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一种含蜂胶提取物的治疗老年痴呆的药物组合物及其制备方法和用途

阅读:858发布:2023-01-18

专利汇可以提供一种含蜂胶提取物的治疗老年痴呆的药物组合物及其制备方法和用途专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且本 发明 一种含蜂胶提取物的 治疗 老年痴呆的药物组合物及其制备方法和用途,提供了一种药物组合物,其特征在于,由以下重量份数的组分制成:蜂胶提取物15~25份、 银 杏叶提取物15~25份以及酸枣仁提取物5~15份,并采用现代化工艺制备了上述组合物中的各提取物,提取效率高,将上述组合物用在制备治疗老年痴呆的药物中,效果较好。,下面是一种含蜂胶提取物的治疗老年痴呆的药物组合物及其制备方法和用途专利的具体信息内容。

1.一种药物组合物,其特征在于,由以下重量份数的组分制成:蜂胶提取物15 25份、~
杏叶提取物15 25份以及酸枣仁提取物5 15份。
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2.根据权利要求1所述的药物组合物,其特征在于,由以下重量份数的组分制成:蜂胶提取物16 24份、银杏叶提取物16 24份以及酸枣仁提取物6 12份。
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3.根据权利要求2所述的药物组合物,其特征在于,由以下重量份数的组分制成:蜂胶提取物18 20份、银杏叶提取物18 20份以及酸枣仁提取物8 10份。
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4.根据权利要求1-3任一项所述的药物组合物,其特征在于,还含有药学上可接受的载体。
5.根据权利要求1-3任一项所述药物组合物的制备方法,其特征在于,按比例称取上述各提取物,分别粉碎、过筛,混合均匀后,填充胶囊即得;
其中,所述蜂胶提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤:
原料的预处理:蜂胶经过选除杂后,放入冷藏柜,进行冷冻,将冷冻后的蜂胶粉碎成颗粒,并过80目筛;
复合酶解:将步骤(1)所得蜂胶颗粒与一定量的复合酶溶液混合,在30 50℃下进行~
酶解,得复合酶解液;其中,所述蜂胶颗粒与复合酶水溶液的质量比为1:(5 10),所述复合~
酶水溶液的质量百分比浓度为2 5%,所述的复合酶由脂肪酶和果胶酶组成,二者质量比为~
(2 8):1;所述脂肪酶和果胶酶酶活分别为40IU/mg、60IU/mg,所述酶解时间为2 4小时;
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乙醇提取:在步骤(2)所得的复合酶解液中,逐步加入无水乙醇(V/V),使上述酶解液中乙醇浓度达到80 100%(V/V),然后浸泡1 3h,随后声波提取3 5h,所述超声提取的温度为~ ~ ~
40 50℃,超声功率为200W;过滤,除去不溶物,残渣反复提取3 5次,合并滤液得粗提液;
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精制:向步骤3)获得的粗提液中加入泊洛沙姆,所述蜂胶与泊洛沙姆质量比1:5 8,搅~
拌使其完全溶解,然后旋转蒸发回收乙醇至液体无醇味得精制液;
提取物的获得:将步骤4)获得的精制液以1 3 mL/min 上样于D101型大孔吸附树脂,吸~
附饱和2 4h后用蒸馏水洗脱至溶液无色,再用干树脂5 10倍质量的80%乙醇(V/V)以1 2 ~ ~ ~
mL/min 的速率洗脱;收集洗脱液,回收乙醇,干燥,即得蜂胶提取物;
其中,所述银杏叶提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤:
原料的预处理:将银杏叶粉碎成颗粒,并过80目筛;
复合酶解:将步骤(1)所得银杏叶颗粒与一定量的复合酶水溶液混合,在40 60℃下进~
行酶解,得复合酶解液;其中,所述银杏叶颗粒与复合酶水溶液的质量比为1:(10 20),所述~
的复合酶水溶液的质量百分比浓度为0.2 1%,所述的复合酶由脂酶、纤维素酶和果胶酶组~
成,三者质量比为(2 5):1:1;所述脂酶、纤维素酶和果胶酶酶活力分别为40IU/mg、45IU/~
mg、60IU/mg,所述酶解时间为1 3小时;
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(3)乙醇提取:在步骤(2)所得的复合酶解液中,逐步加入无水乙醇(V/V),使上述酶解液中乙醇浓度达到70 90%(V/V),然后浸泡1 3h,随后超声波提取1 3h,所述超声提取的温~ ~ ~
度为50 70℃,超声功率为185W;过滤,除去不溶物,残渣反复提取1 4次,合并滤液得粗提~ ~
液;
(4)精制:向步骤(3)获得的粗提液中加入泊洛沙姆,所述银杏叶与泊洛沙姆质量比1:
(3 7),搅拌使其完全溶解,然后旋转蒸发回收乙醇至液体无醇味得精制液;
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(5)提取物的获得:将步骤(4)获得的精制液pH调至5 7,以0.5 2 mL/min 上样于D101~ ~
型大孔吸附树脂,吸附饱和2 4h后,用蒸馏水洗脱至溶液无色,再用干树脂10 20倍质量、pH~ ~
为5 7的75%乙醇(V/V)以0.5 2 mL/min 的速率洗脱;收集洗脱液,回收乙醇,干燥,即得银~ ~
