背景技术
[0001]
治疗性
蛋白质,例如
治疗性抗体,已迅速成为患有免疫
疾病的患者的临床上重要的药物类别。众多自身免疫疾病和同种免疫疾病由致病性抗体介导。例如,许多
胎儿和新生儿免疫疾病来源于母体抗体通过胎盘中的人新生儿Fc受体(FcRn)从妊娠受试者(尤其是患
有免疫疾病的妊娠受试者)转移到胎儿。存在治疗免疫疾病的新型方法的需要。
发明内容
[0002] 在第一个方面,本
专利申请的特征在于治疗胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症的方法,其包括将抗体施用于妊娠受试者,其中所述抗体包括以下、包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成、由以下组成、或基本上由以下组成:(1)包含CDR L1、CDR L2和CDR L3的轻链可变区,以及(2)包含CDR H1、CDR H2和CDR H3的重链可变区,其中所述CDR L1包括以下、包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成、由以下组成、或基本上由以下组成:序列X1GTGSDVGSYNX2VS(SEQ ID NO:12),所述CDR L2包括以下、包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成、由以下组成、或基本上由以下组成:序列GDX3X4RPS(SEQ ID NO:13),所述CDR L3包括以下、包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成、由以下组成、或基本上由以下组成:序列X5SYX6GSGIYV(SEQ ID NO:14),所述CDR H1包括以下、包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成、由以下组成、或基本上由以下组成:序列Z1YAMG(SEQ ID NO:15),所述CDR H2包括以下、包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成、由以下组成、或基本上由以下组成:序列Z7IGZ2SGZ3QTZ4YADS(SEQ ID NO:16),并且所述CDR H3包括以下、包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成、由以下组成、或基本上由以下组成:序列LAZ5Z6DSY(SEQ ID NO:17),其中X1为极性或疏
水性
氨基酸,X2为疏水性氨基酸,X3为极性氨基酸,X4为极性或酸性氨基酸,X5为极性或疏水性氨基酸,X6为疏水性氨基酸,Z1为极性或酸性氨基酸,Z2为极性或疏水性氨基酸,Z3为G、S或A,Z4为
碱性氨基酸,Z5为疏水性或碱性氨基酸,Z6为G、S、D、Q或H,并且Z7为S或T。
[0003] 在一些
实施例中,抗体包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:(1)包含CDR L1、CDR L2和CDR L3的轻链可变区,以及(2)包含CDR H1、CDR H2和CDR H3的重链可变区,其中所述CDR L1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列X1GTGSDVGSYNLVS或TGTGSDVGSYNX2VS,所述CDR L2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列GDX3ERPS或GDSX4RPS,所述CDR L3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列X5SYAGSGIYV或SSYX6GSGIYV,所述CDR H1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:TYAMG(SEQ ID NO:4)、DYAMG(SEQ ID NO:5)或NYAMG(SEQ ID NO:6),所述CDR H2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:
SIGASGSQTRYADS(SEQ ID NO:8)、SIGSSGAQTRYADS(SEQ ID NO:7)、SIGASGAQTRYADS(SEQ ID NO:9)、SIGASGGQTRYADS(SEQ ID NO:10)、TIGSSGAQTRYADS(SEQ ID NO:41)、
SIGASGSQTRYADS(SEQ ID NO:42)、TIGASGAQTRYADS(SEQ ID NO:43)或TIGASGGQTRYADS(SEQ ID NO:32),并且所述CDR H3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列LAZ5GDSY或LAIZ6DSY。
[0004] 在一些实施例中,抗体包括以下、包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成、由以下组成、或基本上由以下组成:(1)包含CDR L1、CDR L2和CDR L3的轻链可变区,以及(2)包含CDR H1、CDR H2和CDR H3的重链可变区,其中所述CDR L1包括以下、包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成、由以下组成、或基本上由以下组成:序列TGTGSDVGSYNLVS(SEQ ID NO:1),所述CDR L2包括以下、包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成、由以下组成、或基本上由以下组成:序列GDSERPS(SEQ ID NO:2),所述CDR L3包括以下、包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成、由以下组成、或基本上由以下组成:序列SSYAGSGIYV(SEQ ID NO:3),所述CDR H1包括以下、包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成、由以下组成、或基本上由以下组成:序列TYAMG(SEQ ID NO:4),所述CDR H2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列SIGSSGAQTRYADS(SEQ ID NO:7)或TIGSSGAQTRYADS(SEQ ID NO:41),并且所述CDR H3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列LAIGDSY(SEQ ID NO:11)。
[0005] 在一些实施例中,受试者具有先前的胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症的病史。在一些实施例中,受试者处于患有胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症的
风险中。在一些实施例中,胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症选自胎儿和新生儿同种免疫性血小板减少症、胎儿和新生儿的溶血性疾病、同种免疫性
全血小板减
少症、先天性心脏传导阻滞、胎儿关节挛缩、新生儿重症肌无
力、新生儿自身免疫性溶血性贫血、新生儿抗磷脂综合征、新生儿多肌炎、皮肌炎、新生儿狼疮、新生儿硬皮病、白塞氏病、新生儿格雷夫斯病、新生儿川崎病、新生儿自身免疫性甲状腺疾病和新生儿I型糖尿病。
[0006] 在一些实施例中,胎儿和新生儿自身免疫和/或自身免疫病症是胎儿和新生儿的溶血性疾病。在一些实施例中,胎儿和新生儿自身免疫和/或自身免疫病症是胎儿和新生儿同种免疫性血小板减少症。在一些实施例中,胎儿和新生儿自身免疫和/或自身免疫病症是先天性心脏传导阻滞。
[0007] 在一些实施例中,治疗降低了流产的风险。
[0008] 在另一个方面,本专利申请的特征在于治疗与胎儿和新生儿的溶血性疾病相关的胎儿贫血的方法,其包括将抗体施用于妊娠受试者,其中所述抗体包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:(1)包含CDR L1、CDR L2和CDR L3的轻链可变区,以及(2)包含CDR H1、CDR H2和CDR H3的重链可变区,其中所述CDR L1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列X1GTGSDVGSYNX2VS(SEQ ID NO:12),所述CDR L2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列GDX3X4RPS(SEQ ID NO:13),所述CDR L3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列X5SYX6GSGIYV(SEQ ID NO:
14),所述CDR H1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列Z1YAMG(SEQ ID NO:15),所述CDR H2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列
Z7IGZ2SGZ3QTZ4YADS(SEQ ID NO:16),并且所述CDR H3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列LAZ5Z6DSY(SEQ ID NO:17),其中X1为极性或疏水性氨基酸,X2为疏水性氨基酸,X3为极性氨基酸,X4为极性或酸性氨基酸,X5为极性或疏水性氨基酸,X6为疏水性氨基酸,Z1为极性或酸性氨基酸,Z2为极性或疏水性氨基酸,Z3为G、S或A,Z4为碱性氨基酸,Z5为疏水性或碱性氨基酸,Z6为G、S、D、Q或H,并且Z7为S或T。
[0009] 在一些实施例中,该方法治疗妊娠受试者、妊娠受试者的胎儿和/或其组合。
[0010] 在另一个方面,本专利申请的特征在于治疗自身免疫病症的方法,其包括将抗体施用于妊娠受试者。在一些实施例中,自身免疫病症选自以下:斑秃、强直性脊柱炎、抗磷脂综合征、
艾迪生氏病、溶血性贫血、自身免疫性
肝炎、肝炎、白塞氏病、大疱性类天疱疮、心肌病、口炎性腹泻-皮炎、慢性疲劳免疫功能障碍综合征、慢性
炎症性脱髓鞘性多发性神经病、丘施综合征、瘢痕性类天疱疮、局限型硬皮病(CREST综合征)、冷凝集素病、克罗恩氏病、皮肌炎、盘状狼疮、特发性混合性冷球蛋白血症、
纤维肌痛、纤维肌炎、格雷夫斯病、桥本氏甲状腺炎、甲状腺功能减退、炎性肠病、自身免疫性淋巴增生综合征、特发性
肺纤维化、IgA肾病、胰岛素依赖性糖尿病、幼年型关节炎、扁平苔癣、狼疮、梅尼埃病、混合性结缔组织病、多发性硬化、恶性贫血、结节性多动脉炎、多软骨炎、多腺体综合征、风湿性多肌痛、多肌炎、原发性无丙种球蛋白血症、原发性胆汁性肝硬化、
牛皮癣、雷诺现象、莱特尔综合征、风湿热、类风湿性关节炎、肉瘤样病、硬皮病、干燥综合征、僵人综合征、高安动脉炎、颞动脉炎、溃疡性结肠炎、葡萄膜炎、白癜风或韦格纳氏肉芽肿。
[0011] 在一些实施例中,抗体包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:(1)包含CDR L1、CDR L2和CDR L3的轻链可变区,以及(2)包含CDR H1、CDR H2和CDR H3的重链可变区,其中所述CDR L1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列X1GTGSDVGSYNX2VS(SEQ ID NO:12),所述CDR L2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列GDX3X4RPS(SEQ ID NO:13),所述CDR L3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列X5SYX6GSGIYV(SEQ ID NO:14),所述CDRH1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列Z1YAMG(SEQ ID NO:15),所述CDR H2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列Z7IGZ2SGZ3QTZ4YADS(SEQ ID NO:16),并且所述CDR H3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列LAZ5Z6DSY(SEQ ID NO:17),其中X1为极性或疏水性氨基酸,X2为疏水性氨基酸,X3为极性氨基酸,X4为极性或酸性氨基酸,X5为极性或疏水性氨基酸,X6为疏水性氨基酸,Z1为极性或酸性氨基酸,Z2为极性或疏水性氨基酸,Z3为G、S或A,Z4为碱性氨基酸,Z5为疏水性或碱性氨基酸,Z6为G、S、D、Q或H,并且
[0012] Z7为S或T。
[0013] 在一些实施例中,该治疗降低了流产/失去胎儿的风险。
[0014] 在另一个方面,本专利申请的特征在于降低自身免疫病症或同种免疫病症的风险,或者降低发展自身免疫病症或同种免疫病症的风险的方法,其包括将FcRn抗体施用于
妊娠受试者。
[0015] 在一些实施例中,自身免疫病症选自以下:斑秃、强直性脊柱炎、抗磷脂综合征、艾迪生氏病、溶血性贫血、自身免疫性肝炎、肝炎、白塞氏病、大疱性类天疱疮、心肌病、口炎性腹泻-皮炎、慢性疲劳免疫功能障碍综合征、慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病、丘施综合征、瘢痕性类天疱疮、局限型硬皮病(CREST综合征)、冷凝集素病、克罗恩氏病、皮肌炎、盘状狼疮、特发性混合性冷球蛋白血症、纤维肌痛、纤维肌炎、格雷夫斯病、桥本氏甲状腺炎、甲状腺功能减退、炎性肠病、自身免疫性淋巴增生综合征、特发性肺纤维化、IgA肾病、胰岛素依赖性糖尿病、幼年型关节炎、扁平苔癣、狼疮、梅尼埃病、混合性结缔组织病、多发性硬化、恶性贫血、结节性多动脉炎、多软骨炎、多腺体综合征、风湿性多肌痛、多肌炎、原发性无丙种球蛋白血症、原发性胆汁性肝硬化、牛皮癣、雷诺现象、莱特尔综合征、风湿热、类风湿性关节炎、肉瘤样病、硬皮病、干燥综合征、僵人综合征、高安动脉炎、颞动脉炎、溃疡性结肠炎、葡萄膜炎、白癜风或韦格纳氏肉芽肿。
[0016] 在一些实施例中,该治疗降低了流产/失去胎儿的风险。
[0017] 在另一个方面,本专利申请的特征在于增加受试者中的抗体分解代谢的方法,该方法包括将抗体施用于妊娠受试者,其中所述抗体包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:(1)包含CDR L1、CDR L2和CDR L3的轻链可变区,以及(2)包含CDR H1、CDR H2和CDR H3的重链可变区,其中所述CDR L1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列X1GTGSDVGSYNX2VS(SEQ ID NO:12),所述CDR L2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列GDX3X4RPS(SEQ ID NO:13),所述CDR L3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列X5SYX6GSGIYV(SEQ ID NO:14),所述CDR H1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列Z1YAMG(SEQ ID NO:15),所述CDR H2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列Z7IGZ2SGZ3QTZ4YADS(SEQ ID NO:16),并且所述CDR H3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列LAZ5Z6DSY(SEQ ID NO:17),其中X1为极性或疏水性氨基酸,X2为疏水性氨基酸,X3为极性氨基酸,X4为极性或酸性氨基酸,X5为极性或疏水性氨基酸,X6为疏水性氨基酸,Z1为极性或酸性氨基酸,Z2为极性或疏水性氨基酸,Z3为G、S或A,Z4为碱性氨基酸,Z5为疏水性或碱性氨基酸,Z6为G、S、D、Q或H,并且Z7为S或T。
[0018] 在一些实施例中,增加的抗体分解代谢包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:增加的致病性抗体分解代谢。
[0019] 在一些实施例中,致病性抗体对母亲、胎儿或母亲和胎儿两者均为致病性的。
[0020] 在一些实施例中,抗体是IgG抗体。
[0021] 在另一个方面,本专利申请的特征在于减少受试者中的自身抗体的方法,该方法包括将抗体施用于妊娠受试者,其中所述抗体包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:(1)包含CDR L1、CDR L2和CDR L3的轻链可变区,以及(2)包含CDR H1、CDR H2和CDR H3的重链可变区,其中所述CDR L1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列X1GTGSDVGSYNX2VS(SEQ ID NO:12),所述CDR L2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列GDX3X4RPS(SEQ ID NO:13),所述CDR L3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列X5SYX6GSGIYV(SEQ ID NO:14),所述CDR H1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列Z1YAMG(SEQ ID NO:15),所述CDR H2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列Z7IGZ2SGZ3QTZ4YADS(SEQ ID NO:16),并且所述CDR H3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列
LAZ5Z6DSY(SEQ ID NO:17),其中X1为极性或疏水性氨基酸,X2为疏水性氨基酸,X3为极性氨基酸,X4为极性或酸性氨基酸,X5为极性或疏水性氨基酸,X6为疏水性氨基酸,Z1为极性或酸性氨基酸,Z2为极性或疏水性氨基酸,Z3为G、S或A,Z4为碱性氨基酸,Z5为疏水性或碱性氨基酸,Z6为G、S、D、Q或H,并且Z7为S或T。
[0022] 在另一个方面,本专利申请的特征在于减少受试者中的基于免疫复合物的免疫应答激活的方法,该方法包括将抗体施用于妊娠受试者,其中所述抗体包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:(1)包含CDR L1、CDR L2和CDR L3的轻链可变区,以及(2)包含CDR H1、CDR H2和CDR H3的重链可变区,其中所述CDR L1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列X1GTGSDVGSYNX2VS(SEQ ID NO:12),所述CDR L2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列GDX3X4RPS(SEQ ID NO:13),所述CDR L3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列X5SYX6GSGIYV(SEQ ID NO:
14),所述CDR H1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列Z1YAMG(SEQ ID NO:15),所述CDR H2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列
Z7IGZ2SGZ3QTZ4YADS(SEQ ID NO:16),并且所述CDR H3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列LAZ5Z6DSY(SEQ ID NO:17),其中X1为极性或疏水性氨基酸,X2为疏水性氨基酸,X3为极性氨基酸,X4为极性或酸性氨基酸,X5为极性或疏水性氨基酸,X6为疏水性氨基酸,Z1为极性或酸性氨基酸,Z2为极性或疏水性氨基酸,Z3为G、S或A,Z4为碱性氨基酸,Z5为疏水性或碱性氨基酸,Z6为G、S、D、Q或H,并且Z7为S或T。
[0023] 在一些实施例中,免疫应答是受试者中的急性或慢性免疫应答。
[0024] 在一些实施例中,急性免疫应答由选自以下的医学状况激活:寻常型天疱疮、狼疮性肾炎、重症肌无力、格-巴二氏综合征、抗体介导的排斥、灾难性抗磷脂抗体综合征、免疫复合物介导的血管炎、肾小球炎、离子通道病、视神经脊髓炎、自身免疫性听力丧失、特发性血小板减少性紫癜、自身免疫性溶血性贫血、免疫性嗜中性粒细胞减少症、扩张型心肌病和血清病。
[0025] 在一些实施例中,慢性免疫应答由选自以下的医学状况激活:慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病(CIDP)、系统性红斑狼疮、
反应性关节病、原发性胆汁性肝硬化、溃疡性结肠炎和抗嗜中性粒细胞
细胞质抗体相关性血管炎。在一些实施例中,慢性免疫应答由慢性炎
性脱髓鞘性多发性神经病激活。在一些实施例中,慢性免疫应答由慢性炎性脱髓鞘性多发
性神经病激活。
[0026] 在一些实施例中,受试者患有自身免疫疾病。在一些实施例中,自身免疫疾病选自以下:斑秃、强直性脊柱炎、抗磷脂综合征、艾迪生氏病、溶血性贫血、温热型自身免疫性溶血性贫血、抗因子抗体、肝素诱导的血小板减少症(致敏性移
植物、自身免疫性肝炎、肝炎、白塞氏病、大疱性类天疱疮、心肌病、口炎性腹泻-皮炎、慢性疲劳免疫功能障碍综合征、慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病、丘施综合征、瘢痕性类天疱疮、局限型硬皮病(CREST综合征)、冷凝集素病、克罗恩氏病、皮肌炎、盘状狼疮、特发性混合性冷球蛋白血症、纤维肌痛、纤维肌炎、格雷夫斯病、桥本氏甲状腺炎、甲状腺功能减退、炎性肠病、自身免疫性淋巴增生综合征、特发性肺纤维化、IgA肾病、胰岛素依赖性糖尿病、幼年型关节炎、扁平苔癣、狼疮、梅尼埃病、混合性结缔组织病、多发性硬化、恶性贫血、结节性多动脉炎、多软骨炎、多腺体综合征、风湿性多肌痛、多肌炎、原发性无丙种球蛋白血症、原发性胆汁性肝硬化、牛皮癣、雷诺现象、莱特尔综合征、风湿热、类风湿性关节炎、肉瘤样病、硬皮病、干燥综合征、僵人综合征、高安动脉炎、颞动脉炎、溃疡性结肠炎、葡萄膜炎、白癜风和韦格纳氏肉芽肿。
[0027] 在另一个方面,本专利申请的特征在于降低跨越妊娠受试者胎盘的抗体转运的方法,该方法包括将抗体施用于妊娠受试者,其中所述抗体包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:(1)包含CDR L1、CDR L2和CDR L3的轻链可变区,以及(2)包含CDR
H1、CDR H2和CDR H3的重链可变区,其中所述CDR L1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列X1GTGSDVGSYNX2VS(SEQ ID NO:12),所述CDR L2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列GDX3X4RPS(SEQ ID NO:13),所述CDR L3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列X5SYX6GSGIYV(SEQ ID NO:14),所述CDR H1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列Z1YAMG(SEQ ID NO:15),所述CDR H2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列Z7IGZ2SGZ3QTZ4YADS(SEQ ID NO:16),并且所述CDR H3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:
序列LAZ5Z6DSY(SEQ ID NO:17),其中X1为极性或疏水性氨基酸,X2为疏水性氨基酸,X3为极性氨基酸,X4为极性或酸性氨基酸,X5为极性或疏水性氨基酸,X6为疏水性氨基酸,Z1为极性或酸性氨基酸,Z2为极性或疏水性氨基酸,Z3为G、S或A,Z4为碱性氨基酸,Z5为疏水性或碱性氨基酸,Z6为G、S、D、Q或H,并且
[0028] Z7为S或T。
[0029] 在另一个方面,本专利申请的特征在于增加妊娠受试者中的抗体分解代谢的方法,该方法包括将抗体施用于妊娠受试者,其中所述抗体包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:(1)包含CDR L1、CDR L2和CDR L3的轻链可变区,以及(2)包含CDR
H1、CDR H2和CDR H3的重链可变区,其中所述CDR L1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列X1GTGSDVGSYNX2VS(SEQ ID NO:12),所述CDR L2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列GDX3X4RPS(SEQ ID NO:13),所述CDR L3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列X5SYX6GSGIYV(SEQ ID NO:14),所述CDR H1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列Z1YAMG(SEQ ID NO:15),所述CDR H2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列Z7IGZ2SGZ3QTZ4YADS(SEQ ID NO:16),并且所述CDR H3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:
序列LAZ5Z6DSY(SEQ ID NO:17),其中X1为极性或疏水性氨基酸,X2为疏水性氨基酸,X3为极性氨基酸,X4为极性或酸性氨基酸,X5为极性或疏水性氨基酸,X6为疏水性氨基酸,Z1为极性或酸性氨基酸,Z2为极性或疏水性氨基酸,Z3为G、S或A,Z4为碱性氨基酸,Z5为疏水性或碱性氨基酸,Z6为G、S、D、Q或H,并且Z7为S或T。
[0030] 在一些实施例中,抗体在妊娠受试者的胎儿中引起胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症。
[0031] 在一些实施例中,胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症选自胎儿和新生儿同种免疫性血小板减少症、胎儿和新生儿的溶血性疾病、同种免疫性全血小板减少症、先天性心脏传导阻滞、胎儿关节挛缩、新生儿重症肌无力、新生儿自身免疫性溶血性贫血、新生儿抗磷脂综合征、新生儿多肌炎、皮肌炎、新生儿狼疮、新生儿硬皮病、白塞氏病、新生儿格雷夫斯病、新生儿川崎病、新生儿自身免疫性甲状腺疾病和新生儿I型糖尿病。
[0032] 在一些实施例中,抗体是IgG抗体。
[0033] 在另一个方面,本专利申请的特征在于治疗胎儿或新生儿中的抗体介导的病毒性疾病增强的方法,该方法包括将抗体施用于妊娠受试者,其中所述抗体包括以下、包含以
下、由以下组成、或基本上由以下组成:(1)包含CDR L1、CDR L2和CDR L3的轻链可变区,以及(2)包含CDR H1、CDR H2和CDR H3的重链可变区,其中所述CDR L1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列X1GTGSDVGSYNX2VS(SEQ ID NO:12),所述CDR L2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列GDX3X4RPS(SEQ ID NO:13),所述CDR L3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列X5SYX6GSGIYV(SEQ ID NO:14),所述CDR H1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列Z1YAMG(SEQ ID NO:15),所述CDR H2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列Z7IGZ2SGZ3QTZ4YADS(SEQ ID NO:16),所述CDR H3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列LAZ5Z6DSY(SEQ ID NO:17),其中X1为极性或疏水性氨基酸,X2为疏水性氨基酸,X3为极性氨基酸,X4为极性或酸性氨基酸,X5为极性或疏水性氨基酸,X6为疏水性氨基酸,Z1为极性或酸性氨基酸,Z2为极性或疏水性氨基酸,Z3为G、S或A,Z4为碱性氨基酸,Z5为疏水性或碱性氨基酸,Z6为G、S、D、Q或H,并且Z7为S或T。
[0034] 在一些实施例中,病毒性疾病由选自以下的病毒引起:α
病毒感染、黄病毒感染、寨卡病毒感染、基孔肯雅病毒感染、罗斯河病毒感染、严重急性呼吸综合征冠状病毒感染、中东呼吸综合征、禽流感感染、流感病毒感染、人
呼吸道合胞病毒感染、埃博拉病毒感染、黄热病病毒感染、登革热病毒感染、人类免疫
缺陷病毒感染、呼吸道合胞病毒感染、汉坦病毒感染、盖塔病毒感染、辛德毕斯病毒感染、布尼亚病毒感染、西尼罗河病毒感染、日本脑炎病毒B型感染、兔痘病毒感染、乳酸脱氢酶升高病毒感染、呼肠孤病毒感染、狂犬病病毒感染、
口蹄疫病毒感染、猪繁殖与呼吸综合征病毒感染、猿猴出血烧病毒感染、
马传染性贫血病毒感染、山羊关节炎病毒感染、非洲
猪瘟病毒感染、慢病毒感染、BK乳多空病毒感染、墨累谷脑炎病毒感染、肠道病毒感染、巨细胞病毒感染、肺病毒感染、麻疹病毒属感染和麻疹病毒感染。
[0035] 在一些实施例中,妊娠受试者患有医学状况或处于患有医学状况的风险中,所述医学状况激活妊娠受试者中的免疫应答。
[0036] 在一些实施例中,医学状况是寻常型天疱疮、狼疮性肾炎、重症肌无力、格-巴二氏综合征、抗体介导的排斥、灾难性抗磷脂抗体综合征、免疫复合物介导的血管炎、肾小球炎、离子通道病、视神经脊髓炎、自身免疫性听力丧失、特发性血小板减少性紫癜、自身免疫性溶血性贫血、免疫性嗜中性粒细胞减少症、扩张型心肌病、血清病、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病、系统性红斑狼疮、反应性关节病、原发性胆汁性肝硬化、溃疡性结肠炎、抗嗜中性粒细胞细胞质抗体(ANCA)相关性血管炎、斑秃、强直性脊柱炎、抗磷脂综合征、艾迪生氏病、溶血性贫血、自身免疫性肝炎、肝炎、白塞氏病、大疱性类天疱疮、心肌病、口炎性腹泻-皮炎、慢性疲劳免疫功能障碍综合征、慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病、丘施综合征、瘢痕性类天疱疮、局限型硬皮病(CREST综合征)、冷凝集素病、克罗恩氏病、皮肌炎、盘状狼疮、特发性混合性冷球蛋白血症、纤维肌痛、纤维肌炎、格雷夫斯病、桥本氏甲状腺炎、甲状腺功能减退、炎性肠病、自身免疫性淋巴增生综合征、特发性肺纤维化、IgA肾病、胰岛素依赖性糖尿病、幼年型关节炎、扁平苔癣、狼疮、梅尼埃病、混合性结缔组织病、多发性硬化、恶性贫血、结节性多动脉炎、多软骨炎、多腺体综合征、风湿性多肌痛、多肌炎、原发性无丙种球蛋白血症、原发性胆汁性肝硬化、牛皮癣、雷诺现象、莱特尔综合征、风湿热、类风湿性关节炎、肉瘤样病、硬皮病、干燥综合征、僵人综合征、高安动脉炎、颞动脉炎、溃疡性结肠炎、葡萄膜炎、白癜风和韦格纳氏肉芽肿。
[0037] 在一些实施例中,妊娠受试者具有患有胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症的先前胎儿或新生儿的病史。
[0038] 在一些实施例中,在从妊娠受试者获得的
生物样品中检测与免疫疾病相关的抗体。
[0039] 在一些实施例中,生物样品是血样或尿样。
[0040] 在一些实施例中,分离的抗体包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:(1)包含CDR L1、CDR L2和CDR L3的轻链可变区,以及(2)包含CDR H1、CDR H2和CDR H3的重链可变区,其中所述CDR L1具有相对于TGTGSDVGSYNLVS(SEQ ID NO:1)的序列,含有不超过两个氨基酸取代的序列,所述CDR L2具有相对于GDSERPS(SEQ ID NO:2)的序列,含有不超过一个氨基酸取代的序列,所述CDR L3具有相对于SSYAGSGIYV(SEQ ID NO:3),含有不超过一个氨基酸取代的序列,所述CDR H1具有相对于TYAMG(SEQ ID NO:4)、DYAMG(SEQ
ID NO:5)或NYAMG(SEQ ID NO:6)的序列,含有不超过一个氨基酸取代的序列,所述CDR H2
具有相对于SIGASGSQTRYADS(SEQ ID NO:8)、SIGSSGAQTRYADS(SEQ ID NO:7)、
SIGASGAQTRYADS(SEQ ID NO:9)、SIGASGGQTRYADS(SEQ ID NO:10)、TIGSSGAQTRYADS(SEQ
