一种中药组合物的应用及包含该中药组合物的软糖 |
|||||||
| 申请号 | CN202410104876.4 | 申请日 | 2024-01-25 | 公开(公告)号 | CN117919348A | 公开(公告)日 | 2024-04-26 |
| 申请人 | 华南农业大学; | 发明人 | 邓亚利; 梁惠嘉; | ||||
| 摘要 | 本 发明 涉及中药组合物技术领域，公开了一种中药组合物的应用，所述中药组合物在制备防治慢性疲劳综合征的药物和/或食品中的应用，所述中药组合物包括 质量 比为6:3:4:3:3:0.1的五指毛桃、大枣、茯苓、当归、薏苡仁、甘草，且所述中药组合物可与食品上可接受的辅料结合制备成软糖。本发明中药组合物中 处方 中以药食同源的中药组成，五指毛桃为君药，益气健脾补 肺 ，益气作用明显；大枣、当归为臣药，具有补虚益气、养血安神的功效；茯苓、薏苡仁为佐药，共达补气燥湿健脾之效，适用于气血不足、脾失营运、湿气阻滞所致的病症。 | ||||||
| 权利要求 | 1.一种中药组合物的应用，其特征在于，所述中药组合物在制备防治慢性疲劳综合征的药物和/或食品中的应用； |
||||||
| 说明书全文 | 一种中药组合物的应用及包含该中药组合物的软糖技术领域[0001] 本发明涉及中药组合物技术领域，特别是涉及一种复方五指毛桃中药组合物的应用及包含该中药组合物的软糖。 背景技术[0002] 慢性疲劳综合征(ChronicFatigueSyndrome,CFS)，又称肌痛性脑脊髓炎或者慢性疲劳免疫功能紊乱综合征，是一种有持续性和反复性发作的疑难病症，主要临床表现为长期的虚弱性疲劳，还常伴有头痛，咽喉痛、关节疼痛、肌肉酸痛、低热、淋巴结肿胀等的非特异性表现，同时还有记忆力和注意力下降、睡眠障碍、认知障碍等精神异常和抑郁、焦虑的心理状态。 [0003] 在快节奏和高压力的人群中有更高的患病率，并随着社会竞争愈加激烈，CFS出现了患者年轻化的趋势。CFS的病理机制还未明确，因此在临床上缺乏针对性的治疗方法与治疗药物，目前主要分为西医和中医两种治疗方法，西医通常使用抗病毒药、免疫调节剂、抗抑郁药和镇静剂等进行药物治疗是最常用且直接的治疗方法；中医干预CFS方法包括非药物治疗(如针灸、推拿等)和药物治疗。 [0004] 复方中药是基于“辨证审因”的基础上，经过几百甚至上千年的实践辨证流传下来，其严格遵守中药材间的配伍原则，使用剂量等，各种中药在煎煮或进行其他加工工艺时发挥协同作用，相互作用，达到多靶点，多层次的药理作用，由于复方中药所含有的中药材及其化学成分复杂，现代的化学合成药物难以达到其所具有的特殊疗效，根据慢性疲劳综合征的症状表现，多数中医学者认为CFS和“虚劳”的病症诊断相似，本质为脏腑功能弱，有气、血、阴、阳四者中一到两种的亏虚，甚至三或四种的亏虚，并伴有一种或多种的病理因素，从脏腑辨证来看，CFS与五脏关联紧密。另外普通软糖一般采用琼脂、白糖、红糖、淀粉、香精制造，口感及营养成分单一且不具备保健功效。 [0005] 因此，如何提供一种营养丰富且具有抗应激抗疲劳、调节免疫平衡的复方五指毛桃软糖是本领域技术人员亟需解决的问题。 发明内容[0006] 有鉴于此，本发明提供了一种中药组合物及包含该中药组合物的软糖，以药食同源的中药为原料，营养丰富且具有抗应激抗疲劳、调节免疫及神经内分泌平衡的功效，能有效防治慢性疲劳综合征。 [0007] 为了达到上述目的，本发明采用如下技术方案： [0008] 一方面，本发明提供了一种中药组合物在制备防治慢性疲劳综合征的药物和/或食品中的应用； [0009] 所述中药组合物包括质量比为6:3:4:3:3:0.1的五指毛桃、大枣、茯苓、当归、薏苡仁、甘草。 [0010] 优选的，所述慢性疲劳综合征为气血两虚型慢性疲劳综合征。 [0011] 优选的，所述中药组合物的给药剂量为15‑45g/d。 [0012] 进一步优选的，所述中药组合物的给药剂量为30‑45g/d。 [0013] 优选的，所述中药组合物还包括药学和/或食品上可接受的辅料。 [0014] 另一方面，本发明还提供了一种包含上述任一中药组合物的软糖，所述软糖的制备方法如下： [0015] (1)以五指毛桃、大枣、茯苓、当归、薏苡仁、甘草为原料制备复方五指毛桃稠膏，加水调配得到复方五指毛桃药液； [0016] (2)将琼脂溶液加热溶解后过滤，得到琼脂滤液，将琼脂滤液与食用明胶溶液混合搅拌均匀，得到琼脂明胶混合液； [0017] (3)将所述复方五指毛桃药液与糖浆混合后静置，得到中草药糖浆； [0018] (4)将所述琼脂明胶混合液与粮食糊混合搅拌，得到混合料； [0019] (5)将所述中草药糖浆与所述混合料混合均匀、冷却，切片后烘干，得到软糖。 [0020] 优选的，所述琼脂溶液由琼脂与水按照1:20‑25混合得到； [0021] 所述食用明胶溶液由食用明胶与水按照1:1‑2混合得到； [0022] 所述加热溶解温度为85‑95℃，时间为1‑3min。 [0023] 优选的，所述糖浆的制备方法如下：将蜂糖、葡萄糖、饴糖、水、色拉油按照20‑30:9‑11:9‑11：15‑20:5‑10的质量比混合后熬至100‑120℃，保温5‑30min，冷却至10‑15℃，保温，备用； [0024] 所述复方五指毛桃药液与所述糖浆的质量比为1：(15‑25)。 [0025] 优选的，所述粮食糊的制备方法如下：将粮食精粉与水按照1:3‑5的质量比混合后加热至100‑120℃，保温，备用； [0026] 所述复方五指毛桃药液与所述粮食精粉的质量比为2：(4‑6)； [0027] 所述粮食精粉包括淀粉、糯米精粉、高粱精粉。 [0028] 优选的，步骤(5)中所述冷却为冷却至10‑15℃，并在10‑15℃保温30‑90min； [0029] 所述烘干温度为40‑50℃，烘干时间为20‑40min。 [0030] 本发明提供了一种复方五指毛桃中药组合物及包括该中药组合物的软糖，与现有技术相比，其有益效果在于：本发明的中药组合物以药食同源的中药组成，五指毛桃为君药，益气健脾补肺，益气作用明显；大枣、当归为臣药，具有补虚益气、养血安神的功效；茯苓、薏苡仁为佐药，共达补气燥湿健脾之效，适用于气血不足、脾失营运、湿气阻滞所致的病症； [0031] 采用在软糖中添加有保健作用的低剂量复方五指毛桃药液汤剂，使软糖营养丰富，口味清新，长期食用可以增强体质，抵抗疲劳，本发明的中草药软糖中有淀粉、糯米、高粱，增加了营养成分，改变了现有技术的软糖营养单调、含糖量过高的缺点，并且复方五指毛桃软糖中用蜂糖、葡萄糖、饴糖，蜂糖主治肺燥咳嗽、肠燥便秘、胃烷疼痛、口疮、烫火伤、解乌头毒等，营养丰富，饴糖主治气虚倦怠、虚寒腹痛以及肺虚久咳久喘，可以有效防治慢性疲劳综合征。附图说明 [0032] 为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。 [0033] 图1为小鼠治疗前后体型对比，(A治疗开始(左为模型组，右为空白组)；B治疗结束(左为空白组，右为模型组))； [0034] 图2为小鼠治疗过程的毛发情况，(A治疗第1天，B治疗第14天，C治疗第28天)； [0035] 图3为雄鼠体重变化图； [0036] 图4为雌鼠体重变化图； [0037] 图5为雄鼠摄食量变化图； [0038] 图6为雌鼠摄食量变化图； [0039] 图7为雄鼠饮水量变化图； [0040] 图8为雌鼠饮水量变化图； [0041] 图9为肝糖原浓度标准曲线； [0042] 图10为肝糖原含量提升对比图； [0043] 图11为SOD浓度标准曲线； [0044] 图12为SOD含量提升对比图； [0045] 图13为IL‑2浓度标准曲线； [0046] 图14为IL‑2含量提升对比图； [0047] 图15为IFN‑γ浓度标准曲线； [0048] 图16为INF‑γ含量提升对比图； [0049] 图17为5‑HT浓度标准曲线； [0050] 图18为5‑HT含量提升对比图； [0051] 图19为DA浓度标准曲线； [0052] 图20为DA含量降低对比图； [0053] 图21为雄鼠心脏组织形态(A空白组，B模型对照组，C阳性对照组，D汤剂高剂量组，E汤剂中剂量组，F汤剂低剂量组)； [0054] 图22为雌鼠心脏组织形态(A空白组，B模型对照组，C阳性对照组，D汤剂高剂量组，E汤剂中剂量组，F汤剂低剂量组； [0055] 图23为雄鼠肝脏组织形态(A空白组，B模型对照组，C阳性对照组，D汤剂高剂量组，E汤剂中剂量组，F汤剂低剂量组)； [0056] 图24为雌鼠肝脏组织形态(A空白组，B模型对照组，C阳性对照组，D汤剂高剂量组，E汤剂中剂量组，F汤剂低剂量组)； [0057] 图25为雄鼠肺脏组织形态(A空白组，B模型对照组，C阳性对照组，D汤剂高剂量组，E汤剂中剂量组，F汤剂低剂量组)； [0058] 图26为雌鼠肺脏组织形态(A空白组，B模型对照组，C阳性对照组，D汤剂高剂量组，E汤剂中剂量组，F汤剂低剂量组)； [0059] 图27为雄鼠肾脏组织形态(A空白组，B模型对照组，C阳性对照组，D汤剂高剂量组，E汤剂中剂量组，F汤剂低剂量组)； [0060] 图28为雌鼠肾脏组织形态(A空白组，B模型对照组，C阳性对照组，D汤剂高剂量组，E汤剂中剂量组，F汤剂低剂量组)； [0061] 图29为雄鼠胸腺组织形态(A空白组，B模型对照组，C阳性对照组，D汤剂高剂量组，E汤剂中剂量组，F汤剂低剂量组)； [0062] 图30为雌鼠胸腺组织形态(A空白组，B模型对照组，C阳性对照组，D汤剂高剂量组，E汤剂中剂量组，F汤剂低剂量组)； [0063] 图31为雄鼠脾脏组织形态(A空白组，B模型对照组，C阳性对照组，D汤剂高剂量组，E汤剂中剂量组，F汤剂低剂量组)； [0064] 图32为雌鼠脾脏组织形态(A空白组，B模型对照组，C阳性对照组，D汤剂高剂量组，E汤剂中剂量组，F汤剂低剂量组)。 具体实施方式[0065] 下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。 [0066] 本发明实施例公开了一种复方五指毛桃软糖，配方如下:高粱精粉10公斤，高原出产的药用蜂糖30公斤，葡萄糖10公斤，饴糖10公斤，琼脂4公斤，食用明胶3公斤，色拉油8公斤，五指毛桃、茯苓、大枣、当归、薏苡仁、甘草以干货计算分别为0.52公斤、0.35公斤、0.26公斤、0.26公斤、0.26公斤、8.6斤。 [0067] 复方五指毛桃软糖的制备方法如下： [0068] 1)将配方药材五指毛桃、茯苓、大枣、当归、薏苡仁、甘草制作成0.52公斤1.3～1.35稠膏，加水配制成0.13g/ml药液，约4公斤，过滤，滤液10～15℃冷却待用； [0069] 具体的，所述稠膏的制备方法如下：称取五指毛桃干燥药材粉碎成粗粉，用10倍量95％乙醇浸泡24h后超声(功率250W，频率40kHz)提取30min，冷凝回流2h，趁热滤取药液；药渣中再加入8倍量95％乙醇浸泡24h，超声提取30min，回流提取1h，合并两次滤液，减压浓缩蒸发，得到五指毛桃提取液和五指毛桃药渣；继续将所述五指毛桃药渣、茯苓、当归、薏苡仁、大枣粉碎后混合，加入12倍量水煎煮3h，滤取药液；药渣中再加10倍量水煎煮2h，合并两次滤液，并加入所述五指毛桃提取液混合均匀，在65℃、0.08MPa的条件下减压浓缩至80℃时相对密度为1.30‑1.35的稠膏，即得。 [0070] 2)熬煮琼脂、食用明胶，食用明胶加水3公斤发湿，琼脂经过漂白处理，放入大锅中，加入80公斤水，加热至80℃，保温1‑3分钟，琼脂溶解后过滤，得到琼脂滤液，加入明胶后搅拌； [0071] 3)熬制糖浆，蜂糖、葡萄糖、饴糖、色拉油，加水18公斤待熬至120℃，保温30分钟起锅，糖浆成品完全冷却到10℃保温备用； [0072] 4)熬制高粱精粉，高粱精粉加水44公斤，和匀放入大锅中缓慢加热至100～120℃，得到淀粉糊保温待用； [0073] 5)将上述药液与糖浆成品混合得糖浆，放置在1个容器中静置半小时； [0074] 6)上述步骤的2)的琼脂明胶混合液与高粱精糊混合搅拌； [0075] 7)立刻将5)步骤的糖浆到入6)步骤的混合料中，冷却，保温10℃静置1小时。 [0077] 本发明实施例的实验所用的复方五指毛桃稠膏由五指毛桃、大枣、当归、茯苓、薏苡仁、甘草组成，具有益气补血、健脾益胃、行气化湿等的功效，针对气血不足引起的疾病有更佳的治疗效果，因此选用气血两虚型的慢性疲劳综合征，用于研究复方五指毛桃汤对该病的药效作用及作用机理，其中上述步骤(1)制备得到的药液既为复方五指毛桃汤剂。 [0078] 实验方法 [0079] 1、实验动物选取及药剂制备 [0080] 实验动物：SPF级昆明种(KM)小鼠，雌雄各半，4周，体重16‑20g，购于广东省动物医学实验中心(实验动物生产许可证号：SCXK(粤)2018‑0002)，饲养于华南农业大学动物实验中心(实验动物使用许可证号：SYCK(粤)2019‑0136)。本试验动物操作均按照动物福利和华南农业大学试验动物伦理委员会标准执行，并得到伦理委员会的批准。 [0081] 试验溶液的制备：根据复方五指毛桃汤高、中、低剂量组比例为4：2：1，配制0.52g/mL、0.26g/mL、0.13g/mL的复方五指毛桃汤。食药两用的复方五指毛桃汤为经验方，为人用日常保健量，剂量为30g稠膏相当于95g药材，根据人与小鼠之间的换算系数：0.0026，即每只小鼠用稠膏量为0.078g，将其溶于3mL水中，配制药液的密度为：0.26g/mL。 [0082] 阳性对照药品溶液的制备：诺迪康胶囊除去胶囊壳，精密称取内容物药粉2.912g，加水至200mL，超声处理(功率250W，频率40kHz)10min，配制成浓度为14.56mg/mL的溶液，即得红景天药液。 [0083] 2、分组及给药情况 [0084] 为排除外在因素影响实验，小鼠按体重排序后采用取余数法进行随机分组，每组20只，雌雄各半，并在模型构建开始前进行7天适应性饲养。