杏叶提取物;
其中,所述酸枣仁提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤:
酸枣仁经过风选除杂后,将其粉碎成80目的颗粒,然后加入酸枣仁质量5 15倍量乙醇~
和十二烷基硫酸混合液进行超声提取;其中,乙醇浓度为60 80%(V/V),十二烷基硫酸钠~
浓度为15~25 mg/mL,超声提取的功率为200W、温度50 70℃、提取时间为1 2 h;然后过滤,~ ~
然后重复上述提取、过滤的操作2 4次,合并滤液、减压浓缩后,用水饱和正丁醇溶液萃取,~
静置10 15h;分离出正丁醇相,经减压浓缩、冷冻干燥后得酸枣仁提取物。
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6.权利要求1-3任一项所述药物组合物用在制备预防和/或治疗老年痴呆的药物中。

说明书全文

一种含蜂胶提取物的治疗老年痴呆的药物组合物及其制备方

法和用途

[0001]

技术领域

背景技术

[0003] 阿尔茨海默症是老年人中常见的一种原发性退行性脑部疾病,临床表现为智下降、言语交流困难、情感障碍和行动障碍等,据统计,我国>65岁老年痴呆症年发病率约为24%,全球老年痴呆症患者总数约3560 万例,且随着老年人口的快速增长,老年痴呆的发病也必然增加,严重影响老年人的身心健康,同时也增加社会和家庭的负担,阿尔茨海默症患者大幅剧增,成为老龄化社会一个突出的社会问题目前市场上针对老年人改善记忆的中药药物,或配方不合理、或提取方法不恰当,或剂型服用不方便,导致人体吸收效果不好,以致对记忆力的改善效果不明显。因此,亟待需研发一种组方配伍合理、活性成分含量较高的药物组合物。

发明内容

[0004] (一)发明目的:本发明的目的旨在提供一种组方合理有效、以现代提取工艺为依托,具有增强记忆力、提高认知作用的药物组合物。
[0005] 一种预防老年痴呆的药物组合物,由以下重量份数的组分制成:蜂胶提取物15 25~份、杏叶提取物15 25份以及酸枣仁提取物5 15份。
~ ~
[0006] 优选的,所述药物组合物由以下重量份数的组分制成:蜂胶提取物16 24份、银杏~叶提取物16 24份以及酸枣仁提取物6 12份。
~ ~
[0007] 优选的,所述药物组合物由以下重量份数的组分制成:蜂胶提取物18 20份、银杏~叶提取物18 20份以及酸枣仁提取物8 10份。
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[0008] 本发明还提供一种预防老年痴呆的药物组合物,包括上述任一种组合物以及食品上可接受的载体。
[0009] 本发明还提供上述任一种预防老年痴呆的药物组合物的制备方法,其特征在于,按比例称取上述各提取物,分别粉碎、过筛,混合均匀后,填充胶囊即得;其中,所述蜂胶提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤:
(1)原料的预处理:蜂胶经过选除杂后,放入冷藏柜,进行冷冻,将冷冻后的蜂胶粉碎成颗粒,并过80目筛;
(2)复合酶解:将步骤(1)所得蜂胶颗粒与一定量的复合酶溶液混合,在30 50℃下进~
行酶解,得复合酶解液;其中,所述蜂胶颗粒与复合酶水溶液的质量比为1:(5 10),所述复~
合酶水溶液的质量百分比浓度为2 5%,复合酶由脂肪酶和果胶酶组成,二者质量比为(2~ ~
8):1;所述脂肪酶和果胶酶酶活力分别为40IU/mg、60IU/mg,所述酶解时间为2 4小时;
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(3)乙醇提取:在步骤(2)所得的复合酶解液中,逐步加入无水乙醇(V/V),使上述酶解液中乙醇浓度达到80 100%(V/V),然后浸泡1 3h,随后声波提取3 5h,所述超声提取的温~ ~ ~
度为40 50℃,超声功率为200W;过滤,除去不溶物,残渣反复提取3 5次,合并滤液得粗提~ ~
液;
(4)精制:向步骤3)获得的粗提液中加入泊洛沙姆,所述蜂胶与泊洛沙姆质量比1:5 8,~
搅拌使其完全溶解,然后旋转蒸发回收乙醇至液体无醇味得精制液;
(5)提取物的获得:将步骤4)获得的精制液以1 3 mL/min 上样于D101型大孔吸附树~
脂,吸附饱和2 4h后用蒸馏水洗脱至溶液无色,再用干树脂5 10倍质量的80%乙醇(V/V)以~ ~
1.5 2 mL/min 的速率洗脱;收集洗脱液,回收乙醇,干燥,即得蜂胶提取物。
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[0010] 优选的,所述步骤(2)中,酶解温度为45℃,蜂胶颗粒与复合酶水溶液的质量比为1:8,所述复合酶水溶液的质量百分比浓度为3.5%,所述的复合酶由脂肪酶和果胶酶组成,二者质量比为6:1;所述酶解时间为3小时;
优选的,所述步骤(3)中,乙醇浓度为95%(V/V),浸泡时间为2h,超声波提取时间为4h、温度为45℃;残渣反复提取4次;
优选的,所述步骤(4)中,蜂胶与泊洛沙姆质量比1:6;
优选的,所述步骤5)中,上样流速为1.5mL/min,吸附时间为3h,洗脱剂用量为树脂用量的8倍,洗脱速率为1.6mL/min。
[0011] 其中,所述银杏叶提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤:(1)原料的预处理:将银杏叶粉碎成颗粒,并过80目筛;(2)复合酶解:将步骤(1)所得银杏叶颗粒与一定量的复合酶水溶液混合,在40 60℃下进行酶解,得复合酶解液;其中,所述~