ID NO:41)、SIGASGSQTRYADS(SEQ ID NO:42)、TIGASGAQTRYADS(SEQ ID NO:43)、或
TIGASGGQTRYADS(SEQ ID NO:32)的序列,含有不超过两个氨基酸取代的序列,并且所述CDR H3具有相对于LAIGDSY(SEQ ID NO:11)的序列,含有不超过一个氨基酸取代的序列。
[0041] 在一些实施例中,分离的抗体包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:(1)包含CDR L1、CDR L2和CDR L3的轻链可变区,以及(2)包含CDR H1、CDR H2和CDR H3的重链可变区,其中所述CDR L1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列X1GTGSDVGSYNLVS或TGTGSDVGSYNX2VS,所述CDR L2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列GDX3ERPS或GDSX4RPS,所述CDR L3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列X5SYAGSGIYV或SSYX6GSGIYV,所述CDR H1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:TYAMG(SEQ ID NO:4)、DYAMG(SEQ ID NO:5)或NYAMG(SEQ ID NO:6),所述CDR H2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:
SIGASGSQTRYADS(SEQ ID NO:8)、SIGSSGAQTRYADS(SEQ ID NO:7)、SIGASGAQTRYADS(SEQ ID NO:9)、SIGASGGQTRYADS(SEQ ID NO:10)、TIGSSGAQTRYADS(SEQ ID NO:41)、
SIGASGSQTRYADS(SEQ ID NO:42)、TIGASGAQTRYADS(SEQ ID NO:43)或TIGASGGQTRYADS(SEQ ID NO:32),并且所述CDR H3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列LAZ5GDSY或LAIZ6DSY。
[0042] 在一些实施例中,抗体包括下述六个CDR、包含下述六个CDR、由下述六个CDR组成、或基本上由下述六个CDR组成:序列TGTGSDVGSYNLVS(SEQ ID NO:1)的CDR L1,序列GDSERPS(SEQ ID NO:2)的CDRL2,序列SSYAGSGIYV(SEQ ID NO:3)的CDRL3,
[0043] 序列TYAMG(SEQ ID NO:4)的CDR H1,序列SIGSSGAQTRYADS(SEQ ID NO:7)的CDR H2,或TIGSSGAQTRYADS(SEQ ID NO:41),以及序列LAIGDSY(SEQ ID NO:11)的CDRH3。
[0044] 在一些实施例中,分离的抗体的CDR L1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列TGTGSDVGSYNLVS(SEQ ID NO:1),分离的抗体的CDR L2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列GDSERPS(SEQ ID NO:2),分离的抗体的CDR L3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列SSYAGSGIYV(SEQ ID NO:3),分离的抗体的CDR H1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列
DYAMG(SEQ ID NO:5),分离的抗体的CDR H2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列SIGASGSQTRYADS(SEQ ID NO:8),并且分离的抗体的CDRH3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列LAIGDSY(SEQ ID NO:11)。
[0045] 在一些实施例中,分离的抗体的CDR L1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列TGTGSDVGSYNLVS(SEQ ID NO:1),分离的抗体的CDR L2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列GDSERPS(SEQ ID NO:2),分离的抗体的CDR L3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列SSYAGSGIYV(SEQ ID NO:3),分离的抗体的CDR H1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列
NYAMG(SEQ ID NO:6),分离的抗体的CDR H2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列SIGASGAQTRYADS(SEQ ID NO:9)或TIGASGAQTRYADS(SEQ ID NO:43),并且分离的抗体的CDR H3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列LAIGDSY(SEQ ID NO:11)。
[0046] 在一些实施例中,分离的抗体的CDR L1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列TGTGSDVGSYNLVS(SEQ ID NO:1),分离的抗体的CDR L2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列GDSERPS(SEQ ID NO:2),分离的抗体的CDR L3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列SSYAGSGIYV(SEQ ID NO:3),分离的抗体的CDR H1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列
TYAMG(SEQ ID NO:4),分离的抗体的CDR H2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列SIGASGGQTRYADS(SEQ ID NO:10)或TIGASGGQTRYADS(SEQ ID NO:32),并且
分离的抗体的CDR H3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列LAIGDSY(SEQ ID NO:11)。
[0047] 在一些实施例中,分离的抗体的CDR L1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列TGTGSDVGSYNLVS(SEQ ID NO:1),分离的抗体的CDR L2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列GDSERPS(SEQ ID NO:2),分离的抗体的CDR L3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列SSYAGSGIYV(SEQ ID NO:3),分离的抗体的CDR H1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列
TYAMG(SEQ ID NO:4),分离的抗体的CDR H2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列SIGASGSQTRYADS(SEQ ID NO:8),并且分离的抗体的CDRH3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列LAIGDSY(SEQ ID NO:11)。
[0048] 在一些实施例,分离的抗体的CDR L1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列X1GTGSDVGSYNX2VS(SEQ ID NO:12),分离的抗体的CDR L2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列GDX3X4RPS(SEQ ID NO:13),分离的抗体的CDRL3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列X5SYX6GSGIYV(SEQ ID NO:14),分离的抗体的CDR H1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列Z1YAMG(SEQ ID NO:15),分离的抗体的CDR H2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列Z7IGZ2SGZ3QTZ4YADS(SEQ ID NO:16),并且分离的抗体的CDR H3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列LAZ5Z6DSY(SEQ ID NO:17),其中X1为T、A、S或I,X2为L或I,X3为S、N或T,X4为Q、E或N,X5为C、S、I或Y,X6为A或V,Z1为E、T、D或N,Z2为S或A,Z3为G、S或A,Z4为K或R,Z5为I、L或H,Z6为G、S、D、Q或H,并且Z7为S或T。
[0049] 在一些实施例,分离的抗体的CDR L1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列TGTGSDVGSYNLVS(SEQ ID NO:1),分离的抗体的CDR L2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列GDSERPS(SEQ ID NO:2),分离的抗体的CDR L3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列SSYAGSGIYV(SEQ ID NO:3),分离的抗体的CDR H1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列Z1YAMG(SEQ ID NO:15),分离的抗体的CDR H2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列Z7IGZ2SGZ3QTRYADS(SEQ ID NO:18),并且分离的抗体的CDR H3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列LAIGDSY(SEQ ID NO:11),并且其中Z1为T、D或N,Z2为S或A,Z3为G、S或A,并且Z7为S或T。
[0050] 在一些实施例,分离的抗体的轻链可变区包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:与以下序列具有至少90%同一性的序列
[0051] QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTGSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKLMIYGDSERPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYAGSGIYVFGTGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFY
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ID NO:19)。
[0052] 在一些实施例,分离的抗体的重链可变区包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:与以下序列具有至少90%同一性的序列
[0053] EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGSSGAQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCL
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ID NO:20)。
[0054] 在一些实施例,分离的抗体的重链可变区包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:与以下序列具有至少90%同一性的序列
[0055] EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGASGSQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCL
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ID NO:21)。
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ID NO:22)。
[0058] 在一些实施例,分离的抗体的重链可变区包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:与以下序列具有至少90%同一性的序列
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ID NO:23)。
[0060] 在一些实施例,分离的抗体的重链可变区包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:与以下序列具有至少90%同一性的序列
[0061] EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGASGSQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCL
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ID NO:24)。
[0062] 在一些实施例,分离的抗体的轻链可变区包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:与以下序列具有至少90%同一性的序列
[0063] QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTGSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKLMIYGDSERPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYAGSGIYVFGTGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFY
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ID NO:19);并且分离的抗体的重链可变区具有与以下序列具有至少90%同一性的序列
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ID NO:20)。
[0065] 在一些实施例,分离的抗体的轻链可变区包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:与以下序列具有至少90%同一性的序列
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[0068] 在一些实施例,分离的抗体的轻链可变区包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:与以下序列具有至少90%同一性的序列
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ID NO:24)。
[0077] 在一些实施例,分离的抗体的重链可变区包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:与SEQ ID NO:20-24中任何一个的序列具有至少95%、97%、99%或100%同一性的序列。
[0078] 在一些实施例,分离的抗体的轻链可变区包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:与SEQ ID NO:19的序列具有至少95%、97%、99%或100%同一性的序列。
[0079] 在一些实施例,分离的抗体的轻链可变区包括以下序列、包含以下序列、由以下序列组成、或基本上由以下序列组成:
[0080] QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTGSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKLMIYGDSERPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYAGSGIYVFGTGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFY
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ID NO:19);并且分离的抗体的重链可变区包括以下序列、包含以下序列、由以下序列组成、或基本上由以下序列组成:
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PGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHKSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS(SEQ
ID NO:19);并且分离的抗体的重链可变区包括以下序列、包含以下序列、由以下序列组成、或基本上由以下序列组成:
[0084] EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGASGSQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCL
VKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCD
KTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYA
STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFY
PSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ
ID NO:21)。
[0085] 在一些实施例,分离的抗体的轻链可变区包括以下序列、包含以下序列、由以下序列组成、或基本上由以下序列组成:
[0086] QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTGSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKLMIYGDSERPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYAGSGIYVFGTGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFY
PGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHKSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS(SEQ
ID NO:19);并且分离的抗体的重链可变区包括以下序列、包含以下序列、由以下序列组成、或基本上由以下序列组成:
[0087] EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGASGAQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCL
VKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCD
KTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYA
STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFY
PSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ
ID NO:22)。
[0088] 在一些实施例,分离的抗体的轻链可变区包括以下序列、包含以下序列、由以下序列组成、或基本上由以下序列组成:
[0089] QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTGSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKLMIYGDSERPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYAGSGIYVFGTGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFY
PGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHKSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS(SEQ
ID NO:19);并且分离的抗体的重链可变区具有以下序列:
[0090] EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGASGGQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCL
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KTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYA
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PSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ
ID NO:23)。
[0091] 在一些实施例,分离的抗体的轻链可变区包括以下序列、包含以下序列、由以下序列组成、或基本上由以下序列组成:
[0092] QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTGSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKLMIYGDSERPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYAGSGIYVFGTGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFY
PGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHKSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS(SEQ
ID NO:19);并且分离的抗体的重链可变区包括以下序列、包含以下序列、由以下序列组成、或基本上由以下序列组成:
[0093] EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGASGSQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCL
VKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCD
KTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYA
STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFY
PSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ
ID NO:24)。
[0094] 在一些实施例中,抗体以1pM至100nM的KD结合人FcRn。
[0095] 在一些实施例中,分离的抗体以小于或等于抗体N026那种的KD结合人FcRn。
[0096] 在一些实施例中,分离的抗体是单克隆抗体。
[0097] 在一些实施例中,分离的抗体是IgG1或其变体。
[0098] 在一些实施例中,分离的抗体包括λ轻链、包含λ轻链、由λ轻链组成或由基本上由λ轻链组成。
[0099] 在一些实施例中,分离的抗体是唾液
酸化的抗体。
[0100] 在另一个方面,本专利申请的特征在于与人FcRn结合的分离的抗体,该分离的抗体包括:(1)包含CDR L1、CDR L2和CDR L3的轻链可变区,以及(2)包含CDR H1、CDR H2和CDR H3的重链可变区,其中(a)CDR L1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:
序列SDVGSYNL(SEQ ID NO:33)或VG_YNL(SEQ ID NO:34),其中“_”可以为任何氨基酸,(b)CDR L2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列GDSE(SEQ ID NO:35),(c)CDR L3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列YAGSGIY(SEQ ID NO:36),(d)CDR H1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列TYA(SEQ ID NO:37),(e)CDR H2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列
SIGASGSQTR(SEQ ID NO:38)或SI_AS_SQ_R(SEQ ID NO:39),其中“_”可以是任何氨基酸,并且(f)CDR H3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列LAI(SEQ ID NO:
40)。
[0101] 在一些实施例中,抗体识别人FcRn中的氨基酸序列a)SEQ ID NO:25_和b)SEQ ID NO:26。
[0102] 在一些实施例中,抗体结合FcRn上的表位,其包含选自SEQ ID NO:30的K80、A81、L82、G83、G84、K85、G86、P87、Y88、L112、N113、E115、G129、D130、W131、P132、E133、L135、A136和Q139中的至少一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个、十八个、十九个或二十个氨基酸。
[0103] 在一些实施例中,抗体结合FcRn上的表位,其包含选自SEQ ID NO:30的K80、A81、L82、G83、G84、K85、G86、P87、Y88、L112、N113、G129、D130、W131、P132、E133、L135、A136和Q139中的至少一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个、十八个、十九个或二十个氨基酸。
[0104] 在一些实施例中,FcRn上的表位包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:SEQ ID NO:30的W131和/或Y88。
[0105] 在一些实施例中,FcRn上的表位包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:SEQ ID NO:30的D130W131、W131P132、P87Y88和/或Y88T89。
[0106] 在一些实施例中,FcRn上的表位包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:SEQ ID NO:30的G129D130W131、W131P132E133、D130W131P132、P87Y88T89、G86P87Y88和/或Y88T89L90。
[0107] 在一些实施例中,FcRn上的表位包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:SEQ ID NO:30的G129D130W131P132、D130W131P132E133、W131P132E133A134、G128G129D130W131、K85G86P87Y88、G86P87Y88T89、P87Y88T89L90和/或Y88T89L90Q91。
[0108] 在一些实施例中,FcRn上的表位包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:SEQ ID NO:30的G129D130W131P132E133、D130W131P132E133A134、W131P132E133A134L315、G128G129D130W131P132、W127G128G129D130W131、
G84K85G86P87Y88、K85G86P87Y88T89、G86P87Y88T89L90、P87Y88T89L90Q91和/或
Y88T89L90T91Q92。
[0109] 在一些实施例中,FcRn上的表位包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:SEQ ID NO:30的T126W127G128G129D130W131、W127G128G129D130W131P132、G128G129D130W131P132E133、G129D130W131P132E133A134、D130W131P132E133A134L135、
W131P132E133A134L135A136、G83G84K85G86P87Y88、G84K85G86P87Y88T89、
K85G86P87Y88T89L90、G86P87Y88T89L90Q91、P87Y88T89L90T91Q92和/或
Y88T89L90Q91G92L93。
[0110] 在一些实施例中,FcRn上的表位包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:在W131的约3个氨基酸或10埃内的一个或多个氨基酸、在Y88的约5个氨基酸或8埃内的一个或多个氨基酸、或任何两组氨基酸,其中第一组是或包括SEQ ID NO:30中的W131,并且第二组是或包括SEQ ID NO:30中的Y88。
[0111] 在一些实施例中,FcRn上的表位包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:K80、A81、L82、G83、G84、K85、G86、P87、Y88、L112、N113、E115、G129、D130、W131、P132、E133、L135、A136和Q139。
[0112] 在一些实施例中,分离的抗体结合β2-微球蛋白上的表位,所述表位包含选自SEQ ID NO:31的I1、Q2、P32和V85的至少一个氨基酸。
[0113] 在一些实施例中,分离的抗体包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:在
位置66-68Kabat处的氨基酸序列KSG。
[0114] 在另一个方面,本专利申请的特征在于分离的抗体,其包括:(1)包含CDR L1、CDR L2和CDR L3的轻链可变区,以及(2)包含CDR H1、CDR H2和CDR H3的重链可变区,其中(a)CDR L1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:SDVGSYNL,条件是它不包含TGTGSDVGSYNLVS(SEQ ID NO:1),(b)CDR L2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:GDSE,条件是它不包含GDSERPS(SEQ ID NO:2),(c)CDR L3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:YAGSGIY,条件是它不包含SSYAGSGIYV(SEQ ID NO:3),(d)CDR H1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:TYA,条件是它不包含TYAMG(SEQ ID NO:4),(e)CDR H2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:
SIGASGSQTR,条件是它不包含SIGASGSQTRYADS(SEQ ID NO:8),或(f)CDR H3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:LAI,条件是它不包含LAIGDSY(SEQ ID NO:11)。
