一种段塞流微萃取-纸基电喷雾质谱联用技术
阅读：688发布：2020-05-17
专利汇可以提供一种段塞流微萃取-纸基电喷雾质谱联用技术专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 属于分析化学领域，涉及一种 段塞流 微萃取-纸基电喷雾质谱(SFME-PS-MS)联用技术及其系统和应用。本发明的SFME-PS-MS技术首先采用毛细管对复杂基体样品中的痕量化合物进行快速萃取和富集，萃取后的萃取液滴加在纸上，待萃取 溶剂 挥干后，将纸靠近质谱入口，对纸施加直流高压 电场 ，然后滴加喷雾溶剂到纸，目标化合物在电场和喷雾溶剂的作用下 解吸 电离并进入质谱分析。本发明发展了新型的微萃取与常压敞开质谱联用技术，实现了复杂 生物 和环境样品中痕量化合物的快速、灵敏、准确分析。，下面是一种段塞流微萃取-纸基电喷雾质谱联用技术专利的具体信息内容。
1.一种SFME-PS-MS技术，其特征在于，包含以下步骤：
S1)采用段塞流微萃取对样品进行萃取；
S2)采用纸基电喷雾质谱对步骤S1)萃取后的萃取液进行分析。
2.如权利要求1所述的SFME-PS-MS技术，其特征在于，
所述的段塞流微萃取包含以下步骤：依次将样品和萃取溶剂加入毛细管，然后振摇毛细管进行萃取；
所述的纸基电喷雾质谱包含以下步骤：将步骤S1)萃取后的萃取液滴加在纸上，待萃取溶剂挥干后，将纸靠近质谱入口，对纸施加直流高压电场，然后滴加喷雾溶剂到纸，目标化合物在电场和喷雾溶剂的作用下解吸电离并进入质谱分析。
3.如权利要求2所述的SFME-PS-MS技术，其特征在于，
所述的毛细管的内径为0.5-0.9mm；毛细管的材质为玻璃或石英，优选地，毛细管的材质为玻璃；
所述的纸至少带有一尖端；优选地，所述的尖端为30°-60°锐角；
进一步的，纸的尖端靠近质谱入口，尖端与质谱入口的距离为5-10mm。
4.如权利要求1-3任一所述的SFME-PS-MS技术，其特征在于，用于液体基质中有机物的分析；优选地，用于复杂液体基质中痕量有机物的分析。
5.一种苯丙胺类毒品的快速分析方法，其特征在于，所述的方法采用权利要求1-3任一所述的SFME-PS-MS技术。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的苯丙胺类毒品选自苯丙胺、甲基苯丙胺、亚甲二氧基甲基苯丙胺、替苯丙胺、3,4-亚甲基二氧基乙基苯丙胺、N-甲基-1-(3,4-亚甲二氧基苯基)-2-丁胺、副甲氧基甲基苯丙胺、麻黄碱、甲基麻黄碱、卡西酮、甲卡西酮、氯胺酮中的一种或多种；优选地，选自苯丙胺、甲基苯丙胺、亚甲二氧基甲基苯丙胺中的一种或几种。
7.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的SFME-PS-MS技术包含以下步骤：
1)依次将样品和萃取溶剂加入毛细管，然后振摇毛细管对样品进行萃取；
2)萃取完成后，将萃取液滴加在纸上，待萃取溶剂挥干后，将纸的尖端对准质谱入口，然后对纸施加直流高压电场，再滴加喷雾溶剂到纸上，目标化合物在电场和喷雾溶剂的作用下解吸电离并进入质谱仪进行分析。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于：
步骤1)中，
样品的基质为液体样品；优选地，为全血、体液或尿液中的一种；
优选地，所述萃取溶剂选自乙酸乙酯、正丁醇、氯仿、甲苯或己烷中的一种或几种；更优选地，为氯仿；
优选地，毛细管的内径为0.5-0.9mm；
优选地，毛细管的材质为玻璃或石英，优选地，毛细管的材质为玻璃；
优选地，萃取的次数为2-20次，优选8-15次，更优选10次；
优选地，步骤2)中，
所述的纸至少带有一尖端；优选地，所述的尖端为30°-60°锐角；
优选地，纸的尖端靠近质谱入口，尖端与质谱入口的距离为1-20mm，优选5-10mm；