银杏叶颗粒与复合酶水溶液的质量比为1:(10 20),所述的复合酶水溶液的质量百分比浓~
度为0.2 1%,所述的复合酶由脂酶、纤维素酶和果胶酶组成,三者质量比为(2 5):1:1;所~ ~
述脂酶、纤维素酶和果胶酶酶活力分别为40IU/mg、45IU/mg、60IU/mg,所述酶解时间为1 3~
小时;(3)乙醇提取:在步骤2)所得的复合酶解液中,逐步加入无水乙醇(V/V),使上述酶解液中乙醇浓度达到70 90%(V/V),然后浸泡1 3h,随后超声波提取1 3h,所述超声提取的温~ ~ ~
度为50 70℃,超声功率为185W;过滤,除去不溶物,残渣反复提取1 4次,合并滤液得粗提~ ~
液;(4)精制:向步骤(3)获得的粗提液中加入泊洛沙姆,所述银杏叶与泊洛沙姆质量比1:3~
7,搅拌使其完全溶解,然后旋转蒸发回收乙醇至液体无醇味得精制液;(5)提取物的获得:
将步骤(4)获得的精制液pH调至5 7,以0.5 2 mL/min 上样于D101型大孔吸附树脂,吸附饱~ ~
和2 4h后,用蒸馏水洗脱至溶液无色,再用干树脂10 20倍质量、pH为5 7的75%乙醇(V/V)以~ ~ ~
0.5 2 mL/min 的速率洗脱;收集洗脱液,回收乙醇,干燥,即得银杏叶提取物;
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优选的,所述步骤(2)中,酶解温度为50℃;银杏叶颗粒与复合酶水溶液的质量比为1:
15;复合酶水溶液的质量百分比浓度为0.5%;所述的复合酶由纤维素酶和果胶酶组成,三者质量比为3:1:1;所述酶解时间为2小时;
优选的,所述步骤(3)中,所述酶解液中乙醇浓度达到80%(V/V);所述浸泡时间为2h,提取时间为2h,温度为60℃,残渣反复提取3次;
优选的,所述步骤(4)中,所述银杏叶与泊洛沙姆质量比1:5;
优选的,所述步骤(5)中,精制液pH调至6,上样速率1 mL/min,饱和时间为3h;洗脱剂用量为树脂用量的15倍,洗脱液的pH为6,洗脱速率为1 mL/min。
[0012] 其中,所述酸枣仁提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤:酸枣仁经过风选除杂后,将其粉碎成80目的颗粒,然后加入酸枣仁质量5 15倍量乙醇~
和十二烷基硫酸混合液进行超声提取;其中,乙醇浓度为60 80%(V/V),十二烷基硫酸钠~
浓度为15~25 mg/mL,超声提取的功率为200W、温度50 70℃、提取时间为1 2 h;然后过滤,~ ~
然后重复上述提取、过滤的操作2 4次,合并滤液、减压浓缩后,用水饱和正丁醇溶液萃取,~
静置10 15h;分离出正丁醇相,经减压浓缩、冷冻干燥后得酸枣仁提取物;
~
优选的,所述提取用乙醇的用量为酸枣仁质量的10倍量;乙醇浓度为70%(V/V),十二烷基硫酸钠浓度为20 mg/mL,超声提取的温度60℃,提取时间为1.5 h;重复上述提取、过滤的操作3次;萃取静置的时间为12h。
[0013] 本发明还提供一种用途,上述任一种药物组合物用在制备预防和/或老年痴呆的药物中。
[0014] 有益效果与现有技术相比,本发明体现的技术优点体现在以下几个方面:
(1)本发明采用蜂胶、银杏叶、酸枣仁复配的组合物,通过实验筛选出最为合适的组合比例,达到了较好的延缓脑部衰老、增强记忆力的保健功效。
[0015] 蜂胶(propolis)是蜜蜂植物芽孢或树干破皮伤处采集来的树脂(树胶),并混入蜜蜂上颚腺的分泌物,与蜂蜡、少量花粉等加工而成的一种具有芳香气味和黏性的胶状固体物质。蜂胶是蜜蜂用于维持整个群体健康的有效物质,一个5 6万只的蜂群一年只能生产~蜂胶100—150g,因此被誉为“紫色黄金”。近年来的研究证明,蜂胶所含有的丰富而独特的生物活性物质,使其具有抗菌、消炎、止痒、抗化、抗衰老、增强记忆力、免疫、降血糖、降血脂、抗肿瘤等多种功能,对人体有着广泛的医疗、保健作用,是一种具有较高保健功能的产品。
[0016] 酸枣仁为鼠李科植物酸枣(Ziziphus jujube Mill)的干燥成熟种子,主产于河北、陕西、辽宁、河南等地。酸枣仁是中医安神之要药,用于虚烦、失眠、心悸、体虚多汗诸症有显著疗效,而且具有补肝、宁心、敛汗、生津的作用,《神农本草经》将其列为上品,《本草纲目》将其列为本部类,《中药学》列为养心安神类药。现代医学研究也表明,酸枣仁有镇静催眠作用。
[0017] 银杏叶为银杏科植物银杏 Ginkgo biloba L.的干燥叶。 其叶、根、果均可作药用,具有化湿止泻、益心敛等功效。其中叶的要用价值较高,具有抗氧化、改善心脑血管循环、延缓衰老、防治痴呆、提高机体免疫力等的多种保健和药用价值。
[0018] 本发明通过对数十种中药材进行组方和筛选,选出较为合适的上述三种进行组方,功效彼此增益,达到协同增效,具有良好的防治记忆力减退、安神健脑的功效。
[0019] 首先,本发明采用酶解辅助超声提取法提取蜂胶、银杏叶中的活性成分。首先,酶解方法温和,不使用过多的有机溶剂,提取效率较高,仅使用较少的酶就能达到破壁的作用,不引入过多杂质,环保清洁。另外,本发明筛选出最为恰当的复合酶组合物和比例,能够显著提高提取效率。
[0020] 其次,蜂胶、银杏叶中的主要活性成分为黄,酸枣仁中主要活性成分为皂苷,在水中溶解度较低,在有机溶剂中溶解度较高,但是避免使用过多的有机溶剂以提高收率,向提取混合液中加入表面活性剂可以增加活性成分的溶解度,有助于提高溶剂的提取率。本发明通过实验,筛选出最适合组分的表面活性剂及其用量。同时,减少有机溶剂的用量具有环保效果。

具体实施方式

