表没食子儿茶素（EGC）单体的分离纯化方法
专利汇可以提供表没食子儿茶素（EGC）单体的分离纯化方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种从绿茶提取物中分离纯化表没食子 儿茶素 单体 的方法，本发明方法以绿茶提取物为原料，经过 单宁 酶酶解， 吸附 树脂 柱色谱吸附后以含 水 乙醇 洗脱，收集富含表没食子儿茶素（EGC） 解吸 馏分，高效外循环浓缩回收乙醇,再用 反渗透 膜低温浓缩，结晶处理，最终 冷冻干燥 得到高纯度的表没食子儿茶素（EGC）单体。本发明方法简便，单体提取率及产品纯度高，制备周期短，成本低，适宜规模型工业化生产。，下面是表没食子儿茶素（EGC）单体的分离纯化方法专利的具体信息内容。
1.一种从绿茶提取物中分离纯化表没食子儿茶素单体的方法，其特征在于包括如下步骤：
（1）加入纯水溶解绿茶提取物茶多酚，配置成浓度为5%（w/v）的溶液，加入柠檬酸调节pH值 4.0～5.0，保持温度35～40℃，茶汤料液备用；
（2）按照茶汤料液0.02%（w/v）的重量加入单宁酶，静置酶解，间歇搅拌；离心过滤，取澄清液喷雾干燥，得到喷雾干粉；
（3）加入水溶解上述喷雾干粉配置成浓度为3%（w/v）的上柱料液，吸附树脂柱分离纯化，解吸溶剂为乙醇，高效外循环浓缩回收乙醇至酒精度<5，再用反渗透膜浓缩解吸馏分，将浓缩的解吸馏分离心、喷雾干燥，得到干燥产品；
（4）将上述干燥产品用3～4倍量（w/v）95%乙醇溶解，放置，结晶，将晶体冷冻干燥，得白色固体，即为表没食子儿茶素单体。
2.按照权利要求 1 所述的方法，其特征在于：第（2）步中所述单宁酶的酶活力为
200—500 U/mg。
3.按照权利要求2所述的方法，其特征在于：所述单宁酶为诺维信公司的 NS-33049，酶活力 228 U/mg；Fluka公司的Tannase，酶活力314U/ mg；或Kikkoman公司的Tannase，酶活力 500U/ mg产品之一。
4.按照权利要求 1 所述的方法，其特征在于：第（2）步中，加入单宁酶，静置酶解4小时，间歇30分钟搅拌5分钟；1000 r/min离心过滤，内衬200目绢布袋，取澄清液用离心喷雾塔喷雾干燥，控制进风温度160℃～180℃，排风温度70℃～80℃ 。
5. 按照权利要求1所述的方法，其特征在于：第（3）步所述的吸附树脂柱分离纯化，其中，树脂用量：40倍EGC粗品重量；上柱流速：1.0 BV/h；解吸溶剂：2BV 60%乙醇；解吸流速：1.0BV/h，反渗透膜浓缩时操作温度控制在40℃以下，进膜压力控制在15 Bar以下。
6.按照权利要求5所述的方法，其特征在于：所述吸附树脂为HP20、NKA-9、聚酰胺或HPD100其中之一。
7.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：第（4）步中，放置温度为4℃，结晶，滤纸常压过滤后将晶体冷冻干燥，产品首先降温至-40℃预冻结，然后开始抽真空，真空度至
30Pa时开始加热升华干燥，控制产品温度不超过20℃，干燥时长12～16h。
表没食子儿茶素（EGC）单体的分离纯化方法
技术领域
背景技术
1998,46(6):2143-2150）。2006年10月，美国食品和药物管理局(FDA)批准茶多酚作为新的处方药，用于局部（外部）治疗由人类乳头瘤病毒引起的生殖器疣，这是FDA根据1962年药品修正案条例首个批准上市的植物（草本）药（黄芳华. 从美国首个被批准植物药探讨中药药代动力学研究与评价策略[J].中国中药杂志, 2010, 35(7):932-935）。过去的二十年中，由于有关茶多酚/儿茶素的保健与药理功能研究的突破，不仅扩大了绿茶在国际市场上的份额，而且极大地推进了茶叶提取物产业的发展，为茶叶功能成分的研究与开发奠定了良好的产业与市场基础，目前，我国已经形成年产约5000吨茶多酚/儿茶素的产业规模。儿茶素粗品传统的提取分离工艺主要包括离子沉淀法、有机溶剂萃取法和吸附柱色谱法（黄思勇, 金显平, 康振兴, 干国平. 茶叶下脚料中茶多酚的提取纯化工艺研究 [J]. 湖北中医药大学学报, 2011, 13(4): 30-32；张盛，刘仲华，黄建安，刘爱玲，施兆鹏. 吸附树脂法制备高纯儿茶素的研究 [J]. 茶叶科学，2002，22（2）：125-130；胡莉娟. 绿茶中茶多酚的提取工艺研究 [J]. 云南农业大学学报, 2011, 26(3):426-429）。儿茶素药理保健功能研究与产业应用中最令人注目的是表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）、表没食子儿茶素（EGC，分子式C15H14O7）和表儿茶素没食子酸酯（ECG），因而成为儿茶素单体分离、纯化与临床应用研究的焦点。但是由于茶叶的成分复杂，从茶叶中制取高纯度的儿茶素单体具有相当难度。