发明领域

本发明涉及使用氨基甲酸酯化合物预防或治疗神经变性疾病的 方法。更具体地讲，本发明涉及使用卤化的2-苯基-1，2-乙二醇单氨 基甲酸酯或二氨基甲酸酯化合物预防或治疗神经变性疾病的方法。

                     发明背景

急性和慢性神经变性疾病与神经元细胞死亡或损害有关 (McDonald ES，Windebank AJ，Mechanisms of neurotoxic injury and cell death，Neurol.Clin.，2000年8月，18(3)，525-40；Nagy Z，Mechanisms of neuronal death in Down′s syndrome，J.Neural.Transm.Suppl.，1999， 57，233-45；Kilpatrick TJ，Soilu-Hanninen M，Molecular mechanisms regulating motor neuron development and degeneration，Mol. Neurobiol.，1999年6月，19(3)，205-28；Rubin LL，Neuronal cell death： an updated view，Prog.Brain.Res.，1998，117，3-8；Saha AR，Ninkina NN，Hanger DP，Anderton BH，Davies AM，Buchman VL，Induction of neuronal death by alpha-synuclein，Eur.J.Neurosci.，2000年8月， 12(8)，3073-3077；Varadarajan S，Yatin S，Aksenova M，Butterfield DA，Review：Alzheimer′s amyloid beta-peptide-associated free radical oxidative stress and neurotoxicity，J.Struct.Biol.，2000年6月，130 (2-3)，184-208；Clarke G，Collins RA，Leavitt BR，Andrews DF，Hayden MR，Lumsden CJ，Mclnnes RR，A one-hit model of cell death in inherited neuronal degenerations，Nature，2000年7月，13，406(6792)，195- 9；Foley P，Riederer P，Influence of neurotoxins and oxidative stress on the onset and progression of Parkinson′s disease，J.Neurol.，2000年4 月，247 Suppl 2，1182-94；Nicotera P，Caspase requirement for Neuronal apoptosis and neurodegeneration，IUBMB Life，2000年5月，49(5)， 421-5；Mattson MP，Pedersen WA，Duan W，Culmsee C，Camandola S，Cellular and molecular mechanisms underlying perturbed energy metabolism and neuronal degeneration in Alzheimer′s and Parkinson′s diseases，Ann.N.Y.Acad.Sci.，1999，893，154-75；Martin LJ，Al-Abdulla NA，Brambrink AM，Kirsch JR，Sieber FE，Portera-Cailliau C， Neurodegeneration in excitotoxicity，global cerebral ischemia，and target deprivation：A perspective on the contributions of apoptosis and necrosis，Brain Res.Bull.，1998年7月1日，46(4)，281-309；Mclntosh TK，Saatman KE，Raghupathi R，Graham DI，Smith DH，Lee VM， Trojanowski JQ，The Dorothy Russell Memorial Lecture；The molecular and cellular sequelae of experimental traumatic brain injury：pathogenetic mechanisms，Neuropathol.Appl.Neurobiol.，1998年8月，24(4)， 251-67)。防止神经元细胞死亡是治疗急性和慢性神经变性疾病所必 需的。

急性神经变性疾病与突然性损伤有关，导致神经元细胞死亡或 损害的这种损伤包括但不限于急性损伤、缺氧缺血或它们的共同作 用。急性损伤包括但不限于脑损伤、局灶性脑损伤、弥漫性脑损伤、 脊髓损伤、颅内或脊柱内损害(包括但不限于挫伤、穿透伤、剪切伤、 压迫或撕裂损害)或婴幼儿头部振摇综合症。缺氧缺血包括但不限于 脑血管供血不足、脑缺血或脑梗塞(包括栓子阻塞和血栓阻塞引起的 脑缺血或梗塞、急性局部缺血后再灌注、产期缺氧缺血性损伤、心 跳停止或任何类型的颅内出血(包括但不限于硬膜外、硬膜下、蛛网 膜下或大脑内出血)。