[0115] 在另一个方面,本专利申请的特征在于分离的抗体,其包括:(1)包含CDR L1、CDR L2和CDR L3的轻链可变区,以及(2)包含CDR H1、CDR H2和CDR H3的重链可变区,其中(a)CDR L1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:TGTGSDVGSYNLVS(SEQ ID NO:1),其中不超过六个单个氨基酸被缺失或取代,条件是子序列SDVGSYNL内的氨基酸未被缺失或取代,(b)CDR L2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:GDSERPS(SEQ ID NO:2),其中不超过三个单个氨基酸被缺失或取代,条件是子序列GDSE内的氨基酸未被缺失或取代,(c)CDR L3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:
SSYAGSGIYV(SEQ ID NO:3),其中不超过三个单个氨基酸被缺失或取代,条件是子序列
YAGSGIY内的氨基酸未被缺失或取代,(d)CDR H1包括选自以下的序列、包含选自以下的序
列、由选自以下的序列组成、或基本上由选自以下的序列组成:TYAMG(SEQ ID NO:4)、DYAMG(SEQ ID NO:5)和NYAMG(SEQ ID NO:6),其中不超过三个单个氨基酸被缺失或取代,条件是子序列YA内的氨基酸未被取代,(e)CDR H2包括选自以下的序列、包含选自以下的序列、由选自以下的序列组成、或基本上由选自以下的序列组成:SIGASGSQTRYADS(SEQ ID NO:8)、SIGSSGAQTRYADS(SEQ ID NO:7)、SIGASGAQTRYADS(SEQ ID NO:9)、SIGASGGQTRYADS(SEQ ID NO:10)、TIGSSGAQTRYADS(SEQ ID NO:41)、SIGASGSQTRYADS(SEQ ID NO:42)、
TIGASGAQTRYADS(SEQ ID NO:43)和TIGASGGQTRYADS(SEQ ID NO:32),其中不超过三个单个
氨基酸被缺失或取代,并且(f)CDR H3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:LAIGDSY(SEQ ID NO:11),其中不超过四个单个氨基酸被缺失或取代,条件是子序列LAI内的氨基酸未被缺失或取代。
[0116] 在一些实施例中,CDR L1包括不超过五个(例如,4、3、2或1个)单个氨基酸取代或缺失。在一些实施例中,CDR L2包括不超过两个(例如,1个)单个氨基酸取代或缺失。在一些实施例中,CDR L3包括不超过两个(例如,1个)单个氨基酸取代或缺失。在一些实施例中,CDR H1包括不超过两个(例如,1个)单个氨基酸取代或缺失。在一些实施例中,CDR H2包括不超过两个(例如,1个)单个氨基酸取代或缺失。在一些实施例中,CDRH3包括不超过三个(例如,2或1个)单个氨基酸取代或缺失。
[0117] 在另一个方面,本专利申请的特征在于分离的抗体,其包括:(1)包含CDR L1、CDR L2和CDR L3的轻链可变区,以及(2)包含CDR H1、CDR H2和CDR H3的重链可变区,其中(a)CDR L1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:TGTGSDVGSYNLVS(SEQ ID NO:1),其中不超过九个单个氨基酸在SEQ ID NO:1中被缺失或取代,条件是SEQ ID NO:1的VG和YNL的子序列内的氨基酸未被缺失或取代,(b)CDR L2包括以下、包含以下、由以下组
成、或基本上由以下组成:GDSERPS(SEQ ID NO:2),其中不超过三个单个氨基酸被缺失或取代,条件是子序列GDSE内的氨基酸未被缺失或取代,(c)CDRL3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:SSYAGSGIYV(SEQ ID NO:3),其中不超过三个单个氨基酸被缺失或取代,条件是子序列YAGSGIY内的氨基酸未被缺失或取代,(d)CDR H1包括选自以下的
序列、包含选自以下的序列、由选自以下的序列组成、或基本上由选自以下的序列组成:
TYAMG(SEQ ID NO:4)、DYAMG(SEQ ID NO:5)和NYAMG(SEQ ID NO:6),其中不超过三个单个
氨基酸被缺失或取代,条件是子序列YA内的氨基酸未被取代,(e)CDR H2包括选自以下的序列、包含选自以下的序列、由选自以下的序列组成、或基本上由选自以下的序列组成:
SIGASGSQTRYADS(SEQ ID NO:8)、SIGSSGAQTRYADS(SEQ ID NO:7)、SIGASGAQTRYADS(SEQ ID NO:9)、SIGASGGQTRYADS(SEQ ID NO:10)、TIGSSGAQTRYADS(SEQ ID NO:41)、
SIGASGSQTRYADS(SEQ ID NO:42)、TIGASGAQTRYADS(SEQ ID NO:43)和TIGASGGQTRYADS(SEQ ID NO:32),其中不超过七个单个氨基酸被缺失或取代,条件是子序列SI、AS、SQ或R内的氨基酸未被缺失或取代,或(f)CDR H3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:LAIGDSY(SEQ ID NO:11),其中不超过四个单个氨基酸被缺失或取代,条件是子序列LAI内的氨基酸未被缺失或取代。
[0118] 在一些实施例中,CDR L1包括不超过八个(例如,7、6、5、4、3、2或1个)单个氨基酸取代或缺失。在一些实施例中,CDR L2包括不超过两个(例如,1个)单个氨基酸取代或缺失。在一些实施例中,CDR L3包括不超过两个(例如,1个)单个氨基酸取代或缺失。在一些实施例中,CDR H1包括不超过两个(例如,1个)单个氨基酸取代或缺失。在一些实施例中,CDR H2包括不超过六个(例如,5、4、3、2或1个)单个氨基酸取代或缺失在一些实施例中,CDR H3包括不超过三个(例如,2或1个)单个氨基酸取代或缺失。
[0119] 在一些实施例中,抗体识别人FcRn中的氨基酸序列a)SEQ ID NO:25和b)SEQ ID NO:26。
[0120] 在一些实施例中,抗体识别FcRn上包含SEQ ID NO:30中的W131和/或Y88的氨基酸序列。在一些实施例中,抗体识别FcRn上包含SEQ ID NO:30中的DW、WP、PY和/或YT的氨基酸序列。在一些实施例中,抗体识别FcRn上包含SEQ ID NO:30中的GDW、WPE、DWP、PYT、GPY和/或YTL的氨基酸序列。在一些实施例中,抗体识别FcRn上包含SEQ ID NO:30中的GDWP、DWPE、WPEA、GGDW、KGPY、GPYT、PYTL和/或YTLQ的氨基酸序列。在一些实施例中,抗体识别FcRn上包含SEQ ID NO:30中的GDWPE、DWPEA、WPEAL、GGDWP、WGGDW、GKGPY、KGPYT、GPYTL、PYTLQ和/或YTLTQ的氨基酸序列。在一些实施例中,抗体识别FcRn上包含SEQ ID NO:30中的TWGGDW、
WGGDWP、GGDWPE、GDWPEA、DWPEAL、WPEALA、GGKGPY、GKGPYT、KGPYTL、GPYTLQ、PYTLTQ和/或YTLQGL的氨基酸序列。在一些实施例中,抗体识别FcRn上包含在W131的约3个氨基酸或10埃内的一个或多个氨基酸、在Y88的约5个氨基酸或8埃内的一个或多个氨基酸、或任何两组氨基酸的氨基酸序列,其中第一组是或包括SEQ ID NO:30中的W131,并且第二组是或包括SEQ ID NO:30中的Y88(例如,Y88和Y88周围的氨基酸)。
[0121] 在另一个方面,本专利申请的特征在于与人FcRn结合的分离的抗体,其中所述抗体结合包括以下的表位:(a)包含KQGTWGGDWPEAL(SEQ ID NO:25)的序列的至少一个氨基酸
的第一氨基酸序列;(b)包含FKALGGKGPYTL(SEQ ID NO:26)的序列的至少一个氨基酸的第
二氨基酸序列,其中所述抗体抑制IgG与人FcRn的结合。
[0122] 在另一个方面,本专利申请的特征在于与人FcRn结合的分离的抗体,其中所述抗体结合包含KQGTWGGDWPEAL(SEQ ID NO:25)的序列中的至少一个氨基酸的表位,其中所述
抗体结合SEQ ID NO:25的氨基酸残基9、12或13中的至少一个,并且其中所述抗体抑制IgG
与人FcRn的结合。
[0123] 在另一个方面,本专利申请的特征在于与人FcRn结合的分离的抗体,其中所述抗体结合FcRn中包含KQGTWGGDWPEAL(SEQ ID NO:25)的序列中的至少一个氨基酸的表位,其
中所述抗体不结合由序列GEEFMNFDLKQGT(SEQ ID NO:27)或EEFMNFDL(SEQ ID NO:28)的序
列组成的肽,并且其中所述抗体抑制IgG与人FcRn的结合。
[0124] 在一些实施例中,表位包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:FcRn中WGGDWPEAL(SEQ ID NO:29)的序列中的至少一个氨基酸。
[0125] 在一些实施例中,表位包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:FcRn中SEQ ID NO:25的至少氨基酸残基9。在一些实施例中,表位包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:FcRn中SEQ ID NO:25的至少氨基酸残基12。在一些实施例
中,表位包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:FcRn中SEQ ID NO:25的至少氨基酸残基13。在一些实施例中,表位包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:FcRn中FKALGGKGPYTL(SEQ ID NO:26)的序列的至少一个氨基酸。在一些实施例中,表位包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:FcRn中FKALGGKGPYTL(SEQ ID NO:26)的序列的至少两个氨基酸。
[0126] 在一些实施例中,抗体结合FcRn中包含FKALGGKGPYTL(SEQ ID NO:26)的序列的至少一个氨基酸的表位,并且其中所述抗体抑制IgG与人FcRn的结合。在一些实施例中,表位包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:FcRn中FKALGGKGPYTL(SEQ ID NO:
26)的序列的至少两个氨基酸。
[0127] 在一些实施例中,表位还包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:FcRn中KQGTWGGDWPEAL(SEQ ID NO:25)的序列的至少一个氨基酸。
[0128] 在一些实施例中,抗体结合FcRn中KQGTWGGDWPEAL(SEQ ID NO:25)的序列的至少两个氨基酸。
[0129] 在一些实施例中,抗体结合FcRn中SEQ ID NO:25的氨基酸残基9、12或13中的至少一个。
[0130] 在一些实施例中,抗体结合FcRn中SEQ ID NO:25的至少氨基酸残基9。在一些实施例中,抗体结合FcRn中SEQ ID NO:25的至少氨基酸残基12。在一些实施例中,抗体结合FcRn中SEQ ID NO:25的至少氨基酸残基13。
[0131] 在一些实施例中,抗体以1pM至100nM的KD结合人FcRn。
[0132] 在一些实施例中,抗体以不超过抗体N026那种的KD结合人FcRn。
[0133] 在一些实施例中,抗体是单克隆抗体。
[0134] 在一些实施例中,抗体是IgG1。
[0135] 在一些实施例中,抗体包括λ轻链、包含λ轻链、由λ轻链组成或由基本上由λ轻链组成。
[0136] 在一些实施例中,抗体是唾液酸化的抗体。
[0137] 在一些实施例中,抗体用于治疗胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症。
[0138] 在一些实施例中,抗体用于降低发展胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症的风险。
[0139] 在一些实施例中,抗体用于降低发展自身免疫病症或同种免疫病症的风险。
[0140] 在一些实施例中,抗体用于治疗胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症。
[0141] 在另一个方面,本专利申请的特征在于编码上述方面中任一的分离的抗体的核酸分子。在另一个方面,本专利申请的特征在于包含核酸分子的载体。宿主细胞可以表达分离的抗体,其中所述宿主细胞包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:核酸分子或载体,其中所述核酸分子或载体在宿主细胞中表达。宿主细胞可以是中国仓鼠卵巢
(CHO)细胞。
[0142] 在另一个方面,本专利申请的特征在于药物组合物,其包含上述方面中任一的分离的抗体和一种或多种药学可接受的载体或赋形剂。抗体可以以
治疗有效量配制。
[0143] 在另一个方面,本专利申请的特征在于制备上述方面中任一的分离的抗体的方法,该方法包括:
[0144] a)提供包含根据
权利要求178所述的核酸分子或根据权利要求179所述的载体的宿主细胞,和
[0145] b)在允许抗体形成的条件下,在所述宿主细胞中表达核酸分子或载体。
[0146] 在一些实施例中,该方法还可以包括回收浓度为约1-100、1-50、1-25、2-50、5-50或2-20mg/ml的抗体的步骤。
[0147] 在一些实施例中,宿主细胞是CHO细胞。
[0148] 在另一个方面,本专利申请的特征在于治疗胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症的方法,其包括将抗体施用于妊娠受试者,其中所述抗体是上述方面中任一的
抗体。
[0149] 在一些实施例中,受试者具有先前的胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症的病史。
[0150] 在一些实施例中,受试者处于患有胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症的风险中。
[0151] 在一些实施例中,胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症选自胎儿和新生儿同种免疫性血小板减少症、胎儿和新生儿的溶血性疾病、同种免疫性全血小板减少症、先天性心脏传导阻滞、胎儿关节挛缩、新生儿重症肌无力、新生儿自身免疫性溶血性贫血、新生儿抗磷脂综合征、新生儿多肌炎、皮肌炎、新生儿狼疮、新生儿硬皮病、白塞氏病、新生儿格雷夫斯病、新生儿川崎病、新生儿自身免疫性甲状腺疾病和新生儿I型糖尿病。
[0152] 在一些实施例中,治疗降低了流产的风险。
[0153] 在另一个方面,本专利申请的特征在于治疗与胎儿和新生儿的溶血性疾病相关的胎儿贫血的方法,其包括将上述方面中任一的抗体施用于妊娠受试者。
[0154] 在一些实施例中,该方法治疗妊娠受试者、妊娠受试者的胎儿和/或其组合。
[0155] 在另一个方面,本专利申请的特征在于治疗自身免疫病症的方法,其包括将上述方面中任一的抗体施用于妊娠受试者。
[0156] 在一些实施例中,自身免疫病症选自以下:斑秃、强直性脊柱炎、抗磷脂综合征、艾迪生氏病、溶血性贫血、自身免疫性肝炎、肝炎、白塞氏病、大疱性类天疱疮、心肌病、口炎性腹泻-皮炎、慢性疲劳免疫功能障碍综合征、慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病、丘施综合征、瘢痕性类天疱疮、局限型硬皮病(CREST综合征)、冷凝集素病、克罗恩氏病、皮肌炎、盘状狼疮、特发性混合性冷球蛋白血症、纤维肌痛、纤维肌炎、格雷夫斯病、桥本氏甲状腺炎、甲状腺功能减退、炎性肠病、自身免疫性淋巴增生综合征、特发性肺纤维化、IgA肾病、胰岛素依赖性糖尿病、幼年型关节炎、扁平苔癣、狼疮、梅尼埃病、混合性结缔组织病、多发性硬化、恶性贫血、结节性多动脉炎、多软骨炎、多腺体综合征、风湿性多肌痛、多肌炎、原发性无丙种球蛋白血症、原发性胆汁性肝硬化、牛皮癣、雷诺现象、莱特尔综合征、风湿热、类风湿性关节炎、肉瘤样病、硬皮病、干燥综合征、僵人综合征、高安动脉炎、颞动脉炎、溃疡性结肠炎、葡萄膜炎、白癜风或韦格纳氏肉芽肿。
[0157] 在一些实施例中,该治疗降低了流产/失去胎儿的风险。
[0158] 在另一个方面,本专利申请的特征在于降低自身免疫病症或同种免疫病症的风险,或者降低发展自身免疫病症或同种免疫病症的风险的方法,其包括将上述方面中任一
的抗体施用于妊娠受试者。
[0159] 在一些实施例中,自身免疫病症选自以下:斑秃、强直性脊柱炎、抗磷脂综合征、艾迪生氏病、溶血性贫血、自身免疫性肝炎、肝炎、白塞氏病、大疱性类天疱疮、心肌病、口炎性腹泻-皮炎、慢性疲劳免疫功能障碍综合征、慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病、丘施综合征、瘢痕性类天疱疮、局限型硬皮病(CREST综合征)、冷凝集素病、克罗恩氏病、皮肌炎、盘状狼疮、特发性混合性冷球蛋白血症、纤维肌痛、纤维肌炎、格雷夫斯病、桥本氏甲状腺炎、甲状腺功能减退、炎性肠病、自身免疫性淋巴增生综合征、特发性肺纤维化、IgA肾病、胰岛素依赖性糖尿病、幼年型关节炎、扁平苔癣、狼疮、梅尼埃病、混合性结缔组织病、多发性硬化、恶性贫血、结节性多动脉炎、多软骨炎、多腺体综合征、风湿性多肌痛、多肌炎、原发性无丙种球蛋白血症、原发性胆汁性肝硬化、牛皮癣、雷诺现象、莱特尔综合征、风湿热、类风湿性关节炎、肉瘤样病、硬皮病、干燥综合征、僵人综合征、高安动脉炎、颞动脉炎、溃疡性结肠炎、葡萄膜炎、白癜风或韦格纳氏肉芽肿。
[0160] 在一些实施例中,该治疗降低了流产/失去胎儿的风险。
[0161] 在另一个方面,本专利申请的特征在于增加受试者中的抗体分解代谢的方法,该方法包括向受试者施用上述方面中任一的分离的抗体或药物组合物。
[0162] 在一些实施例中,增加的抗体分解代谢包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:增加的致病性抗体分解代谢。
[0163] 在一些实施例中,致病性抗体对母亲、胎儿或母亲和胎儿两者均为致病性的。
[0164] 在一些实施例中,抗体是IgG抗体。
[0165] 在另一个方面,本专利申请的特征在于减少受试者中的自身抗体的方法,该方法包括向受试者施用上述方面中任一的分离的抗体或药物组合物。
[0166] 在另一个方面,本专利申请的特征在于减少受试者中的基于免疫复合物的免疫应答激活的方法,该方法包括向受试者施用上述方面中任一的分离的抗体或药物组合物。
[0167] 在一些实施例中,免疫应答是受试者中的急性或慢性免疫应答。
[0168] 在一些实施例中,急性免疫应答由选自以下的医学状况激活:寻常型天疱疮、狼疮性肾炎、重症肌无力、格-巴二氏综合征、抗体介导的排斥、灾难性抗磷脂抗体综合征、免疫复合物介导的血管炎、肾小球炎、离子通道病、视神经脊髓炎、自身免疫性听力丧失、特发性血小板减少性紫癜、自身免疫性溶血性贫血、免疫性嗜中性粒细胞减少症、扩张型心肌病和血清病。
[0169] 在一些实施例中,胎儿和新生儿自身免疫和/或自身免疫病症是胎儿和新生儿的溶血性疾病。
[0170] 在一些实施例中,胎儿和新生儿自身免疫和/或自身免疫病症是胎儿和新生儿同种免疫性血小板减少症。
[0171] 在一些实施例中,胎儿和新生儿自身免疫和/或自身免疫病症是先天性心脏传导阻滞。
[0172] 在一些实施例中,慢性免疫应答由选自以下的医学状况激活:慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病(CIDP)、系统性红斑狼疮、反应性关节病、原发性胆汁性肝硬化、溃疡性结肠炎和抗嗜中性粒细胞细胞质抗体(ANCA)相关性血管炎。
[0173] 在一些实施例中,受试者患有自身免疫疾病。
[0174] 在一些实施例中,自身免疫疾病选自以下:斑秃、强直性脊柱炎、抗磷脂综合征、艾迪生氏病、溶血性贫血、自身免疫性肝炎、肝炎、白塞氏病、大疱性类天疱疮、心肌病、口炎性腹泻-皮炎、慢性疲劳免疫功能障碍综合征、慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病、丘施综合征、瘢痕性类天疱疮、局限型硬皮病(CREST综合征)、冷凝集素病、克罗恩氏病、皮肌炎、盘状狼疮、特发性混合性冷球蛋白血症、纤维肌痛、纤维肌炎、格雷夫斯病、桥本氏甲状腺炎、甲状腺功能减退、炎性肠病、自身免疫性淋巴增生综合征、特发性肺纤维化、IgA肾病、胰岛素依赖性糖尿病、幼年型关节炎、扁平苔癣、狼疮、梅尼埃病、混合性结缔组织病、多发性硬化、恶性贫血、结节性多动脉炎、多软骨炎、多腺体综合征、风湿性多肌痛、多肌炎、原发性无丙种球蛋白血症、原发性胆汁性肝硬化、牛皮癣、雷诺现象、莱特尔综合征、风湿热、类风湿性关节炎、肉瘤样病、硬皮病、干燥综合征、僵人综合征、高安动脉炎、颞动脉炎、溃疡性结肠炎、葡萄膜炎、白癜风和韦格纳氏肉芽肿。
[0175] 在另一个方面,本专利申请的特征在于降低跨越妊娠受试者胎盘的抗体转运的方法,该方法包括向妊娠受试者施用上述方面中任一的分离的抗体或药物组合物。
[0176] 在一些实施例中,降低抗体
转运包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:降低致病性抗体转运。
[0177] 在另一个方面,本专利申请的特征在于增加妊娠受试者中的抗体分解代谢的方法,该方法包括向妊娠受试者施用上述方面中任一的分离的抗体或药物组合物。
[0178] 在一些实施例中,增加的抗体分解代谢包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:增加的致病性抗体分解代谢。
[0179] 在另一个方面,本专利申请的特征是治疗胎儿或新生儿中的抗体介导的病毒性疾病增强的方法,该方法包括向妊娠受试者施用上述方面中任一的分离的抗体或药物组合
物。
[0180] 在一些实施例中,致病性抗体在妊娠受试者的胎儿中引起胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症。
[0181] 在一些实施例中,胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症选自胎儿和新生儿同种免疫性血小板减少症、胎儿和新生儿的溶血性疾病、同种免疫性全血小板减少症、先天性心脏传导阻滞、胎儿关节挛缩、新生儿重症肌无力、新生儿自身免疫性溶血性贫血、新生儿抗磷脂综合征、新生儿多肌炎、皮肌炎、新生儿狼疮、新生儿硬皮病、白塞氏病、新生儿格雷夫斯病、新生儿川崎病、新生儿自身免疫性甲状腺疾病和新生儿I型糖尿病。
[0182] 在一些实施例中,抗体是IgG抗体。
[0183] 在一些实施例中,病毒性疾病由选自以下的病毒引起:α病毒感染、黄病毒感染、寨卡病毒感染、基孔肯雅病毒感染、罗斯河病毒感染、严重急性呼吸综合征冠状病毒感染、中东呼吸综合征、禽流感感染、流感病毒感染、人呼吸道合胞病毒感染、埃博拉病毒感染、黄热病病毒感染、登革热病毒感染、人类免疫缺陷病毒感染、呼吸道合胞病毒感染、汉坦病毒感染、盖塔病毒感染、辛德毕斯病毒感染、布尼亚病毒感染、西尼罗河病毒感染、日本脑炎病毒B型感染、兔痘病毒感染、乳酸脱氢酶升高病毒感染、呼肠孤病毒感染、狂犬病病毒感染、口蹄疫病毒感染、猪繁殖与呼吸综合征病毒感染、猿猴出血烧病毒感染、马传染性贫血病毒感染、山羊关节炎病毒感染、非洲
猪瘟病毒感染、慢病毒感染、BK乳多空病毒感染、墨累谷脑炎病毒感染、肠道病毒感染、巨细胞病毒感染、肺病毒感染、麻疹病毒属感染和麻疹病毒感染。
[0184] 在一些实施例中,妊娠受试者患有医学状况或处于患有医学状况的风险中,所述医学状况激活妊娠受试者中的免疫应答。
[0185] 在一些实施例中,医学状况是寻常型天疱疮、狼疮性肾炎、重症肌无力、格-巴二氏综合征、抗体介导的排斥、灾难性抗磷脂抗体综合征、免疫复合物介导的血管炎、肾小球炎、离子通道病、视神经脊髓炎、自身免疫性听力丧失、特发性血小板减少性紫癜、自身免疫性溶血性贫血、免疫性嗜中性粒细胞减少症、扩张型心肌病、血清病、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病、系统性红斑狼疮、反应性关节病、原发性胆汁性肝硬化、溃疡性结肠炎、抗嗜中性粒细胞细胞质抗体(ANCA)相关性血管炎、斑秃、强直性脊柱炎、抗磷脂综合征、艾迪生氏病、溶血性贫血、自身免疫性肝炎、肝炎、白塞氏病、大疱性类天疱疮、心肌病、口炎性腹泻-皮炎、慢性疲劳免疫功能障碍综合征、慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病、丘施综合征、瘢痕性类天疱疮、局限型硬皮病(CREST综合征)、冷凝集素病、克罗恩氏病、皮肌炎、盘状狼疮、特发性混合性冷球蛋白血症、纤维肌痛、纤维肌炎、格雷夫斯病、桥本氏甲状腺炎、甲状腺功能减退、炎性肠病、自身免疫性淋巴增生综合征、特发性肺纤维化、IgA肾病、胰岛素依赖性糖尿病、幼年型关节炎、扁平苔癣、狼疮、梅尼埃病、混合性结缔组织病、多发性硬化、恶性贫血、结节性多动脉炎、多软骨炎、多腺体综合征、风湿性多肌痛、多肌炎、原发性无丙种球蛋白血症、原发性胆汁性肝硬化、牛皮癣、雷诺现象、莱特尔综合征、风湿热、类风湿性关节炎、肉瘤样病、硬皮病、干燥综合征、僵人综合征、高安动脉炎、颞动脉炎、溃疡性结肠炎、葡萄膜炎、白癜风和韦格纳氏肉芽肿。
[0186] 在一些实施例中,妊娠受试者具有患有胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症的先前胎儿或新生儿的病史。
[0187] 在一些实施例中,在从妊娠受试者获得的生物样品中检测与免疫疾病相关的抗体。
[0188] 在一些实施例中,生物样品是血样或尿样。
[0189] 在一些实施例中,抗体以1pM至100nM的KD结合人FcRn。
[0190] 在一些实施例中,分离的抗体以小于或等于抗体N026那种的KD结合人FcRn。
[0191] 在一些实施例中,分离的抗体是单克隆抗体。
[0192] 在一些实施例中,分离的抗体是IgG1或其变体。
[0193] 在一些实施例中,分离的抗体包括λ轻链、包含λ轻链、由λ轻链组成或由基本上由λ轻链组成。
[0194] 在一些实施例中,分离的抗体是唾液酸化的抗体。
[0195] 在另一个方面,本专利申请的特征在于分离的抗体,其包括:(1)包含CDR L1、CDR L2和CDR L3的轻链可变区,以及(2)包含CDR H1、CDR H2和CDR H3的重链可变区,其中所述CDR L1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列X1GTGSDVGSYNX2VS(SEQ ID NO:12),所述CDR L2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列GDX3X4RPS(SEQ ID NO:13),所述CDR L3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列X5SYX6GSGIYV(SEQ ID NO:14),所述CDR H1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列Z1YAMG(SEQ ID NO:15),所述CDR H2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列Z7IGZ2SGZ3QTZ4YADS(SEQ ID NO:16),所述CDR H3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列LAZ5Z6DSY(SEQ ID NO:17),其中X1为极性或疏水性氨基酸,X2为疏水性氨基酸,X3为极性氨基酸,X4为极性或酸性氨基酸,X5为极性或疏水性氨基酸,X6为疏水性氨基酸,Z1为极性或酸性氨基酸,Z2为极性或疏水性氨基酸,Z3为G、S或A,Z4为碱性氨基酸,Z5为疏水性或碱性氨基酸,Z6为G、S、D、Q或H,并且Z7为S或T,其用于治疗胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症。
[0196] 在一些实施例中,分离的抗体包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:(1)包含CDR L1、CDR L2和CDR L3的轻链可变区,以及(2)包含CDR H1、CDR H2和CDR H3的重链可变区,其中所述CDR L1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:相对于TGTGSDVGSYNLVS(SEQ ID NO:1)的序列,含有不超过两个氨基酸取代的序列,所述
CDR L2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:相对于GDSERPS(SEQ ID NO:2)的序列,含有不超过一个氨基酸取代的序列,所述CDR L3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:相对于SSYAGSGIYV(SEQ ID NO:3),含有不超过一个氨基酸取代的序列,所述CDR H1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:相对于
TYAMG(SEQ ID NO:4)、DYAMG(SEQ ID NO:5)或NYAMG(SEQ ID NO:6)的序列,含有不超过一
个氨基酸取代的序列,所述CDR H2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:
相对于SIGASGSQTRYADS(SEQ ID NO:8)、SIGSSGAQTRYADS(SEQ ID NO:7)、SIGASGAQTRYADS
(SEQ ID NO:9)、SIGASGGQTRYADS(SEQ ID NO:10)、TIGSSGAQTRYADS(SEQ ID NO:41)、
SIGASGSQTRYADS(SEQ ID NO:42)、TIGASGAQTRYADS(SEQ ID NO:43)、或TIGASGGQTRYADS
(SEQ ID NO:32)的序列,含有不超过两个氨基酸取代的序列,并且所述CDR H3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:相对于LAIGDSY(SEQ ID NO:11)的序列,含有不超过一个氨基酸取代的序列,其用于治疗胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症。
[0197] 在一些实施例,分离的抗体的CDR L1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列TGTGSDVGSYNLVS(SEQ ID NO:1),分离的抗体的CDR L2包含序列GDSERPS(SEQ ID NO:2),分离的抗体的CDR L3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列SSYAGSGIYV(SEQ ID NO:3),分离的抗体的CDR H1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列TYAMG(SEQ ID NO:4),分离的抗体的CDR H2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列SIGSSGAQTRYADS(SEQ ID NO:7)或
TIGSSGAQTRYADS(SEQ ID NO:41),并且分离的抗体的CDR H3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列LAIGDSY(SEQ ID NO:11),其用于治疗胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症。
[0198] 在一些实施例,分离的抗体的CDR L1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列TGTGSDVGSYNLVS(SEQ ID NO:1),分离的抗体的CDR L2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列GDSERPS(SEQ ID NO:2),分离的抗体的CDR L3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列SSYAGSGIYV(SEQ ID NO:3),分离的抗体的CDR H1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列DYAMG(SEQ ID NO:5),分离的抗体的CDR H2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列SIGASGSQTRYADS(SEQ ID NO:8)或SIGASGSQTRYADS(SEQ ID NO:42),并且分离的抗体的CDR H3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列LAIGDSY(SEQ ID NO:11),其用于治疗胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症。
