肿瘤发病率和死亡率逐年上升，严重威胁人类健康，已成为人类死亡的主 要原因之一。目前，西医不能手术的肿瘤多是以化疗和放疗为主，但是，抗肿 瘤化疗药物以及放疗都有严重的副反应，容易引起骨髓造血障碍、胃肠道反应 以及原发性二次肿瘤等。而中药在治疗肿瘤方面，相对化疗和放疗副反应较少， 且能对抗肿瘤化疗和放疗造成的损伤，提高肿瘤患者的免疫指标。因此，发展 辅助治疗肿瘤的中药，在肿瘤治疗中联合用药成为趋势。
近年来，关于真菌抗肿瘤的研究相当活跃，很多真菌被应用到临床治疗当 中，起到辅助抑制肿瘤和保护肿瘤病人的化疗、放疗造成的损伤之作用。赤芝、 紫芝、云芝、樟芝、姬松茸、灰树花都是国内外应用较广的抗肿瘤真菌。而人 参则是我国传统名贵中草药，其药理活性成分人参皂甙活性多样，尤其具有极 佳的抗肿瘤活性。
因此，有必要提供一种以赤芝、紫芝、云芝、樟芝、姬松茸、灰树花、人 参、灵芝孢子油为原料制成的真菌类治疗肿瘤的中药组合物以及该中药组合物 的制作方法，以使用该中药组合物有效对抗化放疗损伤、辅助抑制肿瘤、促进 骨髓造血、提高免疫力。

本发明的目的是，针对目前治疗肿瘤缺乏对抗化放疗损伤的中药，选择名 贵中草药，提供一种能够辅助抑制肿瘤、对抗化放疗损伤、促进骨髓造血、提 高免疫力的治疗肿瘤的中药组合物，应用在肿瘤治疗领域，特别是在制备治疗 肿瘤或骨髓造血的药物中的应用。
本发明的另一目的是，选择名贵中草药，经筛选优化配方、合理设计工艺 流程，提供一种制作能够辅助抑制肿瘤、对抗化放疗损伤、促进骨髓造血、提 高免疫力的中药组合物的方法。
以下将进一步说明实现上述发明目的的技术方案。
一种治疗肿瘤的中药组合物，其包括赤芝、紫芝、云芝、樟芝、姬松茸、 灰树花、人参以及灵芝孢子油，或者其由赤芝、紫芝、云芝、樟芝、姬松茸、 灰树花、人参以及灵芝为原料制成并包括赤芝提取物、紫芝提取物、云芝提取 物、云芝提取物、樟芝提取物、姬松茸提取物、灰树花提取物、人参提取物、 灵芝孢子油。
所述包括赤芝、紫芝、云芝、樟芝、姬松茸、灰树花、人参以及灵芝孢子 油的治疗肿瘤的中药组合物中的配料比(重量)为：赤芝1-90％、紫芝1-90％、 云芝1-90％、樟芝1-90％、姬松茸1-90％、灰树花1-90％、人参1-90％以及灵芝 孢子油1-90％。其中，樟芝可选用子实体或菌丝体，姬松茸可选用子实体或菌丝 体，灰树花可选用子实体或菌丝体。
所述包括赤芝、紫芝、云芝、樟芝、姬松茸、灰树花、人参以及灵芝孢子 油的治疗肿瘤的中药组合物中的优选配料比(重量)为：赤芝1-20％、紫芝1-20％、 云芝1-20％、樟芝1-20％、姬松茸1-20％、灰树花1-20％、人参1-20％以及灵芝 孢子油30-70％。
所述由赤芝、紫芝、云芝、樟芝、姬松茸、灰树花、人参以及灵芝为原料 制成的治疗肿瘤的中药组合物中的各组分的重量配比为：赤芝提取物1-90％、紫 芝提取物1-90％、云芝提取物1-90％、樟芝提取物1-90％、姬松茸提取物1-90％、 灰树花提取物1-90％、人参提取物1-90％、灵芝孢子油1-90％。其中，樟芝可选 用子实体或菌丝体，姬松茸可选用子实体或菌丝体，灰树花可选用子实体或菌 丝体。