优选地，直流高压电场的电压为2000-5000V，更优选直流高压电场的电压为3500V；
优选地，所述的喷雾溶剂为乙腈、甲醇、正丁醇、乙酸乙酯、丙酮、氯仿中的一种或几种，或者是它们与水的组合；优选地，为乙腈。
9.一种SFME-PS-MS分析系统，所述系统包括：
毛细管，所述的毛细管用于萃取样品；
纸，所述的纸用于作为分析样品的载体；
导电端，所述的导电端可操作地与纸上经喷雾溶剂解吸的目标化合物作用，使目标化合物带电荷，并移向纸的尖端形成泰勒锥，生成带电荷的喷雾，并进一步去溶剂形成带电的目标化合物气相离子；
质谱仪，所述的质谱仪可操作地藕接到所述的纸的尖端上以接收带电荷的目标化合物离子。
10.如权利要求9所述的系统，其特征在于：
所述的毛细管的内径为0.5-0.9mm；所述的毛细管的材质为玻璃或石英，优选地，为玻璃；
所述的纸至少带有一尖端；优选地，所述的尖端为30°-60°锐角；
所述的纸的尖端与质谱仪的入口藕接；优选地，纸尖端与质谱入口的距离为5-10mm；
所述的导电端为不锈钢金属夹、不锈钢镊子；所述导电端作用于纸，通电后对纸施加直流高压电场。
一种段塞流微萃取-纸基电喷雾质谱联用技术
技术领域
[0001] 本发明属于分析化学领域，涉及一种段塞流微萃取-纸基电喷雾质谱(SFME-PS-MS)联用技术分析复杂基体中的化合物。
背景技术
[0002] 液相微萃取(Liquid Phase Microextraction，LPME)是一种新型的样品前处理技术，该技术根据目标物在样品与萃取剂中的分配系数不同，将目标物从样品中萃取到萃取溶剂中。它能够提供媲美液液萃取的灵敏度和富集效果。同时该技术集萃取、净化和浓缩于一体，操作简单，而且还具有快速、廉价等特点，尤其适用于样品量很少的分析检测。此外，它使用的有机溶剂非常少，是一项对环境较友好的前处理技术。
[0003] 常压敞开质谱(Ambient mass spectrometry,AMS)是近年来新兴的一种无需或者只需很少样品前处理步骤，在敞开的常压环境中可直接对物体表面物质进行离子化的质谱分析技术。近年来，研究者已经开发出多种敞开式离子化技术，例如电喷雾解吸电离(Desorption electrospray ionization,DESI)、实时直接分析(Direct analysis in realtime,DART)、电喷雾萃取电离(Extractive electrospray ionization,EESI)、PESI(Probeelectrospray ionization)、低温等离子体探针(Low-temperature plasma,LTP)，以及纸基电喷雾(Paper spray,PS)、木基电喷雾(Wooden-tip ESI)等。
[0004] 尽管常压敞开质谱技术为复杂基体样品的直接快速分析提供了一种有效的手段，其灵敏度在大多数情况下与常规的液相色谱质谱联用技术相当，有时甚至更低。然而，将复杂基体样品直接引入质谱进行分析，通常容易导致质谱图背景复杂，目标化合物的分析灵敏度不理想，不利于分析痕量目标化合物。因此，采用常压敞开质谱技术分析复杂生物和环境样品中的痕量目标物，仍是一项极具挑战的任务。
[0005] 微萃取常压敞开质谱联用技术的出现为解决以上问题提供了一种有效手段。如对于微量体积复杂基体样品中痕量分析物而言，LPME和AMS联用是一种高效的分析手段，将这两种方法联用，能够有效提高检测灵敏度、降低复杂基体的基体效应，同时又能实现复杂样品的直接、快速的分析。在众多联用分析方法中，有研究者提出了段塞流微萃取-纳升电喷雾(SFME-nanoESI-MS)技术，该技术采用一根带有纳声电喷雾尖端的毛细管进行萃取操作，将数微升的有机溶剂和数微升的复杂生物样品依次注入毛细管中，通过倾斜振摇数个循环进行快速萃取。