在病理模型构建结束后，每日上午9点左右进行药物灌胃治疗，每天一次，连续灌胃28天。实验具体分组和给药情况如表1所示。 [0085] 表1小鼠分组及给药情况 [0086] [0087] 3、CFS动物病理模型构建 [0088] 3.1模型构建方法 [0089] SPF级昆明种小鼠饲养于屏障环境中，采用食物限制、强制游泳和束缚联合模拟CFS的多因素致病机制，模型构建持续35天。 [0090] 食物限制：单日禁食(只提供水)，双日正常饮食，使小鼠饥饱失常、饮食不节。 [0091] 强制游泳：45cma30cma30cm的游泳箱，水深10cm，水温25℃左右，温度过高小鼠易晕厥，温度过低小鼠易肌肉痉挛溺水。每天上午9：00或下午14：00进行强制游泳30min，以消耗小鼠体能，进行两周。 [0092] 负重游泳：45cma30cma30cm的游泳箱，水深20cm，水温25℃左右，让小鼠负其体重10％重物游泳，至极度疲劳状态。小鼠头部低于水面10s不能浮出水面，为极度疲劳状态。在建模第3周开始，进行三周。 [0093] 游泳期间，注意关注小鼠状况，当小鼠浮于水上不动时，挑拨小鼠四肢使其游动，当小鼠仅剩鼻子露出水面，并四肢挑拨后游动幅度也不大时，即达到极度疲劳状态。当小鼠体力不支时，及时捞出，防止溺死。 [0094] 束缚：装入束缚筒(50mL离心管改制)，保持空气流畅和小鼠正常呼吸，使其活动受限、不可摄食和饮水。每天上午9：00或下午14：00将小鼠放入束缚筒，持续2h。 [0095] 以免小鼠产生适应性，束缚和游泳在造模期间的先后顺序和时间不定时交换。 [0096] 3.2病理模型评估 [0097] 病理模型构建最后一天，通过旷场实验和悬尾实验对动物模型进行评估。CFS模型小鼠悬尾不动时间、水平活动得分和垂直活动得分低于正常组(P<0.05)，说明成功建立CFS模型。 [0098] 旷场实验：将小鼠放入开阔箱(50cm×50cm×50cm，底面用分割为面积相等的25块10cm×10cm)，将小鼠放入开阔箱的正中格，小鼠穿越底面的方格数为水平活动得分，后肢站立次数为垂直活动得分，观察小鼠6min内的活动情况(前1min为适应时间，后5min为测试时间)。 [0099] 悬尾实验：小鼠呈倒挂状，悬挂两侧用板隔开视线。小鼠为克服不正常的体位而挣扎活动，但活动一定时间后出现间断性“不动”显示“失望”状态。观察6min内的小鼠活动情况(前1min为适应时间，后5min为测试时间)。 [0100] 连续给药28天后，对小鼠再次进行旷场实验和悬尾实验的行为学测试，对各组小鼠用药效果进行评价。 [0101] 4、行为活动及生理状态 [0104] 常压耐缺氧实验：末次给药次日，每组随机挑出小鼠，小鼠单独放置在装有15g钠石灰(石灰上垫有滤纸吸收尿液)的250mL锥形瓶中，密封容器，观察并记录此条件下的小鼠生存时间。 [0105] 常压耐高温实验：末次给药次日，每组随机挑出小鼠，小鼠单独放置在250mL锥形瓶中，纱布封瓶口后，将装有小鼠的锥形瓶放入恒温45±1℃的水浴锅中，观察并记录小鼠在此高温条件下生存时间。 [0106] 负重游泳实验：末次给药次日，每组随机小鼠，小鼠负重体重5％，在游泳箱(水深18cm，水温18±1℃)中游泳。小鼠入水开始计时，头部沉入水中15s不浮起停止计时，统计小鼠持续游泳时间。 [0107] 肝组织因子测定：末次给药次日，小鼠处死，取出肝脏，生理盐水漂洗，吸干表面水分，称重，制肝组织匀浆，离心后取上清液，采用小鼠ELISA肝糖原试剂盒和小鼠ELISA SOD试剂盒进行测定，以酶标仪波长450nm处测样本吸光值，计算得出肝糖原和SOD的含量。 [0108] 与模型对照组相比的提高率(％)＝(各组因子含量‑模型对照组因子含量)/模型对照组因子含量*100％。 [0109] 6、免疫系统 [0110] 脏器系数测定：末次给药次日，称量小鼠体重，处死后，简单消毒杀菌，剖腹，轻轻摘取心、肝、脾、肺、肾和胸腺，小心地摘除周围多余组织，置于滤纸上吸去其表面液体，置于电子精密天平上称取重量；剪开胸腔，轻轻剥离胸腺，进行相同处理，可计算出各器官的系数。每组小鼠雌雄分开实验。 [0111] 脏器系数(％)＝器官质量/体质量*100％ [0113] 免疫因子测定：末次给药次日，小鼠眼眶取血，室温静置1h，3000rpm转速离心15min，取上层血清，采用小鼠ELISAIL‑2试剂盒和小鼠ELISA IFN‑γ试剂盒进行测定，以酶标仪波长450nm处测吸光值，测定IL‑2和IFN‑γ的含量。 [0114] 与模型对照组相比的提高率(％)＝(各组因子含量‑模型对照组因子含量)/模型对照组因子含量*100％。 [0115] 7、神经系统 [0116] 神经内分泌因子测定：取上层血清采用小鼠ELISA 5‑HT试剂盒和小鼠ELISADA试剂盒进行测定，以酶标仪波长450nm处测吸光值，测定5‑HT和DA的含量。 [0117] 与模型对照组相比的提高率(％)＝(各组因子含量‑模型对照组因子含量)/模型对照组因子含量*100％ [0118] 8、统计学处理方法 [0120] 二、结果 [0121] 1、小鼠生理及活动状态 [0122] 1.1小鼠生理状态 [0123] 实验小鼠体型变化如图1‑2所示，空白组小鼠的皮毛光亮整洁，反应迅速，精神状态良好。与空白组相比，造模组小鼠逐渐有精神不佳、嗜卧、反应力和警觉度降低、暴躁等精神状态。造模后期，雄性小鼠出现惊叫、攻击同伴的行为。雌性小鼠则有明显的体型消瘦、皮毛无光泽发黄、稀疏甚至出现大片掉毛情况。经过药物灌胃28天治疗后，小鼠情绪缓和，逐渐长胖，毛发有光泽并长出新毛发，活动变多。 [0124] 1.1.1CFS小鼠治疗前后的体重变化 [0125] 实验小鼠体重变化雄鼠如表2、图3、雌鼠如表3、图4所示，(1)模型构建后，空白组雄鼠的体重高于造模各组(P<0.01)；经治疗后，汤剂高、中、低剂量组和阳性对照组雄鼠体重均有增长，但汤剂高、中、低剂量组雄鼠体重仍低于空白组和阳性对照组(P<0.01或P<0.05)。(2)模型构建后，空白组雌鼠体重高于造模各组(P<0.01)；经治疗后，汤剂高、中、低剂量组和阳性对照组雌鼠体重高于模型对照组(P<0.01)，仅汤剂中、低剂量组雌鼠体重低于阳性对照组(P<0.01或P<0.05)。 [0126] 表2模型构建及给药治疗雄鼠体质量对比(x±s，n＝10) [0127] [0128] [0129] 注：与模型对照组比较，AP<0.01，aP<0.05；与空白组比较，BP<0.01，bP<0.05；与阳C c性对照组比较，P<0.01，P<0.05。 [0130] 表3模型构建及给药治疗雌鼠体质量对比(x±s，n＝10) [0131] [0132] 注：与模型对照组比较，AP<0.01，aP<0.05；与空白组比较，BP<0.01，bP<0.05；与阳D d性对照组比较，P<0.01，P<0.05。 [0133] 1.1.2CFS小鼠治疗前后的摄食量变化 [0134] 实验小鼠摄食量变化雄鼠如表4、图5、雌鼠如表5、图6所示，(1)模型构建后，空白组雄鼠的摄食量高于造模各组(P<0.01)；经治疗后，汤剂高、中、低剂量组和阳性对照组雄鼠摄食量高于模型对照组(P<0.01)，汤剂高、中、低剂量组雄鼠摄食量仍低于空白组和阳性对照组(P<0.01或P<0.05)。(2)模型构建后，空白组雌鼠摄食量高于造模各组(P<0.01)；经治疗后，汤剂高、中、低剂量组和阳性对照组雌鼠摄食量高于模型对照组(P<0.01)，汤剂高剂量组和阳性对照组雌鼠摄食量高于空白组(P<0.05)。 [0135] 表4模型构建及给药治疗雄鼠摄食变化(x±s，n＝10) [0136] [0137] 注：与模型对照组比较，AP<0.01，aP<0.05；与空白组比较，BP<0.01，bP<0.05；与阳D d性对照组比较，P<0.01，P<0.05。 [0138] 表5模型构建及给药治疗雌鼠摄食变化(x±s，n＝10) [0139] [0140] [0141] 注：与模型对照组比较，AP<0.01，aP<0.05；与空白组比较，BP<0.01，bP<0.05；与阳D d性对照组比较，P<0.01，P<0.05。 [0142] 1.1.3CFS小鼠治疗前后的饮水量变化 [0143] 实验小鼠饮水量变化雄鼠如表6、图7、雌鼠如表7、图8所示，(1)模型构建后，空白组雄鼠的饮水量低于造模各组(P<0.01)；经治疗后，汤剂高、中剂量组和阳性对照组雄鼠饮水量高于模型对照组(P<0.01或P<0.05)，汤剂高、中、低剂量组雄鼠饮水量低于阳性对照组。(2)模型构建后，空白组雌鼠的饮水量低于造模各组(P<0.01)；经治疗后，汤剂高、中剂量组和阳性对照组雌鼠饮水量高于模型对照组(P<0.01)，且汤剂高、中剂量组雌鼠饮水量高于空白组(P<0.01或P<0.05)。 [0144] 表6模型构建及给药治疗雄鼠饮水变化(x±s，n＝10) [0145] [0146] 注：与模型对照组比较，AP<0.01，aP<0.05；与空白组比较，BP<0.01，bP<0.05；与阳D d性对照组比较，P<0.01，P<0.05。 [0147] 表7模型构建及给药治疗雌鼠饮水变化(x±s，n＝10) [0148] [0149] 注：与模型对照组比较，AP<0.01，aP<0.05；与空白组比较，BP<0.01，bP<0.05；与阳D d性对照组比较，P<0.01，P<0.05。 [0150] 1.1.4CFS小鼠治疗后脏器系数 [0151] 1.1.4.1脏器系数 [0152] 服用复方五指毛桃汤剂后实验雄鼠脏器系数如表8所示，汤剂高、中剂量组、阳性对照组和空白对照组小鼠的心脏系数低于模型对照组(P<0.01或P<0.05)；各组间的肝脏系数、肺脏系数和肾脏系数均无明显差异。(2)服用复方五指毛桃汤剂后实验雌鼠脏器系数如表9所示，汤剂高、中、低三剂量组、空白组和阳性对照组雌鼠的心脏系数均低于模型对照组(P<0.01)；各组间的肝脏系数、肺脏系数和肾脏系数均无明显差异。 [0153] 表8复方五指毛桃汤对雄鼠脏器系数的影响 [0154]分组 心(％) 肝(％) 肺(％) 肾(％) A 空白组 0.46±0.05 4.71±0.31 0.63±0.04 1.62±0.14 模型对照组 0.59±0.07 4.80±0.13 0.63±0.06 1.59±0.03 A 阳性对照组 0.47±0.05 4.71±0.41 0.60±0.06 1.58±0.07 A 汤剂高剂量组 0.47±0.02 4.65±0.30 0.59±0.03 1.61±0.04 A 汤剂中剂量组 0.47±0.04 4.75±0.14 0.61±0.06 1.61±0.13 B 汤剂低剂量组 0.55±0.03 4.68±0.23 0.60±0.04 1.61±0.11 [0155] 表9复方五指毛桃汤对雌鼠脏器系数的影响 [0156] 分组 心(％) 肝(％) 肺(％) 肾(％)空白组 0.45±0.02A 4.59±0.23 0.60±0.04 1.27±0.09 模型对照组 0.54±0.01 4.54±0.12 0.58±0.04 1.25±0.07 阳性对照组 0.46±0.03A 4.54±0.18 0.58±0.05 1.26±0.06 汤剂高剂量组 0.46±0.02A 4.54±0.24 0.61±0.04 1.24±0.06 汤剂中剂量组 0.46±0.03A 4.51±0.27 0.61±0.06 1.22±0.06 汤剂低剂量组 0.45±0.03A 4.53±0.18 0.59±0.03 1.22±0.06 [0157] 注：与模型对照组比较，AP<0.01，aP<0.05；与空白组比较，BP<0.01，bP<0.05；与阳D d性对照组比较，P<0.01，P<0.05。 [0158] 1.1.5CFS小鼠治疗后脏器组织病理学 [0159] 1.1.5.1小鼠心脏组织形态 [0160] 服用复方五指毛桃汤剂后实验雄鼠和雌鼠心脏组织形态如图21、图22所示，雄鼠的空白组、阳性对照组、汤剂高、中剂量组和雌鼠空白组、阳性对照组、汤剂高、中、低剂量组：心肌纤维纵切面呈现出细而长的纤维状组织，排列整齐并相互吻合，细胞核分布均匀，位于心肌纤维中央。雄鼠模型对照组和雌鼠模型对照组：心肌纤维排列紊乱，结构疏松，细胞核分布不均，间质中有大量炎症细胞浸润。雄鼠汤剂低剂量组：心肌纤维间隙较小，排列规律，仍有部分细胞核分布不均和炎症细胞浸润情况。 [0161] 1.1.5.2小鼠肝脏组织形态 [0162] 服用复方五指毛桃汤剂后实验雄鼠和雌鼠肝脏组织形态如图23、图24所示，空白组、模型对照组、阳性对照组、汤剂高、中、低剂量组：HE染色观察显示，肝细胞结构完整，圆形胞核居中，以中央静脉为中心呈放射状紧密排列成板状，相邻肝板吻合，构成网架结构，肝小叶结构完整。 [0163] 1.1.5.3小鼠肺脏组织形态 [0164] 服用复方五指毛桃汤剂后实验雄鼠和雌鼠肺脏组织形态如图25、图26所示，空白组、模型对照组、阳性对照组、汤剂高、中、低剂量组：HE染色观察显示，肺脏组织形态正常，毛细血管丰富，细胞核分布均匀。细支气管、终末细支气管、呼吸性细支气管、肺泡管结构均清晰可见，肺泡囊、肺泡结构完整可辨。 [0165] 1.1.5.4小鼠肾脏组织形态 [0166] 服用复方五指毛桃汤剂后实验雄鼠和雌鼠肾脏组织形态如图27、图28所示，空白组、模型对照组、阳性对照组、汤剂高、中、低剂量组：HE染色观察显示，肾脏组织形态正常，血液循环丰富，细胞核分布均匀。肾皮质和肾髓质分界清晰。肾皮质色泽较深，有明显呈颗粒状肾小体均匀分布，肾小体结构完整清晰；肾髓质无肾小体，呈密集线条状朝同一方向汇集，髓放线清晰，可见小叶间动脉。 [0167] 1.2小鼠活动状态 [0168] 1.2.1CFS小鼠造模后的活动情况 [0169] 实验小鼠造模后行为活动变化雄鼠如表10、雌鼠如表11所示，(1)模型构建后的悬尾实验中，空白组雄鼠悬尾不动时间短于造模各组(P<0.01)；旷场实验中，空白组雄鼠穿越的格子个数和直立次数均多于造模各组(P<0.01)。