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电磁辐射的美容使用

阅读:542发布:2020-05-13

专利汇可以提供电磁辐射的美容使用专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且对 哺乳动物 皮肤 的表面区美容处理的方法,处理通过以900nm到1500nm之间的发散电磁 辐射 源照射皮肤,且使用特定 波长 的 电磁辐射 。美容处理包括降低或减轻或去除或减小皱纹或细纹,更生皮肤,延缓或逆转老化迹象,改进皮肤弹性、色泽、质地和外观且美化面部、胸部、臂部、臀部、股部、腹部或颈部的皮肤。,下面是电磁辐射的美容使用专利的具体信息内容。

1.一种对哺乳动物皮肤的表面区美容处理的方法,其包括以900 nm到1500nm之间的发散电磁辐射源照射皮肤。
2.根据权利要求1所述的方法,其中美容处理降低或减轻或去除 或减少皱纹或细纹,更生皮肤,延缓或逆转老化迹象,改进皮肤弹性、 色泽、质地和外观且美化皮肤。
3.根据权利要求1或2的任一项所述的方法,其中皮肤包括面 部、胸部、臂部、臀部、股部、腹部或颈部的最外部的表皮、基底层 和真皮。
4.根据任意前述的权利要求所述的方法,其中发散光在10度至 50度之间。
5.根据任意前述的权利要求所述的方法,其中电磁辐射具有大约 10nm到120nm的带宽。
6.根据任意前述的权利要求所述的方法,其中电磁辐射的波长中 心大约为从如下组中选择的特定波长的任一个或多个,该组包括:940 nm、950nm、1040nm、1060nm、1072nm和1267nm。
7.根据任意前述的权利要求所述的方法,其中电磁辐射是连续的 或脉冲的。
8.根据权利要求7所述的方法,其中当电磁辐射是连续的时,强 度至少为500μW/cm2且直至500mW/cm2。
9.根据权利要求7所述的方法,其中当电磁辐射是脉冲的时,强 度至少为500μW/cm2峰值功率平均功率直至500mW/cm2。
10.根据权利要求9所述的方法,其中当电磁辐射是脉冲的时, 强度的平均功率在50μW/cm2至100μW/cm2的区域内。
11.根据权利要求7、9或10的任意项所述的方法,其中当电磁 辐射是脉冲的时,它施加的期间为至少10μs至15μs。
12.根据权利要求7、9到11的任意项所述的方法,其中当电磁 辐射是脉冲的时,频率/重复率在300Hz至900Hz的范围内。
13.根据权利要求12所述的方法,其中频率/重复率为600Hz或 大约600Hz。
14.根据任意前述的权利要求所述的方法,其中电磁辐射施加到 皮肤至少30秒且直至数分钟。
15.根据任意前述的权利要求所述的方法,其中电磁辐射源是发 光二极管
16.根据任意前述的权利要求所述的方法,其中辐射源发射器包 括至少一个或多个PN结,PN结布置为以波长中心是或大约是从如下 组中选则的任一个或多个波长发射辐射,该组包括:940nm、950nm、 1040nm、1060nm、1072nm和1267nm。
17.根据任意前述的权利要求所述的方法,其中中心是或大约是 特定的波长的波长具有10nm到120nm之间的窄波带。
18.根据任意前述的权利要求所述的方法,其中中心是或大约是 特定的波长的波长具有大约50nm的窄波带。
19.一种改进哺乳动物皮肤表面区弹性特征的方法,其包括以900 nm到1500nm之间的发散电磁辐射源照射皮肤。
20.一种降低哺乳动物皮肤表面区的表面积和体积的方法,其包 括以900nm到1500nm之间的发散电磁辐射源照射皮肤。
22.一种防止或降低或逆转由UV光或光老化导致的哺乳动物皮肤 表面区的皮肤损害的方法,其包括以900nm到1500nm之间的发散电 磁辐射源照射皮肤。
23.根据权利要求20、21或22的任意项所述的方法,进一步包括 权利要求3到19的特征的任一个或多个。
24.900nm到1500nm之间的发散电磁辐射的使用,用于表面皮肤 的区的美容处理。
25.根据权利要求24所述的使用,进一步包括权利要求3到19的 特征的任一个或多个。