萃取完成后，有机溶剂被推到玻璃毛细管的尖端，然后将一根不锈钢丝插 入到毛细管中并接触有机溶剂相，在不锈钢丝上施加一高压电场以诱导有机溶剂产生纳升电喷雾进行质谱分析。但该方法也存在一定的缺点，SFME-nanoESI-MS的萃取溶剂同时也是喷雾溶剂，这就使得有机溶剂的选择变得极为关键，其必须与生物流体样品不互溶，又对目标分析物具有良好的溶解性，还要适合于nanoESI-MS分析，能同时满足以上要求的有机溶剂非常有限，这就使得分析过程难以同时兼顾到萃取效率和离子化效果，从而导致分析方法灵敏度降低。基于以上背景，发展新型的微萃取与常压敞开质谱联用技术，开发复杂生物和环境复杂基体样品中痕量分析物的分析方法具有十分重要意义。
发明内容
[0006] 本发明目的之一在于提供一种SFME-PS-MS联用技术和系统，可以对微量体积复杂基体样品中痕量目标化合物进行直接、快速、原位、高通量分析。
[0007] 本方明的目的之二还在于提供一种利用SFME-PS-MS联用技术，直接、快速、原位分析样品中苯丙胺类毒品。
[0008] 本发明的目的通过以下技术手段实现：
[0009] 本发明提供了一种SFME-PS-MS技术，包含以下步骤：
[0010] S1)采用段塞流微萃取对样品进行萃取、富集；
[0011] S2)采用纸基电喷雾质谱对步骤S1)萃取后的萃取液进行分析。
[0012] 更具体地，
[0013] 段塞流微萃取包含以下步骤：依次将样品和萃取溶剂加入毛细管，然后倾斜振摇数次进行动态循环萃取，在振摇过程中，样品和萃取溶剂分别与玻璃毛细管的内壁反复摩擦并产生内循环，目标物随即在样品和萃取溶剂的界面进行快速的分配，萃取过程在数十秒内即可达到平衡。样品加入毛细管的方式包括但不限于虹吸或注射。
[0014] 纸基电喷雾质谱包含以下步骤：将步骤S1)萃取后的萃取液滴加纸上，待萃取溶剂挥干后，将纸的尖端靠近质谱入口，对纸施加直流高压电场，然后滴加喷雾溶剂到三角形纸，目标化合物在电场和喷雾溶剂的作用下解吸并进入质谱分析。
[0015] 段塞流微萃取毛细管的内径为0.5-0.9mm。
[0016] 毛细管的材质可以为玻璃、石英等；优选地，为玻璃材质，价格便宜，可一次性使用。
[0018] 纸靠近质谱入口时，尖端的一端靠近质谱入口。更进一步地，纸尖端与质谱入口的距离为5-10mm。
[0019] 对纸作用高压电场可以通过一导电端，如金属夹、金属镊子等夹住纸，然后对导电端施 加一直流高压电场，此时，高压电场会通过导电端作用于三角形纸上。然后滴加一定量的喷雾溶剂到三角形纸上，使目标化合物充分解吸，在高压电场的作用下带电并通过纸基表面的多孔网状结构向纸的尖端移动，在尖端形成泰勒锥，生成带电荷的喷雾液滴，进一步脱溶剂形成带电荷的气相离子，进入质量分析仪进行分析。
[0020] 本发明的SFME-PS-MS联用技术可以对液体基质中的痕量有机物进行分析，尤其是复杂液体基质中的微量有机物进行分析。所述的基质包含但不限于环境基质、生物基质、或者是液体的日化用品、液体饮料等，例如是全血、尿、唾液、牛奶、单个微小生物、化妆水、功能饮料等。
[0021] 本发明一个突出的优势在于，在复杂基体样品的分析中，能够保持高灵敏度和操作简便。近几年发展的LPME(液相微萃取)和AMS(常压敞开质谱)联用技术，如段塞流微萃取-纳升电喷雾(SFME-nanoESI-MS)技术，需采用纳升电喷雾毛细管萃取和分析样品，制作成本较高且容易堵塞。此外，SFME-nanoESI-MS的萃取溶剂同时也是喷雾溶剂，这就使得有机溶剂的选择变得极为关键，其必须与生物流体样品不互溶，又对目标分析物具有良好的溶解性，还要适合于nanoESI-MS分析，能同时满足以上要求的有机溶剂非常有限，这就使得分析过程难以同时兼顾到萃取效率和离子化效果，从而导致分析方法灵敏度降低。发明人将SFME-PS-MS与SFME-nanoESI-MS用于人体液中苯胺类毒品的分析(实施例3)，结果显示，目标化合物在SFME-nanoESI-MS谱图中的信号不如SFME-PS-MS理想，SFME-PS-MS灵敏度比SFME-nanoESI-MS至少提高了6倍。
