技术领域
[0001] 本
发明涉及一种治疗痔疮出血的中药组合物的制备及检测方法，属药物技术领域。
背景技术
[0002] 现实生活中，痔是一种常见、多发的肛肠
疾病，俗话说十人九痔，此病不分年龄，男女皆有，且容易反复发作；据流行病学的调查，痔疮的生发率高达87.25%。工作时间过长、强度太高、压
力大而饮食不节，经常久坐，缺少运动等不良的生活习惯，更是造成这一现象的主要原因，从而甚至引发痔疮出血，严重危害人民身体健康。
[0003] 目前治疗痔疮及特别是内痔出血的主要手段是PPH
微创手术和油膏及栓药等外用药，PPH手术容易产生术后并发症及术后出血等各症状，并且
费用较高。而油膏及栓药使用起来并不方便，又易复发，长期用药容易产生耐药性，药效不明显。中药作用缓和，对年老体弱、阴虚火旺造成的内痔出血、肛裂等症状开发口服药品很有必要。相对西药有效果好、痛苦少、毒
副作用低、药源广泛、费用低廉的好处。
[0004]
现有技术中，很多中药组合物没有
质量检测方法的要求，不能有效控制该中药组合物的质量，截止目前，未见有对该产品组合物进行全面质量检测的研究文献报道。
发明内容
[0005] 本发明的目的是提供一种治疗痔疮出血的中药组合物的制备及检测方法，特别是治疗内痔出血的组合物；制备方法简单易行，方便实施；检测方法加强了对药品质量的有效控制，提供质量保证。
[0006] 本发明所述的治疗痔疮出血的中药组合物的制备方法由如下重量份数的原料制成：地榆20-30份、槐
角15-25份、仙鹤草25-35份、补骨脂15-25份、三七5-15份。
[0007] 一种治疗痔疮出血的中药组合物，其特征在于如下重量份数的组合物最佳：地榆22-28份、槐角17-23份、仙鹤草27-33份、补骨脂17-23份、三七7-13份。
[0008] 所述的胶囊、片剂或颗粒是将三七
粉碎成细粉，过筛；地榆、槐角、补骨脂、仙鹤草四味加
水8倍量，煎煮2次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对
密度为1.04～1.06（60℃），离心，上清液继续浓缩至相对密度为1.20～1.25（60℃）的清膏，加入三七细粉，混匀，干燥，粉碎，加辅料适量，过筛，混匀，制成颗粒、片剂或装胶囊。
[0009] 本发明所述的治疗痔疮出血的中药组合物的检测方法，包括内容物的
鉴别和含有成分的含量测定，内容物的鉴别是薄层色谱法鉴别地榆、仙鹤草成分，含有成分的含量测定是高效液相色谱法测定补骨脂的含量。
[0010] 所述的地榆的鉴别方法具体如下：取本品内容物2g，加10%
盐酸的50%甲醇溶液（盐酸：50%甲醇=1：9）25ml，加热回流2小时，放冷，滤过，滤液用盐酸饱和的乙醚振摇提取2次，每次25ml，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取地榆对照药材1g，同法制成对照药材溶液。
[0011] 参照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VIB）试验,吸取供试品溶液5~10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一
硅胶G薄层板上.以
甲苯（用水饱和）-乙酸乙酯-
甲酸（6：3：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化
铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的
位置上，显相同
颜色的斑点。
[0012] 所述的仙鹤草的鉴别方法具体如下：取本品内容物2g，用丙
酮：
醋酸乙酯（4：1）25ml为提取
溶剂，超声处理30分钟，滤过，低温挥干，残渣加乙醇1ml使溶解；另取仙鹤草对照药材2g，同法制成对照药材溶液。
[0013] 参照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VIB）实验，分别吸取供试品与对照品溶液各10μl分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-
氨水（8：2：3：0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%
硫酸乙醇溶液，加热至斑点清晰，日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置显相同颜色的斑点。
[0014] 所述的补骨脂的含量测定方法具体步骤如下：参照高效液相色谱法测定（中国药典2010年版一部附录Ⅵ D）：
（1）色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（50：50）为流动相；检测
波长为246nm。理论板数按补骨脂素峰计算，应不低于3000。
[0015] （2）对照品溶液的制备 精密称取补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml分别各含50μg的混合溶液，即得。
[0016] （3）供试品溶液的制备 取装量差异下的内容物适量，研细，精密称取0.8g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理（功率100W，
频率50kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0017] （4）测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20ul，注入液相色谱仪，测定，即得。
[0018] 本发明与现有技术相比，具有以下有益效果：本发明组合物具有益气养阴，凉血
止血，消肿止痛的作用。临床运用于内痔出血症状的肛肠疾病中，具有疗效显著、价格低廉、服用方便、安全可靠等特点。