[0199] 在一些实施例,分离的抗体的CDR L1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列TGTGSDVGSYNLVS(SEQ ID NO:1),分离的抗体的CDR L2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列GDSERPS(SEQ ID NO:2),分离的抗体的CDR L3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列SSYAGSGIYV(SEQ ID NO:3),分离的抗体的CDR H1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列NYAMG(SEQ ID NO:6),分离的抗体的CDR H2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列SIGASGAQTRYADS(SEQ ID NO:9)或TIGASGAQTRYADS(SEQ ID NO:43),并且分离的抗体的CDR H3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列LAIGDSY(SEQ ID NO:11),其用于治疗胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症。
[0200] 在一些实施例,分离的抗体的CDR L1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列TGTGSDVGSYNLVS(SEQ ID NO:1),分离的抗体的CDR L2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列GDSERPS(SEQ ID NO:2),分离的抗体的CDR L3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列SSYAGSGIYV(SEQ ID NO:3),分离的抗体的CDR H1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列TYAMG(SEQ ID NO:4),分离的抗体的CDR H2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列SIGASGGQTRYADS(SEQ ID NO:10)或TIGASGGQTRYADS(SEQ ID NO:32),并且分离的抗体的CDR H3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列LAIGDSY(SEQ ID NO:11),其用于治疗胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症。
[0201] 在一些实施例,分离的抗体的CDR L1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列TGTGSDVGSYNLVS(SEQ ID NO:1),分离的抗体的CDR L2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列GDSERPS(SEQ ID NO:2),分离的抗体的CDR L3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列SSYAGSGIYV(SEQ ID NO:3),分离的抗体的CDR H1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列TYAMG(SEQ ID NO:4),分离的抗体的CDR H2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列SIGASGSQTRYADS(SEQ ID NO:8)或SIGASGSQTRYADS(SEQ ID NO:42),并且分离的抗体的CDR H3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列LAIGDSY(SEQ ID NO:11),
[0202] 其用于治疗胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症。
[0203] 在一些实施例,分离的抗体的CDR L1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列X1GTGSDVGSYNX2VS(SEQ ID NO:12),分离的抗体的CDR L2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列GDX3X4RPS(SEQ ID NO:13),分离的抗体的CDRL3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列X5SYX6GSGIYV(SEQ ID NO:14),分离的抗体的CDR H1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列Z1YAMG(SEQ ID NO:15),分离的抗体的CDR H2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列Z7IGZ2SGZ3QTZ4YADS(SEQ ID NO:16),分离的抗体的CDR H3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列LAZ5Z6DSY(SEQ ID NO:17),并且其中X1为T、A、S或I,X2为L或I,X3为S、N或T,X4为Q、E或N,X5为C、S、I或Y,X6为A或V,Z1为E、T、D或N,Z2为S或A,Z3为G、S或A,Z4为K或R,Z5为I、L或H,Z6为G、S、D、Q或H,并且Z7为S或T,
[0204] 其用于治疗胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症。
[0205] 在一些实施例,分离的抗体的CDR L1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列TGTGSDVGSYNLVS(SEQ ID NO:1),分离的抗体的CDR L2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列GDSERPS(SEQ ID NO:2),分离的抗体的CDR L3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列SSYAGSGIYV(SEQ ID NO:3),分离的抗体的CDR H1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列Z1YAMG(SEQ ID NO:15),分离的抗体的CDR H2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列Z7IGZ2SGZ3QTRYADS(SEQ ID NO:18),并且分离的抗体的CDR H3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列LAIGDSY(SEQ ID NO:11),并且其中Z1为T、D或N,Z2为S或A,Z3为G、S或A,并且Z7为S或T,其用于治疗胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症。
[0206] 在一些实施例,分离的抗体的轻链可变区包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:与以下序列具有至少90%同一性的序列
[0207] QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTGSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKLMIYGDSERPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYAGSGIYVFGTGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFY
PGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHKSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS(SEQ
ID NO:19),其用于治疗胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症。
[0208] 在一些实施例,分离的抗体的重链可变区包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:与以下序列具有至少90%同一性的序列
[0209] EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGSSGAQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCL
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ID NO:20),其用于治疗胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症。
[0210] 在一些实施例,分离的抗体的重链可变区包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:与以下序列具有至少90%同一性的序列
[0211] EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGASGSQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCL
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ID NO:21),其用于治疗胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症。
[0212] 在一些实施例,分离的抗体的重链可变区包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:与以下序列具有至少90%同一性的序列
[0213] EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGASGAQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCL
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ID NO:22),其用于治疗胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症。
[0214] 在一些实施例,分离的抗体的重链可变区包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:与以下序列具有至少90%同一性的序列
[0215] EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGASGGQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCL
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ID NO:23),其用于治疗胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症。
[0216] 在一些实施例,分离的抗体的重链可变区包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:与以下序列具有至少90%同一性的序列
[0217] EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGASGSQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCL
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ID NO:24),其用于治疗胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症。
[0218] 在一些实施例,分离的抗体的轻链可变区包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:与以下序列具有至少90%同一性的序列
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ID NO:19);并且分离的抗体的重链可变区包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:与以下序列具有至少90%同一性的序列
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ID NO:20),其用于治疗胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症。
[0221] 在一些实施例,分离的抗体的轻链可变区包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:与以下序列具有至少90%同一性的序列
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ID NO:19);并且分离的抗体的重链可变区包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:与以下序列具有至少90%同一性的序列
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ID NO:21),其用于治疗胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症。
[0224] 在一些实施例,分离的抗体的轻链可变区包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:与以下序列具有至少90%同一性的序列
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ID NO:22),其用于治疗胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症。
[0227] 在一些实施例,分离的抗体的轻链可变区包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:与以下序列具有至少90%同一性的序列
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ID NO:23),其用于治疗胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症。
[0230] 在一些实施例,分离的抗体的轻链可变区包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:与以下序列具有至少90%同一性的序列
[0231] QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTGSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKLMIYGDSERPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYAGSGIYVFGTGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFY
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ID NO:19);并且分离的抗体的重链可变区包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:与以下序列具有至少90%同一性的序列
[0232] EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGASGSQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCL
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ID NO:24),其用于治疗胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症。
[0233] 在一些实施例,分离的抗体的重链可变区包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:与SEQ ID NO:20-24中任何一个的序列具有至少95%、97%、99%或100%同一性的序列,其用于治疗胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症。
[0234] 在一些实施例,分离的抗体的轻链可变区包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:与SEQ ID NO:19的序列具有至少95%、97%、99%或100%同一性的序列其用于治疗胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症。
[0235] 在一些实施例,分离的抗体的轻链可变区包括以下序列、包含以下序列、由以下序列组成、或基本上由以下序列组成:
[0236] QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTGSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKLMIYGDSERPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYAGSGIYVFGTGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFY
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ID NO:19);并且分离的抗体的重链可变区包括以下序列、包含以下序列、由以下序列组成、或基本上由以下序列组成:
[0237] EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGSSGAQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCL
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ID NO:20),其用于治疗胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症。
[0238] 在一些实施例,分离的抗体的轻链可变区包括以下序列、包含以下序列、由以下序列组成、或基本上由以下序列组成:
[0239] QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTGSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKLMIYGDSERPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYAGSGIYVFGTGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFY
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ID NO:19);并且分离的抗体的重链可变区包括以下序列、包含以下序列、由以下序列组成、或基本上由以下序列组成:
[0240] EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGASGSQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCL
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ID NO:21),其用于治疗胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症。
[0241] 在一些实施例,分离的抗体的轻链可变区包括以下序列、包含以下序列、由以下序列组成、或基本上由以下序列组成:
[0242] QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTGSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKLMIYGDSERPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYAGSGIYVFGTGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFY
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ID NO:19);并且分离的抗体的重链可变区包括以下序列、包含以下序列、由以下序列组成、或基本上由以下序列组成:
[0243] EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGASGAQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCL
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ID NO:22),其用于治疗胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症。
[0244] 在一些实施例,分离的抗体的轻链可变区包括以下序列、包含以下序列、由以下序列组成、或基本上由以下序列组成:
[0245] QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTGSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKLMIYGDSERPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYAGSGIYVFGTGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFY
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ID NO:19);并且分离的抗体的重链可变区包括以下序列、包含以下序列、由以下序列组成、或基本上由以下序列组成:
[0246] EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGASGGQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCL
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ID NO:23),其用于治疗胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症。
[0247] 在一些实施例,分离的抗体的轻链可变区包括以下序列、包含以下序列、由以下序列组成、或基本上由以下序列组成:
[0248] QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTGSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKLMIYGDSERPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYAGSGIYVFGTGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFY
PGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHKSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS(SEQ
ID NO:19);并且分离的抗体的重链可变区包括以下序列、包含以下序列、由以下序列组成、或基本上由以下序列组成:
[0249] EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGASGSQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCL
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ID NO:24),其用于治疗胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症。
[0250] 在另一个方面,本专利申请的特征在于分离的抗体,其包括:(1)包含CDR L1、CDR L2和CDR L3的轻链可变区,以及(2)包含CDR H1、CDR H2和CDR H3的重链可变区,其中所述CDR L1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列VGX1YNX2,所述CDR L2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列GDX3X4,所述CDR L3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列YX6GSGIY,所述CDRH1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列Z1YA,所述CDR H2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列Z8IZ2Z3SZ4Z5QZ6R,并且所述CDR H3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列LAZ7,其中X1为任何氨基酸,X2为L或I,X3为S、N或T,X4为Q、E或N,X6为A或V,Z1为E、T、D或N,Z2为任何氨基酸,Z3为S或A,Z4为任何氨基酸,Z5为G、S或A,Z6为任何氨基酸,Z7为I、L或H,并且Z8为S或T。
[0251] 在另一个方面,本专利申请的特征在于分离的抗体,其包括:(1)包含CDR L1、CDR L2和CDR L3的轻链可变区,以及(2)包含CDR H1、CDR H2和CDR H3的重链可变区,其中所述CDR L1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列VGX1YNX2,所述CDR L2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列GDX3X4,所述CDR L3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列YX6GSGIY,所述CDRH1包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列Z1YA,所述CDR H2包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列Z8IZ2Z3SZ4Z5QZ6R,和
[0252] 所述CDR H3包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成:序列LAZ7,其中X1为任何氨基酸,X2为疏水性氨基酸,X3为极性氨基酸,X4为极性或酸性氨基酸,X6为疏水性氨基酸,Z1为极性或酸性氨基酸,Z2为任何氨基酸,Z3为极性或疏水性氨基酸,Z4为任何氨基酸,Z5为G、S或A,Z5为疏水性或碱性氨基酸,
[0253] Z6为任何氨基酸,Z7为疏水性或碱性氨基酸,并且Z8为S或T。
[0254] 在一些实施例中,抗体用于治疗胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症。在一些实施例中,前两个方面的抗体用于与上述方法中任一一起使用。
[0255] 在一些实施例中,分离的抗体是抗FcRn抗体。在一些情况下,抗体抑制IgG与FcRn的结合。在一些实施例中,分离的抗体不结合FcRn(SEQ ID NO:30)的E115。在一些实施例
中,分离的抗体结合不包含FcRn(SEQ ID NO:30)的E115的表位。
[0256] 本专利申请的特征还在于通过向妊娠受试者施用与人新生儿Fc受体(FcRn)结合的分离的抗体,降低跨越妊娠受试者胎盘的致病性抗体转运,增加妊娠受试者中的致病性
抗体分解代谢,以及治疗胎儿或新生儿中的抗体介导的病毒性疾病增强的方法。在一些实
施例中,妊娠受试者中的致病性抗体在妊娠受试者的胎儿中引起胎儿和新生儿同种免疫病
症和/或自身免疫病症。
[0257] 在一些实施例中,分离的抗体含有:(1)包括CDR L1、CDR L2和CDR L3的轻链可变区,以及(2)包括CDR H1、CDR H2和CDR H3的重链可变区,其中所述CDR L1具有相对于
TGTGSDVGSYNLVS(SEQ ID NO:1)的序列,含有不超过两个氨基酸取代的序列,所述CDR L2具有相对于GDSERPS(SEQ ID NO:2)的序列,含有不超过一个氨基酸取代的序列,所述CDR L3
具有相对于SSYAGSGIYV(SEQ ID NO:3),含有不超过一个氨基酸取代的序列,所述CDR H1具有相对于TYAMG(SEQ ID NO:4)、DYAMG(SEQ ID NO:5)或NYAMG(SEQ ID NO:6)的序列,含有
不超过一个氨基酸取代的序列,所述CDR H2具有相对于SIGSSGAQTRYADS(SEQ ID NO:7)、
SIGASGSQTRYADS(SEQ ID NO:8)、SIGASGAQTRYADS(SEQ ID NO:9)、或SIGASGGQTRYADS(SEQ ID NO:10)的序列,含有不超过两个氨基酸取代的序列,所述CDR H3具有相对于LAIGDSY
(SEQ ID NO:11)的序列,含有不超过一个氨基酸取代的序列。
[0258] 在一些实施例中,抗体以小于200、150、100、50或40pM的KD结合人FcRn。
[0259] 在一些实施例中,抗体以小于或等于抗体那种的KD结合人FcRn,所述抗体具有N022、N023、N024、N026或N027的轻链可变区和重链可变区,并且还具有和它与之比较的抗体的那种相同的Fc区。
[0260] 在其它实施例中,分离的抗体含有:(1)包括CDR L1、CDR L2和CDR L3的轻链可变区,以及(2)包括CDR H1、CDR H2和CDR H3的重链可变区,其中所述CDR L1具有
X1GTGSDVGSYNX2VS(SEQ ID NO:12)的序列,所述CDR L2具有GDX3X4RPS(SEQ ID NO:13)的序列,所述CDR L3具有X5SYX6GSGIYV(SEQ ID NO:14)的序列,所述CDR H1具有Z1YAMG(SEQ ID NO:15)的序列,所述CDR H2具有SIGZ2SGZ3QTZ4YADS(SEQ ID NO:43)的序列,所述CDR H3具有LAZ5Z6DSY(SEQ ID NO:17)的序列,其中X1为极性或疏水性氨基酸,X2为疏水性氨基酸,X3为极性氨基酸,X4为极性或酸性氨基酸,X5为极性或疏水性氨基酸,X6为疏水性氨基酸,Z1为极性或酸性氨基酸,Z2为极性或疏水性氨基酸,Z3为G、S或A,Z4为碱性氨基酸,Z5为疏水性或碱性氨基酸,Z6为G、S、D、Q或H,并且其中所述抗体以小于或等于抗体那种的KD结合人FcRn,所述抗体具有N026的轻链可变区和重链可变区,并且还具有与待比较的抗体相同的Fc区。
在一些实施例中,X1为T、A、S或I。在其它实施例中,X2为L或I。在一些实施例中,X3为S、N或T。
在其它实施例中,X4为Q、E或N,X5为C、S、I或Y。在一些实施例中,X6为A或V,Z1为E、T、D或N。在进一步的实施例中,Z2为S或A。在一些实施例中,Z4为K或R。在另外其它实施例中,Z5为I、L或H。
[0261] 在另外其它实施例中,分离的抗体含有轻链可变区和重链可变区,所述轻链可变区包括具有TGTGSDVGSYNLVS(SEQ ID NO:1)的序列的CDR L1、具有GDSERPS(SEQ ID NO:2)
的序列的CDR L2、以及具有SSYAGSGIYV(SEQ ID NO:3)的序列的CDR L3,所述重链可变区包括具有Z1YAMG(SEQ ID NO:15)的序列的CDR H1、具有SIGZ2SGZ3QTRYADS(SEQ ID NO:44)的
序列的CDR H2、以及具有LAIGDSY(SEQ ID NO:11)的序列的CDR H3,其中Z1为T、D或N,Z2为S或A,并且Z3为G、S或A。
[0262] 在一些实施例中,分离的抗体含有具有TGTGSDVGSYNLVS(SEQ ID NO:1)的序列的CDR L1、具有GDSERPS(SEQ ID NO:2)的序列的CDR L2、具有SSYAGSGIYV(SEQ ID NO:3)的序列的CDR L3、具有TYAMG(SEQ ID NO:4)的序列的CDR H1、具有SIGSSGAQTRYADS(SEQ ID NO:
7)的序列的CDRH2、以及具有LAIGDSY(SEQ ID NO:11)的序列的CDRH3。
