用于有益于植物生长和防治植物害虫的苏云金芽孢杆菌RTI545组合物和使用方法
阅读：216发布：2022-07-05
专利汇可以提供用于有益于植物生长和防治植物害虫的苏云金芽孢杆菌RTI545组合物和使用方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且提供包含称为RTI545的新的苏 云 金芽孢杆菌菌株的组合物，用于有益于 植物 生长和防治植物 害虫 。特别是，所述RTI545菌株可用于防治植物 线虫 、昆虫和 真菌 害虫。所述组合物包含用RTI545菌株包被的植物 种子 。所述组合物可单独或与其他 微 生物 、生物或化学 杀虫剂 、杀真菌剂、 杀线虫剂 、杀细菌剂、 除草剂 、 植物提取 物、 植物生长调节剂 或 肥料 组合施用。在一个实例中，通过在种植时将化学杀虫剂比如联苯菊酯和液体肥料的组合传递至用RTI545处理的植物或种子来提供增强的生长和昆虫防治。，下面是用于有益于植物生长和防治植物害虫的苏云金芽孢杆菌RTI545组合物和使用方法专利的具体信息内容。
1.一种组合物，其包含：
保藏为ATCC编号PTA-122161的苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis) RTI545或其具有所有其识别特征的突变体的生物纯培养物，和
农业上可接受的辅剂，
为有益于植物生长或在易感植物中赋予保护免受植物害虫的一者或两者，所述组合物施用于植物。
2.权利要求1的组合物，其中所述植物害虫包括昆虫、线虫、植物真菌病原体或植物细菌病原体。
3.权利要求1或权利要求2的组合物，其中苏云金芽孢杆菌RTI545的生物纯培养物以孢子或营养细胞或无细胞提取物的形式存在。
4.权利要求1-3中任何一项的组合物，其中所述辅剂包括种植基质、载体、粘合剂、表面活性剂、分散剂或酵母提取物。
5.权利要求1-4中任何一项的组合物，其进一步包含以适合益于植物生长和/或在易感植物中赋予保护免受病原体感染的量存在的杀虫剂、杀真菌剂、杀线虫剂、杀细菌剂、生物刺激剂、除草剂、植物提取物、微生物提取物、植物生长调节剂或肥料中的一种或组合。
6.权利要求1-5中任何一项的组合物，其中所述组合物进一步包含化学杀虫剂。
7.权利要求6的组合物，其中所述化学杀虫剂包括氯虫苯甲酰胺、氯氧磷、乙基毒死蜱、氰虫酰胺、环溴虫酰胺、氯氰菊酯、二氯丙烯、氟吡呋喃酮、γ氯氟氰菊酯、溴丙磷、丁基嘧啶磷、七氟菊酯、κ联苯菊酯、κ七氟菊酯、呋喃丹、丁硫克百威、杀线威、硫双威、毒死蜱、乙基毒死蜱、甲基毒死蜱、二嗪农、甲拌磷、特丁硫磷、非泼罗尼、啶虫脒、噻虫胺、吡虫啉、噻虫啉、噻虫嗪、阿维菌素、氟啶虫酰胺、氟虫双酰胺、联苯菊酯、λ氯氟氰菊酯、氯氰菊酯、ζ氯氰菊酯、溴氰菊酯、哒螨灵或其任何混合物。
8.权利要求7的组合物，其中所述化学杀虫剂包括联苯菊酯。
9.权利要求1-5中任何一项的组合物，其中所述组合物进一步包含化学杀真菌剂。
10.权利要求9的组合物，其中所述化学杀真菌剂包括噻苯咪唑、氟唑菌酰胺、戊苯吡菌胺、氟唑环菌胺、双苯三唑醇、环丙唑醇、苯醚甲环唑、氟喹唑、粉唑醇、种菌唑、腈菌唑、丙硫菌唑、三唑酮、三唑醇、戊唑醇、灭菌唑、咪酰胺、抑霉唑、苯菌灵、多菌灵、恶霉灵、嘧菌酯、氟嘧菌酯、吡唑醚菌酯、肟菌酯、萎锈灵、氟酰胺、甲霜灵、精甲霜灵、吡噻菌胺、氟吡菌酰胺、硅噻菌胺、氟啶胺、嘧霉胺、咯菌腈、异菌脲、三环唑、克菌丹、棉隆、代森锰锌、威百亩、福美双、双辛胍胺、甲基立枯磷、戊菌隆、甲基硫菌灵、fenpicoxamide、mefentrifluconazole、fluindapyr或其任何混合物。
11.权利要求1-5中任何一项的组合物，其中所述组合物进一步包含化学杀线虫剂。
12.权利要求11的组合物，其中所述化学杀线虫剂包括苯菌灵、克线磷、硫线磷、丙线磷、噻唑硫磷、氯化苦、棉隆、联氟砜、杀线威、1,3-二氯丙烯(telone)、威百亩钠盐、威百亩钾盐、威百亩盐、溴甲烷、异硫氰酸烯丙酯、三氟咪啶酰胺、tioxazafen、氟吡菌酰胺或其任何混合物。
13.权利要求1-12中任何一项的组合物，其中所述组合物存在于与液体肥料或作物营养产品相容的制剂中。
14.权利要求13的组合物，其中所述组合物进一步包含水合硅酸铝镁和至少一种分散剂。
15.权利要求13或14的组合物，其包含联苯菊酯杀虫剂，其中所述联苯菊酯杀虫剂以
0.1 g/ ml-0.2 g/ml范围的浓度存在。
16.一种有益于植物生长或在易感植物中赋予保护免受植物害虫的一者或两者的方法，所述方法包括以适合益于所述植物生长和/或在所述易感植物中赋予保护免受所述植物害虫的量，向所述植物、植物部分、植物的种子、植物的根系、所述植物周围的土壤或生长培养基或者种植所述植物或播种所述植物的种子之前的土壤或生长培养基传递权利要求
1-15中任何一项的组合物，所述组合物包含保藏为ATCC编号PTA-122161的苏云金芽孢杆菌RTI545或其具有所有其识别特征的突变体的生物纯培养物。
17.一种有益于植物生长或在易感植物中赋予保护免受植物害虫的一者或两者的方法，所述方法包括：种植所述植物的种子，其中所述种子已包被有权利要求1-15中任何一项的组合物，所述组合物包含保藏为ATCC PTA-122161的苏云金芽孢杆菌RTI545或其具有所有其识别特征的突变体的生物纯培养物，其中所述植物从所述种子的生长受益和/或赋予保护免受所述植物害虫。
18.权利要求16或权利要求17的方法，其中所述植物包括玉米、大豆、马铃薯、棉花、番茄、胡椒、瓜类蔬菜、甘蔗、花生或小麦。
19.权利要求16-18中任何一项的方法，其中所述植物害虫包括选自草盲蝽属
(Lygusspp.)、鞘翅目(Coleoptera)、根萤叶甲属(Diabrotica spp.)、梳爪叩甲属(Melanotus spp.)、食叶鳃金龟属(Phyllophaga spp.)、丘胸叩甲属(Limonius spp.)、叩甲属(Agriotesspp.)、鳞翅目(Lepidoptera)、疆夜蛾属(Peridroma spp.)、切夜蛾属(Euxoa spp.)、地夜蛾属(Agrotis spp.)、双翅目(Diptera)、种蝇属(Hylemya spp.)、根斑蝇属(Tetanops sp.)、半翅目(Hemiptera)、瘿绵蚜属(Pemphigus sp.)、蚜虫属(Aphis sp.)、Agonoderus sp.、Feltia spp.或其组合的昆虫。
20.权利要求19的方法，其中所述植物害虫包括盲蝽、根虫、金针虫、土壤栖息蛆或白蛴螬复合体。
21.权利要求16-18中任何一项的方法，其中所述植物害虫包括选自肾形线虫属
(Rotlyenchulus spp.)、剑线虫属(Xiphinema spp.)、纽带线虫属(Hoplolaimus spp.)、针线虫属(Paratylenchusspp.)、轮线虫属(Criconemoides spp.)、根结线虫属(Meloidogyne spp.)、鞘线虫属(Hemicycliophora spp.)、螺旋线虫属(Helicotylenchus spp.)、毛刺线虫属(Trichodorusspp.)、孢囊线虫属(Heterodera spp.)、刺线虫属(Belonolaimus spp.)、矮化线虫属(Tylenchorhynchus spp.)、球孢囊线虫属(Globodera spp.)或其组合的植物病原线虫。
22.权利要求21的方法，其中所述线虫包括根结线虫属线虫、针线虫属线虫或球孢囊线虫属线虫或孢囊线虫属线虫。
23.权利要求16-18中任何一项的方法，其中所述植物害虫包括选自链格孢属
(Alternaria ssp.)、曲霉属(Aspergillus spp.)、葡萄孢属(Botrytis spp)、尾孢菌属(Cercospora spp.)、镰刀菌属(Fusarium spp.)、疫霉属(Phytophthora spp.)、丝核菌属(Rhizoctonia spp.)、稻瘟菌属(Magnaporthe spp.)、腐霉属(Pythium spp.)、链核盘菌属(Monilinia spp.)、炭疽菌属(Colletotrichum spp.)、核盘菌属(Sclerotiniaspp.)和欧文氏菌属(Erwiniaspp.)的植物真菌病原体和植物细菌病原体。
24.权利要求23的方法，其中所述植物真菌病原体包括丝核菌属。
25.权利要求16-24中任何一项的方法，其进一步包括将液体肥料或作物营养产品传递至所述植物的种子。
26.一种用权利要求1-15中任何一项的组合物包被的植物种子，所述组合物包含以适合益于植物生长和/或在易感植物中赋予保护免受植物害虫的量存在的保藏为ATCC编号PTA-122161的苏云金芽孢杆菌RTI545或其具有所有其识别特征的突变体的生物纯培养物的孢子。
27.权利要求26的植物种子，其中所述种子包括玉米、大豆、马铃薯、棉花、番茄、胡椒、瓜类蔬菜、甘蔗、花生或小麦的种子。
用于有益于植物生长和防治植物害虫的苏云金芽孢杆菌
RTI545组合物和使用方法
[0001] 相关申请的交叉参考本申请要求2016年10月5日提交的美国临时申请第62/404275号的益处，其公开特此通过参考以其全部结合到本文中。
技术领域
[0003] 背景许多对植物生长和健康具有有益作用的微生物已知存在于土壤中，特别是在根区(根际相关细菌)与植物生活在一起，或作为植物内的内生菌存在。其有益的植物生长促进特性包括固氮、铁螯合、溶磷、抑制非有益微生物、对害虫的抗性或排除害虫、诱导性系统抗性(ISR)、系统获得性抗性(SAR)、土壤中的植物材料分解以增加有用的土壤有机质以及植物激素(比如吲哚乙酸(IAA)、乙偶姻和2,3-丁二醇，其刺激植物生长、发育和对环境压力比如干旱的反应)的合成。另外，这些微生物可通过分解前体分子1-氨基环丙烷-1-甲酸酯(ACC)来干扰植物的乙烯应激反应，从而刺激植物生长并减缓果实成熟。这些有益微生物可改善土壤质量、植物生长、产量和作物质量。各种微生物呈现出生物活性比如可用于防治植物疾病。这些生物杀虫剂(活生物体和由这些生物体天然产生的化合物)通常认为比合成肥料和杀虫剂更加安全和更加可生物降解。
[0004] 例如，已知有益的植物相关细菌(根际的和内生菌的两者)提供给宿主植物许多益处，其范围从对疾病和虫害的抗性和对环境应激(包括寒冷、盐度和干旱应激)的耐受性。由于接种有植物生长促进细菌的植物从土壤中获得更多的水和养分，例如由于根系发育较好，植物生长更健康并且不易受到生物和非生物应激的影响。因此，本发明的微生物组合物可单独或与当前作物管理投入比如化肥、除草剂和杀虫剂组合施用，以使作物生产率最大化。植物生长促进作用转化为植物生长更快并增加地上生物量，这种特性可用于改善早期活力。改善早期活力的一个益处为植物更具竞争力和胜过杂草，通过最大限度地减少劳动力和除草剂的施用直接降低杂草管理的成本。植物生长促进作用也转化为改善根系发育，包括根系更深和更宽，其中根系更细与水和养分的吸收有关。该特性使得能够更好地利用农业资源，并减少用于灌溉需求和/或施肥的水。根系发育和根系结构的变化影响植物与其他土传微生物的相互作用，所述其他土传微生物包括有益真菌和细菌，其帮助植物进行养分吸收，包括固氮和溶磷。这些有益的微生物还与植物病原体竞争，以增加总体植物健康并减少对化学杀真菌剂和杀虫剂的需求。当有害虫存在时，更发达的根系也使得能够提高产量。
[0005] 真菌植物病原体，包括(但不限于)葡萄孢属(Botrytis spp.)(例如灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea))、镰刀菌属(Fusarium spp.)(例如尖孢镰刀菌(F. oxysporum)和禾谷镰刀菌(F. graminearum))、丝核菌属(Rhizoctonia spp.) (例如立枯丝核菌(R. solani))、稻瘟菌属(Magnaporthe spp.)、球腔菌属(Mycosphaerella spp.)、柄锈菌属(Puccinia spp.) (例如隐匿柄锈菌(P. recondita))、疫霉菌属(Phytopthora spp.)和层锈菌属(Phakopsora spp.) (例如豆薯层锈菌(P. pachyrhizi))，为一种类型的植物害虫，其可在农业和园艺产业中造成严重的经济损失。化学试剂可用于防治真菌植物病原体，但化学试剂的使用存在缺点，包括成本高、出现害虫的抗性株以及潜在不期望的环境影响。另外，除处理针对的植物害虫之外，这种化学处理可能对有益细菌、真菌和节肢动物产生不利影响。第二种类型的植物害虫为细菌病原体，包括(但不限于)欧文氏菌属(Erwinia spp.) (比如菊欧文氏菌(Erwinia chrysanthemi))、泛菌属(Pantoea spp.) (比如柠檬泛菌(P. citrea))、黄单胞菌属(Xanthomonas) (例如野生油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris))、假单胞菌属(Pseudomonas spp.) (比如丁香假单胞菌(P. syringae)和劳尔氏属菌(Ralstonia spp.) (比如茄科茄劳尔氏菌(R. soleacearum))，其在农业和园艺产业中造成严重的经济损失。与病原真菌相似，使用化学试剂来处理这些细菌病原体存在缺点。病毒和病毒样生物体构成难以防治的第三种类型的植物致病因子，但细菌微生物可经诱导性系统抗性(ISR)在植物中提供对其的抗性。因此，可用作生物肥料和/或生物杀虫剂来防治病原性真菌、病毒和细菌的微生物对提高农业可持续性为理想的和高度需要的。
最终类型的植物病原体包括植物致病线虫和昆虫，其可导致严重的植物损害和损失，并降低产量。
最终类型的植物病原体包括植物致病线虫和昆虫，其可导致严重的植物损害和损失，并降低产量。
[0006] 已经报道物种芽孢杆菌属的一些成员作为生物防治菌株，并且一些已用于市售产品中(Joseph W. Kloepper, et al. 2004, Phytopathology Vol. 94, No. 11, 1259-1266)。例如，目前用于市售生物防治产品的菌株包括：短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)菌株QST2808，用作SONATA和BALLAD-PLUS中的活性成分，由BAYER CROP SCIENCE生产；短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)菌株GB34，用作YIELDSHIELD的活性成分，由BAYER CROP SCIENCE生产；枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株QST713，用作SERENADE的活性成分，由BAYER CROP SCIENCE生产；枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株GBO3，用作KODIAK和SYSTEM3的活性成分，由Helena Chemical Company生产。已将苏云金芽孢杆菌和坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)的各种菌株用作针对线虫和昆虫的生物防治剂，并且这些菌株用作许多市售可得到的生物防治产品的基础，包括包含苏云金芽孢杆菌库斯塔克亚种(Bacillus thuringiensis subsp kurstaki)菌株的DIPEL(由VALENT BIOSCIENCES CORPORATIO生产)和包含坚强芽孢杆菌(B. firmus)菌株的NORTICA和PONCHO-VOTIVO (由Bayer Crop Science生产)。另外，目前用于市售生物刺激剂产品的芽胞杆菌属菌株包括：
用作RhizoVital 42中的活性成分的枯草芽孢杆菌解淀粉变种(Bacillus subtilis var. amyloliquefaciens)菌株FZB42 (由ABiTEP GmbH生产)以及作为全细胞(包括其发酵提取物)包括在生物刺激剂产品(比如由JHBiotech Inc.生产的FULZYME)中的各种其他枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)物种。
用作RhizoVital 42中的活性成分的枯草芽孢杆菌解淀粉变种(Bacillus subtilis var. amyloliquefaciens)菌株FZB42 (由ABiTEP GmbH生产)以及作为全细胞(包括其发酵提取物)包括在生物刺激剂产品(比如由JHBiotech Inc.生产的FULZYME)中的各种其他枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)物种。
[0007] 然而，期望开发益于植物生长和防治植物害虫的新组合物和方法。
[0008] 概述本公开的主题提供微生物组合物及其用于益于植物生长和防治植物害虫的方法。
[0009] 在一个实施方案中提供一种组合物，其包含保藏为ATCC编号PTA-122161的苏云金芽孢杆菌RTI545或其具有所有其识别特征的突变体的生物纯培养物，用于施用于植物以获得益于植物生长或在易感植物中赋予保护免受植物害虫中的一种或两种。
[0010] 在一个实施方案中提供一种方法，用于获得益于植物生长或在易感植物中赋予保护免受植物害虫中的一种或两种，方法包括以适合益于植物生长和/或在易感植物中赋予保护免受植物害虫的量，向植物、植物部分、植物的种子、植物的根系、植物或植物的种子周围的土壤或生长培养基或者种植植物或播种植物的种子之前的土壤或生长培养基传递包含保藏为ATCC编号PTA-122161的苏云金芽孢杆菌RTI545或其具有所有其识别特征的突变体的生物纯培养物的组合物。
[0011] 在一个实施方案中提供一种方法，用于获得益于植物生长或在易感植物中赋予保护免受植物害虫中的一种或两种，方法包括向植物、植物部分、植物的种子、植物的根系、植物或植物的种子周围的土壤或生长培养基或者种植植物或播种植物的种子之前的土壤或生长培养基传递以下的组合：以适合益于植物生长和/或在易感植物中赋予保护免受植物害虫的量包含保藏为ATCC编号PTA-122161的苏云金芽孢杆菌RTI545或其具有所有其识别特征的突变体的生物纯培养物的组合物；以适合益于植物生长和/或在易感植物中赋予保护免受植物害虫的量存在的杀虫剂、杀真菌剂、杀线虫剂、杀细菌剂、生物刺激剂、除草剂、植物提取物、微生物提取物、植物生长调节剂或肥料中的一种或组合。这些另外的试剂中的每一种可为生物试剂或化学试剂。
[0012] 在一个实施方案中提供一种包被有组合物的植物种子，组合物包含以适合益于植物生长和/或在易感植物中赋予保护免受植物害虫的量存在的保藏为ATCC编号PTA-122161的苏云金芽孢杆菌RTI545或其具有所有其识别特征的突变体的生物纯培养物的孢子。
[0013] 在一个实施方案中提供一种方法，用于获得益于植物生长或在易感植物中赋予保护免受植物害虫中的一种或两种，方法包括种植植物的种子，其中种子已包被有组合物，组合物包含保藏为ATCC PTA-122161的苏云金芽孢杆菌RTI545或其具有所有其识别特征的突变体的生物纯培养物，其中植物从种子的生长受益和/或赋予保护免受植物害虫。
[0014] 在一个实施方案中提供一种益于植物生长的组合物，组合物包含：保藏为ATCC编号PTA-122161的苏云金芽孢杆菌RTI545或其具有所有其识别特征的突变体的生物纯培养物；和联苯菊酯杀虫剂。
[0016] 图1A为在最左侧显示包被有化学杀虫剂(围绕内圆的暗带)的植物种子(内圆)的示意图，植物根际中的植物虫害由水平标记表示。该图的中间部分显示具有扩散的杀虫剂的发芽的植物种子，杀虫剂保护植物种子的根系免受虫害(保护由“X”标记表示)。该图示的最右侧显示随着根系生长超出化学杀虫剂的扩散区，植物种子的根系免受虫害的保护作用减弱。
[0017] 图1B显示图1A的示意图，根据本公开的一个或多个实施方案向植物种子上的包被或植物种子周围的土壤中添加苏云金芽孢杆菌RTI545。该图示的最右侧显示植物种子的根系由于在植物根际中建立苏云金芽孢杆菌RTI545而免受虫害的持续保护作用，即使根系生长超出化学杀虫剂的扩散区。
[0018] 图2为显示使用本公开的一个或多个实施方案的持家基因rpoB的RTI545菌株的系统发育的示意图。自展值表示重复1000次。外群序列来自超嗜热古细菌(hypertheromiphilic archaea)激烈火球菌(Pyrococcus furiosus) DSM3638。
[0019] 图3A为根据本公开的一个或多个实施方案，在通过淋水灌溉种植时，用苏云金芽孢杆菌菌株RTI545的营养细胞处理的种子种植12天后采集的玉米幼苗的图像。
[0020] 图3B为从与图3A中类似但没有添加苏云金芽孢杆菌RTI545细胞进行处理的种子种植12天后采集的玉米幼苗的图像。
[0021] 图4为显示根据本公开的一个或多个实施方案，苏云金芽孢杆菌RTI545细胞在玉米幼苗的择食饲喂测定中驱避南方玉米根虫(SCRW)幼虫的能力的图像。在图像中，左侧的滤纸用苏云金芽孢杆菌菌株RTI545细胞处理，和右侧的滤纸用水处理作为对照。
[0022] 图5为显示根据本公开的一个或多个实施方案，与对照和以下土壤处理相比较，在自然感染有球孢囊线虫属线虫并用每升土壤109 cfu孢子的苏云金芽孢杆菌RTI545细胞(RTI545)增强的土壤中盆栽马铃薯植株的每克根系生物量的孢囊数目的图表：Vydate (DUPONT; A.I. =杀线威[甲酰基N’N’-二甲基-N-[(甲基氨基甲酰基)氧基)氧基]-1-thiooxamimidate)、BIOACT (BAYER CROPSCIENCES LP; 淡紫拟青霉菌(Paecilomyces lilacinus)菌株251)、carex (NUFARM, 哒螨灵)和HD-1 (苏云金芽孢杆菌库斯塔克亚种(Bacillus thuringiensis subsp kurstaki) HD-1)。
[0023] 图6A显示趋化性测试场地的示意性平面图，用于测定受试样品对线虫的吸引/驱避性。图6B为以100 μg/ml测试的卡那霉素水解物(kanosamine)测定的照片，其中代表线虫位置的圆点表示无倾向性分布。图6C为在100%强度下测试的RTI 545上清液测定的照片，其中代表线虫位置的圆点表示驱避性分布。
[0024] 详述在整个该说明书和权利要求中，术语“包含”、“包含”和“包含”以非排他性的意义使用，除非上下文另外要求。同样地，术语“包括”及其语法变体意欲为非限制性的，使得列表中条目的列举不排除可替换或添加至所列条目的其他类似条目。
[0025] 出于本说明书和所附权利要求的目的，当连同一个或多个数字或数值范围一起使用时，术语“约”应理解为是指所有这种数字，包括范围中的所有数字和通过将边界扩展至高于和低于所阐述的数值来修改该范围。通过端点表述数值范围包括纳入该范围内的所有数字，例如整数，包括其分数(例如表述1-5包括1、2、3、4和5以及其分数例如1.5、2.25、3.75、4.1等)以及该范围内的任何范围。当范围被表述为从下限列表至上限列表时，范围被定义为从所述下限中的任何一个至所述上限中的任何一个。
[0026] 商品名本文以大写字母表示。
[0027] 如本文出于本说明书和权利要求的目的使用的那样，在一个实施方案中，短语“苏云金芽孢杆菌RTI545的生物纯培养物”是指以下的一种或组合：细菌菌株的生物纯发酵培养物的孢子、细菌菌株的生物纯发酵培养物的营养细胞、细菌菌株的生物纯发酵培养物的一种或多种产物、细菌菌株的生物纯发酵培养物的培养固体、细菌菌株的生物纯发酵培养物的培养上清液和细菌菌株的生物纯发酵培养物的无细胞提取物。
[0028] 在另一个实施方案中，短语“苏云金芽孢杆菌RTI545的生物纯培养物”是指以下的一种或组合：细菌菌株的生物纯发酵培养物的孢子、细菌菌株的生物纯发酵培养物的营养细胞、细菌菌株的生物纯发酵培养物的一种或多种产物和细菌菌株的生物纯发酵培养物的培养固体。在该实施方案的一个变体中，短语可指细菌菌株的生物纯发酵培养物的孢子。
[0029] 在仍然另一个实施方案中，短语“苏云金芽孢杆菌RTI545的生物纯培养物”是指以下的一种或组合：细菌菌株的生物纯发酵培养物的培养上清液和细菌菌株的生物纯发酵培养物的无细胞提取物。
[0030] 值得注意的是，“苏云金芽孢杆菌RTI545的生物纯培养物”可以生物纯培养物的孢子、营养细胞或无细胞提取物的形式存在。
[0031] 本文出于本说明书和权利要求的目的使用的短语“植物害虫”是指对植物有害和/或致病的任何害虫，非限制性地包括植物害虫比如昆虫、寄生虫、线虫、真菌、细菌或病毒。
[0032] 本文提供一种从羊茅草的土壤中分离的新的植物相关细菌，称为“RTI545”。该菌株基于序列分析鉴定为苏云金芽孢杆菌菌株，尽管该菌株缺乏通常在苏云金芽孢杆菌菌株中发现的晶体蛋白的基因。出乎意料的是，RTI545菌株呈现出强烈的驱虫活性，但未能在直接接触和择食饲喂测定中杀死昆虫幼虫。本文提供包括苏云金芽孢杆菌RTI545菌株的生物纯培养物的组合物和方法，用于传递至植物、植物部分、植物种子、植物根系或土壤以益于植物生长和赋予保护免受植物害虫。生长益处和赋予的保护包括改善幼苗活力、改善根系发育、改善植物生长、改善植物健康、增加产量、改善外观、改善对植物害虫的抗性、减少病原体感染或其组合。
[0033] 将组合物传递至植物或植物部分包括传递至植物的任何部分，包括地上部分(比如叶子部分)和用于繁殖植物的植物部分(比如幼苗、移植物、插条(例如茎、根、叶等)、根茎、孢子、芽段(例如甘蔗的)、鳞茎、球茎、块茎或其部分)或可从中获得完整植株的其他植物组织。向植物或植物的种子周围的土壤或生长培养基或者种植植物或播种植物的种子之前的土壤或生长培养基传递包括在种植时犁沟内施用组合物，包括掺入或混合组合物与土壤或生长培养基、将组合物施用于土壤的表面或生长培养基上，比如通过土壤浇灌等。
[0034] 在一个实施方案中，将苏云金芽孢杆菌RTI545菌株与化学杀虫剂组合传递至植物、植物部分、植物种子、植物根系或土壤中，以通过在植物根际建立RTI545菌株来扩展化学杀虫剂的防治。所提出的通过RTI545菌株防治该昆虫的机制如图1所示。图1A显示通过单独用化学杀虫剂(即没有RTI545)包被种子来防治昆虫。包被有杀虫剂(围绕内圆的暗带)的植物种子(内圆)显示在图1A图示的最左侧，其被植物根际中由水平标记表示的植物虫害围绕。该图的中间部分显示具有扩散的杀虫剂的发芽的植物种子，杀虫剂保护植物种子的根系免受虫害(保护由“X”标记表示)。该图示的最右侧显示随着根系生长超出化学杀虫剂的扩散区，植物种子的根系免受虫害的保护作用减弱。图1B中的图示说明如何将苏云金芽孢杆菌RTI545孢子添加至植物种子上的包被中或当犁沟内施用改善昆虫防治超过单独使用杀虫剂包被时所提出机制。具体地讲，图1B图示的最右侧显示植物种子的根系由于在植物根际中建立苏云金芽孢杆菌RTI545而免受虫害的持续保护作用，即使根系生长超出化学杀虫剂的扩散区。在一个实例中，用RTI545细胞包被或者否则用RTI545处理的种子与化学杀虫剂联苯菊酯和施用液体肥料组合种植，以益于植物生长和防治虫害。
[0035] RTI545菌株的分离和表征在本文提供的实施例中更具体地描述。实施例1描述了RTI545菌株的16S rDNA (SEQ ID NO: 1)和rpoB (SEQ ID NO: 2)基因与NCBI和RDP数据库中的其他已知细菌菌株的序列使用BLAST的比较。该分析将菌株RTI545置于蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)/苏云金芽孢杆菌(thuringiensis)/炭疽芽孢杆菌(anthracis)分支群中。使用Bootstrap一致树(重复1000次)对rpoB基因实施RTI545菌株和相关芽孢杆菌属的进一步系统发育分析。rpoB基因的一致树如图2所示。从图2可以看出，RTI545菌株在蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)/苏云金芽孢杆菌(thuringiensis)/炭疽芽孢杆菌(anthracis)分支群中形成单独的分支，表明RTI545为属于蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)/苏云金芽孢杆菌(thuringiensis)/炭疽芽孢杆菌(anthracis)分支群的新的菌株。另外的序列分析显示RTI545菌株缺乏通常在苏云金芽孢杆菌菌株中发现的晶体蛋白的基因。
[0036] 另外，实施全基因组序列分析以使用基于MUMmer和BLASTn的平均核苷酸一致性(ANI)和UNIPEPT分析两者来比较RTI545菌株与密切相关的芽孢杆菌属物种的菌株，以确认其系统发育分类。基于MUMmer和BLASTn的ANI计算的结果如以下表I所示。ANI和UNIPEPT两者的分析(数据未显示)两者均显示RTI545与发表的菌株序列之间存在显著程度的序列相似性，表明为蜡状芽孢杆菌(B. cereus)和苏云金芽孢杆菌(B. thuringiensis)两者。与所识别类型的菌株具有最高序列相似性为公认的菌株苏云金芽孢杆菌Berliner ATCC10792。同样，全基因组序列与先前发表的那些的差异表明，RTI545为一种属于蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)/苏云金芽孢杆菌(thuringiensis)/炭疽芽孢杆菌(anthracis)分支群的新的苏云金芽孢杆菌菌株。
[0037] 基于前述序列分析，将RTI545菌株鉴定为一种新菌株，并且本文称为苏云金芽孢杆菌菌株。
[0038] RTI545的菌株于2015年5月12日在美国弗吉尼亚州马纳萨斯的美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection) (ATCC)根据国际承认用于专利程序的微生物保存布达佩斯条约(Budapest Treaty on the International Recognition of the Deposit of Microorganisms for the Purposes of Patent Procedure)的条款保存，并且具有专利登记号PTA-122161。
[0039] 证实苏云金芽孢杆菌RTI545菌株在各种植物中和在不同条件(包括体外、温室和田间试验研究)下的生长促进、抗微生物及昆虫和线虫和真菌防治活性的实验结果提供在图3-5和本文的实施例2-17中。具体地讲，苏云金芽孢杆菌RTI545菌株显示出益于植物生长和赋予对植物害虫的防治，包括根虫比如南方玉米根虫(SCRW)、金针虫比如小麦金针虫和玉米金针虫、白蛴螬复合体、土壤栖息蛆比如玉米种子蛆和种子蛆、盲蝽比如西方盲蝽(WPB)、线虫和真菌病原体比如丝核菌属。在一些情况下，与基于生物和化学活性剂的组合或单独的化学活性剂的市售可得到的产品相比较，用苏云金芽孢杆菌RTI545菌株进行种子处理提供了等同或更好的结果。
[0040] 苏云金芽孢杆菌RTI545以平板测定对几种主要植物病原体的拮抗特性描述于实施例2中，并且表型特征比如植物激素产生、乙偶姻和吲哚乙酸(IAA)及菌株的养分循环描述于实施例3中。
[0041] 实施例4描述玉米种子与RTI545细胞的温育对种子萌发、根系发育和早期生长的积极影响。结果如图3A和图3B所示，其为在存在(图3A)和不存在(图3B)RTI545菌株的情况下生长12天之后玉米幼苗的图像。从图中可以看出，RTI545菌株的存在导致显著的生长优势。
[0042] 实施例5描述用RTI545细胞接种玉米种子对早期植物生长和活力的积极影响。将表面灭菌的萌发的玉米种子在室温下，于108 CFU/ml的RTI545的悬浮液中接种2天，随后将接种的种子种植于花盆中并在温室中温育。在生长42天之后测量玉米幼苗生物量的湿重和干重。与未接种的对照相比较，接种有苏云金芽孢杆菌RTI545菌株的植物的玉米幼苗生物量的湿重和干重增加。从湿和干生物量两者的显著增加可以看出，RTI545菌株的存在导致显著的生长优势。
[0043] 实施例6描述RTI545菌株的出乎意料的驱虫活性。为了拮抗西方盲蝽(WPB)，苏云金芽孢杆菌RTI545以直接喷雾、择食饲喂和无择食饲喂测定以及对照包括培养基空白、化学活性剂(O,S-二甲基乙酰基硫代磷酰胺酯)和苏云金芽孢杆菌库斯塔克亚种(Bacillus thuringiensis subsp kurstaki) HD-1 (HD-1)进行评估。正如预期的那样，对于培养基空白或HD-1处理没有观察到显著的死亡率(直接喷雾和无择食饲喂测定)或驱避性(择食饲喂测定)，而化学对照杀死(直接喷雾和无择食饲喂测定)和驱避(择食饲喂测定)WPB。在直接喷雾和无择食饲喂测定两者中，苏云金芽孢杆菌RTI545没有提供给WPB显著的死亡率，然而出乎意料的是，RTI545在WPB被置于择食测定场地之后124小时显示出驱避行为。具体地讲，当将WPB置于装有经处理和未经处理的食物来源的容器中时，观察到WPB仅进食未经处理的食物来源(数据未显示)。
[0044] 为了拮抗南方玉米根虫(SCRW)幼虫，以玉米幼苗的择食饲喂测定评估苏云金芽孢杆菌RTI545细胞并与水对照进行比较。与水对照相比较的另外处理为i) 菌株苏云金芽孢杆菌库斯塔克亚种(Bacillus thuringiensis subsp kurstaki) HD-1 (HD-1)，ii) 化学对照CAPTURE LFR (A.I. = 17.15%联苯菊酯)，和iii) 869培养基。将滤纸切成两半并将每部分置于培养皿中，将处理物或去离子水涂布于每半滤纸上。一粒萌发的玉米种子位于每半湿滤纸上。将10只二龄幼虫置于经处理和未经处理的滤纸之间的中线处。将培养皿密封并保持6天。6天之后用RTI545细胞进行平板测定的图像如图4所示，和来自所有平板测定的数据概述在表IV中。如以上对WPB的测定观察到的，RTI545出人意料地驱避但没有杀死SCRW幼虫。从图4和表IV中可以看到，RTI545培养物在驱避SCRW幼虫方面表现出色，100%的幼虫存在于经水处理的一半滤纸上，并且在经RTI545处理的纸上没有幼虫。相比之下，对于HD-1菌株，幼虫在处理物和水对照之间在统计学上平均分开。化学防治导致经处理的滤纸上存在约19%的幼虫。表V显示类似的结果。结果表明，RTI545菌株在从玉米种子驱避昆虫方面出乎意料地优于化学杀虫剂，但没有杀死昆虫。
[0045] 表VI比较了卡那霉素水解物和苏云金芽孢杆菌菌株RTI545和FD30对SCRW的驱避效果，表明RTI545对昆虫的驱避行为可能是由于卡那霉素水解物的产生。
[0046] 实施例7显示出与卡那霉素水解物相比较，暴露于RTI545上清液的根结线虫的驱避和卵孵化抑制作用。表VII和VIII中概述的结果表明，RTI545对线虫的作用似乎不是由卡那霉素水解物的产生引起的。
[0047] 实施例8描述通过用苏云金芽孢杆菌RTI545的孢子处理玉米和大豆种子，在昆虫压力下的田间和温室试验中对生长和产量的积极影响。在威斯康星州的田间试验中测量了对玉米害虫金针虫和种子蛆的生长、产量和防治的影响。在温室中实施了另外的实验以测量在存在金针虫的情况下对早期植物生长的影响。
[0048] 在田间试验性实验中，玉米种子用含有以下的浆液处理：1) 包含MAXIM + APRON XL (称为“FC”)的化学真菌防治处理；2) FC +杀虫剂联苯菊酯0.125 mg/种子；3) FC + PONCHO 1250 (噻虫胺1.25 mg/种子)和VOTIVO (坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)I-1582)；4) FC + PONCHO 250 (噻虫胺0.25 mg/种子)；5) FC + PONCHO 500 (噻虫胺0.5 mg/种子)和VOTIVO (坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)I-1582)；和6) FC +联苯菊酯(0.125 mg/种子) + 苏云金芽孢杆菌RTI545的孢子。将经处理的玉米种子以单独的田间试验种植于威斯康星州的大量滋生金针虫和种子蛆土壤中。结果如以下表IX所示。包含苏云金芽孢杆菌RTI545与杀虫剂联苯菊酯的组合导致出苗率、植株站立、活力及金针虫和种子蛆两者的防治显著改善超过单独用联苯菊酯处理的种子。另外，苏云金芽孢杆菌RTI545和联苯菊酯的组合的结果在防治金针虫方面在统计学上等同于产品PONCHO 1250 VOTIVO，并且在防治种子蛆方面显示出超过该产品的改善。这些数据表明，用苏云金芽孢杆菌RTI545和化学杀虫剂比如联苯菊酯的组合进行的玉米种子处理显著改善昆虫防治超过单独包含化学杀虫剂，并且对于某些类型的昆虫防治而言优于市售可获得的产品。
[0049] 在第二次田间试验中，玉米种子用与第一次试验相同的浆液进行处理，其中含有：1) 化学防治MAXIM + APRON XL (称为“FC”)；2) FC +联苯菊酯；3) FC + PONCHO 1250 VOTIVO；4) FC + PONCHO 250；和5) FC +联苯菊酯+ RTI545的孢子。经处理的玉米种子以单独的田间试验种植于威斯康星州，其中存在金针虫但没有种子蛆。种植之后41天评定来自金针虫饲喂的玉米根系的损害。结果如以下表X所示，并且显示出与先前试验类似的结果。具体地讲，包含苏云金芽孢杆菌RTI545与杀虫剂联苯菊酯的组合导致出苗率、植株站立、活力及金针虫的防治显著改善超过单独用联苯菊酯处理的种子。另外，苏云金芽孢杆菌RTI545和联苯菊酯的组合的结果在防治金针虫方面在统计学上等同或优于产品PONCHO
1250 VOTIVO。
1250 VOTIVO。
[0050] 与PONCHO VOTIVO相比较，用化学杀虫剂和RTI545的孢子的组合进行种子处理之后的玉米田间试验中的平均产量也被测定。结果如以下表XI所示。包含苏云金芽孢杆菌RTI545与杀虫剂联苯菊酯的组合导致与单独用联苯菊酯处理的种子相比较产量显著提高。另外，RTI545和联苯菊酯的组合优于PONCHO 500 VOTIVO和PONCHO 1250 VOTIVO两者，产量增加13蒲式耳/英亩(分别从180.5增加至193.7和从185.5增加至193.7蒲式耳/英亩)，分别表示粮食产量增加6.8%和4.2%。这些数据表明，用RTI545和化学杀虫剂比如联苯菊酯的组合进行玉米种子处理显著提高产量超过单独包含化学杀虫剂，并减少对犁沟内施用大量化学杀虫剂以防治昆虫损害的需求。
[0051] 进一步评估了通过用RTI545的孢子处理玉米种子对在昆虫压力下的生长的影响。在一组温室研究中，玉米种子首先用如下所述的种子处理浆液进行处理，并然后种植于大量滋生有害虫金针虫的土壤中(每盆一粒种子10只金针虫)，以及对照组的土壤不含金针虫。种子处理浆液如下：1) 化学防治MAXIM + APRON XL (称为“FC”)；2) FC；3) FC +联苯菊酯(对于所有处理的处理物为0125 mg/种子)；4) FC +联苯菊酯+ RTI545 5.0x106；5) FC +联苯菊酯+ RTI545 5.0x106和热处理；6) FC +联苯菊酯+ RTI545 1.0x106；7) FC +
6
RTI545 5.0x10；和8) FC + PONCHO 1250。评估经处理的种子的出苗率。
6
RTI545 5.0x10；和8) FC + PONCHO 1250。评估经处理的种子的出苗率。
[0052] 结果如以下表XII所示。包含苏云金芽孢杆菌RTI545与杀虫剂联苯菊酯的组合导致100%出苗，其提高超过单独包含联苯菊酯，并且提供的结果等同于没有金针虫和FC + PONCHO 1250化学处理的对照组。饲喂梅子根的金针虫导致玉米植物发育迟缓，并且单独的RTI545或联苯菊酯与RTI545减少存活植物的植物发育迟缓。单独的RTI545在防止植物损失方面呈现出活性，但在提供早期保护免受发育迟缓方面不如杀虫剂联苯菊酯。然而，随着植物生长，RTI545在防止植物发育迟缓方面更有效(数据未显示)。这些数据表明，在玉米种子处理中单独或与化学杀虫剂比如联苯菊酯组合包含RTI545的孢子，在存在虫害金针虫的情况下显著改善植物健康。