慢性神经变性疾病与在一定时期内进行性神经元细胞死亡或损 伤有关，包括但不限于阿耳茨海默氏病、Pick氏病、弥漫性莱维小 体病(diffuse Lewy body disease)、进行性核上性麻痹(Steel-Richardson 综合征)、多系统退化(Shy-Drager综合征)、神经变性性慢性癫痫病、 运动神经元疾病(肌萎缩性侧索硬化症)、多发性硬化、退化性共济失 调、皮质基底变性、关岛ALS-帕金森氏-痴呆综合征(ALS- Parkinson’s-Dementia complex of Guam)、亚急性硬化全脑炎、亨廷顿 氏舞蹈病、帕金森氏病、synucleinopathies(包括多系统萎缩症)、原 发性进行性失语症、纹状体与黑质体退化症(striatonigral degeneration)、Machado-Joseph病或3型脊髓小脑共济失调以及橄榄 体脑桥小脑退化症、延髓和假延髓性瘫痪、脊髓性和脊髓延髓性肌 肉萎缩症(Kennedy氏病)、原发性侧索硬化、家族性痉挛下身麻痹、 Werdnig-Hoffmann病、Kugelberg-Welander病、Tay-Sach氏病、Sandhoff 病、家族性痉挛病、Wohlfart-Kugelberg-Welander病、痉挛性下身轻 瘫、进行性多病灶脑白质症、家族性自主神经机能异常(Riley-Day综 合征)或朊病毒病(包括但不限于Creutzfeldt-Jakob病、Gerstmann- Strussler-Scheinker病、Kuru病或致死性家族性失眠症)。

其它记忆丧失性急性或慢性神经变性疾病包括但不限于以下病 症伴有的神经变性性异常：年龄相关性痴呆、血管性痴呆、弥漫性 白质病(Binswanger氏病)、源自内分泌或代谢的痴呆、头部外伤性和 弥漫性脑损伤性痴呆、拳击性痴呆症或额叶性痴呆。

其它神经元损伤性急性或慢性神经变性疾病包括但不限于与以 下损伤有关神经变性疾病：神经系统的化学性、中毒性、传染性和 放射性损伤；胎儿发育期间的损伤、早产儿生产时的损伤、缺氧缺 血时的损伤；肝脏、糖尿病、尿毒症、电解质以及内分泌性损伤； 精神病性损伤(包括但不限于精神病、抑郁症或焦虑症)；外周性疾病 和神经丛病变(包括神经丛麻痹)的损伤或者神经病性损伤(包括选自 以下的神经病：多灶性、感觉性、运动性、感觉-运动性、自主性、 感觉-自主性或脱髓鞘性神经病(包括但不限于Guillain-Barre综合征 或慢性炎症性脱髓鞘多神经根神经病)；或者为以下原因引起的神经 病：感染、炎症、免疫疾病、药物滥用、药物治疗、毒素、外伤(包 括但不限于压迫、压碎、撕裂或分割性外伤)、代谢性疾病(包括但不 限于内分泌性或副肿瘤性代谢性疾病)、Charcot-Marie-Tooth病(包括 但不限于1a、1b、2、4a或1-X连锁型)、Friedreich氏共济失调、异 染性脑白质营养不良、Refsum氏病、肾上腺脊髓神经病变、共济失 调-毛细管扩张、Déjerine-Sottas(包括但不限于A型或B型)、 Lambert-Eaton综合征或颅神经疾病)。

Bossinger等在美国专利3,265,728(通过引用结合到本文)中介绍 了用于治疗中枢神经系统的下式结构的取代的苯基烷基氨基甲酸 酯，它具有镇定、镇静以及放松肌肉的特性：

其中R1为氨基甲酰氧基或烷基氨基甲酰氧基，其中烷基含有1至3 个碳原子；R2为氢、羟基、烷基或1-2个碳的羟烷基；R3为氢或1-2 个碳的烷基；X可以为卤素、甲基、甲氧基、苯基、硝基或氨基。