[0263] 在一些实施例中,分离的抗体含有具有TGTGSDVGSYNLVS(SEQ ID NO:1)的序列的CDR L1、具有GDSERPS(SEQ ID NO:2)的序列的CDR L2、具有SSYAGSGIYV(SEQ ID NO:3)的序列的CDR L3、具有DYAMG(SEQ ID NO:5)的序列的CDR H1、具有SIGASGSQTRYADS(SEQ ID NO:
8)的序列的CDRH2、以及具有LAIGDSY(SEQ ID NO:11)的序列的CDRH3。
[0264] 在一些实施例中,分离的抗体含有具有TGTGSDVGSYNLVS(SEQ ID NO:1)的序列的CDR L1、具有GDSERPS(SEQ ID NO:2)的序列的CDR L2、具有SSYAGSGIYV(SEQ ID NO:3)的序列的CDR L3、具有NYAMG(SEQ ID NO:6)的序列的CDR H1、具有SIGASGAQTRYADS(SEQ ID NO:
9)的序列的CDRH2、以及具有LAIGDSY(SEQ ID NO:11)的序列的CDRH3。
[0265] 在其它实施例中,分离的抗体含有具有TGTGSDVGSYNLVS(SEQ ID NO:1)的序列的CDR L1、具有GDSERPS(SEQ ID NO:2)的序列的CDR L2、具有SSYAGSGIYV(SEQ ID NO:3)的序列的CDR L3、具有TYAMG(SEQ ID NO:4)的序列的CDR H1、具有SIGASGGQTRYADS(SEQ ID NO:
10)的序列的CDRH2、以及具有LAIGDSY(SEQ ID NO:11)的序列的CDRH3。
[0266] 在另外其它实施例中,分离的抗体含有具有TGTGSDVGSYNLVS(SEQ ID NO:1)的序列的CDRL1、具有GDSERPS(SEQ ID NO:2)的序列的CDR L2、具有SSYAGSGIYV(SEQ ID NO:3)
的序列的CDR L3、具有TYAMG(SEQ ID NO:4)的序列的CDR H1、具有SIGASGSQTRYADS(SEQ ID NO:8)的序列的CDR H2、以及具有LAIGDSY(SEQ ID NO:11)的序列的CDRH3。
[0267] 在一些实施例中,本专利申请的分离的抗体的轻链可变区具有与以下序列具有至少90%同一性的序列
[0268] QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTGSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKLMIYGDSERPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYAGSGIYVFGTGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFY
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ID NO:19)。
[0269] 在一些实施例中,本专利申请的分离的抗体的重链可变区具有与以下序列具有至少90%同一性的序列
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ID NO:20)。
[0271] 在其它实施例中,本专利申请的分离的抗体的重链可变区具有与以下序列具有至少90%同一性的序列
[0272] EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGASGSQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCL
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ID NO:21)。
[0273] 在其它实施例中,本专利申请的分离的抗体的重链可变区具有与以下序列具有至少90%同一性的序列
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ID NO:23)。
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[0278] EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGASGSQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCL
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ID NO:24)。
[0279] 在一些实施例中,分离的抗体含有轻链可变区和重链可变区,其中所述轻链可变区具有与以下序列具有至少90%同一性的序列
[0280] QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTGSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKLMIYGDSERPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYAGSGIYVFGTGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFY
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ID NO:19);并且所述重链可变区具有与以下序列具有至少90%同一性的序列
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ID NO:20)。
[0282] 在其它实施例中,分离的抗体含有轻链可变区和重链可变区,其中所述轻链可变区具有与以下序列具有至少90%同一性的序列
[0283] QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTGSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKLMIYGDSERPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYAGSGIYVFGTGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFY
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ID NO:19);并且所述重链可变区具有与以下序列具有至少90%同一性的序列
[0284] EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGASGSQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCL
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ID NO:21)。
[0285] 在其它实施例中,分离的抗体含有轻链可变区和重链可变区,其中所述轻链可变区具有与以下序列具有至少90%同一性的序列
[0286] QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTGSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKLMIYGDSERPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYAGSGIYVFGTGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFY
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[0287] EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGASGAQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCL
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ID NO:22)。
[0288] 在其它实施例中,分离的抗体含有轻链可变区和重链可变区,其中所述轻链可变区具有与以下序列具有至少90%同一性的序列
[0289] QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTGSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKLMIYGDSERPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYAGSGIYVFGTGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFY
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ID NO:19);并且所述重链可变区具有与以下序列具有至少90%同一性的序列
[0290] EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGASGGQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCL
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ID NO:23)。
[0291] 在其它实施例中,分离的抗体含有轻链可变区和重链可变区,其中所述轻链可变区具有与以下序列具有至少90%同一性的序列
[0292] QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTGSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKLMIYGDSERPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYAGSGIYVFGTGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFY
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ID NO:19);并且所述重链可变区具有与以下序列具有至少90%同一性的序列
[0293] EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGASGSQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCL
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ID NO:24)。
[0294] 在一些实施例中,本专利申请的分离的抗体的重链可变区具有与SEQ ID NO:20-24中任何一个的序列具有至少95%、97%、99%或100%同一性的序列。在其它实施例中,本专利申请的分离的抗体的轻链可变区具有与SEQ ID NO:19的序列具有至少95%、97%、
99%或100%同一性的序列。
[0295] 在一些实施例中,本专利申请的分离的抗体还包括相对于SEQ ID NO:20-24中任何一个的序列的氨基酸取代N297A。
[0296] 在其它实施例中,分离的抗体还包括相对于SEQ ID NO:20-24中任何一个的序列的氨基酸取代D355E和L357M。
[0297] 在其它实施例中,本专利申请的分离的抗体还包括以下氨基酸取代中任何一个或多个:相对于SEQ ID NO:20-24中任何一个的序列的A23V、S30R、L80V、A84T、E85D、A93V,以及相对于SEQ ID NO:19的序列的Q38H、V58I和G99D。
[0298] 在另外其它实施例中,相对于SEQ ID NO:20-24中任何一个的序列,本专利申请的分离的抗体不含有在残基446处的C末端赖氨酸。
[0299] 在一些实施例中,上述方面中任一的抗体以小于或等于抗体那种的KD结合人FcRn,所述抗体具有N022、N023、N024、N026或N027的轻链可变区和重链可变区,并且还具有与待比较的抗体的那种相同的Fc区。例如,在特定的KD测定中,抗体的KD小于200、150、100、
50或40pM。
[0300] 分配给本文所述的任何分离的抗体的互补决定区(CDR)和构架区(FR)的氨基酸位置根据Kabat的EU指数(Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版
Public Health Service,National Institutes ofHealth,Bethesda,MD.(1991))限定。
[0301] 在一些实施例中,分离的抗体含有轻链可变区和重链可变区,其中所述轻链可变区具有以下序列:
[0302] QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTGSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKLMIYGDSERPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYAGSGIYVFGTGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFY
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ID NO:19);并且所述重链可变区具有以下序列
[0303] EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGSSGAQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCL
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ID NO:20)。
[0304] 在一些实施例中,分离的抗体含有轻链可变区和重链可变区,其中所述轻链可变区具有以下序列:
[0305] QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTGSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKLMIYGDSERPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYAGSGIYVFGTGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFY
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[0306] EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGASGSQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCL
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ID NO:21)。
[0307] 在一些实施例中,分离的抗体含有轻链可变区和重链可变区,其中所述轻链可变区具有以下序列:
[0308] QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTGSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKLMIYGDSERPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYAGSGIYVFGTGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFY
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ID NO:19);并且所述重链可变区具有以下序列
[0309] EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGASGAQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCL
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[0310] 在一些实施例中,分离的抗体含有轻链可变区和重链可变区,其中所述轻链可变区具有以下序列:
[0311] QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTGSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKLMIYGDSERPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYAGSGIYVFGTGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFY
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ID NO:23)。
[0313] 在一些实施例中,分离的抗体含有轻链可变区和重链可变区,其中所述轻链可变区具有以下序列:
[0314] QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTGSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKLMIYGDSERPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYAGSGIYVFGTGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFY
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[0315] EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGASGSQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCL
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PSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ
ID NO:24)。
[0316] 在上述方面中任一的一些实施例中,本专利申请的分离的抗体是单克隆抗体。在一些实施例中,分离的抗体是IgG1。在一些实施例中,分离的抗体包括λ轻链。在一些实施例中,分离的抗体包括κ轻链。在一些实施例,在分离的抗体的Fc区上的糖基化位点是唾液酸化的(例如,二唾液酸化的)。
[0317] 在上述方面中任一的一些实施例中,本专利申请的分离的抗体是人源化抗体或全人抗体。
[0318] 在一些实施例中,分离的抗体以1-100、5-150、5-100、5-75、5-50、10-50或10-40pM的KD与人FcRn结合。
[0319] 在一些实施例中,本专利申请的分离的抗体结合啮齿类动物,例如小鼠或大鼠FcRn。在一些实施例中,本专利申请的分离的抗体以小于200、150、100、50或40pM的KD结合啮齿类动物,例如小鼠或大鼠FcRn。
[0320] 本专利申请的特征在于针对人新生儿Fc受体(FcRn)的新型抗体。这些抗FcRn抗体可用于例如促进受试者中的自身抗体的清除,抑制受试者中的
抗原呈递,阻断免疫应答,例如阻断受试者中的基于免疫复合物的免疫应答激活,或治疗受试者中的免疫疾病(例如,自身免疫疾病)。通过向妊娠受试者施用与FcRn结合的分离的抗体,这些抗FcRn抗体还可用于降低跨越妊娠受试者胎盘的致病性抗体转运、增加妊娠受试者中的致病性抗体分解代谢、
以及治疗胎儿或新生儿中的抗体介导的病毒性疾病增强的方法。在一些实施例中,妊娠受
试者中的致病性抗体在妊娠受试者的胎儿中引起胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免
疫病症。
[0321] 在一个方面,本专利申请的特征在于结合FcRn的分离的抗体,其中所述抗体结合:(a)KQGTWGGDWPEAL(SEQ ID NO:25)的序列的至少一个氨基酸;(b)FKALGGKGPYTL(SEQ ID
NO:26)的序列的至少一个氨基酸,其中所述抗体抑制IgG与人FcRn的结合。
[0322] 在另一个方面,本专利申请的特征在于与人FcRn结合的分离的抗体,其中所述抗体结合KQGTWGGDWPEAL(SEQ ID NO:25)的序列的至少一个氨基酸,其中所述抗体结合SEQ
ID NO:25的氨基酸残基5、12或13中的至少一个,并且其中所述抗体抑制IgG与人FcRn的结
合。
[0323] 在另一个方面,本专利申请的特征在于与人FcRn结合的分离的抗体,其中所述抗体结合KQGTWGGDWPEAL(SEQ ID NO:25)的序列的至少一个氨基酸,其中所述抗体不结合由
以下组成的肽:序列GEEFMNFDLKQGT(SEQ ID NO:27)或EEFMNFDL(SEQ ID NO:28)的序列的
一个或多个氨基酸,并且其中所述抗体抑制IgG与人FcRn的结合。
[0324] 在一些实施例中,抗体结合WGGDWPEAL(SEQ ID NO:29)的序列的至少一个氨基酸。
[0325] 在一些实施例中,抗体结合SEQ ID NO:25的至少氨基酸残基5。在一些实施例中,抗体结合SEQ ID NO:25的至少氨基酸残基12。在一些实施例中,抗体结合SEQ ID NO:25的
至少氨基酸残基13。
[0326] 在一些实施例中,抗体结合FKALGGKGPYTL(SEQ ID NO:26)的序列的至少一个氨基酸。在一些实施例中,抗体结合FKALGGKGPYTL(SEQ ID NO:26)的序列的至少两个氨基酸。
[0327] 在另一个方面,本专利申请的特征在于与人FcRn结合的分离的抗体,其中所述抗体结合FKALGGKGPYTL(SEQ ID NO:26)的序列的至少一个氨基酸,并且其中所述抗体抑制
IgG与人FcRn的结合。在一些实施例中,抗体结合FKALGGKGPYTL(SEQ ID NO:26)的序列的至少两个氨基酸。
[0328] 在一些实施例中,抗体还结合KQGTWGGDWPEAL(SEQ ID NO:25)的序列的至少一个氨基酸。在一些实施例中,抗体还结合KQGTWGGDWPEAL(SEQ ID NO:25)的序列的至少两个氨基酸。
[0329] 在一些实施例中,抗体结合SEQ ID NO:25的氨基酸残基5、12或13中的至少一个。在一些实施例中,抗体结合SEQ ID NO:25的至少氨基酸残基5。在一些实施例中,抗体结合SEQ ID NO:25的至少氨基酸残基12。在一些实施例中,抗体结合SEQ ID NO:25的至少氨基
酸残基13。
[0330] 在一些实施例中,本文所述的抗体以小于或等于抗体N026那种的KD结合人FcRn。
[0331] 在一些实施例中,抗体是单克隆抗体。在一些实施例中,抗体是IgG1。在一些实施例中,抗体包括λ轻链。在一些实施例中,分离的抗体包括κ轻链。在一些实施例中,抗体是唾液酸化的(例如,二唾液酸化的)抗体。在一些实施例中,抗体是人源化抗体或全人抗体。
[0332] 在另一个方面,本专利申请的特征在于编码本文所述的分离的抗FcRn抗体的核酸分子。
[0333] 在另一个方面,本专利申请的特征在于包括编码本文所述的分离的抗FcRn抗体的核酸分子的载体。
[0334] 在另一个方面,本专利申请的特征在于表达本文所述的分离的抗FcRn抗体的宿主细胞,其中所述宿主细胞包括编码分离的抗FcRn抗体的核酸分子或包括该核酸分子的载
体,其中所述核酸分子或载体在宿主细胞中表达。在一些实施例中,宿主细胞是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。
[0335] 在另一个方面,本专利申请的特征在于药物组合物,其包括本文所述的分离的抗FcRn抗体和一种或多种药学可接受的载体或赋形剂。在一些实施例中,抗体是治疗有效量。
[0336] 在另一个方面,本专利申请的特征在于制备本文所述的分离的抗FcRn抗体的方法,其中所述方法包括:a)提供包括编码分离的抗FcRn抗体的核酸分子或包括该核酸分子
的载体的宿主细胞,和b)在允许抗体形成的条件下,在宿主细胞中表达核酸分子或载体。
[0337] 在一些实施例中,该方法还包括回收浓度为约1-100、1-50、1-25、2-50、5-50或2-20mg/ml的抗体的步骤。
[0338] 在一些实施例中,该方法中使用的宿主细胞是CHO细胞。
[0339] 在另一个方面,本专利申请的特征在于增加受试者中的致病性抗体(例如IgG抗体)分解代谢的方法。在另一个方面,本专利申请的特征在于减少受试者中的自身抗体的方法。在又一个方面,本专利申请的特征在于减少受试者中的基于免疫复合物的免疫应答激
活的方法。该方法包括向受试者施用本文所述的分离的抗体或本文所述的药物组合物。
[0340] 在一些实施例中,免疫应答是受试者中的急性或慢性免疫应答。
[0341] 在一些实施例中,急性免疫应答由选自以下的医学状况激活:寻常型天疱疮、狼疮性肾炎、重症肌无力、格-巴二氏综合征、抗体介导的排斥、灾难性抗磷脂抗体综合征、免疫复合物介导的血管炎、肾小球炎、离子通道病、视神经脊髓炎、自身免疫性听力丧失、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、自身免疫性溶血性贫血(AIHA)、免疫性嗜中性粒细胞减少症、扩张型心肌病和血清病。
[0342] 在一些实施例中,慢性免疫应答由选自以下的医学状况激活:慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病(CIDP)、系统性红斑狼疮、反应性关节病、原发性胆汁性肝硬化、溃疡性结肠炎和抗嗜中性粒细胞细胞质抗体(ANCA)相关性血管炎。
[0343] 在一些实施例中,受试者患有自身免疫疾病。自身免疫疾病可以是斑秃、强直性脊柱炎、抗磷脂综合征、艾迪生氏病、溶血性贫血、自身免疫性肝炎、肝炎、白塞氏病、大疱性类天疱疮、心肌病、口炎性腹泻-皮炎、慢性疲劳免疫功能障碍综合征、慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病、丘施综合征、瘢痕性类天疱疮、局限型硬皮病(CREST综合征)、冷凝集素病、克罗恩氏病、皮肌炎、盘状狼疮、特发性混合性冷球蛋白血症、纤维肌痛、纤维肌炎、格雷夫斯病、桥本氏甲状腺炎、甲状腺功能减退、炎性肠病、自身免疫性淋巴增生综合征、特发性肺纤维化、IgA肾病、胰岛素依赖性糖尿病、幼年型关节炎、扁平苔癣、狼疮、梅尼埃病、混合性结缔组织病、多发性硬化、恶性贫血、结节性多动脉炎、多软骨炎、多腺体综合征、风湿性多肌痛、多肌炎、原发性无丙种球蛋白血症、原发性胆汁性肝硬化、牛皮癣、雷诺现象、莱特尔综合征、风湿热、类风湿性关节炎、肉瘤样病、硬皮病、干燥综合征、僵人综合征、高安动脉炎、颞动脉炎、溃疡性结肠炎、葡萄膜炎、白癜风或韦格纳氏肉芽肿。
[0344] 在另一个方面,本专利申请的特征在于降低跨越妊娠受试者胎盘的致病性抗体转运的方法。在另一个方面,本专利申请的特征在于增加妊娠受试者中的致病性抗体分解代
谢的方法。在又一个方面,本专利申请的特征在于治疗胎儿或新生儿中的抗体介导的病毒
性疾病增强的方法。该方法包括向妊娠受试者施用本文所述的分离的抗体或本文所述的药
物组合物。
[0345] 在一些实施例中,致病性抗体在妊娠受试者的胎儿中引起胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症。
[0346] 在一些实施例中,胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症选自胎儿和新生儿同种免疫性血小板减少症(FNAIT)、胎儿和新生儿的溶血性疾病(HDFN)、同种免疫性全血小板减少症、先天性心脏传导阻滞、胎儿关节挛缩、新生儿重症肌无力、新生儿自身免疫性溶血性贫血、新生儿抗磷脂综合征、新生儿多肌炎、皮肌炎、新生儿狼疮、新生儿硬皮病、白塞氏病、新生儿格雷夫斯病、新生儿川崎病、新生儿自身免疫性甲状腺疾病和新生儿I型糖尿病。
[0347] 在一些实施例中,致病性抗体是IgG抗体。
[0348] 在一些实施例中,病毒性疾病由选自以下的病毒引起:α病毒感染、黄病毒感染、寨卡病毒感染、基孔肯雅病毒感染、罗斯河病毒感染、严重急性呼吸综合征冠状病毒感染、中东呼吸综合征、禽流感感染、流感病毒感染、人呼吸道合胞病毒感染、埃博拉病毒感染、黄热病病毒感染、登革热病毒感染、人类免疫缺陷病毒感染、呼吸道合胞病毒感染、汉坦病毒感染、盖塔病毒感染、辛德毕斯病毒感染、布尼亚病毒感染、西尼罗河病毒感染、日本脑炎病毒B型感染、兔痘病毒感染、乳酸脱氢酶升高病毒感染、呼肠孤病毒感染、狂犬病病毒感染、口蹄疫病毒感染、猪繁殖与呼吸综合征病毒感染、猿猴出血烧病毒感染、马传染性贫血病毒感染、山羊关节炎病毒感染、非洲猪瘟病毒感染、慢病毒感染、BK乳多空病毒感染、墨累谷脑炎病毒感染、肠道病毒感染、巨细胞病毒感染、肺病毒感染、麻疹病毒属感染和麻疹病毒感染。
[0349] 在一些实施例中,妊娠受试者患有医学状况或处于患有医学状况的风险中,所述医学状况激活妊娠受试者中的免疫应答。在一些实施例中,医学状况是寻常型天疱疮、狼疮性肾炎、重症肌无力、格-巴二氏综合征、抗体介导的排斥、灾难性抗磷脂抗体综合征、免疫复合物介导的血管炎、肾小球炎、离子通道病、视神经脊髓炎、自身免疫性听力丧失、特发性血小板减少性紫癜、自身免疫性溶血性贫血、免疫性嗜中性粒细胞减少症、扩张型心肌病、血清病、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病、系统性红斑狼疮、反应性关节病、原发性胆汁性肝硬化、溃疡性结肠炎、抗嗜中性粒细胞细胞质抗体(ANCA)相关性血管炎、斑秃、强直性脊柱炎、抗磷脂综合征、艾迪生氏病、溶血性贫血、自身免疫性肝炎、肝炎、白塞氏病、大疱性类天疱疮、心肌病、口炎性腹泻-皮炎、慢性疲劳免疫功能障碍综合征、慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病、丘施综合征、瘢痕性类天疱疮、局限型硬皮病(CREST综合征)、冷凝集素病、克罗恩氏病、皮肌炎、盘状狼疮、特发性混合性冷球蛋白血症、纤维肌痛、纤维肌炎、格雷夫斯病、桥本氏甲状腺炎、甲状腺功能减退、炎性肠病、自身免疫性淋巴增生综合征、特发性肺纤维化、IgA肾病、胰岛素依赖性糖尿病、幼年型关节炎、扁平苔癣、狼疮、梅尼埃病、混合性结缔组织病、多发性硬化、恶性贫血、结节性多动脉炎、多软骨炎、多腺体综合征、风湿性多肌痛、多肌炎、原发性无丙种球蛋白血症、原发性胆汁性肝硬化、牛皮癣、雷诺现象、莱特尔综合征、风湿热、类风湿性关节炎、肉瘤样病、硬皮病、干燥综合征、僵人综合征、高安动脉炎、颞动脉炎、溃疡性结肠炎、葡萄膜炎、白癜风和韦格纳氏肉芽肿。
[0350] 在一些实施例中,妊娠受试者具有患有胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症的先前胎儿或新生儿的病史。
[0351] 在一些实施例中,在从妊娠受试者获得的生物样品(例如,血样或尿样)中检测与免疫疾病相关的致病性抗体。
[0352] 在一些实施例中,本专利申请的分离的抗FcRn抗体结合啮齿类动物,例如小鼠或大鼠FcRn。在一些实施例中,本专利申请的分离的抗FcRn抗体以小于200、150、100、50或
40pM的KD结合啮齿类动物,例如小鼠或大鼠FcRn。
[0353] 定义
[0354] 本文的术语“抗体”以最广泛的含义使用,并且涵盖各种抗体结构,包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(例如,双特异性抗体)和抗体
片段,只要它们显示出FcRn抗原结合活性。
[0355] “抗体片段”包含完整抗体的一部分,优选完整抗体的抗原结合区或可变区。抗体片段的例子包括Fab、Fab’、F(ab’)2和Fv片段、双抗体、线性抗体、单链抗体分子和多特异性抗体。
[0356] 如本文使用的,术语“分离的抗体”指已从其制造宿主细胞环境的组分中分离和/或回收的抗体。其制造宿主细胞环境的污染组分是将干扰抗体的研究、诊断或
治疗用途的
材料。污染组分可以包括酶、
激素和其它蛋白质或非蛋白质溶质。在一些实施例中,将抗体纯化至(1)如通过例如Lowry方法测定的,按重量计大于95%的抗体,并且在一些实施例中,按重量计大于99%;(2)通过使
用例如旋转杯测序仪,足以获得N末端或内部氨基酸序列的
至少15个残基的程度,或(3)使用例如考马斯蓝或
银染色,在还原或非还原条件下,通过
SDS-PAGE的同质性。分离的抗体包括重组细胞内的原位抗体。然而,通常,通过至少一个纯化步骤制备分离的抗体。如通过由FDA“Guidance for Industry”文件推荐执行的基于
ELISA的HCP测定确定的,分离抗体的药物制剂通常具有小于250ppm(例如,小于200ppm、
150ppm、100ppm)的宿主细胞蛋白(HCP)。
[0357] 如本文使用的,术语“单克隆抗体”指从基本上同质的抗体群体获得的抗体,即群体中的各个抗体具有相同的一级序列,除了可能以少量存在的可能的天然存在的突变。单克隆抗体是高度特异性的,并且针对单个抗原位点(即,在人FcRn上的表位)。与通常包括针对不同表位的不同抗体的多克隆抗体制剂相反,每种单克隆抗体针对抗原上的单个表位。
修饰语“单克隆”指示抗体的特征是从基本上同质的抗体群体获得的,并且不应解释为需要通过任何特定方法的抗体生产。