[0019] 通过96例临床观察，治愈32例，好转29例，有效24例，无效11例。治愈率33.3%，好转率30.2%，有效率25%，无效率11.5%，总有效率88.5%；证明治疗内痔出血疗效好，安全性高。
附图说明
[0020] 图1是地榆的薄层鉴别图谱，图中，1、2、3为样品，4为
没食子酸对照品，5为地榆对照药材，6为阴性对照样品；图2是仙鹤草的薄层鉴别图谱，图中1、2、3为样品，4为仙鹤草对照药材，5为阴性对照样品；
图3是阴性对照试验的补骨脂素、异补骨脂素对照品的高效液相色谱图。
[0021] 图4是阴性对照试验的补骨脂阴性样品的高效液相色谱图。
[0022] 图5是阴性对照试验的样品的高效液相色谱图。
[0023] 图6是阴性对照试验的补骨脂药材的高效液相色谱图。
[0024] 图7是补骨脂素标准曲线。
[0025] 图8是异补骨脂素标准曲线。
具体实施方式
[0026] 以下结合
实施例对本发明做进一步描述。
[0027] 实施例1（1）胶囊的制备
由如下重量份数的原料制成：地榆27g、槐角18g、仙鹤草32g、补骨脂18g、三七12g。
[0028] 以上五味，三七粉碎成细粉，过筛；地榆、槐角 、补骨脂、仙鹤草四味加水8倍量，煎煮2次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.04～1.06（60℃），离心，上清液继续浓缩至相对密度为1.20～1.25（60℃）的清膏，加入三七细粉，混匀，干燥，粉碎，装胶囊即可。
[0029] （2）内容物的鉴别和含有成分的含量测定地榆的薄层鉴别法具体步骤如下：
取胶囊内容物2g，加10%盐酸的50%甲醇溶液（盐酸：50%甲醇=1：9）25ml，加热回流2小时，放冷，滤过，滤液用盐酸饱和的乙醚振摇提取2次，每次25ml，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取地榆对照药材1g，同法制成对照药材溶液。
[0030] 照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VIB）试验,吸取供试品溶液5~10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上.以甲苯（用水饱和）-乙酸乙酯-甲酸（6：3：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。地榆的薄层鉴别图谱见图1,。
[0031] 仙鹤草的薄层鉴别方法具体步骤如下：取本品内容物2g，用丙酮：醋酸乙酯（4：1）25ml为提取溶剂，超声处理30分钟，滤过，低温挥干，残渣加乙醇1ml使溶解；另取仙鹤草对照药材2g，同法制成对照药材溶液，参照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VIB）实验，分别吸取供试品与对照品溶液各10μl分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-氨水（8：2：3：0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，加热至斑点清晰，日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置显相同颜色的斑点。仙鹤草的薄层鉴别图谱见图2。
[0032] 补骨脂含量测定的高效液相色谱法具体步骤如下：参照高效液相色谱法测定（中国药典2010年版一部附录Ⅵ D）：
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（50：50）为流动相；检测波长为246nm。理论板数按补骨脂素峰计算，应不低于3000。
[0033] 对照品溶液的制备 精密称取补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml分别各含50μg的混合溶液，即得。
[0034] 供试品溶液的制备 取装量差异下的内容物适量，研细，精密称取0.8g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理（功率100W，频率50kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0035] 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20ul，注入液相色谱仪，测定，即得。
[0036] 胶囊中每粒含补骨脂以补骨脂素( C11 H6 O3 )和异补骨脂素 （C11 H6 O3 ）的总量计，含量在0.5-1.0mg范围效果最佳。
[0037] 含量检测方法的研究：1、仪器与试药
仪器：美国戴安（DIONEX）高效液相色谱仪（Kromasil C18-5μ色谱柱、P680
泵、UVD170U紫外检测器、CHROMELEON
数据处理软件），HS3120超声清洗器，Sartorius BS124S（d＝
0.1mg）
电子分析天平，Sartorius BP211D（d＝0.01mg）电子分析天平。
[0038]
试剂：甲醇、乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其余试剂均为分析纯。
[0039] 对照品：补骨脂素对照品（中国药品
生物制品检定所，110739-200309，20mg）；异补骨脂素对照品（中国药品生物制品检定所，110738-200401，20mg）样品：由荣昌制药（淄博）有限公司制备。
[0040] 2、色谱条件的选择：（1）检测波长的确定：根据《中国药典》2010版一部补骨脂药材含量测定项下的方法，确定检测波长为：246nm.