26.一种改进免疫细胞成活的体外方法,其包括将外周血单核细 胞暴露于中心为大约1072nm波长的窄带宽发散电磁辐射。
27.根据权利要求26所述的方法,其中外周血单核细胞是淋巴细 胞。
28.根据权利要求26或27所述的方法,其中以植物血球凝集素 (PHA)刺激外周血单核细胞。

说明书全文

发明涉及电磁辐射的美容使用,用于降低或减轻或去除或减小 皱纹或细纹,特别地但不专有地面部和颈部皱纹和其他老化迹象。本 发明也提供了电磁辐射的用于一般地更生皮肤、延缓老化迹象和改进 皮肤弹性、色泽和外观的使用。本发明也提供了处理皮肤的方法以降 低或减轻或延缓或逆转可见的老化迹象且用于美化皮肤,还提供了用 于执行这样的美容处理的设备。

背景技术

在年轻的皮肤中,刚好在皮肤表面下方的胶原质形成了有组织的 带有良好的弹性和柔性的网格。当女性经过更年期且男性年龄变老时 他们都经历了增加的皮肤皱纹和减少的皮肤厚度。在老化期间,胶原 质改变其结构且对皮肤的美容外观产生负面的影响。胶原质的改变也 可以因长期暴露于阳光的紫外线中而加速。人们每年在美容产业中花 费了数十亿英镑且据估计一般女性每年在皮肤护理和美容上花费大约 800英镑。
现有技术中已知使用化学剥脱或美容制剂,典型地以霜的形 式,来防止或减轻皱纹且用作抗老化剂。这样的制剂可以包括合成的 产品或天然出现的植物和/或动物产品。成分局部地且通常地以常规施 加以最大化其效用。然而,即使是经常性地使用这样的成分减轻了可 见的老化迹象的证据也是有限的。
作为美容制剂和外科改脸的替代,已知使用低平的电磁辐射源 来实现皮肤内的光化学反应,通常称为生物刺激。生物刺激取决于增 强的复制和合成的构思,这导致增加的胶原质产生、增加的纤维原细 胞刺激或增加的DNA合成。光能在细胞线粒体和细胞膜内的细胞色素 和卟啉中被吸收而产生小量的纯态。典型地,对急性症状患者要求 四到六个阶段且对于慢性症状要求六到八个处理。这种类型的处理是 长期的且昂贵的。
自1990年代以来,激光已被用于皮肤修复和皱纹去除。皱纹去除 是侵入性技术,其中组织被一层层的去除,侵入真皮且有效地导致二 度烧伤。热量沉积在真皮中而收缩了胶原质且张紧皮肤。激光导致真 皮中胶原质的变性和交联的形成,这导致伸展皮肤的张紧效果,因此 降低或去除了皱纹。此过程称为热解且对组织的热加热是治疗的先 决条件,热解的热阈值被认为大约是70摄氏度。然而,与传统的激光 处理有关的问题是患者可能受到烧伤且因此在处理后许多周内具有皮 肤渗出、结痂和发红。另外,已经报道了二氧化激光皱纹去除处理 后高的色素沉淀的发生率。
因此存在对替代的有效且安全的方法的需求,用来降低或减轻或 去除或减小皱纹或细纹、皮肤更生、延缓老化迹象和改进皮肤弹性、 色泽和外观且用于一般的皮肤美化。

发明内容

根据本发明的第一方面,提供了美容处理哺乳动物皮肤表面区的 方法,方法包括以900nm到1500nm之间的发散电磁辐射源照射皮 肤。
此处提及的“美容处理”包括降低或减轻或去除或减小皱纹或细 纹、更生皮肤、延缓或逆转可见的老化迹象、改进皮肤弹性、色泽、 质地和外观和一般地美化。
此处提及的“皮肤”包括面部、胸部、臂部、臀部、股部、腹部 或颈部的最外部的表皮、基底层和真皮。
说明书的描述和权利要求书的全部中,词语“包括”和“包含” 以及词语的变体,例如“comprising”和“comprises”,意指“包括但 不限制于”,且不意图于排除(且没有排除)其他的组成部分、附加 物、部件、整体或步骤。
在说明书的描述和权利要求书的全部中,单数包括复数,除非上 下文中另外地要求。特别地,其中使用了不定冠词,说明书需要理解 为考虑了复数以及单数,除非上下文中另外地要求。
结合本发明的特别的方面、实施例或例子描述的特征、整体、特 性、化合物、化学组成部分或组需要理解为可以以此处描述的任何其 他方面、实施例或例子实施,除非与之矛盾。
优选地,发散光在10度至50度之间。发散意指从电磁源发射的 电磁辐射具有至少5度的发散半。优选地,电磁辐射的发散度在15 度到25度的半角发散的范围内。
因此,将理解的是本发明的方法不包括使用激光作为电磁辐射 源。