Bossinger等在美国专利3,313,692(通过引用结合到本文)中介绍 了用氨基甲酸酯诱导镇静和肌肉放松的方法，该方法通过给予下式 化合物：

其中W为少于4个碳原子的脂肪族基团；R1为芳族基团；R2为氢或 少于4个碳原子的烷基；X为氢、羟基、其中烷基少于4个碳原子 的烷氧基或者为以下基团：

其中B为包括杂环基、脲基和肼基的有机胺基以及-N(R3)2，其中R3 为氢或少于4个碳原子的烷基。

Choi等在美国专利6,103,759(通过引用结合到本文)中介绍了旋 光纯形式的卤代2-苯基-1，2-乙二醇单氨基甲酸酯及二氨基甲酸酯， 它们有效用于治疗和预防中枢神经系统病症(包括抽搐、癫痫、中风 和肌肉痉挛)并可用于治疗中枢神经系统疾病(尤其用作抗惊厥药、抗 癫痫药、神经保护药以及中枢作用性肌肉弛缓药)，其结构式如下：

其中主要含有一种对映异构体；其中苯环在X被选自氟、氯、溴或 碘的1-5个卤素原子取代；R1、R2、R3、R4、R5和R6各自选自氢和 任选被苯基取代的1-4个碳原子的直链或支链烷基，其中苯基被选自 氢、卤素、烷基、烷氧基、氨基、硝基和氰基的取代基取代。介绍 了上式化合物的纯对映异构体形式和对映异构体混合物，其中在混 合物中主要含有一种对映异构体；优选主要的一种对映异构体达到 约90％或90％以上；最优选约98％或98％以上。

先前还没有关于将式(I)或式(II)的卤代2-苯基-1，2-乙二醇氨基甲 酸酯化合物用于预防或治疗神经变性疾病的介绍。最新的临床前研 究揭示了以前未被认知的药理学特性，这种特性显示式(I)或式(II)化 合物可用于预防或治疗神经变性疾病。因此，本发明的目的是公开 一种使用式(I)或式(II)的化合物预防或治疗神经变性疾病的方法。

                       发明概述

本发明涉及预防或治疗神经变性疾病的方法，该方法包括给予 其需要患者治疗有效量的选自式(I)和式(II)的化合物：

            式(I)                                                                式(II) 其中

苯基在X位置被1至5个选自氟、氯、溴和碘的卤素原子取代；

R1、R2、R3、R4、R5和R6独立选自氢和C1-C4烷基；其中C1-C4 烷基任选被苯基取代(其中苯基任选被独立选自卤素、C1-C4烷基、C1-C4 烷氧基、氨基、硝基和氰基的取代基取代)。

本发明实施方案包括一种预防或治疗神经变性疾病的方法，该 方法包括给予其需要患者治疗有效量的包含选自式(I)和式(II)的化合 物以及药学上可接受的载体的药用组合物。

本发明实施方案包括使用选自式(I)和式(II)的化合物制备用于预 防或治疗其需要患者神经变性疾病的药物。

所述方法的实施方案包括使用选自式(I)和式(II)的对映异构体或 主要含有选自式(I)和式(II)的一种对映异构体的对映异构体混合物。 对于主要含有选自式(I)和式(II)的一种对映异构体的对映异构体混合 物，优选主要含有的一种选自式(I)和式(II)的对映异构体达到约90％ 或90％以上。更优选主要含有的一种选自式(I)和式(II)的对映异构体 达到约98％或98％以上。

                       发明详述

本发明涉及一种预防或治疗神经变性疾病的方法，该方法包括 给予其需要患者治疗有效量的选自下式(I)和(II)的化合物：

                   式(I)                                                        式(II) 其中

苯基在X位置被1至5个选自氟、氯、溴和碘的卤素原子取代；

R1、R2、R3、R4、R5和R6独立选自氢和C1-C4烷基；其中C1-C4 烷基任选被苯基取代(其中苯基任选被独立选自卤素、C1-C4烷基、C1-C4 烷氧基、氨基、硝基和氰基的取代基取代)。

本方法包括使用选自式(I)和式(II)的化合物，其中X为氯；优选 X在苯环的邻位取代。

本方法还包括使用选自式(I)和式(II)的化合物，其中R1、R2、R3、 R4、R5和R6优选氢。

本方法的一个实施方案包括使用选自式(I)和式(II)的对映异构体 或主要含有选自式(I)和式(II)的一种对映异构体的对映异构体混合 物，其中X为氯；优选X在苯环的邻位取代。

本方法还包括使用选自式(I)和式(II)的对映异构体或主要含有选 自式(I)和式(II)的一种对映异构体的对映异构体混合物，其中R1、R2、 R3、R4、R5和R6优选氢。