(2)空白组雌鼠悬尾不动时间短于造模各组(P<0.01)；旷场实验中，空白组雌鼠穿越的格子个数和直立次数均多于造模各组(P<0.01)。 [0170] 表10病理建模后对雄鼠行为学活动的影响(x±s，n＝10) [0171] [0172] 注：与空白组比较，BP<0.01。 [0173] 表11病理建模后对雌鼠行为学活动的影响(x±s，n＝10) [0174] [0175] 注：与空白组比较，BP<0.01。 [0176] 1.2.2CFS小鼠治疗后的活动情况 [0177] 服用五指毛桃汤剂治疗后实验小鼠行为活动变化雄鼠如表12、雌鼠如表13所示，(1)悬尾实验中，汤剂高、中、低剂量组和阳性对照组雄鼠悬尾不动时间皆短于模型对照组(P<0.01)，但悬尾不动时间仍长于空白组(P<0.01或P<0.05)；汤剂高、中、低剂量组和阳性对照组雌鼠悬尾不动时间皆短于模型对照组(P<0.01)，仅汤剂高剂量组雌鼠悬尾不动时间与空白组无明显差异。(2)旷场实验中，汤剂高、中、低剂量组和阳性对照组雄鼠穿越的格子个数和直立次数均多于模型对照组(P<0.01)，阳性对照组、汤剂高剂量组雄鼠穿越格子数均多于空白组(P<0.01)，汤剂高、中剂量组雄鼠直立次数均多于空白组(P<0.01)；汤剂高、中、低剂量组和阳性对照组雌鼠穿越的格子个数均多于模型对照组和空白组(P<0.01或P<0.05)，汤剂高、中、低剂量组和阳性对照组雌鼠直立次数多于模型对照组(P<0.01)，且汤剂高、中、低剂量组雌鼠直立次数多于空白组和阳性对照组(P<0.01)。 [0178] 表12复方五指毛桃汤对雄鼠行为学活动的影响(x±s，n＝10) [0179] [0180] 注：与模型对照组比较，AP<0.01，aP<0.05；与空白组比较，BP<0.01，bP<0.05；与阳D d性对照组比较，P<0.01，P<0.05。 [0181] 表13复方五指毛桃汤对雌鼠行为学活动的影响(x±s，n＝10) [0182] [0183] 注：与模型对照组比较，AP<0.01，aP<0.05；与空白组比较，BP<0.01，bP<0.05；与阳D d性对照组比较，P<0.01，P<0.05。 [0184] 实验结果表明，造模各组的小鼠体重下降，摄食量降低，皮毛暗黄无光泽，倦怠，嗜卧，捉捕时有焦躁、尖叫、强烈挣扎等行为，其体重、摄食量、饮水量下降，悬尾不动时间增长，穿越格子数和直立次数减少，说明饮食不节、强制游泳和慢性束缚长期刺激了小鼠的生理和心理，符合CFS形成过程，已构建出气血两虚型慢性疲劳综合征小鼠病理模型。雄性和雌性小鼠空白组和模型对照组肝脏、肺脏和肾脏组织形态无明显差异，提示CFS病发未使肝、肺、肾的细胞组织形态发生明显病变，该观察结果与CFS实验室检查结果无异常的表现符合，说明该动物模型较好代表慢性疲劳综合征。 [0185] 中药治疗CFS从脏腑调理开始，五指毛桃具有健脾补气、舒筋利湿之功效，可用于治疗无力食少，肝胆湿热等病症，辅以大枣、当归、茯苓和薏苡仁，具有益气补血、健脾益胃、行气化湿等功效，有助于肝疏泄功能和脾运化功能，以通过调节脏腑功能，缓解CFS症状，恢复正常活动能力。各器官的系数对比可判断出药物对机体内脏器的调理和治疗情况。 [0186] 本实验结果中，给药各组小鼠心脏组织细胞及其系数恢复与空白组无明显差异，提示复方五指毛桃能降低慢性应激对心脏细胞组织的炎症影响。给药各组CFS小鼠肝、肺、肾组织器官和脏器系数与空白组相比均无明显差异，提示复方五指毛桃汤应用于CFS治疗不影响机体器官的代谢、通气换气、分泌等正常运作。汤剂高、中、低剂量组和阳性对照组小鼠体重、摄食量、饮水量上升，水平运动得分和直立运动得分明显更高，且悬尾不动时间减少。与空白组和阳性对照组相比，汤剂高剂量组小鼠活动能力更佳，提示复方五指毛桃汤与阳性对照红景天药液均有提高CFS小鼠活动能力的作用，但复方五指毛桃汤可能存在浓度依赖关系。 [0187] 动物行为学实验结果表明，通过造模的过程观察及试验数据结果对比，在受到外界对生理和心理长期刺激时，雌鼠比雄鼠更容易诱发CFS，且患病时表现出的病态更加明显，如迅速消瘦、皮毛暗淡、脱毛等。复方五指毛桃汤灌胃治疗后提高了CFS小鼠在新环境的自主活动和调整情绪不稳的心理状态，增加食欲，体型恢复正常水平，皮毛光亮，与空白组无明显差异，可认为复方五指毛桃汤能缓解CFS小鼠精神不佳和躯体疲劳状态。 [0188] 2、小鼠氧化应激状态 [0189] 2.1小鼠常压耐缺氧环境生存时间 [0190] 服用复方五指毛桃汤剂后实验小鼠常压耐缺氧环境生存时间如表14所示，(1)汤剂高、中、低剂量组和阳性对照组雄鼠的常压缺氧生存时间均长于模型对照组(P<0.01)，分别提高了24.45min、14.94min、13.47min、13.31min；汤剂高剂量组雄鼠的常压缺氧环境中生存时间长于空白组及阳性对照组(P<0.01)，且汤剂高、中、低剂量组雄鼠在常压缺氧环境中生存时间具有量效关系。(2)汤剂高、中、低剂量组和阳性对照组雌鼠的常压缺氧生存时间均长于模型对照组(P<0.01)，分别提高了20.73min、16.41min、9.18min、15.44min；汤剂高、中剂量组和阳性对照组雌鼠的常压缺氧环境中生存时间长于空白组(P<0.01)；汤剂高剂量组雌鼠的常压缺氧环境中生存时间长于阳性对照组(P<0.01)，且汤剂高、中、低剂量组雌鼠在常压缺氧环境中生存时间具有量效关系。 [0191] 表14复方五指毛桃汤对CFS小鼠耐常压缺氧能力的影响(x±s，n＝10) [0192] [0193] 注：与模型对照组比较，AP<0.01，aP<0.05；与空白组比较，BP<0.01，bP<0.05；与阳D d性对照组比较，P<0.01，P<0.05。 [0194] 2.2小鼠常压高温生存时间 [0195] 服用复方五指毛桃汤剂后实验小鼠常压高温生存时间如表15所示，(1)汤剂高、中、低剂量组雄鼠在常压高温环境中生存时间均长于模型对照组(P<0.01)，分别提高了4.89min、4.17min、2.62min；汤剂高、中、低剂量组雄鼠在常压高温环境中生存时间均长于空白组和阳性对照组(P<0.01)，且汤剂高、中、低剂量组雄鼠在常压高温环境中生存时间具有量效关系。(2)汤剂高、中、低剂量三组和阳性对照组雌鼠在常压高温环境中生存时间均长于模型对照组(P<0.01)，分别提高了5.5min、2.93min、2.9min；汤剂高、中、低剂量三组雌鼠在常压高温环境中生存时间均长于空白组和阳性对照组(P<0.01)。 [0196] 表15复方五指毛桃汤对CFS小鼠耐常压高温能力的影响(x±s，n＝10) [0197] [0198] 注：与模型对照组比较，AP<0.01，aP<0.05；与空白组比较，BP<0.01，bP<0.05；与阳D d性对照组比较，P<0.01，P<0.05。 [0199] 2.3小鼠负重游泳时间 [0200] 服用复方五指毛桃汤剂后实验小鼠负重游泳时间如表16所示，(1)汤剂高、中、低剂量组雄鼠负重游泳时间均长于模型对照组(P<0.01)，分别提高了10.31min、7.64min、4.43min；汤剂高、中、低剂量组雄鼠负重游泳时间均长于空白组和阳性对照组(P<0.01或P< 0.05)，且汤剂高、中、低剂量组雄鼠在负重游泳时间具有量效关系。(2)汤剂高、中、低剂量组雌鼠负重游泳时间均长于模型对照组(P<0.01)，分别提高了2.71min、2.11min、1.72min； 汤剂高剂量组雌鼠负重游泳时间长于阳性对照组(P<0.01)。 [0201] 表16复方五指毛桃汤对CFS小鼠负重游泳时长的影响(x±s，n＝10) [0202] [0203] 注：与模型对照组比较，AP<0.01，aP<0.05；与空白组比较，BP<0.01，bP<0.05；与阳D d性对照组比较，P<0.01，P<0.05。 [0204] 抗氧化应激方面，缺氧对生物体产生一种紧张性刺激，引起机体的应激性反应，并影响代谢和氧化功能，最终使心脑缺氧供能不足而死亡，汤剂高、中、低剂量组和阳性对照组的雄鼠和雌鼠在常压缺氧环境生存时间比模型对照组均有提高，且与空白组和阳性对照组相比，汤剂高剂量组小鼠缺氧生存时间更长，提示复方五指毛桃汤和阳性对照红景天药液均能够提高CFS小鼠缺氧环境的生存时间。被高温刺激后，生物体会产生一系列的保护性应激反应，如有利于抵抗应激作用的肾上腺皮质激素分泌增加，当该激素耗竭，机体抗应激能力就会下降，汤剂高、中、低剂量组和阳性对照组的雄鼠和雌鼠在常压高温环境生存时间比模型对照组均有提高，生存时间亦长于空白组，提示复方五指毛桃汤和阳性对照红景天药液均能够提高CFS小鼠高温环境的生存时间。负重游泳对小鼠来说是一种强迫运动，肌肉在长时间运动时，促使能量迅速代谢，肌纤维充血、肌肉膨胀，肌肉中的血管变窄，缺氧供能不足，产生大量代谢产物的同时不能及时排出，导致疲劳加重，汤剂高、中、低剂量组和阳性对照组的雄鼠和雌鼠负重游泳时间比模型对照组均有提高，提示复方五指毛桃汤和阳性对照红景天药液均能够延长CFS小鼠疲劳活动时间。 [0205] 抗氧化应激能力实验结果证明，服用复方五指毛桃汤剂和红景天药液的CFS小鼠在极端环境中的生存时间更长，说明复方五指毛桃汤和阳性对照红景天药液能够提高CFS小鼠不良环境刺激下抗氧化应激能力和抗疲劳能力，且汤剂高剂量组小鼠表现的抗应激能力更佳，推断复方五指毛桃汤可能存在浓度依赖关系。 [0206] 2.4小鼠肝脏肝糖原含量 [0207] 建立肝糖原含量测定标准曲线，如图9所示，浓度在0‑400ng/mL之间，线性关系良2 好(R＝0.9986)，线性方程为：y＝0.0062x+0.18。 [0208] 服用复方五指毛桃汤剂后实验小鼠肝糖原含量如表17、图10所示，(1)汤剂高、中、低剂量组和阳性对照组雄鼠肝匀浆中肝糖原含量均高于模型对照组(P<0.01)，分别提高了0.54％、0.27％、0.21％、0.24％；汤剂高、中剂量组和阳性对照组雄鼠肝糖原含量高于空白组(P<0.01或P<0.05)；汤剂高剂量组雄鼠肝糖原含量高于阳性对照组(P<0.01)，且汤剂高、中、低剂量组具有量效关系(P<0.01)。(2)汤剂高、中、剂量组和阳性对照组雌鼠肝匀浆中肝糖原含量均高于模型对照组(P<0.01)，分别提高了0.48％、0.45％、0.45％、0.59％；汤剂高、中、低剂量组雌鼠肝匀浆中肝糖原含量高于空白组(P<0.01)，低于阳性对照组(P< 0.01)。 [0209] 表17复方五指毛桃汤对CFS小鼠肝糖原含量的影响(x±s，n＝10) [0210] [0211] 注：与模型对照组比较，AP<0.01，aP<0.05；与空白组比较，BP<0.01，bP<0.05；与阳D d性对照组比较，P<0.01，P<0.05。 [0212] 复方五指毛桃汤含有大量多糖成分，而多糖具有抗氧化的效用，维持血糖平衡，提供能量。当肝糖原储备量越多，机体对于疲劳的抵抗能力就越强，因此肝糖原含量的多少决定了疲劳发生的快慢速度。与模型对照组相比，汤剂高、中、低剂量组的CFS雄鼠和雌鼠肝糖原含量均有提高，提示复方五指毛桃汤能提高肝脏肝糖原含量，调节机体血糖平衡，增强机体抵抗疲劳的能力。仅有汤剂高剂量组雄鼠肝糖原含量高于阳性对照组雄鼠，但汤剂高、中剂量组的雄鼠和雌鼠肝糖原含量均高于空白组，说明复方五指毛桃汤能通过提高肝糖原含量已达到增强机体抵抗疲劳的能力。 [0213] 2.5小鼠肝脏SOD含量 [0214] 建立SOD含量测定标准曲线，如图11所示，浓度在0‑0.03ng/mL之间，线性关系良好2 (R＝0.9952)，线性方程为：y＝40.226x+0.0433。 [0215] 服用复方五指毛桃汤剂后实验小鼠SOD含量如表18、图12所示，(1)汤剂高、中、低剂量组和阳性对照组雄鼠肝匀浆中SOD含量均高于模型对照组(P<0.01)，分别提高了120.94％、96.37％、83.33％、93.22％；汤剂高剂量组雄鼠肝匀浆中SOD含量高于空白组和阳性对照组(P<0.01)，且汤剂高、中、低剂量三组雄鼠肝匀浆中SOD含量具有量效关系。(2)汤剂高、中、低剂量组和阳性对照组雌鼠肝匀浆中SOD含量均高于模型对照组(P<0.01)，分别提高了107.16％、80.33％、64.06％、131.53％；汤剂高剂量组和阳性对照组雌鼠肝匀浆中SOD含量高于空白组(P<0.01)，且汤剂高、中、低剂量组雌鼠肝匀浆中SOD含量具有量效关系。 [0216] 表18复方五指毛桃汤对CFS小鼠SOD含量的影响(x±s，n＝10) [0217] [0218] 注：与模型对照组比较，AP<0.01，aP<0.05；与空白组比较，BP<0.01，bP<0.05；与阳D d性对照组比较，P<0.01，P<0.05。 [0219] 当机体消耗能量，机体产生疲劳时清除代谢能力有所下降，机体内氧气的利用速率上升，导致大量的自由基积聚，使得抗氧化系统平衡被打破，自由基攻击细胞膜，引起细胞功能下降，影响机体的正常代谢反应，从而使人体产生疲劳感却无法通过休息缓解。通过阻断NO/ONOO‑的循环机制，可拮抗自由基对细胞的攻击所造成损伤，维持机体内的稳态平衡，用于治疗CFS。五指毛桃中的有效成分补骨脂素、佛手柑内酯等香豆素类化合物和其他黄酮类化合物，都具有较强的清除自由基能力，能有效降低的机体脂质过氧化，维持谷胱甘肽和超氧化物歧化酶等抗氧化因子水平，从而提高机体的抗氧化应激能力，维持机体内抗氧化系统稳态平衡。超氧化物歧化酶(SOD)常被公认为“抗氧化损伤”的指标，其能歧化氧离子，消除自由基，保护细胞功能的正常运作，提高抗疲劳能力，其含量高低能够反应机体自由基的清除能力。 [0220] 与模型对照组相比，汤剂高、中、低剂量组的CFS雄鼠和雌鼠肝糖原含量均有提高，提示复方五指毛桃汤能提高肝脏SOD含量，从而降低自由基对机体细胞的伤害，维持抗氧化系统平衡，缓解机体的疲劳。