[0021] 为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明了,下面结合具体实施方式,对本发明进一步详细说明。应该理解,这些描述只是示例性的,而并非要限制本发明的范围。显然,所描述的实施例是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
[0022] (一)实施例1、实施例1
一种药物组合物,由以下重量份数的组分制成:蜂胶提取物18克、银杏叶提取物18克以及酸枣仁提取物9克;按比例称取上述各提取物,分别粉碎成颗粒、过80目筛,混合均匀后,填充胶囊即得;
其中,所述蜂胶提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤:
(1)原料的预处理:蜂胶经过风选除杂后,放入冷藏柜,进行冷冻,将冷冻后的蜂胶粉碎成颗粒,并过80目筛;(2)复合酶解:将步骤(1)所得蜂胶颗粒与一定量的复合酶水溶液混合,在45℃下进行酶解,得复合酶解液;其中,所述蜂胶颗粒与复合酶水溶液的质量比为1:
8,所述复合酶水溶液的质量百分比浓度为3.5%,所述的复合酶中脂肪酶:果胶酶组成二者质量比为6:1;所述脂肪酶和果胶酶酶活力分别为40IU/mg、60IU/mg,所述酶解时间为3小时;(3)乙醇提取:在步骤(2)所得的复合酶解液中,逐步加入无水乙醇,使上述酶解液中乙醇浓度达到95%(V/V),然后浸泡2h,随后超声波提取4h,所述超声提取的温度为45℃,超声功率为200W;过滤,除去不溶物,残渣反复提取4次,合并滤液得粗提液;(4)精制:向步骤(3)获得的粗提液中加入泊洛沙姆188,所述蜂胶与泊洛沙姆质量比1:6,搅拌使其完全溶解,然后旋转蒸发回收乙醇至液体无醇味得精制液;5)提取物的获得:将步骤(4)获得的精制液以
1.5mL/min 上样于D101型大孔吸附树脂,吸附饱和3h后,用蒸馏水洗脱至溶液无色,再用干树脂8倍质量的80%乙醇(V/V)以1.6 mL/min 的速率洗脱;收集洗脱液,回收乙醇,干燥,即得蜂胶提取物。
[0023] 其中,所述银杏叶提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤:原料的预处理:将银杏叶粉碎成颗粒,并过80目筛;(2)复合酶解:将步骤(1)所得银杏叶颗粒与一定量的复合酶水溶液混合,在50℃下进行酶解,得复合酶解液;其中,所述银杏叶颗粒与复合酶水溶液的质量比为1:15,所述的复合酶水溶液的质量百分比浓度为0.5%,所述的复合酶由脂酶、纤维素酶和果胶酶组成,三者质量比为3:1:1;所述脂酶、纤维素酶和果胶酶酶活力分别为40IU/mg、45IU/mg、60IU/mg,所述酶解时间为2小时;(3)乙醇提取:在步骤(2)所得的复合酶解液中,逐步加入无水乙醇(V/V),使上述酶解液中乙醇浓度达到80%(V/V),然后浸泡2h,随后超声波提取2h,所述超声提取的温度为60℃,超声功率为185W;过滤,除去不溶物,残渣反复提取3次,合并滤液得粗提液;(4)精制:向步骤(3)获得的粗提液中加入泊洛沙姆,所述银杏叶与泊洛沙姆质量比1:5,搅拌使其完全溶解,然后旋转蒸发回收乙醇至液体无醇味得精制液;(5)提取物的获得:将步骤(4)获得的精制液pH调至6,以
1mL/min 上样于D101型大孔吸附树脂,吸附饱和3h后,用蒸馏水洗脱至溶液无色,再用干树脂15倍质量、pH为6的75%乙醇(V/V)以1 mL/min 的速率洗脱;收集洗脱液,回收乙醇,干燥,即得银杏叶提取物;
其中,所述酸枣仁提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤:
酸枣仁经过风选除杂后,将其粉碎成80目的颗粒,然后加入酸枣仁质量10倍量乙醇和十二烷基硫酸钠混合液进行超声提取;其中,乙醇浓度为70%(V/V),十二烷基硫酸钠浓度为
20mg/mL,超声提取的功率为200W、温度60℃、提取时间为1.5 h;然后过滤,然后重复上述提取、过滤的操作3次,合并滤液、减压浓缩后,用水饱和正丁醇溶液萃取,静置12h;分离出正丁醇相,经减压浓缩、冷冻干燥后得酸枣仁提取物。
[0024] 2、实施例2一种药物组合物,由以下重量份数的组分制成:蜂胶提取物20克、
银杏叶提取物20克以及酸枣仁提取物10克。按比例称取上述各提取物,分别粉碎、过80目筛,混合均匀后,填充胶囊即得。
[0025] 本发明还提供上述任一种预防老年痴呆的药物组合物的制备方法,其特征在于,按比例称取上述各提取物,分别粉碎、过筛,混合均匀后,填充胶囊即得;其中,所述蜂胶提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤:
(1)原料的预处理:蜂胶经过风选除杂后,放入冷藏柜,进行冷冻,将冷冻后的蜂胶粉碎成颗粒,并过80目筛;
(2)复合酶解:将步骤(1)所得蜂胶颗粒与一定量的复合酶水溶液混合,在30℃下进行酶解,得复合酶解液;其中,所述蜂胶颗粒与复合酶水溶液的质量比为1:5,所述复合酶水溶液的质量百分比浓度为2%,所述的复合酶中脂肪酶:果胶酶组成二者质量比为2:1;所述脂肪酶和果胶酶酶活力分别为40IU/mg、60IU/mg,所述酶解时间为2小时;
(3)乙醇提取:在步骤(2)所得的复合酶解液中,逐步加入无水乙醇(V/V),使上述酶解液中乙醇浓度达到80%(V/V),然后浸泡1,随后超声波提取3h,所述超声提取的温度为40℃,超声功率为200W;过滤,除去不溶物,残渣反复提取3次,合并滤液得粗提液;
(4)精制:向步骤(3)获得的粗提液中加入泊洛沙姆,所述蜂胶与泊洛沙姆质量比1:5,搅拌使其完全溶解,然后旋转蒸发回收乙醇至液体无醇味得精制液;