对于主要含有选自式(I)和式(II)的一种对映异构体的对映异构体 混合物，优选主要含有的一种选自式(I)和式(II)的对映异构体达到约 90％或90％以上。更优选主要含有的一种选自式(I)和式(II)的对映异 构体达到约98％或98％以上。

本方法的一个实施方案包括使用选自式(Ia)和式(IIa)的对映异构 体或主要含有选自式(Ia)和式(IIa)的一种对映异构体的对映异构体混 合物：

                    式(Ia)                                                   式(IIa) 其中

苯基在X位置被1至5个选自氟、氯、溴和碘的卤素原子取代；

R1、R2、R3、R4、R5和R6独立选自氢和C1-C4烷基；其中C1-C4 烷基任选被苯基取代(其中苯基任选被独立选自卤素、C1-C4烷基、C1-C4 烷氧基、氨基、硝基和氰基的取代基取代)。

本方法包括使用选自式(Ia)和式(IIa)的对映异构体或主要含有选 自式(Ia)和式(IIa)的一种对映异构体的对映异构体混合物，其中X为 氯；优选X在苯环的邻位取代。

本方法还包括使用选自式(Ia)和式(IIa)的对映异构体或主要含有 选自式(Ia)和式(IIa)的一种对映异构体的对映异构体混合物，其中R1、 R2、R3、R4、R5和R6优选氢。

对于主要含有选自式(Ia)和式(IIa)的一种对映异构体的对映异构 体混合物，优选选自式(Ia)和式(IIa)的一种主要对映异构体达到约90％ 或90％以上。更优选选自式(Ia)和式(IIa)的一种主要对映异构体达到 约98％或98％以上。

本方法的一个实施方案包括预防或治疗神经变性疾病的方法， 该方法包括给予其需要患者治疗有效量的选自式(Ib)和式(IIb)的对映 异构体或主要含有选自式(Ib)和式(IIb)的一种对映异构体的对映异构 体混合物：

                式(Ib)                                                     式(IIb)

对于主要含有选自式(Ib)和式(IIb)的一种对映异构体的对映异构 体混合物，优选选自式(Ib)和式(IIb)的一种主要对映异构体达到约90％ 或90％以上。更优选选自式(Ib)和式(IIb)的一种主要对映异构体达到 约98％或98％以上。

本发明化合物可能存在其它结晶形式，而这样的形式已经包括 在本发明内。

对于本领域技术人员而言，本发明化合物以其外消旋体、对映 异构体及对映异构体混合物形式存在是显而易见的。选自式(I)、式 (II)、式(Ia)、式(IIa)、式(Ib)和式(IIb)的氨基甲酸酯对映异构体在苄基 位置含有一个不对称手性碳原子，它是与苯环相邻的脂肪族碳(在结 构式中用星号表示)。

本发明化合物可以按前面引用的Bossinger的’728号专利(通过 引用结合到本文)、Bossinger的’692号专利(通过引用结合到本文)和 Choi的’759号专利(通过引用结合到本文)中介绍的方法制备。

对某个分子中特定位置上的任何取代基或变量的定义独立于它 们在该分子中其它位置的定义。本领域普通技术人员能够选择本发 明化合物的取代基以及取代方式，以便获得化学稳定并且很容易用 本领域已知技术和本文阐述的方法合成的化合物。

本发明涉及一种预防或治疗其需要患者神经变性疾病的方法。 神经变性疾病包括但不限于急性神经变性疾病、慢性神经变性疾病、 其它记忆丧失性急性或慢性神经变性疾病或者其它神经元损伤性急 性或慢性神经变性疾病。

急性神经变性疾病与突然性损伤有关，导致神经元细胞死亡或 损害的这种损伤包括但不限于急性损伤、缺氧缺血或它们的共同作 用。急性损伤包括但不限于脑损伤、局灶性脑损伤、弥漫性脑损伤、 脊髓损伤、颅内或脊柱内损害(包括但不限于挫伤、穿透伤、剪切伤、 压迫或撕裂损害)或婴幼儿头部振摇综合症。缺氧缺血包括但不限于 脑血管供血不足、脑缺血或脑梗塞(包括源自栓子阻塞和血栓阻塞的 脑缺血或梗塞、急性局部缺血后再灌注、产期缺氧缺血性损伤、心 跳停止或任何类型的颅内出血(包括但不限于硬膜外、硬膜下、蛛网 膜下或大脑内出血)。