[0053] 实施实验以确定除苏云金芽孢杆菌RTI545的孢子与化学杀虫剂的组合之外，通过用化学活性成分的标准杀真菌组合处理大豆种子对产量的影响。如下所述实施实验。在实验中，将大豆种子与含有以下的溶液混合：1) 化学防治咯菌腈/TPM/精甲霜灵(“FC”)；2) FC +杀虫剂噻虫嗪；和3) FC +噻虫嗪+苏云金芽孢杆菌RTI545的孢子。将经处理的大豆种子种植于具有金针虫大量滋生的3个地点(N = 3)并分析产量。结果如以下表XIII所示。包含RTI545孢子与噻虫嗪的组合导致与单独用噻虫嗪处理的种子相比较产量显著提高。这些数据表明，用RTI545和化学杀虫剂的组合进行大豆种子处理显著提高产量超过单独包含杀虫剂，并减少对犁沟内施用大量化学杀虫剂以防治昆虫损害的需求。
[0054] 实施例9描述苏云金芽孢杆菌RTI545菌株降低大豆和马铃薯中的线虫大量滋生的能力。用来自经和不经RTI545细胞处理的种子盆栽于感染有南方根结线虫(南方根结线虫(Meloidogyne incognita))的土壤中的大豆植物实施温室研究。种子处理包括产品PONCHO VOTIVO (BAYER CROPSCIENCE LP; A.I. = 40.3%噻虫胺、8.1%坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)I-1582)和AVICTA COMPLETE (SYNGENTA; A.I. = 11.7%噻虫嗪、10.3%阿维菌素、2.34%噻苯咪唑、0.3%咯菌腈、0.23%精甲霜灵、0.12%嘧菌酯)。结果如以下表XIV所示。在开始之后63天时，对用RTI545细胞处理的种子和用化学组合AVICTA COMPLETE处理的种子，线虫卵/盆的数目没有统计学差异。然而，对用RTI545细胞处理的种子线虫卵/盆的数目少于用PONCHO VOTIVO处理的种子。这证实了由苏云金芽孢杆菌RTI545提供的对大豆的线虫防治的积极影响，与基于市售可得到的生物加化学和化学活性物质的产品相比较，提供等同于更好的防治。
[0055] 用在自然感染有球孢囊线虫属线虫的土壤中盆栽的马铃薯植株实施了温室研究，以确定用苏云金芽孢杆菌RTI545细胞处理土壤的效果。将马铃薯(线虫敏感品种 “宾杰”)种植于感染有球孢囊线虫属并用每升土壤109 cfu孢子的RTI545增强的土壤中(对照)。结果如图5中的图表所示。在该研究中包括另外的土壤处理：VYDATE产品(DUPONT; A.I. =杀线威[甲酰基N’N’-二甲基-N-[(甲基氨基甲酰基)氧基)氧基]-1-thiooxamimidate)、BIOACT产品(BAYER CROPSCIENCES LP; A.I. =淡紫拟青霉菌(Paecilomyces lilacinus)菌株251)、carex产品(NUFARM, 哒螨灵)和苏云金芽孢杆菌库斯塔克亚种(Bacillus thuringiensis subsp kurstaki)HD-1。产品以产品标签上指定的比率施用。从图1中可以看到，与包括含有化学活性成分的产品的所有处理相比较，对用RTI545细胞处理的土壤，每克根系生物量的孢囊数目显著减少。这证实了由苏云金芽孢杆菌RTI545提供的对马铃薯的线虫防治的积极效果，与基于市售可得到的生物和化学活性剂的产品相比较，提供更好的防治。
[0056] 实施例10描述实施的实验，以研究除用于病原体防治的化学活性剂之外，当用RTI545菌株处理种子时，在存在丝核菌属病压力的情况下对棉花的出苗、根病和产量的影响。
[0057] 具体地讲，棉花实验建立如下：1) 种子未经处理(UTC)；2) 根据制造商标签，用咯菌腈+精甲霜灵+吡虫啉的基础组合(称为“B”)处理种子；3) 用基础加5 x 105 cfu/种子的RTI545 (B + RTI545)处理种子；和4) 根据标签说明书，用基础加VIBRANCE (活性成分氟唑环菌胺，SYNGENTA CROP PROTECTION, INC) (B + VIBRANCE)处理种子。在乔治亚州实施了田间试验。通过在种植时使干燥的接种物与种子混合至规定的比率来将试验接种有丝核菌属，以在种子开始生长时提供感染。平均棉花出苗率呈现于以下表XV中。
[0058] 表XV中的结果表明，除基础之外，用RTI545孢子处理导致出苗率显著改善超过单独的化学基础。另外，用RTI545进行处理表现与基础加含有化学活性剂的市售产品VIBRANCE一样好。因此，即使在严重病原体压力的条件下，用RTI545进行种子处理也可提供出苗的显著改善。
[0059] 实施例11描述研究用苏云金芽孢杆菌RTI545的孢子处理的小麦种子和用RTI545加化学活性剂处理的种子进行病原体防治，对昆虫压力下的生长和产量的影响的实验。更具体地讲，在威斯康星州的田间试验中测量了对小麦害虫金针虫和白蛴螬的生长、产量和防治的影响。小麦种子用含有以下的浆液进行处理：1) 化学杀真菌剂基础苯醚甲环唑/戊6
唑醇/TPM/精甲霜灵(称为“FC”)；2) FC +苏云金芽孢杆菌RTI545的孢子(RTI545 1x10 cfu/g种子)；3) FC +联苯菊酯(20 g/种子)；4) FC +联苯菊酯(20 g/种子) + RTI545
1x106 cfu/g种子；5) FC +联苯菊酯(50 g/种子)；和6) FC +联苯菊酯(50 g/种子) + RTI545 1x106 cfu/g种子。结果如以下表XVI所示。种子用苏云金芽孢杆菌RTI545孢子进行处理和用RTI545孢子与杀真菌剂基础(单独或与杀虫剂联苯菊酯组合)进行处理中的每种，导致出苗率、活力、金针虫和白蛴螬的防治及产量显著改善。在每种测试的情况下，在小麦种子处理中包含RTI545孢子导致生长、活力、害虫防治和产量显著改善。
唑醇/TPM/精甲霜灵(称为“FC”)；2) FC +苏云金芽孢杆菌RTI545的孢子(RTI545 1x10 cfu/g种子)；3) FC +联苯菊酯(20 g/种子)；4) FC +联苯菊酯(20 g/种子) + RTI545
1x106 cfu/g种子；5) FC +联苯菊酯(50 g/种子)；和6) FC +联苯菊酯(50 g/种子) + RTI545 1x106 cfu/g种子。结果如以下表XVI所示。种子用苏云金芽孢杆菌RTI545孢子进行处理和用RTI545孢子与杀真菌剂基础(单独或与杀虫剂联苯菊酯组合)进行处理中的每种，导致出苗率、活力、金针虫和白蛴螬的防治及产量显著改善。在每种测试的情况下，在小麦种子处理中包含RTI545孢子导致生长、活力、害虫防治和产量显著改善。
[0060] 实施例12显示出RTI545大豆种子处理对抗丝核菌属真菌病原体的生长和产量的影响。表XVII显示出添加至基础化学种子处理物中的RTI545与单独的基础处理和与基础处理加另一种化学活性成分相比较的比较。与化学基础相比较，向基础化学处理物中添加RTI545导致站立、活力和产量显著增加。
[0061] 实施例13显示RTI545玉米种子处理对抗金针虫和种子蛆的生长和产量的影响。表XVIII显示出，当添加至化学杀虫剂比如噻虫胺、联苯菊酯和氯虫苯甲酰胺中时，RTI545提供一些保护并增强针对这些害虫的杀虫保护。
[0062] 实施例14显示出RTI545在针对玉米金针虫和玉米根虫的犁沟内施用中是有效的，导致单独并且尤其是与化学杀虫剂联苯菊酯组合时增加产量和减少根系损害，如表XIX和XX所示。
[0063] 实施例15显示RTI545花生种子处理对抗丝核菌属真菌病原体的生长和产量的影响。表XXI显示出添加至基础化学种子处理物中的RTI545与单独的基础处理相比较的比较。与化学基础相比较，向基础化学处理物中添加RTI545导致站立、活力和产量显著增加。
[0064] 实施例16呈现针对病变线虫的RTI545玉米种子处理的温室测定。表XXII显示出添加至基础杀真菌剂化学种子处理物中的RTI545与单独的基础处理和基础处理加PONCHO/VOTIVO相比较的比较。与通过基础处理加PONCHO/VOTIVO提供的相比较，RTI545加基础处理提供超过未经处理的更好的根系长度增加。表XXIII显示出与基础处理和基础+ PONCHO/VOTIVO相比较，RTI545 +基础处理提供更好的渗透性降低和上部鲜重。该表还显示出RT545与其他生物防治剂组合时的结果。
[0065] 实施例17呈现针对大豆孢囊线虫的RTI545大豆种子处理的土壤浇灌测定。表XXIV显示出与未经处理的对照相比较孢囊减少。
[0066] 实施例18和19显示出RTI545 (表XXV)和RTI545加联苯菊酯(表XXVI和XXVII)的浓混悬剂制剂。表XXVIII显示出SC制剂中的孢子在升高温度下储存两周后保持稳定。
[0067] 在本公开的一个实施方案中提供一种组合物，其包含保藏为ATCC编号PTA-122161的苏云金芽孢杆菌RTI545或其具有所有其识别特征的突变体的生物纯培养物，用于施用于植物以获得益于植物生长或在易感植物中赋予保护免受植物害虫中的一种或两种。
[0068] 在另一个实施方案中提供一种方法，用于获得益于植物生长或在易感植物中赋予保护免受植物害虫中的一种或两种，方法包括以适合益于植物生长和/或在易感植物中赋予保护免受植物害虫的量，向植物、植物部分、植物的种子、植物的根系、植物或植物的种子周围的土壤或生长培养基或者种植植物或播种植物的种子之前的土壤或生长培养基传递包含保藏为ATCC编号PTA-122161的苏云金芽孢杆菌RTI545或其具有所有其识别特征的突变体的生物纯培养物的组合物。
[0069] 在本公开的组合物和方法中，植物的生长益处和/或赋予的保护作用可通过改善幼苗活力、改善根系发育、改善植物生长、改善植物健康、增加产量、改善外观、改善对植物害虫的抗性、减少病原体感染或其组合来呈现。
[0070] 本发明的组合物和方法益于广泛范围的植物，包括(但不限于)单子叶植物、双子叶植物、谷类植物比如玉米、甜玉米、爆米花、种子玉米、青贮玉米、饲料玉米、大米、小麦、大麦、高粱、芦笋、浆果比如蓝莓、黑莓、山莓、洛根莓、美洲越橘、蔓越莓、醋栗、接骨木果、小葡萄干、蔓越莓、叢紅莓、芸苔属蔬菜比如西兰花、卷心菜、花椰菜、抱子甘蓝、羽衣甘蓝、羽衣甘蓝、芥末芽、球茎甘蓝、瓜类蔬菜比如黄瓜、哈密瓜、甜瓜、香瓜、南瓜小果、西瓜、南瓜大果、茄子、鳞茎类蔬菜比如洋葱、大蒜、青葱、柑橘类果实比如橙子、葡萄柚、柠檬、柑橘、橘柚、柚子、果类蔬菜比如胡椒、番茄、地樱桃、绿番茄、黄秋葵、葡萄、草本植物、香料、叶类蔬菜比如生菜、芹菜、菠菜、欧芹、紫叶菊苣、豆科作物或蔬菜比如豆类，包括青豆、油豆角、壳豆、大豆、干菜豆、鹰嘴豆、利马豆、豌豆、鹰嘴豆、裂豌豆、小扁豆、油料作物比如油菜、蓖麻、椰子、棉花、亚麻、油棕、橄榄、花生、油菜籽、红花、芝麻、向日葵、大豆、梨果比如苹果、海棠、梨、榅桲、夏花山楂、根、块茎和球茎蔬菜比如胡萝卜、马铃薯、红薯、木薯、甜菜、姜、辣根、萝卜、人参、芜菁、核果类比如杏、樱桃、油桃、桃、李子、梅子、草莓、树坚果比如杏仁、开心果、山核桃、核桃、榛子、栗子、腰果、山毛榉坚果、灰胡桃、澳洲坚果、猕猴桃、香蕉、(蓝色)龙舌兰、草、草坪草、观赏植物、一品红、硬插条比如栗树、橡树、枫树、甘蔗和甜菜。在一个或多个实施方案中，植物可包括玉米、大豆、马铃薯、棉花、番茄、胡椒、瓜类蔬菜、甘蔗、花生或小麦；或者大豆、棉花、小麦、玉米或马铃薯。
[0071] 在本发明的组合物和方法中，植物损害可由广泛种类的植物害虫引起，包括例如(但不限于)植物虫害，比如西方盲蝽(Western Plant Bug)(WPB)豆荚草盲蝽(Lygus hesperus)、鞘翅目(Coleoptera sp.)、根萤叶甲属(Diabrotica sp.) (包括西方(玉米根萤叶甲(D. virgifera))、南方(黄瓜十一星叶甲(D. undecimpunctata))和北方(巴氏根萤叶甲(D. barberi)玉米根虫)、带斑黄瓜叶甲(D. balteata)和长角叶甲(D. longicornis))、梳爪叩甲属(Melanotus spp.) (包括玉米金针虫、玉米叩甲(Melanotus communis)和筛胸梳爪叩甲(Melanotus cribricollis))、食叶鳃金龟属(Phyllophaga spp.) (包括白蛴螬、金针虫、网目砂潜(false wireworm)和皱食叶鳃金龟(Phyllophaga rugosa))、丘胸叩甲属(Limonius spp.) (甜菜金针虫和Limonius agronus)、叩甲属(Agriotes spp.) (包括小麦金针虫小麦叩甲(Agriotes mancus)、玉米金针虫、白蛴螬和种子蛆)、鳞翅目(Lepidoptera sp.)、疆夜蛾属(Peridroma spp.) (包括豆杂色夜蛾(variegated cutworm))、切夜蛾属(Euxoa spp.) (包括原切根虫(army cutworm))、地夜蛾属(Agrotis spp.) (包括黑切根虫(black cutworm)原切根虫(Agrotis ipsilon))、双翅目(Diptera sp.)、种蝇属(Hylemya spp.) (包括种蝇(seedcorn maggot)灰地种蝇(Delia platura Meigen)和玉米种蝇(Hylemya cilicrura))、根斑蝇属(Tetanops spp.) (包括甜菜根蛆)、同翅目(Homoptera sp.)、瘿绵蚜属(Pemphigus sp.) (包括甜菜根蚜(sugarbeet root aphid)、切根虫和白蛴螬)、蚜虫属(Aphis spp.) (包括玉米根蚜(corn root aphid))、玉米甲虫(seed-corn beetle) Agonoderus lecontei、Feltia subgothica或其组合。值得注意的昆虫包括西方盲蝽(WPB)、南方玉米根虫、玉米金针虫、种蝇、种子蛆、小麦金针虫和白蛴螬。
[0072] 在本发明的组合物和方法中，植物害虫可为例如(但不限于)植物病原线虫、肾形线虫(reniform nematode) (肾形线虫属(Rotylenchulus spp.))、剑线虫(dagger nematode) (剑线虫属(Xiphinema spp.))、矛线虫(lance nematode) (纽带线虫属(Hoplolaimus spp.))、针(病变)线虫(针线虫属(Paratylenchus spp.))、环线虫(ring nematode) (轮线虫属(Criconemoides spp.))、根结线虫(根结线虫属(Meloidogyne spp.))、鞘线虫(sheath nematode) (鞘线虫属(Hemicycliophora spp.))、螺旋线虫(spiral nematode) (螺旋线虫属(Helicotylenchus spp.))、毛刺线虫(stubbyroot nematode) (毛刺线虫属(Trichodorus spp.))、孢囊线虫(孢囊线虫属(Heterodera spp.)和球孢囊线虫属(Globodera sp.)、刺线虫(sting nematode) (刺线虫属(Belonolaimus spp.))、矮化线虫(stunt nematode) (和矮化线虫属(Tylenchorhynchus spp.))、穿孔线虫(burrowing nematode) (穿孔线虫属(Radopholus spp.))或其组合。值得注意的线虫包括根结线虫(根结线虫属(Meloidogyne spp.))、病变线虫(针线虫属(Paratylenchus spp.))和孢囊线虫(孢囊线虫属(Heterodera spp.)和球孢囊线虫属(Globodera spp.))。
[0073] 在本发明的组合物和方法中，植物害虫其特征为例如(但不限于)植物真菌病原体或植物细菌病原体，比如锈菌(rust fungus)、葡萄孢属(Botrytis spp.)、欧文氏菌属(Erwinia spp.)、迪基氏菌属(Dickeya spp.)、农杆菌属(Agrobacterium spp.)、黄单胞菌属(Xanthomonas spp.)、木杆菌属(Xylella spp.)、念珠菌属(Candidatus spp.)、镰刀菌属(Fusarium spp.)、核盘菌属(Sclerotinia spp.)、尾孢菌属(Cercospora)/短胖孢菌属(Cercosporidium spp.)、钩丝壳属(Uncinula spp.)、叉丝单囊壳属(Podosphaera spp.) (白粉病(Powdery Mildew))、拟茎点霉属(Phomopsis spp.)、链格孢属(Alternaria spp.)、假单胞菌属(Pseudomonas spp.)、疫霉属(Phytophthora spp.)、层锈菌属(Phakopsora spp.)、曲霉属(Aspergillus spp.)、单胞锈菌属(Uromyces spp.)比如疣顶单胞锈菌(Uromyces appendiculatus)、枝孢属(Cladosporium spp.)、根霉属(Rhizopus spp.)、青霉属(Penicillium spp.)、丝核菌属(Rhizoctonia spp.)、菜豆壳球孢菌(Macrophomina phaseolina)、球腔菌属(Mycosphaerella spp.)、稻瘟菌属(Magnaporthe spp.)比如稻巨座壳菌(Magnaporthe oryzae)或稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)、链核盘菌属(Monilinia spp.)、炭疽菌属(Colletotrichum spp.)、间座壳属(Diaporthe spp.)、棒孢菌属(Corynespora spp.)、胶锈菌属(Gymnosporangium spp.)、裂盾菌属(Schizothyrium spp.)、粘壳孢属(Gloeodes spp.)、葡萄座腔菌属(Botryosphaeria spp.)、明孢盘菌属(Neofabraea spp.)、Wilsonomyces spp.、单囊丝壳属(Sphaerotheca spp.)、白粉菌属(Erysiphe spp.)、壳多孢属(Stagonospora spp.)、腐霉属(Pythium spp.)、黑星菌属(Venturia spp.)、黑粉菌属(Ustilago spp.)、麦角菌属(Claviceps spp.)、腥黑粉菌属(Tilletia spp.)、茎点霉属(Phoma spp.)、禾旋孢腔菌(Cocliobolus sativus)、小麦全蚀病菌(Gaeumanomyces gaminis)、喙孢属(Rhynchosporium spp.)、平脐蠕孢属(Biopolaris spp.)和长蠕孢属(Helminthosporium spp.)或其组合。
[0074] 值得注意的真菌病原体包括黄曲霉(Aspergillus flavus)、葡萄孢属(Botrytis spp.)比如灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)、镰刀菌属(Fusarium spp.) (比如大刀镰刀菌(Fusarium colmorum)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)或北美大豆猝死综合症病菌(Fusarium virguliforme))、疫霉属(Phytophthora spp.)比如辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)、丝核菌属(Rhizoctonia spp.)比如立枯丝核菌(Rhizoctonia solani))、稻瘟菌属(Magnaporthe spp.)比如稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)和稻巨座壳菌(Magnaporthe oryzae)、以及腐霉属(Pythium spp.)比如瓜果腐霉菌(Pythium aphanidermatum)和Pythium sylvatium、链核盘菌属(Monilinia spp.)比如美澳型核果褐腐病菌(Monilinia fructicola)、炭疽菌属(Colletotrichum spp.)比如胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides) (性阶段(sexual stage)围小丛壳菌(Glomerella cingulata))即炭疽病(nthracnose)、核盘菌属(Sclerotinia spp.)比如油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)和银斑病病菌(Sclerotinia homeocarpa)；更值得注意的为丝核菌属(Rhizoctonia spp.)。值得注意的细菌病原体包括欧文氏菌属(Erwinia spp.)比如梨火疫病菌(Erwinia amylovora)。
[0075] 在本公开的组合物和方法中，包含RTI545菌株的组合物可以液体、浓混悬剂、油分散剂、撒粉、干燥可湿性粉剂、可涂抹的粒剂或干燥可湿性粒剂的形式存在。在实施方案中，苏云金芽孢杆菌RTI545可以约1.0x108 CFU/ml-约1.0x1012 CFU/ml的浓度存在于组合物中。在实施方案中，苏云金芽孢杆菌RTI545可以约1.0x108 CFU/g-约1.0x1012 CFU/g的量存在。苏云金芽孢杆菌RTI545可以孢子或营养细胞的形式存在。
[0076] 在本公开的组合物和方法中，包含RTI545菌株的组合物可包含包括以下的辅剂中的一种或组合：例如载体、粘合剂、表面活性剂、分散剂或酵母提取物。包含载体、粘合剂、表面活性剂、分散剂和/或酵母提取物以改善组合物的特性，用于益于植物生长和/或赋予保护免受植物害虫，特性包括改善处理特性、改善可湿性、改善流动性、改善对种子的附着力、改善RTI545菌株的稳定性以及在传递或施用于植物种子、根系或土壤之后改善RTI545菌株的活性中的一种或多种。酵母提取物可以益于植物生长的比率传递，范围为约0.01%-0.2% w/w。
[0077] 包含RTI545菌株的组合物可以种植基质的形式存在。种植基质可以盆栽土壤混合物的形式存在。
[0078] 在本公开的组合物和方法中，组合物可以适合益于植物生长和/或在易感植物中赋予保护免受植物害虫的量进一步包含另外的农用试剂中的一种或组合，比如杀虫剂、杀真菌剂、杀线虫剂、杀细菌剂、生物刺激剂、除草剂、植物提取物、微生物提取物、植物生长调节剂、肥料或作物营养产品。在一个实施方案中，包含苏云金芽孢杆菌RTI545的生物纯培养物和以下中的一种或组合的组合物一起配制：杀虫剂、杀真菌剂、杀线虫剂、杀细菌剂、生物刺激剂、除草剂、植物提取物、微生物提取物、植物生长调节剂、肥料或作物营养产品。任何另外的农用试剂可为生物试剂或化学试剂。在其他实施方案中，包含RTI545菌株的组合物与另外的农用试剂分别配制，其也可配制并然后与另外的农用试剂混合，比如以桶混物形式。
[0079] 肥料可为液体肥料。术语“液体肥料”是指以流体或液体形式存在的肥料，其含有各种比率的氮、磷和钾(例如(但不限于)5-15%比如10%的氮、20-50%比如34%的磷和0-15%比如0%的钾)和任选地含有次级营养素和/或微量营养素，通常称为高磷的起始肥料并促进快速和旺盛的根系生长。
[0080] 本文使用的术语“生物刺激剂”是指施用于植物的物质或微生物，其目的是增强养分吸收、营养效率和/或非生物压力耐受性，以改善作物活力、产量和/或作物品质特征比如营养含量、外观和保质期，无论其养分含量如何。生物刺激剂通过与肥料不同的机制起作用，并且没有针对害虫或疾病的直接作用。
[0081] 在一个实施方案中，包含苏云金芽孢杆菌RTI545的生物纯培养物的组合物进一步包含化学杀虫剂联苯菊酯。
[0082] 值得注意的为苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)RTI545菌株与其他生物防治菌株的混合物，包括其他苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)菌株比如苏云金芽孢杆菌鲇泽亚种(Bacillus thuringiensis subsp. aizawai.)或苏云金芽孢杆菌库斯塔克亚种(Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株比如CH201或QST713或MBI600 or RTI477、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)菌株比如CH200或RTI184、贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)菌株比如RTI301、枯草芽孢杆菌解淀粉变种(Bacillus subtilis var. amyloliquefaciens)FZB24或解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)D747或其组合。
[0083] 微生物菌株(包括RTI545)的混合物可用于增强针对特定目标害虫的活性，但也可用于增强效用谱。作为实例，将对土壤昆虫具有强活性的菌株与对线虫、真菌或强植物生长益处具有强活性的其他菌株组合。此外，这种菌株混合物还可与合成(化学)杀虫剂组合以获得额外的益处。
[0084] 在一个实施方案中，包含苏云金芽孢杆菌RTI545的生物纯培养物的组合物进一步包含先前鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens) RTI301的菌株，其保藏为ATCC编号PTA-121165 (参见US2016/0186273)。该菌株最近已被重新分类为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)菌株。在本说明书的其余部分中，保藏为ATCC编号PTA-121165的菌株称为“RTI301”或“贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis) RTI301”。在一个实施方案中，RTI545和RTI301菌株的组合通过扩展和增加其中一种或两种菌株提供最大保护免受植物害虫(包括植物真菌病原体)的温度范围，将益处扩展至植物生长和免受植物害虫的保护作用。
[0085] 在其他实施方案中，包含苏云金芽孢杆菌RTI545的生物纯培养物的组合物进一步包含保藏为DSM 17236的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)CH200或其具有所有其识别特征的突变体的生物纯培养物、保藏为DSM 17231的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) CH201或其具有所有其识别特征的突变体的生物纯培养物、保藏为ATCC编号PTA-121167的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) RTI477或其具有所有其识别特征的突变体的生物纯培养物、保藏为FERM BP-8234的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens) D747菌株的生物纯培养物、保藏为ATCC编号PTA-121722的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis) RTI184或其具有所有其识别特征的突变体或其任何组合，包括还包含RTI301的组合。
[0086] 在一个实施方案中，包括苏云金芽孢杆菌RTI545的生物纯培养物的组合物进一步包含化学杀虫剂联苯菊酯，并且组合物与液体肥料组合传递至植物、植物部分、植物的种子、植物的根系、植物或植物的种子周围的土壤或生长培养基或者种植植物或播种植物的种子之前的土壤或生长培养基。例如在WO 2016/108972 A1中描述了使用杀虫剂联苯菊酯与液体肥料的组合以益于植物生长的实例，通过参考以其全部结合到本文中。
[0087] 在另一个实施方案中提供一种方法，用于获得益于植物生长或在易感植物中赋予保护免受植物害虫中的一种或两种，方法包括向植物、植物部分、植物的种子、植物的根系、植物或植物的种子周围的土壤或生长培养基或者种植植物或播种植物的种子之前的土壤或生长培养基传递以下的组合：以适合益于植物生长和/或在易感植物中赋予保护免受植物害虫的量包含保藏为ATCC 编号PTA-122161的苏云金芽孢杆菌RTI545或其具有所有其识别特征的突变体的生物纯培养物的组合物；以适合益于植物生长和/或在易感植物中赋予保护免受植物害虫的量存在的本文所述的另外的农用试剂比如杀虫剂、杀真菌剂、杀线虫剂、杀细菌剂、除草剂、植物提取物、植物生长调节剂或肥料中的一种或组合。任何另外的农用试剂可为生物试剂或化学试剂。在该实施方案中，将包含苏云金芽孢杆菌RTI545的生物纯培养物和本文所述的另外的农用试剂中的一种或组合的组合物分别而不是从单一制剂传递至易感植物。
[0088] 在一个实施方案中，包含苏云金芽孢杆菌RTI545的生物纯培养物的组合物与液体肥料组合传递至植物、植物部分、植物的种子、植物的根系、植物或植物的种子周围的土壤或生长培养基或者种植植物或播种植物的种子之前的土壤或生长培养基。
[0089] 在一个实施方案中，包含苏云金芽孢杆菌RTI545的生物纯培养物的组合物与化学杀虫剂联苯菊酯和与液体肥料结合传递至植物、植物部分、植物的种子、植物的根系、植物或植物的种子周围的土壤或生长培养基或者种植植物或播种植物的种子之前的土壤或生长培养基。
[0090] 在一个实施方案中提供一种植物种子，其用包含以适合益于植物生长和/或在易感植物中赋予保护免受植物害虫的量存在的另外的生物农用试剂比如保藏为ATCC 编号PTA-121165的贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)RTI301的生物纯培养物的孢子或其具有所有其识别特征的突变体的组合物包被。组合物可包含约1.0x102 CFU/种子-约9
1.0x10 CFU/种子的量的贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)孢子。
1.0x10 CFU/种子的量的贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)孢子。
[0091] 本发明的种子包被组合物益于广泛范围的植物种子，包括(但不限于)以下的种子：单子叶植物、双子叶植物、谷类植物比如玉米、甜玉米、爆米花、种子玉米、青贮玉米、饲料玉米、大米、小麦、大麦、高粱、芦笋、浆果比如蓝莓、黑莓、山莓、洛根莓、美洲越橘、蔓越莓、醋栗、接骨木果、小葡萄干、蔓越莓、叢紅莓、芸苔属蔬菜比如西兰花、卷心菜、花椰菜、抱子甘蓝、羽衣甘蓝、羽衣甘蓝、芥末芽、球茎甘蓝、瓜类蔬菜比如黄瓜、哈密瓜、甜瓜、香瓜、南瓜小果、西瓜、南瓜大果、茄子、鳞茎类蔬菜比如洋葱、大蒜、青葱、柑橘类果实比如橙子、葡萄柚、柠檬、柑橘、橘柚、柚子、果类蔬菜比如胡椒、番茄、地樱桃、绿番茄、黄秋葵、葡萄、草本植物、香料、叶类蔬菜比如生菜、芹菜、菠菜、欧芹、紫叶菊苣、豆科作物或蔬菜比如豆类，包括青豆、油豆角、壳豆、大豆、干菜豆、鹰嘴豆、利马豆、豌豆、鹰嘴豆、裂豌豆、小扁豆、油料种子比如油菜、蓖麻、椰子、棉花、亚麻、油棕、橄榄、花生、油菜籽、红花、芝麻、向日葵、大豆、梨果比如苹果、海棠、梨、榅桲、夏花山楂、根、块茎和球茎蔬菜比如胡萝卜、马铃薯、红薯、木薯、甜菜、姜、辣根、萝卜、人参、芜菁、核果类比如杏、樱桃、油桃、桃、李子、梅子、草莓、树坚果比如杏仁、开心果、山核桃、核桃、榛子、栗子、腰果、山毛榉坚果、灰胡桃、澳洲坚果、猕猴桃、香蕉、(蓝色)龙舌兰、草、草坪草、观赏植物、一品红、硬插条比如栗树、橡树、枫树、甘蔗和甜菜。在一个或多个实施方案中，植物种子可包括玉米、大豆、马铃薯、棉花、番茄、胡椒、瓜类蔬菜、甘蔗、花生或小麦；或者大豆、棉花、小麦、玉米或马铃薯。
[0092] 在用组合物包被的植物种子的一个实施方案中，组合物进一步包含以适合益于植物生长和/或在易感植物中赋予保护免受植物害虫的量存在的本文所述的另外的农用试剂中的一种或组合。
[0093] 在一个实施方案中提供一种方法，用于获得益于植物生长或在易感植物中赋予保护免受植物害虫中的一种或两种，方法包括种植植物的种子，其中种子已包被有组合物，组合物包含保藏为 ATCC PTA-122161的苏云金芽孢杆菌RTI545的生物纯培养物或其具有所有其识别特征的突变体，其中植物从种子生长受益和/或赋予保护免受植物害虫。
[0094] 在一个实施方案中，方法进一步包括在种植包被的植物种子之前将液体肥料传递至包被的植物种子、包被的植物种子周围的土壤或生长培养基。
[0095] 在方法的一个实施方案中，植物种子用组合物包被，组合物进一步包含另外的生物农用试剂，比如保藏为ATCC编号PTA-121165的贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis) RTI301。在一个实施方案中，RTI545和RTI301菌株的组合通过扩展和增加其中一种或两种菌株提供最大保护免受植物害虫(包括植物真菌病原体)的温度范围，将益处扩展至植物生长和免受植物害虫的保护作用。
[0096] 在一个实施方案中，植物种子用组合物包被，组合物进一步包含化学杀虫剂，并且方法进一步包括将液体肥料传递至包被的植物种子、包被的植物种子周围的土壤或生长培养基或者种植包被的植物种子之前的土壤或生长培养基。在一个实施方案中，化学杀虫剂为联苯菊酯。
[0097] 在本文包含包被的种子的实施方案中，术语“种子”不仅是指实生种子，而且还指用于繁殖植物的其他植物部分(比如幼苗、移植物、插条(例如茎、根、叶等)、孢子、芽段(例如甘蔗的)、鳞茎、球茎、根茎、块茎或其部分)或可从中获得完整植株的其他植物组织。
[0098] 在本公开的组合物和方法中，组合物可包含杀真菌剂。杀真菌剂可包括来自白羽扇豆(Lupinus albus)的提取物。在一个或多个实施方案中，杀真菌剂可包括BLAD多肽。BLAD多肽可为来自甜羽扇豆(sweet lupine) (白羽扇豆(Lupinus albus))的天然存在的种子贮藏蛋白的片段，其通过对真菌细胞壁造成损伤并破坏内细胞膜而作用于易感真菌病原体。组合物可包含约20%的BLAD多肽。
[0099] 另外，在一个或多个实施方案中，本发明的组合物和方法的合适的杀虫剂、除草剂、杀真菌剂和杀线虫剂可包括以下：杀虫剂：A0) 各种杀虫剂，包括agrigata、磷化铝(al-phosphide)、钝绥螨属
(amblyseius)、蚜小蜂属(aphelinus)、蚜茧蜂属(aphidius)、食蚜瘿蚊(aphidoletes)、青蒿素、苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(autographa californica NPV)、三唑锡
(azocyclotin)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、苏云金芽孢杆菌鲇泽亚种(Bacillus thuringiensis subsp. aizawai.)、苏云金芽孢杆菌库斯塔克亚种(Bacillus
thuringiensis subsp. kurstaki)、苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)、白僵菌属(Beauveria)、球孢白僵菌(Beauveria bassiana)、β-氟氯氰菊酯(betacyfluthrin)、生物制品、杀虫双(bisultap)、溴氟菊酯(brofluthrinate)、乙基溴硫磷(bromophos-e)、溴螨酯(bromopropylate)、Bt-Corn-GM、Bt-Soya-GM、辣椒素(capsaicin)、杀螟丹(cartap)、南蛇藤属提取物(celastrus-extract)、氯虫苯甲酰胺(chlorantraniliprole)、灭幼脲(chlorbenzuron)、氯氧磷(chlorethoxyfos)、氟啶脲(chlorfluazuron)、乙基毒死蜱(chlorpyrifos-e)、蛇床定(cnidiadin)、冰晶石(cryolite)、杀螟腈(cyanophos)、氰虫酰胺(cyantraniliprole)、环溴虫酰胺(cyclaniliprole)、氯氟氰菊酯(cyhalothrin)、三环锡(cyhexatin)、氯氰菊酯(cypermethrin)、离颚茧蜂属(dacnusa)、DCIP、二氯丙烯、三氯杀螨醇(dicofol)、姬小蜂属(diglyphus)、姬小蜂属(diglyphus)+离颚茧蜂属(dacnusa)、混灭威(dimethacarb)、二甲基二硫醚(dithioether)、乙酸十二酯(dodecyl-acetate)、埃玛菌素(emamectin)、恩蚜小蜂属(encarsia)、EPN、浆角蚜小蜂属(Eretmocerus)、二溴化乙烯(ethylene-dibromide)、桉叶油素(eucalyptol)、脂肪酸、脂肪酸/盐、喹螨醚
(fenazaquin)、仲丁威(fenobucarb) (BPMC)、唑螨酯(fenpyroximate)、溴氟菊酯(flubrocythrinate)、氟螨嗪(flufenzine)、氟吡呋喃酮(flupyradifurone)、伐虫脒(formetanate)、安硫磷(formothion)、呋线威(furathiocarb)、γ氯氟氰菊酯(gamma-cyhalothrin)、大蒜汁(garlic-juice)、颗粒体病毒(granulosis-virus)、瓢虫属(harmonia)、棉铃虫核型多角体病毒(heliothis armigera NPV)、非活性细菌(inactive bacterium)、吲哚-3-基丁酸、碘甲烷、铁、水胺硫磷(isocarbofos)、异柳磷(isofenphos)、甲基异柳磷(isofenphos-m)、异丙威(isoprocarb)、异拌磷(isothioate)、高岭土、林丹(lindane)、浏阳霉素(liuyangmycin)、苦参碱(matrine)、地胺磷(mephosfolan)、四聚乙醛(metaldehyde)、金龟子绿僵菌(metarhizium-anisopliae)、甲胺磷(methamidophos)、速灭威(metolcarb) (MTMC)、矿物油、灭蚁灵(mirex)、甲基-异硫氰酸酯(m-isothiocyanate)、杀虫单(monosultap)、疣孢漆斑菌(myrothecium verrucaria)、二溴磷(naled)、芙新姬小蜂(neochrysocharis formosa)、尼古丁、烟碱类、油、油酸、氧乐果(omethoate)、小花蝽属(orius)、氧化苦参碱(oxymatrine)、拟青霉属(paecilomyces)、石蜡油、乙基对硫磷(parathion-e)、巴斯德氏菌属(pasteuria)、石油、信息素(pheromones)、磷酸、光杆状菌属(photorhabdus)、辛硫磷(phoxim)、小植绥螨属(phytoseiulus)、乙基虫螨磷(pirimiphos-e)、植物油、小菜蛾颗粒体病毒(plutella xylostella GV)、多角体病毒、多酚提取物、油酸钾、溴丙磷(profenofos)、补骨酯素(prosuler)、丙硫磷(prothiofos)、吡唑硫磷(pyraclofos)、除虫菊酯(pyrethrins)、哒嗪硫磷(pyridaphenthion)、嘧螨醚