现在惊人地确定,低强度的小带宽电磁辐射(优选地大约10nm 到120nm且更优选地50nm)在皮肤美容处理中有效。假定电磁辐射 起作用的方式是通过经过细胞成分/细胞器、酶,例如但不限制于可诱 导的一氧化氮合酶(iNOS)的能量传输的方式。具有通过它的电磁辐 射波长范围的水分子将产生数个传输峰值。这些传输峰值与本发明的 优选的治疗电磁辐射波长范围有关且因此对于水分子以作用的一般机 制起作用。
优选地,电磁辐射波长的中心大约是从如下组中选择的任一个或 多个特定的波长,包括:940nm、950nm、1040nm、1060nm、1072nm 和1267nm。
发明人的研究已显示波长中心大约是这些以上指定波长且特别地 大约是波长中心为1072nm或1267nm的单有限带宽的光对降低皱纹 长度和面积特别地有效。注意到这两个波长对应于水分子光传输曲线 的峰值发射波长且因此发明人认为作用的机制涉及水且可能地涉及细 胞膜。
发明人的研究也显示出1072nm和880nm得出对体外淋巴细胞成 活力的相反的作用,前者是保护性的而后者波长是对细胞有害的。此 外,发明人提供了证据证明1072nm对UV引起的对淋巴细胞有害性 起到保护。
优选地,电磁辐射是连续的或脉冲的。
优选地,当电磁辐射是连续的时,强度至少为500μW/cm2且直至 500mW/cm2。
优选地,当电磁辐射是脉冲的时,强度至少为500μW/cm2峰值功 率且平均功率直至500mW/cm2。平均功率为峰值功率乘以施加了辐射 的总时间的比例。例如,如果峰值功率为500μW/cm2且以600Hz的频 率脉冲持续10μs,则平均规律为30μW/cm2。
依赖于热力加温的现有技术方法指定了0.5W/cm2的下限,寻求避 免任何热效应的本发明的运行低于此水平。
优选地,当电磁辐射是脉冲的时,强度的平均功率在50μW/cm2 至100μW/cm2的范围内。
发明人发现当施加到皮肤时功率范围可以合适地从500μW/cm2峰 值到500mW/cm2连续的或峰值功率。典型地在皮肤上使用了20 mW/cm2,但此值取决于对象肥胖或肌肉发达如何,且因此取决于皱纹 位于的深度如何。
优选地,当电磁辐射是脉冲的时,将其施加至少10至15μs的时 期,且更优选地以300Hz至900Hz的频率/重复率施加,再更优选地 频率/重复率是或大约是600Hz。
发明人的研究显示电磁辐射可以是相干或是非相干的,临床结果 不受此参数影响。
优选地,电磁辐射施加到受影响区至少30秒且直至数分钟。典型 的暴露时间在3分钟的范围,然而,对于更深的皱纹此时间可以根据 个体的脂肪层深度增加且暴露可以直至10分钟。
应理解的是发射电磁辐射的功率源将必须产生大于临床效果所要 求强度的强度,因为发明人已显示出在处理期间施加的治疗光的量的 大约99%在穿过皮肤表面期间损失。因此,当执行处理时施加的辐射 的强度将必须被修正。
从前文中所理解,电磁辐射可以连续地或以切换的(脉冲的)方 式指向目标位置。切换的主要好处是使得功率能守恒且便于更高的峰 值功率输出,因此改进了美容响应。
优选地,电磁辐射治疗源包括用于降低冲击到处理位置上的环境 辐射的量的装置。
优选地,电磁辐射源是发光二极管。来自这样的设备的辐射能电 气地运行或辐射可以通过光纤输送系统输送到施加器。
优选地,辐射源发射器包括布置为发射其波长中心是或大约是前 述的特定波长的辐射的PN结。单发光二极管组件包括多个定向的结。 红外发射二极管可以布置为不仅发射在特定的频率处的辐射而且发射 高强度发散束。发散光也可以从发光聚合物得到。
本发明涉及以具有从可见光到红外光且中心在大约940nm、950 nm、1040nm、1060nm、1072nm或1267nm的波长范围的发散电磁 辐射对皮肤美容处理的方法。电磁辐射以低强度施加使得不导致对处 理区周围的皮肤或任何其他组织或器官的热损害或发热。以此方式, 本发明的方法与现有技术不同,因为效果是非热的且避免了热解。另 外,本发明是与生物刺激的直觉相反的,因为增加的复制和合成的构 思被确定地避免。确实,发明人发现在本发明中使用的波长特别地抑 制了DNA的合成,抑制了胶原质的产生且抑制了纤维原细胞的复制。 发明人的结果已显示通过抑制胶原质的产生而非增加胶原质的密度, 惊人地改进了在细胞之间的结缔组织的质量,以实现如由现有技术所 实现的希望的效果。