慢性神经变性疾病与在一段时期内进行性神经元细胞死亡或损 伤有关，包括但不限于阿耳茨海默氏病、Pick氏病、弥漫性莱维小 体病、进行性核上性麻痹(Steel-Richardson综合征)、多系统退化 (Shy-Drager综合征)、神经变性性慢性癫痫病、运动神经元疾病(肌萎 缩性侧索硬化症)、多发性硬化、退化性共济失调、皮质基底变性、 关岛ALS-帕金森氏-痴呆综合征、亚急性硬化全脑炎、亨廷顿氏舞蹈 病、帕金森氏病、synucleinopathies(包括多系统萎缩症)、原发性进 行性失语症、纹状体与黑质体退化症、Machado-Joseph病或3型脊 髓小脑共济失调以及橄榄体脑桥小脑退化症、延髓和假延髓性瘫痪、 脊髓性和脊髓延髓性肌肉萎缩症(Kennedy氏病)、原发性侧索硬化、 家族性痉挛下身麻痹、Werdnig-Hoffmann病、Kugelberg-Welander病、 Tay-Sach氏病、Sandhoff病、家族性痉挛病、Wohlfart-Kugelberg- Welander病、痉挛性下身轻瘫、进行性多病灶脑白质症、家族性自 主神经机能异常(Riley-Day综合征)或朊病毒病(包括但不限于 Creutzfeldt-Jakob病、Gerstmann-Strussler-Scheinker病、Kuru病或致 死性家族性失眠症)。

其它记忆丧失性急性或慢性神经变性疾病包括但不限于以下病 症伴有的神经变性性异常：年龄相关性痴呆、血管性痴呆、弥漫性 白质病(Binswanger氏病)、源自内分泌或代谢的痴呆、头部外伤性和 弥漫性脑损伤性痴呆、拳击性痴呆症或额叶性痴呆。

其它神经元损伤性急性或慢性神经变性疾病包括但不限于与以 下损伤有关的神经变性疾病：神经系统的化学性、中毒性、传染性 和放射性损伤；胎儿发育期间的损伤、早产儿生产时的损伤、缺氧 缺血时的损伤；肝脏、糖尿病、尿毒症、电解质以及内分泌性损伤； 精神病性损伤(包括但不限于精神病、抑郁症或焦虑症)；外周性疾病 和神经丛病变(包括神经丛麻痹)的损伤或者神经病性损伤(包括选自 以下的神经病：多灶性、感觉性、运动性、感觉-运动性、自主性、 感觉-自主性或脱髓鞘性神经病(包括但不限于Guillain-Barre综合征 或慢性炎症性脱髓鞘多神经根神经病)；或者为以下原因引起的神经 病：感染、炎症、免疫疾病、药物滥用、药物治疗、毒素、外伤(包 括但不限于压迫、压碎、撕裂或分割性外伤)、代谢性疾病(包括但不 限于内分泌性或副肿瘤性代谢性疾病)、Charcot-Marie-Tooth病(包括 但不限于1a、1b、2、4a或1-X连锁型)、Friedreich氏共济失调、异 染性脑白质营养不良、Refsum氏病、肾上腺脊髓神经病变、共济失 调-毛细管扩张、Déjerine-Sottas(包括但不限于A型或B型)、 Lambert-Eaton综合征或颅神经疾病)。

本发明方法的一个实例包括以药用组合物给予患者治疗有效量 的选自式(I)和式(II)的化合物，所述组合物中包含选自式(I)和式(II)的 化合物和药学上可接受的载体。本发明方法还包括使用选自式(I)和 式(II)的化合物制备预防或治疗神经变性疾病的药物。