[0358] 如本文使用的,术语“可变区”和“可变结构域”指抗体的轻链和重链的各部分,其包括互补决定区(CDR,例如CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3)和构架区(FR)的氨基酸序列。根据本公开内容中使用的方法,分配给CDR和FR的氨基酸位置根据Kabat(Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版Public Health
Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD.(1991))限定。使用该编号系统,实际的线性氨基酸序列可以含有较少或另外的氨基酸,其对应于可变区的CDR(在本文中进
一步定义)或FR(在本文中进一步定义)的缩短或插入。例如,重链可变区可以包括在CDR H2的残基52之后的单个插入的残基(即,根据Kabat的残基52a)、以及在重链FR的残基82之后
插入的残基(即,根据Kabat的残基82a、82b、82c等)。通过在抗体序列的同源性区域处与“标准”Kabat编号序列的比对,对于给定抗体可以确定残基的Kabat编号。
[0359] 如本文使用的,术语“互补决定区”和“CDR”指抗体可变结构域的区域,其在序列中是高变的和/或形成结构上限定的环。CDR也称为高变区。轻链可变区和重链可变区各自具有三个CDR。轻链可变区含有CDR L1、CDR L2和CDR L3。重链可变区含有CDR H1、CDR H2和CDR H3。每个CDR可以包括来自如通过Kabat定义的互补决定区的氨基酸残基(即,轻链可变区中的残基24-34(CDR L1)、50-56(CDR L2)和89-97(CDR L3),以及重链可变区中的约残基
31-35(CDR H1)、50-65(CDR H2)和95-102(CDR H3)。
[0360] 如本文使用的,术语“FcRn”指与IgG抗体例如IgG1抗体的Fc区结合的新生儿Fc受体。示例性FcRn是具有UniProt ID编号P55899的人FcRn。人FcRn被认为通过结合组成性内
化的IgG且将其运输回细胞表面用于IgG的再循环,负责维持IgG的
半衰期。
[0361] 如本文使用的,术语“亲和力”和“结合亲和力”指两个分子之间的结合相互作用的强度。一般地,结合亲和力指分子的单个结合位点与其结合配偶体(例如分离的抗体及其靶)(例如,分离的抗FcRn抗体和人FcRn)之间的非共价相互作用的总和的强度。除非另有说明,否则结合亲和力指内在结合亲和力,其反映结合对的成员之间的1:1相互作用。两个分子之间的结合亲和力通常通过解离常数(KD)或亲和常数(KA)来描述。对于彼此具有低结合
亲和力的两种分子一般缓慢结合,趋于易于解离,并且显示出大KD。对于彼此具有高亲和力的两种分子一般容易结合,趋于保持更长的结合,并且显示出小KD。用于确定抗体与人FcRn的KD的一种方法在实例2中描述(“SPR(表面等离振子共振)方法”)。使用该方法,N022、
N023、N024、N026和N027的KD分别为31、31.4、35.5、36.5和19.3pM。
[0362] 如本文使用的,术语“抑制IgG与FcRn的结合”指抗FcRn抗体阻断或抑制IgG(例如IgG1)与人FcRn结合的能力。在一些实施例中,抗FcRn抗体例如在人FcRn上IgG与之结合的
位点处结合FcRn。因此,抗FcRn抗体能够抑制IgG(例如,受试者的自身抗体)与FcRn的结合。
在一些实施例中,分子(例如,抗FcRn抗体)基本上或完全抑制与IgG的结合。在一些实施例中,IgG的结合降低10%、20%、30%、50%、70%、80%、90%、95%或甚至100%。
[0363] 如本文使用的,术语“抑制致病性抗体与FcRn的结合”指抗FcRn抗体阻断或抑制致病性抗体(例如致病性IgG抗体)与人FcRn结合的能力。在一些实施例中,抗FcRn抗体例如在人FcRn上致病性抗体与之结合的位点处结合FcRn。因此,抗FcRn抗体能够抑制致病性抗体(例如,致病性IgG抗体)与FcRn的结合。在一些实施例中,分子(例如,抗FcRn抗体)基本上或完全抑制与致病性抗体的结合。在一些实施例中,致病性抗体与FcRn的结合降低10%、
20%、30%、50%、70%、80%、90%、95%或甚至100%。
[0364] 如本文使用的,术语“疏水性氨基酸”指具有相对低
水溶性的氨基酸。疏水性氨基酸是甘氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、
色氨酸、缬氨酸和脯氨酸。本公开内容中特别优选的疏水性氨基酸是丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸。
[0365] 如本文使用的,术语“极性氨基酸”指由具有不同电负性的
原子诱导的
侧链具有化学极性的氨基酸。极性氨基酸的极性取决于氨基酸的侧链中的原子之间的电负性和侧链结构的不对称性。极性氨基酸是丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、组氨酸、甲硫氨酸、酪氨酸、色氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺。本公开内容中特别优选的极性氨基酸是丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸和酪氨酸。
[0366] 如本文使用的,术语“酸性氨基酸”指其侧链含有pKa在3.5和4.5之间的
羧酸基团的氨基酸。酸性氨基酸是天冬氨酸和谷氨酸。
[0367] 如本文使用的,术语“碱性氨基酸”指其侧链含有pKa在9.5和13之间的氨基的氨基酸。碱性氨基酸是组氨酸、赖氨酸和精氨酸。
[0368] 如本文使用的,术语“同一性百分比(%)”指在比对序列并且在需要时引入缺口以实现最大同一性百分比后(即,可以在候选序列和参考序列之一或两者中引入缺口用于最佳比对,并且可以忽略非同源序列用于比较目的),与参考序列(例如野生型抗FcRn抗体)的氨基酸(或核酸)残基相同的候选序列(例如抗FcRn抗体)的氨基酸(或核酸)残基的百分比。
用于确定同一性百分比目的的比对可以以在本领域技术范围内的各种方式实现,例如,使
用可公开获得的计算机
软件,例如BLAST、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可确定用于测量比对的适当参数,包括在待比较的序列的全长上实现最大比对所需的任
何
算法。在一些实施例中,如下计算给定候选序列和、与或针对给定参考序列的氨基酸(或核酸)序列同一性百分比(其可以可替代地表达为和、与或针对给定参考序列具有或包括一
定氨基酸(或核酸)序列同一性百分比):
[0369] 100x(A/B的分数)
[0370] 其中A是在候选序列和参考序列的比对中评分为相同的氨基酸(或核酸)残基的数目,并且其中B是参考序列中氨基酸(或核酸)残基的总数。在其中候选序列的长度不等于参考序列的长度的一些实施例中,候选序列与参考序列的氨基酸(或核酸)序列同一性百分比
不等于参考序列与候选序列的氨基酸(或核酸)序列同一性百分比。
[0371] 在特定实施例中,用于与候选序列比较而比对的参考序列可以显示,跨越候选序列的全长或候选序列的连续氨基酸(或核酸)残基的
选定部分,候选序列显示出50%至
100%的同一性。用于比较目的而比对的候选序列的长度为参考序列长度的至少30%,例如至少40%,例如至少50%、60%、70%、80%、90%或100%。当候选序列中的位置被与参考序列中的相应位置相同的氨基酸(或核酸)残基占据时,则该分子在该位置处是相同的。可以
通过取代、缺失或插入来改变位置。取代、缺失或插入可以包含一定数目的氨基酸(例如,1、
2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15个或更多)。当描述不超过n个氨基酸的取代、缺失或插入时,这意味着取代、缺失或插入包括例如1、2、3、4、5、6、7、8、9,10、11、12、13、14、
15、......或n个氨基酸。取代、缺失或插入的数目可以包括总序列的百分比(例如,1%、
5%、10%、15%、20%或更多),其中所述取代、缺失或插入的数目改变总序列中氨基酸的
5%、10%、15%、20%或更多。如本文使用的,术语“胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症”指胎儿和/或新生儿中由针对胎儿和/或新生儿抗原的母体抗体(例如,致病性母体抗体)的胎盘转移引起的免疫病症。例如,妊娠受试者的抗体(例如,致病性抗体)可以针对胎儿中的抗原(例如,胎儿从胎儿的父亲遗传的抗原)反应。本文提供了胎儿和新生儿同
种免疫病症和/或自身免疫病症的例子。
[0372] 如本文使用的,术语“致病性抗体”指在受试者(例如,妊娠受试者)、妊娠受试者中的胎儿和/或新生儿中引起一种或多种免疫疾病或病症的抗体。在一些实施例中,致病性抗体是在受试者(例如,妊娠受试者)中针对一种或多种受试者的自身蛋白质产生的自身抗体,因此引起受试者中的自身免疫疾病或病症。在一些实施例中,妊娠受试者中的致病性抗体可以通过胎盘转移至胎儿,并且针对胎儿中的抗原(例如,胎儿从胎儿的父亲遗传的抗
原)反应,因此引起例如胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症。
[0373] 如本文使用的,术语“抗体介导的病毒性疾病增强”指这样的病毒性疾病,其中所述抗体可以促进病毒进入宿主细胞内,因此导致细胞中的感染性增加或增强。在一些实施例中,抗体可以与病毒表面蛋白结合,并且抗体/病毒复合物可以通过抗体和受体之间的相互作用与细胞表面上的FcRn受体结合。随后,抗体/病毒复合物可以变得内化到细胞内。
[0374] 如本文使用的,术语“宿主细胞”指包括从其相应核酸表达蛋白质所需的必要细胞组分(例如细胞器)的媒介物。核酸通常包括在核酸载体中,所述核酸载体可以通过本领域已知的常规技术(例如转化、
转染、电穿孔、
磷酸钙沉淀、直接显微注射等)引入宿主细胞内。
宿主细胞可以是原核细胞例如细菌细胞,或真核细胞例如
哺乳动物细胞(例如CHO细胞)。如本文所述,宿主细胞用于表达编码抗FcRn抗体的一种或多种多肽。
[0375] 如本文使用的,术语“载体”指能够转运它已与之连接的另一种核酸分子的核酸分子。一种类型的载体是“质粒”,其指另外的DNA区段可连接到其内的环状双链DNA环。另一种类型的载体是
噬菌体载体。另一种类型的载体是病毒载体,其中另外的DNA区段可以连接到病毒基因组内。某些载体能够在它们已引入其内的宿主细胞中自主复制(例如,具有细菌复制起点的细菌载体和附加型哺乳动物载体)。其它载体(例如,非附加型哺乳动物载体)可在引入宿主细胞内之后整合到宿主细胞的基因组内,并且从而连同宿主基因组一起复制。此外,某些载体能够指导它们与之可操作地连接的基因的表达。此类载体在本文中称为“重组表达载体”(或简称为“重组载体”)。一般而言,在重组DNA技术中有用的表达载体通常为质粒的形式。
[0376] 如本文使用的,术语“受试者”指哺乳动物,例如优选人。哺乳动物包括但不限于人以及驯养动物和农场动物,例如猴子(例如食蟹猴)、小鼠、犬、猫、马和牛等。
[0377] 如本文使用的,术语“药物组合物”指医学或药物制剂,其含有活性成分以及一种或多种赋形剂和稀释剂,以致使活性成分适合于施用方法。药物组合物包括与抗FcRn抗体相容的药学可接受的组分。药物组合物可以是用于静脉内或皮下施用的水性形式,或者用
于经口施用的片剂或胶囊形式。
[0378] 如本文使用的,术语“药学可接受的载体”指药物组合物中的赋形剂或稀释剂。药学可接受的载体必须与制剂的其它成分相容并且对接受者无害。药学可接受的载体必须为Fc构建体提供足够的药物
稳定性。载体的性质因施用模式而异。例如,对于静脉内施用,一般使用水溶液载体;对于经口施用,固体载体是优选的。
[0379] 如本文使用的,术语“治疗有效量”指有效诱导受试者或患者中的所需生物效应或者有效治疗患有本文所述状况或病症的患者的量,例如药物剂量。本文还应理解,“治疗有效量”可以解释为给予所需疗效的量,以单个剂量或任何剂量或途径服用,单独服用或与其它治疗剂组合服用。
[0380] 如本文使用的,术语“不超过”指小于等于的量。这可能是以整数的量。例如,不超过两个取代可以指0、1或2个取代。
[0381] 如本文使用的,术语“治疗(treatment)”或“治疗(treating)”指减少特定疾病或状况、降低特定疾病或状况、降低特定疾病或状况的风险、或者降低特定疾病或状况的
副作用。减少、降低、降低风险或降低副作用是相对于未接受治疗的受试者,例如,对照、基线或已知的对照水平或测量。
附图说明
[0382] 图1显示了两个图和表,其显示了在pH 6.0下,抗体N022-N024、N026和N027与人或食蟹猴FcRn的IgG竞争性结合。
[0383] 图2显示了图,其显示了抗体N023、N024、N026和N027对转基因小鼠中的IgG分解代谢的作用。
[0384] 图3显示了图,其显示了抗体N027对转基因小鼠中的IgG水平和靶占据的剂量依赖性作用。
[0385] 图4A-4C显示了图,其显示了在施用不同剂量的抗体N027后,在食蟹猴中的IgG分解代谢和靶占据的选择性诱导。
[0386] 图5显示了图,其显示了转基因小鼠中N027的生物分布。
[0387] 图6显示了实验
时间线和图,其显示了N027在转基因小鼠中的小鼠胶原抗体诱导的关节炎模型中的功效。
[0388] 图7显示了实验时间线和两个图,其显示了N027在转基因小鼠中的小鼠慢性特发性血小板减少性紫癜(ITP)模型中的功效。
[0389] 图8A-8C显示了图,其分别显示了在主动脉内皮细胞、静脉内皮细胞和胎盘滋养母细胞中,用N027实现的剂量依赖性FcRn占据。
[0390] 图9A-9C显示了图,其分别显示了通过N027的100%FcRn占据导致主动脉内皮细胞、静脉内皮细胞和胎盘滋养母细胞中的细胞内IgG积累增加。
[0391] 图10显示了图,其显示了通过N027实现100%FcRn占据所花费的时间量。
[0392] 图11A和11B显示了图,其分别显示了N027处理不改变人内皮细胞和绒毛滋养层细胞中的FcRn周转率。
[0393] 图12A和12B显示了
定位于人内皮和绒毛滋养层细胞的内体中的FcRn的图像。
[0394] 图13A和13B分别显示了N027处理对人内皮细胞和人胎盘滋养细胞中的IgG运输动力学的作用的图。
[0395] 图13C和13D显示了图像,其显示了N027增加细胞内IgG和IgG与溶酶体(溶酶体标记物:Lamp-1和葡聚糖)的共定位。
[0396] 图14显示了FcRn上的N027Fab结合位点与Fc和
白蛋白结合位点的比较图像。Fab和Fc结合位点彼此重叠,但不同于白蛋白结合位点。
[0397] 图15显示了N027Fab表面上的表位(左)和FcRn表面上的互补位(右)的图像。
[0398] 图16显示了映射到序列的N027Fab:FcRn表位和互补位。
[0399] 图17为显示了安替比林经过四小时灌注的胎盘转移的图(n=14)。数据表示在t=0时100μg/ml安替比林的母体施用后,作为胎儿(正方形)和母体(圆形)循环中的平均值±
标准差(SD)的安替比林浓度。
[0400] 图18是显示了N027经过四小时灌注的胎盘转移的图。数据表示在t=0时
指定浓度的N027的母体施用后,作为胎儿和母体循环中的平均值±SD的N027浓度。
[0401] 图19是显示了在妊娠期间用N027治疗后的母体IgG浓度的图。
[0402] 图20是显示了在妊娠期间用N027治疗母亲后的胎儿IgG水平的图。
具体实施方式
[0403] 本公开内容的特征在于以高亲和力结合人新生儿Fc受体(FcRn)的分离的抗体。本公开内容的特征在于抗FcRn抗体,用于制备抗FcRn抗体的方法和组合物,以及用于阻断
FcRn活性、减少基于免疫复合物的免疫应答激活和治疗免疫疾病的方法。此外,抗FcRn抗体可以用于降低跨越妊娠受试者胎盘的致病性抗体转运、增加妊娠受试者中的致病性抗体分
解代谢、以及治疗胎儿或新生儿中的抗体介导的病毒性疾病增强。
[0404] I.抗FcRn抗体
[0405] 一般而言,本公开内容的特征在于与人FcRn结合的分离的抗体。抗FcRn抗体指可以与人FcRn结合且抑制IgG(例如,IgG自身抗体或致病性抗体)与FcRn结合的抗体。在一些
实施例中,抗体是单克隆抗体。在其它实施例中,抗体是多克隆抗体。在一些实施例中,抗体是IgG1。在一些实施例中,抗体包括λ轻链。在一些实施例中,抗体是唾液酸化的抗体。在一些实施例中,抗体选自
嵌合抗体、亲和力成熟的抗体、人源化抗体和人抗体。在某些实施例中,抗体是抗体片段,例如Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2或scFv。
[0406] 在一些实施例中,抗体是嵌合抗体。例如,抗体含有来自非人供体的抗原结合序列,所述非人供体被移植到异源非人、人或人源化序列(例如,构架和/或恒定结构域序列)。
在一个实施例中,非人供体是小鼠。在另一个实施例中,抗原结合序列是合成的,例如通过诱变(例如噬菌体展示筛选等)获得。在进一步的实施例中,嵌合抗体具有非人(例如小鼠)
可变区和人恒定区。在一个例子中,小鼠轻链可变区与人κ轻链融合。在另一个例子中,小鼠重链可变区与人IgG1恒定区融合。
[0407] 在一些实施例中,当描述抗体的CDR序列时,抗体定义为包括一组6个CDR序列。包括一组CDR序列描述了由这些CDR序列组成、包含这些CDR序列、或基本上由这些CDR序列组
成的抗体。
[0408] 在一个方面,本公开内容的特征在于结合人新生儿Fc受体(FcRn)的分离的抗体,该分离的抗体包括:(1)包括CDR L1、CDR L2和CDR L3的轻链可变区,以及(2)包括CDR H1、CDR H2和CDR H3的重链可变区,其中所述CDR L1包括序列SDVGSYNL(SEQ ID NO:33)或VG_
YNL(SEQ ID NO:34),其中“_”可以是任何氨基酸,所述CDR L2包括序列GDSE(SEQ ID NO:
35),所述CDR L3包括序列YAGSGIY(SEQ ID NO:36),所述CDR H1包括序列TYA(SEQ ID NO:
37),所述CDR H2包括序列SIGASGSQTR(SEQ ID NO:38)或SI_AS_SQ_R(SEQ ID NO:39),其中“_”可以是任何氨基酸,并且所述CDR H3包括序列LAI(SEQ ID NO:40),以及任选地,其中(a)CDR L1具有缺失或者具有相对于TGTGSDVGSYNLVS(SEQ ID NO:1)的序列的超过两个氨
基酸取代,(b)CDR L2具有缺失或者具有相对于GDSERPS(SEQ ID NO:2)的序列的超过一个
氨基酸取代,(c)CDR L3具有缺失或者具有相对于SSYAGSGIYV(SEQ ID NO:3)的序列的超过
一个氨基酸取代,(d)CDR H1具有缺失或者具有相对于TYAMG(SEQ ID NO:4)、DYAMG(SEQ ID NO:5)和NYAMG(SEQ ID NO:6)的每个序列的超过一个氨基酸取代,(e)CDR H2具有缺失或者
具有相对于SIGSSGAQTRYADS(SEQ ID NO:7)、SIGASGSQTRYADS(SEQ ID NO:8)、
SIGASGAQTRYADS(SEQ ID NO:9)和SIGASGGQTRYADS(SEQ ID NO:10)的每个序列的超过两个
氨基酸取代,或(f)CDR H3具有缺失或者具有相对于LAIGDSY(SEQ ID NO:11)的序列的超过
一个氨基酸取代。在一些实施例中,分离的抗体包含在Kabat位置66-68处的氨基酸序列
KSG。
[0409] 在另一个方面,本公开内容的特征在于与人FcRn结合的分离的抗体,其中所述抗体结合FcRn上的表位,其包含选自SEQ ID NO:30的K80、A81、L82、G83、G84、K85、G86、P87、Y88、L112、N113、E115、G129、D130、W131、P132、E133、L135、A136和Q139中的至少一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个、十八个、十九个或二十个氨基酸,其分别对应于野生型FcRn的氨基酸K103、A104、L105、G106、G107、K108、G109、P110、Y111、L135、N136、E138、G152、D153、W154、P155、E156、L158、A159、Q162。在一些实施例中,FcRn上的表位不包含E115,其对应于野生型FcRn的氨基酸E138。
[0410] 在另一个方面,本公开内容的特征在于分离的抗体,其结合β2-微球蛋白上的表位,所述表位包含选自I21、Q22、P52和V105的至少一个氨基酸。
[0411] 在另一个方面,本公开内容的特征在于与FcRn结合的分离的抗体,其中所述抗体与以下结合:(a)KQGTWGGDWPEAL(SEQ ID NO:25)的序列的至少一个氨基酸;(b)
FKALGGKGPYTL(SEQ ID NO:26)的序列的至少一个氨基酸,其中所述抗体抑制IgG与人FcRn
的结合。
[0412] 本公开内容的特征还在于与人FcRn结合的分离抗体,其中所述抗体结合KQGTWGGDWPEAL(SEQ ID NO:25)的序列的至少一个氨基酸,其中所述抗体结合SEQ ID NO:
25的氨基酸残基5、12或13中的至少一个,并且其中所述抗体抑制IgG与人FcRn的结合。
[0413] 本公开内容的特征还在于与人FcRn结合的分离的抗体,其中所述抗体结合KQGTWGGDWPEAL(SEQ ID NO:25)的序列的至少一个氨基酸,其中所述抗体不结合由序列
EFMNFDLKQGT(SEQ ID NO:27)或EEFMNFDL(SEQ ID NO:28)的序列组成的肽,并且其中所述
抗体抑制IgG与人FcRn的结合。
[0414] 在一些实施例中,本文所述的抗FcRn抗体结合WGGDWPEAL(SEQ ID NO:29)的序列的至少一个氨基酸。在一些实施例中,抗FcRn抗体结合SEQ ID NO:25的至少氨基酸残基5。
在一些实施例中,抗FcRn抗体结合SEQ ID NO:25的至少氨基酸残基12。在一些实施例中,抗FcRn抗体结合SEQ ID NO:25的至少氨基酸残基13。
[0415] 在一些实施例中,抗FcRn抗体结合FKALGGKGPYTL(SEQ ID NO:26)的序列的至少一个氨基酸。抗FcRn抗体还可以结合FKALGGKGPYTL(SEQ ID NO:26)的序列的至少两个氨基
酸。
[0416] 在另一个方面,本公开内容的特征还在于与人FcRn结合的分离的抗体,其中所述抗体结合FKALGGKGPYTL(SEQ ID NO:26)的序列的至少一个氨基酸,并且其中所述抗体抑制
IgG与人FcRn的结合。
[0417] 在该方面的一些实施例中,抗FcRn抗体结合FKALGGKGPYTL(SEQ ID NO:26)的序列的至少两个氨基酸。在一些实施例中,抗FcRn抗体还结合KQGTWGGDWPEAL(SEQ ID NO:25)的序列的至少一个氨基酸。在一些实施例中,抗FcRn抗体还结合KQGTWGGDWPEAL(SEQ ID NO:
25)的序列的至少两个氨基酸。在一些实施例中,抗FcRn抗体结合SEQ ID NO:25的氨基酸残基5、12或13中的至少一个。在一些实施例中,抗FcRn抗体结合SEQ ID NO:25的至少氨基酸残基5。在一些实施例中,抗FcRn抗体结合SEQ ID NO:25的至少氨基酸残基12。在一些实施例中,抗FcRn抗体结合SEQ ID NO:25的至少氨基酸残基13。
[0418] 在另一个方面,本公开内容的特征在于能够结合人FcRn的分离的抗体。分离的抗体含有:(1)包括CDR L1、CDR L2和CDR L3的轻链可变区,以及(2)包括CDR H1、CDR H2和CDR H3的重链可变区,其中所述CDR L1具有与TGTGSDVGSYNLVS(SEQ ID NO:1)的序列具有至少
92%同一性的序列,所述CDR L2具有与GDSERPS(SEQ ID NO:2)的序列具有至少85%同一性
的序列,所述CDR L3具有与SSYAGSGIYV(SEQ ID NO:3)的序列具有至少90%同一性的序列,所述CDR H1具有与TYAMG(SEQ ID NO:4)、DYAMG(SEQ ID NO:5)或NYAMG(SEQ ID NO:6)的序
列具有至少80%同一性的序列,所述CDR H2具有与SIGSSGAQTRYADS(SEQ ID NO:7)、
SIGASGSQTRYADS(SEQ ID NO:8)、SIGASGAQTRYADS(SEQ ID NO:9)、SIGASGGQTRYADS(SEQ ID NO:10)、TIGSSGAQTRYADS(SEQ ID NO:41)、SIGASGSQTRYADS(SEQ ID NO:42)、
TIGASGAQTRYADS(SEQ ID NO:43)、或TIGASGGQTRYADS(SEQ ID NO:32)的序列具有至少92%
同一性的序列,并且所述CDR H3具有与LAIGDSY(SEQ ID NO:11)的序列具有至少85%同一
性的序列。在一些实施例中,抗体以小于200、150、100、50或40pM的KD结合人FcRn。在一些实施例中,抗体以小于或等于(例如,小于)具有N022、N023、N024、N026或N027的轻链可变区和重链可变区的抗体那种的KD结合人FcRn,并且还具有与待比较的抗体相同的Fc区。
[0419] 在一些实施例中,分离的抗体具有以下:包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成、具有以下的CDR L1:X1GTGSDVGSYNX2VS(SEQ ID NO:12)的序列,包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成、具有以下的CDR L2:GDX3X4RPS(SEQ ID NO:13)的序列,包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成、具有以下的CDR L3:X5SYX6GSGIYV(SEQ ID NO:14)的序列,包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成、具有以下的CDRH1:Z1YAMG(SEQ ID NO:15)的序列,包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成、具有以下的CDR H2:Z7IGZ2SGZ3QTZ4YADS(SEQ ID NO:16)的序列,以及包括以下、包含以下、由以下组成、或基本上由以下组成、具有以下的CDR H3:LAZ5Z6DSY(SEQ ID NO:17)的序列,其中X1为极性或疏水性氨基酸(例如,优选T、A、S或I),X2为疏水性氨基酸(例如,优选L或I),X3为极性氨基酸(例如,优选S、N或T),X4为极性或酸性氨基酸(例如,优选Q、E或N),X5为极性或疏水性氨基酸(例如,优选C、S、I或Y),X6为疏水性氨基酸(例如,优选A或V),Z1为极性或酸性氨基酸(例如,优选E、T、D或N),Z2为极性或疏水性氨基酸(例如,优选S或A),Z3为G、S或A,Z4为碱性氨基酸(例如,优选K或R),Z5为疏水性或碱性氨基酸(例如,优选I、L或H),Z6为G、S、D、Q或H,并且Z7为S或T,并且其中所述抗体以小于200、150、100、50或40pM的KD结合人FcRn。
[0420] 在其它实施例中,分离的抗体具有以下:具有TGTGSDVGSYNLVS(SEQ ID NO:1)的序列的CDRL1,具有GDSERPS(SEQ ID NO:2)的序列的CDR L2,具有SSYAGSGIYV(SEQ ID NO:3)
的序列的CDR L3,具有Z1YAMG(SEQ ID NO:15)的序列的CDR H1,具有Z7IGZ2SGZ3QTRYADS
(SEQ ID NO:18)的序列的CDRH2,
[0421] 以及具有LAIGDSY(SEQ ID NO:11)的序列的CDR H3,其中Z1为T、D或N,Z2为S或A,Z3为G、S或A,并且Z7为S或T。
[0422] 表1显示了一些示例性抗FcRn抗体的轻链和重链互补决定区(CDR)的氨基酸序列。
[0423] 表1
[0424]
[0425]
[0426] 表2显示了这些示例性抗FcRn抗体的轻链可变区和重链可变区的SEQ ID NO。
[0427] 表2
[0428]
[0429]
[0430] 在一些实施例,分离的抗体的轻链可变区具有与以下序列具有至少90%同一性的序列
[0431] QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTGSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKLMIYGDSERPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYAGSGIYVFGTGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFY
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ID NO:19)。
[0432] 在一些实施例,分离的抗体的重链可变区具有与以下序列具有至少90%同一性的序列
[0433] EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGSSGAQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCL
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[0434] 在一些实施例,分离的抗体的重链可变区具有与以下序列具有至少90%同一性的序列
[0435] EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGASGSQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCL
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[0436] 在一些实施例,分离的抗体的重链可变区具有与以下序列具有至少90%同一性的序列
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[0438] 在其它实施例,分离的抗体的重链可变区具有与以下序列具有至少90%同一性的序列
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[0440] 在另外其它实施例,分离的抗体的重链可变区具有与以下序列具有至少90%同一性的序列
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[0445] 本公开内容的特征在于包括轻链可变区和重链可变区的分离的抗体,其中所述轻链可变区具有与以下序列具有至少90%同一性的序列
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[0448] 本公开内容的特征在于包括轻链可变区和重链可变区的分离的抗体,其中所述轻链可变区具有与以下序列具有至少90%同一性的序列
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[0451] 本公开内容的特征在于包括轻链可变区和重链可变区的分离的抗体,其中所述轻链可变区具有与以下序列具有至少90%同一性的序列
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[0454] 本公开内容的特征在于包括轻链可变区和重链可变区的分离的抗体,其中所述轻链可变区具有与以下序列具有至少90%同一性的序列
[0455] QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTGSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKLMIYGDSERPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYAGSGIYVFGTGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFY
PGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHKSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS(SEQ
ID NO:19);并且所述重链可变区具有与以下序列具有至少90%同一性的序列
[0456] EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGASGSQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCL
VKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCD
KTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYA
STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFY
PSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ
ID NO:24)。
[0457] 此外,在本文所述的任何抗FcRn抗体中,抗体的重链可变区具有与SEQ ID NO:20-24中任何一个的序列具有至少95%、97%、99%或100%同一性的序列。在本文所述的任何抗FcRn抗体中,轻链可变区具有与SEQ ID NO:19的序列具有至少95%、97%、99%或100%同一性的序列。
[0458] 抗体还可以含有在CDR外(即,在构架区(FR)中)的氨基酸取代、添加和/或缺失。氨基酸取代、添加和/或缺失可以是一个或多个氨基酸(例如,1、2、3、4、5、6、7、8个或更多个)的取代、添加和/或缺失。氨基酸取代、添加和/或缺失可以是八个或更少、七个或更少、六个或更少、五个或更少、四个或更少、三个或更少、或者两个或更少氨基酸的取代、添加和/或缺失。在一些实施例中,抗体还可以包括下述氨基酸取代中的任何一个或多个:相对于SEQ ID NO:20-24中任何一个的序列的A23V、S30R、L80V、A84T、E85D、A93V,以及相对于SEQ ID NO:19的序列的Q38H、V58I和G99D。