(5)提取物的获得:将步骤(4)获得的精制液以1 mL/min 上样于D101型大孔吸附树脂,吸附饱和2h后用蒸馏水洗脱至溶液无色,再用干树脂5倍质量的80%乙醇(V/V)以1.5mL/min 的速率洗脱;收集洗脱液,回收乙醇,干燥,即得蜂胶提取物。
[0026] 其中,所述银杏叶提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤:原料的预处理:将银杏叶粉碎成颗粒,并过80目筛;(2)复合酶解:将步骤(1)所得银杏叶颗粒与一定量的复合酶水溶液混合,在40℃下进行酶解,得复合酶解液;其中,所述银杏叶颗粒与复合酶水溶液的质量比为1:10,所述的复合酶水溶液的质量百分比浓度为0.2%,所述的复合酶由脂酶、纤维素酶和果胶酶组成,三者质量比为2:1:1;所述脂酶、纤维素酶和果胶酶酶活力分别为40IU/mg、45IU/mg、60IU/mg,所述酶解时间为1小时;(3)乙醇提取:在步骤(2)所得的复合酶解液中,逐步加入无水乙醇(V/V),使上述酶解液中乙醇浓度达到70%(V/V),然后浸泡1h,随后超声波提取1h,所述超声提取的温度为50℃,超声功率为185W;过滤,除去不溶物,残渣反复提取1次,合并滤液得粗提液;(4)精制:向步骤(3)获得的粗提液中加入泊洛沙姆,所述银杏叶与泊洛沙姆质量比1:3,搅拌使其完全溶解,然后旋转蒸发回收乙醇至液体无醇味得精制液;(5)提取物的获得:将步骤(4)获得的精制液pH调至5,以0.5 mL/min 上样于D101型大孔吸附树脂,吸附饱和2h后,用蒸馏水洗脱至溶液无色,再用干树脂10倍质量、pH为5的75%乙醇(V/V)以0.5mL/min 的速率洗脱;收集洗脱液,回收乙醇,干燥,即得银杏叶提取物;
其中,所述酸枣仁提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤:
酸枣仁经过风选除杂后,将其粉碎成80目的颗粒,然后加入酸枣仁质量5倍量乙醇和十二烷基硫酸钠混合液进行超声提取;其中,乙醇浓度为60%(V/V),十二烷基硫酸钠浓度为15 mg/mL,超声提取的功率为200W、温度50℃、提取时间为1h;然后过滤,然后重复上述提取、过滤的操作2次,合并滤液、减压浓缩后,用水饱和正丁醇溶液萃取,静置10h;分离出正丁醇相,经减压浓缩、冷冻干燥后得酸枣仁提取物。
[0027] 3、实施例3一种药物组合物,由以下重量份数的组分制成:蜂胶提取物15克、
银杏叶提取物15克以及酸枣仁提取物5克。按比例称取上述各提取物,分别粉碎、过80目筛,混合均匀后,填充胶囊即得。
[0028] 本发明还提供上述任一种预防老年痴呆的药物组合物的制备方法,其特征在于,按比例称取上述各提取物,分别粉碎、过筛,混合均匀后,填充胶囊即得;其中,所述蜂胶提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤:
(1)原料的预处理:蜂胶经过风选除杂后,放入冷藏柜,进行冷冻,将冷冻后的蜂胶粉碎成颗粒,并过80目筛;(2)复合酶解:将步骤(1)所得蜂胶颗粒与一定量的复合酶水溶液混合,在50℃下进行酶解,得复合酶解液;其中,所述蜂胶颗粒与复合酶水溶液的质量比为1:
10,所述复合酶水溶液的质量百分比浓度为5%,所述的复合酶中脂肪酶:果胶酶组成二者质量比为8:1;所述脂肪酶和果胶酶酶活力分别为40IU/mg、60IU/mg,所述酶解时间为4小时;(3)乙醇提取:在步骤(2)所得的复合酶解液中,逐步加入无水乙醇(V/V),使上述酶解液中乙醇浓度达到90%(V/V),然后浸泡3h,随后超声波提取5h,所述超声提取的温度为50℃,超声功率为200W;过滤,除去不溶物,残渣反复提取5次,合并滤液得粗提液;(4)精制:向步骤(3)获得的粗提液中加入泊洛沙姆,所述蜂胶与泊洛沙姆质量比1:8,搅拌使其完全溶解,然后旋转蒸发回收乙醇至液体无醇味得精制液;(5)提取物的获得:将步骤(4)获得的精制液以3 mL/min 上样于D101型大孔吸附树脂,吸附饱和4h后用蒸馏水洗脱至溶液无色,再用干树脂10倍质量的80%乙醇(V/V)以2 mL/min 的速率洗脱;收集洗脱液,回收乙醇,干燥,即得蜂胶提取物。
[0029] 其中,所述银杏叶提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤:原料的预处理:将银杏叶粉碎成颗粒,并过80目筛;(2)复合酶解:将步骤(1)所得银杏叶颗粒与一定量的复合酶水溶液混合,在60℃下进行酶解,得复合酶解液;其中,所述银杏叶颗粒与复合酶水溶液的质量比为1:20,所述的复合酶水溶液的质量百分比浓度为1%,所述的复合酶由脂酶、纤维素酶和果胶酶组成,三者质量比为5:1:1;所述脂酶、纤维素酶和果胶酶酶活力分别为40IU/mg、45IU/mg、60IU/mg,所述酶解时间为3小时;(3)乙醇提取:在步骤(2)所得的复合酶解液中,逐步加入无水乙醇(V/V),使上述酶解液中乙醇浓度达到90%(V/V),然后浸泡3h,随后超声波提3h,所述超声提取的温度为70℃,超声功率为185W;过滤,除去不溶物,残渣反复提取4次,合并滤液得粗提液;(4)精制:向步骤(3)获得的粗提液中加入泊洛沙姆,所述银杏叶与泊洛沙姆质量比1:7,搅拌使其完全溶解,然后旋转蒸发回收乙醇至液体无醇味得精制液;(5)提取物的获得:将步骤(4)获得的精制液pH调至7,以2 mL/min 上样于D101型大孔吸附树脂,吸附饱和4h后,用蒸馏水洗脱至溶液无色,再用干树脂
120倍质量、pH为7的75%乙醇(V/V)以2 mL/min 的速率洗脱;收集洗脱液,回收乙醇,干燥,即得银杏叶提取物。