(pyrimidifen)、吡丙醚(pyriproxifen)、皂树(quillay)提取物、灭螨猛
(quinomethionate)、菜油(rape-oil)、鱼藤酮(rotenone)、皂苷(saponin)、saponozit、钠化合物、氟硅酸钠、淀粉、斯氏线虫属(steinernema)、链霉菌属(streptomyces)、氟虫胺(sulfluramid)、硫磺(sulphur)、丁基嘧啶磷(tebupirimfos)、双硫磷(temephos)、三氯杀螨砜(tetradifon)、氟氰虫酰胺(tetraniliprole)、久效威(thiofanox)、甲基乙拌磷(thiometon)、转基因(transgenics) (例如Cry3Bb1)、唑蚜威(triazamate)、木霉属(trichoderma)、赤眼蜂属(trichogramma)、杀虫隆(triflumuron)、轮枝孢属
(verticillium)、藜芦碱、杀虫剂异构体(例如κ联苯菊酯(kappa-bifenthrin)、κ七氟菊酯(kappa-tefluthrin))、二氯噻吡嘧啶(dichoromezotiaz)、溴氟酰胺(broflanilide)、派拉氟胺(pyraziflumid)；A1) 氨基甲酸酯类，包括涕灭威(aldicarb)、棉铃威(alanycarb)、丙硫克百威(benfuracarb)、甲萘威(carbaryl)、呋喃丹(carbofuran)、丁硫克百威(carbosulfan)、甲硫威(methiocarb)、灭多威(methomyl)、杀线威(oxamyl)、抗蚜威(pirimicarb)、残杀威(propoxur)和硫双威(thiodicarb)；A2) 有机磷酸酯类，包括乙酰甲胺磷(acephate)、乙基谷硫磷(azinphos-ethyl)、甲基谷硫磷(azinphos-methyl)、毒虫畏(chlorfenvinphos)、毒死蜱(chlorpyrifos)、甲基毒死蜱(chlorpyrifos-methyl)、内吸磷-S-甲基(demeton-S-methyl)、二嗪农(diazinon)、敌敌畏(dichlorvos)/DDVP、百治磷(dicrotophos)、乐果(dimethoate)、乙拌磷(disulfoton)、乙硫磷(ethion)、杀螟松(fenitrothion)、倍硫磷(fenthion)、恶唑磷(isoxathion)、马拉硫磷(malathion)、甲胺磷(methamidaphos)、杀扑磷(methidathion)、速灭磷(mevinphos)、久效磷(monocrotophos)、氧乐果(oxymethoate)、甲基异内吸磷亚砜(oxydemeton-methyl)、对硫磷(parathion)、甲基对硫磷(parathion-methyl)、稻丰散(phenthoate)、甲拌磷(phorate)、伏杀硫磷(phosalone)、亚胺硫磷(phosmet)、磷酰胺酮(phosphamidon)、甲基嘧啶磷(pirimiphos-methyl)、喹硫磷(quinalphos)、特丁硫磷(terbufos)、四氯乙烯磷(tetrachlorvinphos)、三唑磷(triazophos)和敌百虫(trichlorfon)；A3) 环戊二烯(cyclodiene)有机氯化合物类比如硫丹；A4)苯基吡唑类(fiproles)，包括乙虫腈(ethiprole)、非泼罗尼(fipronil)、吡嗪氟虫腈(pyrafluprole)和吡唑虫啶(pyriprole)；A5) 新烟碱类(neonicotinoids)，包括啶虫脒(acetamiprid)、噻虫胺(clothianidin)、呋虫胺(dinotefuran)、吡虫啉(imidacloprid)、烯啶虫胺(nitenpyram)、噻虫啉(thiacloprid)和噻虫嗪
(thiamethoxam)；A6) 多杀菌素类(spinosyns)，比如多杀菌素(spinosad)和乙基多杀菌素(spinetoram)；A7) 来自菌素类(mectins)类的氯离子通道活化剂(activators)，包括阿维菌素(abamectin)、甲氨基阿维菌素苯甲酸盐(emamectin benzoate)、伊维菌素
(ivermectin)、雷皮菌素(lepimectin)和弥拜菌素(milbemectin)；A8) 保幼激素模拟物(juvenile hormone mimics)，比如烯虫乙酯(hydroprene)、烯虫炔酯(kinoprene)、甲氧普林(methoprene)、苯氧威(fenoxycarb)和吡丙醚(pyriproxyfen)；A9) 选择性同翅目(homopteran)饲喂阻滞剂，比如吡蚜酮(pymetrozine)、氟啶虫酰胺(flonicamid)和新喹唑啉(pyrifluquinazon)；A10) 螨(mite)生长抑制剂，比如四螨嗪(clofentezine)、噻螨酮(hexythiazox)和乙螨唑(etoxazole)；A11) 线粒体ATP合成酶抑制剂，比如丁醚脲(diafenthiuron)、苯丁锡(fenbutatin oxide)和克螨特(propargite)；氧化磷酸化的解偶联剂，比如溴虫腈(chlorfenapyr)；A12) 烟碱样乙酰胆碱受体通道阻断剂，比如杀虫磺(bensultap)、杀螟丹盐酸盐(cartap hydrochloride)、杀虫环(thiocyclam)和杀虫双(thiosultap sodium)；A13) 来自苯甲酰脲类的几丁质生物合成0型的抑制剂，包括双三氟虫脲(bistrifluron)、除虫脲(diflubenzuron)、氟虫脲(flufenoxuron)、氟铃脲(hexaflumuron)、虱螨脲(lufenuron)、氟酰脲(novaluron)和氟苯脲(teflubenzuron)；
A14) 几丁质生物合成1型的抑制剂比如噻嗪酮(buprofezin)；A15) 蜕皮破坏者(molting disruptors)比如环丙氨嗪(cyromazine)；A16) 蜕皮激素(ecdyson)受体激动剂，比如甲氧虫酰肼(methoxyfenozide)、虫酰肼(tebufenozide)、氯虫酰肼(halofenozide)和环虫酰肼(chromafenozide)；A17) 章鱼胺受体激动剂比如双甲脒(amitraz)；A18) 线粒体复合物电子传递(transport)抑制剂哒螨灵(pyridaben)、吡螨胺(tebufenpyrad)、唑虫酰胺(tolfenpyrad)、嘧虫胺(flufenerim)、腈吡螨酯(cyenopyrafen)、丁氟螨酯
(cyflumetofen)、氟蚁腙(hydramethylnon)、灭螨醌(acequinocyl)或嘧螨酯
(fluacrypyrim)；A19) 电压依赖性钠通道阻滞剂比如茚虫威(indoxacarb)和氰氟虫腙 (metaflumizone)；A20) 脂质合成的抑制剂比如螺螨酯(spirodiclofen)、螺甲螨酯(spiromesifen)和螺虫乙酯(spirotetramat)；A21) 来自二酰胺类的兰尼碱(ryanodine)受体调节剂，包括氟虫双酰胺(flubendiamide)、邻苯二甲酰胺化合物(R)-3-氯-N1-{2-甲基-4-[1,2,2,2-四氟-1-(三氟甲基)乙基]苯基}-N2-(1-甲基-2-甲基磺酰基乙基)苯二甲酰胺和(S)-3-氯-N1-{2-甲基-4-[1,2,2,2-四氟-1-(三氟甲基)乙基]苯基}-N2-(1-甲基-
2-甲基磺酰基乙基)苯二甲酰胺、氯虫苯甲酰胺(chlorantraniliprole)、环溴虫酰胺(cyclaniliprole)和氰虫酰胺(cyantraniliprole)；A22) 未知或不确定作用方式的化合物比如印楝素(azadirachtin)、磺胺螨酯(amidoflumet)、联苯肼酯(bifenazate)、联氟砜(fluensulfone)、胡椒基丁醚(piperonyl butoxide)、啶虫丙醚(pyridalyl)、氟啶虫胺腈(sulfoxaflor)；或A23) 来自拟除虫菊酯(pyrethroids)类的钠通道调节剂，包括氟丙菊酯(acrinathrin)、丙烯菊酯(allethrin)、联苯菊酯(bifenthrin)、氟氯氰菊酯
(cyfluthrin)、λ氯氟氰菊酯(lambda-cyhalothrin)、氯氰菊酯(cypermethrin)、α氯氰菊酯(alpha-cypermethrin)、β氯氰菊酯(beta-cypermethrin)、ζ氯氰菊酯(zeta-
cypermethrin)、溴氰菊酯(deltamethrin)、高氰戊菊酯(esfenvalerate)、醚菊酯(etofenprox)、甲氰菊酯(fenpropathrin)、氰戊菊酯(fenvalrate)、氟氰戊菊酯(flucythrinate)、τ氟胺氰菊酯(tau-fluvalinate)、氯菊酯(permethrin)、氟硅菊酯(silafluofen)、七氟菊酯(tefluthrin)和四溴菊酯(tralomethrin)。
(amblyseius)、蚜小蜂属(aphelinus)、蚜茧蜂属(aphidius)、食蚜瘿蚊(aphidoletes)、青蒿素、苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(autographa californica NPV)、三唑锡
(azocyclotin)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、苏云金芽孢杆菌鲇泽亚种(Bacillus thuringiensis subsp. aizawai.)、苏云金芽孢杆菌库斯塔克亚种(Bacillus
thuringiensis subsp. kurstaki)、苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)、白僵菌属(Beauveria)、球孢白僵菌(Beauveria bassiana)、β-氟氯氰菊酯(betacyfluthrin)、生物制品、杀虫双(bisultap)、溴氟菊酯(brofluthrinate)、乙基溴硫磷(bromophos-e)、溴螨酯(bromopropylate)、Bt-Corn-GM、Bt-Soya-GM、辣椒素(capsaicin)、杀螟丹(cartap)、南蛇藤属提取物(celastrus-extract)、氯虫苯甲酰胺(chlorantraniliprole)、灭幼脲(chlorbenzuron)、氯氧磷(chlorethoxyfos)、氟啶脲(chlorfluazuron)、乙基毒死蜱(chlorpyrifos-e)、蛇床定(cnidiadin)、冰晶石(cryolite)、杀螟腈(cyanophos)、氰虫酰胺(cyantraniliprole)、环溴虫酰胺(cyclaniliprole)、氯氟氰菊酯(cyhalothrin)、三环锡(cyhexatin)、氯氰菊酯(cypermethrin)、离颚茧蜂属(dacnusa)、DCIP、二氯丙烯、三氯杀螨醇(dicofol)、姬小蜂属(diglyphus)、姬小蜂属(diglyphus)+离颚茧蜂属(dacnusa)、混灭威(dimethacarb)、二甲基二硫醚(dithioether)、乙酸十二酯(dodecyl-acetate)、埃玛菌素(emamectin)、恩蚜小蜂属(encarsia)、EPN、浆角蚜小蜂属(Eretmocerus)、二溴化乙烯(ethylene-dibromide)、桉叶油素(eucalyptol)、脂肪酸、脂肪酸/盐、喹螨醚
(fenazaquin)、仲丁威(fenobucarb) (BPMC)、唑螨酯(fenpyroximate)、溴氟菊酯(flubrocythrinate)、氟螨嗪(flufenzine)、氟吡呋喃酮(flupyradifurone)、伐虫脒(formetanate)、安硫磷(formothion)、呋线威(furathiocarb)、γ氯氟氰菊酯(gamma-cyhalothrin)、大蒜汁(garlic-juice)、颗粒体病毒(granulosis-virus)、瓢虫属(harmonia)、棉铃虫核型多角体病毒(heliothis armigera NPV)、非活性细菌(inactive bacterium)、吲哚-3-基丁酸、碘甲烷、铁、水胺硫磷(isocarbofos)、异柳磷(isofenphos)、甲基异柳磷(isofenphos-m)、异丙威(isoprocarb)、异拌磷(isothioate)、高岭土、林丹(lindane)、浏阳霉素(liuyangmycin)、苦参碱(matrine)、地胺磷(mephosfolan)、四聚乙醛(metaldehyde)、金龟子绿僵菌(metarhizium-anisopliae)、甲胺磷(methamidophos)、速灭威(metolcarb) (MTMC)、矿物油、灭蚁灵(mirex)、甲基-异硫氰酸酯(m-isothiocyanate)、杀虫单(monosultap)、疣孢漆斑菌(myrothecium verrucaria)、二溴磷(naled)、芙新姬小蜂(neochrysocharis formosa)、尼古丁、烟碱类、油、油酸、氧乐果(omethoate)、小花蝽属(orius)、氧化苦参碱(oxymatrine)、拟青霉属(paecilomyces)、石蜡油、乙基对硫磷(parathion-e)、巴斯德氏菌属(pasteuria)、石油、信息素(pheromones)、磷酸、光杆状菌属(photorhabdus)、辛硫磷(phoxim)、小植绥螨属(phytoseiulus)、乙基虫螨磷(pirimiphos-e)、植物油、小菜蛾颗粒体病毒(plutella xylostella GV)、多角体病毒、多酚提取物、油酸钾、溴丙磷(profenofos)、补骨酯素(prosuler)、丙硫磷(prothiofos)、吡唑硫磷(pyraclofos)、除虫菊酯(pyrethrins)、哒嗪硫磷(pyridaphenthion)、嘧螨醚
(pyrimidifen)、吡丙醚(pyriproxifen)、皂树(quillay)提取物、灭螨猛
(quinomethionate)、菜油(rape-oil)、鱼藤酮(rotenone)、皂苷(saponin)、saponozit、钠化合物、氟硅酸钠、淀粉、斯氏线虫属(steinernema)、链霉菌属(streptomyces)、氟虫胺(sulfluramid)、硫磺(sulphur)、丁基嘧啶磷(tebupirimfos)、双硫磷(temephos)、三氯杀螨砜(tetradifon)、氟氰虫酰胺(tetraniliprole)、久效威(thiofanox)、甲基乙拌磷(thiometon)、转基因(transgenics) (例如Cry3Bb1)、唑蚜威(triazamate)、木霉属(trichoderma)、赤眼蜂属(trichogramma)、杀虫隆(triflumuron)、轮枝孢属
(verticillium)、藜芦碱、杀虫剂异构体(例如κ联苯菊酯(kappa-bifenthrin)、κ七氟菊酯(kappa-tefluthrin))、二氯噻吡嘧啶(dichoromezotiaz)、溴氟酰胺(broflanilide)、派拉氟胺(pyraziflumid)；A1) 氨基甲酸酯类，包括涕灭威(aldicarb)、棉铃威(alanycarb)、丙硫克百威(benfuracarb)、甲萘威(carbaryl)、呋喃丹(carbofuran)、丁硫克百威(carbosulfan)、甲硫威(methiocarb)、灭多威(methomyl)、杀线威(oxamyl)、抗蚜威(pirimicarb)、残杀威(propoxur)和硫双威(thiodicarb)；A2) 有机磷酸酯类，包括乙酰甲胺磷(acephate)、乙基谷硫磷(azinphos-ethyl)、甲基谷硫磷(azinphos-methyl)、毒虫畏(chlorfenvinphos)、毒死蜱(chlorpyrifos)、甲基毒死蜱(chlorpyrifos-methyl)、内吸磷-S-甲基(demeton-S-methyl)、二嗪农(diazinon)、敌敌畏(dichlorvos)/DDVP、百治磷(dicrotophos)、乐果(dimethoate)、乙拌磷(disulfoton)、乙硫磷(ethion)、杀螟松(fenitrothion)、倍硫磷(fenthion)、恶唑磷(isoxathion)、马拉硫磷(malathion)、甲胺磷(methamidaphos)、杀扑磷(methidathion)、速灭磷(mevinphos)、久效磷(monocrotophos)、氧乐果(oxymethoate)、甲基异内吸磷亚砜(oxydemeton-methyl)、对硫磷(parathion)、甲基对硫磷(parathion-methyl)、稻丰散(phenthoate)、甲拌磷(phorate)、伏杀硫磷(phosalone)、亚胺硫磷(phosmet)、磷酰胺酮(phosphamidon)、甲基嘧啶磷(pirimiphos-methyl)、喹硫磷(quinalphos)、特丁硫磷(terbufos)、四氯乙烯磷(tetrachlorvinphos)、三唑磷(triazophos)和敌百虫(trichlorfon)；A3) 环戊二烯(cyclodiene)有机氯化合物类比如硫丹；A4)苯基吡唑类(fiproles)，包括乙虫腈(ethiprole)、非泼罗尼(fipronil)、吡嗪氟虫腈(pyrafluprole)和吡唑虫啶(pyriprole)；A5) 新烟碱类(neonicotinoids)，包括啶虫脒(acetamiprid)、噻虫胺(clothianidin)、呋虫胺(dinotefuran)、吡虫啉(imidacloprid)、烯啶虫胺(nitenpyram)、噻虫啉(thiacloprid)和噻虫嗪
(thiamethoxam)；A6) 多杀菌素类(spinosyns)，比如多杀菌素(spinosad)和乙基多杀菌素(spinetoram)；A7) 来自菌素类(mectins)类的氯离子通道活化剂(activators)，包括阿维菌素(abamectin)、甲氨基阿维菌素苯甲酸盐(emamectin benzoate)、伊维菌素
(ivermectin)、雷皮菌素(lepimectin)和弥拜菌素(milbemectin)；A8) 保幼激素模拟物(juvenile hormone mimics)，比如烯虫乙酯(hydroprene)、烯虫炔酯(kinoprene)、甲氧普林(methoprene)、苯氧威(fenoxycarb)和吡丙醚(pyriproxyfen)；A9) 选择性同翅目(homopteran)饲喂阻滞剂，比如吡蚜酮(pymetrozine)、氟啶虫酰胺(flonicamid)和新喹唑啉(pyrifluquinazon)；A10) 螨(mite)生长抑制剂，比如四螨嗪(clofentezine)、噻螨酮(hexythiazox)和乙螨唑(etoxazole)；A11) 线粒体ATP合成酶抑制剂，比如丁醚脲(diafenthiuron)、苯丁锡(fenbutatin oxide)和克螨特(propargite)；氧化磷酸化的解偶联剂，比如溴虫腈(chlorfenapyr)；A12) 烟碱样乙酰胆碱受体通道阻断剂，比如杀虫磺(bensultap)、杀螟丹盐酸盐(cartap hydrochloride)、杀虫环(thiocyclam)和杀虫双(thiosultap sodium)；A13) 来自苯甲酰脲类的几丁质生物合成0型的抑制剂，包括双三氟虫脲(bistrifluron)、除虫脲(diflubenzuron)、氟虫脲(flufenoxuron)、氟铃脲(hexaflumuron)、虱螨脲(lufenuron)、氟酰脲(novaluron)和氟苯脲(teflubenzuron)；
A14) 几丁质生物合成1型的抑制剂比如噻嗪酮(buprofezin)；A15) 蜕皮破坏者(molting disruptors)比如环丙氨嗪(cyromazine)；A16) 蜕皮激素(ecdyson)受体激动剂，比如甲氧虫酰肼(methoxyfenozide)、虫酰肼(tebufenozide)、氯虫酰肼(halofenozide)和环虫酰肼(chromafenozide)；A17) 章鱼胺受体激动剂比如双甲脒(amitraz)；A18) 线粒体复合物电子传递(transport)抑制剂哒螨灵(pyridaben)、吡螨胺(tebufenpyrad)、唑虫酰胺(tolfenpyrad)、嘧虫胺(flufenerim)、腈吡螨酯(cyenopyrafen)、丁氟螨酯
(cyflumetofen)、氟蚁腙(hydramethylnon)、灭螨醌(acequinocyl)或嘧螨酯
(fluacrypyrim)；A19) 电压依赖性钠通道阻滞剂比如茚虫威(indoxacarb)和氰氟虫腙 (metaflumizone)；A20) 脂质合成的抑制剂比如螺螨酯(spirodiclofen)、螺甲螨酯(spiromesifen)和螺虫乙酯(spirotetramat)；A21) 来自二酰胺类的兰尼碱(ryanodine)受体调节剂，包括氟虫双酰胺(flubendiamide)、邻苯二甲酰胺化合物(R)-3-氯-N1-{2-甲基-4-[1,2,2,2-四氟-1-(三氟甲基)乙基]苯基}-N2-(1-甲基-2-甲基磺酰基乙基)苯二甲酰胺和(S)-3-氯-N1-{2-甲基-4-[1,2,2,2-四氟-1-(三氟甲基)乙基]苯基}-N2-(1-甲基-
2-甲基磺酰基乙基)苯二甲酰胺、氯虫苯甲酰胺(chlorantraniliprole)、环溴虫酰胺(cyclaniliprole)和氰虫酰胺(cyantraniliprole)；A22) 未知或不确定作用方式的化合物比如印楝素(azadirachtin)、磺胺螨酯(amidoflumet)、联苯肼酯(bifenazate)、联氟砜(fluensulfone)、胡椒基丁醚(piperonyl butoxide)、啶虫丙醚(pyridalyl)、氟啶虫胺腈(sulfoxaflor)；或A23) 来自拟除虫菊酯(pyrethroids)类的钠通道调节剂，包括氟丙菊酯(acrinathrin)、丙烯菊酯(allethrin)、联苯菊酯(bifenthrin)、氟氯氰菊酯
(cyfluthrin)、λ氯氟氰菊酯(lambda-cyhalothrin)、氯氰菊酯(cypermethrin)、α氯氰菊酯(alpha-cypermethrin)、β氯氰菊酯(beta-cypermethrin)、ζ氯氰菊酯(zeta-
cypermethrin)、溴氰菊酯(deltamethrin)、高氰戊菊酯(esfenvalerate)、醚菊酯(etofenprox)、甲氰菊酯(fenpropathrin)、氰戊菊酯(fenvalrate)、氟氰戊菊酯(flucythrinate)、τ氟胺氰菊酯(tau-fluvalinate)、氯菊酯(permethrin)、氟硅菊酯(silafluofen)、七氟菊酯(tefluthrin)和四溴菊酯(tralomethrin)。
[0100] 值得注意的为苏云金芽孢杆菌RTI545菌株与其他生物防治菌株的混合物，包括枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株比如CH201、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)菌株比如CH200、其他苏云金芽孢杆菌菌株比如苏云金芽孢杆菌鲇泽亚种(Bacillus thuringiensis subsp. aizawai.)、苏云金芽孢杆菌库斯塔克亚种(Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki)或其用于昆虫防治的组合。
[0101] 在本公开的组合物和方法中，组合物可包含化学杀虫剂。化学杀虫剂可包括拟除虫菊酯比如联苯菊酯、七氟菊酯、ζ氯氰菊酯、氟氯氰菊酯；有机磷酸酯比如四氯乙磷、毒死蜱、丁基嘧啶磷、苯基吡唑类比如非泼罗尼；新烟碱类比如吡虫啉、噻虫嗪、噻虫胺；二酰胺类比如氯虫苯甲酰胺、氰虫酰胺、环溴虫酰胺或其混合物。
[0102] 优选的为苏云金芽孢杆菌RTI545菌株与包括以下的化学昆虫防治剂的混合物：氯虫苯甲酰胺、氯氧磷、乙基毒死蜱、氰虫酰胺、环溴虫酰胺、氯氰菊酯、二氯丙烯、氟吡呋喃酮、γ氯氟氰菊酯、溴丙磷、丁基嘧啶磷、七氟菊酯、κ联苯菊酯、κ七氟菊酯、呋喃丹、丁硫克百威、杀线威、硫双威、毒死蜱、乙基毒死蜱、甲基毒死蜱、二嗪农、甲拌磷、特丁硫磷、非泼罗尼、啶虫脒、噻虫胺、吡虫啉、噻虫啉、噻虫嗪、阿维菌素、氟啶虫酰胺、氟虫双酰胺、联苯菊酯、λ氯氟氰菊酯、氯氰菊酯、ζ氯氰菊酯、溴氰菊酯或其任何混合物。
[0103] 更优选的为苏云金芽孢杆菌RTI545菌株与噻虫胺、噻虫嗪、吡虫啉、七氟菊酯、非泼罗尼、乙基毒死蜱、丁基嘧啶磷、联苯菊酯、氯氰菊酯、ζ氯氰菊酯、γ氯氟氰菊酯、杀线威、氯虫苯甲酰胺、氰虫酰胺、环溴虫酰胺或其混合物的混合物。
[0104] 在一个或多个实施方案中，杀虫剂可包含联苯菊酯，并且组合物可配制成液体。在一个或多个实施方案中，杀虫剂可包含联苯菊酯和噻虫胺。在一个或多个实施方案中，杀虫剂可包含联苯菊酯和噻虫胺，并且组合物可配制成液体。在一个或多个实施方案中，杀虫剂可包含联苯菊酯或ζ氯氰菊酯。在一个或多个实施方案中，组合物可配制成液体，并且杀虫剂可包含联苯菊酯或ζ氯氰菊酯。
[0105] 在一个实施方案中，化学杀虫剂包括联苯菊酯。在一个实施方案中，化学杀虫剂包括联苯菊酯，并且组合物进一步包含水合硅酸铝镁和至少一种选自蔗糖酯、木质素磺酸盐、烷基多糖苷、萘磺酸甲醛缩合物和磷酸酯的分散剂。联苯菊酯杀虫剂可以0.1 g/ml-0.2 g/ml范围内的浓度存在。联苯菊酯杀虫剂可以0.17 g/ml的浓度存在。联苯菊酯杀虫剂的施用率可在约0.1克联苯菊酯/公顷(g ai/ha)-约1000 g ai/ha的范围内，更优选地在约1 g ai/ha-约100 g ai/ha的范围内。
[0106] 基于组合物中所有组分的总重量，联苯菊酯可优选地以按重量计1.0%-按重量计35%，更特别地以按重量计15%-按重量计25%的浓度存在。联苯菊酯杀虫剂组合物可以适合作为液体与肥料的混合物的方式配制。
[0107] 杀真菌剂：B0) 苯并烯氟菌唑(benzovindiflupyr)、anitiperonosporics(比如唑嘧菌胺(ametoctradin)、吲唑磺菌胺(amisulbrom)、苯噻菌胺(benthiavalicarb)、氰霜唑(cyazofamid)、霜脲氰(cymoxanil)、烯酰吗啉(dimethomorph)、噻唑菌胺(ethaboxam)、恶唑菌酮(famoxadone)、咪唑菌酮(fenamidone)、氟联苯菌(flumetover)、氟吗啉(flumorph)、氟吡菌胺(fluopicolide)、异丙菌胺(iprovalicarb)、双炔酰菌胺
(mandipropamid)、缬菌胺(valifenalate)、苯霜灵(benalaxyl)、精苯霜灵(benalaxyl-M)、呋霜灵(furalaxyl)、甲霜灵(metalaxyl)和精甲霜灵(metalaxyl-M))、唑嘧菌胺
(ametoctradin)、吲唑磺菌胺(amisulbrom)、铜盐(例如氢氧化铜、氧氯化铜、硫酸铜、过硫酸铜(copper persulfate))、啶酰菌胺(boscalid)、噻氟菌胺(thifluzamide)、氟噻唑菌腈(flutianil)、呋霜灵(furalaxyl)、噻苯咪唑(thiabendazole)、麦锈灵(benodanil)、灭锈胺(mepronil)、异丙噻菌胺(isofetamid)、甲呋酰胺(fenfuram)、联苯吡菌胺(bixafen)、氟唑菌酰胺(fluxapyroxad)、戊苯吡菌胺(penflufen)、氟唑环菌胺(sedaxane)、丁香菌酯(coumoxystrobin)、烯肟菌酯(enoxastrobin)、氟菌螨酯(flufenoxystrobin)、唑菌酯(pyraoxystrobin)、唑胺菌酯(pyrametostrobin)、氯啶菌酯(triclopyricarb)、烯肟菌胺(fenaminstrobin)、苯氧菌胺(metominostrobin)、吡菌苯威(pyribencarb)、硝苯菌酯(meptyldinocap)、三苯基乙酸锡(fentin acetate)、三苯基氯化锡(fentin chloride)、三苯基氢氧化锡(fentin hydroxide)、土霉素、乙菌利(chlozolinate)、氯甲氧苯
(chloroneb)、四氧硝基苯(tecnazene)、氯唑灵 (etridiazole)、丁基氨基甲酸碘代丙炔酯(iodocarb)、胺丙威(prothiocarb)、各种芽孢杆菌属菌株(例如鉴定为CH200、CH201、RTI184、RT1301、QST713、FZB24、MBI600、D747的菌株)、来自互生叶白千层(Melaleuca alternifolia)的提取物、来自白羽扇豆(Lupinus albus doce)的提取物、BLAD多肽、氯啶菌酯(pyrisoxazole)、噁咪唑(oxpoconazole)、乙环唑(etaconazole)、胺苯吡菌酮(fenpyrazamine)、fenpicoxamide、mefentrifluconazole、萘替芬(naftifine)、特比萘芬(terbinafine)、井冈霉素(validamycin)、丁吡吗啉(pyrimorph)、缬菌胺(valifenalate)、四氯苯酞(fthalide)、烯丙苯噻唑(probenazole)、异噻菌胺(isotianil)、昆布多糖(laminarin)、来自大虎杖(Reynoutria sachalinensis)的提取物、亚磷酸(phosphorous acid)和盐、叶枯酞(tecloftalam)、咪唑嗪(triazoxide)、焦磷酸烯酮(pyriofenone)、有机油、碳酸氢钾、百菌清(chlorothalonil)、氟氯菌核利(fluoroimide)；B1) 唑类，包括双苯三唑醇(bitertanol)、糠菌唑(bromuconazole)、环丙唑醇(cyproconazole)、苯醚甲环唑(difenoconazole)、烯唑醇(diniconazole)、恩康唑(Enilconazole)、氟环唑
(epoxiconazole)、氟喹唑(fluquinconazole)、腈苯唑(fenbuconazole)、氟硅唑(flusilazole)、粉唑醇(flutriafol)、己唑醇(hexaconazole)、亚胺唑(imibenconazole)、种菌唑(ipconazole)、叶菌唑(metconazole)、腈菌唑(myclobutanil)、戊菌唑
(penconazole)、丙环唑(propiconazole)、丙硫菌唑(prothioconazole)、硅氟唑(simeconazole)、三唑酮(triadimefon)、三唑醇(triadimenol)、戊唑醇(tebuconazole)、氟醚唑(tetraconazole)、灭菌唑(triticonazole)、咪酰胺(prochloraz)、稻瘟酯(pefurazoate)、抑霉唑(imazalil)、氟菌唑(triflumizole)、氰霜唑(cyazofamid)、苯菌灵(benomyl)、多菌灵(carbendazim)、噻苯咪唑(thiabendazole)、麦穗宁(fuberidazole)、噻唑菌胺(ethaboxam)、氯唑灵(etridiazole)和恶霉灵(hymexazole)、阿扎康唑
(azaconazole)、高效烯唑醇(diniconazole-M)、噁咪唑(oxpoconazole)、多效唑(paclobutrazol)、烯效唑(uniconazol)、1-(4-氯苯基)-2-([1,2,4]三唑-1-基)-环庚醇和抑霉唑硫酸盐(imazalil-sulfphate)；B2) 甲氧基丙烯酸酯类(strobilurins)，包括嘧菌酯(azoxystrobin)、醚菌胺(dimoxystrobin)、烯肟菌酯(enestroburin)、氟嘧菌酯(fluoxastrobin)、醚菌酯(kresoxim-methyl)、叉氨苯酰胺(methominostrobin)、肟醚菌胺(orysastrobin)、啶氧菌酯(picoxystrobin)、吡唑醚菌酯(pyraclostrobin)、肟菌酯(trifloxystrobin)、烯肟菌酯(enestroburin)、(2-氯-5-[1-(3-甲基苄氧基亚氨基)乙基]苄基)氨基甲酸甲酯、(2-氯-5-[1-(6-甲基吡啶-2-基甲氧基亚氨基)乙基]苄基)氨基甲酸甲酯和2-(邻-(2,5-二甲基苯氧基亚甲基)苯基)-3-甲氧基丙烯酸甲酯、2-(2-(6-(3-氯-2-甲基苯氧基)-5-氟-嘧啶-4-基氧基)苯基)-2-甲氧基亚氨基-N-甲基-乙酰胺和3-甲氧基-
2-(2-(N-(4-甲氧基苯基)环丙烷亚胺酸酰基(carboximidoyl)硫甲基)苯基)丙烯酸甲酯；
B3) 甲酰胺类，包括萎锈灵(carboxin)、苯霜灵(benalaxyl)、精苯霜灵(benalaxyl-M)、环酰菌胺(fenhexamid)、氟酰胺(flutolanil)、呋吡菌胺(furametpyr)、灭锈胺(mepronil)、甲霜灵(metalaxyl)、精甲霜灵(mefenoxam)、甲呋酰胺(ofurace)、恶霜灵(oxadixyl)、氧化萎锈灵(oxycarboxin)、吡噻菌胺(penthiopyrad)、吡唑萘菌胺(isopyrazam)、噻氟菌胺(thifluzamide)、噻酰菌胺(tiadinil)、3,4-二氯-N-(2-氰基苯基)异噻唑-5-甲酰胺、烯酰吗啉(dimethomorph)、氟吗啉(flumorph)、氟联苯菌(flumetover)、氟吡菌胺
(fluopicolide) (氟吡菌胺(picobenzamid))、苯酰菌胺(zoxamide)、环丙酰亚胺(carpropamid)、双氯氰菌胺(diclocymet)、双炔酰菌胺(mandipropamid)、N-(2-(4-[3-(4-氯苯基)丙-2-炔基氧基]-3-甲氧基苯基)乙基)-2-甲磺酰基-氨基-3-甲基丁酰胺、N-(2-(4-[3-(4-氯苯基)丙-2-炔基氧基]-3-甲氧基苯基)乙基)-2-乙磺酰氨基-3-甲基丁酰胺、
3-(4-氯苯基)-3-(2-异丙氧基羰基氨基-3-甲基丁酰基氨基)丙酸甲酯、N-(4'-溴联苯-2-基)-4-二氟甲基-2-甲基噻唑-5-甲酰胺、N-(4'-三氟甲基-联苯-2-基)-4-二氟甲基-2-甲基噻唑-5-甲酰胺、N-(4'-氯-3'-氟联苯-2-基)-4-二氟甲基-2-甲基噻唑-5-甲酰胺、N-(3',4'-二氯-4-氟联苯-2-基)-3-二氟甲基-1-甲基吡唑-4-甲酰胺、N-(3',4'-二氯-5-氟联苯-2-基)-3-二氟甲基-1-甲基吡唑-4-甲酰胺、N-(2-氰基苯基)-3,4-二氯异噻唑-5-甲酰胺、2-氨基-4-甲基噻唑-5-甲酰苯胺、2-氯-N-(1,1,3-三甲基茚满-4-基)-烟酰胺、N-(2-(1,3-二甲基丁基)苯基)-1,3-二甲基-5-氟-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(4'-氯-3',5-二氟联苯-2-基)-3-二氟甲基-1-甲基-IH-吡唑-4-甲酰胺、N-(4'-氯-3',5-二氟联苯-2-基)-3-三氟甲基-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(3',4'-二氯-5-氟联苯-2-基)-3-三氟甲基-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(3',5-二氟-4'-甲基联苯-2-基)-3-二氟甲基-1-甲基-1H-吡唑-
4-甲酰胺、N-(3',5-二氟-4'-甲基联苯-2-基)-3-三氟甲基-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(顺式-2-联环丙基-2-基苯基)-3-二氟甲基-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(方式-2-联环丙基-2-基苯基)-3-二氟甲基-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、氟吡菌酰胺(fluopyram)、N-(3-乙基-3,5-5-三甲基环己基)-3-甲酰氨基-2-羟基苯甲酰胺、土霉素、硅噻菌胺
(silthiofam)、N-(6-甲氧基吡啶-3-基)环丙烷甲酰胺、2-碘-N-苯基苯甲酰胺、N-(2-联环丙基-2-基苯基)-3-二氟甲基-1-甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(3',4',5'-三氟联苯-2-基)-1,
3-二甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(3',4',5'-三氟联苯-2-基)-1,3-二甲基-5-氟吡唑-4-基甲酰胺、N-(3',4',5'-三氟联苯-2-基)-5-氯-1,3-二甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(3',4',5'-三氟联苯-2-基)-3-氟甲基-1-甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(3',4',5'-三氟联苯-2-基)-3-(氯氟甲基)-1-甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(3',4',5'-三氟联苯-2-基)-3-二氟甲基-1-甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(3',4',5'-三氟联苯-2-基)-3-二氟甲基-5-氟-1-甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(3',4',5'-三氟联苯-2-基)-5-氯-3-二氟甲基-1-甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(3',
4',5'-三氟联苯-2-基)-3-(氯二氟甲基)-1-甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(3',4',5'-三氟联苯-2-基)-1-甲基-3-三氟甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(3',4',5'-三氟联苯-2-基)-5-氟-1-甲基-3-三氟甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(3',4',5'-三氟联苯-2-基)-5-氯-1-甲基-3-三氟甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(2',4',5'-三氟联苯-2-基)-1,3-二甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(2',4',5'-三氟联苯-2-基)-1,3-二甲基-5-氟吡唑-4-基甲酰胺、N-(2',4',5'-三氟联苯-