所述由赤芝、紫芝、云芝、樟芝、姬松茸、灰树花、人参以及灵芝为原料 制成的治疗肿瘤的中药组合物中的各组分的优选重量配比为：赤芝提取物 1-20％、紫芝提取物1-20％、云芝提取物1-20％、樟芝提取物1-20％、姬松茸提取 物1-20％、灰树花提取物1-20％、人参提取物1-20％、灵芝孢子油30-70％。
一种治疗肿瘤的中药组合物的制作方法，其包括以下步骤：
第一步，分别制备所述治疗肿瘤的中药组合物的各组分：赤芝提取物、紫芝 提取物、云芝提取物、樟芝提取物、姬松茸提取物、灰树花提取物和人参提取 物。
上述各组分可采取水提浓缩或水提醇沉方式制备，即分别取赤芝孢子、紫芝 孢子、云芝孢子、樟芝干燥子实体或菌丝体、姬松茸干燥子实体或菌丝体、灰 树花干燥子实体或菌丝体、干燥人参，进行超微粉碎以分别得到上述各原料的 粉末，再采用超声波破壁，以分别得到上述各原料的粉末的破壁粉末；加热回 流萃取上述各原料的粉末的破壁粉末，并用5-95％的乙醇沉淀，提取各原料中的 水溶性成份。优选地，进行超微粉碎前，直接冷冻干燥上述各原料。采用水提 醇沉方式具体制作过程如下：
(1)破壁赤芝孢子粉，制备赤芝提取物
取赤芝孢子，进行超微粉碎，粉碎的粒度为80-300目，得赤芝孢子粉；或 者直接冷冻干燥赤芝孢子，经超微粉碎制成赤芝孢子粉。将赤芝孢子粉采用超 声波破壁得到破壁赤芝孢子粉。
取破壁赤芝孢子粉，用5-10倍量水加热回流萃取1-3次，每次0.5-3小时， 用5-95％的乙醇沉淀，提取赤芝水溶性成份，主要是多糖体包括多糖、糖肽、糖 蛋白，从而得到赤芝提取物。
(2)破壁紫芝孢子粉，制备紫芝提取物
取紫芝孢子，进行超微粉碎，粉碎的粒度为80-300目，得紫芝孢子粉；或 者直接冷冻干燥紫芝孢子，经超微粉碎制成紫芝孢子粉。将紫芝孢子粉采用超 声波破壁得到破壁紫芝孢子粉。
取破壁紫芝孢子粉，用5-10倍量水加热回流萃取1-3次，每次0.5-3小时， 用5-95％的乙醇沉淀，提取紫芝水溶性成份，主要是多糖体包括多糖、糖肽、糖 蛋白，从而得到紫芝提取物。
(3)破壁云芝孢子粉，制备云芝提取物
取云芝孢子，进行超微粉碎，粉碎的粒度为80-300目，得云芝孢子粉；或 者直接冷冻干燥云芝孢子，经超微粉碎制成云芝孢子粉。将云芝孢子粉采用超 声波破壁得到破壁云芝孢子粉。
取破壁云芝孢子粉，用5-10倍量水加热回流萃取1-3次，每次0.5-3小时， 用5-95％的乙醇沉淀，提取云芝水溶性成份，主要是多糖体包括多糖、糖肽、糖 蛋白，从而得到云芝提取物。
(4)破壁樟芝子实体或菌丝体粉，制备樟芝提取物
取樟芝干燥子实体或菌丝体，进行超微粉碎，粉碎的粒度为80-300目，得 樟芝子实体或菌丝体粉；或者直接冷冻干燥樟芝子实体或菌丝体，经超微粉碎 制成樟芝子实体或菌丝体粉。将樟芝子实体或菌丝体粉采用超声波破壁得到破 壁樟芝子实体或菌丝体粉。
取破壁樟芝子实体或菌丝体粉，用5-10倍量水加热回流萃取1-3次，每次 0.5-3小时，用5-95％的乙醇沉淀，提取樟芝多糖体、三萜类成分，得到樟芝提 取物。
(5)破壁姬松茸子实体或菌丝体粉，制备姬松茸提取物