[0030] 其中,所述酸枣仁提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤:酸枣仁经过风选除杂后,将其粉碎成80目的颗粒,然后加入酸枣仁质量15倍量乙醇和十二烷基硫酸钠混合液进行超声提取;其中,乙醇浓度为80%(V/V),十二烷基硫酸钠浓度为
25 mg/mL,超声提取的功率为200W、温度70℃、提取时间为2 h;然后过滤,然后重复上述提取、过滤的操作4次,合并滤液、减压浓缩后,用水饱和正丁醇溶液萃取,静置15h;分离出正丁醇相,经减压浓缩、冷冻干燥后得酸枣仁提取物;
4、实施例4
一种药物组合物,由以下重量份数的组分制成:蜂胶提取物25克、
银杏叶提取物25克以及酸枣仁提取物15克。按比例称取上述各提取物,分别粉碎、过80目筛,混合均匀后,填充胶囊即得。其中,所述蜂胶、银杏叶、酸枣仁提取物的制备方法同实施例1。
[0031] 5、实施例5一种药物组合物,由以下重量份数的组分制成:蜂胶提取物16克、
银杏叶提取物16克以及酸枣仁提取物12克。按比例称取上述各提取物,分别粉碎、过80目筛,混合均匀后,填充胶囊即得。其中,所述蜂胶、银杏叶、酸枣仁提取物的制备方法同实施例1。
[0032] 6、对比例1一种药物组合物,由以下重量份数的组分制成:蜂胶提取物18克、
银杏叶提取物18克。按比例称取上述各提取物,分别粉碎成颗粒、过80目筛,混合均匀后,填充胶囊即得;
其中,所述蜂胶提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤:(1)原料的预处理:蜂胶经过风选除杂后,放入冷藏柜,进行冷冻,将冷冻后的蜂胶粉碎成颗粒,并过80目筛;(2)复合酶解:将步骤(1)所得蜂胶颗粒与一定量的复合酶水溶液混合,在45℃下进行酶解,得复合酶解液;其中,所述蜂胶颗粒与复合酶水溶液的质量比为1:8,所述复合酶水溶液的质量百分比浓度为3.5%,所述的复合酶中脂肪酶:果胶酶组成二者质量比为6:1;所述脂肪酶和果胶酶酶活力分别为40IU/mg、60IU/mg,所述酶解时间为3小时;(3)乙醇提取:在步骤(2)所得的复合酶解液中,逐步加入无水乙醇,使上述酶解液中乙醇浓度达到95%(V/V),然后浸泡
2h,随后超声波提取4h,所述超声提取的温度为45℃,超声功率为200W;过滤,除去不溶物,残渣反复提取4次,合并滤液得粗提液;(4)精制:向步骤(3)获得的粗提液中加入泊洛沙姆
188,所述蜂胶与泊洛沙姆质量比1:6,搅拌使其完全溶解,然后旋转蒸发回收乙醇至液体无醇味得精制液;5)提取物的获得:将步骤(4)获得的精制液以1.5mL/min 上样于D101型大孔吸附树脂,吸附饱和3h后,用蒸馏水洗脱至溶液无色,再用干树脂8倍质量的80%乙醇(V/V)以1.6 mL/min 的速率洗脱;收集洗脱液,回收乙醇,干燥,即得蜂胶提取物;
其中,所述银杏叶提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤:(1)原料的预处理:将银杏叶粉碎成颗粒,并过80目筛;(2)复合酶解:将步骤(1)所得银杏叶颗粒与一定量的复合酶水溶液混合,在50℃下进行酶解,得复合酶解液;其中,所述银杏叶颗粒与复合酶水溶液的质量比为1:15,所述的复合酶水溶液的质量百分比浓度为0.5%,所述的复合酶由脂酶、纤维素酶和果胶酶组成,三者质量比为3:1:1;所述脂酶、纤维素酶和果胶酶酶活力分别为
40IU/mg、45IU/mg、60IU/mg,所述酶解时间为2小时;(3)乙醇提取:在步骤(2)所得的复合酶解液中,逐步加入无水乙醇(V/V),使上述酶解液中乙醇浓度达到80%(V/V),然后浸泡2h,随后超声波提取2h,所述超声提取的温度为60℃,超声功率为185W;过滤,除去不溶物,残渣反复提取3次,合并滤液得粗提液;(4)精制:向步骤(3)获得的粗提液中加入泊洛沙姆,所述银杏叶与泊洛沙姆质量比1:5,搅拌使其完全溶解,然后旋转蒸发回收乙醇至液体无醇味得精制液;(5)提取物的获得:将步骤(4)获得的精制液pH调至6,以1mL/min 上样于D101型大孔吸附树脂,吸附饱和3h后,用蒸馏水洗脱至溶液无色,再用干树脂15倍质量、pH为6的75%乙醇(V/V)以1 mL/min 的速率洗脱;收集洗脱液,回收乙醇,干燥,即得银杏叶提取物。
[0033] 7、对比例2一种药物组合物,由以下重量份数的组分制成:蜂胶提取物18克和酸枣仁提取物9克。
按比例称取上述各提取物,分别粉碎成颗粒、过80目筛,混合均匀后,填充胶囊即得;
其中,所述蜂胶提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤:
(1)原料的预处理:蜂胶经过风选除杂后,放入冷藏柜,进行冷冻,将冷冻后的蜂胶粉碎成颗粒,并过80目筛;(2)复合酶解:将步骤(1)所得蜂胶颗粒与一定量的复合酶水溶液混合,在45℃下进行酶解,得复合酶解液;其中,所述蜂胶颗粒与复合酶水溶液的质量比为1:
8,所述复合酶水溶液的质量百分比浓度为3.5%,所述的复合酶中脂肪酶:果胶酶组成二者质量比为6:1;所述脂肪酶和果胶酶酶活力分别为40IU/mg、60IU/mg,所述酶解时间为3小时;(3)乙醇提取:在步骤(2)所得的复合酶解液中,逐步加入无水乙醇,使上述酶解液中乙醇浓度达到95%(V/V),然后浸泡2h,随后超声波提取4h,所述超声提取的温度为45℃,超声功率为200W;过滤,除去不溶物,残渣反复提取4次,合并滤液得粗提液;(4)精制:向步骤(3)获得的粗提液中加入泊洛沙姆188,所述蜂胶与泊洛沙姆质量比1:6,搅拌使其完全溶解,然后旋转蒸发回收乙醇至液体无醇味得精制液;5)提取物的获得:将步骤(4)获得的精制液以