服用复方五指毛桃汤小鼠SOD含量虽不如阳性对照组的红景天药液，但汤剂高剂量组的雄鼠和雌鼠SOD含量高于空白组和模型对照组，汤剂中剂量组小鼠SOD含量与空白组相比无明显差异，说明复方五指毛桃汤通过提高SOD含量已达到维持抗氧化系统平衡，缓解机体产生的疲劳感。 [0221] 3、小鼠免疫功能 [0222] 3.1小鼠的免疫脏器系数 [0223] (1)服用复方五指毛桃汤剂后实验雄鼠脏器系数如表19所示，汤剂高剂量组雄鼠的脾脏系数高于模型对照组和空白组(P<0.01)；汤剂高剂量组雄鼠的胸腺系数高于模型对照组、空白组和阳性对照组(P<0.01)；各组间的肝脏系数、肺脏系数和肾脏系数均无明显差异。(2)服用复方五指毛桃汤剂后实验雌鼠脏器系数如表19所示，汤剂高、中、低剂量组雌鼠的脾脏系数均高于模型对照组、空白组和阳性对照组(P<0.01)；汤剂高、中、低剂量组和阳性对照组雌鼠的胸腺系数均高于空白组和模型对照组(P<0.01)；各组间的肝脏系数、肺脏系数和肾脏系数均无明显差异。 [0224] 表19复方五指毛桃汤对雄鼠和雌鼠免疫脏器系数的影响 [0225] [0226] 注：与模型对照组比较，AP<0.01，aP<0.05；与空白组比较，BP<0.01，bP<0.05；与阳D d性对照组比较，P<0.01，P<0.05。 [0227] 胸腺和脾脏都是机体的免疫器官，能储存和分泌免疫细胞、免疫分子等，具有产生T淋巴细胞、产生和分泌胸腺素和激素类物质的功能。胸腺和脾脏系数的高低取决于其中淋巴细胞增殖的程度，可粗略估计免疫功能的强弱。汤剂高剂量组雄鼠和汤剂高、中、低剂量组雌鼠的胸腺系数和脾脏系数均有上升，说明复方五指毛桃汤具有抗胸腺萎缩、恢复正常胸腺免疫功能和增强脾脏免疫能力的作用，但可能存在浓度依赖关系。 [0228] 汤剂中、低剂量两组CFS雄鼠的胸腺系数和脾脏系数与空白组无明显差别，可能由于雄鼠与雌鼠体重或性别的不同，导致其体内代谢产生动态变化。因此复方五指毛桃对于CFS雄鼠免疫功能的治疗效果与CFS雌鼠产生差别。 [0229] 3.2小鼠免疫器官组织形态 [0230] 3.2.1小鼠胸腺组织形态 [0231] 服用复方五指毛桃汤剂后实验雄鼠和雌鼠胸腺组织形态如图29、图30所示，雄鼠的空白组、阳性对照组、汤剂高剂量组和雌鼠的空白组、阳性对照组、汤剂高、中、低剂量组：HE染色结果显示一个胸腺小叶，淋巴细胞大量集中在皮质区呈深色分布，髓质区细胞较稀疏染色较浅，皮质区和皮髓区分布规律，有明显界限。雄鼠模型对照组和雌鼠模型对照组： 皮质区和髓质区分布界限不明显，淋巴细胞数量减少。汤剂中剂量组：皮质区和髓质区分布规律，有明显界限。但髓质区范围较小，淋巴细胞分布较少。汤剂低剂量组：皮质区和皮髓区分布界限不明显，淋巴细胞分布稀疏。 [0232] 3.2.3小鼠脾脏组织形态 [0233] 服用复方五指毛桃汤剂后实验雄鼠和雌鼠脾脏组织形态如图31、图32所示，雄鼠空白组、阳性对照组、汤剂高、中、低剂量组和雌鼠的空白组、阳性对照组、汤剂高、中、低剂量组：脾小体形状结构清晰，被紫红色区域的红髓围绕，清晰可见。雄鼠模型对照组和雌鼠模型对照组：脾小体形状较小、结构不清晰，白髓和红髓界限不清晰，无明显边缘区。 [0234] 3.3小鼠血清IL‑2含量 [0235] 建立IL‑2含量测定标准曲线，如图13所示，浓度在0‑0.03ng/mL之间，线性关系良2 好(R＝0.997)，线性方程为：y＝67.221x+0.0402。 [0236] 服用复方五指毛桃汤剂后实验小鼠IL‑2含量如表20、图14所示，(1)汤剂高、中、低剂量组和阳性对照组雄鼠血清中IL‑2因子含量均高于模型对照组(P<0.01)，分别提高了94.56％、87.64％、40.30％、40.21％；汤剂高、中、低剂量组和阳性对照组雄鼠血清中IL‑2因子含量均高于空白组(P<0.01)；汤剂高、中剂量组雄鼠血清中IL‑2含量均高于阳性对照组(P<0.01)，且汤剂高、中、低剂量组具有量效关系。(2)汤剂高、中、低剂量组和阳性对照组雌鼠血清中IL‑2含量高于模型对照组(P<0.01)，分别提高了149.90％、68.19％、45.82％、 101.77％；汤剂高、中、低剂量组和阳性对照组雌鼠血清中IL‑2含量均高于空白组(P< 0.01)；汤剂高剂量组雌鼠血清中IL‑2含量均高于阳性对照组SOD含量，且汤剂高、中、低剂量组具有量效关系。 [0237] 表20复方五指毛桃汤对CFS小鼠IL‑2含量的影响(x±s，n＝10) [0238] [0239] 注：与模型对照组比较，AP<0.01，aP<0.05；与空白组比较，BP<0.01，bP<0.05；与阳D d性对照组比较，P<0.01，P<0.05。 [0240] IL‑2是机体细胞免疫功能的重要指标，由活化的CD4+T细胞及少量CD8+T细胞产生，+对机体的免疫应答和抗病毒感染等，具有高活化度，能调节淋巴因子，加强CD8T细胞和自然+ + 杀伤细胞的活性(NK细胞)。T细胞亚群包括CD4 、CD8 两大类，二者之间的相互制约、共同作+ + 用维持着机体正常的免疫功能。若两者失衡，导致CD4 /CD8水平升高或降低，即提示机体免疫功能紊乱。NK细胞活性能直接反映细胞免疫的状态，当NK细胞数量降低，警示机体免疫功能低下，也被认为是诱发CFS的重要原因。因此，当机体内IL‑2含量上升，提示NK细胞活性得到加强，能提高机体内细胞的免疫状态，从而降低CFS被引发的可能性。与模型对照组相比，雄鼠和雌鼠汤剂高、中、低剂量组的CFS雄鼠IL‑2含量均有提高，提示复方五指毛桃汤能调控免疫因子IL‑2，使NK细胞的活性增强，维持机体免疫功能稳态平衡，降低CFS发病率。汤剂高剂量组比阳性对照组IL‑2含量更高，但汤剂高、中、低剂量组的IL‑2含量均高于空白组和模型对照组，可认为复方五指毛桃汤能提高IL‑2因子在机体内含量，达到对免疫系统的调控作用。 [0241] 3.4小鼠血清IFN‑γ含量 [0242] 建立IFN‑γ含量测定标准曲线，如图15所示，浓度在0‑0.03ng/mL之间，线性关系2 良好(R＝0.9979)，线性方程为：y＝67.067x+0.0378。 [0243] 服用复方五指毛桃汤剂后实验小鼠IFN‑γ含量如表21、图16所示，(1)汤剂高、中、低剂量组和阳性对照组雄鼠血清中INF‑γ含量均高于模型对照组(P<0.01)，分别提高了87.80％、82.42％、82.27％、75.36％；汤剂高、中、低剂量组和阳性对照组雄鼠血清中INF‑γ含量均高于空白组(P<0.01)；汤剂高剂量组雄鼠血清中INF‑γ含量高于阳性对照组(P< 0.05)。(2)汤剂高、中、低剂量组和阳性对照组雌鼠血清中INF‑γ含量均高于模型对照组(P<0.01)，分别提高了39.01％、43.30％、39.91％、43.38％；汤剂高、中、低剂量三组和阳性对照组雌鼠血清中INF‑γ含量均高于空白组(P<0.01)。 [0244] 表21复方五指毛桃汤对CFS小鼠INF‑γ含量的影响(x±s，n＝10) [0245] [0246] 注：与模型对照组比较，AP<0.01，aP<0.05；与空白组比较，BP<0.01，bP<0.05；与阳D d性对照组比较，P<0.01，P<0.05。 [0247] IFN‑γ由抗原刺激T淋巴细胞产生的具有多种功能的细胞因子，其异常表达和很多自身炎症和自身免疫疾病相关，是重要的细胞介导免疫应答标志。有研究已经证实，IFN‑γ通过JAK‑STAT通路的激活来调节免疫功能，促进T淋巴细胞的成熟、增殖和活化，发挥抗病毒及抗肿瘤作用，其含量降低说明机体免疫功能下降。与模型对照组相比，雄鼠和雌鼠汤剂高、中、低剂量组的IFN‑γ含量均有提高，提示复方五指毛桃汤能调控免疫因子IFN‑γ，进而调整机体的免疫状态。汤剂高剂量组小鼠IFN‑γ含量更高于阳性对照组，但汤剂高、中、低剂量组小鼠的IFN‑γ含量均高于空白组和模型对照组，可认为复方五指毛桃汤提高IFN‑γ因子在机体内含量，已达到对免疫系统的调控作用。 [0248] 免疫功能实验结果显示，复方五指毛桃汤对胸腺及脾脏细胞具有保护作用，能恢复其正常免疫能力，改善雌性胸腺萎缩的情况，通过调控CFS小鼠免疫因子IL‑2和IFN‑γ，进而调节机体内其他的免疫因子，使机体维持正常的免疫功能。 [0249] 4小鼠神经内分泌测定 [0250] 4.1小鼠血清5‑HT含量 [0251] 建立5‑HT含量测定标准曲线，如图17所示，浓度在0‑400ng/mL之间，线性关系良好2 (R＝0.9983)，线性方程为：y＝0.0053x+0.19。 [0252] 服用复方五指毛桃汤剂后实验小鼠5‑HT含量如表22、图18所示，(1)汤剂高、中、低剂量组和阳性对照组雄鼠血清中的5‑HT含量高于模型对照组(P<0.01)，分别提高了1.08％、0.73％、0.85％、0.35％；汤剂高、中、低剂量组雄鼠血清中5‑HT含量均高于空白组和阳性对照组(P<0.01)。(2)汤剂高、中、低剂量组和阳性对照组雌鼠血清中的5‑HT含量明显高于模型对照组(P<0.01)，分别提高了0.55％、0.89％、1.12％、0.47％；汤剂高、中、低剂量三组雌鼠血清中5‑HT含量均高于空白组和阳性对照组(P<0.01)。 [0253] 表22复方五指毛桃汤对CFS小鼠5‑HT含量的影响(x±s，n＝10) [0254] [0255] [0256] 注：与模型对照组比较，AP<0.01，aP<0.05；与空白组比较，BP<0.01，bP<0.05；与阳D d性对照组比较，P<0.01，P<0.05。 [0257] 5‑HT属于中枢神经系统中一类脑内单胺类神经递质，参与调节学习记忆、情绪、动机和食欲等，其普遍存在于哺乳动物的神经系统中，对中枢神经系统具有兴奋或抑制的协调作用。构建CFS大鼠病理模型时，发现CFS大鼠下丘脑和垂体中的NE、DOPAC、DA含量均有升高趋势，而5‑HT含量却有明显下降。当5‑HT含量水平减少，可以直接影响CFS患者的情绪、睡眠，造成失眠、抑郁、萎靡等负面状态，还会导致机体对痛阈的降低，影响对疼痛的应激水平。外周系统中的5‑HT在不同受体亚型的作用下参与HPA轴调控，通过提高机体内5‑HT含量水平，以调节神经系统，可缓解不良的精神状态和情绪。与模型对照组相比，雄鼠和雌鼠汤剂高、中、低剂量组的5‑HT含量均有提高，且均高于空白组和阳性对照组，提示复方五指毛桃汤对于神经递质5‑HT含量有一定调控作用，有助于缓解机体精神紧张和不良情绪。 [0258] 4.2小鼠血清DA含量 [0259] 建立DA含量测定标准曲线，如图19所示，浓度在0‑0.03ng/mL之间，线性关系良好(R2＝0.9925)，线性方程为：y＝‑45.639x+1.5567。 [0260] 服用复方五指毛桃汤剂后实验小鼠DA含量如表23、图20所示，(1)汤剂高、中、低剂量组和阳性对照组雄鼠血清中DA含量低于模型对照组(P<0.01)，分别降低了19.92％、18.05％、17.85％、21.77％；汤剂高、中、低剂量组雄鼠血清中DA含量高于阳性对照组(P< 0.01或P<0.05)；汤剂高剂量组雄鼠血清中DA含量与空白组无明显差异。(2)汤剂高、中、低剂量组和阳性对照组雌鼠血清中DA含量低于模型对照组(P<0.01)，分别降低了12.16％、 11.86％、8.52％、14.97％；汤剂高、中、低剂量组雌鼠血清中DA含量高于阳性对照组(P< 0.01或P<0.05)；汤剂高、中剂量组雌鼠血清中DA含量与空白组无明显差异。 [0261] 表23复方五指毛桃汤对CFS小鼠DA含量的影响(x±s，n＝10) [0262] [0263] 注：与模型对照组比较，AP<0.01，aP<0.05；与空白组比较，BP<0.01，bP<0.05；与阳D d性对照组比较，P<0.01，P<0.05。 [0264] DA含量的检测采用ELISA竞争抑制法，其原理为待测抗体和一定量的酶标抗体均可与固相抗原相结合，二者处于竞争状态。即待测抗体含量越多，结合在固相抗原上的酶标抗体含量越少，阳性反应呈现的颜色越浅，测得的OD值就越低。因此OD值与待测标本中抗体含量成反比，呈向下趋势的线性关系。 [0265] DA是维持体外神经功能正常运转的重要神经介质，参与动机和情绪功能，当遭遇急性应激时，可能刺激下丘脑‑垂体‑肾上腺轴(HPA轴)激素分泌紊乱，引起身体肌肉神经紧张、动作迟缓等身体机能衰退，和记忆力、注意力下降等认知功能障碍。DA过多也会自我氧化产生神经毒素6‑OHDA和神经黑素，造成细胞的氧化应激，从而打破机体抗氧化平衡，诱发机体出现疲劳、抑郁、失眠等症状，使机体产生疲劳感，引发CFS，减少活动行为。因此，患有CFS的小鼠会有嗜卧、反应迟钝、暴躁、尖叫和打架等的行为。与模型对照组相比，雄鼠和雌鼠汤剂高、中、低剂量组的血清中DA含量均有降低，其中汤剂高、中剂量组CFS小鼠均与空白组无明显差异，提示复方五指毛桃汤在一定程度上调控神经介质DA含量，缓解CFS小鼠不良情绪，提高机体应激能力。 [0266] 神经内分泌功能实验结果显示，服用复方五指毛桃汤对神经递质因子5‑HT和DA含量具有调控作用，可缓解机体精神紧张和不良情绪，提高机体应激能力和活动能力。 [0267] 综上，服用复方五指毛桃汤能有效增强CFS小鼠活动能力和抵抗不良环境刺激的应激能力，延长极端环境中的生存时间，并提高其肝糖原和SOD含量，加强机体对能量的储存和利用能力，减轻活性氧自由基对机体细胞的攻击，保证细胞功能正常运转，具有一定的抗氧化及抗疲劳能力，并达到缓解慢性疲劳的作用。服用复方五指毛桃汤后，CFS小鼠血清中免疫因子IL‑2和IFN‑γ含量得到调节，可认为复方五指毛桃汤能调节炎症因子水平，从而维持免疫系统动态平衡，增强机体免疫力。复方五指毛桃汤能调控CFS小鼠的5‑HT和DA含量，缓解机体精神紧张和不良情绪，且雄鼠与雌鼠效果无明显差异，说明复方五指毛桃汤对CFS小鼠的日常行为活动和饮食状态、记忆力和负性情绪等有明显的改善。 |
||||||
QQ群二维码
意见反馈
意见反馈