2-基)-5-氯-1,3-二甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(2',4',5'-三氟联苯-2-基)-3-氟甲基-1-甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(2',4',5'-三氟联苯-2-基)-3-(氯氟甲基)-1-甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(2',4',5'-三氟联苯-2-基)-3-二氟甲基-1-甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(2',4',5'-三氟联苯-2-基)-3-二氟甲基-5-氟-1-甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(2',4',5'-三氟联苯-2-基)-5-氯-3-二氟甲基-1-甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(2',4',5'-三氟联苯-2-基)-3-(氯二氟甲基)-1-甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(2',4',5'-三氟联苯-2-基)-1-甲基-3-三氟甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(2',4',5'-三氟联苯-2-基)-5-氟-1-甲基-3-三氟甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(2',4',5'-三氟联苯-2-基)-5-氯-1-甲基-3-三氟甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(3',4'-二氯-3-氟联苯-2-基)-1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(3',4'-二氯-3-氟联苯-2-基)-1-甲基-3-二氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(3',4'-二氟-3-氟联苯-2-基)-1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(3',4'-二氟-3-氟联苯-2-基)-1-甲基-5-二氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(3'-氯-4'-氟-3-氟联苯-2-基)-1-甲基-3-二氟甲基-1H-吡唑-
4-甲酰胺、N-(3',4'-二氯-4-氟联苯-2-基)-1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(3',4'-二氟-4-氟联苯-2-基)-1-甲基-S-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(3',4'-二氯-
4-氟联苯-2-基)-1-甲基-3-二氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(3',4'-二氟-4-氟联苯-2-基)-1-甲基-3-二氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(3'-氯-4'-氟-4-氟联苯-2-基)-1-甲基-
5-二氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(3',4'-二氯-5-氟联苯-2-基)-1-甲基-3-三氟甲基-
1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(3',4'-二氟-5-氟联苯-2-基)-1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(3',4'-二氯-5-氟联苯-2-基)-1-甲基-S-二氟甲基-1H-吡唑-甲酰胺、N-(3',4'-二氟-5-氟联苯-2-基)-1-甲基-3-二氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(3',4'-二氯-5-氟联苯-2-基)-1,3-二甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(3'-氯-4'-氟-5-氟联苯-2-基)-1-甲基-3-二氟甲基-1H-甲酰胺、N-(4'-氟-4-氟联苯-2-基)-1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(4'-氟-5-氟联苯-2-基)-1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(4'-氯-5-氟-联苯-2-基)-1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(4'-甲基-5-氟联苯-2-基)-1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(4'-氟-5-氟联苯-2-基)-1,3-二甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(4'-氯-5-氟联苯-2-基)-1,3-二甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(4'-甲基-5-氟联苯-2-基)-1,3-二甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(4'-氟-6-氟联苯-2-基)-1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(4'-氯-6-氟联苯-2-基)-1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-[2-(1,1,2,3,3,3-六氟丙氧基)苯基]-3-二氟甲基-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-[4'-(三氟甲基硫基)联苯-2-基]-3-二氟甲基-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺和N-[4'-(三氟甲基硫基)联苯-2-基]-1-甲基-3-三氟甲基-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、3-二氟甲基-N-(7-氟-1,1,3-三甲基-4-茚满基)-1-甲基-4-吡唑甲酰胺(fluindapyr)、4-二氟甲基-N-(7-氟-1,1,3-三甲基-4-茚满基)-2-甲基-5-噻唑甲酰胺、3-二氟甲基-1-甲基-N-(1,1,3,7-四甲基-4-茚满基)-吡唑甲酰胺、4-二氟甲基-2-甲基-N-(1,1,3,7-四甲基-4-茚满基)-5-噻唑甲酰胺、3-二氟甲基-1-甲基-N-(7-甲氧基-1,1,3-三甲基-4-茚满基)-4-吡唑甲酰胺、4-二氟甲基-2-甲基-N-(7-甲氧基-1,1,3-三甲基-4-茚满基)-5-噻唑甲酰胺、3-二氟甲基-1-甲基-N-(7-甲硫基-1,1,3-三甲基-4-茚满基)-4-吡唑甲酰胺、4-二氟甲基-2-甲基-N-(7-甲硫基-1,1,3-三甲基-4-茚满基)-5-噻唑甲酰胺、3-二氟甲基-1-甲基-N-(7-三氟甲氧基-
1,1,3-三甲基-4-茚满基)-4-吡唑甲酰胺、4-二氟甲基-2-甲基-N-(7-三氟甲氧基-1,1,3-三甲基-4-茚满基)-5-噻唑甲酰胺、3-二氟甲基-N-(7-氟-1,1,3-三甲基-4-茚满基)-4-呋咱甲酰胺、4-二氟甲基-N-(7-氟-1,1,3-三甲基-4-茚满基)-2-甲硫基-5-嘧啶甲酰胺、3-二氟甲基-N-(7-氯-1,1,3-三甲基-4-茚满基)-1-甲基-4-吡唑甲酰胺、3-二氟甲基-N-(7-氯-
1,1-二乙基-3-甲基-4-茚满基)-1-甲基-4-吡唑甲酰胺或4-二氟甲基-N-(7-氟-1,1,3-三甲基-4-茚满基)-5-噻二唑甲酰胺；B4) 杂环化合物，包括氟啶胺(fluazinam)、啶斑肟(pyrifenox)、乙嘧酚磺酸酯(bupirimate)、嘧菌环胺(cyprodinil)、氯苯嘧啶醇(fenarimol)、嘧菌腙(ferimzone)、嘧菌胺(mepanipyrim)、氟苯嘧啶醇(nuarimol)、嘧霉胺(pyrimethanil)、嗪氨灵(triforine)、拌种咯(fenpiclonil)、咯菌腈(fludioxonil)、二甲基吗啉(aldimorph)、吗菌灵(dodemorph)、丁苯吗啉(fenpropimorph)、十三吗啉(tridemorph)、苯锈啶(fenpropidin)、异菌脲(iprodione)、腐霉利(procymidone)、乙烯菌核利(vinclozolin)、恶唑酮菌(famoxadone)、咪唑菌酮(fenamidone)、辛噻酮
(octhilinone)、烯丙苯噻唑(probenazole)、5-氯-7-(4-甲基哌啶-1-基)-6-(2,4,6-三氟苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶、敌菌灵(anilazine)、哒菌清(diclomezine)、咯喹酮(pyroquilon)、丙氧喹啉(proquinazid)、三环唑(tricyclazole)、2-丁氧基-6-碘-3-丙基苯并吡喃(chromen)-4-酮、阿拉酸式苯-S-甲基(acibenzolar-S-methyl)、敌菌丹(captafol)、克菌丹(captan)、棉隆(dazomet)、灭菌丹(folpet)、氰菌胺(fenoxanil)、喹氧灵(quinoxyfen)、N,N-二甲基-3-(3-溴-6-氟-2-甲基吲哚-1-磺酰基)-[1,2,4]三唑-1-磺酰胺、5-乙基-6-辛基-[1,2,4]三唑并[1,5- a]嘧啶-2,7-二胺、2,3,5,6-四氯-4-甲磺酰基-吡啶、3,4,5-三氯吡啶-2,6-二腈、N-(1-(5-溴-3-氯吡啶-2-基)乙基)-2,4-二氯烟酰胺、N-((5-溴-3-氯吡啶-2-基)甲基)-2,4-二氯烟酰胺、氟嘧菌胺(diflumetorim)、氯草定(nitrapyrin)、吗菌灵醋酸盐(dodemorph acetate)、氟氯菌核利(fluoroimid)、杀稻瘟菌素S(Blasticidin-S)、灭螨猛(chinomethionat)、咪菌威(debacarb)、双苯唑快
(difenzoquat)、苯敌快-甲基硫酸盐(difenzoquat-methylsulphat)、恶喹酸(oxolinic acid)和哌丙灵(piperalin)；B5) 氨基甲酸酯类，包括代森锰锌(mancozeb)、代森锰(maneb)、威百亩(metam)、磺菌威(methasulphocarb)、代森联(metiram)、福美铁(ferbam)、丙森锌(propineb)、福美双(thiram)、代森锌(zineb)、福美锌(ziram)、乙霉威
(diethofencarb)、异丙菌胺(iprovalicarb)、苯噻菌胺(benthiavalicarb)、霜霉威(propamocarb)、霜霉威盐酸盐(propamocarb hydrochloride)、N-(1-(1-(4-氰基苯基)乙磺酰基)丁-2-基)氨基甲酸4-氟苯基酯、3-(4-氯苯基)-3-(2-异丙氧基羰基氨基-3-甲基丁酰氨基)丙酸甲酯；或B6) 其他杀真菌剂，包括胍、多果定(dodine)、多果定游离碱(dodine free base)、双胍辛胺(iminoctadine)、双辛胍胺(guazatine)、抗生素(春雷霉素(kasugamycin)、土霉素及其盐、链霉素、多抗霉素(polyoxin)、井冈霉素A(validamycin A))、硝基苯基衍生物(乐杀螨(binapacryl)、敌螨普(dinocap)、敌螨通(dinobuton))、含硫的杂环化合物(二氰蒽醌(dithianon)、稻瘟灵(isoprothiolane))、有机金属化合物(三苯锡盐(fentin salts))、有机磷化合物(Organophosphorus Compound)(敌瘟磷
(edifenphos)、异稻瘟净(iprobenfos)、乙膦酸(fosetyl)、乙膦铝(fosetyl-aluminum)、亚磷酸及其盐、吡嘧磷(pyrazophos)、甲基立枯磷(tolclofos-methyl))、有机氯化合物(抑菌灵(dichlofluanid)、磺菌胺(flusulfamide)、六氯苯(hexachloro-benzene)、苯酞(phthalide)、戊菌隆(pencycuron)、五氯硝基苯(quintozene)、硫菌灵(thiophanate)、甲基硫菌灵(thiophanate-methyl)、对甲抑菌灵(tolylfluanid))、其他：环氟菌胺(cyflufenamid)、霜脲氰(cymoxanil)、甲菌定(dimethirimol)、乙菌定(ethirimol)、呋霜灵(furalaxyl)、苯菌酮(metrafenone)和螺环菌胺(Spiroxamine)、双辛胍胺乙酸盐(guazatine acetate)、双胍辛胺三乙酸盐(iminoctadine-triacetate)、双胍三辛烷基苯磺酸盐(iminoctadine tris(albesilate))、春雷霉素盐酸盐水合物(Kasugamycin Hydrochloride Hydrate)、双氯酚(dichlorophen)、五氯酚(pentachlorophenol)及其盐、N-(4-氯-2-硝基苯基)-N-乙基-4-甲基苯磺酰胺、氯硝胺(dicloran)、酞菌酯(nitrothal-isopropyl)、四氧硝基苯(tecnazene)、联苯、溴硝醇(bronopol)、二苯胺(diphenylamine)、米多霉素(mildiomycin)、喹啉铜(oxin-copper)、调环酸钙(prohexadione calcium)、N-(环丙基甲氧基亚氨基-(6-二氟甲氧基-2,3-二氟苯基)甲基)-2-苯基乙酰胺、N'-(4-(4-氯-3-三氟甲基苯氧基)-2,5-二甲基苯基)-N-乙基-N-甲基甲脒、N'-(4-(4-氟-3-三氟甲基苯氧基)-2,5-二甲基苯基)-N-乙基-N-甲基甲脒、N'-(2-甲基-5-三氟甲基-4-(3-三甲基硅烷基丙氧基)苯基)-N-乙基-N-甲基甲脒和N'-(5-二氟甲基-2-甲基-4-(3-三甲基硅烷基丙氧基)苯基)-N-乙基-N-甲基甲脒。
(mandipropamid)、缬菌胺(valifenalate)、苯霜灵(benalaxyl)、精苯霜灵(benalaxyl-M)、呋霜灵(furalaxyl)、甲霜灵(metalaxyl)和精甲霜灵(metalaxyl-M))、唑嘧菌胺
(ametoctradin)、吲唑磺菌胺(amisulbrom)、铜盐(例如氢氧化铜、氧氯化铜、硫酸铜、过硫酸铜(copper persulfate))、啶酰菌胺(boscalid)、噻氟菌胺(thifluzamide)、氟噻唑菌腈(flutianil)、呋霜灵(furalaxyl)、噻苯咪唑(thiabendazole)、麦锈灵(benodanil)、灭锈胺(mepronil)、异丙噻菌胺(isofetamid)、甲呋酰胺(fenfuram)、联苯吡菌胺(bixafen)、氟唑菌酰胺(fluxapyroxad)、戊苯吡菌胺(penflufen)、氟唑环菌胺(sedaxane)、丁香菌酯(coumoxystrobin)、烯肟菌酯(enoxastrobin)、氟菌螨酯(flufenoxystrobin)、唑菌酯(pyraoxystrobin)、唑胺菌酯(pyrametostrobin)、氯啶菌酯(triclopyricarb)、烯肟菌胺(fenaminstrobin)、苯氧菌胺(metominostrobin)、吡菌苯威(pyribencarb)、硝苯菌酯(meptyldinocap)、三苯基乙酸锡(fentin acetate)、三苯基氯化锡(fentin chloride)、三苯基氢氧化锡(fentin hydroxide)、土霉素、乙菌利(chlozolinate)、氯甲氧苯
(chloroneb)、四氧硝基苯(tecnazene)、氯唑灵 (etridiazole)、丁基氨基甲酸碘代丙炔酯(iodocarb)、胺丙威(prothiocarb)、各种芽孢杆菌属菌株(例如鉴定为CH200、CH201、RTI184、RT1301、QST713、FZB24、MBI600、D747的菌株)、来自互生叶白千层(Melaleuca alternifolia)的提取物、来自白羽扇豆(Lupinus albus doce)的提取物、BLAD多肽、氯啶菌酯(pyrisoxazole)、噁咪唑(oxpoconazole)、乙环唑(etaconazole)、胺苯吡菌酮(fenpyrazamine)、fenpicoxamide、mefentrifluconazole、萘替芬(naftifine)、特比萘芬(terbinafine)、井冈霉素(validamycin)、丁吡吗啉(pyrimorph)、缬菌胺(valifenalate)、四氯苯酞(fthalide)、烯丙苯噻唑(probenazole)、异噻菌胺(isotianil)、昆布多糖(laminarin)、来自大虎杖(Reynoutria sachalinensis)的提取物、亚磷酸(phosphorous acid)和盐、叶枯酞(tecloftalam)、咪唑嗪(triazoxide)、焦磷酸烯酮(pyriofenone)、有机油、碳酸氢钾、百菌清(chlorothalonil)、氟氯菌核利(fluoroimide)；B1) 唑类，包括双苯三唑醇(bitertanol)、糠菌唑(bromuconazole)、环丙唑醇(cyproconazole)、苯醚甲环唑(difenoconazole)、烯唑醇(diniconazole)、恩康唑(Enilconazole)、氟环唑
(epoxiconazole)、氟喹唑(fluquinconazole)、腈苯唑(fenbuconazole)、氟硅唑(flusilazole)、粉唑醇(flutriafol)、己唑醇(hexaconazole)、亚胺唑(imibenconazole)、种菌唑(ipconazole)、叶菌唑(metconazole)、腈菌唑(myclobutanil)、戊菌唑
(penconazole)、丙环唑(propiconazole)、丙硫菌唑(prothioconazole)、硅氟唑(simeconazole)、三唑酮(triadimefon)、三唑醇(triadimenol)、戊唑醇(tebuconazole)、氟醚唑(tetraconazole)、灭菌唑(triticonazole)、咪酰胺(prochloraz)、稻瘟酯(pefurazoate)、抑霉唑(imazalil)、氟菌唑(triflumizole)、氰霜唑(cyazofamid)、苯菌灵(benomyl)、多菌灵(carbendazim)、噻苯咪唑(thiabendazole)、麦穗宁(fuberidazole)、噻唑菌胺(ethaboxam)、氯唑灵(etridiazole)和恶霉灵(hymexazole)、阿扎康唑
(azaconazole)、高效烯唑醇(diniconazole-M)、噁咪唑(oxpoconazole)、多效唑(paclobutrazol)、烯效唑(uniconazol)、1-(4-氯苯基)-2-([1,2,4]三唑-1-基)-环庚醇和抑霉唑硫酸盐(imazalil-sulfphate)；B2) 甲氧基丙烯酸酯类(strobilurins)，包括嘧菌酯(azoxystrobin)、醚菌胺(dimoxystrobin)、烯肟菌酯(enestroburin)、氟嘧菌酯(fluoxastrobin)、醚菌酯(kresoxim-methyl)、叉氨苯酰胺(methominostrobin)、肟醚菌胺(orysastrobin)、啶氧菌酯(picoxystrobin)、吡唑醚菌酯(pyraclostrobin)、肟菌酯(trifloxystrobin)、烯肟菌酯(enestroburin)、(2-氯-5-[1-(3-甲基苄氧基亚氨基)乙基]苄基)氨基甲酸甲酯、(2-氯-5-[1-(6-甲基吡啶-2-基甲氧基亚氨基)乙基]苄基)氨基甲酸甲酯和2-(邻-(2,5-二甲基苯氧基亚甲基)苯基)-3-甲氧基丙烯酸甲酯、2-(2-(6-(3-氯-2-甲基苯氧基)-5-氟-嘧啶-4-基氧基)苯基)-2-甲氧基亚氨基-N-甲基-乙酰胺和3-甲氧基-
2-(2-(N-(4-甲氧基苯基)环丙烷亚胺酸酰基(carboximidoyl)硫甲基)苯基)丙烯酸甲酯；
B3) 甲酰胺类，包括萎锈灵(carboxin)、苯霜灵(benalaxyl)、精苯霜灵(benalaxyl-M)、环酰菌胺(fenhexamid)、氟酰胺(flutolanil)、呋吡菌胺(furametpyr)、灭锈胺(mepronil)、甲霜灵(metalaxyl)、精甲霜灵(mefenoxam)、甲呋酰胺(ofurace)、恶霜灵(oxadixyl)、氧化萎锈灵(oxycarboxin)、吡噻菌胺(penthiopyrad)、吡唑萘菌胺(isopyrazam)、噻氟菌胺(thifluzamide)、噻酰菌胺(tiadinil)、3,4-二氯-N-(2-氰基苯基)异噻唑-5-甲酰胺、烯酰吗啉(dimethomorph)、氟吗啉(flumorph)、氟联苯菌(flumetover)、氟吡菌胺
(fluopicolide) (氟吡菌胺(picobenzamid))、苯酰菌胺(zoxamide)、环丙酰亚胺(carpropamid)、双氯氰菌胺(diclocymet)、双炔酰菌胺(mandipropamid)、N-(2-(4-[3-(4-氯苯基)丙-2-炔基氧基]-3-甲氧基苯基)乙基)-2-甲磺酰基-氨基-3-甲基丁酰胺、N-(2-(4-[3-(4-氯苯基)丙-2-炔基氧基]-3-甲氧基苯基)乙基)-2-乙磺酰氨基-3-甲基丁酰胺、
3-(4-氯苯基)-3-(2-异丙氧基羰基氨基-3-甲基丁酰基氨基)丙酸甲酯、N-(4'-溴联苯-2-基)-4-二氟甲基-2-甲基噻唑-5-甲酰胺、N-(4'-三氟甲基-联苯-2-基)-4-二氟甲基-2-甲基噻唑-5-甲酰胺、N-(4'-氯-3'-氟联苯-2-基)-4-二氟甲基-2-甲基噻唑-5-甲酰胺、N-(3',4'-二氯-4-氟联苯-2-基)-3-二氟甲基-1-甲基吡唑-4-甲酰胺、N-(3',4'-二氯-5-氟联苯-2-基)-3-二氟甲基-1-甲基吡唑-4-甲酰胺、N-(2-氰基苯基)-3,4-二氯异噻唑-5-甲酰胺、2-氨基-4-甲基噻唑-5-甲酰苯胺、2-氯-N-(1,1,3-三甲基茚满-4-基)-烟酰胺、N-(2-(1,3-二甲基丁基)苯基)-1,3-二甲基-5-氟-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(4'-氯-3',5-二氟联苯-2-基)-3-二氟甲基-1-甲基-IH-吡唑-4-甲酰胺、N-(4'-氯-3',5-二氟联苯-2-基)-3-三氟甲基-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(3',4'-二氯-5-氟联苯-2-基)-3-三氟甲基-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(3',5-二氟-4'-甲基联苯-2-基)-3-二氟甲基-1-甲基-1H-吡唑-
4-甲酰胺、N-(3',5-二氟-4'-甲基联苯-2-基)-3-三氟甲基-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(顺式-2-联环丙基-2-基苯基)-3-二氟甲基-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(方式-2-联环丙基-2-基苯基)-3-二氟甲基-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、氟吡菌酰胺(fluopyram)、N-(3-乙基-3,5-5-三甲基环己基)-3-甲酰氨基-2-羟基苯甲酰胺、土霉素、硅噻菌胺
(silthiofam)、N-(6-甲氧基吡啶-3-基)环丙烷甲酰胺、2-碘-N-苯基苯甲酰胺、N-(2-联环丙基-2-基苯基)-3-二氟甲基-1-甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(3',4',5'-三氟联苯-2-基)-1,
3-二甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(3',4',5'-三氟联苯-2-基)-1,3-二甲基-5-氟吡唑-4-基甲酰胺、N-(3',4',5'-三氟联苯-2-基)-5-氯-1,3-二甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(3',4',5'-三氟联苯-2-基)-3-氟甲基-1-甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(3',4',5'-三氟联苯-2-基)-3-(氯氟甲基)-1-甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(3',4',5'-三氟联苯-2-基)-3-二氟甲基-1-甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(3',4',5'-三氟联苯-2-基)-3-二氟甲基-5-氟-1-甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(3',4',5'-三氟联苯-2-基)-5-氯-3-二氟甲基-1-甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(3',
4',5'-三氟联苯-2-基)-3-(氯二氟甲基)-1-甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(3',4',5'-三氟联苯-2-基)-1-甲基-3-三氟甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(3',4',5'-三氟联苯-2-基)-5-氟-1-甲基-3-三氟甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(3',4',5'-三氟联苯-2-基)-5-氯-1-甲基-3-三氟甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(2',4',5'-三氟联苯-2-基)-1,3-二甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(2',4',5'-三氟联苯-2-基)-1,3-二甲基-5-氟吡唑-4-基甲酰胺、N-(2',4',5'-三氟联苯-
2-基)-5-氯-1,3-二甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(2',4',5'-三氟联苯-2-基)-3-氟甲基-1-甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(2',4',5'-三氟联苯-2-基)-3-(氯氟甲基)-1-甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(2',4',5'-三氟联苯-2-基)-3-二氟甲基-1-甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(2',4',5'-三氟联苯-2-基)-3-二氟甲基-5-氟-1-甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(2',4',5'-三氟联苯-2-基)-5-氯-3-二氟甲基-1-甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(2',4',5'-三氟联苯-2-基)-3-(氯二氟甲基)-1-甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(2',4',5'-三氟联苯-2-基)-1-甲基-3-三氟甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(2',4',5'-三氟联苯-2-基)-5-氟-1-甲基-3-三氟甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(2',4',5'-三氟联苯-2-基)-5-氯-1-甲基-3-三氟甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(3',4'-二氯-3-氟联苯-2-基)-1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(3',4'-二氯-3-氟联苯-2-基)-1-甲基-3-二氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(3',4'-二氟-3-氟联苯-2-基)-1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(3',4'-二氟-3-氟联苯-2-基)-1-甲基-5-二氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(3'-氯-4'-氟-3-氟联苯-2-基)-1-甲基-3-二氟甲基-1H-吡唑-
4-甲酰胺、N-(3',4'-二氯-4-氟联苯-2-基)-1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(3',4'-二氟-4-氟联苯-2-基)-1-甲基-S-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(3',4'-二氯-
4-氟联苯-2-基)-1-甲基-3-二氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(3',4'-二氟-4-氟联苯-2-基)-1-甲基-3-二氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(3'-氯-4'-氟-4-氟联苯-2-基)-1-甲基-
5-二氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(3',4'-二氯-5-氟联苯-2-基)-1-甲基-3-三氟甲基-
1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(3',4'-二氟-5-氟联苯-2-基)-1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(3',4'-二氯-5-氟联苯-2-基)-1-甲基-S-二氟甲基-1H-吡唑-甲酰胺、N-(3',4'-二氟-5-氟联苯-2-基)-1-甲基-3-二氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(3',4'-二氯-5-氟联苯-2-基)-1,3-二甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(3'-氯-4'-氟-5-氟联苯-2-基)-1-甲基-3-二氟甲基-1H-甲酰胺、N-(4'-氟-4-氟联苯-2-基)-1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(4'-氟-5-氟联苯-2-基)-1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(4'-氯-5-氟-联苯-2-基)-1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(4'-甲基-5-氟联苯-2-基)-1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(4'-氟-5-氟联苯-2-基)-1,3-二甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(4'-氯-5-氟联苯-2-基)-1,3-二甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(4'-甲基-5-氟联苯-2-基)-1,3-二甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(4'-氟-6-氟联苯-2-基)-1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(4'-氯-6-氟联苯-2-基)-1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-[2-(1,1,2,3,3,3-六氟丙氧基)苯基]-3-二氟甲基-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-[4'-(三氟甲基硫基)联苯-2-基]-3-二氟甲基-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺和N-[4'-(三氟甲基硫基)联苯-2-基]-1-甲基-3-三氟甲基-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、3-二氟甲基-N-(7-氟-1,1,3-三甲基-4-茚满基)-1-甲基-4-吡唑甲酰胺(fluindapyr)、4-二氟甲基-N-(7-氟-1,1,3-三甲基-4-茚满基)-2-甲基-5-噻唑甲酰胺、3-二氟甲基-1-甲基-N-(1,1,3,7-四甲基-4-茚满基)-吡唑甲酰胺、4-二氟甲基-2-甲基-N-(1,1,3,7-四甲基-4-茚满基)-5-噻唑甲酰胺、3-二氟甲基-1-甲基-N-(7-甲氧基-1,1,3-三甲基-4-茚满基)-4-吡唑甲酰胺、4-二氟甲基-2-甲基-N-(7-甲氧基-1,1,3-三甲基-4-茚满基)-5-噻唑甲酰胺、3-二氟甲基-1-甲基-N-(7-甲硫基-1,1,3-三甲基-4-茚满基)-4-吡唑甲酰胺、4-二氟甲基-2-甲基-N-(7-甲硫基-1,1,3-三甲基-4-茚满基)-5-噻唑甲酰胺、3-二氟甲基-1-甲基-N-(7-三氟甲氧基-
1,1,3-三甲基-4-茚满基)-4-吡唑甲酰胺、4-二氟甲基-2-甲基-N-(7-三氟甲氧基-1,1,3-三甲基-4-茚满基)-5-噻唑甲酰胺、3-二氟甲基-N-(7-氟-1,1,3-三甲基-4-茚满基)-4-呋咱甲酰胺、4-二氟甲基-N-(7-氟-1,1,3-三甲基-4-茚满基)-2-甲硫基-5-嘧啶甲酰胺、3-二氟甲基-N-(7-氯-1,1,3-三甲基-4-茚满基)-1-甲基-4-吡唑甲酰胺、3-二氟甲基-N-(7-氯-
1,1-二乙基-3-甲基-4-茚满基)-1-甲基-4-吡唑甲酰胺或4-二氟甲基-N-(7-氟-1,1,3-三甲基-4-茚满基)-5-噻二唑甲酰胺；B4) 杂环化合物，包括氟啶胺(fluazinam)、啶斑肟(pyrifenox)、乙嘧酚磺酸酯(bupirimate)、嘧菌环胺(cyprodinil)、氯苯嘧啶醇(fenarimol)、嘧菌腙(ferimzone)、嘧菌胺(mepanipyrim)、氟苯嘧啶醇(nuarimol)、嘧霉胺(pyrimethanil)、嗪氨灵(triforine)、拌种咯(fenpiclonil)、咯菌腈(fludioxonil)、二甲基吗啉(aldimorph)、吗菌灵(dodemorph)、丁苯吗啉(fenpropimorph)、十三吗啉(tridemorph)、苯锈啶(fenpropidin)、异菌脲(iprodione)、腐霉利(procymidone)、乙烯菌核利(vinclozolin)、恶唑酮菌(famoxadone)、咪唑菌酮(fenamidone)、辛噻酮
(octhilinone)、烯丙苯噻唑(probenazole)、5-氯-7-(4-甲基哌啶-1-基)-6-(2,4,6-三氟苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶、敌菌灵(anilazine)、哒菌清(diclomezine)、咯喹酮(pyroquilon)、丙氧喹啉(proquinazid)、三环唑(tricyclazole)、2-丁氧基-6-碘-3-丙基苯并吡喃(chromen)-4-酮、阿拉酸式苯-S-甲基(acibenzolar-S-methyl)、敌菌丹(captafol)、克菌丹(captan)、棉隆(dazomet)、灭菌丹(folpet)、氰菌胺(fenoxanil)、喹氧灵(quinoxyfen)、N,N-二甲基-3-(3-溴-6-氟-2-甲基吲哚-1-磺酰基)-[1,2,4]三唑-1-磺酰胺、5-乙基-6-辛基-[1,2,4]三唑并[1,5- a]嘧啶-2,7-二胺、2,3,5,6-四氯-4-甲磺酰基-吡啶、3,4,5-三氯吡啶-2,6-二腈、N-(1-(5-溴-3-氯吡啶-2-基)乙基)-2,4-二氯烟酰胺、N-((5-溴-3-氯吡啶-2-基)甲基)-2,4-二氯烟酰胺、氟嘧菌胺(diflumetorim)、氯草定(nitrapyrin)、吗菌灵醋酸盐(dodemorph acetate)、氟氯菌核利(fluoroimid)、杀稻瘟菌素S(Blasticidin-S)、灭螨猛(chinomethionat)、咪菌威(debacarb)、双苯唑快
(difenzoquat)、苯敌快-甲基硫酸盐(difenzoquat-methylsulphat)、恶喹酸(oxolinic acid)和哌丙灵(piperalin)；B5) 氨基甲酸酯类，包括代森锰锌(mancozeb)、代森锰(maneb)、威百亩(metam)、磺菌威(methasulphocarb)、代森联(metiram)、福美铁(ferbam)、丙森锌(propineb)、福美双(thiram)、代森锌(zineb)、福美锌(ziram)、乙霉威
(diethofencarb)、异丙菌胺(iprovalicarb)、苯噻菌胺(benthiavalicarb)、霜霉威(propamocarb)、霜霉威盐酸盐(propamocarb hydrochloride)、N-(1-(1-(4-氰基苯基)乙磺酰基)丁-2-基)氨基甲酸4-氟苯基酯、3-(4-氯苯基)-3-(2-异丙氧基羰基氨基-3-甲基丁酰氨基)丙酸甲酯；或B6) 其他杀真菌剂，包括胍、多果定(dodine)、多果定游离碱(dodine free base)、双胍辛胺(iminoctadine)、双辛胍胺(guazatine)、抗生素(春雷霉素(kasugamycin)、土霉素及其盐、链霉素、多抗霉素(polyoxin)、井冈霉素A(validamycin A))、硝基苯基衍生物(乐杀螨(binapacryl)、敌螨普(dinocap)、敌螨通(dinobuton))、含硫的杂环化合物(二氰蒽醌(dithianon)、稻瘟灵(isoprothiolane))、有机金属化合物(三苯锡盐(fentin salts))、有机磷化合物(Organophosphorus Compound)(敌瘟磷