取姬松茸干燥子实体或菌丝体，进行超微粉碎，粉碎的粒度为80-300目， 得姬松茸子实体或菌丝体粉；或者直接冷冻干燥姬松茸子实体或菌丝体，经超 微粉碎制成姬松茸子实体或菌丝体粉。将姬松茸子实体或菌丝体粉采用超声波 破壁得到破壁姬松茸子实体或菌丝体粉。
取破壁姬松茸子实体或菌丝体粉，用5-10倍量水加热回流萃取1-3次，每 次0.5-3小时，用5-95％的乙醇沉淀，提取姬松茸多糖体，得到姬松茸提取物。
(6)破壁灰树花子实体或菌丝体粉，制备灰树花提取物
取灰树花干燥子实体或菌丝体，进行超微粉碎，粉碎的粒度为80-300目， 得灰树花子实体或菌丝体粉；或者直接冷冻干燥灰树花子实体或菌丝体，经超 微粉碎制成灰树花子实体或菌丝体粉。将灰树花子实体或菌丝体粉采用超声波 破壁得到破壁灰树花子实体或菌丝体粉。
取破壁灰树花子实体或菌丝体粉，用5-10倍量水加热回流萃取1-3次，每 次0.5-3小时，用5-95％的乙醇沉淀，提取灰树花多糖体，得到灰树花提取物。
(7)破壁人参干粉，制备人参提取物
取干燥人参，进行超微粉碎，粉碎的粒度为80-300目，得人参干粉；或者 冷冻干燥人参，经超微粉碎制成人参干粉。将人参干粉采用超声波破壁得到破 壁人参干粉。
取破壁人参干粉，用5-10倍量水加热回流萃取1-3次，每次0.5-3小时，用 5-95％的乙醇沉淀，提取人参多糖体、皂甙类成分，从而得到人参提取物。
第二步，制备灵芝孢子油。
所述灵芝孢子油可采取采取超临界二氧化碳流体萃取、压榨提取或索氏提 取制备。采用超临界二氧化碳流体萃取提取制备时，取干燥灵芝孢子粉，进行 超临界二氧化碳流体萃取，萃取条件是25-35MPa，萃取温度为40-45℃，萃取 2-3个小时，得到灵芝孢子油，其主要成分是脂肪酸、灵芝三萜类成分。
第三步，取赤芝提取物、紫芝提取物、云芝提取物、樟芝提取物、姬松茸 提取物、灰树花提取物以及人参提取物，以灵芝孢子油为基础油，加入药用辅 料混合，制成药剂。优选地，所用的药用辅料为蜂蜡、氢化油、明胶、甘油、 水，按常规方法制成软胶囊剂。
相对于现有技术，本技术方案的治疗肿瘤的中药组合物制成软胶囊剂，经 研究表明具有辅助治疗肿瘤的作用。试验结果表明：(1)对移植肉瘤S180小鼠 灌胃给予该中药组合物，能显著抑制小鼠移植肉瘤S180肿瘤细胞的增殖，说明 该品具有较强的抗肿瘤活性；(2)对荷瘤小鼠灌胃给予该中药组合物，能够增 加荷瘤鼠胸腺和脾细胞的数量，说明该中药组合物可显著提高免疫系统的能力； (3)对受辐射损伤小鼠灌胃给予该中药组合物，能够减轻骨髓抑制，恢复骨髓 造血功能。(4)灌胃给予该中药组合物能降低四氯化碳诱导肝损伤的兔死亡率， 减轻肝组织受伤程度和防止肝细胞器的破坏。
试验方法：
1、该治疗肿瘤的中药组合物对移植肉瘤S180小鼠及其免疫器官的影响
取昆明种纯系健康小鼠，6周龄，试验组平均瘤重(mg)体重18～22g。抽 取腹腔接种S180细胞7～10d(天)的小鼠腹水，用无菌生理盐水稀释成1×107 /ml浓度的瘤细胞悬浮液，接种0.2ml悬浮液于健康小鼠右腹沟皮下，随机分组， 每组10只，雌雄各半，次日开始以0.167、0.330、1.000g/d·kg的剂量灌胃给药一 次，连续10天，阴性对照组(Ck)每日给予等量无菌生理盐水，阳性对照组(Cy) 给予用无菌生理盐水稀释的环磷酰胺。停药24h后颈椎脱臼处死动物，剥离瘤块， 称重，按下式计算肿瘤抑制率：
