一种高纬度地区马铃薯原原种繁育方法
专利汇可以提供一种高纬度地区马铃薯原原种繁育方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 一种高纬度地区 马 铃薯原原种繁育方法，其特征在于，包括以下步骤：茎尖脱毒组织获得，病毒检测，脱毒试管苗快速繁殖，网棚起垄生产原原种。本发明的有益效果在于：相比常规 无土栽培 繁育技术，本发明可以直接在大田起垄扣上网棚繁育原原种，不需要购买基质及固定设备，生产资料成本低、繁育方式简单易行；本发明可以实现田间机械化作业，极大地降低了人工成本，效率得到极大提高；本发明的单株脱毒苗和单位面积的原原种产量高；本发明的方法从源头上解决了马铃薯“退化”的问题，实现了高纬度地区马铃薯原原种的繁育，在推动高纬度地区马铃薯脱毒种薯的工厂化繁育 进程 和马铃薯产业的健康持续发展中可发挥重要作用。，下面是一种高纬度地区马铃薯原原种繁育方法专利的具体信息内容。
1.一种高纬度地区马铃薯原原种繁育方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)茎尖脱毒组织获得：在田间根据植株长势，选择高纬度地区马铃薯的健康单株；之后将所述健康单株的薯块在36℃条件下进行催芽4～6周，待所述薯块催芽萌发至芽长1.0～2.0cm时，剥离所述芽直到只保留一个叶原基生长点，且所述叶原基生长点大小为0.1～
0.3mm；之后将所述叶原基生长点切下，置于装有基本培养基的1号培养瓶中，封严所述1号培养瓶的瓶口放于培养室内培养，直至长出小植株；
(2)病毒检测：采用RT-PCR法对步骤(1)中制备的所述小植株进行病毒检测，筛选得到不含病毒的小植株，称为脱毒小植株；
(3)脱毒试管苗快速繁殖：将所述脱毒小植株在无菌条件下按茎节切段，获得茎节段；
之后将所述茎节段置于装有快速繁殖培养基的2号培养瓶内，在23～25℃、光照强度
3000Lx、光照时间16h/d条件下培养15～20d，获得具备移栽条件的试管苗；所述快速繁殖培养基的成分组成是Ms大量元素、微量元素、铁盐、20g/L蔗糖或白糖，pH值5.8，不含有机物和植物激素；每个所述2号培养瓶内培养15～30个所述茎节段；
(4)网棚起垄生产原原种：移栽前5～7d，将培养试管苗的所述2号培养瓶瓶盖打开，置于培养室内进行炼苗；之后移栽至整理好的苗床上培养10～15d，之后将其假植于育苗钵里培养10～15d，得到假植苗；之后根据所述假植苗的长势，及时移栽定植于整理好的大棚内，进行微喷灌溉，扣上防虫网，并在生长过程中进行3～4次中耕培土、2～3次人工除草、及时灌溉、病害防治；成熟后进行机械杀秧和收获，之后进行包装贮藏。
2.根据权利要求1所述的一种高纬度地区马铃薯原原种繁育方法，其特征在于，步骤(1)所述剥离芽直到只保留一个叶原基生长点的操作过程为：取粗壮的芽段用无菌水冲洗
40min，再用75％的酒精浸蘸3s，放入无菌杯内用0.1％的HgCl水浸泡30s，然后用无菌水冲洗4次，之后将茎尖放在无菌滤纸上吸干水分，在30～40倍解剖镜下用解剖针由外向里逐层将生长点的小叶片和叶原基剥离，直到只保留一个叶原基生长点；步骤(1)中所述封严1号培养瓶的瓶口放于培养室内培养的条件为：温度23～25℃、光照强度2000～3000Lx，光照时间16h/d，培养周期120～140d。
3.根据权利要求1所述的一种高纬度地区马铃薯原原种繁育方法，其特征在于，步骤(2)中所述RT-PCR法的检测过程为：提取纯化所述小植株的RNA为模板，加入Oligo(dT)，进行反转录生成cDNA；之后以所述cDNA为模板，用特异性引物，进行PCR扩增得到扩增产物；之后对所述扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，电泳条带中不含病毒特异条带的样品对应的小植株即为脱毒小植株。
4.根据权利要求1所述的一种高纬度地区马铃薯原原种繁育方法，其特征在于，步骤(2)中所述病毒检测的病毒种类为马铃薯常见的六种病毒PVX、PVY、PLRV、PVS、PVM、PVA，使用的特异性引物序列分别为：