(edifenphos)、异稻瘟净(iprobenfos)、乙膦酸(fosetyl)、乙膦铝(fosetyl-aluminum)、亚磷酸及其盐、吡嘧磷(pyrazophos)、甲基立枯磷(tolclofos-methyl))、有机氯化合物(抑菌灵(dichlofluanid)、磺菌胺(flusulfamide)、六氯苯(hexachloro-benzene)、苯酞(phthalide)、戊菌隆(pencycuron)、五氯硝基苯(quintozene)、硫菌灵(thiophanate)、甲基硫菌灵(thiophanate-methyl)、对甲抑菌灵(tolylfluanid))、其他：环氟菌胺(cyflufenamid)、霜脲氰(cymoxanil)、甲菌定(dimethirimol)、乙菌定(ethirimol)、呋霜灵(furalaxyl)、苯菌酮(metrafenone)和螺环菌胺(Spiroxamine)、双辛胍胺乙酸盐(guazatine acetate)、双胍辛胺三乙酸盐(iminoctadine-triacetate)、双胍三辛烷基苯磺酸盐(iminoctadine tris(albesilate))、春雷霉素盐酸盐水合物(Kasugamycin Hydrochloride Hydrate)、双氯酚(dichlorophen)、五氯酚(pentachlorophenol)及其盐、N-(4-氯-2-硝基苯基)-N-乙基-4-甲基苯磺酰胺、氯硝胺(dicloran)、酞菌酯(nitrothal-isopropyl)、四氧硝基苯(tecnazene)、联苯、溴硝醇(bronopol)、二苯胺(diphenylamine)、米多霉素(mildiomycin)、喹啉铜(oxin-copper)、调环酸钙(prohexadione calcium)、N-(环丙基甲氧基亚氨基-(6-二氟甲氧基-2,3-二氟苯基)甲基)-2-苯基乙酰胺、N'-(4-(4-氯-3-三氟甲基苯氧基)-2,5-二甲基苯基)-N-乙基-N-甲基甲脒、N'-(4-(4-氟-3-三氟甲基苯氧基)-2,5-二甲基苯基)-N-乙基-N-甲基甲脒、N'-(2-甲基-5-三氟甲基-4-(3-三甲基硅烷基丙氧基)苯基)-N-乙基-N-甲基甲脒和N'-(5-二氟甲基-2-甲基-4-(3-三甲基硅烷基丙氧基)苯基)-N-乙基-N-甲基甲脒。
[0108] 值得注意的为苏云金芽孢杆菌RTI545菌株与其他生物防治菌株的混合物，包括枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株吡如CH201或QST713或MBI600或RTI477、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)菌株比如CH200或RTI184、贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)菌株比如RTI301、枯草芽孢杆菌解淀粉变种(Bacillus subtilis var. amyloliquefaciens)FZB24或解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)D747或其用于真菌病防治的组合。
[0109] 在本公开的组合物和方法中，组合物可包括化学杀真菌剂。
[0110] 优选的为苏云金芽孢杆菌RTI545菌株与包括以下的化学真菌防治剂的混合物：噻苯咪唑、氟唑菌酰胺、戊苯吡菌胺、氟唑环菌胺、双苯三唑醇、环丙唑醇、苯醚甲环唑、氟喹唑、粉唑醇、种菌唑、腈菌唑、丙硫菌唑、三唑酮、三唑醇、戊唑醇、灭菌唑、咪酰胺、抑霉唑、苯菌灵、多菌灵、恶霉灵、嘧菌酯、氟嘧菌酯、吡唑醚菌酯、肟菌酯、萎锈灵、氟酰胺、甲霜灵、精甲霜灵、吡噻菌胺、氟吡菌酰胺、硅噻菌胺、氟啶胺、嘧霉胺、咯菌腈、异菌脲、三环唑、克菌丹、棉隆、代森锰锌、威百亩、福美双、双辛胍胺、甲基立枯磷、戊菌隆、甲基硫菌灵、fenpicoxamide、mefentrifluconazole、fluindapyr或其任何混合物。
[0111] 更优选的为苏云金芽孢杆菌RTI545菌株与以下的混合物：咯菌腈、丙硫菌唑、精甲霜灵、甲霜灵、戊唑醇、苯醚甲环唑、福美双、萎锈灵、多菌灵、灭菌唑、戊菌隆、抑霉唑、吡唑醚菌酯、氟唑环菌胺、肟菌酯、氟喹唑、氟嘧菌酯、嘧菌酯、粉唑醇、氟唑菌酰胺、吡噻菌胺、fenpicoxamide、mefentrifluconazole、fluindapyr或其混合物。
[0112] 除草剂：C1) 乙酰辅酶A羧化酶抑制剂(ACC)，例如环己烯酮肟醚类，比如禾草灭(alloxydim)、烯草酮(clethodim)、环丁烯草酮(cloproxydim)、噻草酮(cycloxydim)、烯禾定(sethoxydim)、三甲苯草酮(tralkoxydim)、丁氧环酮(butroxydim)、环苯草酮(clefoxydim)或吡喃草酮(tepraloxydim)；苯氧基苯氧基丙酸酯类，比如炔草酯(clodinafop-propargyl)、氰氟草酯(cyhalofop-butyl)、禾草灵(甲酯) (diclofop-methyl)、噁唑禾草灵(乙酯) (fenoxaprop-ethyl)、精噁唑禾草灵(fenoxaprop-P-ethyl)、噻唑禾草灵(fenthiaprop-ethyl)、吡氟禾草灵(fluazifop-butyl)、精吡氟禾草灵(fluazifop-p-butyl)、吡氟甲禾灵(乙氧基乙酯) (haloxyfop-ethoxyethyl)、氟吡甲禾灵(haloxyfop-methyl)、高效氟吡甲禾灵(haloxyfop-P-methyl)、异噁草醚(isoxapyrifop)、喔草酯(propaquizafop)、喹禾灵(quizalofop-ethyl)、精喹禾灵(quizalofop-p-ethyl)或喹禾糠酯(quizalofop-tefuryl)；或芳基氨基丙酸类，比如麦草氟甲酯(flamprop-methyl)或麦草氟异丙酯(flamprop-isopropyl)；C2) 乙酰乳酸合酶(ALS)抑制剂，例如咪唑啉酮类，比如咪唑烟酸(imazapyr)、灭草喹(imazaquin)、咪草酸甲酯(imazamethabenz-methyl) (咪草酯(imazame))、甲氧咪草烟(imazamox)、甲基咪草烟(imazapic)或咪唑乙烟酸(imazethapyr)；嘧啶基醚类，比如嘧硫草醚(pyrithiobac-acid)、嘧硫草醚(pyrithiobac-sodium)、双草醚(bispyribac-sodium)、KIH-6127或嘧啶肟草醚(pyribenzoxim)；磺酰胺类，比如双氟磺草胺(florasulam)、氟唑嘧磺草胺(flumetsulam)或磺草唑胺(metosulam)；
或磺酰脲类，比如酰嘧磺隆(amidosulfuron)、四唑嘧磺隆(azimsulfuron)、苄嘧磺隆(bensulfuron-methyl)、氯嘧磺隆(chlorimuron-ethyl)、氯磺隆(chlorsulfuron)、醚磺隆(cinosulfuron)、环丙嘧磺隆(cyclosulfamuron)、胺苯磺隆(ethametsulfuron-methyl)、乙氧嘧磺隆(ethoxysulfuron)、啶嘧磺隆(flazasulfuron)、氯吡嘧磺隆(halosulfuron-methyl)、唑吡嘧磺隆(imazosulfuron)、甲磺隆(metsulfuron-methyl)、烟嘧磺隆(nicosulfuron)、甲基氟嘧磺隆(primisulfuron-methyl)、氟磺隆(prosulfuron)、吡嘧磺隆乙酯(pyrazosulfuron-ethyl)、玉嘧磺隆(rimsulfuron)、甲嘧磺隆(sulfometuron-methyl)、甲基噻吩磺隆(thifensulfuron-methyl)、醚苯磺隆(triasulfuron)、苯磺隆(tribenuron-methyl)、氟胺磺隆(triflusulfuron-methyl)、三氟甲磺隆
(tritosulfuron)、磺酰磺隆(sulfosulfuron)、甲酰胺磺隆(foramsulfuron)或碘甲磺隆(iodosulfuron)；C3) 酰胺类，例如二丙烯草胺(allidochlor) (CDAA)、新燕灵
(benzoylprop-ethyl)、溴丁酰草胺(bromobutide)、草克乐(chlorthiamid)、双苯酰草胺(diphenamid)、乙氧苯草胺(etobenzanid) (乙苯酰草(benzchlomet))、噻唑草酰胺(fluthiamide)、膦铵素(fosamine)或杀草利(monalide)；C4) 生长素除草剂，例如吡啶羧酸类(pyridinecarboxylic acids)，比如二氯吡啶酸(clopyralid)或毒莠定(picloram)；
或2,4-D或草除灵(benazolin)；C5) 生长素转运抑制剂，例如抑草生(naptalam)或氟吡草腙(diflufenzopyr)；C6) 类胡萝卜素(carotenoid)生物合成抑制剂，例如吡草酮(benzofenap)、异恶草酮(clomazone) (广灭灵(dimethazone))、吡氟草胺
(diflufenican)、氟咯草酮(fluorochloridone)、氟啶酮(fluridone)、吡唑特
(pyrazolynate)、苄草唑(pyrazoxyfen)、异噁唑草酮(isoxaflutole)、异噁氯草酮(isoxachlortole)、甲基磺草酮(mesotrione)、磺草酮(sulcotrione) (磺草酮
(chlormesulone))、克螺多(ketospiradox)、呋草酮(flurtamone)、达草灭(norflurazon)或杀草强(amitrol)；C7) 烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合酶(enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase) (EPSPS)抑制剂，例如草甘膦(glyphosate)或草硫膦(sulfosate)；
C8) 谷氨酰胺合成酶抑制剂，例如双丙氨酰膦(bilanafos) (双丙氨磷(bialaphos))或草铵膦(glufosinate-ammonium)；C9) 脂质生物合成抑制剂，例如苯胺类，比如莎稗磷(anilofos)或苯噻草胺(mefenacet)；氯乙酰苯胺类，比如二甲吩草胺(dimethenamid)、高效二甲吩草胺(S-dimethenamid)、乙草胺(acetochlor)、甲草胺(alachlor)、丁草胺(butachlor)、丁烯草胺(butenachlor)、乙酰甲草胺(diethatyl-ethyl)、二甲草胺(dimethachlor)、吡唑草胺(metazachlor)、异丙甲草胺(metolachlor)、精异丙甲草胺(S-metolachlor)、丙草胺(pretilachlor)、扑草胺(propachlor)、丙炔草胺(prynachlor)、特丁草胺(terbuchlor)、甲氧噻草胺(thenylchlor)或二甲苯草胺(xylachlor)；硫脲类，比如丁草特(butylate)、草灭特(cycloate)、燕麦敌(di-allate)、哌草丹(dimepiperate)、茵草敌(EPTC)、禾草畏(esprocarb)、禾草特(molinate)、克草猛(pebulate)、苄草丹(prosulfocarb)、禾草丹(thiobencarb) (杀草丹(benthiocarb))、野麦畏(tri-allate)或灭草猛(vemolate)；或者呋草磺(benfuresate)或氟草磺胺(perfluidone)；C10) 有丝分裂抑制剂，例如氨基甲酸酯类，比如磺草灵(asulam)、卡草胺(carbetamide)、氯苯胺灵(chlorpropham)、坪草丹(orbencarb)、拿草特(pronamid) (戊炔草胺(propyzamid))、苯胺灵(propham)或仲草丹(tiocarbazil)；二硝基苯胺类，比如氟草胺(benefin)、地乐胺(butralin)、敌草胺(dinitramin)、乙丁烯氟灵(ethalfluralin)、氯乙氟灵
(fluchloralin)、氨磺乐灵(oryzalin)、二甲戊乐灵(pendimethalin)、氨基丙氟灵(prodiamine)或氟乐灵(trifluralin)；吡啶类，比如氟硫草定(dithiopyr)或噻唑烟酸(thiazopyr)；或者丁胺磷(butamifos)、氯酞酸二甲酯(chlorthal-dimethyl) (DCPA)或马来酰肼(maleic hydrazide)；C11) 原卟啉原IX氧化酶(protoporphyrinogen IX oxidase)抑制剂，例如二苯醚类(diphenylethers)，比如三氟羧草醚(acifluorfen)、三氟羧草醚(acifluorfen-sodium)、苯草醚(aclonifen)、甲羧除草醚(bifenox)、全滅草
(chlomitrofen) (CNP)、氯氟草醚(ethoxyfen)、消草醚(fluorodifen)、乙羧氟草醚(fluoroglycofen-ethyl)、氟磺胺草醚(fomesafen)、氟呋草醚(furyloxyfen)、乳氟禾草灵(lactofen)、除草醚(nitrofen)、三氟甲草醚(nitrofluorfen)或乙氧氟草醚
(oxyfluorfen)；噁二唑类(oxadiazoles)，比如丙炔噁草酮(oxadiargyl)或噁草酮(oxadiazon)；环状酰亚胺类，比如唑啶草酮(azafenidin)、氟丙嘧草酯(butafenacil)、唑酮草酯(carfentrazone-ethyl)、吲哚酮草酯(cinidon-ethyl)、氟胺草酯(flumiclorac-pentyl)、丙炔氟草胺(flumioxazin)、炔草胺(flumipropyn)、丙嘧草酯(flupropacil)、嗪草酸甲酯(fluthiacet-methyl)、甲磺草胺(sulfentrazone)或噻二唑草胺(thidiazimin)；
或者吡唑类，比如ET-751、JV 485或吡氯草胺(nipyraclofen)；C12) 光合作用
(photosynthesis)抑制剂，例如敌稗(propanil)、哒草特(pyridate)或哒嗪醇
(pyridafol)；苯并噻二嗪酮类(benzothiadiazinone)，比如苯达松(bentazone)；二硝基酚类，例如溴酚肟(bromofenoxim)、地乐酚(dinoseb)、地乐酯(dinoseb acetate)、特乐酚(dinoterb)或二硝基邻甲酚(DNOC)；二吡啶亚基类(dipyridylene)，比如牧草快
(cyperquat-chloride)、野燕枯甲基硫酸盐(difenzoquat-methylsulfate)、敌草快(diquat)或百草枯二氯盐(paraquat dichloride)；脲类，比如氯溴隆(chlorbromuron)、氯麦隆(chlorotoluron)、枯莠隆(difenoxuron)、噁唑隆(dimefuron)、敌草隆(diuron)、磺噻隆(ethidimuron)、非草隆(fenuron)、伏草隆(fluometuron)、异丙隆(isoproturon)、异噁隆(isouron)、利谷隆(linuron)、甲基苯噻隆(methabenzthiazuron)、灭草定(methazole)、吡喃隆(metobenzuron)、甲氧隆(metoxuron)、绿谷隆(monolinuron)、丁敌隆(neburon)、环草隆(siduron)或特丁噻草隆(tebuthiuron)；酚类，比如溴苯腈(bromoxynil)或碘苯腈(ioxynil)；氯草敏(chloridazon)；三嗪类，比如莠灭净(ametryn)、莠去津(atrazine)、氰草津(cyanazine)、desmein、戊草津(dimethamethryn)、环嗪酮(hexazinone)、扑草通(prometon)、扑草净(prometryn)、扑灭津(propazine)、西玛嗪(simazine)、西草净(simetryn)、特丁通(terbumeton)、特丁净(terbutryn)、特丁津(terbutylazine)或草达津(trietazine)；三嗪酮类，比如苯嗪草酮(metamitron)或嗪草酮 (metribuzin)；脲嘧啶类，比如除草定(bromacil)、环草定(lenacil)或特草定(terbacil)；或者双氨基甲酸酯类，比如甜菜安(desmedipham)或甜菜宁(phenmedipham)；C13) 增效剂，例如环氧乙烷类，比如灭草环(tridiphane)；C14) 顺式(cis)细胞壁合成抑制剂，例如异噁酰草胺(isoxaben)或敌草腈(dichlobenil)；C15) 各种其他除草剂，例如二氯丙酸类，比如茅草枯(dalapon)；二氢苯并呋喃类，比如乙氧呋草黄(ethofumesate)；苯乙酸类，比如伐草克(chlorfenac) (fenac)；或者叠氮津(aziprotryn)、燕麦灵(barban)、地散磷(bensulide)、噻草隆(benzthiazuron)、氟磺胺草(benzofluor)、特克草(buminafos)、特咪唑草(buthidazole)、炔草隆(buturon)、唑草胺(cafenstrole)、氯炔灵(chlorbufam)、燕麦酯(chlorfenprop-methyl)、枯草隆(chloroxuron)、环庚草醚(cinmethylin)、苄草隆(cumyluron)、环莠隆(cycluron)、环丙津(cyprazine)、三环塞草胺(cyprazole)、苄草隆(dibenzyluron)、异丙净(dipropetryn)、杀草隆(dymron)、甘草津(eglinazine-ethyl)、草藻灭(endothall)、乙嗪草酮(ethiozin)、氟唑磺隆(flucarbazone)、fluorbentranil、氟胺草唑(flupoxam)、丁咪酰胺(isocarbamid)、异丙乐灵(isopropalin)、隆草特(karbutilate)、氟磺酰草胺(mefluidide)、灭草隆(monuron)、草萘胺(napropamide)、精草萘胺(napropamide-M)、敌草胺(napropanilide)、甲磺乐灵(nitralin)、噁嗪草酮(oxaziclomefone)、棉胺宁(phenisopham)、哌草磷(piperophos)、环丙腈津(procyazine)、环丙氟灵(profluralin)、稗草畏(pyributicarb)、仲丁通(secbumeton)、草克死(sulfallate) (CDEC)、特草灵(terbucarb)、三嗪氟草胺(triaziflam)、triazofenamid或三甲隆(trimeturon)；或其环境相容性盐。
或磺酰脲类，比如酰嘧磺隆(amidosulfuron)、四唑嘧磺隆(azimsulfuron)、苄嘧磺隆(bensulfuron-methyl)、氯嘧磺隆(chlorimuron-ethyl)、氯磺隆(chlorsulfuron)、醚磺隆(cinosulfuron)、环丙嘧磺隆(cyclosulfamuron)、胺苯磺隆(ethametsulfuron-methyl)、乙氧嘧磺隆(ethoxysulfuron)、啶嘧磺隆(flazasulfuron)、氯吡嘧磺隆(halosulfuron-methyl)、唑吡嘧磺隆(imazosulfuron)、甲磺隆(metsulfuron-methyl)、烟嘧磺隆(nicosulfuron)、甲基氟嘧磺隆(primisulfuron-methyl)、氟磺隆(prosulfuron)、吡嘧磺隆乙酯(pyrazosulfuron-ethyl)、玉嘧磺隆(rimsulfuron)、甲嘧磺隆(sulfometuron-methyl)、甲基噻吩磺隆(thifensulfuron-methyl)、醚苯磺隆(triasulfuron)、苯磺隆(tribenuron-methyl)、氟胺磺隆(triflusulfuron-methyl)、三氟甲磺隆
(tritosulfuron)、磺酰磺隆(sulfosulfuron)、甲酰胺磺隆(foramsulfuron)或碘甲磺隆(iodosulfuron)；C3) 酰胺类，例如二丙烯草胺(allidochlor) (CDAA)、新燕灵
(benzoylprop-ethyl)、溴丁酰草胺(bromobutide)、草克乐(chlorthiamid)、双苯酰草胺(diphenamid)、乙氧苯草胺(etobenzanid) (乙苯酰草(benzchlomet))、噻唑草酰胺(fluthiamide)、膦铵素(fosamine)或杀草利(monalide)；C4) 生长素除草剂，例如吡啶羧酸类(pyridinecarboxylic acids)，比如二氯吡啶酸(clopyralid)或毒莠定(picloram)；
或2,4-D或草除灵(benazolin)；C5) 生长素转运抑制剂，例如抑草生(naptalam)或氟吡草腙(diflufenzopyr)；C6) 类胡萝卜素(carotenoid)生物合成抑制剂，例如吡草酮(benzofenap)、异恶草酮(clomazone) (广灭灵(dimethazone))、吡氟草胺
(diflufenican)、氟咯草酮(fluorochloridone)、氟啶酮(fluridone)、吡唑特
(pyrazolynate)、苄草唑(pyrazoxyfen)、异噁唑草酮(isoxaflutole)、异噁氯草酮(isoxachlortole)、甲基磺草酮(mesotrione)、磺草酮(sulcotrione) (磺草酮
(chlormesulone))、克螺多(ketospiradox)、呋草酮(flurtamone)、达草灭(norflurazon)或杀草强(amitrol)；C7) 烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合酶(enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase) (EPSPS)抑制剂，例如草甘膦(glyphosate)或草硫膦(sulfosate)；
C8) 谷氨酰胺合成酶抑制剂，例如双丙氨酰膦(bilanafos) (双丙氨磷(bialaphos))或草铵膦(glufosinate-ammonium)；C9) 脂质生物合成抑制剂，例如苯胺类，比如莎稗磷(anilofos)或苯噻草胺(mefenacet)；氯乙酰苯胺类，比如二甲吩草胺(dimethenamid)、高效二甲吩草胺(S-dimethenamid)、乙草胺(acetochlor)、甲草胺(alachlor)、丁草胺(butachlor)、丁烯草胺(butenachlor)、乙酰甲草胺(diethatyl-ethyl)、二甲草胺(dimethachlor)、吡唑草胺(metazachlor)、异丙甲草胺(metolachlor)、精异丙甲草胺(S-metolachlor)、丙草胺(pretilachlor)、扑草胺(propachlor)、丙炔草胺(prynachlor)、特丁草胺(terbuchlor)、甲氧噻草胺(thenylchlor)或二甲苯草胺(xylachlor)；硫脲类，比如丁草特(butylate)、草灭特(cycloate)、燕麦敌(di-allate)、哌草丹(dimepiperate)、茵草敌(EPTC)、禾草畏(esprocarb)、禾草特(molinate)、克草猛(pebulate)、苄草丹(prosulfocarb)、禾草丹(thiobencarb) (杀草丹(benthiocarb))、野麦畏(tri-allate)或灭草猛(vemolate)；或者呋草磺(benfuresate)或氟草磺胺(perfluidone)；C10) 有丝分裂抑制剂，例如氨基甲酸酯类，比如磺草灵(asulam)、卡草胺(carbetamide)、氯苯胺灵(chlorpropham)、坪草丹(orbencarb)、拿草特(pronamid) (戊炔草胺(propyzamid))、苯胺灵(propham)或仲草丹(tiocarbazil)；二硝基苯胺类，比如氟草胺(benefin)、地乐胺(butralin)、敌草胺(dinitramin)、乙丁烯氟灵(ethalfluralin)、氯乙氟灵
(fluchloralin)、氨磺乐灵(oryzalin)、二甲戊乐灵(pendimethalin)、氨基丙氟灵(prodiamine)或氟乐灵(trifluralin)；吡啶类，比如氟硫草定(dithiopyr)或噻唑烟酸(thiazopyr)；或者丁胺磷(butamifos)、氯酞酸二甲酯(chlorthal-dimethyl) (DCPA)或马来酰肼(maleic hydrazide)；C11) 原卟啉原IX氧化酶(protoporphyrinogen IX oxidase)抑制剂，例如二苯醚类(diphenylethers)，比如三氟羧草醚(acifluorfen)、三氟羧草醚(acifluorfen-sodium)、苯草醚(aclonifen)、甲羧除草醚(bifenox)、全滅草
(chlomitrofen) (CNP)、氯氟草醚(ethoxyfen)、消草醚(fluorodifen)、乙羧氟草醚(fluoroglycofen-ethyl)、氟磺胺草醚(fomesafen)、氟呋草醚(furyloxyfen)、乳氟禾草灵(lactofen)、除草醚(nitrofen)、三氟甲草醚(nitrofluorfen)或乙氧氟草醚
(oxyfluorfen)；噁二唑类(oxadiazoles)，比如丙炔噁草酮(oxadiargyl)或噁草酮(oxadiazon)；环状酰亚胺类，比如唑啶草酮(azafenidin)、氟丙嘧草酯(butafenacil)、唑酮草酯(carfentrazone-ethyl)、吲哚酮草酯(cinidon-ethyl)、氟胺草酯(flumiclorac-pentyl)、丙炔氟草胺(flumioxazin)、炔草胺(flumipropyn)、丙嘧草酯(flupropacil)、嗪草酸甲酯(fluthiacet-methyl)、甲磺草胺(sulfentrazone)或噻二唑草胺(thidiazimin)；
或者吡唑类，比如ET-751、JV 485或吡氯草胺(nipyraclofen)；C12) 光合作用
(photosynthesis)抑制剂，例如敌稗(propanil)、哒草特(pyridate)或哒嗪醇
(pyridafol)；苯并噻二嗪酮类(benzothiadiazinone)，比如苯达松(bentazone)；二硝基酚类，例如溴酚肟(bromofenoxim)、地乐酚(dinoseb)、地乐酯(dinoseb acetate)、特乐酚(dinoterb)或二硝基邻甲酚(DNOC)；二吡啶亚基类(dipyridylene)，比如牧草快
(cyperquat-chloride)、野燕枯甲基硫酸盐(difenzoquat-methylsulfate)、敌草快(diquat)或百草枯二氯盐(paraquat dichloride)；脲类，比如氯溴隆(chlorbromuron)、氯麦隆(chlorotoluron)、枯莠隆(difenoxuron)、噁唑隆(dimefuron)、敌草隆(diuron)、磺噻隆(ethidimuron)、非草隆(fenuron)、伏草隆(fluometuron)、异丙隆(isoproturon)、异噁隆(isouron)、利谷隆(linuron)、甲基苯噻隆(methabenzthiazuron)、灭草定(methazole)、吡喃隆(metobenzuron)、甲氧隆(metoxuron)、绿谷隆(monolinuron)、丁敌隆(neburon)、环草隆(siduron)或特丁噻草隆(tebuthiuron)；酚类，比如溴苯腈(bromoxynil)或碘苯腈(ioxynil)；氯草敏(chloridazon)；三嗪类，比如莠灭净(ametryn)、莠去津(atrazine)、氰草津(cyanazine)、desmein、戊草津(dimethamethryn)、环嗪酮(hexazinone)、扑草通(prometon)、扑草净(prometryn)、扑灭津(propazine)、西玛嗪(simazine)、西草净(simetryn)、特丁通(terbumeton)、特丁净(terbutryn)、特丁津(terbutylazine)或草达津(trietazine)；三嗪酮类，比如苯嗪草酮(metamitron)或嗪草酮 (metribuzin)；脲嘧啶类，比如除草定(bromacil)、环草定(lenacil)或特草定(terbacil)；或者双氨基甲酸酯类，比如甜菜安(desmedipham)或甜菜宁(phenmedipham)；C13) 增效剂，例如环氧乙烷类，比如灭草环(tridiphane)；C14) 顺式(cis)细胞壁合成抑制剂，例如异噁酰草胺(isoxaben)或敌草腈(dichlobenil)；C15) 各种其他除草剂，例如二氯丙酸类，比如茅草枯(dalapon)；二氢苯并呋喃类，比如乙氧呋草黄(ethofumesate)；苯乙酸类，比如伐草克(chlorfenac) (fenac)；或者叠氮津(aziprotryn)、燕麦灵(barban)、地散磷(bensulide)、噻草隆(benzthiazuron)、氟磺胺草(benzofluor)、特克草(buminafos)、特咪唑草(buthidazole)、炔草隆(buturon)、唑草胺(cafenstrole)、氯炔灵(chlorbufam)、燕麦酯(chlorfenprop-methyl)、枯草隆(chloroxuron)、环庚草醚(cinmethylin)、苄草隆(cumyluron)、环莠隆(cycluron)、环丙津(cyprazine)、三环塞草胺(cyprazole)、苄草隆(dibenzyluron)、异丙净(dipropetryn)、杀草隆(dymron)、甘草津(eglinazine-ethyl)、草藻灭(endothall)、乙嗪草酮(ethiozin)、氟唑磺隆(flucarbazone)、fluorbentranil、氟胺草唑(flupoxam)、丁咪酰胺(isocarbamid)、异丙乐灵(isopropalin)、隆草特(karbutilate)、氟磺酰草胺(mefluidide)、灭草隆(monuron)、草萘胺(napropamide)、精草萘胺(napropamide-M)、敌草胺(napropanilide)、甲磺乐灵(nitralin)、噁嗪草酮(oxaziclomefone)、棉胺宁(phenisopham)、哌草磷(piperophos)、环丙腈津(procyazine)、环丙氟灵(profluralin)、稗草畏(pyributicarb)、仲丁通(secbumeton)、草克死(sulfallate) (CDEC)、特草灵(terbucarb)、三嗪氟草胺(triaziflam)、triazofenamid或三甲隆(trimeturon)；或其环境相容性盐。
[0113] 杀线虫剂或生物杀线虫剂：苯菌灵(benomyl)、除线威(cloethocarb)、氧涕灭威(aldoxycarb)、环线威(tirpate)、除线特(diamidafos)、克线磷(fenamiphos)、硫线磷(cadusafos)、除线磷(dichlofenthion)、丙线磷(ethoprophos)、丰索磷(fensulfothion)、噻唑硫磷(fosthiazate)、速杀硫磷(heterophos)、氯唑磷(isamidofos)、氯唑磷(isazofos)、乙丙磷威(phosphocarb)、治线磷(thionazin)、新烟磷(imicyafos)、四甲磷(mecarphon)、乙酰虫腈(acetoprole)、异噻虫唑(benclothiaz)、杀线威(oxamyl)、氯化苦(chloropicrin)、棉隆(dazomet)、联氟砜(fluensulfone)、1,3-二氯丙烯(telone)、二甲基二硫化物、威百亩钠盐(metam-sodium)、威百亩钾盐(metam potassium)、威百亩盐(metam salt) (全部为MITC发生器)、溴甲烷、生物土壤改良剂(amendments) (例如芥菜籽、芥菜籽提取物)、土壤的蒸汽熏蒸(steam fumigation)、异硫氰酸烯丙酯(AITC)、硫酸二甲酯、糠醛(醛)、三氟咪啶酰胺(fluazaindolizine) (DPX-Q8U80)、氟吡菌酰胺(fluopyram)或tioxazafen。
[0114] 优选的为苏云金芽孢杆菌RTI545菌株与包括以下的化学线虫防治剂的混合物：苯菌灵、克线磷、硫线磷、丙线磷、噻唑硫磷、氯化苦、棉隆、联氟砜、杀线威、1,3-二氯丙烯(telone)、威百亩钠盐、威百亩钾盐、威百亩盐(全部为MITC发生器)、溴甲烷、异硫氰酸烯丙酯(AITC)、三氟咪啶酰胺(DPX-Q8U80)、tioxazafen、氟吡菌酰胺或其任何混合物。
[0115] 更优选的为苏云金芽孢杆菌RTI545菌株与硫线磷、丙线磷、噻唑硫磷、联氟砜、杀线威、三氟咪啶酰胺(DPX-Q8U80)、tioxazafen或其任何混合物的混合物。在本公开的组合物和方法中，组合物可包含杀线虫剂硫线磷。
[0116] 本发明的合适的植物生长调节剂包括以下：植物生长调节剂：D1) 抗生长素，比如氯贝酸、2,3,5-三碘苯甲酸；D2) 生长，比如4-CPA、2,4-D、2,4-DB、2,4-DEP、2,4-滴丙酸(dichlorprop)、2,4,5-涕丙酸(fenoprop)、IAA、IBA、萘乙酰胺、α-萘乙酸、1-萘酚、萘氧基乙酸、环烷酸钾(Potassium naphthenate)、环烷酸钠(sodium naphthenate)、2,4,5-T；D3) 细胞分裂素，比如2iP、苄基腺嘌呤、4-羟基苯乙醇、激动素(kinetin)、玉米素(zeatin)；D4) 落叶剂(defoliant)，比如氰氨化钙(calcium cyanamide)、噻节因(dimethipin)、草藻灭(endothal)、乙烯利(ethephon)、脱叶亚磷(merphos)、甲氧隆(metoxuron)、五氯酚(pentachlorophenol)、噻苯隆(thidiazuron)、脱叶磷(tribufos)；D5) 乙烯抑制剂，比如艾维激素(aviglycine)、1-甲基环丙烯；D6) 乙烯释放剂，比如ACC、乙烯硅(etacelasil)、乙烯丰(ethephon)、乙二肟(glyoxime)；D7) 杀配子剂(gametocide)，比如哒嗪酮酸(fenridazon)、马来酰肼；D8) 赤霉素类(gibberellins)，比如赤霉素(gibberellins)、赤霉酸(gibberellic acid)；D9) 生长抑制剂，比如脱落酸(abscisic acid)、嘧啶醇(ancymidol)、地乐胺(butralin)、甲萘威(Carbaryl)、三丁氯苄膦 (chlorphonium)、氯苯胺灵(chlorpropham)、调呋酸(dikegulac)、氟节胺(flumetralin)、增糖胺(fluoridamid)、杀木膦(fosamine)、增甘膦 (glyphosine)、异嘧醇(isopyrimol)、茉莉酸(jasmonic acid)、马来酰肼、缩节胺(mepiquat)、哌壮素(piproctanyl)、茉莉酮(prohydrojasmon)、苯胺灵(propham)、调节安(tiaojiean)、2,3,5-三碘苯甲酸；D10) 形态素类(morphactins)，比如氯芴羧酸(chlorfluren)、氯芴素(chlorflurenol)、二氯茀醇(dichlorflurenol)、芴丁酸(flurenol)；D11) 生长延缓剂，比如氯化矮壮素(chlormequat)、丁酰肼(daminozide)、调嘧醇(flurprimidol)、氟磺酰草胺(mefluidide)、巴克素
(paclobutrazol)、特效烯(tetcyclacis)、烯效唑(uniconazole)；D12) 生长刺激剂类，比如芸苔素内酯(brassinolide)、乙基芸苔素内酯(brassinolide-ethyl)、DCPTA、氯吡脲(forchlorfenuron)、恶霉灵(hymexazol)、补骨内酯(prosuler)、三十烷醇
(triacontanol)；D13) 未分类的植物生长调节剂类，比如菊乙胺酯(bachmedesh)、氟磺胺草(benzofluor)、特克草(buminafos)、香芹酮(carvone)、氯化胆碱、氰苯丁酰胺(ciobutide)、苯哒嗪酸(clofencet)、氰胺(cyanamide)、环丙酸酰胺(cyclanilide)、环己酰亚胺、环丙磺酰胺(cyprosulfamide)、丙酰芸苔素内酯(epocholeone)、吲熟酯(ethychlozate)、乙烯、呋苯硫脲(fuphenthiourea)、乙二醇缩糖醛(furalane)、增产肟(heptopargil)、霍洛硫(holosulf)、依纳素(inabenfide)、卡日塔赞(karetazan)、砷酸铅、灭速克(methasulfocarb)、调环酸(prohexadione)、比达农(pydanon)、杀雄啉(sintofen)、抑芽唑(triapenthenol)、抗倒酯(trinexapac)。
(paclobutrazol)、特效烯(tetcyclacis)、烯效唑(uniconazole)；D12) 生长刺激剂类，比如芸苔素内酯(brassinolide)、乙基芸苔素内酯(brassinolide-ethyl)、DCPTA、氯吡脲(forchlorfenuron)、恶霉灵(hymexazol)、补骨内酯(prosuler)、三十烷醇
(triacontanol)；D13) 未分类的植物生长调节剂类，比如菊乙胺酯(bachmedesh)、氟磺胺草(benzofluor)、特克草(buminafos)、香芹酮(carvone)、氯化胆碱、氰苯丁酰胺(ciobutide)、苯哒嗪酸(clofencet)、氰胺(cyanamide)、环丙酸酰胺(cyclanilide)、环己酰亚胺、环丙磺酰胺(cyprosulfamide)、丙酰芸苔素内酯(epocholeone)、吲熟酯(ethychlozate)、乙烯、呋苯硫脲(fuphenthiourea)、乙二醇缩糖醛(furalane)、增产肟(heptopargil)、霍洛硫(holosulf)、依纳素(inabenfide)、卡日塔赞(karetazan)、砷酸铅、灭速克(methasulfocarb)、调环酸(prohexadione)、比达农(pydanon)、杀雄啉(sintofen)、抑芽唑(triapenthenol)、抗倒酯(trinexapac)。
[0117] 本发明的化学制剂可以任何合适的常规形式存在，例如浓乳剂(EC)、浓混悬剂(SC)、悬浮乳剂(SE)、胶囊悬浮剂(CS)、水分散性粒剂(WG)、乳粒剂(EG)、油包水乳剂(EO)、水包油乳剂(EW)、微乳剂(ME)、油分散剂(OD)、油悬浮剂(OF)、油剂(OL)、可溶性液剂(SL)、可膨胀泡沫剂(EF)混悬剂、超低容量混悬剂(SU)、超低容量液剂(UL)、水分散性乳剂(DC)、可湿性粉剂(WP)、各种大小的粒剂(G)，其在实施方案中可与农业上可接受的辅剂组合在种植时沉积或为任何技术上可行的制剂。