肿瘤抑制率(％)＝(1-W1/W2)×100％
其中W1为阴性对照组平均瘤重(mg)，W2为各试验组平均瘤重(mg)，同时称 取脾脏和胸腺，称重，比较对免疫器官的影响。
脾脏指数＝脾重/体重(mg/g)
胸腺指数＝胸腺重/体重(mg/g)
表1 该治疗肿瘤的中药组合物对小鼠S180移植瘤的抗肿瘤效果

   表2 该治疗肿瘤的中药组合物对荷瘤鼠免疫器官的影响

2、该治疗肿瘤的中药组合物对小鼠骨髓造血功能的影响
(1)对放射损伤小鼠外周血白细胞总数及骨髓GM-CFU(骨髓粒巨噬细胞集 落形成单位)的影响
将雌雄兼有BALB/c小鼠随机分3组，每组10只，实验前1天测外周血白细胞 总数，实验当天，实验组小鼠经60Coγ射线300cGy全身照射，剂量率为<10cGy/ min，照射后立即开始以0.167、0.330、1.000g/d·kg的剂量灌胃给药一次，连续5 天，正常对照组(不照射)及照射对照组(照射剂量同前)均注射等量生理盐水。照 射后第1、3、5天分别由尾静脉采血查白细胞总数，第6天取同侧股骨骨髓细胞， 体外培养GM-CFU。
(2)对放射损伤小鼠血清造血因子活性的影响
将供体BALB/c小鼠随机分为3组，每组21只，均经60Coγ射线300cGy全身 照射，剂量率为<10cGy/min，预防组照射前，治疗组照射后，立即开始以0.167、 0.330、1.000g/d·kg的剂量灌胃给药一次，连续5天，照射对照组照射前后均注射 等量生理盐水。照射第6、8、10天分批杀死小鼠，心脏穿刺取血，分别收集于 消毒离心管，静置12h后，收集血清作为集落刺激因子，加入GM-CFU培养体系 中(鼠肺条件培养液减半、加待测血清0.1ml/ml)培养5天，检测GM-CFU产率， 观察血清造血因子活性，同时第6、8、10天血清等量混合后检测其总体活性水 平。
(3)结果
经300cGy60Coγ射线照射的小鼠外周血白细胞数明显减少(P<0.01)，经该治 疗肿瘤的中药组合物灌胃给药3天白细胞数开始回升，5天升至6.06×109/L，照 射对照组白细胞数则由照射后的3.20×109/L继续下降至2.35×109/L。提示该治 疗肿瘤的中药组合物具有促进放射损伤小鼠外周血白细胞恢复的作用。同时能 促进放射损伤小鼠GM-CFU的增殖。
本品可提高放射损伤小鼠血清造血因子活性。动态观察表明：照射后第6天， 预防组和治疗组血清造血因子活性水平显著提高(P<0.01)，停药后则逐渐下降， 第10天，接近对照组水平(P>0.05)。
3、该治疗肿瘤的中药组合物对四氯化碳诱导肝损伤兔的保护作用
随机将试验兔分为I组(肝损伤模型组)、II组(给药组)，每组7只。在同样的 条件下，按照正常方法给予饲料和饮水。试验第1天，各组均皮下注射50％的四 氯化碳石蜡溶液(剂量为0.4mL/kg·Bw(毫升/千克·体重))，同时I组灌胃给予生 理盐水，II组灌胃给予该治疗肿瘤的中药组合物，剂量均为330mg/kg·Bw)，连 续注射7天。在染毒后，每天观察记录临床症状，对死亡兔及时剖检，检查和记 录病理变化。试验第12天，对存活试验兔全部扑杀、解剖(处理同上)。