1.5mL/min 上样于D101型大孔吸附树脂,吸附饱和3h后,用蒸馏水洗脱至溶液无色,再用干树脂8倍质量的80%乙醇(V/V)以1.6 mL/min 的速率洗脱;收集洗脱液,回收乙醇,干燥,即得蜂胶提取物;
其中,所述酸枣仁提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤: 酸枣仁经过风选除杂后,将其粉碎成80目的颗粒,然后加入酸枣仁质量10倍量乙醇和十二烷基硫酸钠混合液进行超声提取;其中,乙醇浓度为70%(V/V),十二烷基硫酸钠浓度为20mg/mL,超声提取的功率为200W、温度60℃、提取时间为1.5 h;然后过滤,然后重复上述提取、过滤的操作3次,合并滤液、减压浓缩后,用水饱和正丁醇溶液萃取,静置12h;分离出正丁醇相,经减压浓缩、冷冻干燥后得酸枣仁提取物。
[0034] 8、对比例3一种药物组合物,由以下重量份数的组分制成:银杏叶提取物18克以及酸枣仁提取物9克。按比例称取上述各提取物,分别粉碎成颗粒、过80目筛,混合均匀后,填充胶囊即得;
其中,所述银杏叶提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤:(1)原料的预处理:将银杏叶粉碎成颗粒,并过80目筛;(2)复合酶解:将步骤(1)所得银杏叶颗粒与一定量的复合酶水溶液混合,在50℃下进行酶解,得复合酶解液;其中,所述银杏叶颗粒与复合酶水溶液的质量比为1:15,所述的复合酶水溶液的质量百分比浓度为0.5%,所述的复合酶由脂酶、纤维素酶和果胶酶组成,三者质量比为3:1:1;所述脂酶、纤维素酶和果胶酶酶活力分别为
40IU/mg、45IU/mg、60IU/mg,所述酶解时间为2小时;(3)乙醇提取:在步骤(2)所得的复合酶解液中,逐步加入无水乙醇(V/V),使上述酶解液中乙醇浓度达到80%(V/V),然后浸泡2h,随后超声波提取2h,所述超声提取的温度为60℃,超声功率为185W;过滤,除去不溶物,残渣反复提取3次,合并滤液得粗提液;(4)精制:向步骤(3)获得的粗提液中加入泊洛沙姆,所述银杏叶与泊洛沙姆质量比1:5,搅拌使其完全溶解,然后旋转蒸发回收乙醇至液体无醇味得精制液;(5)提取物的获得:将步骤(4)获得的精制液pH调至6,以1mL/min 上样于D101型大孔吸附树脂,吸附饱和3h后,用蒸馏水洗脱至溶液无色,再用干树脂15倍质量、pH为6的75%乙醇(V/V)以1 mL/min 的速率洗脱;收集洗脱液,回收乙醇,干燥,即得银杏叶提取物;
其中,所述酸枣仁提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤: 酸枣仁经过风选除杂后,将其粉碎成80目的颗粒,然后加入酸枣仁质量10倍量乙醇和十二烷基硫酸钠混合液进行超声提取;其中,乙醇浓度为70%(V/V),十二烷基硫酸钠浓度为20mg/mL,超声提取的功率为200W、温度60℃、提取时间为1.5 h;然后过滤,然后重复上述提取、过滤的操作3次,合并滤液、减压浓缩后,用水饱和正丁醇溶液萃取,静置12h;分离出正丁醇相,经减压浓缩、冷冻干燥后得酸枣仁提取物。
[0035] 技术效果测试(一)含量测定
1 材料与方法
1.1 试验材料:实施例1中蜂胶、银杏叶、酸枣仁提取物以及实施例1-5以及对比例1-3组合物
1.2 主要试剂及仪器
芦丁葡萄糖、酸枣仁皂苷A对照品均购自中国药品生物制品检定所;
其它分析纯以及色谱纯级试剂均为市售。AE240S型电子分析天平(德国梅特勒-托利多公司);UV-1800型紫外-可见光分光光度计(日本岛津公司);SHZ-D 型循环水真空(巩义市予华仪器有限公司);SHY-2 型水浴恒温振荡器(江苏金坛市金城国胜实验仪器厂);
RE-52 型旋转蒸发仪( 上海亚荣生化仪器厂) ,KQ5200B 型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)HH-6恒温水浴锅(郑州杜甫仪器厂)。
[0036] 1.3总黄酮含量的测定标准曲线的绘制以及空白测定:精密吸取芦丁对照品使用溶液(0.2mg/m1)1ml、2ml、
3ml、4ml、5ml、6ml,分别置于50mL容量瓶中。加无水乙醇至总体积为15mL,依次加入硝酸溶液(100mg/m1) 1m1,醋酸溶液(9.8mg/m1g/L) 1mL,摇匀,加水至刻度,摇匀。静置lh。用
1cm比色杯于415nm处,以0.5ml 30%乙醇溶液为空白,测定吸光度。以50ml中芦丁质量(mg)为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线或按直线回归方程计算。线性工作范围0mg-
1.2mg (50mL)。
[0037] 样品溶液的测定:精密称待测实施例1 4样品0.5g,置于50mL容量瓶中,加无水乙~醇至总体积为15mL,依次加入硝酸铝溶液(100mg/m1) 1m1,醋酸钾溶液(9.8mg/m1)1mL,摇匀,加水至刻度,摇匀。静置1h。以空白试液作参比,用1 cm比色杯,在波长415二处测定试料溶液的吸光度。查标准曲线或通过回归方程计算,求出蜂胶、银杏叶中的黄酮类化合物含量(mg)。
[0038] 1.4总皂苷含量测定色谱条件与系统适应性实验:色谱柱( 色谱柱与设备均来自Aglient公
司,4.6 mm×250 mm,5μm ) ,流动相乙腈-水( 32∶ 68), 柱温 25℃,检测波长 281 nm,流速1 mL·min -1,进样量10μL。酸枣仁皂苷 A的理论塔板数均>5000,分离度均>1. 