[0022] 本发明还利用新开发的SFME-PS-MS技术，建立了一种苯丙胺类毒品的快速分析方法。
[0023] 本发明所述的苯丙胺类毒品选自苯丙胺、甲基苯丙胺、亚甲二氧基甲基苯丙胺、替苯丙胺、3,4-亚甲基二氧基乙基苯丙胺、N-甲基-1-(3,4-亚甲二氧基苯基)-2-丁胺、副甲氧基甲基苯丙胺、麻黄碱、甲基麻黄碱、卡西酮、甲卡西酮、氯胺酮中的一种或多种；优选地，为苯丙胺(AM)、甲基苯丙胺(MA)、亚甲二氧基甲基苯丙胺(MDMA)中的一种或几种。
[0024] 苯丙胺类毒品的分析方法包含以下步骤：
[0025] 1)依次将样品和萃取溶剂加入毛细管，然后振摇毛细管对样品进行萃取；
[0026] 2)萃取完成后，将萃取液加在带尖端的纸上，待萃取液挥干后，将纸的尖端对准质谱入口，然后对纸施加直流高压电场，滴加喷雾溶剂到纸上，目标化合物在电场和喷雾溶剂的作用下解吸并进入质谱仪进行分析。
[0027] 步骤1)中，样品的基质为液体样品；在本发明优选的实施例中，所述的样品为全血、体液或尿液中的一种。萃取溶剂选自乙酸乙酯、正丁醇、氯仿、甲苯或己烷中的一种或几种；优选的，为氯仿。所述的毛细管为一次性使用的玻璃毛细管，毛细管的内径为0.5-0.9mm。萃取的次数为2-20次；优选8-15次，更优选10次。萃取溶剂与样品的体积比为1:1[0028] 步骤2)中，所述的纸至少带有一尖端；优选地，所述的尖端为30°-60°锐角。在本发明一优选的实施例中，所述的纸为底边与高比为1:2的等腰三角形。纸最尖端与质谱入口的距离为5-10mm。直流高压电场的电压为2000-5000V，优选直流高压电场的电压为3500V。所述的喷雾溶剂为乙腈、甲醇、正丁醇、乙酸乙酯、丙酮、氯仿或它们与水的组合；优选地，为乙腈。
[0029] 苯丙胺类毒品，是中枢神经兴奋剂，长期滥用会对人体精神造成巨大损害，导致慢性精神障碍。此外苯丙胺类兴奋剂还能兴奋心血管系统，导致心肌细胞肥大、萎缩、变性、小血管内皮细胞损伤和小血管痉挛等，从而导致急性心肌缺血、心肌病和心律失常。目前，苯丙胺类毒品的检测主要参照国标GB/T 29636-2013《疑似毒品中甲基苯丙胺的气相色谱、高效液相色谱和气相色谱-质谱检验方法》。该标准检测时间长、成本高、需要经过复杂大量的样品前处理，严重影响监控的数量和频次，难以达到有效的监管效果。因此，建立血液和尿液等复杂基体中苯丙胺类毒品的SFME-PS-MS快速分析检测方法具有重要意义。
[0030] 本发明还提供了一种SFME-PS-MS分析系统，所述系统包括：
[0031] 样品中的有机物；
[0032] 纸，所述的纸用于作为分析样品的载体；
[0033] 导电端，所述的导电端可操作的与纸上经喷雾溶剂解吸的目标化合物作用，使目标化合物带电荷，并移向纸的尖端形成泰勒锥，生成带电荷的喷雾，并进一步去溶剂形成带电的目标化合物气相离子；
[0034] 质量分析仪，所述的质量分析仪可操作地藕接到所述的纸上，以接收目标化合物的离子。
[0035] 所述的毛细管的内径为0.5-0.9mm；所述毛细管的材质为玻璃、石英；优选地，为玻璃。在本发明优选的实施例中，所述的毛细管为一次性使用的玻璃毛细管。
[0036] 所述的纸至少带有一尖端；优选地，所述的尖端为30°-60°锐角。在本发明优选的实施例中，所述的纸为底边与高比为1:2的等腰三角形。
[0037] 所述的纸尖端与质谱仪的入口藕接；优选地，纸尖端与质谱口的距离为5-10mm。
[0038] 所述的导电端为不锈钢金属夹、不锈钢镊子；所述导电端作用于纸，导电端通电后对纸施加电场。
[0039] 本发明取得的有益效果：