试验结果：I、II组兔在染毒后，I组部分兔表现精神沉郁、嗜睡、食欲减少 或废绝、腹泻，对外界反应降低。在攻毒后3天开始出现死亡，到第5天死亡4只， 第11天死亡1只，共死亡7只。而II组兔5天内则未见异常，仅在攻毒后第12天死 亡1只。

下面将通过多个实施例对本技术方案进一步说明。
实施例1
一种由赤芝、紫芝、云芝、樟芝、姬松茸、灰树花、人参以及灵芝为原料 制作治疗肿瘤的中药组合物的方法，其包括以下步骤：
(1)制备破壁赤芝孢子粉、紫芝孢子粉、云芝孢子粉
分别取赤芝孢子、紫芝孢子、云芝孢子各10kg，利用超微粉碎机，粉碎粒 度为300目，再经超声波破壁分别得破壁赤芝孢子粉、紫芝孢子粉、云芝孢子 粉。
(2)制备破壁樟芝、姬松茸、灰树花粉
分别取樟芝子实体或菌丝体、姬松茸子实体或菌丝体、灰树花子实体或菌 丝体各10kg，利用超微粉碎机，粉碎粒度为300目，再经超声波破壁分别得破 壁樟芝子实体或菌丝体粉、姬松茸子实体或菌丝体粉、灰树花子实体或菌丝体 粉。
(3)制备破壁人参粉
取人参干品10kg，利用超微粉碎机，粉碎粒度为300目，再经超声波破壁 得破壁人参粉。
(4)制备赤芝提取物、紫芝提取物、云芝提取物、樟芝提取物、姬松茸提取物、 灰树花提取物和人参提取物
本实施例中，采用水提醇沉方式制备各原料的提取物。具体地，分别取300 目的破壁赤芝孢子粉、紫芝孢子粉、云芝孢子粉以及樟芝子实体或菌丝体粉、 姬松茸子实体或菌丝体粉、灰树花子实体或菌丝体粉、人参粉10kg，分别用10 倍量的水加热回流提取3次，每次2小时，用75％的乙醇沉淀，分别得到赤芝 提取物3.5kg、紫芝提取物3.6kg、云芝提取物4.1kg、樟芝提取物3.2kg、姬松 茸提取物3.8kg、灰树花提取物4.5kg、人参提取物1.3kg。也就是说，1kg赤芝 提取物相当于2.9kg赤芝，1kg紫芝提取物相当于2.8kg紫芝，1kg云芝提取物 相当于2.4kg云芝，1kg樟芝提取物相当于3.1kg樟芝，1kg姬松茸提取物相当 于2.6kg姬松茸，1kg灰树花提取物相当于2.2kg灰树花。
(5)制备灵芝孢子油
本实施例中，采用超临界二氧化碳流体萃取方法制备灵芝孢子油。具体地， 称取破壁灵芝孢子粉10kg，以30％乙醇水溶液制粒，投于萃取釜，萃取条件为： 温度为45℃，压力为30MPa，时间为2h，流量为35kg/h。二级分离的工艺是：第 一级分离压力为10MPa，分离温度为50℃，第二级分离压力6MPa，分离温度40℃。 收集分离釜I解析出来的灵芝孢子油2.3kg。
(6)制备治疗肿瘤的中药组合物
本实施例中，制备软胶囊剂的治疗肿瘤的中药组合物，具体地将赤芝提取 物、紫芝提取物、云芝提取物、樟芝提取物、姬松茸提取物、灰树花提取物、 人参提取物各2kg混合，与21kg灵芝孢子油混匀，加入辅料蜂蜡0.2kg，再按照软 胶囊工艺压制成软胶囊，每粒内容物为500mg。
可以理解，也可以采用其它常用制药方法，将所述各提取物的混合物制成 其它形式的药剂，例如片剂、口服溶液等等。
实施例2