本发明方法的另一个实例包括给予患者治疗有效量的选自式(I) 和式(II)的化合物或其药用组合物以及一种或多种可用于预防或治疗 神经变性疾病的药物。

选自式(I)和式(II)的化合物或其药用组合物可以通过任何常规的 给药途径用药，包括但不限于口服、肺部、腹膜内(ip)、静脉内(iv)、 肌内(im)、皮下(sc)、透皮、口腔含化、经鼻、舌下、眼部、直肠以 及阴道用药。另外，对神经系统直接给药的方式可以包括但不限于 使用或不使用泵装置通过颅内或脊柱内探针或导管经脑内、心室内、 脑室内、鞘内、脑池内、脊柱内或近脊髓给药。对本领域熟练技术 人员显而易见的是任何能产生本文所述疗效的给药剂量或给药频率 都适用于本发明。

选自式(I)和式(II)的化合物或其药用组合物的治疗有效量可以为 约0.01mg/Kg/剂至约100mg/Kg/剂。优选的治疗有效量可以为约 0.01mg/Kg/剂至约25mg/Kg/剂。更优选的治疗有效量可以为约 0.01mg/Kg/剂至约10mg/Kg/剂。最优选的治疗有效量可以为约 0.01mg/Kg/剂至约5mg/Kg/剂。因此，例如对于平均体重70公斤的 患者而言，上述的每剂量单位(如片剂、胶囊剂、散剂、注射液、栓 剂、一茶匙量等)所含治疗有效量的活性成分可以为约1毫克/天至约 7000毫克/天。

然而，剂量可以根据患者的需要(包括与所治疗的特定患者相关 的因素，包括患者的年龄、体重和饮食、制剂浓度、疾病状态的发 展和给药方式与时间)以及使用的具体式(I)或式(II)化合物或其药用组 合物而变化。

本领域熟练技术人员可以很容易确定最佳给药剂量，这使得需 要调整剂量达到适当的治疗水平。可以每天给药也可以后周期性给 药。优选口服或胃肠外给予用于治疗神经变性疾病的式(I)或式(II)化 合物或其药用组合物。

依照本发明方法，上述式(I)或式(II)化合物或其药用组合物可以 在疗程的不同时间单独给药，也可以以分开的组合物或单一的组合 物形式同时给药。选自式(I)和式(II)的化合物或其药用组合物可以方 便地以每日一剂给药，也可以将总日剂量连续给药或者以每日两次、 三次或四次的分剂量给药。所以应当理解本发明已包括所有这样的 连续、同时或交替治疗的方法和方案，因此术语“给药”应据此进 行解释。

本文所用术语“患者”是指成为治疗、观察或试验对象的动物， 优选哺乳动物，最优选人类。

本文所用术语“治疗有效量”是指活性化合物或药物在组织系 统、动物或人体引起研究者、兽医、医生或其他临床医生所寻找的 生物学或医学反应的剂量，所述反应包括减缓所治疗疾病或病症的 症状。

本文所用术语“组合物”是指包括含有特定量特定成分的产品， 以及由各种特定成分以特定量组合而直接或间接产生的任何产品。

为了制备本发明药用组合物，将活性成分式(I)或式(II)化合物与 药用载体按照常规药学混合技术紧密混合，其中载体可以根据给药 途径(例如口服或胃肠外用药)所要剂型而采用各种不同的形式。合适 的药学上可接受的载体在本领域众所周知。部分药学上可接受的载 体的说明可以参见American Pharmaceutical Association和 Pharmaceutical Society of Great Britain出版的 The Handbook of Pharmaceutical Excipients。

已有大量的出版物介绍配制药用组合物的方法，例如 Pharmaceutical Dosage Forms：Tablets， 经修订增补的第二版，第1-3 卷；主编Lieberman等； Pharmaceutical Dosage Forms：Parenteral Medications，第1-2卷，主编Avis等； Pharmaceutical Dosage Forms： Disperse Systems，第1-2卷，主编Lieberman等；Marcel Dekker，Inc 出版。

优选药用组合物为单位剂型如片剂、丸剂、胶囊剂、囊片、胶 囊锭(gelcap)、锭剂、颗粒剂、散剂、无菌胃肠外溶液剂或混悬剂、 计量的气雾剂或液体喷雾剂、滴剂、安瓿、自动注射器或栓剂，通 过口服、鼻内、舌下、眼内、透皮、胃肠外、直肠、阴道、吸入或 吹入的方式给药。或者，组合物可以为适合每星期或每月给药一次 的剂型，还可以为适合肌内注射的制剂。