[0040] 1)首次建立了SFME-PS-MS联用技术，并将其成功应用于微量体积复杂基体样品中痕量目标化合物的直接、快速分析，只需数微升的样品，即可在极短的时间内完成分析检测，无需复杂的前处理步骤和处理工具；
[0041] 2)SFME-PS-MS技术同时提高了SFME和PS-MS的分析性能，与PS-MS相比，提高 灵敏度1-3个数量级，并显著地降低了复杂样品分析的基体效应；
[0042] 3)萃取和质谱分析的有机溶剂选择相对独立，能最大限度地提高萃取和离子化效率，提高了分析灵敏度；
[0043] 4)使用一次性玻璃毛细管，无需制备有纳升电喷雾尖端的毛细管，降低分析成本；
[0044] 5)无需使用不锈钢丝插入样品到有机相进行电离，操作更为简便；
[0046] 图1段塞流微萃取-纸基电喷雾质谱联用分析过程
[0047] 图2萃取和解吸条件
[0048] a)萃取溶剂，5μL 50μg/L AM、MA和MDMA全血加标样品，萃取10次，喷雾溶剂乙腈；
[0049] b)萃取次数，5μL 50μg/L AM、MA和MDMA全血加标样品，萃取溶剂氯仿，喷雾溶剂乙腈；
[0050] c)喷雾溶剂，5μL 50μg/L AM、MA和MDMA全血加标样品，萃取溶剂氯仿，萃取10次[0051] 图3全血中样品中，AM、MA和MDMA的质谱图。
[0052] a)SFME-PS-MS分析5μL 50μg/L AM、MA和MDMA全血加标样品一级质谱图，500μg/L咖啡因加入到喷雾溶剂中。
[0053] b)AM二级质谱图；
[0054] c)MA二级质谱图；
[0055] d)MDMA二级质谱图。
[0056] 图4 AM、MA和MDMA的标准曲线
[0057] 图5 PS-MS分析AM、MA和MDMA全血加标样品
[0058] a)PS-MS分析5μL 50μg/L AM、MA和MDMA的全血加标样品一级质谱图，500μg/L咖啡因作为内标加入到喷雾溶剂中；
[0059] b)PS-MS十倍放大谱图。
[0060] 图6 SFME-nanoESI-MS分析AM、MA和MDMA的全血加标样品一级质谱图；萃取5μL 50μg/L AM、MA和MDMA的全血加标样品10次，5μL 500μg/L咖啡因氯仿溶液作为萃取/喷雾溶剂。
[0061] 图7 SFME-PS-MS分析AM、MA和MDMA尿液加标样品一级质谱图；萃取5μL 50μg/L AM、MA和MDMA尿液加标样品10次，5μL氯仿作为萃取溶剂，5μL 500μg/L 咖啡因乙腈溶液作为喷雾溶剂。
具体实施方式
[0063] 试剂：甲醇、乙腈为色谱纯(美国Burdick&Jackson公司)；丙酮、氯仿、乙酸乙酯、正己烷、甲苯、正丁醇为分析纯(广州化学试剂厂)；实验用水为超纯水，由超纯水设备(Mili-Q，美国)制备。
[0064] 标准物质：苯丙胺(Amphetamine,AM)、甲基苯丙胺(Methamphetamine,MA)、亚甲二氧基甲基苯丙胺(3,4-Methylenedioxy-N-methylamphetamine,MDMA)由广州市刑事科学技术研究所提供。红霉素(Erythromycin,ERY)、克拉霉素(Clarithromycin,CLA)、罗红霉素(Roxithromycin，ROX)、咖啡因(Caffeine)购自美国Sigma-Aldrich公司。d3-OFL和d7-ROX购自Toronto Research Chemicals公司。全氟辛烷磺酸(PFOS)和全氟辛酸(PFOA)购自美国Accustandard公司。13C4-PFOS和13C4-PFOA购自加拿大Wellington实验室。
[0066] 仪器设备：Orbitrap Elite离子阱-静电场轨道阱质谱(美国Thermo Fisher Scientific公司)
[0067] 实施例1SFME-PS-MS对血液、尿液中苯丙胺类毒品的快速分析