一种由赤芝、紫芝、云芝、樟芝、姬松茸、灰树花、人参以及灵芝为原料 制作的治疗肿瘤的中药组合物的方法，其中制备破壁赤芝、紫芝、云芝孢子粉； 制备破壁樟芝、姬松茸、灰树花粉；制备破壁人参粉以及制备赤芝提取物、紫 芝提取物、云芝提取物、樟芝提取物、姬松茸提取物、灰树花提取物和人参提 取物；以及制备灵芝孢子油的步骤基本与实施例1相同。不同之处在于，各原 料的粉碎粒度为200目，且加5倍水量加热回流萃取3次，每次1小时，在加 热回流萃取中用95％的乙醇沉淀，从而分别得到赤芝提取物、紫芝提取物、云 芝提取物、樟芝提取物、灰树花提取物、人参提取物。
此外在制备该治疗肿瘤的中药组合物的步骤中，本实施例将治疗肿瘤的中 药组合物制备成软胶囊剂，具体地将赤芝提取物2kg、紫芝提取物1kg、云芝提 取物1kg、樟芝提取物1kg、姬松茸提取物2kg、灰树花提取物1kg、人参提取 物2kg混合，与10kg灵芝孢子油混匀，加入辅料蜂蜡0.1kg，氢化油0.02kg、 明胶0.01kg、甘油0.01kg，再按照软胶囊工艺压制成软胶囊，每粒内容物为 500mg。
可以理解，也可以采用其它常用制药方法，将所述混合物制成其它形式的 药剂，例如片剂、口服溶液等等。
实施例3
一种由赤芝、紫芝、云芝、樟芝、姬松茸、灰树花、人参以及灵芝为原料 制作的治疗肿瘤的中药组合物的方法，其中制备破壁赤芝、紫芝、云芝孢子粉； 制备破壁樟芝、姬松茸、灰树花粉；制备破壁人参粉以及制备赤芝提取物、紫 芝提取物、云芝提取物、樟芝提取物、姬松茸提取物、灰树花提取物和人参提 取物；以及制备灵芝孢子油的步骤基本与实施例1相同。不同之处在于，各原 料的粉碎粒度为80目，且加8倍水量加热回流萃取2次，每次3小时，在加热 回流萃取中用45％的乙醇沉淀，从而分别得到赤芝提取物、紫芝提取物、云芝 提取物、樟芝提取物、灰树花提取物、人参提取物。
此外在制备中药组合物的步骤中，本实施例中，制备软胶囊剂的中药组合 物，具体地将赤芝提取物3kg、紫芝提取物3kg、云芝提取物4kg、樟芝提取物 2kg、姬松茸提取物2kg、灰树花提取物2kg、人参提取物4kg混合，与5kg灵 芝孢子油混匀，加入辅料蜂蜡0.1kg，氢化油0.02kg、明胶0.01kg、甘油0.01kg， 再按照软胶囊工艺压制成软胶囊，每粒内容物为500mg。
同样可以理解，也可采用其它常用制药方法，将所述混合物制成其它形式 的药剂，例如片剂、口服溶液等等。
实施例4
一种治疗肿瘤的中药组合物，其根据赤芝、紫芝、云芝、樟芝、姬松茸、 灰树花以及人参中所需的有效成分，选择相应重量的赤芝、紫芝、云芝、樟芝、 姬松茸、灰树花以及人参混合灵芝孢子油进行直接制药。即1kg赤芝提取物相 当于2.9kg赤芝，1kg紫芝提取物相当于2.8kg紫芝，1kg云芝提取物相当于2.4kg 云芝，1kg樟芝提取物相当于3.1kg樟芝，1kg姬松茸提取物相当于2.6kg姬松 茸，1kg灰树花提取物相当于2.2kg灰树花。所述治疗肿瘤的中药组合物具体制 作方法如下：分别取5.8kg赤芝，5.6kg紫芝，4.8kg云芝，6.2kg樟芝，5.2kg 姬松茸，4.4kg灰树花进行超声粉碎成粉末，粉碎粒度为300目，与20kg灵芝 孢子油混匀。可以理解的是，可以采用多种常用制药方法，将所述混合物制成 各种形式的药剂，例如软胶囊剂、片剂、口服溶液等等。