（2）流动相的确定：进行系统的优化实验，由结果得知：用甲醇：水（50：50）系统时峰形好，两峰分离效果好，故选择流动相为：甲醇：水（50：50）。
[0041] 3、提取条件的选择：（1）提取溶剂的选择 经过实验，结果表明：以甲醇和85％乙醇为提取溶剂时样品含量最高，而85％乙醇提取的供试品溶液中杂质峰较多，故选择提取剂为甲醇。
[0042] （2）提取方法的选择 经过实验，结果表明：超声处理法与回流提取法样品含量相当，但超声处理法易操作，故选择提取方法为超声法。
[0043] （3）提取时间的选择 经过实验，结果表明：样品超声提取30min和45min结果相差不大，补骨脂素和异补骨脂素已提取完全，故确定提取时间为30min。
[0044] 4、阴性对照试验：取不含补骨脂的阴性试制样品细粉0.8g，胶囊内容物细粉0.8g，补骨脂药材细粉
0.1g，精密称定，同“供试品溶液制备”项下，同法处理后，制得阴性样品溶液、胶囊供试品溶液、补骨脂药材溶液，分别取对照品溶液及上述供试液注入液相色谱仪，记录色谱图。结果见图3、图4、图5、图6。
[0045] 结果表明: 在阴性对照图谱中补骨脂素、异补骨脂素峰无干扰。
[0046] 5、精密度试验：吸取对照品溶液重复进样6次，每次各20μl，分别计算补骨脂素、异补骨脂素峰面积的RSD，结果见表1。
[0047] 表1精密度试验结果结果表明：补骨脂素峰面积RSD为0.31%，异补骨脂素峰面积RSD为0.37%，仪器精密度良好。
[0048] 6、线性范围考察：取补骨脂素、异补骨脂素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含补骨脂素108μg、异补骨脂素136μg的溶液，分别精密吸取20μl、15μl、10μl、
8μl、5μl、2μl进样，测定其峰面积。结果见表2、图7、图8。以峰面积（Y）对进样量（X）进行回归，得补骨脂素标准曲线方程Y=112.38X+6.957（r=0.9998）；异补骨脂素标准曲线方程Y=110.68X+10.051（r=0.9998）。
[0049] 表2补骨脂素、异补骨脂素标准曲线结果以上结果表明补骨脂素在0.216μg～2.160μg范围内、异补骨脂素在0.272μg～
2.720μg范围内，峰面积值与进样量有良好的线性关系。
[0050] 7、稳定试验 取同一份供试品溶液，分别于0小时、2小时、4小时、6小时、8小时，进样。结果见表3。
[0051] 表3
稳定性试验结果0h 2h 4h 6h 8h 平均 RSD（％）
补骨脂素 113.205 113.365 116.398 116.949 115.319 115.047 1.49
异补骨脂素 109.984 106.626 108.194 107.738 107.36 107.98 1.17
结果表明：供试品在8小时内 补骨脂素峰面积RSD为1.49% ，异补骨脂素峰面积RSD为1.17%，证明供试品溶液在8小时内稳定性良好。
[0052] 8、重现性试验 取胶囊样品5份，分别按供试品制备项下制备，测定结果，补骨脂素、异补骨脂素总含量见表4。
[0053] 表4重现性试验结果结果表明：5份供试品的平均含量为3.27mg/g，RSD为1.18% ，试验方法的重现性良好。
[0054] 9、回收率试验：精密称取胶囊内容物细粉0.4g，共称取5份，分别精密加入对照品溶液（含补骨脂素0.601mg/ml、异补骨脂素0.615mg/ml）1ml，再精密加入甲醇24.00ml，照供试品制备项下方法制备供试品溶液，测定总含量，计算回收率。回收率=（总量-样品中量）/加入纯品量。结果见表5。
[0055] 表5回收率试验结果结果表明：补骨脂素平均回收率为99.51% ，RSD为0.35%；异补骨脂素平均回收率为
99.38% ，RSD为0.67%。本方法加样回收率良好。
[0056] 10、样品测定：取多批样品，补骨脂素、异补骨脂素含量见表6。