根据本发明的第二方面,提供了改进哺乳动物皮肤表面区弹性特 征的方法,方法包括以900nm到1500nm之间的发散电磁辐射源照射 皮肤。
发明人已发现,使用本发明的方法弹性蛋白纤维变得破碎得更少 且更均匀,因此改进了皮肤的弹性特征。例如,当处理胸部皮肤时发 明人发现不仅改进了皮肤的弹性而且也改进了皮肤的色泽。发明人也 已发现,本发明的方法改进了细胞成活力。
根据本发明的第三方面,提供了降低哺乳动物皮肤表面区的组织 的表面积和体积的方法,方法包括以900nm到1500nm之间的发散电 磁辐射源照射皮肤。
由本发明的方法获得的结果展示通过降低眼部上方和眼部下方的 皮肤体积,可以降低面部侧面的下垂的外观。以此方式发明人显示出 组织体积和皮肤表面积的降低与改进的弹性特征提供了希望的美容效 果。
将理解的是在本发明的方法的第四方面中,也可以用于防止或降 低或逆转由UV光或光老化导致的皮肤损害。
根据本发明的第五方面,提供了900nm到1500nm之间的发散电 磁辐射的使用,用于表面皮肤的美容处理。
优选地,本发明的第二、第三、第四和第五方面进一步包括任一 个或多个前述的本发明第一方面的特征。
激光和LED的光治疗已被显示在许多治疗领域提供了临床好处。 使用单独照射和多照射方案的范围,已评估了中心波长大约是1072nm 和880nm的光对新准备的以植物血球凝集素(PHA)刺激的人体淋巴 细胞的效果。在每日单独照射经过五日时期后,与未处理的对照组相 比,当以1072nm照射后,保留下的活细胞个数显著地更高,且当以 880nm照射后,保留下的活细胞个数显著地更低。另外,与仅以UVA 处理的细胞相比,在以1072nm预先处理后且暴露于UVA的细胞的个 数显著地更高。在收获后第3日以各种波带两次照射的细胞在第5日 时确定,在暴露于1072nm和1072nm与1268nm的交替照射后细胞 成活力的百分比增加,而仅以880nm照射后细胞成活力的百分比降 低。这些观察导致发明人认为中心波长大约为1072nm的光可能在体 外方法中对改进免疫细胞成活力是有用的。
根据本发明的第六方面,提供了改进免疫细胞成活力的体外方 法,方法包括将外周血单核细胞暴露于中心波长大约为1072nm的窄 带宽发散电磁辐射。
优选地,外周血单核细胞是淋巴细胞。
优选地,以植物血球凝集素(PHA)刺激外周血单核细胞。
因而将理解的是可将细胞再引入到它们所获取自的个体内以促进 个体的免疫系统。
根据本发明的进一步的方面提供了用于对皮肤的美容处理的便携 式光发射设备,设备包括用于向发光装置供电的电源装置,发光装置 产生900nm至1500nm之间的发散的电磁辐射,还包括光所通过的柔 性或成形的面板,和柔性或成形的面板接附到其上的壳体,使得设备 可以在要求美容处理的身体部分周围轮廓相符。
优选地,电源装置是电池电网电。
优选地,发光设备是LED或更优选地是多个LED。将理解的是本 发明的设备不是激光设备。
优选地,设备也可以包括至少一个或多个PN结,PN结布置为以 中心波长是或大约是从如下组中选则的任一个或多个特定的波长发射 辐射,包括:940nm、950nm、1040nm、1060nm、1072nm和1267nm。
附图说明
现在将参考如下附图描述本发明,其中:
图1示出了用于将本发明的方法付诸实践的设备的一个的俯视图 (1A)、侧视图(1B)和截面视图(1C和1D)。
图2示出了用于将本发明的方法付诸实践的设备的替代设备的侧 视图;
图3示出了再另一个用于将本发明的方法付诸实践的设备的替代 设备的前视图、图4示出了该替代设备的侧视图且图5示出了该设备 的后视图;
图6中柱1和柱2示出了在第3日和第5日时的单独的3分钟的 IR1072处理后在第5日时检测凋亡前PHA母细胞的细胞成活力百分 比。数据与各对照对比且使用ANOVA进行分析,其中*p<0.05。柱3、 柱4和柱5示出了在第3日和第5日时的多次5×3分钟的IR1072和 IR880处理后在第5日检测细胞成活力前的PHA母细胞的细胞成活力 百分比。数据与各对照在第5日时对比且使用ANOVA进行分析,其 中**p<0.01。