[0068] 本实施例选择了三种世界反兴奋剂机构(WADA)和联合国毒品和犯罪问题办事处(UNODC)优先控制的苯丙胺类毒品，即苯丙胺(AM)、甲基苯丙胺(MA)、亚甲二氧基甲基苯丙胺(MDMA)为研究对象，建立这三种苯丙胺类毒品在全血和尿液中的SFME-PS-MS分析方法。
[0069] 实验步骤：
[0070] 实验首先对各项参数进行优化。一般情况下，SFME-PS-MS的关键参数包括SFME萃取溶剂、SFME萃取次数、PS-MS喷雾溶剂。实验采用在全血样品中添加50μg/L的AM、MA和MDMA，研究不同条件对分析结果的影响。分析采用内标法，以500μg/L的咖啡因添加到喷雾溶剂作为内标物。
[0072] 在本实施例中，公开了乙酸乙酯、正丁醇、氯仿、甲苯和正己烷对质谱响应强度的影响。在这些可选的萃取溶剂中，氯仿呈现出尤为突出的效果，其对三种化合物的萃取结果均显著高于其他萃取溶剂，萃取效率约为是其他萃取溶剂的一倍或以上(图2a)。
[0073] 本发明还考察了不同的萃取次数(即，2、4、6、8、10、12、14、16、18和20次)，结果表明，三种化合物的质谱信号强度随着萃取次数的增加而提高，当萃取次数达到10次时，萃取达到动态平衡(图2b)。
[0074] 在本实施例中，公开了多种喷雾溶剂的实验效果，包括乙腈、甲醇、乙腈-水(1:1)、甲醇-水(1:1)、正丁醇、乙酸乙酯、丙酮和氯仿。尤其突出的是，乙腈作为喷雾溶剂(同时也是解吸溶剂)，所得到三个化合物的质谱信号均为最强(图2c)。
[0075] 采用0.9mm内径的玻璃毛细管进行SFME萃取，依次将5μL的样品和5μL的萃取溶剂(在本实施例中为氯仿)注射进毛细管内，将毛细管倾斜振摇10次进行萃取。所述的样品为血液、尿液。
[0076] SFME萃取后的萃取液直接滴加在三角形纸(高10mm底边长5mm)的中心位置，待溶剂挥干后，用镊子夹稳三角形纸并置于三维移动平台上，将三角形纸的尖端对准质谱入口，距离质谱入口5mm处。将一高压电场通过镊子施加于三角形纸上，并采用移液枪将5μL的喷雾溶剂(在本实施例中为乙腈)滴加到三角形纸上，进行目标化合物的解吸离子化和质谱分析。质谱分析采用离子阱-静电场轨道阱质谱或串联四极杆质谱或离子阱质谱进行。
[0077] 定性分析采用精确分子量实验和碰撞诱导解离实验进行。目标化合物的定性测定选择1个母离子和2个子离子进行，在相同实验条件下，母离子在样品中的精确分子量与标准溶液中对应的精确分子量偏差应在5ppm范围内，母离子同位素峰与母离子的丰度比在样品和标准溶液中的偏差应在20％范围内，2个子离子峰的个位以上m/z值在样品和标准溶液中应相同，满足这些条件则可判定为样品中存在对应的目标化合物。
[0078] 定量分析采用内标校正标准曲线法进行，加入内标化合物到喷雾溶剂中进行校准。将一系列浓度的目标化合物添加到样品中，分别配制成一系列不同浓度的加标样品，在优化的实验条件下进行分析，以目标化合物的浓度为横坐标，目标化合物与内标物的质谱信号强度比值(IAnalyte/IIS)为纵坐标，进行线性拟合，绘制标准曲线。
[0079] 标准曲线的制作：将一系列浓度(0.1、0.5、1、5、10和50μg/L)的AM、MA和MDMA加入到全血样品中建立标准曲线。使用咖啡因作为三种化合物的内标，将咖啡因添加到喷雾溶剂中，浓度为500μg/L。
[0080] 实验结果：
[0081] 通过对加标全血样品进行SFME-PS-MS分析，可观察到显著的AM、MA和MDMA信号(图3a)。AM准分子离子峰[AM+H]+的精确分子量为m/z 136.1117，分子式为C9H13N，误差-
2.76ppm；MA准分子离子峰[MA+H]+的精确分子量为m/z 150.1273，分子式为C10H15N，误差-
2.84ppm；MDMA准分子离子峰[MDMA+H]+的精确分子量为m/z194.1170，分子式为C11H15O2N，误差-2.86ppm。