[0118] 在实施方案中，组合物可包含0.5-99重量%的保藏为ATCC 编号PTA-122161的苏云金芽孢杆菌RTI545的生物纯培养物或不低于约1x1011 CFU/g的其具有所有其识别特征的突变体和农业上可接受的辅剂。在至少一个实施方案中，包含芽孢杆菌属物种的活性成分以农用组合物的0.5%-约95重量%之间范围内的总浓度存在，比如其中芽孢杆菌属物种以独立地选自从总组合物的1、2、3、4或5、7、8或10重量%的下限至10、15、20、25、40、50、60、70、80或90重量%的上限的量存在。在另一个实施方案中，农业上可接受的辅剂构成总组合物的约
1%-约99.5%，比如从1、2、3、4或5重量%的下限至10%、15%、20%、25%、40%、50%、60%、70%、80%、
90%或95%的上限。
1%-约99.5%，比如从1、2、3、4或5重量%的下限至10%、15%、20%、25%、40%、50%、60%、70%、80%、
90%或95%的上限。
[0119] 在实施方案中，辅剂可选自液体载体、固体载体、表面活性剂(表面活性剂)、粘度调节剂、增稠剂、流变添加剂、结构化剂、防腐剂、杀生物剂或生物抑制剂、防冻剂、结晶抑制剂、悬浮剂、染料、抗氧化剂、发泡剂、光吸收剂、混合辅剂、消泡剂、络合剂、中和或pH调节物质和缓冲剂、腐蚀抑制剂、芳香剂、润湿剂、吸收促进剂、微量营养素、增塑剂、助流剂、润滑剂和分散剂。
[0120] 载体可为液体或固体。可用于这种制剂的辅剂包括表面活性剂、粘度调节剂比如增稠剂、防腐剂、杀生物剂或生物抑制剂、防冻剂、结晶抑制剂、悬浮剂、染料、抗氧化剂、发泡剂、光吸收剂、混合辅剂、消泡剂、络合剂、中和或pH调节物质和缓冲剂、腐蚀抑制剂、芳香剂、润湿剂、吸收促进剂、微量营养素、增塑剂、助流剂、润滑剂和分散剂以及液体和固体肥料。
[0121] 在实施方案中，本发明的组合物可配制成浓混悬剂(SC)、可湿性粉剂(WP)或可湿性粒剂(WG)。其他制剂类型包括用于浆液处理的水分散性粉剂(WS)、油分散剂(OD)、用于广播施用的粒剂(GR)、胶囊悬浮剂(CS)、浓乳剂(EC)、水包乳剂(EW)、可溶性液剂(SL)、CS和SC (ZC)的混合制剂、SC和EW作为悬浮乳剂(SE)的混合制剂、可膨胀泡沫剂(EF)混悬剂或CS和EW (ZW)的混合制剂。在一些实施方案中，组合物可配制成撒粉或粉剂或粒剂，其可作为干燥制剂施用于植物、植物部分、种子或土壤(例如花生上的干燥种子包被或者用于掺入土壤中的各种大小的撒粉、粉剂或粒剂)。
[0122] 液体载体包括溶剂和共溶剂，包括水、石油醚、植物油、酸酐、乙酸戊酯、碳酸亚丁酯、环己烷、环己醇、二丙酮醇、1,2-二氯丙烷、二乙醇胺、二乙二醇、二乙二醇松香酸酯、二乙二醇丁醚、二乙二醇乙醚、二乙二醇甲醚、1,4-二噁烷、二丙二醇、二丙二醇甲醚、二丙二醇二苯甲酸酯、diproxitol、烷基吡咯烷酮、2-乙基己醇、碳酸亚乙酯、1,1,1-三氯乙烷、α-蒎烯、d-柠檬烯、乳酸乙酯、乙二醇、乙二醇丁醚、乙二醇甲醚、γ-丁内酯、甘油、甘油乙酸酯、甘油二乙酸酯、甘油三乙酸酯、十六烷、己二醇、乙酸异冰片酯、异辛烷、异佛尔酮、肉豆蔻酸异丙酯、乳酸、月桂胺、异丙叉丙酮、甲氧基丙醇、月桂酸甲酯、辛酸甲酯、油酸甲酯、二氯甲烷、正己烷、正辛胺、十八烷酸、乙酸辛胺、油酸、油胺、聚乙二醇(PEG)、丙酸、乳酸丙酯、碳酸亚丙酯、丙二醇、丙二醇甲醚、磷酸三乙酯、二缩三乙二醇、二甲苯磺酸、石蜡、矿物油、三氯乙烯、全氯乙烯、较高分子量的醇比如戊醇、四氢糠醇、己醇、辛醇、液体酰胺比如N,N-二甲基辛酰胺、N,N-二甲基癸酰胺、N-甲基-N-(2-丙基庚基)乙酰胺、N-甲基-N-(2-丙基庚基)甲酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮等。优选地，液体载体使得生物活性剂在组合物中保持基本不变，直至将其施用于防治场所之后。水通常为用于稀释浓缩制剂的载体选择。
[0123] 合适的固体载体包括例如碳水化合物(包括单或二碳水化合物，比如蔗糖、寡糖或多糖，比如麦芽糊精或果胶)、滑石、二氧化钛、叶蜡石粘土、绿坡缕石粘土、硅藻土、二氧化硅(二氧化硅)、石灰岩、膨润土、钙蒙脱石水溶性盐，比如乙酸、碳酸、氯化物、枸橼酸、磷酸或硫酸的钠、钾、镁、钙或铵盐(比如碳酸钙)、棉籽壳、小麦粉、大豆粉、浮石、木粉、磨碎的核桃壳、木质素和类似物质、酵母提取物、鱼粉或其混合物。值得注意的固体载体包括麦芽糊精、二氧化硅、碳酸钙或其任何混合物。
[0124] 表面活性剂(包括表面活性剂、分散剂和乳化剂)、粘度增强剂、溶剂和其它辅剂可独立地构成最终制剂的按重量计约0.1%-约25%之间。
[0125] 组合物可含有表面活性物质(表面活性剂、分散剂和乳化剂)，这些物质来自本领域已知的非常广泛种类的物质，并且还可市售得到。表面活性物质(本文通常描述为表面活性剂)可为阴离子的、阳离子的、非离子的或聚合的，并且其可用作表面活性剂、分散剂、乳化剂、润湿剂或悬浮剂或用于其他目的。
[0126] 表面活性剂属于不同类别，比如阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂、非离子表面活性剂、离子表面活性剂和两性表面活性剂。 根据本发明，表面活性剂可为任何表面活性剂或者两种或多种表面活性剂的组合，其可用于使生物活性成分分散于制剂或桶混物中用于施用。本发明的组合物中的表面活性剂的量可在约1-约15%或约1-约10%，优选地在约3-约8%，和更优选地在约5-约7% w/w的范围内。
[0127] 一些优选的表面活性剂的实例包括阳离子的、非离子的、阴离子的和/或两性表面活性剂。
[0128] 适合于本发明的非离子表面活性剂包括乙氧基化直链醇、乙氧基化烷基酚、烷基EO/PO共聚物、聚亚烷基二醇单丁醚乙氧基化脂肪酸/油、失水山梨醇月桂酸酯、聚山梨酯、失水山梨醇油酸酯、乙氧基化脂肪酸醇或烷基酚、链烷醇酰胺或烷基醇酰胺(比如二乙醇酰胺、月桂酸单异丙醇酰胺和乙氧基化肉豆蔻酰胺)、xyethylene脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪醇醚(比如烷基芳基聚乙二醇醚)、烷基酚/环氧烷加成产物比如壬基酚乙氧基化物、醇/环氧烷加成产物比如十三烷醇乙氧基化物。
[0129] 阴离子表面活性剂包括烷基-、烷基芳基-和芳基磺酸盐或其盐(比如月桂基肌氨酸盐、烷基苯磺酸盐、十二烷基苯磺酸盐、烷基萘磺酸盐比如二丁基萘磺酸盐或C14-16烯烃磺酸盐的钠、钾或钙盐)、烷基-、烷基芳基-和芳基硫酸盐或其盐(比如十三硫酸盐(tridedeth sulfate)、月桂基硫酸盐、癸基硫酸盐和二乙醇胺月桂基硫酸盐的钠、钾或钙盐)、蛋白水解产物、多元羧酸的衍生物(比如月桂基醚羧酸铵)、烯烃磺酸盐(比如α-烯烃磺酸钠)、肌氨酸盐(比如环己基棕榈酰基牛磺酸铵)、琥珀酸盐(比如N-十八烷基磺基琥珀酸二钠)、磷衍生物(比如磷酸酯及其等价盐)。
[0130] 阳离子表面活性剂包括烷基苄基三甲基氯化铵、月桂基硫酸铵和月桂胺氧化物。
[0131] 在一些实施方案中，表面活性剂可用作发泡剂，使得制剂可发泡，以在种植时施用于种子或犁沟内。可发泡组合物可任选地用水稀释，并在包含发泡介质比如多个玻璃珠的发泡室中与加压气体比如空气混合。
[0132] 合适的发泡剂可为非离子表面活性剂，包括链烷醇酰胺或烷基醇酰胺(比如椰油酰二乙醇胺、月桂酰单异丙醇胺和乙氧基化肉豆蔻酰胺)、xyethylene脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪醇醚(比如烷基芳基聚乙二醇醚)和碳氟化合物(比如乙氧基化多氟化醇)；阴离子表面活性剂，包括烷基-、烷基芳基-和芳基磺酸盐(比如月桂基肌氨酸钠和比如烷基苯磺酸钠)、烷基-、烷基芳基-和芳基硫酸盐、蛋白水解产物、多元羧酸的衍生物(比如月桂基醚羧酸铵)、烯烃磺酸盐(比如α-烯烃磺酸钠)、肌氨酸盐(比如环己基棕榈酰基牛磺酸铵)、琥珀酸盐(比如N-十八烷基磺基琥珀酸二钠)、磷衍生物(比如磷酸酯及其等价盐)；阳离子表面活性剂，包括烷基苄基三甲基氯化铵；和两性表面活性剂，包括甜菜碱。特别优选的发泡剂包括十二烷基苯磺酸钠(例如Bio-Soft® D-40)、C14-16烯烃磺酸钠(例如Bioterge® AS-40)、月® ® ® ®桂胺氧化物(例如Ammonyx DO, Ammonyx LO)、月桂基硫酸铵(例如Steol )、钠(Cedepal TD-407)和烷基硫酸盐(例如Polystep® B-25)。制剂中发泡剂的总浓度取决于所用的发泡剂，并且可占浓缩的可发泡制剂的约0.1%-约50%之间，优选地在约0.3%-约30%之间，更优选地在约5%-25%之间和甚至更优选地在约17%-约23%之间。
[0133] 值得注意的实施方案包括其中在约45分钟或更长时间之后由制剂产生的泡沫体积减少25%(或更少)的那些实施方案。其他表面活性物质包括肥皂比如硬脂酸钠、磺基琥珀酸盐的二烷基酯比如二(2-乙基己基)磺基琥珀酸钠、山梨醇酯比如山梨醇油酸酯、季胺比如月桂基三甲基氯化铵、脂肪酸的聚乙二醇酯比如聚乙二醇硬脂酸酯、环氧乙烷和环氧丙烷的嵌段共聚物及单-和二-烷基磷酸酯的盐。
[0134] 同样合适的为聚硅氧烷表面活性剂(尤其是其可例如作为Silwet L-77®市售可得到的聚烷基氧化物改性的七甲基三硅氧烷)以及全氟化表面活性剂。
[0135] 其中，一些甚至更具体类型的优选的表面活性剂包括非离子直链或支链的醇乙氧基化物表面活性剂、阴离子磷酸酯表面活性剂(有时称为“磷酸酯”表面活性剂)和阳离子乙氧基化牛脂胺表面活性剂。
[0136] 值得注意的表面活性剂(分散剂)包括至少一种烷基烷基多糖苷，优选地包含C8-C14烷基。BASF公司的Agnique®产品(Cognis)具有代表性。在一个实施方案中，烷基d-吡喃葡糖苷表面活性剂包括C8-C10烷基d-吡喃葡萄糖苷的混合物，比如Agnique® PG8105-G。在另一个实施方案中，烷基d-吡喃葡萄糖苷表面活性剂包括C9-C11烷基d-吡喃葡萄糖苷的混合®物。优选的产品为Agnique PG9116，其为C9-C11烷基d-吡喃葡萄糖苷的混合物，其聚合度为约1.6和亲水-亲油平衡值(HLB)为约13.1。
[0137] 磷酸酯表面活性剂(分散剂)可包括醇、乙氧基化醇或乙氧基化酚的磷酸酯。其可以游离酸形式存在或者中和为钠、钾或铵盐。Ashland公司的Dextrol®产品具有代表性，比®如Dextrol OC-180。磷酸酯优选地选自壬基酚磷酸酯和十三烷醇乙氧基化磷酸酯钾盐。
[0138] 在另一方面，组合物可含有增稠剂、粘度调节剂、流变添加剂或结构化剂，其稳定制剂比如浓混悬剂或油分散剂以防止沉降或沉积。合适的增稠剂为大米、淀粉、阿拉伯树胶、黄蓍胶、瓜尔豆胶、英国树胶、淀粉醚和淀粉酯、树胶脂、半乳甘露聚糖、硅酸铝镁、黄原胶、角叉菜胶、纤维素衍生物、甲基纤维素、羧甲基纤维素、藻酸盐及其组合。其他已知的市售产品可包括Lattice NTC 50、Lattice NTC 60、美多秀、粘土和维格姆二氧化硅。
[0140] 合适的防腐剂包括(但不限于)C12-C15烷基苯甲酸酯、对羟基苯甲酸烷基酯、芦荟提取物、抗坏血酸、苯扎氯铵、苯甲酸，C9-C15醇的苯甲酸酯、丁羟甲苯、丁基羟基茴香醚、叔丁基氢醌、蓖麻油、鲸蜡醇、氯甲酚、枸橼酸、可可脂、椰子油、双咪唑烷基脲、己二酸二异丙酯、二甲基聚硅氧烷、DMDM乙内酰脲、乙醇、乙二胺四乙酸、脂肪酸、脂肪醇、十六烷醇、羟基苯甲酸酯类、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯、异壬酸异壬酯、荷荷巴油、羊毛脂油、矿物油、油酸、橄榄油、尼泊金类、聚醚类、聚氧丙烯丁基醚、聚氧丙烯鲸蜡基醚、山梨酸钾、没食子酸丙酯、硅油、丙酸钠、苯甲酸钠、亚硫酸氢钠、山梨酸、硬脂酸、二氧化硫、维生素E、维生素E乙酸酯及衍生物、酯、盐及其混合物。优选的防腐剂包括邻苯基苯酚钠、5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮和1,2-苯并异噻唑啉-3-酮。
[0141] 消泡剂比如Xiameter AFE-100、Dow Corning AFs、Dow Corning 1520、1530或1540也可用于本发明要求的制剂中。
[0142] 在实施方案中，组合物可为包含水和至少一种表面活性剂和一种或多种另外的辅剂的液体浓混悬剂。在实施方案中，一种或多种辅剂可选自增稠剂、粘度调节剂、结构化剂或流变添加剂、溶剂、防腐剂、防冻剂和消泡剂。通常，浓混悬剂在传递组合物之前用水进一步稀释。在实施方案中，液体组合物可为浓混悬剂，其包含0.5-20重量%的苏云金芽孢杆菌RTI545的生物纯培养物或其具有所有其识别特征的突变体、1-5重量%的一种或多种表面活性剂及至少一种增稠剂、溶剂、防腐剂、防冻剂或消泡剂，每种独立地占组合物的多达约1重量%。
[0143] 在其他实施方案中，组合物可为液体油分散剂，其包含分散于油比如植物油中的固体活性成分和至少一种表面活性剂及一种或多种另外的辅剂。在实施方案中，一种或多种辅剂可选自增稠剂、粘度调节剂、结构化剂或流变添加剂、溶剂、防腐剂、防冻剂、消泡剂等。通常，油分散剂在传递组合物之前用水进一步稀释。在实施方案中，液体组合物可为油分散剂，其包含0.5-20重量%的苏云金芽孢杆菌RTI545的生物纯培养物或其具有所有其识别特征的突变体、1-10重量%的一种或多种表面活性剂及至少一种增稠剂、粘度调节剂、结构化剂、流变添加剂、溶剂、防腐剂、防冻剂或消泡剂，每种独立地占组合物的多达约5重量%。
[0144] 在实施方案中，组合物可以撒粉、粉剂、粒剂、干燥可湿性粉剂、可涂抹的粒剂或干燥可湿性粒剂的形式存在，并且苏云金芽孢杆菌RTI545的生物纯培养物或其具有所有其识别特征的突变体可以约1.0x108 CFU/g-约5x1013 CFU/g的量存在。在实施方案中，组合物可包含选自以下的固体载体：单糖或二糖、寡糖或多糖、滑石、二氧化钛、叶蜡石粘土、绿坡缕石粘土、硅藻土、二氧化硅、石灰岩、膨润土、钙蒙脱石、乙酸盐、碳酸盐、氯化物、枸橼酸盐、磷酸盐或硫酸盐的钠、钾、镁、钙或铵盐、棉籽壳、小麦粉、大豆粉、浮石、木粉、磨碎的坚果(比如花生或核桃)壳、木质素、酵母提取物、鱼粉或其混合物。
[0145] 在实施方案中，组合物包含5-40%的不低于约1x1011 CFU/g的生物纯培养物及麦芽糊精、二氧化硅、碳酸钙或其任何混合物。在实施方案中，组合物包含5-15%的麦芽糊精。
[0146] 在实施方案中，组合物可包含(按重量计%)5-40%的不低于约1x1011 CFU/g的苏云金芽孢杆菌RTI545的生物纯培养物或其具有所有其识别特征的突变体、5-15%麦芽糊精、35-45%碳酸钙和5-15%二氧化硅。在实施方案中，组合物可为可湿性粉剂制剂。
[0147] 在实施方案中，组合物可为可湿性粉剂制剂，其包含(按重量计%)约40%的不低于约1x1011 CFU/g的苏云金芽孢杆菌RTI545的生物纯培养物或其具有所有其识别特征的突变体、10%麦芽糊精、40%碳酸钙和10%二氧化硅。
[0148] 在实施方案中，组合物可用于植物种子处理或犁沟内施用，以赋予保护免受或防治植物真菌病原体感染。对于种子处理，组合物的溶液或混悬液可使用标准种子处理程序施用于种子。组合物可施用于未经处理的种子或已用至少一种本文所述的另外的作物保护剂处理的种子。或者，组合物还可与另外的作物保护剂混合用于种子处理或犁沟内施用。在一些实施方案中，组合物可施用于待保护的植物的枝叶，任选地与另外的作物保护剂混合。
[0149] 在组合物和方法的一些实施方案中，组合物进一步包含以适合益于植物生长和/或赋予植物保护免受植物害虫的量存在的另外的农用试剂中的一种或组合，比如本文所述的杀虫剂、杀真菌剂、杀线虫剂、杀细菌剂、除草剂、植物提取物、植物生长调节剂或肥料。另外的农用试剂可为微生物试剂、生物试剂或化学试剂。
[0150] 在组合物和方法的一些实施方案中，可将组合物配制成与液体肥料相容。
[0151] 与液体肥料相容的制剂可包含水合硅酸铝镁和至少一种分散剂。在整个说明书和权利要求中使用的术语“在与液体肥料相容的制剂中”意指制剂能够在水溶液中溶出或分散或乳化，以使得能够以液体制剂与肥料混合以传递至植物。
[0152] 在值得注意的实施方案中，与液体肥料相容的制剂可包含联苯菊酯，比如组合物包含联苯菊酯、水合硅酸铝镁和至少一种选自蔗糖酯、木质素磺酸盐、烷基多糖苷、萘磺酸甲醛缩合物和磷酸酯的分散剂。基于组合物中所有组分的总重量，联苯菊酯可优选地以按重量计1.0%-按重量计35%，更特别地按重量计15%-按重量计25%的浓度存在。联苯菊酯杀虫剂组合物可以0.1 g/ml-0.2 g/ml范围内的浓度存在于液体制剂中。联苯菊酯杀虫剂可以0.17 g/ml的浓度存在于液体制剂中。基于组合物中所有组分的总重量，一种或多种分散剂可优选地以按重量计约0.02%-按重量计约20%的总浓度存在。在一些实施方案中，水合硅酸铝镁可选自蒙脱石和绿坡缕石。在一些实施方案中，磷酸酯可选自壬基酚磷酸酯和十三烷醇乙氧基化磷酸酯钾盐。
[0153] 基于组合物中所有组分的总重量，一种或多种分散剂可优选地以按重量计约0.02%-按重量计约20%的总浓度存在。
[0154] 在一些实施方案中，水合硅酸铝镁可选自蒙脱石和绿坡缕石。
[0155] 在一些实施方案中，磷酸酯可选自壬基酚磷酸酯和十三烷醇乙氧基化磷酸酯钾盐。
[0156] 其他实施方案可进一步包括防冻剂、消泡剂和杀生物剂中的至少一种。
[0157] 在另一方面，组合物可通过以下步骤的方法制备：将有效量的生物活性成分与本文所述的载体和辅剂组合。配制的组合物可例如通过将生物活性剂与制剂组分混合以获得以细分的固体、粒剂或分散体的形式存在的组合物来制备。活性成分还可与其他组分比如细分的固体、矿物油、植物或动物来源的油、植物或动物来源的改性油、有机溶剂、水、表面活性物质或其组合一起配制。
[0158] 在一些实施方案中，制剂的组分可干燥混合，或者固体和液体组分可在均化器或其他合适的混合容器中掺混在一起。通过均质化简单混合成分可优于任何形式的磨碎。在其他实施方案中，混合物可进一步经历研磨过程，比如干磨或湿磨，直至获得约1-约250微米范围内的合适粒度。组合物的粒度可小于250、小于100或优选地小于50微米。在一个优选的实施方案中，将混合物进行均质化或研磨直至90%的粒度(D90)小于约50微米。
[0159] 一个实施方案涉及一种组合物，其包含：i) 保藏为ATCC 编号PTA-122161的苏云金芽孢杆菌RTI545或其具有所有其识别特征的突变体；和ii) 至少一种选自用于SC制剂的辅剂、用于WP制剂的辅剂和用于WG制剂的辅剂的制剂组分。
[0160] 在另一个实施方案中，组合物以SC的形式存在，比如包含水和至少一种表面活性剂及一种或多种选自增稠剂、溶剂、防腐剂、防冻剂、pH调节剂和消泡剂的另外的辅剂的SC。
[0161] 在一个实施方案中，SC包含1-20重量%的保藏为ATCC 编号PTA-122161的苏云金芽孢杆菌RTI545或其具有所有其识别特征的突变体、1-5重量%的一种或多种表面活性剂和任选地至少一种增稠剂、溶剂、防腐剂、防冻剂或消泡剂及水。任选的增稠剂、溶剂、防腐剂、防冻剂或消泡剂可各自独立地占SC制剂的多达约1重量%。SC包含所有其他组分补足量的水，以使总组合物达到100重量% (qs)。
[0162] 组合物可以固体形式存在，例如撒粉、粉剂、粒剂、WP或WG制剂。这些制剂包含至少一种如上所述的固体载体。在实施方案中，WP或WG制剂可包含约1-约50重量%，比如1-10、5-10、或5-50、或7-50、或10-50重量%的保藏为ATCC编号PTA-122161的苏云金芽孢杆菌RTI545或其具有所有其识别特征的突变体和至少一种选自麦芽糊精、碳酸钙和二氧化硅的固体载体。可湿性粒剂制剂类似于可湿性粉剂制剂，除了粉剂例如通过任选地用另外的分散剂使粉剂在水中稀释，并通过聚结、喷雾干燥或挤出形成颗粒来形成为较大的颗粒外。
[0163] 在一个实施方案中，组合物可包含2-20重量%的保藏为ATCC编号PTA-122161的苏云金芽孢杆菌RTI545或其具有所有其识别特征的突变体、约80-约90重量%的麦芽糊精和约0.5-约2重量%的二氧化硅。
[0164] 在另一个实施方案中，组合物可包含5-60 (比如40%)的保藏为ATCC编号PTA-122161的苏云金芽孢杆菌RTI545或其具有所有其识别特征的突变体、约30-约50 (比如
40%)重量%的麦芽糊精、约10-20 (比如16%)重量%的碳酸钙和约0.5-约5 (比如4%)重量%的二氧化硅。
40%)重量%的麦芽糊精、约10-20 (比如16%)重量%的碳酸钙和约0.5-约5 (比如4%)重量%的二氧化硅。
[0165] 在另一个实施方案中，组合物包含可湿性粉剂或可湿性粒剂制剂，其包含(按重量计%)：5-50% (比如40%)的保藏为ATCC编号PTA-122161的苏云金芽孢杆菌RTI545或其具有所有其识别特征的突变体；
5-15% (比如10%)的麦芽糊精；
35-45% (比如40%)的碳酸钙；和
5-15% (比如10%)的二氧化硅。
5-15% (比如10%)的麦芽糊精；
35-45% (比如40%)的碳酸钙；和
5-15% (比如10%)的二氧化硅。
[0166] 组合物可用于植物种子处理或犁沟内施用。对于种子处理，组合物的溶液、浆液、糊状物、凝胶或润湿的固体可使用标准种子处理程序施用于种子。组合物可施用于未经处理的种子或已用至少一种本文所述的另外的作物保护剂处理的种子。或者，组合物还可与另外的作物保护剂混合用于种子处理或犁沟内施用。
[0167] 在犁沟内，施用可包括在种植时处理犁沟内(优选地接近作物种子)的土壤，并将制剂掺入土壤中。在犁沟内，施用可包括液体或固体制剂。在一些实施方案中，犁沟内施用包括将组合物以泡沫施加。
[0168] 在实施方案中，配制的组合物可以在使用之前稀释的浓缩液的形式存在，尽管也可制备即用型制剂。尽管市售产品优选地配制成浓缩液，但最终用户通常使用稀释制剂施用于土壤或植物。稀释液可例如用水、液体肥料、微量营养素、生物体、油或溶剂制备。
[0169] 在实施方案中，配制的组合物可另外包含添加剂，其包括植物或动物来源的油、矿物油、这种油的烷基酯或这种油和油衍生物的混合物。基于喷雾混合物，本发明的组合物中的油添加剂的量通常为0.01-10%。例如，在制备喷雾混合物之后，可将油添加剂以期望的浓度加入喷雾桶中。在实施方案中，油添加剂可包含矿物油或植物来源的油，例如大豆油、菜籽油、橄榄油或葵花油、乳化的植物油、植物来源的油的烷基酯例如甲基衍生物或动物来源的油比如鱼油或牛脂。实施例
[0170] 包括以下实施例以为本领域的普通技术人员实践本公开的主题的代表性实施方案提供指导。鉴于本发明和本领域的一般技术水平，技术人员可意识到以下实施例意欲仅为示例性的，并且可采用许多变化、修改和更改而不背离本公开的主题的范围。
[0171] 实施例1细菌分离株苏云金芽孢杆菌RTI545通过序列分析的鉴定
植物相关的细菌菌株(本文称为RTI545)分离自北卡罗来纳州高羊茅草周围的根际土壤。将菌株RTI545的基因组进行测序，并使用BLAST将RTI545菌株的16S rRNA (SEQ ID NO.: 1)和rpoB (SEQ ID NO: 2)基因的序列与NCBI和RDP数据库中的其他已知细菌菌株的序列进行比较，这将菌株RTI545置于蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)/苏云金芽孢杆菌(thuringiensis)/炭疽芽孢杆菌(anthracis)分支群内。使用Bootstrap一致树(重复1000次)对rpoB基因实施RTI545菌株和相关芽孢杆菌属物种的进一步系统发育分析。rpoB基因的一致树如图2所示。从图2可以看出，RTI545菌株在蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)/苏云金芽孢杆菌(thuringiensis)/炭疽芽孢杆菌(anthracis)分支群中形成单独的分支。
rpoB基因在DNA水平上的序列差异表明RTI545为一种属于蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)/苏云金芽孢杆菌(thuringiensis)/炭疽芽孢杆菌(anthracis)分支群的新的菌株。另外的序列分析显示RTI545菌株缺乏通常在苏云金芽孢杆菌菌株中发现的晶体蛋白的基因(cry基因)。
植物相关的细菌菌株(本文称为RTI545)分离自北卡罗来纳州高羊茅草周围的根际土壤。将菌株RTI545的基因组进行测序，并使用BLAST将RTI545菌株的16S rRNA (SEQ ID NO.: 1)和rpoB (SEQ ID NO: 2)基因的序列与NCBI和RDP数据库中的其他已知细菌菌株的序列进行比较，这将菌株RTI545置于蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)/苏云金芽孢杆菌(thuringiensis)/炭疽芽孢杆菌(anthracis)分支群内。使用Bootstrap一致树(重复1000次)对rpoB基因实施RTI545菌株和相关芽孢杆菌属物种的进一步系统发育分析。rpoB基因的一致树如图2所示。从图2可以看出，RTI545菌株在蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)/苏云金芽孢杆菌(thuringiensis)/炭疽芽孢杆菌(anthracis)分支群中形成单独的分支。
rpoB基因在DNA水平上的序列差异表明RTI545为一种属于蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)/苏云金芽孢杆菌(thuringiensis)/炭疽芽孢杆菌(anthracis)分支群的新的菌株。另外的序列分析显示RTI545菌株缺乏通常在苏云金芽孢杆菌菌株中发现的晶体蛋白的基因(cry基因)。
[0172] 另外，实施全基因组序列分析以使用基于MUMmer和BLASTn的平均核苷酸一致性(ANI)计算(Richter M, & Rosselló-Móra R (2009) Shifting the genomic gold standard for the prokaryotic species definition. Proc Natl Acad Sci USA 106(45):19126-31)和UNIPEPT分析(Mesuere, B., Debyser, G., Aerts, M., Devreese, B., Vandamme, P. and Dawyndt, P. (2015), The Unipept metaproteomics analysis pipeline. Proteomics, 15: 1437-1442. doi:10.1002/pmic.201400361)两者来比较RTI545菌株与密切相关的芽孢杆菌属物种的菌株，以确认其系统发育分类。基于MUMmer和BLASTn的ANI计算的结果如以下表I所示。ANI和UNIPEPT两者的分析(数据未显示)均显示RTI545与发表的菌株序列之间存在显著程度的序列相似性，表明为苏云金芽孢杆菌和蜡状芽孢杆菌(B. cereus)两者。与所识别类型的菌株具有最高序列相似性为公认类型的菌株苏云金芽孢杆菌Berliner ATCC10792。同样，全基因组序列与先前发表的那些的差异表明，RTI545为一种属于蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)/苏云金芽孢杆菌(thuringiensis)/炭疽芽孢杆菌(anthracis)分支群的新的苏云金芽孢杆菌菌株。
[0173] 表I. 比较菌株RTI545与相关的芽孢杆菌属物种菌株的序列分析(基于MUMmer和BLASTn两者的ANI计算)。
[0174] 注释：*表示苏云金芽孢杆菌和蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)两者的所识别类型菌株。
[0175] RTI545的菌株于2015年5月12日在美国弗吉尼亚州马纳萨斯的美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection) (ATCC)根据国际承认用于专利程序的微生物保存布达佩斯条约(Budapest Treaty on the International Recognition of the Deposit of Microorganisms for the Purposes of Patent Procedure)的条款保存，并且具有专利登记号(Accession No.)PTA-122161。
[0176] RTI545基因组16S rDNA 1 (SEQ ID NO: 1)AGAAAGGAGGTGATCCAGCCGCACCTTCCGATACGGCTACCTTGTTACGACTTCACCCCAATCATCTGTCCCACCTTAGGCGGCTGGCTCCAAAAAGGTTACCCCACCGACTTCGGGTGTTACAAACTCTCGTGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGGCATGCTGATCCGCGATTACTAGCGATTCCAGCTTCATGTAGGCGAGTTGCAGCCTACAATCCGAACTGAGAACGGTTTTATGAGATTAGCTCCACCTCGCGGTCTTGCAGCTCTTTGTACCGTCCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCAGGTCATAAGGGGCATGATGATTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCAGTCACCTTAGAGTGCCCAACTTAATGATGGCAACTAAGATCAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAACCATGCACCACCTGTCACTCTGCTCCCGAAGGAGAAGCCCTATCTCTAGGGTTTTCAGAGGATGTCAAGACCTGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCTTCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCAGCCTTGCGGCCGTACTCCCCAGGCGGAGTGCTTAATGCGTTAACTTCAGCACTAAAGGGCGGAAACCCTCTAACACTTAGCACTCATCGTTTACGGCGTGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTTGCTCCCCACGCTTTCGCGCCTCAGTGTCAGTTACAGACCAGAAAGTCGCCTTCGCCACTGGTGTTCCTCCATATCTCTACGCATTTCACCGCTACACATGGAATTCCACTTTCCTCTTCTGCACTCAAGTCTCCCAGTTTCCAATGACCCTCCACGGTTGAGCCGTGGGCTTTCACATCAGACTTAAGAAACCACCTGCGCGCGCTTTACGCCCAATAATTCCGGATAACGCTTGCCACCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTTAGCCGTGGCTTTCTGGTTAGGTACCGTCAAGGTGCCAGCTTATTCAACTAGCACTTGTTCTTCCCTAACAACAGAGTTTTACGACCCGAAAGCCTTCATCACTCACGCGGCGTTGCTCCGTCAGACTTTCGTCCATTGCGGAAGATTCCCTACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTCTGGGCCGTGTCTCAGTCCCAGTGTGGCCGATCACCCTCTCAGGTCGGCTACGCATCGTTGCCTTGGTGAGCCGTTACCTCACCAACTAGCTAATGCGACGCGGGTCCATCCATAAGTGACAGCCGAAGCCGCCTTTCAATTTCGAACCATGCAGTTCAAAATGTTATCCGGTATTAGCCCCGGTTTCCCGGAGTTATCCCAGTCTTATGGGCAGGTTACCCACGTGTTACTCACCCGTCCGCCGCTAACTTCTTGAGAGCAAGCTCTCAATCCATTCGCTCGACTTGCATGTATTAGGCACGCCGCCAGCGTTCATCCTGAGCCAGGATCAAAC
RTI545 rpoB基因(SEQ ID NO: 2)
ttgacaggtcaactagttcaatacggacgccaccgccaacgaagaagttatgcccgtattagtgaagtattagagttaccaaatcttatcgaaattcaaacctcttcttatcagtggtttcttgatgagggtttgcgagaaatgttccaagacatttctccgattgaagactttacgggaaatctatcgcttgaatttatcgactacagcttaggtgaacctaaatactctgtagacgaatgcaaagagcgtgatgtgacgtatgcagcaccacttcgtgtaaaagtgcgtctaatcaacaaggaaactggtgaagtaaaagaacaagatgtgttcatgggagatttcccactcatgacagagactggaacattcgtaattaacggtgcagaacgtgttatcgtttcccagttagttcgctctccaagcgtatactatagtggcaaagtggataaaaacggaaaacgtggttttactgctactgtaattccaaaccgcggagcttggttagagtatgagacagatgctaaggatgttgtatatgtgcgtattgaccgtacgcgtaaacttcctgtaactgttttgttacgcgcattagggtttggctctgatcaagaaatcaccgagcttttaggtgataacgaatacttaagcaacacattagaaaaagacaacacagatagtacagaaaaagcattgcttgaaatttatgagcgtctacgtcctggtgaaccaccaacagtagaaaatgctaagagcttacttgtgtctcgtttcttcgatccaaagcgctacgatttagcaaatgtaggtcgctataagatcaacaagaagttacacattaaaaacagattgtttaatcaacgtttagctgaaacattagtggatccagaaactggtgaaattttagcggcagaaggaacaatcttagatcgtcgtacacttgatcgcattttaccttacttagagaaaaacattggattcaaaacagcgaaaccaatgggtggagtggtagaaggcgatgttgagctgcaatctattaagatttatgctcctgagtcggaaggcgaacgtgtaattaatgtaattggtaatgcaaatattactcgtgatgtgaaacacatcacaccaggtgatatccttgcttctatcagttacttcttcaacctactatacaaagtaggggatacagatgatattgaccatttaggaaaccgtcgtctgcgttctgttggagaactattacaaaatcaattccgtatcggtctttctcgtatggaacgtgttgttcgtgagagaatgtcgatccaagatacaaatgcaattacaccacaggcgctaattaatattcgtcctgttattgcatctattaaagagttcttcggaagttctcagttatctcagttcatggaccaaacaaatccattagcagagttaactcacaaacgaagactatctgcattaggacctggtggtttaacgcgtgagcgcgcaggctttgaagtacgtgacgttcattactcccactacggtcgtatgtgtccgattgaaacaccagagggaccaaacatcggtttgattaactcattatcttcgttcgcgaaagtaaatgagtttggtttcattgaaacaccatatcgtcgtgttgacccagaaactggtcttgtaacagggcatgttgattatttaacagcagatgaagaagataactatgttgtagcccaagcgaatatgaaattatctgatgaaggtgaattcctaagtgaagatatcgtagctcgtttccgtggtgaaaacattgtcacaaatagagaacgcatcgactacatggatgtatctccaaaacaagtagtgtcggcagcgacagcttgtattccgttcttagaaaacgatgactctaaccgcgcacttatgggagcgaacatgcaacgtcaggcggttccgttaatgaatccggaatctccgattgtaggtacaggtatggagtacgtatcagcaaaagactcaggtgctgcagtaatctgtaaacatcctggtgttgttgagcgcgtagaagcacgtgaagtttgggtacgtcgctatgtagaagttgacggtcaaacagtaaaaggcgacttagatcgctacaaaatgcaaaaattcattcgttctaaccaaggaacttgttacaaccaacgtccaatcgtaagtgttggaaatgaagttgtaaaaggtgaaatccttgcggatggtccttctatggaattaggtgaactagcacttggacgtaacgtgcttgttggcttcatgacttgggacggttataactacgaggatgcgatcatcatgagtgagcgccttgtaaaagatgatgtgtacacttctattcatattgaagaatatgaatcagaagctcgtgatacgaagcttggaccagaagaaattacacgtgacattccaaatgttggggaagacgcattacgtaaccttgacgagcgcggtatcattcgcgttggtgctgaagtaaaagatggagatttacttgttggtaaagtaacacctaaaggtgtaacagaattaacagctgaagaacgtctattacatgctatctttggagaaaaagcgcgtgaagtacgtgatacatcactacgtgtaccacacggtggtggcggtattatcttagacgtaaaagtattcaaccgtgaagatggcgatgaattgccaccaggcgtgaatcaacttgtacgtgcatatatcgttcaaaaacgtaaaatttctgaaggtgacaagatggccggacgtcacggtaacaaaggtgttatttctcgtattttaccagaagaagatatgccttacttaccagacggtacgccaatcgatatcatgttaaacccattaggggtaccatctcgtatgaatatcggtcaggtattagagcttcatcttggtatggcagcaagatacctgggcattcacattgcaacaccagtattcgatggtgctcgtgaggaagatgtttggggcacaattgaagaagctggtatggcaaatgacgcgaaaacaatcctgtatgacggacgtactggtgaaccattcgataaccgcgtatctgttggtgtcatgtatatgatcaaacttgcgcacatggttgacgataaacttcatgctcgttctactggaccatactcacttgtaacgcagcaacctcttggaggtaaagctcagttcggtggacagcgtttcggtgagatggaggtttgggcacttgaagcttacggtgctgcttatactcttcaagaaatcttaacagtgaagtctgatgatgttgttggacgtgttaagacttatgaagcaattgttaaaggcgaaaatgttccagaaccaggcgttcctgaatcattcaaagtattgattaaagagctgcaaagtttaggtatggacgttaaaatgatgtctagcgacgatacagaaattgaaatgcgtgatacagaagatgacgatgatcatcaatcagcagataaattgaatgtcgaagttgagacaactaaggaataa