[0459] 在一些实施例中,抗体可以包括在抗体的恒定区(例如,Fc区)中的氨基酸取代、添加和/或缺失,其例如导致降低的效应子功能,例如,降低的补体依赖性细胞溶解(CDC)、抗体依赖性细胞介导的细胞溶解(ADCC)和/或抗体依赖性细胞介导的吞噬作用(ADCP)、和/或降低的B细胞杀伤。恒定区不直接涉及抗体与其靶的结合,但显示出各种效应子功能,例如抗体参与抗体依赖性细胞毒性。在一些实施例中,抗体的特征在于对天然杀伤(NK)细胞上
的人补体因子C1q和/或人Fc受体降低的结合(即,结合的不存在)。在其它实施例中,抗体的特征在于与人FcγRI、FcγRIIA和/或FcγRIIIA降低的结合(即,结合的不存在)。为了改变或减少抗体依赖性效应子功能,例如CDC、ADCC、ADCP和/或B细胞杀伤,抗体可以是IgG类别,并且含有一个或多个氨基酸取代E233、L234、G236、D265、D270、N297、E318、K320、K322、A327、A330、P331和/或P329(编号根据欧洲Kabat指数(Sequences of Proteins of
Immunological Interest,第5版Public Health Service,National Institutes
ofHealth,Bethesda,MD.(1991)))。在一些实施例中,抗体含有突变L234A/L235A或D265A/
N297A。优选地,相对于SEQ ID NO:20-24中任何一个的序列,抗FcRn抗体含有氨基酸取代
N297A,使得抗体变为无糖基化形式。所得到的无效抗体显示与补体或Fc受体的非常少的结合(即,补体C1q结合),指示低CDC潜力。
[0460] 在其它实施例中,抗体可以包括具有改善抗体稳定性的特定氨基酸改变的抗体。
[0461] 此外,在其它实施例中,为了使潜在的免疫原性最小化,一些抗体,例如N024、N026和N027,可以通过将氨基酸D355和L357(相对于SEQ ID NO:20-24中任何一个的序列)分别取代为谷氨酸和甲硫氨酸,经历从G1m17.1到G1m17的同种异型改变。
[0462] 在其它实施例中,抗体(例如,N022-N024、N026和N027)不含有C末端赖氨酸,例如相对于SEQ ID NO:20-24中任何一个的序列在残基446处的C末端赖氨酸。
[0463] 本公开内容的特征在于含有轻链可变区和重链可变区的分离的抗体,其中所述轻链可变区具有序列
[0464] QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTGSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKLMIYGDSERPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYAGSGIYVFGTGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFY
PGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHKSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS(SEQ
ID NO:19);并且所述重链可变区具有以下序列
[0465] EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGSSGAQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCL
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ID NO:20)。
[0466] 本公开内容的特征在于含有轻链可变区和重链可变区的分离的抗体,其中所述轻链可变区具有序列
[0467] QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTGSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKLMIYGDSERPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYAGSGIYVFGTGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFY
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ID NO:19);并且所述重链可变区具有以下序列
[0468] EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGASGSQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCL
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ID NO:21)。
[0469] 本公开内容的特征在于含有轻链可变区和重链可变区的分离的抗体,其中所述轻链可变区具有QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTGSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKLMIYGDSERPSGVSNRF
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SDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHKSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
(SEQ ID NO:19)的序列;并且所述重链可变区具有以下序列
[0470] EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGASGAQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCL
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ID NO:22)。
[0471] 本公开内容的特征在于含有轻链可变区和重链可变区的分离的抗体,其中所述轻链可变区具有QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTGSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKLMIYGDSERPSGVSNRF
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(SEQ ID NO:19)的序列;并且所述重链可变区具有以下序列
[0472] EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGASGGQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCL
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ID NO:23)。
[0473] 本公开内容的特征在于含有轻链可变区和重链可变区的分离的抗体,其中所述轻链可变区具有QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTGSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKLMIYGDSERPSGVSNRF
SGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYAGSGIYVFGTGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLI
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(SEQ ID NO:19)的序列;并且所述重链可变区具有以下序列
[0474] EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGASGSQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCL
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ID NO:24)。
[0475] 在另外其它实施例中,抗体是唾液酸化的抗体。
[0476] 在本文所述的任何抗FcRn抗体中,在一些实施例中,抗体以小于200、150、100、50或40pM的KD结合小鼠或大鼠FcRn。
[0477] 在本文所述的任何抗FcRn抗体中,在一些实施例中,抗体以1-100、5-150、5-100、5-75、5-50、10-50或10-40pM的亲和力结合人FcRn。
[0478] 抗FcRn抗体可以是免疫球蛋白抗体同种型IgG、IgE、IgM、IgA或IgD。优选地,抗FcRn抗体是免疫球蛋白抗体同种型IgG。抗FcRn抗体也可以是任何免疫球蛋白抗体同种型
亚类。例如,抗FcRn抗体可以是IgG亚类IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。优选地,抗FcRn抗体是亚类IgG1。特别地,抗FcRn抗体含有IgG G1m17或G1m17.1同种异型重链。在一些实施例中,抗
FcRn抗体的轻链可以是κ轻链、λ轻链或κ-λ嵌合轻链。在优选实施例中,抗FcRn抗体含有全长λ轻链。
[0479] 在一些实施例中,抗体(例如,N022-N024、N026和N027,优选N027和/或N024)是单克隆的。抗体也可以是多克隆的、嵌合的、人源化的或全人的。在一些实施例中,抗体可以是亲和力成熟的。在其它实施例中,抗体可以是抗体片段。
[0480] 不受理论束缚,认为抗FcRn抗体与IgG竞争并抑制IgG与人FcRn的结合。通过抗体的氢-氘交换的表位作图指示抗体与FcRn上位于Fc-FcRn相互作用界面中和/或邻近的表位
结合,这提示抗体通过方向抑制阻断IgG与FcRn的结合。此外,表位作图的结合位点远离
FcRn的白蛋白结合位点。
[0481] 在一些实施例中,血清白蛋白结合不受抑制。在一些情况下,在抗FcRn抗体施用后,血清白蛋白水平不降低。
[0482] II.唾液酸化的抗FcRn抗体
[0483] 在一些实施例中,抗FcRn抗体的Fc区的糖基化位点在摩尔
基础上为至少25%、50%、75%或更多唾液酸化的。抗体可以用唾液酸转移酶(ST6Gal-I)唾液酸化,所述唾液酸转移酶以有序的方式唾液酸化底物。具体地,在某些条件下,ST6唾液酸转移酶催化在抗
FcRn抗体Fc区的聚糖α1,3臂上的唾液酸添加,随后为在α1,6臂上的第二个唾液酸添加,随后为来自α1,3臂的唾液酸的去除。
[0484] 分离的抗FcRn抗体可以在制备宿主细胞(例如哺乳动物细胞,例如用ST6唾液酸转移酶共转染或过表达ST6唾液酸转移酶的哺乳动物细胞)中的生产期间进行唾液酸化。在其
它实施例中,分离的抗FcRn抗体可以在从制备宿主细胞纯化后,在体外例如酶促或通过化
学缀合唾液酸化。产生唾液酸化的抗FcRn抗体的方法在PCT公开WO2014/179601中描述。
[0485] III.FcRn抑制
[0486] 人新生儿Fc受体(FcRn)是I型跨膜蛋白,其充当IgG和血清白蛋白结合的细胞内-GG运输蛋白。FcRn在内皮细胞、腔上皮细胞、
肝细胞、足细胞、粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞和NK细胞中表达,但在B细胞或T细胞上不表达。FcRn通过结合组成性内化的IgG且将其运输回细胞表面,来维持IgG的半衰期。通过FcRn的Fc和血清白蛋白两者的结合在早期内体中在pH 6.0下发生,随后将FcRn分选到囊泡内,所述囊泡将FcRn结合的IgG和/或白
蛋白运输回细胞表面,在其中FcRn在pH 7.4下快速释放IgG和/或白蛋白。该运输周期通过
将IgG和白蛋白再循环到循环内且阻止运输至溶酶体用于降解,而维持两者的半衰期。FcRn还捕获上皮细胞中的内化IgG Fc,并且将其双向转运至相对的顶端或基底外侧膜。该功能
允许IgG运输至器官例如胃肠道的腔,或者将IgG或IgG-抗原复合物从腔转运到基质层中的
脉管系统或淋巴组织。
[0487] 为了研究FcRn对IgG稳态的贡献,已对小鼠进行了改造,使得FcRn的轻链和重链的部分已被“敲除”,使得这些蛋白质不被表达(Junghans等人,Proc NatlAcadSci USA 93:
5512,1996)。在这些小鼠中,IgG的血清半衰期和浓度显著降低,提示IgG稳态的FcRn依赖性机制。啮齿类动物模型中的研究,例如上文讨论的那种,提示FcRn功能的阻断可以增加IgG分解代谢,包括致病性自身抗体的那种,从而抑制疾病(例如,自身免疫疾病)发展。FcRn还可以通过将免疫复合物运输至抗原降解和MHC加载区室而促成抗原呈递。
[0488] 母体IgG抗体向胎儿的胎盘转移是在他/她的体液应答无效时,对新生儿提供保护的重要的FcRn依赖性机制。在胎儿生命期间,胎盘的合体滋养层中的FcRn负责将母体IgG抗体转移至胎儿。致病性母体抗体(例如致病性母体IgG抗体)也可以通过与FcRn结合而穿过
胎盘,并且引起胎儿和新生儿中的同种免疫病症和/或自身免疫病症。在一些实施例中,妊娠受试者中的致病性抗体在妊娠受试者的胎儿中引起胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自
身免疫病症。本文所述的抗FcRn抗体(例如,N022-N024、N026和N027,优选N027和/或N024)可以与母体致病性抗体(例如,母体致病性IgG抗体)竞争,并且抑制其与FcRn的结合,从而增加这些致病性抗体的分解代谢且降低其半衰期。
[0489] 本公开内容提供了与人FcRn结合的分离的抗FcRn抗体。抗FcRn抗体可以与其它抗FcRn抗体(例如,IgG、IgG自身抗体)竞争,并且抑制其与FcRn的结合,从而增加其它抗FcRn抗体(例如IgG、IgG自身抗体)的分解代谢且降低其半衰期。抗FcRn抗体可以用于治疗或减
少受试者中的基于免疫复合物的免疫应答激活的方法,例如由自身免疫疾病中的自身抗体
引起的免疫应答。减少免疫应答可以被描述为相对于未接受治疗的受试者(例如,对照受试者)减少免疫应答。抗FcRn抗体还可以通过向妊娠受试者施用与人FcRn结合的分离的抗体,用于降低跨越妊娠受试者的胎盘的致病性抗体转运(例如,致病性母体IgG抗体转运)、增加妊娠受试者中的致病性抗体分解代谢、以及治疗胎儿或新生儿中的抗体介导的病毒性疾病
增强。降低跨越妊娠受试者的胎盘的致病性抗体转运可以描述为相对于未接受治疗的受试
者(例如,对照受试者)降低致病性抗体转运。
[0490] IV.载体、宿主细胞和抗体产生
[0491] 抗FcRn抗体可以从宿主细胞产生。宿主细胞指包括从其相应的核酸表达本文所述多肽和构建体所需的必需细胞组分(例如细胞器)的媒介物。核酸可以包括在核酸载体中,
所述核酸载体可以通过本领域已知的常规技术(例如,转化、转染、电穿孔、磷酸钙沉淀、直接显微注射、感染等)引入宿主细胞内。核酸载体的选择部分取决于待使用的宿主细胞。一般地,优选的宿主细胞具有原核(例如细菌)或真核(例如哺乳动物)起源。
[0492] 核酸载体构建和宿主细胞
[0493] 编码抗FcRn抗体的氨基酸序列的核酸序列可以通过本领域已知的各种方法制备。这些方法包括但不限于寡核苷酸介导的(或定点)诱变和PCR诱变。编码抗FcRn抗体的核酸
分子可以使用标准技术例如基因合成获得。可替代地,可以使用本领域的标准技术(例如
QuikChangeTM诱变),使编码野生型抗FcRn抗体的核酸分子突变,以含有特定的氨基酸取代。
可以使用核苷酸合成仪或PCR技术合成核酸分子。
[0494] 可以将编码抗FcRn抗体的核酸序列插入能够在原核或真核宿主细胞中复制且表达核酸分子的载体内。许多载体是本领域可获得的并且可以使用。每种载体可以含有可以
调整且优化用于与特定宿主细胞的相容性的各种组分。例如,载体组分可以包括但不限于
复制起点、选择标记物基因、启动子、核糖体结合位点、
信号序列、编码目的蛋白质的核酸序列和转录终止序列。
[0495] 在一些实施例中,哺乳动物细胞用作宿主细胞。哺乳动物细胞类型的例子包括但不限于人胚肾(HEK)(例如,HEK293、HEK 293F)、中国仓鼠卵巢(CHO)、HeLa、COS、PC3、Vero、MC3T3、NS0、Sp2/0、VERY、BHK、MDCK、W138、BT483、Hs578T、HTB2、BT20、T47D、NS0(并不内源性产生任何免疫球蛋白链的鼠骨髓瘤细胞系)、CRL7O3O和HsS78Bst细胞。在其它实施例中,大肠杆菌(E.coli)细胞用作宿主细胞。大肠杆菌菌株的例子包括但不限于大肠杆菌294(
31,446)、大肠杆菌λ1776( 31,537,大肠杆菌BL21(DE3)( BAA-
1025)和大肠杆菌RV308( 31,608)。不同的宿主细胞具有用于蛋白质产物的转录后
加工和修饰的特征性和特异性机制。可以选择适当的细胞系或宿主系统,以确保所表达的
抗FcRn抗体的正确修饰和加工。可以使用本领域的常规技术,例如转化、转染、电穿孔、磷酸钙沉淀和直接显微注射,将上述表达载体引入适当的宿主细胞内。一旦将载体引入宿主细
胞内用于蛋白质生产,宿主细胞就在常规营养培养基中培养,所述培养基适当地修饰用于
诱导启动子,选择转化体或扩增编码所需序列的基因。用于表达治疗性蛋白质的方法是本
领域已知的,参见例如,Paulina Balbas,Argelia Lorence(编辑)Recombinant Gene
Expression:Reviews and Protocols(Methods in Molecular Biology),Humana Press;
第2版2004年(2004年7月20日),以及Vladimir Voynov和Justin A.Caravella(编辑)
Therapeutic Proteins:Methods andProtocols(Methods in Molecular Biology)Humana
Press;第2版2012年(2012年6月28日)。
[0496] 蛋白质产生、回收和纯化
[0497] 用于生产抗FcRn抗体的宿主细胞可以在培养基中生长,所述培养基是本领域已知的且适合于培养所选择的宿主细胞。用于哺乳动物宿主细胞的合适培养基的例子包括最小
必需培养基(MEM)、达尔贝科改良伊格尔培养基(DMEM)、Expi293TM表达培养基、补充胎牛血清(FBS)的DMEM和RPMI-1640。用于细菌宿主细胞的合适培养基的例子包括Luria肉汤(LB)
加上必需的补充剂,例如选择
试剂,例如氨苄青霉素。宿主细胞在合适的
温度和CO2水平下培养,所述温度例如约20℃至约39℃,例如25℃至约37℃,优选37℃,所述CO2水平例如5至
10%(优选8%)。培养基的pH一般为约6.8至7.4,例如7.0,主要取决于宿主生物。如果在表达载体中使用诱导型启动子,则在适合于激活启动子的条件下诱导蛋白质表达。
[0498] 蛋白质回收通常涉及破坏宿主细胞,一般通过此类手段如渗透压休克、超声处理或裂解。一旦细胞被破坏,就可以通过离心或过滤去除细胞碎片。可以进一步纯化蛋白质。
抗FcRn抗体可以通过蛋白质纯化领域中已知的任何方法纯化,例如,通过蛋白质A亲和、其它层析(例如离子交换层析、亲和层析和尺寸排阻柱层析)、离心、差异
溶解度,或通过用于纯化蛋白质的任何其它标准技术。(参见Process Scale Purification of Antibodies,
Uwe Gottschalk(编辑)JohnWiley&Sons,Inc.,2009)。在一些情况下,抗FcRn抗体可以与标记物序列(例如肽)缀合,以促进纯化。标记物氨基酸序列的例子是六组氨酸肽(His-标签),其以微摩尔亲和力与镍官能化的琼脂糖亲和柱结合。用于纯化的其它肽标签包括但不限于
血凝素“HA”标签,其对应于源自流感血凝素蛋白的表位。
[0499] 可替代地,抗FcRn抗体可以由受试者(例如人)的细胞产生,例如,在治疗的背景下,通过施用含有编码抗FcRn抗体的核酸分子的载体(例如,逆转录病毒载体、腺病毒载体、痘病毒载体(例如牛痘病毒载体,例如改良的安卡拉牛痘病毒(Modified Vaccinia
Ankara)(MVA))、腺相关病毒载体和α病毒载体)。一旦在受试者的细胞内(例如,通过转化、转染、电穿孔、磷酸钙沉淀、直接显微注射、感染等),载体就促进抗FcRn抗体的表达,所述抗FcRn抗体随后从细胞中分泌。如果疾病或病症的治疗是所需结果,则可能不需要进一步的
动作。如果需要收集蛋白质,则可以从受试者中收集血液,并且通过本领域已知的方法从血液中纯化蛋白质。
[0500] V.药物组合物和制剂
[0501] 本公开内容的特征在于药物组合物,其包括本文所述的一种或多种抗FcRn抗体(例如,N022-N024、N026和N027,优选N027和/或N024)。在一些实施例中,药物组合物含有一种或多种抗体作为治疗性蛋白质。在其它实施例中,含有一种或多种抗体的药物组合物可
以与其它试剂(例如治疗性生物制品和/或小分子)或组合物组合用于治疗中。除治疗有效
量的抗体之外,药物组合物还可以含有一种或多种药学可接受的载体或赋形剂,其可以通
过本领域技术人员已知的方法配制。
[0502] 药物组合物中可接受的载体和赋形剂在所采用的剂量和浓度下对接受者无毒。可接受的载体和赋形剂可以包括缓冲剂、抗
氧化剂、
防腐剂、
聚合物、氨基酸和
碳水化合物。药物组合物可以以可注射制剂的形式肠胃外施用。用于注射的药物组合物(即静脉内注射)可
以使用无菌溶液或任何药学可接受的液体作为媒介物来配制。药学可接受的媒介物包括但
不限于无菌水、生理盐水和细胞培养基(例如达尔贝科改良伊格尔培养基(DMEM)、α-改良伊格尔培养基(α-MEM)、F-12培养基)。配制方法是本领域已知的,参见例如Banga(编辑)
Therapeutic Peptides and Proteins:Formulation,Processing and Delivery Systems
(第2版)Taylor&Francis Group,CRC Press(2006)。
[0503] 药物组合物可以根据需要以单位剂量形式形成。包括在药物制剂中的活性组分(例如,一种或多种抗FcRn抗体(例如,N022-N024、N026和N027,优选N027和/或N024)的量使得提供在指定范围内的合适剂量(例如,在0.01-500mg/kg体重范围内的剂量)。
[0504] VI.途径、剂量和施用
[0505] 含有本文所述的一种或多种抗FcRn抗体(例如,N022-N024、N026和N027,优选N027和/或N024)作为治疗性蛋白质的药物组合物可以配制用于静脉内施用、肠胃外施用、皮下施用、肌内施用、动脉内施用、鞘内施用或腹膜内施用。特别地,静脉内施用是优选的。药物组合物还可以配制用于经口、鼻腔、喷雾、
气溶胶、直肠或
阴道施用,或者通过经口、鼻腔、喷雾、气溶胶、直肠或阴道施用进行施用。对于可注射制剂,本领域已知各种有效的药物载体。
[0506] 药物组合物的剂量取决于各种因素,包括施用途径、待治疗的疾病和受试者的身体特征,例如年龄、体重、一般健康状况。通常,单一剂量内包含的本文所述的抗FcRn抗体(例如,N022-N024、N026和N027,优选N027和/或N024)的量可以是有效
预防、延迟或治疗该疾病而不诱导显著毒性的量。药物组合物可以包括范围为0.01至500mg/kg(例如,0.01、
0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、1、2、3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、100、150、200、250、300、
350、400、450或500mg/kg),并且在一个更具体的实施例中,约1至约100mg,并且在一个更具体的实施例中,约1至约50mg/kg的抗FcRn抗体剂量。剂量可以由医师根据常规因素进行调
整,所述常规因素例如疾病的程度和受试者的不同参数。
[0507] 药物组合物以与剂量制剂相容的方式施用,并且以治疗有效的量施用,以导致症状的改善或纠正。药物组合物以各种剂型施用,例如静脉内剂型、皮下剂型和经口剂型(例如可摄取的溶液、药物释放胶囊)。一般地,治疗性蛋白质以1-100mg/kg,例如1-50mg/kg
给药。含有本文所述的抗FcRn抗体(例如,N022-N024、N026和N027,优选N027和/或N024)的药物组合物可以施用于有此需要的受试者,例如,每天、每周、每月、每半年、每年或根据医学需要一次或多次(例如,1-10次或更多次)。剂量可以以单一剂量或多重剂量方案提供。施用之间的时间选择可以随着医学状况改善而降低,或随着患者的健康下降而增加。
[0508] VII.治疗方法和适应症
[0509] 通过抗FcRn抗体阻断人FcRn可能在由IgG自身抗体驱动的疾病中具有治疗益处。FcRn阻断以诱导总体致病性抗体(例如,IgG抗体)分解代谢和多种自身抗体去除,而不扰乱血清白蛋白、小循环代谢产物或脂蛋白的能力,提供了扩展自身抗体去除策略对患有自身
抗体驱动的自身免疫疾病病理状况的患者的效用和可及性的方法。尽管本公开内容不受理
论束缚,但抗FcRn抗体的主要作用机制可能是增加循环中致病性自身抗体的分解代谢,并
且降低受影响组织中的自身抗体和免疫复合物沉积。
[0510] 含有本文所述的一种或多种抗FcRn抗体(例如,N022-N024、N026和N027,优选N027和/或N024)的药物组合物和方法可用于促进受试者中的致病性抗体(例如IgG和IgG自身抗体)的分解代谢和清除,减少免疫应答,例如阻断受试者中的基于免疫复合物的免疫应答激活,以及治疗受试者中的免疫状况或疾病。特别地,药物组合物和方法可用于减少或治疗基于免疫复合物的急性或慢性免疫应答激活。急性免疫应答可以通过选自以下的医学状况来
激活:寻常型天疱疮、狼疮性肾炎、重症肌无力、格-巴二氏综合征、抗体介导的排斥、灾难性抗磷脂抗体综合征、免疫复合物介导的血管炎、肾小球炎、离子通道病、视神经脊髓炎、自身免疫性听力丧失、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、自身免疫性溶血性贫血(AIHA)、免疫性嗜中性粒细胞减少症、扩张型心肌病和血清病。慢性免疫应答可以由选自以下的医学状况
激活:慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病(CIDP)、系统性红斑狼疮、指示用于急性治疗的病症的慢性形式、反应性关节病、原发性胆汁性肝硬化、溃疡性结肠炎和抗嗜中性粒细胞细胞质抗体(ANCA)相关性血管炎。
[0511] 在一些实施例中,药物组合物和方法可用于降低胎儿中的贫血的风险或降低胎儿中发展贫血的风险。在一些实施例中,药物组合物和方法可用于降低或消除对于IUT(子宫
内输血)的需要。在一些实施例中,药物组合物和方法可用于降低或消除对于出生前PP+
IVIg、出生后输血、IVIg和/或光疗法的需要。在一些实施例中,药物组合物和方法可用于减少或治疗由自身免疫疾病激活的免疫应答。自身免疫疾病可以选自:斑秃、强直性脊柱炎、抗磷脂综合征、艾迪生氏病、溶血性贫血、自身免疫性肝炎、肝炎、白塞氏病、大疱性类天疱疮、心肌病、口炎性腹泻-皮炎、慢性疲劳免疫功能障碍综合征、慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病、丘施综合征、瘢痕性类天疱疮、局限型硬皮病(CREST综合征)、冷凝集素病、克罗恩氏病、皮肌炎、盘状狼疮、特发性混合性冷球蛋白血症、纤维肌痛、纤维肌炎、格雷夫斯病、桥本氏甲状腺炎、甲状腺功能减退、炎性肠病、自身免疫性淋巴增生综合征、特发性肺纤维化、IgA肾病、胰岛素依赖性糖尿病、幼年型关节炎、扁平苔癣、狼疮、梅尼埃病、混合性结缔组织病、多发性硬化、恶性贫血、结节性多动脉炎、多软骨炎、多腺体综合征、风湿性多肌痛、多肌炎、原发性无丙种球蛋白血症、原发性胆汁性肝硬化、牛皮癣、雷诺现象、莱特尔综合征、风湿热、类风湿性关节炎、肉瘤样病、硬皮病、干燥综合征、僵人综合征、高安动脉炎、颞动脉炎、溃疡性结肠炎、葡萄膜炎、白癜风和韦格纳氏肉芽肿。
[0512] 特别地,药物组合物和方法可用于减少或治疗由系统性红斑狼疮、抗磷脂综合征、寻常性天疱疮/大疱性类天疱疮、抗嗜中性粒细胞细胞质抗体(ANCA)相关性血管炎、重症肌无力或视神经脊髓炎激活的免疫应答。
[0513] 通过给妊娠受试者施用与人FcRn结合的分离的抗体,药物组合物和方法可用于降低跨越妊娠受试者胎盘的致病性抗体转运(例如,致病性母体IgG抗体转运)、增加妊娠受试者中的致病性抗体分解代谢、以及治疗胎儿或新生儿中的抗体介导的病毒性疾病增强的方
法。可受益于通过本文所述的分离的抗FcRn抗体(例如,N022-N024、N026和N027,优选N027和/或N024)的FcRn抑制的疾病和病症包括胎儿和/或新生儿中通过母体致病性抗体(例如,
母体致病性IgG抗体)跨越胎盘从妊娠受试者到胎儿和/或新生儿的转移引起的疾病和病
症。
[0514] 在一些实施例中,可受益于通过本文所述的分离的抗FcRn抗体(例如,N022-N024、N026和N027,优选N027和/或N024)的FcRn抑制的疾病和病症是胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症。胎儿和新生儿同种免疫病症是胎儿和/或新生儿中由妊娠受试者中的
致病性抗体引起的疾病。妊娠受试者中的致病性抗体可以攻击胎儿的抗原(例如,胎儿从胎儿的父亲遗传的抗原),促使胎儿或新生儿患有胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫
病症。
[0515] 可以通过本文所述的方法治疗的胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症的例子包括但不限于胎儿和新生儿同种免疫性血小板减少症(FNAIT)、胎儿和新生儿的溶
血性疾病(HDFN)、同种免疫性全血小板减少症、先天性心脏传导阻滞、胎儿关节挛缩、新生儿重症肌无力、新生儿自身免疫性溶血性贫血、新生儿抗磷脂综合征、新生儿多肌炎、皮肌炎、新生儿狼疮、新生儿硬皮病、白塞氏病、新生儿格雷夫斯病、新生儿川崎病、新生儿自身免疫性甲状腺疾病和新生儿I型糖尿病。
[0516] 在一些实施例中,可受益于通过本文所述的分离的抗FcRn抗体(例如,N022-N024、N026和N027,优选N027和/或N024)的FcRn抑制的疾病和病症是其中抗体促进病毒进入宿主细胞内的病毒性疾病,导致细胞中的感染性增加或增强,例如抗体介导的病毒性疾病增强。
在一些实施例中,抗体可以与病毒表面蛋白结合,并且抗体/病毒复合物可以通过抗体和受体之间的相互作用与细胞表面上的FcRn结合。随后,抗体/病毒复合物可以变得内化到细胞内。例如,通过与母体IgG抗体形成复合物,病毒可以进入胎儿的细胞和/或组织内。母体IgG抗体可以与病毒表面蛋白结合,并且IgG/病毒复合物可以与胎盘的合体滋养细胞中的FcRn
结合,所述FcRn随后将复合物转移到胎儿内。
[0517] 在一些实施例中,本文描述的方法可以用于治疗抗体介导的病毒性疾病增强。在一些实施例中,由致病性抗体(例如,致病性IgG抗体)增强的病毒性疾病包括但不限于由以下引起的病毒性疾病:α病毒感染、黄病毒感染、寨卡病毒感染、基孔肯雅病毒感染、罗斯河病毒感染、严重急性呼吸综合征冠状病毒感染、中东呼吸综合征、禽流感感染、流感病毒感染、人呼吸道合胞病毒感染、埃博拉病毒感染、黄热病病毒感染、登革热病毒感染、人类免疫缺陷病毒感染、呼吸道合胞病毒感染、汉坦病毒感染、盖塔病毒感染、辛德毕斯病毒感染、布尼亚病毒感染、西尼罗河病毒感染、日本脑炎病毒B型感染、兔痘病毒感染、乳酸脱氢酶升高病毒感染、呼肠孤病毒感染、狂犬病病毒感染、口蹄疫病毒感染、猪繁殖与呼吸综合征病毒感染、猿猴出血烧病毒感染、马传染性贫血病毒感染、山羊关节炎病毒感染、非洲猪瘟病毒感染、慢病毒感染、BK乳多空病毒感染、墨累谷脑炎病毒感染、肠道病毒感染、巨细胞病毒感染、肺病毒感染、麻疹病毒属感染和麻疹病毒感染。
[0518] 通过抗FcRn抗体阻断人FcRn可能在由致病性抗体(例如致病性IgG抗体)驱动的疾病中具有治疗益处。FcRn阻断以诱导总体致病性抗体分解代谢和多种致病性抗体去除,而
不扰乱血清白蛋白、小循环代谢产物或脂蛋白的能力,提供了扩展致病性抗体去除策略对
患有致病性抗体驱动的自身免疫疾病病理状况的患者的效用和可及性的方法。虽然不受理
论束缚,但抗FcRn抗体的主要作用机制可能是增加循环中致病性抗体的分解代谢,并且降
低受影响组织中的致病性抗体和免疫复合物沉积。
[0519] 本文所述的抗FcRn抗体(例如,N022-N024、N026和N027,优选N027和/或N024)可以施用于妊娠受试者,其患有医学状况或处于患有医学状况的风险中,所述医学状况激活妊娠受试者中的免疫应答。在一些实施例中,妊娠受试者过去可能已具有激活妊娠受试者中
的免疫应答的医学状况。在一些实施例中,妊娠受试者具有患有胎儿和新生儿同种免疫病
症和/或自身免疫病症的先前胎儿或新生儿的病史。在一些实施例中,如果在从妊娠受试者获得的生物样品(例如,血样或尿样)中检测与免疫疾病相关的致病性抗体,则可以将本文
所述的抗FcRn抗体施用于妊娠受试者。在一些实施例中,在妊娠受试者的生物样品中检测
到的致病性抗体已知与来自妊娠受试者中的胎儿的抗原(例如,胎儿从胎儿的父亲遗传的
抗原)结合。
[0520] 在一些实施例中,本文所述的抗FcRn抗体(例如,N022-N024、N026和N027,优选N027和/或N024)可以施用于受试者,所述受试者计划怀孕,并且患有或处于患有激活妊娠
受试者中的免疫应答的医学状况的风险中,和/或过去已具有激活妊娠受试者中的免疫应
答的医学状况。在一些实施例中,受试者计划怀孕,并且具有患有胎儿和新生儿同种免疫病症和/或自身免疫病症的先前胎儿或新生儿的病史。在一些实施例中,本文所述的抗FcRn抗体可以施用于受试者,所述受试者计划怀孕,并且其生物样品含有与免疫疾病相关的致病