[0057] 表6样品测定试验结果临床试验表明，每次服药补骨脂素、异补骨脂素含量在2.0-4.0mg范围效果最佳。
[0058] 实施例2（1）片剂的制备
由如下重量份数的原料制成：地榆25g、槐角20g、仙鹤草30g、补骨脂20g、三七10g。
[0059] 三七粉碎成细粉，过筛；地榆、槐角 、补骨脂、仙鹤草四味加水8倍量，煎煮2次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.04～1.06（60℃），离心，上清液继续浓缩至相对密度为1.20～1.25（60℃）的清膏，加入三七细粉，混匀，加糊精适量，混匀，制成颗粒，干燥，过筛，压片即可。
[0060] （2）内容物的鉴别和含有成分的含量测定同实施例1。
[0061] 补骨脂以补骨脂素( C11 H6 O3 )和异补骨脂素 （C11 H6 O3 ）的总量计，每次服药含量在2.0-4.0mg范围效果最佳。
[0062] 实施例3（1）颗粒的制备
由如下重量份数的原料制成：地榆27g、槐角22g、仙鹤草28g、补骨脂22g份、三七8g。
[0063] 三七粉碎成细粉，过筛；地榆、槐角 、补骨脂、仙鹤草四味加水8倍量，煎煮2次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.04～1.06（60℃），离心，上清液继续浓缩至相对密度为1.20～1.25（60℃）的清膏，加入三七细粉，糊精适量，混匀，过筛，干燥，制成颗粒，每袋装4g。
[0064] （2）内容物的鉴别和含有成分的含量测定同实施例1。
[0065] 补骨脂以补骨脂素( C11 H6 O3 )和异补骨脂素 （C11 H6 O3 ）的总量计，每次服药含量在2.0-4.0mg范围效果最佳。
[0066] 临床资料：1、病例选择：
作为治疗痔疮出血的中药组合物，选择
门诊内痔患者96例进行临床观察，年龄 ≥20 周岁，≤65 周岁，男58例，女38例，平均年龄42周岁。符合内痔的诊断及分期标准第一期、第二期、第三期。
[0067] 2、排除标准：有合并肛周脓肿、肛瘘、直肠
恶性肿瘤或肠道感染性疾病者。
[0068] 妊娠或哺乳期妇女。
[0069] 过敏体质及对多种药物过敏者。
[0070] 合并心血管、脑血管、肝、肾、造血系统等原发性疾病，
精神病患者。
[0071] 下列实验室指标异常：尿蛋白>+，镜下尿红细胞>+（尿HB不作为判断指标）。ALT、SCr、BUN超过正常值上限20%以上。
[0073] 怀疑或确有酒精、
药物滥用病史，或根据研究者的判断具有降低入组可能性或使入组复杂化的其他病变，如工作环境经常变动等已造成失访的情况。
[0074] 3、患者口服消痔止血胶囊（每粒重 0.4g），每次3粒，每日3次，
疗程共7天。
[0075] 4、疗效判断：治愈：排粪时出血症状消失，痔
块不脱出肛门外；
好转：排粪时出血现象减少70%以上，内痔脱出后能自行还纳；
有效：排粪时出血现象减少30%~70%，痔块仍脱出肛门，不能自行还纳；
无效：排粪时出血现象减少30%以下或无明显减少, 痔块仍脱出肛门，不能自行还纳。
[0076] 5、治疗结果：治愈32例，好转29例，有效24例，无效11例。治愈率33.3%，好转率30.2%，有效率
25%，无效率11.5%，总有效率88.5%。
[0077] 典型病例举例：1、梁某，女，45岁，农民，山东聊城人。近年来一直有便血症状，痔块脱出，不能自行还纳，
瘙痒；因惧怕手术，多次服用和外用其他药物治疗，未果，近两个月来，腿脚乏力，精神不振，一次如厕时大出血。求诊，服用本发明使用实施例1中所制胶囊，5天症状明显减轻，继续服用一个疗程，痊愈，随访未见复发。
[0078] 2、朱某，女，59岁，退休工人，山东淄博人，患痔疮多年，近段时间肛门胀痛，大便时有堵塞感，出血后求诊，使用实施例1的胶囊，3天好转，7天治愈，随访未见复发。