PVX上游引物5'-AGTGGTATGGAACTGGATG-3'，
PVX下游引物5'-TTATGGTGGTGGTAGAGTGA-3'；
PVY上游引物5'-CATGGGAAATGACACAATCG-3'，
PVY下游引物5'-TCACATGTTCTTGACTCCAAG-3'；
PLRV上游引物5'-CGCGCTAACAGAGTTCAGCC-3'，
PLRV下游引物5'-GCAATGGGGGTCCAACTCAT-3'；
PVS上游引物5'-AATGCCGCCTAAACCAGATC-3'，
PVS下游引物5'-AACGGTCTGCCTTCATTGGT-3'；
PVM上游引物5'-CGCATACAATATCTGGACTTACAC-3'，
PVM下游引物5'-CTACTCCAGTAATGCAACTCATC-3'；
PVA上游引物5'-GAACTCTTGATGCAGGCG-3'，
PVA下游引物5'-ACATCCGTTGCTGTGTGTCC-3'。
5.根据权利要求1所述的一种高纬度地区马铃薯原原种繁育方法，其特征在于，步骤(4)中所述炼苗的培养条件为湿度≥75％，白天温度控制在20℃、夜间≥10℃，控制光照强度；所述苗床的组成成分为黑土和草炭土，质量配比为黑土：草炭土＝5:1；移栽苗床时的脱毒苗的株行距为1cm×10cm。
6.根据权利要求1所述的一种高纬度地区马铃薯原原种繁育方法，其特征在于，步骤(4)中所述假植所用营养钵的尺寸为9cm×9cm；营养钵里土壤的组成成分为黑土和草炭土，配比为黑土：草炭土＝5:1；假植过程中的培养条件为湿度≥50％，白天温度控制在20℃、夜间≥10℃，控制光照强度，及时喷施药剂进行病虫害防控。
7.根据权利要求1所述的一种高纬度地区马铃薯原原种繁育方法，其特征在于，步骤(4)中所述移栽定植于大棚前假植苗要浇透水；定植前要在大棚内用机械进行起垄施肥，垄宽65cm，施用撒克富马铃薯专用复合肥50kg/亩，假植苗定植的株距为12cm。
8.根据权利要求1所述的一种高纬度地区马铃薯原原种繁育方法，其特征在于，步骤(4)中所述病害防治包括马铃薯早疫病和晚疫病的防治，具体为依据“中国马铃薯早、晚疫病监测预警系统”和“预警系统简报”的防控建议进行化学药剂防治；其中所述马铃薯早疫病药剂防治的方案为：在马铃薯现蕾期前开始喷施，共喷3遍药，每隔7～10d喷一次，喷药顺序和喷药量为10％世高80g/亩、25％阿米西达30mL/亩、可杀得3000为30g/亩；所述马铃薯晚疫病防治的方案为：从出苗后20天开始喷药，共喷7遍药，每隔7～10d喷一次，喷药顺序和喷药量为克露100g/亩、福帅得30ml/亩、银法利80ml/亩、科佳60ml/亩、升银法利80ml/亩、瑞凡40ml/亩、金雷120g/亩。
9.根据权利要求1所述的一种高纬度地区马铃薯原原种繁育方法，其特征在于，步骤(4)中所述机械杀秧是指在收获前5～7d，利用4QP-2型马铃薯打秧机进行机械杀秧，以加速块茎成熟、薯皮老化，增强耐贮性；所述收获是指利用4KJW型马铃薯收获机进行机械收获。
10.根据权利要求1所述的一种高纬度地区马铃薯原原种繁育方法，其特征在于，步骤(4)中所述包装贮藏的要求为：用塑料筐或网袋作为包装材料，贮藏窖采取棚窖、永久式砖窖，入窖前要对所述贮藏窖进行高锰酸钾和甲醛薰蒸消毒，之后通风；入窖后控制温度1～3℃、湿度85～90％、适当通风。
一种高纬度地区马铃薯原原种繁育方法
技术领域
背景技术
发明内容
7～10d喷一次，喷药顺序和喷药量为克露100g/亩、福帅得30ml/亩、银法利80ml/亩、科佳
60ml/ 亩、升银法利80ml/亩、瑞凡40ml/亩、金雷120g/亩。
具体实施方式
8uL的2.5mmol/L dNTPs，并用枪头混匀，之后42℃平衡2min，再加入1uL反转录酶，42℃反应
90min生成cDNA；之后70℃灭活反转录酶15min。
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