性抗体。
[0521] 在一些实施例中,本文所述的抗FcRn抗体可以施用于受试者(例如,妊娠受试者),以减少或治疗受试者中的基于免疫复合物的急性或慢性免疫应答激活。急性免疫应答可以通过医学状况(例如,寻常型天疱疮、狼疮性肾炎、重症肌无力、格-巴二氏综合征、抗体介导的排斥、灾难性抗磷脂抗体综合征、免疫复合物介导的血管炎、肾小球炎、离子通道病、视神经脊髓炎、自身免疫性听力丧失、特发性血小板减少性紫癜、自身免疫性溶血性贫血、免疫性嗜中性粒细胞减少症、扩张型心肌病、血清病、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病、系统性红斑狼疮、反应性关节病、原发性胆汁性肝硬化、溃疡性结肠炎和抗嗜中性粒细胞细胞质抗体(ANCA)相关性血管炎)激活。
[0522] 在一些实施例中,本文所述的抗FcRn抗体可以施用于受试者(例如,妊娠受试者),以减少或治疗由自身免疫疾病激活的免疫应答。自身免疫疾病可以是例如斑秃、强直性脊柱炎、抗磷脂综合征、艾迪生氏病、溶血性贫血、温热型自身免疫性溶血性贫血(wAIHA)、抗因子抗体、肝素诱导的血小板减少症(HICT)、致敏性移植物、自身免疫性肝炎、肝炎、白塞氏病、大疱性类天疱疮、心肌病、口炎性腹泻-皮炎、慢性疲劳免疫功能障碍综合征、慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病、丘施综合征、瘢痕性类天疱疮、局限型硬皮病(CREST综合征)、冷凝集素病、克罗恩氏病、皮肌炎、盘状狼疮、特发性混合性冷球蛋白血症、纤维肌痛、纤维肌炎、格雷夫斯病、桥本氏甲状腺炎、甲状腺功能减退、炎性肠病、自身免疫性淋巴增生综合征、特发性肺纤维化、IgA肾病、胰岛素依赖性糖尿病、幼年型关节炎、扁平苔癣、狼疮、梅尼埃病、混合性结缔组织病、多发性硬化、恶性贫血、结节性多动脉炎、多软骨炎、多腺体综合征、风湿性多肌痛、多肌炎、原发性无丙种球蛋白血症、原发性胆汁性肝硬化、牛皮癣、雷诺现象、莱特尔综合征、风湿热、类风湿性关节炎、肉瘤样病、硬皮病、干燥综合征、僵人综合征、高安动脉炎、颞动脉炎、溃疡性结肠炎、葡萄膜炎、白癜风或韦格纳氏肉芽肿。
[0523] 实例
[0524] 实例1–抗体产生
[0525] 使用骨粘连蛋白分泌信号,将IgG重链和轻链核酸分子克隆到载体pCDNA3.3中。HEK 293F细胞在Expi293培养基中在37℃下伴随8%CO2生长。以3x106/ml的
密度转染细胞,其中每升具有1mg总DNA。遵循制造商的
说明书,在第2天和第3天时添加增强剂,并且在细胞存活率降至低于50%至60%之前,将细胞培养直到第5天或第6天。然后通过离心将细胞旋
出,并且将耗尽的培养基无菌过滤且贮存于4℃下直至抗体纯化。通过双柱程序纯化抗体:
POROS蛋白A层析,随后为POROS HS-50阳离子交换层析。前者将大部分宿主细胞蛋白与表达的抗体分离,而后者去除重链二聚体、轻链二聚体和半抗体,以及更高分子量的种类。基于SDS-PAGE凝胶分析合并来自HS-50阳离子交换柱的级分,以使全长抗体的纯度最大化。将收集的级分置于在以pH 7.2的PBS中平衡的Sephadex G50缓冲液交换柱上。合并峰级分并且
使用30kDa旋转浓缩器浓缩至大于10mg/ml,并且在-30℃下以2mg和5mg等分试样冷冻。通过SDS-PAGE检查最终的蛋白质样品的纯度。
[0526] 实例2–结合亲和力
[0527] 通过亲和力成熟,我们鉴定了与人FcRn具有结合亲和力的超过100种抗FcRn抗体,其KD在亚微摩尔范围内。选择五种抗体(N022-N024、N026和N027)用于进一步表征。表面等离振子共振(SPR)用于确定这五种抗体各自的结合速率和解离速率(分别为ka和kd)。简言
之,将Bio-Rad GLC
传感器芯片插入ProteOn XPR 36内并且空气初始化。在初始化后,适当时将运行缓冲液转变为新鲜制备的缓冲液,HBSP+(0.01M HEPES、0.15M NaCl、0.05%P20,pH 7.4)或磷酸钠缓冲液(0.02M磷酸钠、0.15M NaCl、0.05%P20,pH 6.0),所述缓冲液用于测定的剩余部分和所有稀释。使用0.5%SDS、50mMNaOH和10mM HCl各自以30μl/分钟一次注射60秒来预处理芯片。将来自GE Healthcare(BR100839)的小鼠抗人Fc mAb在10mM乙酸盐
缓冲液pH 5.0中稀释至10μg/ml,并且使用标准胺偶联化学,将约5,700个响应单位(RU)在水平方向上固定到GLC传感器芯片上。待测试的抗hFcRn mAb在垂直方向上捕获到表面上,
目标是每个相互作用点固定大约200个响应单位(RU)。将rhFcRn以1.25μg/ml开始的五点三倍稀释系列稀释,留下一个泳道作为仅缓冲液用于双重参考。将分析物以100μl/分钟在水平方向上流过传感器表面240秒,其中解离时间为3,600秒。通过在水平方向和垂直方向两
者上以100μl/分钟注入3M MgCl230秒来完成再生。对于所有配体重复这些程序。
[0528] 使用ProteOn Manager软件进行数据分析。使用Auto Process工具调整每个相互作用步骤的Y和X方向,随后为去除非特异性相互作用的中间点通道参考以及去除测定漂移
的空白泳道双重参考。使用具有分组Rmax的兰米尔1:1动力学模型来拟合数据。将在单次运行中从ProteOn Manager获得的ka、kd和KD值求平均值,并且当N为三或更大时,在Microsoft Excel中计算其百分比CV。
[0529] 表3显示了五种抗FcRn抗体,N022、N023、N024、N026和N027,都在pH 7.4下以高亲和力与人FcRn结合。抗FcRn抗体的平衡解离常数KD在pH 7.4、298K下与人FcRn结合的范围为19.4pM(N027)至36.5pM(N026)。表3还显示了五种抗FcRn抗体的快速结合速率和慢速解
离速率。在pH 7.4、298K下,对于与人FcRn结合的结合速率在0.93-1.42X 1061/Ms的范围
6
内。解离速率在2.31-4.44X 101/s的范围内。
[0530] 表3
[0531] ka(1/Ms) kd(1/s) KD(M) Rmax Chi2 KD(pM)
N022 1.42E+06 4.42E-05 3.10E-11 146.93 7.65 31
N023 9.27E+05 2.91E-05 3.14E-11 193.43 5.26 31.4
N024 1.13E+06 4.03E-05 3.55E-11 181.17 6.12 35.5
N026 1.22E+06 4.44E-05 3.65E-11 163.9 5.68 36.5
N027 1.19E+06 2.31E-05 1.94E-11 211.33 7.81 19.4
[0532] 实例3–IgG竞争
[0533] 在细胞表面上异位表达糖磷脂酰肌醇(GPI)-连接的FcRn的人胚肾(HEK)293细胞上,评估抗FcRn抗体与IgG竞争结合人或食蟹猴FcRn的能力。人和食蟹猴FcRnα氨基酸序列显示出97.5%的序列同一性。355个中的九个氨基酸残基在人和食蟹猴FcRnα之间是不同
的,但无一在表位作图的结合区中。使用66nM
荧光探针标记的非特异性IgG测定细胞结合的IgG的水平。IgG与细胞表面FcRn的结合在pH 6.0下完成,这允许IgG的Fc部分与FcRn相互作用。如图1中所示,随着抗FcRn抗体(N022-N024、N026或N027)的浓度增加,细胞结合的IgG的量显著降低。IgG的结合被五种示例性抗FcRn抗体中的每一种以浓度和饱和依赖性方式抑
制,证实抗FcRn抗体N022-N024、N026和N027在pH 6.0下与IgG竞争有效且抑制其与FcRn的
结合。抗体的EC50值范围为2至6nM。
[0534] 实例4–抗FcRn抗体对小鼠中的IgG分解代谢的作用
[0535] 为了测量抗FcRn抗体对体内IgG分解代谢的作用,使用人FcRn转基因小鼠品系,纯合B6.Cg-Fcgrttm1Dcr Tg(FCGRT)32Dcr/DcrJ小鼠,其缺乏小鼠FcRn,但以类似于内源性小鼠和人FcRn的组织分布表达人FcRn。在第0天时用500mg/kg人IVIG示踪剂注射的FcRn-/-
hFcRn(32)Tg小鼠在第1和4天时施用以10mg/kg的单一剂量的抗FcRn抗体。如图2中所示,如通过抗FcRn抗体处理的小鼠中随着时间过去测量的较低水平的IgG可见的,通过施用抗
FcRn抗体增加IgG的分解代谢。N024(KD=35.5pM)、N026(KD=36.5pM)和N027(KD=19.4pM)的活性看起来在10mg/kg下是相似的。
[0536] 实例5–抗FcRn抗体的体外表征
[0537] 在细胞表面上异位表达糖磷脂酰肌醇(GPI)-连接的人或食蟹猴FcRn的人胚肾(HEK)293细胞上,测量抗体的细胞结合亲和力。FcRn是I型跨膜蛋白,当转运至质膜时,其IgG和白蛋白结合结构域定向至内体膜的腔侧或细胞表面。在pH 7.4下,抗FcRn抗体与
HEK293细胞上的细胞表面、膜结合的FcRn的结合模拟在生理学相关环境中和在其中仅抗体
的Fab结构域而非抗体的Fc结构域与FcRn相互作用的pH下的结合。FcRn细胞外结构域通过C
末端改造的GPI连接以高密度在细胞表面上展示。用荧光探针标记抗FcRn抗体。允许抗体在
冰上结合30分钟。然后在4℃下洗涤细胞,并且使用荧光团标记的第二抗体,例如山羊抗人IgG F(ab)2检测结合的抗体。与人FcRn的结合是浓度依赖性的,并且抗体展示范围为4至
7nM的EC50值。
[0538] 还在内源表达的人FcRn上测量抗体的细胞结合亲和力。单核细胞表达最高水平的FcRn,并且在小鼠和人血液中显示关于FcRn表达的最高阳性百分比。单核细胞系THP-1用于评估抗FcRn抗体在pH 7.4下与内源性人FcRn的结合。由于内源性FcRn主要在细胞内内体囊
泡中,因此首先将THP-1细胞固定,然后在阻断非特异性Fc受体结合的牛血清存在下在4℃
下与抗FcRn抗体温育30分钟前,用温和的
洗涤剂透化且固定。该测定能够区分具有更好地
结合内源性人FcRn的抗体。抗FcRn抗体与THP-1细胞的结合是浓度依赖性的。所有抗体,例如N022-N024、N026和N027,显示比IgG1更好的结合亲和力。抗体N027展示最高的结合亲和力,其EC50值为3.0nM。
[0539] 通过抗体的氢-氘交换的表位作图指示抗体与包含人FcRn上的两个氨基酸序列的至少一部分的表位结合。一个氨基酸序列包括位于Fc-FcRn相互作用界面中和/或附近的
KQGTWGGDWPEAL(SEQ ID NO:25)的序列的至少一个氨基酸,这提示抗体通过方向抑制阻断
IgG与FcRn的结合。第一氨基酸序列包含FcRn(SEQ ID NO:30)的W131。第二氨基酸序列包括FKALGGKGPYTL(SEQ ID NO:26)序列的至少一个氨基酸。第二氨基酸序列包含FcRn(SEQ ID
NO:30)的Y88。抗FcRn抗体的表位包括a)包含FcRn的W131的氨基酸序列和b)包含FcRn的Y88的氨基酸序列之一或两者。在一些实施例中,表位包含至少a)包含FcRn的W131的氨基酸序
列和b)包含FcRn的Y88的氨基酸序列。在一些实施例中,表位包含或a)包含FcRn的W131的氨基酸序列或b)包含FcRn的Y88的氨基酸序列。表位作图的结合位点远离FcRn的白蛋白结合
位点。因此,血清白蛋白结合不应受抑制,并且血清白蛋白水平不应降低。酶联
免疫吸附测定(ELISA)用于证实抗体不抑制血清白蛋白与FcRn的结合。人FcRn的可溶性加上His标签的
细胞外结构域与板表面结合,并且在pH 6.0下与渐增浓度的抗FcRn抗体预温育。允许辣根
过氧化物酶(HRP)缀合的人血清白蛋白与可溶性加上His标签的FcRn结合。抗体无一抑制白
蛋白与FcRn的结合。此外,体内实验证据还显示,在抗FcRn抗体施用后,食蟹猴白蛋白水平保持恒定,指示白蛋白再循环不受抗体与FcRn结合的干扰(图4C)。
[0540] 实例6–抗FcRn抗体对小鼠中的IgG水平和靶占据的作用
[0541] 在向纯合的B6.Cg-Fcgrttm1Dcr Tg(FCGRT)32Dcr/DcrJ小鼠施用500mg/kg人IVIg(示踪剂)后24小时静脉内(i.v.)给予N027。每天通过ELISA检测循环的人IgG。在细胞与免
疫表型细胞表面标记物一起温育,随后为固定和透化后,通过荧光激活细胞分选(FACS)在
来自RBC裂解的全血的单核细胞中每天测量靶占据。通过用Dy650标记的N027染色来测量未
被占据的FcRn(n=4只雄性/组)。如图3中所示,通过以剂量依赖性方式施用N027,降低IgG水平和未被占据的FcRn的百分比。
[0542] 实例7–在食蟹猴中的IgG分解代谢和靶占据的选择性诱导
[0543] 为了研究N027对IgG分解代谢和靶受体占据的诱导的作用,在食蟹猴中在第0天时i.v.给予N027。通过ELISA检测循环内源性IgG和白蛋白。在细胞与免疫表型细胞表面标记
物一起温育,随后为固定和透化后,通过FACS在来自RBC裂解的全血的单核细胞中测量靶占据。通过用Dy650标记的N027染色来测量未被占据的FcRn。(n=3只雄性/组)。如图4A-4C中所示,通过以剂量依赖性方式施用N027,降低IgG水平和未被占据的FcRn的百分比,而
血浆白蛋白水平保持不变。
[0544] 实例8–N027在小鼠中的生物分布
[0545] 为了比较没有靶介导分布的N027和人IgG的生物分布,以30mg/kg向纯合B6.Cg-Fcgrttm1Dcr Tg(FCGRT)32Dcr/DcrJ小鼠i.v.施用由荧光团(VivoTag 680)标记的N027或人
IgG1同种型对照抗体。通过定量离体荧光成像,在个体器官中测量标记抗体的水平。如图5中所示,N027在小鼠的各种器官中的生物分布与同种型对照抗体的生物分布相似。
[0546] 实例9-N027在小鼠胶原抗体诱导的关节炎中的功效
[0547] 在第1天时通过腹膜内(i.p.)注射ArthritoMabTM混合物(MD Biosciences),在纯合B6.Cg-Fcgrttm1Dcr Tg(FCGRT)32Dcr/DcrJ小鼠中诱导胶原抗体诱导的关节炎,并且在第4天时用i.p.给予的100μg LPS诱导炎性疾病活性。在疾病诱导和随机化后第6天时,以5mg/kg(箭头)在治疗上i.v.施用N027。在随机化后第6天时给予以1g/kg的IVIG(阳性对照组)或
媒介物-PBS(阴性对照)(n=5/组)。如图6中所示,当在治疗上施用时,N027有效抑制人转基因FcRn小鼠中的胶原抗体诱导的关节炎。
[0548] 实例10-N027在小鼠慢性特发性血小板减少性紫癜(ITP)中的功效
[0549] 通过经由微渗
泵连续皮下输注抗血小板抗体(抗CD41,MWReg30),在纯合B6.Cg-Fcgrttm1Dcr Tg(FCGRT)32Dcr/DcrJ小鼠中诱导血小板减少症。到泵植入后72小时(第3天),循环血小板水平降低至300x 109/L或更低。在泵植入后72小时(第3天)和120小时(第5天)
(A,n=4/组;B,n=7/组),在治疗上i.v.给予N027。图7显示了当在治疗上给予时,N027可以有效恢复患有血小板减少症的小鼠中的血小板水平。
[0550] 实例11-在靶细胞类型中用N027实现浓度依赖性FcRn占据
[0551] 跨越不同细胞类型,例如原代人主动脉内皮细胞(HAEC)、人脐静脉内皮细胞(HUVEC)细胞和胎盘滋养母细胞(HVT),比较通过N027的受体占据。使细胞在完全EBM-2培养基(Lonza,Waterville)或滋养母细胞培养基(ScienCell)中生长至汇合。将细胞
单层在1ml具有不同浓度的未标记的N027的培养基中在37℃下温育1小时。在洗涤后,用冷HyQTase收
获细胞,固定且透化,然后在黑暗中在4℃下与VivoTag645标记的N027(10μg/ml)一起温育
30分钟。在温育后,用透化缓冲液洗涤细胞,然后重悬浮于FACS缓冲液中。通过流式细胞术测量细胞结合的VivoTag645-N027。该值代表几何平均荧光强度(gMFI)±SD(n=2)。图8A、
8B和8C分别显示了对于HAEC、HUVEC和HVT,跨越N027浓度的FcRn占据。如表4中概括的结果显示人EC(HAEC、HUVEC)以及胎盘HVT显示出通过N027类似的浓度依赖性受体占据。
[0552] 表4
[0553]人原代细胞 IC50 100%FcRn占据剂量
主动脉内皮细胞(HAEC) 0.23μg/mL 2.43μg/mL
静脉内皮细胞(HUVEC) 0.15μg/mL 4.99μg/mL
胎盘滋养层细胞(HVT) 0.15μg/mL 2.43μg/mL
[0554] 实例12-达到100%受体占据的N027浓度导致细胞内IgG积累增加
[0555] 跨越不同细胞类型,比较通过N027的受体占据水平与IgG细胞内运输的改变之间的关系。在内皮细胞培养(EBM-2,Lonza)中培养人内皮细胞(HAEC和HUVEC),而在滋养母细胞培养基(ScienCell)中培养人胎盘滋养母细胞(HVT)。然后将细胞单层在37℃下在1mL培
养基中脉冲4-5小时,所述培养基含有:
[0556] 1.不同浓度的N027+VivoTag645-IgG(50μg/mL);或
[0557] 2.不同浓度的同种型对照IgG+VivoTag645-IgG(50μg/mL)
[0558] 然后在冷培养基中洗涤细胞单层,随后为通过HyQtase处理的细胞脱离。通过流式细胞术测量细胞结合的VivoTag645-N027。值代表几何平均荧光强度(gMFI)±SD(n=2)。图
9A、9B和9C分别显示了对应于各种剂量的N027,关于HAEC、HUVEC和HVT的细胞内IgG水平。与同种型对照相比,对应于>100%FcRn占据的N027剂量导致显著更高的IgG积累。结果证实达到饱和水平的IgG积累所需的有效N027浓度在这些靶细胞类型中是相似的,并且范围为
4.99至2.43μg/mL,如表5中概括的
[0559] 表5
[0560]人原代细胞 ~IC50 100%FcRn占据剂量
主动脉内皮细胞(HAEC) 0.12μg/mL 2.43μg/mL
静脉内皮细胞(HUVEC) 0.15μg/mL 4.99μg/mL
胎盘滋养层细胞(HVT) 0.07μg/mL 3.68μg/mL
[0561] 实例13-测量到100%FcRn占据的时间
[0562] 为了确定N027使FcRn饱和且阻断IgG运输所花费的时间,将汇合的血管内皮细胞(HUVEC)单层连同或不连同饱和浓度的N027(16.6μg/ml)一起在EBM-2培养基中在37℃下温
育指定的时间(图10)。在温育完成后,将细胞洗涤且用冷HyQtase
收获,随后为固定和透化。
然后将这些细胞在透化缓冲液+10%人血清和VivoTag645标记的N027(10μg/mL)中在4℃下
在黑暗中温育30分钟。然后用透化缓冲液洗涤细胞,重悬浮于FACS缓冲液中,并且通过FACS测量细胞结合的VivoTag645-N027。值代表平均gMFI±SD(n=2)。图10中显示的结果指示在
该内皮细胞类型中在约30分钟内实现了通过N027的100%FcRn占据。
[0563] 实例14-人血管内皮细胞和胎盘滋养母细胞显示出类似的FcRn周转率,其未被N027改变
[0564] 在N027的存在和不存在下,比较人血管内皮细胞(HUVEC)和胎盘滋养母细胞(HVT)的FcRn周转率。将细胞在含有培养基的25%D2O(氧化氘,来自Aldrich)的75cm2烧瓶中培养三天。在三天后,将培养基替换为含有N027(100μg/ml)或对照IgG(100μg/ml)或模拟处理的正常培养基。然后在培养基更换后的指定时间,从烧瓶中收获细胞(图11A和11B)。洗涤细胞单层;将细胞收获,形成团
块,并且裂解各个团块且分开消化。执行了
鸟枪蛋白质组学和靶向蛋白质组学。使用Qual Browser,提取同位素相对强度,并且通过将每个强度除以总和来计算每个同位素聚体(isotopomer)的分数丰度。分数丰度值用于计算系统中剩余的D2O标
记的FcRn的百分比。图11A和11B显示了FcRn周转率在人血管内皮细胞(HUVEC)和胎盘滋养
母细胞(HVT)之间是相似的。此外,用N027处理不改变FcRn周转率。
[0565] 实例15-靶细胞中的FcRn定位
[0566] 在人血管内皮细胞(HUVEC)和胎盘滋养母细胞(HVT)中比较N027的定位。细胞在EBM-2/TM培养基中的玻璃盖玻片上生长。将活细胞在含有DyLight594-N027(2μg/mL)的培
养基中在37℃下温育1小时。然后将细胞洗涤,并且在荧光
显微镜下以共焦模式用60X干物
镜使用适当的
滤波器实时成像。代表性的单细胞图像显示在两种细胞类型中与FcRn的内吞
池结合的N027的类似定位模式(图12A和12B)。细胞中心的圆圈指示核的定位。
[0567] 实例16-N027处理对IgG运输动力学的作用:细胞内IgG积累以及与溶酶体的共定位
[0568] 跨越表达FcRn的靶细胞类型,例如人血管内皮细胞(HUVEC)和胎盘滋养母细胞(HVT),比较N027处理对细胞内IgG积累动力学的作用。使细胞在EBM-2培养基(Lonza,
Waterville)或TM1培养基(ScienCell)中生长至汇合。然后将汇合的细胞单层在含有N027
(2μg/ml)+VivoTag645-IgG(50μg/mL)或同种型对照IgG(2μg/mL)+VivoTag645-IgG(50μg/ml)的1ml培养基中在37℃下脉冲20小时。然后洗涤细胞单层,然后在含有N027(2μg/mL)或同种型对照(2μg/mL)的追踪培养基中在37℃下追踪0分钟、30分钟和90分钟。在每个追踪期后,将细胞洗涤,分离且通过HyQtase处理收集。通过流式细胞术测量细胞结合的
VivoTag645-N027。值代表几何平均荧光强度(gMFI)±SD(n=2)。用N027处理的细胞显示更
高水平的细胞内IgG。此外,N027对细胞内IgG积累动力学的作用在测试的两种细胞类型之
间是相似的,如图13A和13B中所示。
[0569] 我们还确定N027是否增加细胞内IgG以及IgG与溶酶体在原代人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中的共定位。细胞在玻璃盖玻片上生长,并且在含有10μg/ml Alexa Fluor
594Dextran(10,000MW,阴离子,可固定)的培养基中在37℃下温育2小时。在温育后,将细胞洗涤,并且在含有N027(2μg/mL)+DyLight 488-IgG(50μg/ml)的培养基、或含有同种型对照IgG(2μg/mL)+DyLight 488-IgG(50μg/ml)的培养基中;或在没有任何IgG处理的培养基中,在37℃下脉冲20小时。将板在冷培养基中洗涤,然后在37℃下追踪0分钟或30分钟。使用下述追踪条件:在N027(2μg/mL)的存在下,追踪N027+DyLight 488-IgG脉冲的组;在同种型对照IgG(2μg/mL)的存在下,追踪同种型+DyLight 488-IVIG脉冲的组,并且仅在培养基中追踪没有任何IgG处理的组。将细胞洗涤,在BD Cytofix/Cytoperm溶液中在4℃下在黑暗中温育30分钟,用perm洗涤缓冲液洗涤,随后为在perm洗涤缓冲液+10%正常小鼠血清+5μg/ml小鼠抗人Lamp1抗体中在黑暗中在4℃下的过夜温育。然后将细胞用perm洗涤缓冲液和PBS
洗涤,然后固定在
载玻片上。在Olympus荧光显微镜上使用共聚焦模式完成细胞成像,使用具有2X光学放大率的60X干物镜。如图13C和13D中所示,与同种型对照IgG处理的细胞相比,N027处理增加了溶酶体区室中IgG的积累。
[0570] 实例17-与N027Fab复合的FcRn(由FcRn/p51和β2-微球蛋白/p14组成的异二聚体)的结构的测定和分析
[0571] 纯化N027Fab:FcRn的复合物,并且在由30mM HEPES(pH 7.5)、200mM NaCl、3%甘油组成的缓冲液中浓缩至约9mg/ml。该复合物在坐滴式
蒸汽扩散结晶实验中建立。将由0.3μl蛋白质溶液加上0.3μl储库溶液组成的液滴在80μl储库溶液的储库上混合。将板密封且允许在4℃下平衡。
[0572] 板状晶体在几种条件下经过4天至7周的过程生长。最终导致复合物结构的晶体在由10%PEG 1000、10%PEG 8000组成的母液中生长。通过在25%PEG 1000、10%PEG 8000、
100mM NaCl的溶液中浸泡约2分钟,然后在冷冻环中固定,并且在液氮中快速冷冻,来冷冻保护晶体。
[0573] 使用Dectris Pilatus 6M检测器和 的
波长,在光束线BL9-2上的Stanford Synchrotron Radiation Lightsource(SSRL)处收集
X射线衍射数据。使用HKL-
2000,随后为CCP4(Collaborative Computational Project,Number 4)
软件套件中的各种
程序,将衍射
图像处理成 的
分辨率。数据收集和处理的细节包含在表6中。
[0574] 使用来自Protein Data Bank(PDB)ID No.4k71的完整FcRn(分别为大和小亚基的异二聚体,p51和p14)的搜索模型,以及来自PDB ID No.5v7u的人Fab的各个重链和轻链,连同程序Phaser,通过分子置换解析N027Fab:FcRn复合物的 结构。在不对称单元中存在
一个完整的复合物,其
溶剂含量为大约65%。随后通过Coot程序中的连续几轮手动构建和
真实空间细化来完成且改进结构,随后为使用程序Refmac5针对使用X射线数据的限制性改
进,以及使用程序Molprobity和Coot内的各种工具的验证。Refmac5的最后几轮改进包括
TLS改进,其中每条链定义为各个TLS组。结构解决方案和改进的细节包含在表7中。
[0575] 表6
[0576]
[0577]
[0579] 表7
[0580]
[0581] FcRn表位的结构分析
[0582] 由
晶体结构限定的FcRn的表位主要由FcRn/p51亚基上的氨基酸组成,但也涉及来自β2-微球蛋白/p14亚基的四个氨基酸。总之,N027Fab和FcRn之间的相互作用掩埋大约
其中轻链和FcRn之间为 重链和FcRn之间为 并且轻链和β2-微
球蛋白之间为 来自N027Fab的两条链的所有三个CDR环都涉及互补位,其中CDR H2
和CDR L1一起贡献约一半的相互作用氨基酸,各八个。CDR H1、H3和L2各自贡献三个氨基
酸,而CDR L3贡献五个氨基酸。在CDR L2和L3之间的轻链构架中的位置66-68Kabat处的三
个氨基酸(KSG)也涉及结合。表位/互补位界面完全由
电子密度定义,并且已完全明确地建
模。FcRn上的Fab结合表位与经典Fc结合位点重叠,因此预期通过FcRn抗体的紧密结合阻断Fc结合。另外,白蛋白结合位点仍然可接近。另外,N-乙酰葡糖胺存在于FcRn的Gln102上,其由电子密度明确定义。描绘了如由晶体结构限定的表位的概述,并且映射到图14-16中的序列上。FCGRT上的W131和Y88残基看起来是通过H-键合与抗FcRn N027分子上的CDR L3
(YAGSGIY)和CDRH2(R58)结合的最重要残基。
[0583] 实例18-通过N027抑制食蟹猴中的内源性母体和胎儿IgG以及缺乏N027至胎儿循环的转移
[0584] 怀孕雌性食蟹猴从妊娠第45天(GD45)到GD100(孕中期)或GD140(孕晚期)时的剖腹产(C-section)每周进行给药。研究中还包括动物群组,其被允许分娩其婴儿(出生日
[BD1])。设计研究在表8中描述。
[0585] 表8:研究设计
[0586]
[0587] a最初招募二十四(24)名怀孕雌性进行研究(每组8名)。每组四名孕妇分配到GD140±2剖腹产群组,并且每组剩余的4名孕妇分配到GD100±2群组。
[0588] 使用标准验证的总IgG ELISA在母体和新生儿血样中测量IgG浓度(表9)。简而言之,用商购可得的抗人IgG抗原包被聚苯乙烯板(96孔)。洗涤涂布的板以去除未结合的样
品,然后使用封闭缓冲液封闭,随后为洗涤以去除残留的封闭缓冲液。将血清样品稀释且加入抗人IgG包被的孔中,并且在室温下温育60±5分钟。在加入与辣根过氧化物酶(HRP)缀合
的二级(检测)抗体之前洗涤每个孔,并且在室温下温育60±5分钟。随后将四甲基联苯胺
(TMB)底物加入每个孔中,并且在板
振荡器上在室温下温育20±5分钟,然后加入2N H2SO4
以终止酶促反应。使用 190微板阅读器在450nm处读取每个孔的吸光度。识别
总IgG且与食蟹猴IgG交叉反应的任何商购可得或有专利权的抗人IgG捕获抗体和HRP缀合
的抗人IgG检测抗体对,可以用于在ELISA中测量总食蟹猴IgG。IgG检测抗体可以是例如完
整IgG、
多克隆血清抗体、单克隆抗体或Fab(2)片段。
[0589] 表9:方法
[0590]
[0591] 对于分配进行研究的所有怀孕成年雌性,根据表10通过静脉穿刺从股静脉(优选)或头静脉/隐静脉收集血液。对于在GD100±2或GD140±2时通过剖腹产获得的所有胎儿,血
液根据表10从脐带收集。允许样品(1mL)
凝结至少60分钟;离心,并且分离所得血清,转移至适当标记的(例如IgG)聚丙烯管中,并且在冷冻器中立即冷冻以维持80℃。
[0592] 表10:用于评估的样品收集时间点
[0593]
[0594]
[0595]
[0596] a时间点仅从GD100剖腹产群组中的动物收集。
[0597] b基于GD44至46的潜在剂量天列出的收集范围。所有时间点都基于剂量日。
[0598] 内源性母体IgG的抑制
[0599] 在剂量后72小时开始,N027施用导致成年雌性中的血清IgG水平的剂量依赖性降低,并且在GD51-53:剂量前时间点,对于100和300mg/kg给药的动物两者观察到血清IgG浓度中的最大降低(图19)。第2组(100mg/kg)的血清IgG值以剂量依赖性方式趋向于剂量前水
平,从GD65-67:剂量前时间点开始,并且继续直至在GD93-95和GD135-137时的下一次剂量施用,这之后,在给药的72小时内存在类似量级的减少。在给药期自始至终,第3组动物
(300mg/kg)在所有剂量前时间点保持在最低点IgG值下(如表10中所提到的)。在用媒介物
处理的动物(组1)中未观察到IgG从基线的变化。
[0600] 在GD44-46、GD93-95和GD135-137时的剂量施用后2小时,存在血清IgG浓度中的剂量依赖性增加。这些增加可能是通过总IgG测定检测N027的结果,并且不视为与N027的药理学相关。相对于在GD100和GD140时的对照值以及在BD1时间点时的新生儿,存在胎儿血清
IgG水平中的剂量依赖性降低(图20)。
[0601] 从母体到胎儿循环的N027转移的缺乏
[0602] 通过测量胎儿循环单核细胞中的N027FcRn占据的水平,来评估从母体循环到胎儿循环的N027转移。使用流式细胞术(FACS)测定,评价单核细胞、粒细胞、B淋巴细胞和T淋巴细胞上的N027受体占据,以测量在饱和浓度的N027的存在和不存在下,荧
光标记的N027与
游离/未结合的FcRn的结合。不饱和样品证明了在每个剂量前和剂量后时间点上,在每个白细胞亚群上存在的游离或未结合的FcRn受体的百分比。饱和样品用未标记的N027的浓度掺
料,确定其完全饱和在每个施用后时间点保持游离/未结合的任何FcRn受体。在如上所述的不饱和样品分析的背景下,在第GD100和GD140天时或在BD1时的新生儿中,在胎儿的全血中未检测到N027受体占据。
[0603] 实例19-N027的胎盘转移的评估
[0604] 从简单足月妊娠中获得的人胎盘用于离体双重灌注单个胎盘小叶方法,以评估N027的胎盘转移。简言之,检查每个胎盘的撕裂,并且分别用3F和5F脐带
导管插入供给单个完整外周子叶的两个绒毛膜血管(一个动脉和一个静脉)。将子叶
修剪并放置在灌注室中,
其中母体表面向上。通过穿透
基板的两个导管灌注母体侧上的绒毛间间隙。胎儿和母体回
路中的灌注液培养基的流速分别为3.0和12mL/分钟。母体灌注液用由95%O2和5%CO2制成
的气体混合物进行平衡,并且胎儿灌注液用由95%O2和5%CO2的混合物进行平衡。所有实验都在37℃的温度下进行。
[0605] 将每个胎盘小叶灌注一小时的初始控制期,以允许组织使用灌注系统的开放-开放式配置稳定至其新环境。如果在控制期过程中出现下述情况之一,则灌注终止:胎儿回路中的体积损失超过3mL/h,或胎儿静脉与动脉之间的pO2差异小于60mmHg,指示两个回路之
间的灌注重叠不足。控制期随后为使用灌注系统的闭合-闭合式配置(即,培养基的再循环)的四小时实验期。后者通过更换母体和胎儿储库的培养基并且添加3mg/ml的BSA来开始。
[0606] 对于三种不同浓度测试N027跨越人胎盘小叶的转移:0.3mg/ml、3mg/ml和30mg/ml。将十四个个别胎盘灌注四小时,其中N027以0.3mg/ml、3mg/ml和30mg/ml加入母体灌注液中。在实验期过程中,在0、15、30、60、90、120、150、180、210和240分钟时,取出以0.5mL等分试样的来自母体动脉和胎儿静脉的样品。安替比林用作阳性对照,以验证回路的完整性
(图17-18)。使用敏感的内消旋规模发现(MSD)
免疫测定来测定母体和胎儿样品中N027的浓
度,其中定量下限为5ng/ml。该测定涉及使用抗独特型抗体对的夹心形式;其中MSD板用抗独特型Ab包被,随后为与样品的温育,并且用第二生物素化的抗独特型Ab揭示,随后为用加上MSD标签的链霉抗生物素蛋白的检测和读数缓冲液的添加。使用HPLC测定来测定安替比
林的浓度,其中在液-液萃取后在260nm下进行UV检测。跨越十四个实验,安替比林的平均胎儿转移率为41±2.8%。跨越十四个实验,N027的平均胎儿转移率为0.0027±0.0021%,指
示转移水平非常低。结果提示N027可以用于治疗妊娠患者而不引起胎儿暴露的方法中。
[0607] 其它实施例
[0608] 尽管本公开内容已描述了特定实施例,但应理解,它能够进行进一步的
修改,并且本专利申请预期
覆盖一般而言遵循本公开内容原理的本公开内容的任何变化、用途或适应,并且包括与在本公开内容所属领域内的已知或惯常实践,且可以应用于上文所述的基
本特征的此类偏离。
[0609] 所有出版物、专利和专利申请都以引用的方式整体并入本文,其程度如同每个个别出版物、专利或专利申请具体地且个别地指出以引用的方式整体并入。
[0610] 其它实施例在下述权利要求书内。