一种蜂毒素的制备方法
专利汇可以提供一种蜂毒素的制备方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及 蛋白质 合成技术领域，具体是一种 蜂毒 素的制备方法。本发明方法步骤如下：(1)将 钙 调蛋白、smt3(SUMO family protein)以及蜂毒素三者核苷酸序列与表达载体组成的重组质粒转入大肠杆菌菌株；(2)将(1)所得菌株接种于TB培养基或改进后的TB培养基，IPTG过夜诱导表达；(3)将(2)所得菌体超声 破碎 、离心，上清经Ni-NTA亲和层析、sumo蛋白酶酶切，在1.0mM EDTA存在下再次经Ni-NTA亲和层析以及Sephadex G-25分子筛分离获得纯度高达95％的蜂毒素，产量可达每升菌体16mg蜂毒素。本方法能克服目前蜂毒素产量低、成本高、无法满足对蜂毒素应用需求的 缺陷 ，是目前高产量、低成本的表达方法。，下面是一种蜂毒素的制备方法专利的具体信息内容。
1.一种蜂毒素的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将钙调蛋白(calmodulin)、smt3(SUMO family protein)以及蜂毒素(melittin)的核苷酸序列与表达载体形成的重组质粒转入大肠杆菌菌株；
(2)将(1)所得菌株接种于TB培养基或改进后的TB培养基，IPTG诱导过夜表达；
(3)将(2)所得菌体通过超声破碎、离心、上清经过Ni-NTA亲和层析，sumo蛋白酶酶切，在1.0mM EDTA存在下再次经过Ni-NTA亲和层析以及Sephadex G-25分子筛分离获得目标肽。
2.如权利要求1所述的一种蜂毒素的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述的表达载体是pMAL-c2x、pET28a或者pET-30a。
3.如权利要求1所述的一种蜂毒素的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所表述的宿主菌是BL21(DE3)plysS、Transsetta(DE3)或Transsetta(DE3)plysS。
4.如权利要求1所述的一种蜂毒素的制备方法，其特征在于，步骤(3)中超声破碎可用反复冻融法或溶菌酶酶解替代。
5.如权利要求1所述的一种蜂毒素的制备方法，其特征在于，步骤(2)中改进后的TB培养基组分包括：蛋白胨(12g/L)、酵母提取物(24g/L)，甘油(10mL/L)，磷酸盐(0.1mM)，葡萄糖(5g/L)。
一种蜂毒素的制备方法
技术领域：
发明内容：
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