在制备口服的固体剂型如片剂、丸剂、胶囊剂、囊片、胶囊锭、 锭剂、颗粒剂或散剂(每种都包括立即释放、定时释放以及缓释的制 剂)的药用组合物时，合适的载体和添加剂包括但不限于稀释剂、造 粒剂、润滑剂、粘合剂、助流剂、崩解剂等。如果需要，片剂按照 标准技术进行糖包衣、明胶包衣、薄膜包衣或肠包衣。

对于制备固体剂型，可将主要活性成分与药用载体(例如常规制 备片剂的成分如稀释剂、粘合剂、胶粘剂、崩解剂、润滑剂、抗粘 着剂和助流剂)混合。可咀嚼的固体剂型中可以加入甜味剂和调味剂 来改善口服剂型的适口性。另外，为了药物易于识别或美观，固体 剂型中可以添加或应用着色剂和包衣。将这些载体与药用活性物质 一起配制以提供具有治疗学释放特征的药用活性物质的准确且适当 的剂量。

在制备口服、局部和胃肠外给药的液体剂型药用组合物时，可 使用任何常见的药学介质或赋形剂。由此，对于液体单位剂型，例 如混悬剂(即胶体、乳剂和分散体)和溶液剂，可以使用合适的载体和 添加剂，包括但不限于药学上可接受的润湿剂、分散剂、絮凝剂、 增稠剂、pH调节剂(即缓冲剂)、渗透剂、着色剂、调味剂、香味剂、 防腐剂(即用于抑制微生物生长等)和液体赋形剂。不是每种液体剂型 都需要上面列出的所有成分。可以加入本发明的新组合物用于口服 或注射给药的液体形式包括但不限于水溶液、经适当调味的糖浆、 水性或油性悬浮液以及含食用油(如棉籽油、芝麻油、椰子油或花生 油)的调味乳液，也包括酏剂和类似药用溶媒。

                      生物学试验实施例

用于预防或治疗神经变性疾病的式(I)和式(II)化合物的活性用以 下试验实施例评价，这些实施例是用于示例性说明本发明而非对本 发明的限制。

                           实施例1

PC12细胞去血清模型

去血清是一种细胞毒素环境测试，它导致培养的细胞系以及来 源于各种组织的原代细胞(包括神经细胞)的细胞死亡。特别是嗜铬细 胞瘤(PC)12细胞作为体外神经元细胞模型已经广泛用于各种神经变 性以及细胞死亡相关的疾病(Muriel等，Mitochondrial free calcium levels(Rhod-2 fluorescence)and ultrastructural alterations in neuronally differentiated PC12 cells during ceramide-dependent cell death，J.Comp. Neurol.，2000，426(2)，297-315；Dermitzaki等，Opioids transiently prevent activation of apoptotic mechanisms following short periods of serum withdrawal，J.Neurochem.，2000，74(3)，960-969；Carlile等， Reduced apoptosis after nerve growth factor and serum withdrawal： conversion of tetrameric glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase to a dimer，Mol Pharmacol.，2000，57(1)，2-12)。

PC12细胞在无菌培养基中培养(RPMI 1640)，培养基中补充10％ 热灭活的马血清和5％胎牛血清(FBS)。培养基还包含1X青霉素-链 霉素-新霉素的抗菌素(分别为50μg，50μg，100μg)。培养基每隔一 天更换一次，细胞在接近汇合的生长对数期时收获使用。

对照细胞在没有任何处理的常规培养基中培养。式(Ib)或式(IIb) 对映异构体(10μM)在培养基中充分混合，然后应用于上述细胞。对 2天的测试，式(Ib)或式(IIb)对映异构体(10μM)只在去血清时应用 于细胞。对于7天的测试，式(Ib)或式(IIb)对映异构体(10μM)在去血 清时以及在其后每48小时给细胞更换新鲜没有血清的新培养基时也 应用于细胞。在去血清组中，细胞在没有血清的培养基中培养，没 有加入式(Ib)或式(IIb)的对映异构体。在去血清后第2或第7天通过 3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基-甲氧基苯基)-2-(4-磺基苯基)-2H-四 唑鎓内盐(MTS)分析检测细胞存活率。