图7示出了在以IR1072或以IR880照射的每日单独3分钟处理后 PHA母细胞的细胞成活力百分比。细胞成活力使用膜联蛋白V凋亡套 件确定。IR1072的数据与各IR880的数据对比使用ANOVA分析,其 中在第1、3、4和5日观察到显著的差异*p<0.01,且在第2日观察到 趋向于显著的趋势。
图8示出了在第3日以IR1072预处理4×3分钟且在第4日以 IR1072预处理1×3分钟的PHA母细胞,且然后细胞被培养4小时后暴 露于UVA40分钟。然后检定样本细胞成活力。单独地使用ANOVA分 析数据且与UV处理对比,其中**p<0.01。
图9示出了各种波带在PHA母细胞上的效果,该PHA母细胞在 第3日被处理2×3分钟且被分析。使用多ANVOA分析数据且与未处 理的对照对比,其中**p<0.01。
图10示出了西部印迹,西部印迹示出了IR处理在iNOS蛋白质表 达水平上的效果。PHA母细胞每天暴露于红外源、IR1072或IR8801×3 分钟且在第3日和第5日使用带有选择性抗iNOS抗体(Autogen Bioclear,UK)的定量的免疫印迹检定iNOS蛋白质表达。(免疫印迹 被重探测且以β-肌动蛋白抗体(Sigma,UK)标准化。)泳道1,对照 细胞(第5日);泳道2,IR1072处理的细胞(第5日);泳道3,IR880 处理的细胞(第5日)。数据通过由多个ANOVA与显著性设定在p<0.01 的水平对比来比较。
图11A示出了每日以1072nm处理两个月后与相同个体的图11B 在处理开始前相比的效果,图11C示出了处理前的图和以1072nm在 相同个体上处理一个月后的图的叠加
图12示出了用于人体研究的方案的示意性表示。
图13A(处理前)和图13B示出了多个处理的效果和眼部下方的 眼袋的减小。
图14A、B和C示出了经历了相同的方案的与图12不同的个体。

具体实施方式

存在数个宣称在利用蓝、黄或红色波长内的非热光处理细纹和皱 纹中有效的产品。在本发明中,发明人试图确定任何依赖于波长的生 理反应。单独和组合地检查了所使用的波长范围从660nm到1268nm 的多种有限带宽。发明人发现其中心为1072nm的单有限带宽的光看 来对人体淋巴细胞具有正面效果。此波长的光显示出保护人体淋巴细 胞防止UV辐射的损害效果,UV辐射是已知的光老化剂。
将本发明的方法付诸实践的优选的设备是便携式光发射设备1,它 能以电池运行或能以电网运行。设备顺应了被处理区2的轮廓,如面 部、眼部、臂部、股部或胸部。
图1A示出了便携式手持光发射设备的俯视图,图1B示出了设备 的侧视图且图1C和图1D示出了设备的截面图,该设备具有适合于眼 部的形状。红外光通过透明的面板3到达被处理的皮肤。单元的电源 通过区4连接且设备通过主体5保持在合适的位置。面板3是略微凹 面的以顺应被处理区的轮廓且避免当放置在眼眶上时在眼部上的不适 当的压力。空间6包括了控制电子装置,它控制了处理周期的强度和 持续时间。空间6还容纳了LED7。图2示出了用于放置在更大的皮 肤部分上的设备的替代实施例。
参考附图的图3到图5,根据本发明的第二实施例具有多面板窄波 长辐射源的形式。在此情况中,多个面板7以并排关系安装在铰链8 上,铰链8又通过臂10和11连接到台9上。该布置使得面板能相互移 动且台能调整以改变光照的方向。台从地板延伸或接附到椅子或床 上。
每个面板7的前壁是透明的,且前壁下安装了辐射发射设备12的 阵列。
如更早地在以上描述的设备的实施例,本发明的实施例包括用于 限制施加辐射的时间和监测环境辐射且当超过环境辐射的阈值时提供 警报的控制电子装置。
本发明的设备可以用于对影响臀部和腿部的脂肪团和胸部的组织 色泽的美容改进,它们也可以用于全脸处理。
方法和材料
细胞准备
