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化学发光底物液

阅读：492发布：2020-05-13

专利汇可以提供化学发光底物液专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明是一种高稳定性化学发光底物液，用于免疫分析检测领域。所述发光液中含有机溶剂二甲基甲酰胺（DMF）、鲁米诺（luminol）、过氧化氢（H2O2）、增强剂4-（咪唑-1-基）苯酚（4-IMP）、苯甲酸钠、Tris-HCl缓冲液。本发明的化学发光底物液稳定性好、线性范围长、发光持续时间长、灵敏度好、使用方便、成本便宜。，下面是化学发光底物液专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种高稳定性化学发光底物液，其特征是同时包含发光试剂和氧化试剂，所述发光底物液中含有二甲基甲酰胺0.2%，鲁米诺0.63 mol/L，过氧化氢2 mol/L，4-（咪唑-1-基）苯酚1 mol/L，苯甲酸钠0.1%，Tris-HCl 0.01mol/L，PH9.0。
2.根据权利要求1所述，二甲基甲酰胺浓度为0.1%-3.2%。
3.根据权利要求1所述，鲁米诺浓度为0.3-1.2mol/L。
4.根据权利要求1所述，过氧化氢浓度为1-4mol/L。
5.根据权利要求1所述，4-（咪唑-1-基）苯酚浓度为0.25-2mol/L。
6.根据权利要求1所述，苯甲酸钠浓度为0.1-0.3%。
7.根据权利要求1所述，Tris-HCl浓度为0.005-0.05mol/L，PH值为7.4-9.5。
8.根据权利要求1所述的系统，其特征在于，增强剂为4-（咪唑-1-基）苯酚或4-碘苯酚或4羟基-4’-联苯酚或其衍生物
4-（咪唑-1-基）苯酚：
4-碘苯酚：
4羟基-4’-联苯酚：。
9.根据权利要求1所述的系统，其特征在于组分少，配制简便，在其基础上进行调整或修饰均视为本发明保护内容。

说明书全文

化学发光底物液

技术领域

[0001] 本发明涉及一种高稳定性化学发光底物液，是单一试剂化学发光底物液。应用于化学发光检测领域。

背景技术

[0002] 目前，临床检验用体外诊断检测试剂领域应用的最为广泛的检测方法，主要是化学发光免疫分析法。化学发光免疫分析法是临床免疫检验技术发展的较高诊断技术，它可以进行定量检测，与放射性免疫分析法和酶联免疫分析法相比，具有放射性免疫分析法和酶联免疫分析法的所有优点，同时克服了放射性免疫分析法和酶联免疫分析法的缺点。其中化学发光免疫分析法所用到的化学发光底物液是最重要的试剂，是限制化学发光检测的关键物质。化学发光底物液的灵敏度、发光值测定范围以及稳定性等显著影响化学发光免疫分析检测。市面上一般的化学发光底物液是有两种试剂组成：A液和B液，在使用之前等比例混合，混合后在10分钟之内使用，超出一定时间后发光值和发光梯度就开始下降，导致检测范围变窄，线性变差，灵敏度降低，不能满足检测需要。

发明内容

[0003] 鉴于一般化学发光底物液的问题：①配液麻烦：需要分别配置2种不同试剂A液和B液，②使用麻烦：使用时A液和B液需要等比例混合，③稳定性短：A液和B液等比混合好之后要在10分钟之内使用。本发明提出了一种试剂化学发光底物液，克服了一般化学发光底物液，配液麻烦、使用麻烦、稳定性短的问题带来的局限性，使配制更简便，保存和操作更简单，稳定性更长，便于检测应用。

[0004] 本发明涉及的化学发光底物液成分及浓度如下：二甲基甲酰胺0.1%-3.2%，鲁米诺0.3-1.2 mol/L，过氧化氢1-4 mol/L，增强剂4-（咪唑-1-基）苯酚0.25-2 mol/L，苯甲酸钠
0.1-0.3%，PH7.4-9.5的Tris-HCl 0.01mol/L缓冲体系。

[0005] 本发明优选的化学发光底物液成分包含：二甲基甲酰胺0.2%，鲁米诺0.63 mol/L，过氧化氢2 mol/L， 4-（咪唑-1-基）苯酚1 mol/L，苯甲酸钠0.1%，PH9.0的Tris-HCl 0.01 mol/L缓冲体系。