在试验结束时，细胞用新鲜培养基冲洗，用MTS溶液在潮湿、 含5％二氧化碳的保温箱中于37℃温育1.5h。在温育期后，立即用 Softmax程序(分子仪)分析细胞。MTS分析是一种在指定实验设置下 用于测定可存活细胞数量的量热法。这种分析是基于四唑鎓盐(MTS) 由细胞转化为甲，甲溶解于组织培养基中并在96-孔分析板上于 490nm直接测量。吸光度直接与培养物中活细胞数量成比例。对照 细胞的任意吸光度读数表示为100％存活率。

表1数据证明在PC12细胞去血清模型中口服给予式(Ib)和式(IIb) 对映异构体能有效提高细胞存活率(1P值＝0.01；2p值＝＜0.01)。

                表1

            ％细胞存活率

            2天            7天

            存活率(％)     存活率(％)

对照        100            100

没有血清    49.6±2.6      23.8±2.6

式(Ib)      69.4±1.71    79.9±4.02

式(IIb)     66.4±5.41    85.240.62

                  实施例2

暂时性脑缺血大鼠模型

在暂时性脑缺血的中大脑动脉阻塞(MCAO)大鼠模型上研究式 (Ib)对映异构体(参见Nagasawa H.和Kogure K.，Stroke，1989，20， 1037；Zea Longa E.，Weinstein P.R.，Carlson S和Cummins R.，Stroke， 1989，20，84)，使用雄性Wistar大鼠，10和100mg/kg(i.v.)。MK 801 (地卓亚平马来酸盐)；CAS登记号77086-22-7，市售可得)用作阳性 对照(3mg/kg，i.p.)。

大鼠(n＝12)随机分配至4个试验组之一，然后麻醉。通过此方 法阻塞从颈内动脉、大脑前动脉和大脑后动脉至大脑中动脉的血流。 阻塞1小时后，在1小时内大鼠用溶媒(i.v.给予1小时)、对照(在1 小时开始时一次性i.p.给药)以及两剂式(Ib)对映异构体(在1小时内i.v. 给药)。阻塞后两小时，进行再灌注。

处死大鼠，将各个大脑制备20mm-厚的冠状切面。从前部至枕 骨皮质的四十分之一的切面(即每800nM)用于对脑损害进行量化。 用甲酚紫染色的切面制备载玻片(根据Nissl方法)，在光学显微镜下 检验。

根据出现的具有形态变化的细胞，测量各个大鼠冠状切面的局 部缺血的表面面积。测量神经元损伤或梗塞面积，然后累加。计算 出每个大鼠的皮质和纹状体体积(总缺血表面面积×0.8mm(厚度))。

MCAO模型分析

随机分配至四个试验组的每只大鼠的平均体积(±S.E.M.)用单因 子ANOVA法比较(单因子ANOVA是一种统计学方法，可比较3个 或3个以上的不匹配组)，然后进行Dunnett′s t检验(两种方法都结合 到软件Statview 512+中，BarinPower，Calabasas，CA，USA)。

如表2所示，当与溶媒组相比p值＜0.05(1P＜0.01；2p＜0.05) 时，认为试验结果具有统计学显著性。

                       表2

            平均梗塞体积(mm3)±S.E.M.

处理方法            N    皮质            纹状体       总体积

溶媒，10mL/kg       12   275.5±27.1     79.4±3.6    354.9+29.9

MK 801，3mg/kg      12   95.8±24.511   56.1+5.32  151.9±28.71

式(Ib)，10mg/kg     12   201.0±23.9     75.9±2.6    276.9±25.4

式(Ib)，100mg/kg    12   98.8±29.51    63.0±5.92 161.9±34.31

虽然前述说明书公开了本发明的原理并提供了说明性实施例， 但是应当理解的是实施本发明包括所有常规变化、改动和/或改进方 法，它们都属于以下权利要求书以及其等同内容范畴。

                相关申请的交叉引用

本申请要求2001年2月27日申请的临时申请60/271,682的权 益，将其通过引用结合到本文。