肝素化人全血从健康的志愿者获取且使用Lymphoprep(Axis- Shield Poc AS Oslo,Norway)分离外周血单核细胞(PBMC)且以400 ×g离心25分钟。从界面层隔离PBMC,在不带L-谷酸盐的RPMI 洗液(GibcoTM)中洗两次且在RPMIcm(RMPI洗液+10%体积百分 比胎血清+1%青霉素/链霉素+1%L-谷氨酸盐)中重悬浮。因 此将细胞密度以RPMIcm调整到1×106个细胞/毫升。将100μlPHA(外 源凝集素′Sigma)添加到细胞中以制成PHA母细胞。细胞在37摄氏 度5%在CO2中培养。
试验设定
如下是五个方案的设定:
1.PHA母细胞在收获后第3日、第4日和第5日暴露于红外光源, IR1072。使用35mm培养皿,所有细胞暴露于单独的3分钟红外光的 处理。在每日处理后,在第5日对个体复制细胞样本分析细胞成活力 百分比。
2.PHA母细胞在第3日和第5日暴露于IR1072和IR880处理5×3 分钟且在第5日被分析。在第5日每个处理后确定细胞成活力和iNOS 的表达。
3.PHA母细胞从第1日开始每日暴露于单独的3分钟剂量的 IR1072和IR880。在每日照射后分析细胞成活力百分比。
4.PHA母细胞在第3日暴露于IR1072处理4×3分钟且在第4日暴 露于单独的3分钟处理。然后在暴露于UVA40分钟前将细胞保留4小 时,且然后确定细胞成活力。
5.在组织培养管中培养细胞直至第3日且在第3日将细胞暴露于多 种波带2×3分钟。波带包括IR660nm、IR880nm、IR950nm、IR1267nm、 IR1072nm、IR1072nm与IR1268nm的交替、IR1072nm和IR1267nm、 1微秒的IR1072nm脉冲和7微秒的IR1072nm脉冲。在照射后立即分 析细胞的细胞成活力百分比。
特别地对于所有使用的方案,对于全部IR处理和对比处理,所有 培养皿的温度维持在室温。
膜联蛋白V凋亡套件
使用膜联蛋白V凋亡检测套件(Autogen Bioclear,UK)分析细 胞成活力。凋亡可以通过磷脂酰丝氨酸(PS)在细胞膜中位置改变来 检测。在非凋亡细胞中,大多数PS分子位于质膜的内层,但只要当导 致凋亡后,PD再分配到膜的外层。可以容易地以膜联蛋白V检测到暴 露的PS。结合有膜联蛋白V的细胞在质膜中示出了绿色着色。丧失了 膜完整性的细胞遍及细胞质示出了红色着色(PI)且在细胞表面(质 膜)示出了绿色着色的晕。每培养皿1×105至1×106的细胞被冲洗且在 检定结合缓冲液中重悬浮。在于室温下黑暗中培养15至30分钟前, 将5μl的膜联蛋白V和10μl的碘化丙啶(PI)添加到细胞中。在双滤 光镜组下使用荧光显微镜观察细胞的FITC和若丹明,且至少由两个观 察者计数盲点
西部印迹分析
解冻的细胞团悬浮液在上以Dounce均质机均质化。使用牛血清 白蛋白作为标准使用Lowry检定来确定在细胞悬浮液中的蛋白质水 平。将蛋白质水平调整为10μg,蛋白质加载在每个泳道中。使用6% 的聚丙烯酰胺凝胶体进行标准电泳。电泳后以50V将蛋白质转移到硝 化纤维(NC)膜上2.5小时。NC膜以5%的无脂干牛奶在室温下封闭 在包括0.2%的Tween20(Sigma,UK)的1×Tris缓冲盐溶液(TBS) 中1小时。NC膜以一次抗体iNOS(稀释1∶2500)在4摄氏度下培养 一夜。以缓冲洗液(2.5%的无脂干牛奶,TBS中0.2%的Tween20) 洗NC膜4×10分钟且以抗兔辣根过氧化物酶链接的二次抗体(稀释 1∶2000)培养1小时。NC膜以缓冲洗液洗4×10分钟。使用68mM鲁 米诺、1.25 mM的p-couramic酸和30%的过氧化氢的基质将来自NC 的蛋白质带可视化。免疫印迹在胶片盒中暴露于HyperfileTM 3分钟且 在室温下显影并定影。使用ImageQuant密度计在胶片的线性范围内 量化蛋白质带来确定相关的iNOS表达。使用多ANOVA将光学密度值 (以β肌动蛋白标准化)与p<0.05的显著性水平比较。从n=3个体复 制试验获得数据。
统计量
使用细胞成活力百分比测量凋亡,即:
细胞成活力百分比=[(活细胞数量)/(总细胞数量)]*100
数据以均值±标准差给出。
在对照和处理细胞之间的对比由多ANOVA进行且以均值±标准 差表达,置信区间为95%。统计分析使用Prism3.2进行。
光源