实施例2
苏云金芽孢杆菌RTI 545分离株的抗微生物特性
以平板测定测量菌株RTI545对主要植物病原体的拮抗能力。通过在869琼脂平板上以
3-4 cm的距离并排生长细菌分离株和病原真菌来实施平板测定用于评估对植物真菌病原体的拮抗作用。将板在室温下温育并长达两周定期检查生长行为，比如生长抑制、生态位占据或无效。在筛选针对细菌病原体的拮抗特性的情况下，首先将病原体作为草坪铺展在869琼脂平板上。随后，将20 μl RTI545培养物的等分试样在平板上点样。将平板在室温下温育并长达两周定期检查已施用RTI545的位置周围的草坪中的抑制区域。拮抗活性的概述显示在以下表II中。
RTI545 rpoB基因(SEQ ID NO: 2)
ttgacaggtcaactagttcaatacggacgccaccgccaacgaagaagttatgcccgtattagtgaagtattagagttaccaaatcttatcgaaattcaaacctcttcttatcagtggtttcttgatgagggtttgcgagaaatgttccaagacatttctccgattgaagactttacgggaaatctatcgcttgaatttatcgactacagcttaggtgaacctaaatactctgtagacgaatgcaaagagcgtgatgtgacgtatgcagcaccacttcgtgtaaaagtgcgtctaatcaacaaggaaactggtgaagtaaaagaacaagatgtgttcatgggagatttcccactcatgacagagactggaacattcgtaattaacggtgcagaacgtgttatcgtttcccagttagttcgctctccaagcgtatactatagtggcaaagtggataaaaacggaaaacgtggttttactgctactgtaattccaaaccgcggagcttggttagagtatgagacagatgctaaggatgttgtatatgtgcgtattgaccgtacgcgtaaacttcctgtaactgttttgttacgcgcattagggtttggctctgatcaagaaatcaccgagcttttaggtgataacgaatacttaagcaacacattagaaaaagacaacacagatagtacagaaaaagcattgcttgaaatttatgagcgtctacgtcctggtgaaccaccaacagtagaaaatgctaagagcttacttgtgtctcgtttcttcgatccaaagcgctacgatttagcaaatgtaggtcgctataagatcaacaagaagttacacattaaaaacagattgtttaatcaacgtttagctgaaacattagtggatccagaaactggtgaaattttagcggcagaaggaacaatcttagatcgtcgtacacttgatcgcattttaccttacttagagaaaaacattggattcaaaacagcgaaaccaatgggtggagtggtagaaggcgatgttgagctgcaatctattaagatttatgctcctgagtcggaaggcgaacgtgtaattaatgtaattggtaatgcaaatattactcgtgatgtgaaacacatcacaccaggtgatatccttgcttctatcagttacttcttcaacctactatacaaagtaggggatacagatgatattgaccatttaggaaaccgtcgtctgcgttctgttggagaactattacaaaatcaattccgtatcggtctttctcgtatggaacgtgttgttcgtgagagaatgtcgatccaagatacaaatgcaattacaccacaggcgctaattaatattcgtcctgttattgcatctattaaagagttcttcggaagttctcagttatctcagttcatggaccaaacaaatccattagcagagttaactcacaaacgaagactatctgcattaggacctggtggtttaacgcgtgagcgcgcaggctttgaagtacgtgacgttcattactcccactacggtcgtatgtgtccgattgaaacaccagagggaccaaacatcggtttgattaactcattatcttcgttcgcgaaagtaaatgagtttggtttcattgaaacaccatatcgtcgtgttgacccagaaactggtcttgtaacagggcatgttgattatttaacagcagatgaagaagataactatgttgtagcccaagcgaatatgaaattatctgatgaaggtgaattcctaagtgaagatatcgtagctcgtttccgtggtgaaaacattgtcacaaatagagaacgcatcgactacatggatgtatctccaaaacaagtagtgtcggcagcgacagcttgtattccgttcttagaaaacgatgactctaaccgcgcacttatgggagcgaacatgcaacgtcaggcggttccgttaatgaatccggaatctccgattgtaggtacaggtatggagtacgtatcagcaaaagactcaggtgctgcagtaatctgtaaacatcctggtgttgttgagcgcgtagaagcacgtgaagtttgggtacgtcgctatgtagaagttgacggtcaaacagtaaaaggcgacttagatcgctacaaaatgcaaaaattcattcgttctaaccaaggaacttgttacaaccaacgtccaatcgtaagtgttggaaatgaagttgtaaaaggtgaaatccttgcggatggtccttctatggaattaggtgaactagcacttggacgtaacgtgcttgttggcttcatgacttgggacggttataactacgaggatgcgatcatcatgagtgagcgccttgtaaaagatgatgtgtacacttctattcatattgaagaatatgaatcagaagctcgtgatacgaagcttggaccagaagaaattacacgtgacattccaaatgttggggaagacgcattacgtaaccttgacgagcgcggtatcattcgcgttggtgctgaagtaaaagatggagatttacttgttggtaaagtaacacctaaaggtgtaacagaattaacagctgaagaacgtctattacatgctatctttggagaaaaagcgcgtgaagtacgtgatacatcactacgtgtaccacacggtggtggcggtattatcttagacgtaaaagtattcaaccgtgaagatggcgatgaattgccaccaggcgtgaatcaacttgtacgtgcatatatcgttcaaaaacgtaaaatttctgaaggtgacaagatggccggacgtcacggtaacaaaggtgttatttctcgtattttaccagaagaagatatgccttacttaccagacggtacgccaatcgatatcatgttaaacccattaggggtaccatctcgtatgaatatcggtcaggtattagagcttcatcttggtatggcagcaagatacctgggcattcacattgcaacaccagtattcgatggtgctcgtgaggaagatgtttggggcacaattgaagaagctggtatggcaaatgacgcgaaaacaatcctgtatgacggacgtactggtgaaccattcgataaccgcgtatctgttggtgtcatgtatatgatcaaacttgcgcacatggttgacgataaacttcatgctcgttctactggaccatactcacttgtaacgcagcaacctcttggaggtaaagctcagttcggtggacagcgtttcggtgagatggaggtttgggcacttgaagcttacggtgctgcttatactcttcaagaaatcttaacagtgaagtctgatgatgttgttggacgtgttaagacttatgaagcaattgttaaaggcgaaaatgttccagaaccaggcgttcctgaatcattcaaagtattgattaaagagctgcaaagtttaggtatggacgttaaaatgatgtctagcgacgatacagaaattgaaatgcgtgatacagaagatgacgatgatcatcaatcagcagataaattgaatgtcgaagttgagacaactaaggaataa
实施例2
苏云金芽孢杆菌RTI 545分离株的抗微生物特性
以平板测定测量菌株RTI545对主要植物病原体的拮抗能力。通过在869琼脂平板上以
3-4 cm的距离并排生长细菌分离株和病原真菌来实施平板测定用于评估对植物真菌病原体的拮抗作用。将板在室温下温育并长达两周定期检查生长行为，比如生长抑制、生态位占据或无效。在筛选针对细菌病原体的拮抗特性的情况下，首先将病原体作为草坪铺展在869琼脂平板上。随后，将20 μl RTI545培养物的等分试样在平板上点样。将平板在室温下温育并长达两周定期检查已施用RTI545的位置周围的草坪中的抑制区域。拮抗活性的概述显示在以下表II中。
[0177] 表II. 苏云金芽孢杆菌RTI 545分离株对主要植物病原体的拮抗特性+++活性非常强，++活性强，+活性，+-活性弱，-没有观察到活性。
[0178] 实施例3苏云金芽孢杆菌RTI 545分离株的表型特征
除拮抗特性之外，还测量了苏云金芽孢杆菌RTI545菌株的各种表型特征，并且数据如以下表III所示。根据本文中以下表III所述的程序实施测定。
除拮抗特性之外，还测量了苏云金芽孢杆菌RTI545菌株的各种表型特征，并且数据如以下表III所示。根据本文中以下表III所述的程序实施测定。
[0179] 表III. 表型测定：植物激素产生、乙偶姻和吲哚乙酸(IAA)及RTI545分离株的养分循环。
[0180] +++非常强，++强，+一些，+-弱，-没有观察到。
[0181] 酸和乙偶姻测试。将富含869培养基中的20 μl起动培养物转移至1 ml甲基红-Voges Proskauer培养基(Sigma Aldrich 39484)。将培养物在30℃和200 rpm下温育2天。转移0.5 ml培养物并加入50 μl 0.2 g/l甲基红。红色表示酸产生。将剩余的0.5 ml培养物与0.3 ml 5% α-萘酚(Sigma Aldrich N1000)混合，随后加入0.1 ml 40% KOH。温育30分钟之后解释样品。出现红色表明乙偶姻产生。对于酸和乙偶姻两者的测试，未接种的培养基用作阴性对照(Sokol et al., 1979, Journal of Clinical Microbiology. 9: 538-540)。
[0182] 吲哚-3-乙酸。将富含869培养基中的20 μl起动培养物转移至补充有0.5 g/l色氨酸(Sigma Aldrich T0254)的1 ml 1/10 869培养基中。将培养物在黑暗中于30℃和200 rpm下温育4-5天。将样品离心，并使0.1 ml上清液与0.2 ml Salkowski试剂(35%高氯酸，10 mM FeCl3)混合。在黑暗中温育30分钟之后，产生粉红色的样品记录为IAA合成阳性。IAA (Sigma Aldrich I5148)的稀释液用作阳性对照，未接种的培养基用作阴性对照(Taghavi, et al., 2009, Applied and Environmental Microbiology 75: 748-757)。
[0183] 溶磷测试。将细菌铺展在Pikovskaya (PVK)琼脂培养基上，培养基由10 g葡萄糖、5 g三聚磷酸钙、0.2 g氯化钾、0.5 g硫酸铵、0.2 g氯化钠、0.1 g七水硫酸镁、0.5 g酵母提取物、2 mg硫酸锰、2 mg铁硫酸盐和15 g琼脂/升(pH 7)组成，热压处理。清除的区域表示溶磷细菌(Sharma et al., 2011, Journal of Microbiology and Biotechnology
Research 1: 90-95)。
Research 1: 90-95)。
[0184] 几丁质酶活性。向改性的PVK琼脂培养基(10 g葡萄糖、0.2 g氯化钾、0.5 g硫酸铵、0.2 g氯化钠、0.1 g七水硫酸镁、0.5 g酵母提取物、2 mg硫酸锰、2 mg铁硫酸盐和15 g琼脂/升(pH 7)，热压处理)中加入10%湿重胶体几丁质。将细菌铺展在这些几丁质板上，清除的区域表示几丁质酶活性(N. K. S. Murthy & Bleakley., 2012. “Simplified Method of Preparing Colloidal Chitin Used for Screening of Chitinase Producing Microorganisms”. The Internet Journal of Microbiology. 10(2))。
[0185] 蛋白酶活性。将细菌铺展在补充有10%牛奶的869琼脂培养基上。清除区域表示分解蛋白质的能力，表明蛋白酶的活性(Sokol et al., 1979, Journal of Clinical Microbiology. 9: 538-540)。
[0186] 实施例4苏云金芽孢杆菌RTI545对玉米种子萌发的影响
如下所述测定细菌分离株RTI545的营养细胞对玉米种子萌发的影响。
如下所述测定细菌分离株RTI545的营养细胞对玉米种子萌发的影响。
[0187] 使用来自玉米的种子实施对RTI545的营养细胞的测定。将RTI545从冷冻的储备原料铺展至869培养基上，并在30℃下生长过夜。从平板中取出分离的菌落并接种至含有20 mL 869肉汤的50 mL锥管中。将培养物伴随在30℃和200 RPM下振荡温育过夜。将过夜培养物以10000 RPM离心10分钟。弃去上清液，并将沉淀重悬于MgSO4中以洗涤。将混合物再次以10000 RPM离心10分钟。弃去上清液，并将沉淀重悬于改良的Hoagland溶液中。然后稀释混合物以提供初始浓度。由此，制备RTI545培养物的稀释液，使得最终浓度为2x107 cfu/ml。
对于基于玉米的种子萌发实验，用RTI545或对照标记植物生长容器。将十(10)粒种子置于单个容器中。将10 mL浓度为2x107 cfu/ml的RTI545混悬液加入容器中，并将种子在黑暗中于21℃下温育。对照容器含有种子和改良的Hoagland溶液，不添加细菌。在10-12天之后拍摄容器的图像。图3A-3B为在存在(图3A)和不存在(图3B)RTI545菌株的情况下生长12天之后玉米幼苗的图像。从图中可以看出，RTI545菌株的存在导致显著的生长优势。
对于基于玉米的种子萌发实验，用RTI545或对照标记植物生长容器。将十(10)粒种子置于单个容器中。将10 mL浓度为2x107 cfu/ml的RTI545混悬液加入容器中，并将种子在黑暗中于21℃下温育。对照容器含有种子和改良的Hoagland溶液，不添加细菌。在10-12天之后拍摄容器的图像。图3A-3B为在存在(图3A)和不存在(图3B)RTI545菌株的情况下生长12天之后玉米幼苗的图像。从图中可以看出，RTI545菌株的存在导致显著的生长优势。
[0188] 实施例5苏云金芽孢杆菌RTI545分离株在玉米中的生长效应
测定了施用细菌分离株对玉米早期植物生长和活力的影响。通过在室温和振荡下，于
108 CFU/ml细菌的混悬液中接种表面灭菌的萌发的玉米种子2天实施实验(还在没有细菌的情况下实施对照)。随后，将接种的种子种植在装有PROMIX BX的1加仑花盆中，用石灰处理至pH值为6.5。对于每次处理，将9个花盆接种单个玉米种子。将花盆在温室中于22℃下进行温育，光照和黑暗循环为14/10小时，并根据需要每周浇水两次。
测定了施用细菌分离株对玉米早期植物生长和活力的影响。通过在室温和振荡下，于
108 CFU/ml细菌的混悬液中接种表面灭菌的萌发的玉米种子2天实施实验(还在没有细菌的情况下实施对照)。随后，将接种的种子种植在装有PROMIX BX的1加仑花盆中，用石灰处理至pH值为6.5。对于每次处理，将9个花盆接种单个玉米种子。将花盆在温室中于22℃下进行温育，光照和黑暗循环为14/10小时，并根据需要每周浇水两次。
[0189] 种植之后42天收获植物并测量其鲜重和干重，且与对未接种的对照植物获得的数据进行比较。在生长42天之后测量了玉米幼苗生物量的湿重和干重。对于接种有苏云金芽孢杆菌RTI545菌株的植物，玉米幼苗生物量的湿重等于173.7 g，而对于未接种的对照湿重等于147.6 g，相对于未接种的对照湿重增加17.7%。对于接种有苏云金芽孢杆菌RTI545菌株的植物，玉米幼苗生物量的干重等于16.0 g，而对于未接种的对照干重等于12.4 g，相对于未接种的对照干重增加29%。从湿和干生物量两者的显著增加可以看出，RTI545菌株的存在导致显著的生长优势。
[0190] 实施例6苏云金芽孢杆菌RTI545分离株对昆虫的活性
以体外测定评估了苏云金芽孢杆菌RTI545菌株拮抗西方盲蝽(WPB)、豆荚草盲蝽
(Lygus hesperus)和南方玉米根虫(SCRW)、黄瓜十一星叶甲食根亚种(Diabrotica undecimpunctata howardi)的能力。
以体外测定评估了苏云金芽孢杆菌RTI545菌株拮抗西方盲蝽(WPB)、豆荚草盲蝽
(Lygus hesperus)和南方玉米根虫(SCRW)、黄瓜十一星叶甲食根亚种(Diabrotica undecimpunctata howardi)的能力。
[0191] 对于测定，使苏云金芽孢杆菌RTI545在5 ml 869培养基中于200 rpm和30℃下生长7小时。随后，将一小部分预培养物稀释100倍至869培养基中，并在150 rpm和30℃下生长17小时。全部细菌培养物用于所有生物测定。作为生物防治，根据相同的方案使用苏云金芽孢杆菌库斯塔克亚种(Bacillus thuringiensis subsp kurstaki) HD-1。
[0192] 对于拮抗WPB，以直接喷雾、择食饲喂和无择食饲喂测定以及对照(包括869培养基空白、化学对照Acephate 97UP (A.I. = 97% O,S-二甲基乙酰基硫代磷酰胺酯、生物对照HD-1和未经处理的对照)评估了苏云金芽孢杆菌RTI545。正如预期的那样，对于869培养基空白或HD-1处理没有观察到显著的死亡率(直接喷雾和无择食饲喂测定)或驱避性(择食饲喂测定)，而化学对照杀死(直接喷雾和无择食饲喂测定)和驱避(择食饲喂测定)WPB。在直接喷雾和无择食饲喂测定两者中，当施用时苏云金芽孢杆菌RTI545没有提供给WPB显著的死亡率，然而出乎意料的是，RTI545在WPB被置于择食测定场地之后124小时显示出驱避行为。具体地讲，当将WPB置于装有经处理和未经处理的食物来源的容器中时，观察到WPB仅进食未经处理的食物来源(数据未显示)。
[0193] 对于拮抗SCRW幼虫，以玉米幼苗的择食饲喂测定评估了苏云金芽孢杆菌RTI545细胞并与水对照进行比较。与水对照相比较的另外处理为i) 菌株苏云金芽孢杆菌库斯塔克亚种(Bacillus thuringiensis subsp kurstaki) HD-1 (HD-1)，ii) 化学对照CAPTURE LFR (A.I. = 17.15%联苯菊酯)，和iii) 869培养基。将滤纸切成两半并将每部分用胶带粘在100 mm培养皿内，确保两半滤纸中的每一个均未触碰。对经处理的一半滤纸涂布总体积为0.65 ml的处理物。将去离子水涂布于未经处理的一侧。对于未经处理的对照，滤纸的两半仅用水处理。一粒萌发的玉米种子位于每半湿滤纸上。将10只二龄幼虫置于经处理和未经处理的滤纸之间的中线处。每个处理重复3次。将培养皿用封口膜密封，并在评价之前在室温下和黑暗环境中保持6天。记录死亡幼虫的位置和数目。将每部分滤纸上的幼虫比例进行平方根转换以标准化分布并用ANOVA进行统计学分析。使用事后Tukey HSD测试来确定未经处理和经处理的滤纸之间的差异是否显著(α= 0.10)。
[0194] 6天之后用RTI545细胞进行平板测定的图像如图4所示，并且来自所有平板测定的数据概述于以下表IV中。从以上对WPB的测定观察到，RTI545出乎意料地驱避但没有杀死SCRW幼虫。在图4和表IV中可以看出，RTI545培养物在驱避SCRW幼虫方面表现出色，100%的幼虫存在于经水处理的一半滤纸上，并且在经RTI545处理的纸上没有幼虫。相比之下，对于HD-1菌株，幼虫在处理物和水对照之间在统计学上平均分开。联苯菊酯化学防治导致经CAPTURE LFR处理的滤纸上存在约19%的幼虫。结果表明，RTI545菌株在从玉米种子驱避昆虫方面出乎意料地优于化学杀虫剂，但没有杀死昆虫。
[0195] 表IV. 在基于玉米的择食饲喂测定中，6天之后位于经处理物和经水处理的一半滤纸上的活SCRW幼虫的百分比注释：对经处理的和未经处理的一半滤纸上的幼虫的平方根转换比例实施统计学分析。
[0196] 用HD-1菌株和RTI545，重复使用玉米幼苗对SCRW幼虫进行择食饲喂测定。与HD-1不同，RTI545不含用于产生晶体蛋白的基因(表示为“Cry”)。经SCRW幼虫使用玉米幼苗的体外平板择食饲喂测定测量了驱避性，并在72小时之后作为SCRW幼虫在未经处理的平板一侧的百分比进行评分。在没有驱避性的情况下，预期在平板的经处理和未经处理的两半上分布相同(50%)，表明驱避性为0%。该测定的结果如以下表V所示。在该实验中，在测定3天之后，与水对照相比较评估了苏云金芽孢杆菌RTI545和苏云金芽孢杆菌库斯塔克亚种(Bacillus thuringiensis subsp kurstaki) HD-1。同样，RTI545培养物在驱避SCRW幼虫方面表现出色，96%的幼虫存在于经水处理的一半滤纸上，而在含有RTI545细胞的一半上仅有4%。相比之下，对于HD-1菌株，幼虫在处理物和水对照之间同样在统计学上平均分开(在未经处理的平板一侧为53%)。
[0197] 表V. 在基于玉米的择食饲喂测定中，3天之后位于未经处理的一半滤纸上的活SCRW幼虫的百分比还重复了使用玉米幼苗对SCRW幼虫的择食饲喂测定，以将RTI545与另一种苏云金芽孢杆菌菌株FD30和卡那霉素水解物进行比较。基于基因组序列数据，假定的卡那霉素水解物生物合成途径在RTI545而未在FD30中发现。经SCRW幼虫使用玉米幼苗的体外平板择食饲喂测定测量了驱避性，并在72小时之后作为SCRW幼虫在未经处理的平板一侧的百分比进行评分。在没有驱避性的情况下，预期在平板的经处理和未经处理的两半上分布相同(50%)，表明驱避性为0%。该测定的结果如以下表VI所示。
[0198] 表VI. 在引入实验场地之后3天时，位于未经处理和经处理的滤纸部分上的SCRW幼虫的平均百分比如表VI中概述的那样，当被置于经处理和未经处理的滤纸之间的中线处时，RTI545提供对SCRW幼虫的驱避效应。FD30 (苏云金芽孢杆菌)不具有相同的总体效果。当卡那霉素水解物与FD30菌株组合时观察到SCRW回避。在两个单独的生物测定中，在24小时时观察到卡那霉素水解物在0.1 μg/ml和100.0 μg/ml之间的所有稀释率下具有驱避效应。在一项测试中，以10和100 μg/ml卡那霉素水解物处理的滤纸对SCRW提供≥80%的回避反应。在第3天，在位于经卡那霉素水解物处理一侧的玉米观察到饲喂损害最小。相反，FD30在第3天位于经处理和未经处理的滤纸上的幼虫数目方面具有20%的非统计学差异，在FD30择食测定的两侧均观察到明显的玉米饲喂损害。在第二项测试中，用30.0 μg/ml的卡那霉素水解物处理的滤纸提供完全的驱避性至5天(数据未显示)。基于这些结果，RTI545驱避昆虫物种比如WPB和SCRW的能力可能是由于其卡那霉素水解物的产生。
[0199] 实施例7苏云金芽孢杆菌RTI545分离株对线虫的活性
实施例6的结果表明TRI545对昆虫物种的驱避活性可能是由于化合物比如卡那霉素水解物的产生。类似地，RTI545对线虫的活性也可能是由于该菌株产生的化合物。如下所述在琼脂平板上实施线虫趋化性测定以评估根结(RKN)线虫幼体(J2)体外对不同浓度的卡那霉素水解物和RTI545上清液的反应。
实施例6的结果表明TRI545对昆虫物种的驱避活性可能是由于化合物比如卡那霉素水解物的产生。类似地，RTI545对线虫的活性也可能是由于该菌株产生的化合物。如下所述在琼脂平板上实施线虫趋化性测定以评估根结(RKN)线虫幼体(J2)体外对不同浓度的卡那霉素水解物和RTI545上清液的反应。
[0200] 测试场地如图6示意性地所示。9 cm直径的培养皿中装有15 ml 0.75% Phytagel (包含0.1% MgSO4.7H2O)。使用七水硫酸镁MgSO4.7H2O代替水琼脂培养基，使得可在显微镜下观察到线虫踪迹。在距离中心2 cm处的培养皿的对侧制备0.5 cm直径的孔，其可容纳约50 μl溶液。将测试样品施加于孔中并使扩散1小时(盖子在培养皿上)，因此可建立孔周围的梯度。然后，通过吸液管将悬浮于5 μl无菌蒸馏水中的75-100个J2期根结线虫置于平板的中心直径1.5 cm圆形中。当水悬浮液的表面张力丧失时，培养皿用盖子盖上并在黑暗中和25℃下于水平平台上温育1-4小时。温育之后，将平板变成4℃以使线虫停止移动，用于在设置之后2小时、3小时和5小时进行评分。对每种测试材料重复3次。
[0201] 对于评分，将测试场地分成16个区域，对于吸引区指定为1-8和对于驱避区指定为a-h，如图6A所示。吸引到测试物质的线虫将趋于向编号(吸引)区移动，导致沿着与孔的方向平行的轴聚集。被驱避的线虫趋于向标有字母(驱虫剂)区移动，导致沿着与孔的方向垂直的轴聚集。趋化因子(Cf)通过将引诱剂区域中的线虫总数除以驱避剂区域中的线虫总数来计算。Cf大于2意指对线虫的吸引作用，而小于0.5表示驱避性，和0.5-2认为无倾向性。结果如表VII所示。在该趋化性生物测定中，发现蒸馏水在所有评估时间点无倾向性(Cf介于0.5-2.0之间)。1%的乙酸在测试开始之后3小时和5小时显示出对RKN J2的驱避性(Cf <
0.5)。在2小时的早期评估时间点，乙酸的Cf为无倾向性(数据未显示)，可能是由于化学物质缓慢扩散至Phytagel培养基中和/或延迟线虫对化学品的反应。图6B为以100 μg/ml测试的卡那霉素水解物测定的照片，其中代表线虫位置的圆点表示无倾向性分布。图6C为在
100%强度下测试的RTI 545上清液测定的照片，其中代表线虫位置的圆点表示驱避性分布。
0.5)。在2小时的早期评估时间点，乙酸的Cf为无倾向性(数据未显示)，可能是由于化学物质缓慢扩散至Phytagel培养基中和/或延迟线虫对化学品的反应。图6B为以100 μg/ml测试的卡那霉素水解物测定的照片，其中代表线虫位置的圆点表示无倾向性分布。图6C为在
100%强度下测试的RTI 545上清液测定的照片，其中代表线虫位置的圆点表示驱避性分布。
[0202] 表VII. 在存在RTI545上清液的情况下根结线虫(根结线虫属(Meloidogyne spp.))的趋化性所有3种测试的卡那霉素水解物浓度(1、10和100 μg/ml)在测定中均未显示出驱避特性。对于所有测试的卡那霉素水解物比率和所有测试的时间点，Cf因子始终高于0.5。所有测试的RTI545上清液的比率(1%、10%、25%、50%和100%)和所有869培养基的比率(10%、25%、
50%和100%)均从测定开始之后2小时开始起驱避剂作用(Cf <0.5)。J2线虫的这种快速反应表明造成线虫行为的因素易于扩散并建立梯度。在869培养基的情况下，对测试的比率没有明显的剂量响应。然而，在RTI545上清液的情况下，观察到对所测试的比率的明显响应：上清液的比率较高导致线虫的驱避更强(Cf更低)。然而，由于测定的869培养基的活性强，RTI545驱避性的结果为非决定性的。
50%和100%)均从测定开始之后2小时开始起驱避剂作用(Cf <0.5)。J2线虫的这种快速反应表明造成线虫行为的因素易于扩散并建立梯度。在869培养基的情况下，对测试的比率没有明显的剂量响应。然而，在RTI545上清液的情况下，观察到对所测试的比率的明显响应：上清液的比率较高导致线虫的驱避更强(Cf更低)。然而，由于测定的869培养基的活性强，RTI545驱避性的结果为非决定性的。
[0203] 卡那霉素水解物对线虫不存在驱避性，这与对昆虫测定观察到的形成对比。对于RTI545观察到的线虫驱避性似乎是由于除卡那霉素水解物之外的一些其他因素造成的。
[0204] 体外评估在RTI545 (苏云金芽孢杆菌)菌株的过夜培养期间产生的化合物和纯化合物卡那霉素水解物，以表征其对根结线虫(RKN)卵(南方/北方根结线虫(Meloidogyne incognita/hapla))孵化的潜在影响。
[0205] 细菌上清液：为了获得用于测定的上清液，使一圈( 10 μl)的RTI545菌株在5 ml的869培养基中于~
200 rpm和30℃下生长16小时。第二天，在600 nm处测量了1:100稀释的光密度(OD)，以估计接种发酵烧瓶需要的体积。细菌培养在250 ml发酵瓶中于25 ml 869培养基中开始，初始OD为0.01。细菌在200 rpm和30℃下生长过夜(16小时)。保存2 ml的细菌培养物以测量OD和菌落形成单位(CFU)。将剩余的培养物离心(2500 rpm，15分钟)并将上清液通过0.22 μm滤器过滤灭菌。孵化测定在上清液收集之后4小时内开始。将上清液保持在4℃下直至开始生物测定。
200 rpm和30℃下生长16小时。第二天，在600 nm处测量了1:100稀释的光密度(OD)，以估计接种发酵烧瓶需要的体积。细菌培养在250 ml发酵瓶中于25 ml 869培养基中开始，初始OD为0.01。细菌在200 rpm和30℃下生长过夜(16小时)。保存2 ml的细菌培养物以测量OD和菌落形成单位(CFU)。将剩余的培养物离心(2500 rpm，15分钟)并将上清液通过0.22 μm滤器过滤灭菌。孵化测定在上清液收集之后4小时内开始。将上清液保持在4℃下直至开始生物测定。
[0206] 使卡那霉素水解物(10 mg)溶于1 ml去离子水中，得到10 mg/ml储备溶液。为了获得200 μg/ml浓度，将20 μl浓储备液(10 mg/ml)加入到990 ml水中。然后进行连续稀释以分别产生20 μg/ml和2 μg/ml卡那霉素水解物的浓度。
[0207] 使用根结线虫(南方根结线虫(Meloidogyne incognita)和北方根结线虫(M. hapla))的混合培养物。通过漂白从番茄根中提取线虫卵，并使用Opti-prep离心步骤进行清洁，随后在水中洗涤两次。在建立孵化测定之前，通过在显微镜下计数卵来建立早期(具有可见胚胎的卵)和晚期(里面具有分化的幼体的卵，J1或J2阶段)卵的百分比。仅将新鲜卵(在测定开始的当天收集)用于生物测定。
[0208] 测定以24孔组织培养板实施。在每孔中，将75 μl在2%甲基纤维素中的卵溶液(每孔约100个卵)与75 μl抗生素溶液(300 mg/L链霉素+ 300 mg/L青霉素)和150 μl每种处理物混合。将抗生素悬浮于无菌蒸馏水中。试测板中的抗生素的最终浓度为75 mg/L的青霉素和75 mg/L的链霉素。所有的处理物均含有2%甲基纤维素(RKN卵在暴露于处理物之前悬浮于甲基纤维素中)。添加甲基纤维素增加向每种处理物添加相同数目的接种物的准确性。处理设置为重复6次。盖上每个板，用铝箔包裹并置于设定在25℃的温育箱中。在孵化开始之后7天和14天时，在立体显微镜下计数每孔中孵出的幼体的数目。对于每个时间点和处理物，根据以下公式计算孵化百分比：7天和14天之后根结线虫卵的平均孵化百分比如表VIII所示。所有处理物均补充有抗生素(75 mg/L青霉素和75 mg/L链霉素)以防止污染。数据为来自6次重复的平均值±平均值的标准偏差。
[0209] 表VIII. 处理物对线虫卵孵化%的影响为测定收集的早期和晚期卵的百分比分别为41%和59%。抗生素、较低比率的Agrimek® (0.1 ppm)和869培养基空白对卵孵化没有显著影响。化学标准Agrimek®在体外抑制卵孵化。14天之后，1 ppm的比率导致卵孵化抑制72%。以任何比率的RTI545上清液和以高比率的Agrimek® (1 ppm)进行孵化均显著低于水对照。在测试的RTI545比率(2.5%-50%)当中没有观察到剂量响应，并且所有这些比率均与化学标准Agrimek®类似。相比之下，暴露于各种卡那霉素水解物浓度(1、10和100 μg/ml)的卵的孵化率均高于水对照。
[0210] 来自以所有测试的比率在869培养基上过夜培养的RTI545上清液显著抑制卵孵化。当从相同培养基上生长的3天培养物收集RTI545上清液时观察到类似的结果(数据未显示)。造成卵孵化抑制的化合物存在于生长过夜和3天的培养物中。
[0211] 卡那霉素水解物对卵孵化有积极作用。暴露于卡那霉素水解物的卵的孵化率比7天之后在水对照中温育的卵的孵化率高出80%。这些结果与卡那霉素水解物的生化特性一致。卡那霉素水解物被鉴定为几丁质合成抑制剂(Janiak and Milewski, 2001)。线虫卵壳由几丁质组成和卵孵化涉及几丁质降解-与几丁质合成相反的过程。
[0212] 尽管不打算受到任何理论的束缚，但来自测定的结果表明RTI545的抗线虫活性不是由于卡那霉素水解物造成的。RTI545上清液和869培养基提取物在驱避性和卵孵化测定中的不同行为表明，RTI545产生一种提供抗线虫性能的尚未鉴定的化合物。
[0213] 实施例8通过用苏云金芽孢杆菌RTI545处理玉米和大豆种子对生长和产量的影响
通过用苏云金芽孢杆菌RTI545的孢子与化学杀虫剂的组合处理玉米和大豆种子实施实验，以确定在昆虫压力下对生长和产量的影响。
通过用苏云金芽孢杆菌RTI545的孢子与化学杀虫剂的组合处理玉米和大豆种子实施实验，以确定在昆虫压力下对生长和产量的影响。
[0214] 在威斯康星州的田间试验中测量了对玉米害虫金针虫和种子蛆的生长、产量和防治中的一种或多种的影响。在温室中实施了另外的实验以测量在存在金针虫的情况下对早期植物生长的影响。实验如下所述实施。
[0215] 制剂：将苏云金芽孢杆菌RTI545孢子在水中的浓缩液(1.0x1010 cfu/ml)以1.0x106 cfu/种子的量施用。
[0216] 将MAXIM (SYNGENTA CROP PROTECTION, INC)以0.0064 mg AI/果核 (A.I. =咯菌腈)施用于种子。
[0217] 根据制造商标签将APRON XL (SYNGENTA CROP PROTECTION, INC)施用于种子(A.I. =精甲霜灵)。
[0218] 根据制造商标签将PONCHO 250、PONCHO 500 VOTIVO和PONCHO 1250 VOTIVO (BAYER CROP SCIENCE)各自施用于种子(PONCHO A.I. =噻虫胺和VOTIVO A.I. =坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus) I-1582)。
[0219] 在第一次田间试验中，玉米种子用含有以下的浆液处理：1) 化学防治MAXIM + APRON XL (称为“FC”)；2) FC +杀虫剂联苯菊酯0.125 mg/种子；3) FC + PONCHO 1250 (噻虫胺1.25 mg/种子)和VOTIVO (坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)I-1582)；4) FC + PONCHO 250 (噻虫胺0.25 mg/种子)；5) FC + PONCHO 500 (噻虫胺0.5 mg/种子)和VOTIVO (坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)I-1582)；和6) FC +联苯菊酯(0.125 mg/种子) + 苏云金芽孢杆菌RTI545的孢子。
[0220] 将经处理的玉米种子以单独的田间试验种植于威斯康星州的大量滋生虫害金针虫和种子蛆的土壤中。在一项试验中，将粪肥添加至地块中以吸引地种蝇属(Delia spp.)成体产卵。收集和分析的评级为%出苗、植株站立、%金针虫损害、%种子蛆损害、植物活力和产量。在种植之后34天通过目视检查评定昆虫饲喂损害的严重程度，并且植物活力按1-5的等级分级，其中1表示非常差和5表示植物活力评级出色。
[0221] 结果如以下表IX所示。包含苏云金芽孢杆菌RTI545与杀虫剂联苯菊酯的组合导致出苗率、植株站立、活力及金针虫和种子蛆两者的防治显著改善超过单独用联苯菊酯处理的种子。另外，苏云金芽孢杆菌RTI545和联苯菊酯的组合的结果在防治金针虫方面在统计学上等同于产品PONCHO 1250 VOTIVO，并且在防治种子蛆方面显示出超过该产品的改善。这些数据表明，用苏云金芽孢杆菌RTI545和化学杀虫剂比如联苯菊酯的组合进行的玉米种子处理显著改善昆虫防治超过单独包含化学杀虫剂，并且对于某些类型的昆虫防治而言优于市售可得到的产品。
[0222] 表IX. 与PONCHO VOTIVO相比较，用化学杀虫剂和RTI545的孢子的组合进行种子处理之后，在玉米田间试验中金针虫和种子蛆的防治* FC为用于所有含有咯菌腈和精甲霜灵的处理物的杀真菌剂检查，以提供疾病防护。
[0223] 在第二次田间试验中，玉米种子也用与第一次试验相同的浆液处理，其中含有：1) 化学防治MAXIM + APRON XL (称为“FC”)；2) FC +联苯菊酯；3) FC + PONCHO 1250 VOTIVO；4) FC + PONCHO 250；和5) FC +联苯菊酯+ RTI545的孢子。经处理的玉米种子以单独的田间试验种植于威斯康星州，其中存在金针虫但没有添加粪肥因此种子蛆不是问题。种植之后41天评定来自金针虫饲喂的玉米根系的损害。
[0224] 结果如以下表X所示，并且显示出与以上表IX相似的结果。具体地讲，包含苏云金芽孢杆菌RTI545与杀虫剂联苯菊酯的组合导致出苗率、植株站立、活力及金针虫的防治显著改善超过单独用联苯菊酯处理的种子。另外，苏云金芽孢杆菌RTI545和联苯菊酯的组合的结果在防治金针虫方面在统计学上等同或优于产品PONCHO 1250 VOTIVO。
