纯化工艺装置，包括上样桶、下样桶、自动化蛋白纯化系统和Protein A层析柱，自动化蛋白纯化系统与上样桶相连，Protein A层析柱与下样桶相连，自动化蛋白纯化系统和Protein A层析柱相连。上样桶内的重组 抗体 细胞溶液依次流过自动化蛋白纯化系统和Protein A层析柱，进行纯化后进入下样桶。本实用新型操作方法简单，方便操作，抗体纯度可高达98％，通过自动化蛋白纯化系统的生产，可以大大提高纯化效率，实现短期内重组抗体的规模化生产同时保证抗体的纯度，具有重大价值。 | ||||||
| 权利要求 | 1.一种重组抗体细胞上清纯化工艺装置，其特征在于: |
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| 说明书全文 | 一种重组抗体细胞上清纯化工艺装置技术领域[0001] 本实用新型涉及一种重组抗体细胞上清纯化工艺装置。 背景技术[0002] 重组抗体是抗体制备方法研究的第三阶段，通过基因工程技术改造动物生产的单克隆抗体的基因序列，使单抗性能更加符合应用需要，并能通过大规模细胞培养获得。重组抗体主要分为嵌合抗体、人源化抗体、全人源化抗体、小分子抗体、双特异性抗体五大类。重组抗体解决了抗体人源化问题，均一性强，可用于人类疾病治疗。在重组抗体纯化过程中，主要需要去除的杂质包括残留DNA、宿主细胞蛋白残留及可能存在的病毒。 [0003] 细胞上清中含有大量细微颗粒物包括细胞碎片、胶质组分等，这些物质的存在长期积累会导致柱填料堵塞，柱效下降，纯化效果受到影响，导致实验成本的增加。发明内容 [0004] 本实用新型提供了一种重组抗体上清澄清和纯化工艺的装置，在纯化重组抗体过程中使用自动化蛋白纯化系统及Protein A亲和层析柱，可以得到更为纯净的蛋白并且使纯化过程更加简洁。 [0005] 本实用新型所采用的技术方案有： [0006] 一种重组抗体细胞上清纯化工艺装置，包括上样桶；下样桶；自动化蛋白纯化系统，所述自动化蛋白纯化系统包括恒流泵，所述恒流泵的进液端与上样桶相连；Protein A层析柱，包括连接管、密封圈、柱管和Protein A填料，所述密封圈设于玻璃柱管内并将柱管一分为二，对应形成密封腔与进液腔，所述Protein A填料填充在密封腔内，连接管的一端与恒流泵的出液端相连，另一端伸于进液腔内并与密封圈上的进液孔密封连接，在密封腔上设有与下样桶相连通的出液口。 [0007] 进一步地，所述柱管为上下均开口的空心状透明玻璃管，在柱管的上下两端均套设有橡胶管帽，在每个橡胶管帽上均插接一根连接管，两个连接管分别形成柱管的进液口和出液口。 [0008] 进一步地，在两橡胶管帽的连接管上分别设置一调节阀。 [0009] 进一步地，所述自动化蛋白纯化系统还包括混合器、电导率仪、电紫外光度检测仪和PH检测仪，所述混合器、电导率仪、电紫外光度检测仪和PH检测仪沿着液体的流道方向通过连接管依次连接，且Protein A层析柱设置在混合器和电导率仪之间。 [0010] 进一步地，所述电紫外光度检测仪的检测紫外波长设置为A280。 [0011] 进一步地，所述混合器的液体流动下游方向设有柱位阀和调节阀。 [0012] 进一步地，所述电导率仪的液体流动上游方向设有柱位阀和调节阀。 [0013] 本实用新型具有如下有益效果： [0014] 本实用新型属于重组抗体纯化的一种装置，整个装置分为细胞上清澄清及纯化两个单元，两个单元装置操作方法简单，方便操作，抗体纯度可高达98％，通过自动化蛋白纯化系统的生产，可以大大提高纯化效率，实现短期内重组抗体的规模化生产同时保证抗体的纯度，具有重大价值。附图说明 [0015] 图1为本实用新型纯化装置结构图。 [0016] 图2为自动化蛋白纯化系统的结构图。 [0017] 图3为Protein A层析柱的结构图。 具体实施方式[0018] 下面结合附图对本实用新型作进一步的说明。 [0019] 如图1至图3，本实用新型是一种重组抗体细胞上清纯化工艺装置，包括上样桶21、下样桶22、自动化蛋白纯化系统2和Protein A层析柱3，自动化蛋白纯化系统2与上样桶21相连，Protein A层析柱3与下样桶22相连，自动化蛋白纯化系统2和Protein A层析柱3相连。上样桶21内的重组抗体细胞溶液依次流过自动化蛋白纯化系统2和Protein A层析柱3，进行纯化后进入下样桶22。以下对自动化蛋白纯化系统2和Protein A层析柱3的结构和作用进行进一步描述。 [0020] 上述自动化蛋白纯化系统2包括恒流泵4、混合器5、电导率仪10、电紫外光度检测仪11和PH检测仪12，恒流泵4的进液端与上样桶21相连，出液端通过连接管13与混合器5相连，混合器5的出液端通过连接管13连接Protein A层析柱3，Protein A层析柱3与电导率仪10相连，电导率仪10通过连接管13连接电紫外光度检测仪11，电紫外光度检测仪11通过连接管13连接PH检测仪12。 [0021] 其中混合器5用于使上样溶液的化学成分均匀，电导率仪10检测重组抗体细胞溶液纯化后抗体的浓度，紫外280nm波长处有最大吸收峰值，其光吸收值与蛋白浓度成正比，故电紫外光度检测仪11的检测紫外波长设置为A280，PH检测仪12用于检测平衡缓冲液是否将重组抗体细胞溶液的ph值进行平衡。 [0022] 为了对自动化蛋白纯化系统2的管路进行更好的控制，在自动化蛋白纯化系统2中还设有柱位阀6和调节阀14，具体的布置为：混合器5的液体流动下游方向设有柱位阀6和调节阀14，电导率仪10的液体流动上游方向设有柱位阀6和调节阀14。 [0023] Protein A层析柱3包括连接管13、密封圈15、柱管17和Protein A填料18，密封圈15设于玻璃柱管17内并将柱管17一分为二，对应形成密封腔与进液腔，Protein A填料18填充在密封腔内，连接管13的一端与混合器5的出液端相连，另一端伸于进液腔内并与密封圈 15上的进液孔密封连接，在密封腔上设有与电导率仪10相连通的出液口。 [0024] 柱管17为上下均开口的空心状透明玻璃管，采用透明玻璃是为了更方便观察纯化过程。在柱管17的上下两端均套设有橡胶管帽16，柱管17大小根据样液体积可进行更换，在每个橡胶管帽16上均插接一根连接管13，两个连接管13分别形成柱管17的进液口和出液口。 [0025] 依据上述结构，以下对本实用新型的使用过程进行详细描述： [0026] 1)取细胞上清室温水浴化冻，使用低温高速冷冻离心机离心，设置参数为9000rpm、4℃、10分钟。离心后取上清，使用0.45μm滤器过滤后加入100mM PBS稀释上清。 [0027] 2)填装适量体积的Protein A填料，装填完毕后保证填料沉降完毕，形成平整严密的柱床，整个层析柱已经确认为密封状态后。连接自动化蛋白纯化系统，设置好参数。上样速度按照实际填装柱量进行设置，作为参考，200ml柱体积设置上样速度通常不超过15ml/min。柱位阀从旁路设置为正冲，紫外光度检测仪设置为开灯，检测参数A280，PH检测仪设置开启，电导率仪实时检测，混合器在线性上样的实验过程中一般是关闭状态。用纯化水洗涤5‑10倍柱体积，去除乙醇，用平衡缓冲液平衡A柱。将步骤1)得到的溶液上A柱，上样结束后用平衡缓冲液平衡，再使用解离液进行解离。 [0028] 3)解离完成后样品收集在接料容器中，放置在透析缓冲液10mM PBS(pH7.4)中进行透析处理透析比例1：50，换液3次，透析间隔不低于4小时。之后进行下一工步的各项处理，后续工步的工艺不涉及本实用新型的装置内容，故不再赘述。 [0029] 以上所述仅是本实用新型的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本实用新型原理的前提下还可以作出若干改进，这些改进也应视为本实用新型的保护范围。 |
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