5,拖尾因子均符合测定需求。
[0039] 对照品溶液的制备:分别取对照品酸枣仁皂苷A 2.4 mg置于10 mL容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度。精密量取各对照品溶液5.0 mL置同一10 mL量瓶中,摇匀,得混合对照品溶液。
[0040] 供试品溶液的制备:取实施例1制备的酸枣仁总皂苷提取物,加甲醇溶解并定容至10 mL,摇匀,经0. 45μm 微孔滤膜滤过,取续滤液,即得。
[0041] 含量测定结果如下表1所示:表1实施例1-3中各提取物含量测定结果(质量百分数)
组别 蜂胶总黄酮含量(%) 银杏叶总黄酮含量(%) 酸枣仁总皂苷含量(%)
实施例1 56.0 57.0 52.0
实施例2 55.0 56.2 49.5
实施例3 55.6 56.8 50.6
(二)药理实验活性测定
1.主要实验材料与仪器 阳性对照药盐酸为多奈哌齐片(卫材( 中国) 药业有限公司);治疗药物为实施例1-5获得的保健品组合物以及对比例6-8获得的保健品组合物,D-半乳糖、单胺氧化酶-B (MAOB)、超氧化物歧化酶( SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px ) 试剂盒以及其它常规设备均为市售。
[0042] 2.实验动物 昆明种健康小鼠(雌雄各半, 体重22~25 g ) 由中国农业科学院蜜蜂研究所蜂产品室提供。3.方法 将110只小鼠随机分为11组: 正常组,模型组,阳性对照组,治疗组(实施例1 5以及对比例6 8), 每组10只。正常组以普通饮食喂养, 其余组小鼠~ ~腹腔注射 D-半乳糖100 mg · k g -1· d -1, 连续 6w  , 建立小鼠 AD模型。同时,治疗组和对比例组每天分别灌胃100mg/kg  , 阳性对照组每天灌胃50 mg /kg, 模型组灌胃等体积的生理盐水。第43天断头处死小鼠,开颅取脑,称重,从断头至称重在5 min内完成。根据公式计算脑指数, 脑指数=(脑重/体重)×100%。按重量体积比(1:9) 加生理盐水制成
10%脑组织匀浆液,以3000 r /min,离心10min,4℃,取上清液, 用进行分析。4.统计学处理 应用 SPSS 17.0统计软件进行方差分析及t检验, 全部数据用x±s 表示。5.实验结果5.1对脑指数的影响
如表2所示模型组小鼠脑指数较低,与正常组比较, 差异有显著性 (P<0. 05); 阳性对照组以及实施例1 5实验组脑指数较高,与模型组比较差异显著(P<0. 01),与正常组比~
较, 无显著性差异;对比例1 3组脑指数介于二者中间,与实施例1 5实验组比较差异显著~ ~
(P<0. 01) 。
[0043] 表2各组脑指数数值组别 脑指数(%)
正常组 5.25 ±0.30
模型组 4.20±0.22
阳性对照组 5.25 ±0.25
实施例1 5.24±0.50
实施例2 5.24 ±0.36
实施例3 5.26 ±0.02
实施例4 5.25 ±0.15
实施例5 5.24 ±0.10
对比例6 4.99±0.32
对比例7 4.93±0.45
对比例8 4.78±0.60
5.2对脑中MAO-B、SOD、GSH-Px的影响
如表2所示,治疗组脑中MAO-B的含量明显低于模型组,与正常组和阳性对照组持平,而模型组MAO-B的含量显著高于正常组;对比例组略低于模型组,但是仍高于正常组。正常组脑中SOD的含量明显高于模型组;治疗组中SOD含量明显高于模型组,与正常组接近;对照组略高于模型组,低于治疗组和正常组。与正常组和模型组相比,各治疗组的GSH-Px含量明显升高,且略高于正常组。
[0044] 表2 提取物组合物对AD模型小鼠脑中MAO-B、SOD、GSH-Px的影响组别 剂量(mg/kg) MAO-B(U·h-1·m-1) SOD(U/mgProt) GSH-Px(mmol)
正常组 - 25.02±1.58 5.25±1.50 200.5±105.0
模型组 - 38.15±1.43 4.29±1.81 93.5±24.4
阳性对照组 50 24.20±1.15 5.36±1.55 289.8±34.5
实施例1 100 24.26±0.86 5.42±0.49 295.2±35.6
实施例2 100 24.58±0.05 5.38±1.04 290.1±35.3
实施例3 100 24.36±1.20 5.40±2.32 292.8±40.3
实施例4 100 24.50±2.45 5.39±2.10 290.1±30.3
实施例5 100 24.74±2.34 5.36±2.30 290.8±55.3
对比例6 100 30.26±1.48 4.80±1.26 190.5±40.5
对比例7 100 30.34±2.50 4.78±2.15 189.6±25.5
对比例8 100 30.28±3.20 4.81±1.45 190.2±30.8
由此可见,采用本发明方法提取的提取物,组方制备成组合物,具有显著的提高认知、治疗老年痴呆的作用,并且与提取物两两组合相比,蜂胶、银杏叶、酸枣仁这三者组合,取得了较好的技术效果。
[0045] 应当理解的是,本发明的上述具体实施方式仅仅用于示例性说明或解释本发明的原理,而不构成对本发明的限制。因此,在不偏离本发明的精神和范围的情况下所做的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。此外,本发明所附权利要求旨在涵盖落入所附权利要求范围和边界、或者这种范围和边界的等同形式内的全部变化和修改例。
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