[0225] 表X. 与PONCHO VOTIVO相比较，用化学杀虫剂和RTI545的孢子的组合进行种子处理之后的玉米田间试验中的金针虫的防治* FC为用于所有含有咯菌腈和精甲霜灵的处理物的杀真菌剂检查，以提供疾病防护。
[0226] 与PONCHO VOTIVO相比较，用化学杀虫剂和RTI545的孢子的组合进行种子处理之后的玉米田间试验中的平均产量也被测定。结果如以下表XI所示。包含苏云金芽孢杆菌RTI545与杀虫剂联苯菊酯的组合导致与单独用联苯菊酯处理的种子相比较产量显著提高。另外，RTI545和联苯菊酯的组合优于PONCHO 500 VOTIVO和PONCHO 1250 VOTIVO两者，产量增加13蒲式耳/英亩(分别从180.5增加至193.7和从185.5增加至193.7蒲式耳/英亩)，分别表示粮食产量增加6.8%和4.2%。这些数据表明，用RTI545和化学杀虫剂比如联苯菊酯的组合进行玉米种子处理显著提高产量超过单独包含化学杀虫剂，并减少犁沟内施用大量化学杀虫剂以防治昆虫损害的需求。
[0227] 表XI. 与PONCHO VOTIVO相比较，用化学杀虫剂和苏云金芽孢杆菌RTI545的孢子的组合进行种子处理之后的玉米田间试验中的平均产量进一步评估了通过用RTI545的孢子处理玉米种子对在昆虫压力下的生长的影响。在一组温室研究中，玉米种子首先用如下所述的种子处理浆液进行处理，并然后种植于大量滋生有害虫金针虫的土壤中(每盆一粒种子10只金针虫)，以及对照组的土壤不含金针虫。种子处理浆液如下：1) 化学防治MAXIM + APRON XL (称为“FC”)；2) FC；3) FC +联苯菊酯
6
(对于所有处理的处理物为0.125 mg/种子)；4) FC +联苯菊酯+ RTI545 5.0x10 ；5) FC +联苯菊酯+ RTI545 5.0x106和热处理；6) FC +联苯菊酯+ RTI545 1.0x106；7) FC + RTI545 5.0x106；和8) FC + PONCHO 1250。评估经处理的种子的出苗率。
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(对于所有处理的处理物为0.125 mg/种子)；4) FC +联苯菊酯+ RTI545 5.0x10 ；5) FC +联苯菊酯+ RTI545 5.0x106和热处理；6) FC +联苯菊酯+ RTI545 1.0x106；7) FC + RTI545 5.0x106；和8) FC + PONCHO 1250。评估经处理的种子的出苗率。
[0228] 结果如以下表XII所示。包含苏云金芽孢杆菌RTI545与杀虫剂联苯菊酯的组合导致100%出苗，其提高超过单独包含联苯菊酯，并且提供的结果等同于没有金针虫和FC + PONCHO 1250化学处理的对照组。饲喂梅子根的金针虫导致玉米植物发育迟缓，并且单独的RTI545或联苯菊酯与RTI545减少存活植物的植物发育迟缓。单独的RTI545在防止植物损失方面呈现出活性，但在提供早期保护免受发育迟缓方面不如杀虫剂联苯菊酯。然而，随着植物生长，RTI545在防止植物发育迟缓方面更有效(数据未显示)。这些数据表明，在玉米种子处理中单独或与化学杀虫剂比如联苯菊酯组合包含RTI545的孢子，在存在虫害金针虫的情况下显著改善植物健康。
[0229] 表XII. 在用化学杀虫剂和RTI545进行种子处理之后，在存在金针虫的情况下的玉米温室研究中的出苗和生长实施实验以确定除苏云金芽孢杆菌RTI545的孢子与化学杀虫剂的组合之外，通过用化学活性成分的标准杀真菌组合处理大豆种子对产量的影响。如下所述实施实验。
[0230] 制剂：将RTI545孢子在水中的浓缩液(1.0x1010 cfu/ml)以1.0x106 cfu/种子的量施用。
[0231] FC为含有咯菌腈、TPM和精甲霜灵的制剂，以2.5 g/100 g种子(咯菌腈)、10 g/100 g (TPM)和7.5 g/100 g种子(精甲霜灵)施用于种子。
[0232] 噻虫嗪以50 g/100 g种子施用于种子。
[0233] 在实验中，将大豆种子与含有以下的溶液混合：1) 化学防治咯菌腈/TPM/精甲霜灵(“FC”)；2) FC +杀虫剂噻虫嗪；和3) FC +噻虫嗪+苏云金芽孢杆菌RTI545的孢子。将经处理的大豆种子种植于具有金针虫大量滋生的3个地点(N = 3)并分析产量结果如以下表XIII所示。包含RTI545孢子与噻虫嗪的组合导致与单独用噻虫嗪处理的种子相比较产量显著提高，产量增加1.6蒲式耳/英亩(从68.2增加至69.8)，表示产量增加
2.3%。这些数据表明，用RTI545和化学杀虫剂的组合进行大豆种子处理显著提高产量超过单独包含杀虫剂，并减少犁沟内施用大量化学杀虫剂以防治昆虫损害的需要。
2.3%。这些数据表明，用RTI545和化学杀虫剂的组合进行大豆种子处理显著提高产量超过单独包含杀虫剂，并减少犁沟内施用大量化学杀虫剂以防治昆虫损害的需要。
[0234] XIII. 除标准杀真菌种子处理(FC)之外，用化学杀虫剂和RTI545的孢子进行种子处理之后的大豆的平均产量通过用RTI545的孢子与化学杀虫剂的组合进行种子或犁沟内处理改善昆虫防治的一种可能的解释如图1所示。具体地讲，图1A为显示单独用化学杀虫剂(即没有RTI545)进行昆虫防治的示意图。图1A在最左侧显示包被有化学杀虫剂(围绕内圆的暗带)的植物种子(内圆)，其被植物根际中由水平标记表示的植物虫害围绕。该图的中间部分显示具有扩散的杀虫剂的发芽的植物种子，杀虫剂保护植物种子的根系免受虫害(保护由“X”标记表示)。该图示的最右侧显示随着根系生长超出化学杀虫剂的扩散区，植物种子的根系免受虫害的保护作用减弱。图1B显示向植物种子上的包被中添加苏云金芽孢杆菌RTI545孢子(或大约在种植时犁沟内施用RTI545孢子)如何改善昆虫防治超过单独使用杀虫剂包被。具体地讲，图1B图示的最右侧显示植物种子的根系由于在植物根际中建立苏云金芽孢杆菌RTI545而免受害虫的持续保护作用，即使根系生长超出化学杀虫剂的扩散区。
[0235] 实施例9苏云金芽孢杆菌RTI545分离株在大量滋生的土壤中的线虫防治
如下所述测定苏云金芽孢杆菌RTI545菌株降低大豆和马铃薯中的线虫大量滋生的能力。
如下所述测定苏云金芽孢杆菌RTI545菌株降低大豆和马铃薯中的线虫大量滋生的能力。
[0236] 用在感染有南方根结线虫的土壤中盆栽的大豆植物实施温室研究，以确定以6
1.0x10 cfu/种子的量施用的RTI545孢子进行种子处理的效果。将大豆植物盆栽于感染有南方根结线虫(南方根结线虫(Meloidogyne incognita))的活卵的土壤中。种子用产品PONCHO VOTIVO (BAYER CROPSCIENCE LP; A.I. = 40.3%噻虫胺、8.1%坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)I-1582)和AVICTA COMPLETE (SYNGENTA; A.I. = 11.7%噻虫嗪、10.3%阿维菌素、2.34%噻苯咪唑、0.3%咯菌腈、0.23%精甲霜灵、0.12%嘧菌酯中的每种单独处理，产品以产品标签上指定的比率含有化学活性成分。数据如以下表XIV所示。在开始之后63天时，对用RTI545细胞和化学组合AVICTA COMPLETE进行种子处理的线虫卵/盆的数目没有统计学差异，然而，对用RTI545处理的种子的线虫卵/盆的数目少于用PONCHO VOTIVO处理的种子。63天之后任何处理的幼体/盆的数目没有统计学差异。这些数据证实了由苏云金芽孢杆菌RTI545提供的对大豆的线虫防治的积极效果。
1.0x10 cfu/种子的量施用的RTI545孢子进行种子处理的效果。将大豆植物盆栽于感染有南方根结线虫(南方根结线虫(Meloidogyne incognita))的活卵的土壤中。种子用产品PONCHO VOTIVO (BAYER CROPSCIENCE LP; A.I. = 40.3%噻虫胺、8.1%坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)I-1582)和AVICTA COMPLETE (SYNGENTA; A.I. = 11.7%噻虫嗪、10.3%阿维菌素、2.34%噻苯咪唑、0.3%咯菌腈、0.23%精甲霜灵、0.12%嘧菌酯中的每种单独处理，产品以产品标签上指定的比率含有化学活性成分。数据如以下表XIV所示。在开始之后63天时，对用RTI545细胞和化学组合AVICTA COMPLETE进行种子处理的线虫卵/盆的数目没有统计学差异，然而，对用RTI545处理的种子的线虫卵/盆的数目少于用PONCHO VOTIVO处理的种子。63天之后任何处理的幼体/盆的数目没有统计学差异。这些数据证实了由苏云金芽孢杆菌RTI545提供的对大豆的线虫防治的积极效果。
[0237] 表XIV. 用RTI545孢子进行种子处理之后的大豆中随着时间推移的线虫大量滋生对在自然感染有球孢囊线虫属线虫的土壤中盆栽的马铃薯植株实施了温室研究，以确定用苏云金芽孢杆菌RTI545细胞处理土壤的效果。在该实验中，在研究开始之后60天测定了RTI545细胞的土壤增强对每克根系生物量的孢囊数目的影响。将马铃薯(线虫敏感品种“宾杰”)种植于感染有球孢囊线虫属并用每升土壤10E9 cfu孢子的苏云金芽孢杆菌RTI545 (RTI545)增强的土壤中(对照)。结果如图5中的图表所示。在该研究中包括另外的土壤处理：VYDATE产品(Vydate; DUPONT; A.I. =杀线威[甲酰基N’N’-二甲基-N-[(甲基氨基甲酰基)氧基)氧基]-1-thiooxamimidate)、BIOACT产品(BAYER CROPSCIENCES LP; A.I. =淡紫拟青霉菌(Paecilomyces lilacinus)菌株251)、carex产品(carex, NUFARM, 哒螨灵)和苏云金芽孢杆菌库斯塔克亚种(Bacillus thuringiensis subsp kurstaki)HD-1。产品以产品标签上指定的比率施用。从图5中可以看到，与包括含有化学活性成分的产品的所有处理相比较，对用RTI545细胞处理的土壤，每克根系生物量的孢囊数目显著减少。
[0238] 实施例10用苏云金芽孢杆菌RTI545对接种有丝核菌属(Rhizoctonia)的棉花种子进行处理
实施实验以研究除用于病原体防治的化学活性剂之外，当用RTI545菌株处理种子时，在存在丝核菌属(Rhizoctonia)病压力的情况下对棉花的出苗、根病和产量的影响。
实施实验以研究除用于病原体防治的化学活性剂之外，当用RTI545菌株处理种子时，在存在丝核菌属(Rhizoctonia)病压力的情况下对棉花的出苗、根病和产量的影响。
[0239] 具体地讲，棉花实验建立如下：1) 种子未经处理(UTC)；2) 根据制造商标签，用咯菌腈+精甲霜灵+吡虫啉的基础组合(称为“B”)处理种子；3) 用基础加5 x 10+5 cfu/种子的RTI545 (B + RTI545)处理种子；和4) 根据标签说明书，用基础加VIBRANCE (活性成分氟唑环菌胺，SYNGENTA CROP PROTECTION, INC) (B + VIBRANCE)处理种子。在乔治亚州实施了田间试验。通过在种植时使干燥的接种物与种子混合至规定的比率来将试验接种有丝核菌属(Rhizoctonia)，以在种子开始生长时提供感染。平均棉花出苗率呈现于以下表XV中。
[0240] 表XV中的结果表明，除基础之外，用RTI545孢子处理导致出苗率显著改善超过单独的化学基础(67%相对于单独的基础的45%)。另外，用RTI545进行处理表现与基础加含有化学活性剂的市售产品VIBRANCE一样好。因此，即使在严重病原体压力的条件下，用RTI545进行种子处理也可提供出苗的显著改善。
[0241] 表XV. 接种有丝核菌属(Rhizoctonia)的土壤中用RTI545处理的种子的棉花出苗实施例11用苏云金芽孢杆菌RTI545处理小麦种子对生长和产量的影响
实施实验以确定用单独的苏云金芽孢杆菌RTI545的孢子或与化学杀真菌剂和化学杀虫剂中的一种或两种的组合处理的小麦种子对昆虫压力下的生长和产量的影响。更具体地讲，在威斯康星州的田间试验中测量了对小麦害虫金针虫和白蛴螬的生长、产量和防治的影响。如下所述实施实验，比较向种子和向种子加杀真菌剂基础添加苏云金芽孢杆菌RTI545孢子，和除杀真菌剂基础之外添加RTI545孢子与2种浓度的杀虫剂联苯菊酯的组合。
实施实验以确定用单独的苏云金芽孢杆菌RTI545的孢子或与化学杀真菌剂和化学杀虫剂中的一种或两种的组合处理的小麦种子对昆虫压力下的生长和产量的影响。更具体地讲，在威斯康星州的田间试验中测量了对小麦害虫金针虫和白蛴螬的生长、产量和防治的影响。如下所述实施实验，比较向种子和向种子加杀真菌剂基础添加苏云金芽孢杆菌RTI545孢子，和除杀真菌剂基础之外添加RTI545孢子与2种浓度的杀虫剂联苯菊酯的组合。
[0242] 在田间试验中，小麦种子用含有以下的浆液进行处理：1) 化学杀真菌剂基础苯醚甲环唑/戊唑醇/TPM/精甲霜灵(称为“FC”)；2) FC +苏云金芽孢杆菌RTI545的孢子(RTI545 106 cfu/g种子)；3) FC +联苯菊酯(20 g/种子)；4) FC +联苯菊酯(20 g/种子) + RTI545
106 cfu/g种子；5) FC +联苯菊酯(50 g/种子)；和6) FC +联苯菊酯(50 g/种子) + RTI545 106 cfu/g种子。
106 cfu/g种子；5) FC +联苯菊酯(50 g/种子)；和6) FC +联苯菊酯(50 g/种子) + RTI545 106 cfu/g种子。
[0243] 将经处理的小麦种子以田间试验种植于威斯康星州的大量滋生有虫害金针虫和白蛴螬土壤中。收集和分析的评级为%出苗、%金针虫损害、%蛴螬损害、植物活力和产量。在种植之后35天通过目视检查评定昆虫饲喂损害的严重程度，并且植物活力按1-5的等级分级，其中1 表示低和5表示高度旺盛。
[0244] 结果如以下表XVI所示。种子用苏云金芽孢杆菌RTI545孢子进行处理和用RTI545孢子与杀真菌剂基础(单独或与杀虫剂联苯菊酯组合)进行处理中的每种，导致出苗率、活力、金针虫和蛴螬的防治及产量显著改善。在每种测试的情况下，在小麦种子处理中包含RTI545孢子导致生长、活力、害虫防治和产量显著改善。
[0245] 表XVI. 用化学杀虫剂和RTI545的孢子的组合进行种子处理之后的小麦田间试验中的金针虫和蛴螬的防治* FC为用于所有含有苯醚甲环唑+TPM+戊唑醇+精甲霜灵的处理物的杀真菌剂检查，以提供疾病防护。
[0246] 实施例12苏云金芽孢杆菌RTI545种子处理对接种有丝核菌属(Rhizoctonia)的大豆的生长和产量的影响
在Quitman，GA实施田间试验，以测试与未经处理的种子或该基础或包含合成的基础加氟唑环菌胺的阳性对照相比较，将RTI545添加至基础杀真菌剂/杀虫剂化学处理物中提供丝核菌属(Rhizoctonia)防护作用的功效。
在Quitman，GA实施田间试验，以测试与未经处理的种子或该基础或包含合成的基础加氟唑环菌胺的阳性对照相比较，将RTI545添加至基础杀真菌剂/杀虫剂化学处理物中提供丝核菌属(Rhizoctonia)防护作用的功效。
[0247] 大豆品种的大豆种子(栽培品种Pioneer 93Y92)用制备用于化学和生物处理并同时施用于种子的单独的浆液进行处理。将种子置于广口瓶中，在改良的涂料振荡器上振荡直至产品均匀地包被于种子上。基础化学处理包含作为单一制剂的4种活性物质，其包括1) 12.8 g/L的咯菌腈，2) 38.4 g/L的精甲霜灵，3) 38.4 g/L的甲基硫菌灵(TPM)和4) 256 g/L的噻虫嗪，并以41.4 mL/140000粒种子施用。将Vibrance (500 g/L的氟唑环菌胺)作为种子处理单独施加于阳性对照处理。使用菌株RTI545的干燥技术并在水中稀释以获得
5x105 cfu/种子的施用率。将产品用水浆化至至少65 mL/140000粒种子以确保均匀施用。
试验包括完全随机区阻测试(重复4次)，为1.8米x 9米的地块。大豆品种的种子为栽培品种。使用锥形播种机将经处理和未经处理的种子种植于砂土中，播种率为13粒种子/米，深度为2.5 cm和行距为90 cm。将丝核菌属(Rhizoctonia)的接种物混合并与种子一起种植。
在普遍接受的大豆农艺条件下处理地块和大豆植物，包括常规耕作和根据需要补充灌溉。
在生长期间评价植物的出苗、活力(基于1-5定性等级，5为最佳)，并然后收获以评价转化为bu/英亩和kg/公顷的产量。结果概述在以下表XVII中。
5x105 cfu/种子的施用率。将产品用水浆化至至少65 mL/140000粒种子以确保均匀施用。
试验包括完全随机区阻测试(重复4次)，为1.8米x 9米的地块。大豆品种的种子为栽培品种。使用锥形播种机将经处理和未经处理的种子种植于砂土中，播种率为13粒种子/米，深度为2.5 cm和行距为90 cm。将丝核菌属(Rhizoctonia)的接种物混合并与种子一起种植。
在普遍接受的大豆农艺条件下处理地块和大豆植物，包括常规耕作和根据需要补充灌溉。
在生长期间评价植物的出苗、活力(基于1-5定性等级，5为最佳)，并然后收获以评价转化为bu/英亩和kg/公顷的产量。结果概述在以下表XVII中。
[0248] 表XVII. RTI545种子处理对接种有丝核菌属(Rhizoctonia)的大豆的生长和产量的影响丝核菌属(Rhizoctonia)的影响为减少站立、降低活力和降低产量。鉴于基础处理相对于未经处理的种子显著改善所有植物计数、活力和产量的评价，接种为有效的。
[0249] 向化学基础添加RTI545导致在所有3个评价时间站立显著增加、在2个评价时间活力显著增加和与化学基础相比较产量在数量上更高。站立和活力评级降低可能是由于植物相继死亡。向合成基础中添加氟唑环菌胺(一种活性物质，注册用于丝核菌属(Rhizoctonia)的防治)，与合成基础相比较导致出苗、活力增加和产量在数量上更高。在该试验中，对于所有评级，RTI545添加类似于氟唑环菌胺处理，证实该菌株在减少来自丝核菌属(Rhizoctonia)的损害方面具有相同的有效性。
[0250] 实施例13苏云金芽孢杆菌RTI 545种子处理对种植于大量滋生有金针虫和种子蛆的田间的玉米的生长和产量的影响
在威斯康星州实施了田间试验，以测试除基础杀真菌剂(Maxim和Apron XL两者均以
5.2 mL/100 kg施用)或该基础杀真菌剂和噻虫胺(0.25 mg/种子)或该基础杀真菌剂加联苯菊酯(0.125 mg/种子)或该基础杀真菌剂加氯虫苯甲酰胺(对0.25和0.5 mg/种子评估的
2个评级)或联苯菊酯(0.125 mg/种子)与氯虫苯甲酰胺(0.25 mg/种子)组合之外的RTI545的功效。作为显示高水平防护作用的阳性对照，噻虫胺以1.25 mg/种子与基础杀真菌剂组合施用，该高比率代表所评估的低比率噻虫胺的加载量的5倍。
在威斯康星州实施了田间试验，以测试除基础杀真菌剂(Maxim和Apron XL两者均以
5.2 mL/100 kg施用)或该基础杀真菌剂和噻虫胺(0.25 mg/种子)或该基础杀真菌剂加联苯菊酯(0.125 mg/种子)或该基础杀真菌剂加氯虫苯甲酰胺(对0.25和0.5 mg/种子评估的
2个评级)或联苯菊酯(0.125 mg/种子)与氯虫苯甲酰胺(0.25 mg/种子)组合之外的RTI545的功效。作为显示高水平防护作用的阳性对照，噻虫胺以1.25 mg/种子与基础杀真菌剂组合施用，该高比率代表所评估的低比率噻虫胺的加载量的5倍。
[0251] 玉米种子(品种为栽培品种Ag Venture G5891)用制备用于化学和生物处理并同时施用于种子的单独的浆液进行处理。将种子置于广口瓶中，在改良的涂料振荡器上振荡直至产品均匀地包被于种子上。基础化学处理包括3种市售制剂，其包括1) 40.3%的咯菌腈，2) 33.3%的精甲霜灵，3) 18.4%的氯虫苯甲酰胺，4) 600 g/L的噻虫胺，和5) 400 g/L的联苯菊酯。使用菌株RTI545的干燥技术并在水中稀释以获得1x106 cfu/种子的施用率。将产品浆化至至少600 mL/100 kg以确保均匀施用。处理13为基础+噻虫胺1.25 mg/种子，作为高水平金针虫防护的阳性对照。试验包括完全随机区阻测试(重复4次)，为3米x 15米的地块。使用锥形播种机将玉米种子种植于Milford粉质粘壤土中，播种率为93900粒种子/公顷，深度为6.25 cm和行距为75 cm。播种之后，将粪肥在地块之上散开以吸引种子蛆在地块中产卵。在普遍接受的玉米农艺条件下处理地块和玉米植物，包括最小耕作，降雨量平均高于该地区的平均水平。在生长期间评价植物的出苗、活力(基于1-5定性等级，1 =低活力和5 =高活力-评定地块的丰满度)、金针虫和种子蛆的饲喂损害(通过对50株植物取样和评价金针虫或种子蛆的根系损害进行评定)，并然后收获以评价产量。结果概述于表XVIII中。
[0252] 表XVIII. RTI545种子处理对种植于大量滋生有金针虫和种子蛆的田间的玉米的生长和产量的影响金针虫饲喂的影响为通过断根减少站立、减少活力和阻碍植物生长、损害根系并降低产量。种子蛆还可减少站立和饲喂种子，导致发育迟缓。
[0253] 将RTI545添加至杀真菌剂基础(处理物2与处理物3)中导致在种植之后42和164天时的出苗计数显著更高，减少了由金针虫饲喂引起的根系损害并且显著增加产量超过杀真菌剂基础。尽管RTI545提供了杀虫剂防护，但防护的水平低于评估的合成产品，证实将该产品添加至杀虫剂中益于确保令人满意的性能。
[0254] 将RTI545添加至以0.25 mg/种子施用的噻虫胺(分别为处理物3和4)中，在所有4个评价时间显著增加出苗、在所有3个评价时间显著增加活力，减少由种子蛆和金针虫引起的饲喂损害并显著增加产量。将RTI545添加至低比率的噻虫胺中导致性能与以1.25 mg/种子施用的高比率噻虫胺相似。
[0255] 将RTI545添加至联苯菊酯(对处理物5和6分别为01.25 mg/种子)中，在1个评价时间显著增加出苗、在1个评价时间显著增加活力、在最后的评价时间显著减少由种子蛆引起的饲喂损害并显著增加产量。
[0256] 将RTI545添加至氯虫苯甲酰胺(对处理物7和8分别为0.25 mg/种子)中，在3个评价时间显著增加出苗并显著增加产量。
[0257] 将RTI545添加至氯虫苯甲酰胺(对处理物9和10分别为0.5 mg/种子)中，在所有4个评价时间显著增加出苗、在所有3个评价时间显著增加活力，显著减少由种子蛆引起的饲喂损害、数量上减少金针虫饲喂损害并显著增加产量。将RTI545添加至氯虫苯甲酰胺(0.5 mg/种子)中导致该产品的表现与高比率的噻虫胺(1.25 mg/种子)相似。
[0258] 将RTI545添加至氯虫苯甲酰胺和联苯菊酯组合(分别为处理物9和10)中，在所有4个评价时间显著增加出苗、在所有3个评价时间显著增加活力，显著减少由种子蛆和金针虫引起的饲喂损害并显著增加产量。添加RTI545这种组合导致该产品的表现与高比率的噻虫胺(1.25 mg/种子)相似或改善，该处理的最终产量比高比率的噻虫胺高超过8 bu/英亩。
[0259] 这些结果表明由RTI545提供的杀虫剂防护可增强由3种独特的IRAC类合成杀虫剂提供的防护作用。这些结果表明RTI545本身可提供防护作用，然而，与有效杀虫剂的组合助于确保更高水平的益处出现。
[0260] 实施例14苏云金芽孢杆菌RTI545在玉米田间试验中的犁沟内施用
在北美不同地点的多个田间试验中研究了用RTI545进行的玉米的犁沟内处理，以评估对金针虫(梳爪叩甲属(Melanotus spp.))和玉米根虫(根萤叶甲属(Diabrotica spp.))的有效性。与未经处理的对照相比较，几种处理物对单个北美试验的产量和作物损害的影响，作为与未经处理的对照相比较的%产量增加和%损害减少被汇总并概述为下表中试验的平均值。对金针虫进行了7次试验评估。对玉米根虫进行了18次试验评估。由玉米根虫造成严重损害的5次试验分别取平均值。
在北美不同地点的多个田间试验中研究了用RTI545进行的玉米的犁沟内处理，以评估对金针虫(梳爪叩甲属(Melanotus spp.))和玉米根虫(根萤叶甲属(Diabrotica spp.))的有效性。与未经处理的对照相比较，几种处理物对单个北美试验的产量和作物损害的影响，作为与未经处理的对照相比较的%产量增加和%损害减少被汇总并概述为下表中试验的平均值。对金针虫进行了7次试验评估。对玉米根虫进行了18次试验评估。由玉米根虫造成严重损害的5次试验分别取平均值。
[0261] 表XIX. 用RTI545处理对金针虫大量滋生的田间地块的玉米产量的影响表XX. 用RTI545处理对玉米根虫大量滋生的田间地块的玉米产量和根虫损害的影响来自7个金针虫试验的产量数据表明，含有RTI545的处理物比单独的联苯菊酯和市售的标准七氟菊酯(以其最高比率)显示出略微优势。来自玉米根虫的18个试验的数据表明，含有RTI545的处理物的产量显示出与单独的联苯菊酯和七氟菊酯(以其最高比率)相同或略高。来自这18个试验的数据还表明，用RTI545与杀虫剂的组合处理的玉米导致对玉米根虫大量滋生的土壤中的玉米的根系损害比以其最大比率的七氟菊酯或以最大比率的联苯菊酯或单独施用RTI545作为处理时的行业标准要低。当玉米根虫的压力较大时，损害评级的降低与典型根虫压力下的处理相似，但产量增加百分比更好。总体而言，来自这些试验的数据表明，与未经处理的区域或用行业标准七氟菊酯处理的区域相比较，RTI545与联苯菊酯的组合可提高玉米产量并减少对玉米根系的昆虫损害。
[0262] 还在欧洲用RTI545进行玉米的犁沟内处理实施了田间试验，以评估对金针虫(叩甲属(Agriotes spp.))的有效性-数据未显示。
[0263] 实施例15苏云金芽孢杆菌RTI545对接种有丝核菌属(Rhizoctonia)的花生的生长和产量的影响在佐治亚州实施了田间试验以测试本发明的生物组合作为接种有立枯丝核菌
(Rhizoctonia solani)的花生的种子处理的功效。
(Rhizoctonia solani)的花生的种子处理的功效。
[0264] 花生种子用含有RTI545的干粉制剂进行处理，最终施用率为200 g/100 kg种子，导致RTI545以3.0 x 106 CFU/g种子施用，并同时施用DYNASTY PD，后者为一种美国注册的花生产品，含有咯菌腈(2%)、精甲霜灵(0.4%)和嘧菌酯(3.2%)，施用率为195 g/100 kg种子。将种子置于广口瓶中并摇动直至产品均匀地包被于种子上。
[0265] 试验包括使用6英寸x 30英尺(约1.8米x 9.1米)地块的完全随机区阻测试。种植经处理和未经处理的花生(花生(Arachis hypogaea), var. GA 06)种子。使用锥形播种机将种子种植于砂壤土中，深度1.25英寸(3 cm)和行距为36英寸(0.9 m)。地块接种有丝核菌属(Rhizoctonia sp.)以确保大量滋生。在普遍接受的农艺条件下处理地块和花生植物，包括常规耕作和根据需要灌溉，直至其准备收获为止。在生长期间评价植物的出苗、活力(基于1-5定性等级)，并然后收获以评价产量。结果概述于表XXI中。
[0266] 表XXI. RTI545种子处理的花生抗丝核菌属(Rhizoctonia)的田间试验的结果在所有3个评价时间，所有种子处理比未经处理的对照(UTC)具有更高的站立。在所有3个评价时间，包括RTI545在内的处理提供了最好的出苗。在所有3个评价时间，未经处理的种子具有最低的活力。包括RTI545在内的处理提供了比UTC和化学基础处理更强的活力。所有产品的产量均显著高于UTC。包括RTI545在内的处理优于化学基础处理。
[0267] 实施例16苏云金芽孢杆菌RTI 545种子处理对病变线虫的影响
在温室中实施基于经种子处理的玉米的土壤测定以评价对病变线虫穿刺短体线虫
(Pratylenchus penetrans)的活性。用咯菌腈(1.1 ml/SU)和精甲霜灵(1.1 ml/SU)的基础种子处理来处理玉米(栽培品种Viking)种子(所有种子)。一些种子还用PONCHO/VOTIVO (噻虫胺+坚强芽孢杆菌(B. firmus) I-1582，以80 ml/SU)、RTI545 (以5 x 105 CFU/种子)、RTI545 (以1 x 106 CFU/种子)或者RTI545 (5 x 105 CFU/种子) + 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株CH201 (2.5 x 106 CFU/种子) + 地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)菌株CH200 (2.5 x 106 CFU/种子)或RTI545 (5 x 105 CFU/种子) +贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)菌株RTI301 (5 x 105 CFU/种子) +地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)菌株CH200 (2.5 x 106 CFU/种子)的混合物进行处理。
在温室中实施基于经种子处理的玉米的土壤测定以评价对病变线虫穿刺短体线虫
(Pratylenchus penetrans)的活性。用咯菌腈(1.1 ml/SU)和精甲霜灵(1.1 ml/SU)的基础种子处理来处理玉米(栽培品种Viking)种子(所有种子)。一些种子还用PONCHO/VOTIVO (噻虫胺+坚强芽孢杆菌(B. firmus) I-1582，以80 ml/SU)、RTI545 (以5 x 105 CFU/种子)、RTI545 (以1 x 106 CFU/种子)或者RTI545 (5 x 105 CFU/种子) + 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株CH201 (2.5 x 106 CFU/种子) + 地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)菌株CH200 (2.5 x 106 CFU/种子)或RTI545 (5 x 105 CFU/种子) +贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)菌株RTI301 (5 x 105 CFU/种子) +地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)菌株CH200 (2.5 x 106 CFU/种子)的混合物进行处理。
[0268] 在一种类型的测定中，将经处理的种子种植于锥形容器中的90 ml土壤(80.4%砂、14.8%淤泥、4.8%粘土、1.1%有机质(pH 6.9))中。种植种子之后，土壤在同一天用200 μl载体(2%甲基纤维素)中的4000只线虫(混合阶段：J2-成虫)/种子接种。对照在未接种的土壤中使用进行基础种子处理的种子。测试种植使用弥雾器进行顶部浇水。使用WinRhizoTM软件在出苗之后2 (数据未显示)和7天评估测试的总根系长度。在ANOVA分析之前，使用α= 0.1的ANOVA Fisher检验，使用反正弦平方根变换转化根系长度数据和线虫%减少数据。
[0269] 表XXII. 玉米中的RTI545种子处理对病变线虫压力下生长的幼苗的总根系长度的影响用病变线虫接种玉米幼苗在数量上减少了总根系长度。用PONCHO/VOTIVO (商业标准)处理的幼苗的总根系长度大于未经处理的接种的幼苗并且与未经处理的未接种的幼苗相似。当与未经处理的接种的幼苗(30-34%)相比较，经RTI545处理的幼苗的总根系长度显著增加，并且在统计学上相似，但在数量上大于用PONCHO/VOTIVO处理的幼苗的总根系长度。
[0270] 使用2000只线虫/种子进行接种的类似测试在130 ml土壤中实施，并且在线虫接种之后8周测量每根系的线虫数目和植物的上部鲜重。结果呈现于表XXIII中。病变线虫大量滋生导致玉米植株的上部鲜重(FTW)严重下降。当与未接种的植物相比较，接种的对照植物的FTW下降了50%。与标准PONCHO/VOTIVO和与接种的线虫对照相比较，高比率的RTI545提供了统计学上更高的FTW。这些结果表明，RTI545种子处理通过在存在线虫害虫的情况下保持植物生长来增加植物对线虫大量滋生的耐受性。另外，当RTI545以较低比率与以下其他菌株组合使用时对于植物生长/FTW观察到类似的积极影响：RTI545 (1 x 105 CFU/种子) +枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株CH201 (2.5 x 106 CFU/种子) +地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)菌株CH200 (2.5 x 106 CFU/种子)或RTI545 (1 x 105 CFU/种子)+RTI301 (5 x 105 CFU/种子) +地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)菌株CH200 (2.5 x 106 CFU/种子)。此外，以高比率(1.0 x 106 CFU/种子)进行RTI545种子处理提供了对病变线虫的非常好的防治(根系中的线虫数目减少50%)。PONCHO/VOTIVO没有减少根系中的线虫数目。
[0271] 表XXIII. 接种有病变线虫之后，玉米中的RTI545种子处理对上部鲜重和根系中的线虫计数的影响其中RTI545以2.5x1011 CFU/ha的比率随着土壤浇灌施用的类似的测试，提供了每根系的病变线虫数目减少71%，相比之下阿维菌素为95%。在温室中施用于花盆的土壤浇灌测试中，其中土壤大量滋生有病变线虫卵和成虫(2000只/盆)，RTI545以2.5x1013 CFU/ha的比率提供了每根系的线虫数目减少80%，相比之下硫线磷减少86%。
[0272] 实施例17苏云金芽孢杆菌RTI 545在土壤浇灌测定中对大豆孢囊线虫的影响
在温室中的土壤浇灌测定中研究了RTI545对大豆孢囊线虫(大豆孢囊线虫
(Heterodera glycines))的活性。将单个大豆(栽培品种AG4730)种子种植于锥形容器中的
120 ml土壤(80.4%砂、14.8%淤泥、4.8%粘土、1.1%有机质(pH 6.9))中，并用单独的底部浇水进行浇水。在种植之后21天，以每个容器于1 mL 2%甲基纤维素中4000只卵的比率将容器接种线虫卵。在种植之后7和21天，施用土壤浇灌(10 ml体积/100 ml土壤)，以施用RTI545和AGRI-MEK 0.15 EC (a.i. 2%阿维菌素)和VENERATE XC (94.46%热灭活的伯克霍尔德菌属(Burkholderia spp.)菌株A396细胞和用过的发酵培养基)。测试的比率为用以下洗涤：
以2.5x1012 CFU/ha、2.5x1013 CFU/ha和2.5x1014 CFU/ha的RTI545孢子、以1 ppm (0.01 mg a.i./植株)和10 ppm (0.1 mg a.i./植株)的阿维菌素(对应于种子处理标签比率)和以5% v/v (500 mg/植株)的VENERATE XC (对应于4.5 x的犁沟内比率)。在第70天(接种之后7周)评估测试。通过从根系和土壤中提取孢囊并在立体显微镜下计数孢囊的总数来进行评估。
在温室中的土壤浇灌测定中研究了RTI545对大豆孢囊线虫(大豆孢囊线虫
(Heterodera glycines))的活性。将单个大豆(栽培品种AG4730)种子种植于锥形容器中的
120 ml土壤(80.4%砂、14.8%淤泥、4.8%粘土、1.1%有机质(pH 6.9))中，并用单独的底部浇水进行浇水。在种植之后21天，以每个容器于1 mL 2%甲基纤维素中4000只卵的比率将容器接种线虫卵。在种植之后7和21天，施用土壤浇灌(10 ml体积/100 ml土壤)，以施用RTI545和AGRI-MEK 0.15 EC (a.i. 2%阿维菌素)和VENERATE XC (94.46%热灭活的伯克霍尔德菌属(Burkholderia spp.)菌株A396细胞和用过的发酵培养基)。测试的比率为用以下洗涤：
以2.5x1012 CFU/ha、2.5x1013 CFU/ha和2.5x1014 CFU/ha的RTI545孢子、以1 ppm (0.01 mg a.i./植株)和10 ppm (0.1 mg a.i./植株)的阿维菌素(对应于种子处理标签比率)和以5% v/v (500 mg/植株)的VENERATE XC (对应于4.5 x的犁沟内比率)。在第70天(接种之后7周)评估测试。通过从根系和土壤中提取孢囊并在立体显微镜下计数孢囊的总数来进行评估。
[0273] 表XXIV. 从根系和土壤中提取的大豆孢囊线虫的孢囊数目数据显示，RTI545使线虫孢囊数目减少了多达66%。在测试的比率和活性之间没有明显的剂量响应。RTI545的活性与生物标准VENERATE XC没有统计学差异。化学标准阿维菌素具有最高活性。0.01 mg/植株的比率提供了减少79%和0.1 mg/植株提供了减少96%。
[0274] 实施例18包含苏云金芽孢杆菌RTI545的浓混悬剂制剂
包含苏云金芽孢杆菌RTI545的代表性浓混悬剂概述于表XXV中。它们通过在合适的混合容器或均质器中混合RTI545的孢子与其他组分来制备。
包含苏云金芽孢杆菌RTI545的代表性浓混悬剂概述于表XXV中。它们通过在合适的混合容器或均质器中混合RTI545的孢子与其他组分来制备。
[0275] 表XXV. 浓混悬剂制剂实施例19
包含苏云金芽孢杆菌RTI545和联苯菊酯的浓混悬剂制剂
包含苏云金芽孢杆菌RTI545和联苯菊酯的代表性浓混悬剂概述于表XXVI和XXVII中。
它们通过在合适的混合容器或均质器中混合RTI545的孢子与其他组分来制备。实施例19C为可发泡组合物，其可在种植时作为泡沫施用于种子或犁沟内。可发泡组合物19C可任选地用水稀释，并在包含发泡介质比如多个玻璃珠的发泡室中与加压气体比如空气混合以制备泡沫。
包含苏云金芽孢杆菌RTI545和联苯菊酯的浓混悬剂制剂
包含苏云金芽孢杆菌RTI545和联苯菊酯的代表性浓混悬剂概述于表XXVI和XXVII中。
它们通过在合适的混合容器或均质器中混合RTI545的孢子与其他组分来制备。实施例19C为可发泡组合物，其可在种植时作为泡沫施用于种子或犁沟内。可发泡组合物19C可任选地用水稀释，并在包含发泡介质比如多个玻璃珠的发泡室中与加压气体比如空气混合以制备泡沫。
[0276] 表XXVI. RTI545和联苯菊酯的SC制剂表XXVII
在升高的温度下储存期间的孢子稳定性非常好，如以下表XXVIII所示，其中制剂18D在
54℃下储存两周，RTI545孢子的浓度几乎没有变化。
在升高的温度下储存期间的孢子稳定性非常好，如以下表XXVIII所示，其中制剂18D在
54℃下储存两周，RTI545孢子的浓度几乎没有变化。
[0277] 表XXVIII. 储存期间的孢子稳定性本说明书中提及的所有公开、专利申请、专利和其他参考文献表示本公开的主题所属领域的技术人员的水平。所有公开、专利申请、专利和其他参考文献本文通过参考结合至好像每个单个公开、专利申请、专利和其他参考文献被具体和单独地表明通过参考结合的相同程度。应当理解，尽管本文参考了许多专利申请、专利和其他参考文献，但这种参考文献并不构成承认任何这些文献形成本领域公知常识的部分。
[0278] 尽管为了清楚理解的目的已通过说明和实施例较为详细地描述了前述主题，但是本领域的技术人员应当理解，可在所附权利要求的范围内实践某些变化和修改。
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