880nm和1072nm两个光源以带宽小于50nm,光学功率为5 mw/cm2的连续模式发射多模式光。
人体研究
所使用的波长范围从660nm到1268nm,单独且组合地对多种有 限的带宽检查。
从一般人群中征募40个志愿者,年龄在45岁到65岁之间,38位 女性,两位男性。对每个个体使用固定灯光和固定距离照相。取如下 图像:面部中心的左侧;面部中心的右侧;面部的左侧外形和;面部 的右侧外形。恒定的距离和灯光便于在“处理前”照片和“处理后” 照片直接对比。
在摄取“处理后”照片时保证眼睛的张开量与“处理前”照片相 比类似。这因而允许对眼部上方的皮肤皱褶和下方的眼袋的对比。特 别地要求当摄取照片时参加者不要微笑或在其面部具有任何表情。给 予参加者每人有效设备并要求他们每天处理眼部周围的皮肤区大约30 分钟(每个眼部区15分钟)。围绕眼部的皮肤选择为更可移动且更可 能展示出皮肤弹性的改进。
例1
使用一定范围的方案,IR1072的处理一致地得出对于PHA母细胞 存活的显著的保护性效果。相反,与对照和IR1072处理的细胞相比, IR880一致地是对细胞有害的。
在以IR1072照射后,即在第3日和第5日的单独的和多次的5×3 分钟处理方案后,与对照数据相比在第5日细胞成活力百分比显著地 增加(p<0.05)(图6)。在下一个方案中,细胞以5×3分钟的IR1072 和IR880照射,在以IR880都在第5日处理后,与以IR1072处理的细 胞相比细胞成活力百分比显著地下降(p<0.01)(图6)。每日处理方 案得出:与那些在平行的试验中以IR1072照射的细胞相比,对于IR880 处理的细胞的细胞成活力百分比在8天时期内显著地下降[第1日 (p<0.01),第3日(p<0.01),第4日(p<0.05),第5日(p<0.05) 和第8日(p<0.05)](图7)。与仅以UVA处理的细胞相比,在以IR1072 预处理后且随后暴露于UVA时,细胞成活力百分比保持为显著地更高 (p<0.01)(图8)。以多种波带照射后又暴露于IR880的细胞显示了 细胞成活力百分比的显著的下降(p<0.01),而在以IR1072(p<0.01) 和交替的IR1072/IR1268的波带的光(p<0.01)处理后细胞成活力百分 比显著地更高,所有这些都与为处理的对照相比(图9)。所有其他试 验的波长和条件对于细胞成活力没有显著效果。
虽然在855至905nm范围内的波长可以刺激纤维原细胞的增殖, 但发明人发现在此范围内的光看来对淋巴细胞有害(lymphotoxic)。 当分析在暴露于IR光两小时内进行时对细胞有害和对细胞的保护性效 果是迅速的,且两个效果是长期的,在处理后至少2天被观察到。发 明人的研究清楚地展示了在1050nm至1100nm范围的光在单独处理 和多次处理方案后都改进了细胞成活力。维持淋巴细胞的成活力在存 在不利因素中是重要的,因为细菌内毒素和细菌外毒素是白细胞毒素 因素,其效果可以通过以1072nm±25nm的光照射发炎细胞来降低。 早已假定IR光对于防止UVA具有保护性效果,然而波长的准确范围 是未知的。这些当前的结果指出1072nm±25nm的光对于防UVA的 损害效果是保护性的。
例2
一氧化氮已显示出在多种细胞类型中是有效的凋亡抑制剂。NO非 常迅速地通过水和细胞膜扩散且iNOS产生得比eNOS和nNOS更迅速 和有效。iNOS可以发生作用而无细胞内水平的升高且其活性在免疫 细胞内迅速地被诱发,例如在暴露于细胞因子和微生物产品后首先激 活单核细胞和巨噬细胞。
为阐明观察到的由暴露于IR1072所得出的长期细胞保护所基于的 可能的机制,进行了与对照和IR880对比的量化免疫印迹来探测iNOS 的表达。在以IR1072预处理后,在第5日检测到与对照相比iNOS免 疫活性的4.9±2.1倍的显著增加(p<0.05)。相反,在平行研究中对于 IR880没有观察到iNOS的显著的增加(对于第5日,2.1±2.2倍) (p>0.05)(图10)。