2.76ppm；MA准分子离子峰[MA+H]+的精确分子量为m/z 150.1273，分子式为C10H15N，误差-
2.84ppm；MDMA准分子离子峰[MDMA+H]+的精确分子量为m/z194.1170，分子式为C11H15O2N，误差-2.86ppm。
[0082] [AM+H]+的二级质谱依次失去NH2和(C+CH3)碎片，得到m/z 119.0856和m/z +91.0542的离子峰，(图3b)；[MA+H] 的二级质谱依次失去(NH+CH3)和(C+CH3)的碎片，得到m/z 119.0855和m/z 91.0543的离子峰(图3c)；[MDMA+H]+的二级质谱依次失去(NH2+CH3)和(CH2)2的碎片，得到m/z 163.0758和m/z 135.0442的离子峰(图3d)。这些目标化合物的二级质谱与对照品标准溶液中对应化合物的二级质谱信息一致。
[0083] AM、MA和MDMA的线性相关系数(R2)≥0.9979。实验同时研究了所建立方法的检出限和定量限。研究结果表明：AM、MA和MDMA的检出限分别为16.9ng/L、14.2ng/L和22.4ng/L，定量限分别为56.0ng/L、47.1ng/L和74.3ng/L。在同样条件下进行6次平行萃取实验，同时萃取AM、MA和MDMA浓度均为10μg/L的全血加标样品，计算AM、MA和MDMA的RSD值分别为8.4％、10.3％和9.7％(n＝6)。因此，所建立的分析方法重复性良好。实验同时在10μg/L浓度水平进行了回收率试验，所测得的回收率在90-96％范围内，结果显示该方法具有良好的准确度。如表1和图4所示，AM、MA和MDMA在0.1-50μg/L范围内。分析方法具有良好的线性，AM、MA和MDMA的线性相关系数(R2)≥0.9979。AM、MA和MDMA的检出限分别为16.9ng/L、
14.2ng/L和22.4ng/L，定量限分别为56.0ng/L、47.1ng/L和74.3ng/L。在同样条件下进行6次平行萃取实验，同时萃取AM、MA和MDMA浓度均为10μg/L的全血加标样品，计算AM、MA和MDMA的RSD值分别为8.4％、10.3％和9.7％(n＝6)。因此，所建立的分析方法重复性良好。实验同时在10μg/L浓度水平进行了回收率试验，所测得的回收率在90-96％范围内，结果显示该方法具有良好的准确度。
14.2ng/L和22.4ng/L，定量限分别为56.0ng/L、47.1ng/L和74.3ng/L。在同样条件下进行6次平行萃取实验，同时萃取AM、MA和MDMA浓度均为10μg/L的全血加标样品，计算AM、MA和MDMA的RSD值分别为8.4％、10.3％和9.7％(n＝6)。因此，所建立的分析方法重复性良好。实验同时在10μg/L浓度水平进行了回收率试验，所测得的回收率在90-96％范围内，结果显示该方法具有良好的准确度。
[0084] 实施例2SFME-PS-MS和PS-MS分别用于全血中苯丙胺类毒品的分析
[0085] 为了比较SFME-PS-MS和PS-MS分析全血样品的灵敏度，将这两种方法分析同一个50μg/L AM、MA和MDMA的全血加标样品，采用500μg/L咖啡因乙腈溶液作为内标。
[0086] SFME-PS-MS的分析方法参见实施例1，PS-MS的分析方法参见J.Liu,H.Wang,N.E.Manicke,J.M.Lin,R.G.Cooks,Z.Ouyang,Anal.Chem.2010,82,2463–2471.。
[0087] PS-MS谱图仅可观察到非常微弱的AM、MA和MDMA质谱信号，伴随着大量的基体信号(图5)。而SFME-PS-MS谱图可见显著更高的目标化合物信号和较低的基体信号(图3a)。与PS-MS相比，SFME-PS-MS能显著提高全血中AM、MA和MDMA的分析灵敏度，降低基体效应，计算其对AM、MA和MDMA提高的灵敏度倍数分别为137±12、293±21和609±34倍(n＝6)。