其技术难点是精细分离，同时还应防止有效物及茶叶赋有的天然风味不被破坏和损失，加工过程尽量采用低温。目前国内外比较成功的应用于EGCG单体分离制备的工艺主要包括高速逆流色谱萃取、模拟移动床色谱分离等技术（Zhang Ying, Shi Zhao-peng, Nie Hong-yong, et al. Preparative Isolation and Purification of Catechins from Green Tea Extract by Preparative Counter-current Chromatography [J]. Journal of Hunan Agricultural University (Natural Science), 2003, 29(5):
408-411, 417；黄永东，江和源，江用文，等. 传统SMB、Varicol和Partial-discard工艺分离纯化ECG和EGCG的比较研究[J]. 茶叶科学，2011，31（3）：201-210）。研究表明，EGC在诱导乳腺癌细胞凋亡（David Vergote, C´ecile Cren-Oliv´e, Val´erie Chopin, et al. (�)-Epigallocatechin (EGC) of green tea induces apoptosis of human breast cancer cells but not of their normal counterparts [J]. Breast Cancer Research and Treatment, 2002, 76: 195-201），食品抗氧化、抑菌上具有显著功效（Zhen-Yu Chen, Li-Ya Wang, Ping Tim Chan, et al. Antioxidative activity of green tea catechin extract compared with that of rosemary extract [J]. JOURNAL OF THE AMERICAN OIL CHEMISTS' SOCIETY, 1998, 75(9): 1141-1145），同时可降低茶饮料苦涩味，提高产品稳定性，为茶叶提取物深度开发与利用提供了新的途径。迄今，国内外尚未有EGC单体分离纯化方面的报道。
发明内容
（2）按照茶汤料液0.02%（w/v）的重量加入单宁酶，静置酶解，间歇搅拌；离心过滤，取澄清液喷雾干燥，得到喷雾干粉；
（3）加入水溶解上述喷雾干粉配置成浓度为3%（w/v）的上柱料液，吸附树脂柱分离纯化，解吸溶剂为乙醇，高效外循环浓缩回收乙醇至酒精度<5，再用反渗透膜浓缩解吸馏分，将浓缩后的解吸馏分离心、喷雾干燥得到干燥产品；
（4）将上述干燥产品用3~4倍量（w/v）95%乙醇溶解，放置，结晶，将晶体冷冻干燥，得白色固体，即为表没食子儿茶素单体。
160℃～180℃，排风温度70℃～80℃。
上述的方法，第（3）步所述的吸附树脂柱分离纯化，其中，树脂用量：40倍EGC粗品重量；上柱流速：1.0 BV/h；解吸溶剂：2BV 60%乙醇；解吸流速：1.0BV/h，收集乙醇解吸馏分，高效外循环浓缩回收乙醇至酒精度<5, 温度控制在45℃以下，真空度控制在-0.08Mpa以下，再用反渗透膜浓缩时操作温度控制在40℃以下，进膜压力控制在15 Bar以下；所述吸附树脂为HP20、NKA-9、聚酰胺或HPD100之一。
具体实施方式
（1）加入纯水溶解绿茶提取物95%茶多酚（95%茶多酚购自长沙三福生物科技有限公司，其中总儿茶素含量为76.50%，EGC含量为5.60%，EGCG含量为43.80%），配置成浓度为5%（w/v）的溶液，加入柠檬酸调节pH= 4.20，保持温度37+1℃，茶汤料液备用；
（2）按照茶汤料液0.02%（w/v）的重量加入单宁酶，静置酶解4小时，间歇30分钟搅拌
5分钟；1000 r/min三足离心机离心过滤，内衬200目绢布袋，取澄清液用离心喷雾塔喷雾干燥，控制进风温度160℃～180℃，排风温度70℃～80℃，一级旋风分离器每隔30分钟取出喷雾干粉。
（2）收集解吸馏分，高效外循环浓缩回收乙醇至酒精度<5,再采用反渗透膜系统进一步浓缩解吸馏分，反渗透膜操作温度控制在40℃以下，进膜压力控制在15 Bar以下（具体操作可参考：孙艳娟，朱跃进，李大伟，等. 膜分离技术在香菇速溶茶开发中的应用研究 [J].中国茶叶加工, 2010, (4): 42-45； 郑远斌，郁军，陈添顺，等.冷冻干燥工艺原理及相关设备装置 [J].速溶罗汉果粉的研制, 2010, 31(18): 450-452）。离心、喷雾干燥得到干燥产品。
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