这些现有的结果从生物化学上示出与未处理的对照相比iNOS已 以依赖波长的方式上调。NO被认为通过两个独特的机制用作凋亡的抑 制剂:首先,通过cGMP依赖机制,其中NO在像caspase-3的蛋白酶 激活水平起作用,或在此活动上游起作用以防止蛋白酶的激活;其次, NO也通过酶的S-亚硝基化作用抑制了像caspase-3的蛋白酶的活性。 对像caspase-3的活性的抑制拯救了细胞防止渐进的细胞死亡。
例3
在以光源处理面部和眼部的皮肤后,发明人观察到皱纹深度、长 度和面积的减小,也观察到眼部上方的皮肤表面积的减小和眼部下方 眼袋突出的减小。为保证将人为因素减小到最小值,使用了恒定光照 的光盒。这便于照相机镜头距离对象的恒定距离和恒定的曝光。要求 对象注视相同的点且将他们的下巴放置在固定的点上使他们的鼻子触 及线以保证在相片之间最小的旋转。然后给予对象光源以至少每天处 理一次,但优选地一天两次。在一个月后,拍摄最初的跟踪照片,随 后在两个月时拍摄另一个系列的照片。当拍摄照片时,基本上在所有 情况中在所有时间时面部无表情,眼部张开相同的量,使得能直接对 比眼部上方的皮肤,且在所有情况中目光指向光盒上相同的点。拍摄 四个图像:左前、右前、左侧外形和右侧外形。这便于对眼部下方的 眼袋和皱纹长度和深度的直接对比。不检查非垂直面或非水平面的皱 纹,因为轻微的在旋转上的差异将造成人为因素的差异。发明人也观 察到在其中施加了电磁美容处理的身体的多种的其他部分的组织和肌 肉色泽的改进。结果显示在减少可见的老化迹象、减少影响上眼睑的 多余皮肤、维持面部组织色泽和因此维持年轻鼻唇沟和面部轮廓中的 量化的改进。
本发明的方法改进皮肤质地和轮廓,导致了更平滑的皮肤。在处 理停止后这些效果可以维持达一到三个月且在一些情况中能逆转可见 的老化迹象多达10年。
当向股部和臀部施加光时,在观察到的脂肪团中有显著的改进, 降低了臀部因重力影响而下垂的程度。
参考图11A,图中示出了每日以IR 1072nm处理两个月后的效果 与相同个体在处理开始前的图11B的对比,图11C示出了相同个体的 处理前图片和以IR 1072nm处理一个月处理后的图片的叠加。发明人 观察到在处理一个月后,眼睑上方的皮肤皱襞可以直接地对比,因为 上眼睑在相同的位置与角膜相交且在角膜上的光反射在对照和试验情 况中相同(图11C)。发明人观察到上眼睑下垂在处理后更小。在两 个月的处理后下垂进一步改进(图11A)。
例4
参考图13A,示出了在处理前个体的侧面外形,且在图13B中示 出了处理后的相同个体。个体具有可识别的角膜缘下色素性病变的标 志。划出了垂直于黑色标记线的线且进行如下测量:
                            图13A    图13B
1.鼻尖:                    34.2mm   38.3mm
2.从线到色素性病变:        20.3mm   28.6mm
3.从线到眼袋(眼睑下方7mm): 18mm     23.2mm
对于线到色素性病变进行因比例变化(到鼻子的距离)的调整: (38.3/34.2)×20.3=22.7mm和从线到眼袋:(38.3/34.2)×18=20.2mm。
修正结果
处理前 处理后 线到色素性病变 22.7mm 28.6mm 线到眼袋 20.2mm 23.2mm
使用以上的技术对8个志愿者测量眼袋的减小。7个志愿者展示出 眼部下方的眼袋的尺寸的减小。
例5
保证在处理前图和处理后图14C中眼孔径相同,在“处理前”图 片(图14A)中一个眼的部分被剪切且与来自“处理后”图片(图14B) 中的眼的补充侧合并。可以容易地看到皮肤品质的改进。
结果测量、眼袋尺寸和松弛皮肤皱襞的测量去除了在仅评估眼周 围的皱纹中所固有的可变性。
皱纹 眼部下方眼袋 眼睑上方松弛皮肤 改进的人 n=18 n=6 n=14 未改进的人 n=2 n=1 n=2 p=0.0004 p=0.1 p=0.004
研究中涉及的20位参加者中的19位满意于1072nm光疗法是有效 的,p=0.00004。
利用基线照片作为美容评审的对照方面,以上数据展示了本发明 的方法和设备的功效。每日处理导致大多数的参加者实现了具有更年 轻的外貌的正面结果。
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