[0088] 实施例3SFME-PS-MS和SFME-nanoESI-MS分别用于体液中苯丙胺类毒品的分析[0089] 为了比较SFME-PS-MS和SFME-nanoESI-MS分析全血样品中苯丙胺类毒品的性能， 将这两种方法分析同一个50μg/L AM、MA和MDMA的全血加标样品，采用500μg/L咖啡因乙腈溶液作为内标。
[0090] SFME-PS-MS的分析方法参见实施例1，SFME-nanoESI-MS的分析方法参见Y.Ren,M.N.McLuckey,J.Liu,Z.Ouyang,Angew.Chem.Int.Ed.2014,53,14124-14127。
[0091] 如图6所示，三个目标化合物在SFME-nanoESI-MS谱图中的信号比在PS-MS好，但不如SFME-PS-MS理想。SFME-nanoESI-MS方法中，氯仿为最佳的萃取/喷雾溶剂。由于氯仿的离子化效率比乙腈低，因而SFME-nanoESI-MS的灵敏度比SFME-PS-MS低。实验结果表明，SFME-PS-MS分析AM、MA和MDMA的灵敏度与SFME-nanoESI-MS比较，分别提高14±2、7±1和6±1倍。此外，SFME-nanoESI-MS采用纳升电喷雾毛细管萃取和分析样品，制作成本较高且容易堵塞。以上结果均表明，SFME-PS-MS更有利于复杂基体样品的分析。
[0092] 将SFME-PS-MS方法进一步用于分析尿液中三种苯丙胺类毒品。与PS-MS相比，SFME-PS-MS提高AM、MA和MDMA的分析灵敏度倍数分别为8±1、22±2和11±2倍(n＝6)。将一系列浓度的AM、MA和MDMA加入到尿液样品中建立标准曲线。使用咖啡因作为三种化合物的内标，将咖啡因添加到喷雾溶剂中，浓度为500μg/L。通过对加标尿液样品进行SFME-PS-MS分析，可观察到显著的AM、MA和MDMA信号(图7)。AM、MA和MDMA在0.1-50μg/L范围内，分析方2
法具有良好的线性，AM、MA和MDMA的线性相关系数(R)≥0.9987。实验同时研究了所建立方法的检出限和定量限。研究结果表明：AM、MA和MDMA的检出限分别为11.4、10.5和12.8ng/L，定量限分别为37.4、34.8和42.2ng/L。在同样条件下对10μg/L AM、MA和MDMA尿液加标样品平行萃取6份，计算AM、MA和MDMA的RSD值分别为5.9％、9.1％和7.2％(n＝6)，所建立的分析方法重复性良好。采用10μg/L的全血样品进行回收率试验，回收率在88％-97％范围内，结果显示该方法具有良好的准确度。
法具有良好的线性，AM、MA和MDMA的线性相关系数(R)≥0.9987。实验同时研究了所建立方法的检出限和定量限。研究结果表明：AM、MA和MDMA的检出限分别为11.4、10.5和12.8ng/L，定量限分别为37.4、34.8和42.2ng/L。在同样条件下对10μg/L AM、MA和MDMA尿液加标样品平行萃取6份，计算AM、MA和MDMA的RSD值分别为5.9％、9.1％和7.2％(n＝6)，所建立的分析方法重复性良好。采用10μg/L的全血样品进行回收率试验，回收率在88％-97％范围内，结果显示该方法具有良好的准确度。
[0093] 表1SFME-PS-MS分析全血和尿液中AM、MA和MDMA的方法学验证
[0094]
[0095]
[0096] a检出限和定量限：信噪比分别为3和10时相应的浓度
[0097] b全血/尿液样品中加入10μg/L的AM、MA和MDMA
[0098] c与PS-MS比较分析50μg/L AM、MA和MDMA的血/尿液加标样品 。
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