[0006] 使用本发明的化学发光底物液，鉴于本发明提供的试剂配方及配制方案，配制时不必配置成传统的A液和B液，使用前将A液和B液等比例混合。本发明提供的方案成分简单，配制过程及操作简便，配制一种试剂即可，使用前也不需要与另外一种试剂再混合；低温冷藏，使用前恢复至室温。另外配方中的各试剂组分、原料均对人体无毒无害，对环境也无污染；适用于半自动化学发光仪，也适用于全自动化学发光检测系统。

具体实施方式

[0007] 以下对本发明的实施举例进行说明：配制1000ml化学发光底物液，具体配方如下：
二甲基甲酰胺2g
Tris-HCl 0.01mol/L pH9.0
鲁米诺 0.63mol/L
过氧化氢2mol/L
4-（咪唑-1-基）苯酚1mol/L
苯甲酸钠 1g
先配制0.01mol/L的Tris，浓HCl调节PH值至9.0，再称量二甲基甲酰胺 2g配制二甲基甲酰胺有机溶剂溶解增强剂4-（咪唑-1-基）苯酚，之后依次加入其他组分；搅拌至各组分充分溶解，混合均匀，定容，即配制成本发明的化学发光底物液。

[0008] 实验步骤：（1）包被板准备：以PH7.4的PBS抗CEA单抗包被液包被发光板，包被浓度为5ug/ml，包被量为150ul/孔，4℃包被12h，之后洗涤液洗板5次；封闭液封闭150ul/孔，室温封闭4-6h，甩干封闭液，然后将包被板在吸水纸上拍干，37℃烘干2h后备用。

[0009] （2）抗CEA单抗酶结合物制备：以碘酸钠法制备抗CEA单抗-HRP酶结合物，酶标记物稀释液为10%小牛血清，0.02mol/L Tris-HCl PH 7.4的蛋白缓冲液，含防腐剂P-300 0.1%。

[0010] （3）校准品制备：配制0ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、500ng/ml系列的CEA校准品，校准品稀释液为10%牛血清白蛋白（BSA），0.01mol/L Tris-HCl PH 7.4的蛋白缓冲液，含防腐剂P-300 0.1%，吐温20 0.1%。

[0011] （4）CEA校准品每孔加50ul，每个点做复孔，再加100ul酶结合物，37℃温浴1h，之后洗板液洗板5次，吸水纸上拍干残留液体。

[0012] （5）每孔加入化学发光底物液100ul，避光反应5min后于化学发光仪检测其信号值。

[0013] 为了体现本发明所述的单组分化学发光底物液的优势，同时以进口的Thermo Scientific PierceA、B化学发光底物液和国产索莱宝A、B化学发光底物液为对照，进行灵敏度，测量范围，发光持续时间比较。

[0014] 加样设计如表一：表一
试剂板条第1-2条板条第3-4条板条第5-6条
校准品 ◆ ◆ ◆
酶结合物 ◆ ◆ ◆
Thermo Scientific Pierce化学发光底物液 ◆
索莱宝化学发光底物液 ◆
本发明化学发光底物液　　 ◆
检测结果如表二：
表二
校准品（ng/ml） Thermo Scientific Pierce 索莱宝本发明
0 658 1126 725
2 10598 8965 10012
10 52968 40123 51236
50 260456 160891 243686
100 480654 280123 456987
500 2089655 1256477 2004563
十分钟之后，对其信号值再次进行检测，结果如表三：
表三
校准品（ng/ml） Thermo Scientific Pierce 索莱宝本发明
0 712 1654 762
2 9965 8023 9836
10 50856 35621 50253
50 240632 95456 226584
100 461365 146548 446548
500 2065821 400236 2086954

[0015] 综上所述，本发明涉及的单一组分化学发光底物液，配制简单，操作简便，使用前不需要额外混合其他物质，检测范围宽，线性好，灵敏度高；在使用过程中，能够保持良好的发光强度，稳定性好。

[0016] 此外，本发明提供的配方，原材料少，成本低，配制简便，对人员和环境均无毒无害。

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