在胰脏机能不全(pancreatic insufficiency)的情况下，可给药胰脂肪酶 (pancrelipase)和其它胰酶产品(pancreatic enzyme product，PEP)，以便至少部 分地对由影响胰脏(pancreas)的各种疾病(如胰腺炎、胰脏切除 (pancreatectomy)、囊性纤维化(cystic fibrosis)等)所引起的酶缺乏进行治疗。 胰酶在治疗胰脏机能不全中的用途是治疗囊性纤维化患者中至关重要的部 分。在没有这些补充物(supplement)的情况下，患者会出现严重的营养缺损。 这种营养缺损(nutritional impairment)若不进行治疗则可能是有生命危险的， 特别是在婴儿的情况下。
药物物质(drug substance)胰脂肪酶主要是三类酶即脂肪酶(lipase)、蛋白 酶(protease)和淀粉酶(amylase)以及它们的各种辅因子(co-factor)和辅酶的组 合。这些酶在胰脏中天然地产生，并且在脂肪、蛋白质和碳水化合物的消 化中是重要的。胰脂肪酶典型地从猪胰腺中制备，尽管也可使用其它来源， 例如在U.S.6,051,220、U.S.2004/0057944、2001/0046493和WO 2006044529 中描述的那些来源，在此将每篇文献引入作为参考。所述酶催化脂肪水解 为甘油和脂肪酸，催化淀粉水解为糊精和糖，以及催化蛋白质水解为氨基 酸和所衍生的物质。
胰酶在接近中性和稍微碱性的条件下显示出最佳的活性。在胃条件下， 胰酶可被灭活，其中导致生物活性的损失。因此，通常对外源性给药的酶 进行保护，使其不发生胃灭活(gastric inactivation)以及在其通过胃和进入十 二指肠期间保持完整。尽管期望的是对胰酶进行包衣，但是未包衣的制剂 也存在于商业中。胰脂肪酶是最敏感于胃灭活的，并且在吸收不良 (malabsorption)的治疗中是最重要的单一酶。通常对脂肪酶的活性进行监测 以确定含有脂肪酶的酶组合物的稳定性。
在通过胃后，所述酶可在十二指肠中在5-30分钟内释放，这是因为尽 管消化和吸收可发生在胃肠道各处，但是由胰酶进行的消化和代谢物的吸 收主要发生在肠的上段(upper segment)。通常将胰酶用肠溶性包衣聚合物包 衣，所述肠溶性包衣聚合物保护酶组合物使其不暴露于胃酸性环境中，然 后提供酶在肠中的释放。
常规的胰酶制剂在本质上是不稳定的，并且不具有通常与所批准的口 服用药物产品相关的贮存期限。胰酶制剂的活性通常基于脂肪酶的活性来 确定，而脂肪酶是贮存期间对损失酶活性最敏感的酶之一。市售的消化酶 组合物随着时间过去显示出高达约35％或更多的脂肪酶活性损失。为了补 偿贮存期间酶活性的损失以及确保产品在贮存期限的后期提供标称的效 力，制造商通常对剂型进行过量填充(过量程度为5％至60％)，而目前针对 胰脂肪酶延迟释放胶囊的美国药典规格(USP specificifiion)允许胰脂肪酶相 当于不少于90％且不多于165％的所标示脂肪酶活性。
在实践中，这意味着患者和开处方者不能准确地判断剂量强度，其中 实际的结果是，对于每种新的处方需要凭借经验来确定适当的剂量。患有 胰腺外分泌机能不全病症(exocrine pancreatic insufficiency disorder)的患者依 赖于这些药物来提供他们适当消化食物所需的酶。若标签含有关于具体产 品效力的不准确描述，则患者会面临接受过多或过少药物的危险。
因此，应该期望的是，提供就酶制剂的期望贮存期限而言能够维持所 需活性而不依赖于对剂型进行过量填充的稳定消化酶组合物。
发明内容
本发明涉及稳定的消化酶组合物和剂型以及制备稳定的酶组合物和剂 型的方法。更具体地，本发明涉及包有肠溶衣的(enteric coated)酶组合物和 剂型，所述酶组合物和剂型在典型的贮存条件下显示出很小的活性损失。
在一个实施方案中，本发明提供了包含至少一种消化酶的组合物，其 中所述组合物具有约3％或更小的含湿量(moisture content)。
在另一个实施方案中，本发明的组合物包含至少一种消化酶，其中所 述组合物具有约0.6或更小的水活性(water activity)。
在另一个实施方案中，本发明的组合物包含至少一种经稳定化的消化 酶，其中所述至少一种经稳定化的消化酶在六个月的加速稳定性试验后显 示出不超过约15％的活性损失。
在另一个实施方案中，本发明提供了填充有本发明组合物的剂型，如 片剂或胶囊剂。
在另一个实施方案中，本发明的组合物还包含至少一种包有包衣的消 化酶，其中所述包衣包含肠溶性聚合物(enteric polymer)以及任选的至少一种 无机材料(inorganic material)。
在另一个实施方案中，本发明提供了一种包装，其包含由防潮材料 (moisture resistant material)制成的密封容器、干燥剂(dessicant)和本发明的至 少一种剂型，其中所述干燥剂和至少一种剂型在所述密封容器内侧。
在另一个实施方案中，本发明提供了治疗或预防与消化酶缺乏 (digestive enzyme deficiency)相关的病症的方法，所述方法包括将本发明的 组合物给予有此需要的哺乳动物。
在另一个实施方案中，本发明提供了制备本发明组合物的方法。在一 个实施方案中，所述方法包括在含湿量为约3.6g水/m3或更小的气氛中用包 含肠溶性聚合物和至少一种无机材料的包衣对至少一种消化酶的颗粒进行 包衣，由此形成多种延迟释放颗粒(delayed release particle)。

本发明的一个方面涉及经稳定化的消化酶组合物。术语“经稳定化的消 化酶”是指在长期贮存后维持基本酶活性的消化酶。术语“消化酶”是指消化 道中的酶，所述酶分解食物组分以便使食物组分被有机体摄取或吸收。
适用于本发明的消化酶的非限制性类别包括脂肪酶、淀粉酶和蛋白酶。 消化酶的非限制性实例包括胰脂肪酶(也称为胰酶制剂(pancreatin))、脂肪酶 (lipase)、辅脂肪酶(co-lipase)、胰蛋白酶(trypsin)、糜蛋白酶(chymotrypsin)、 糜蛋白酶B(chymotrypsin B)、胰肽酶(pancreatopeptidase)、羧肽酶 A(carboxypeptidase A)、羧肽酶B(carboxypeptidase B)、甘油酯水解酶(glycerol ester hydrolase)、磷脂酶(phospholipase)、固醇酯水解酶(sterol ester hydrolase)、 弹性蛋白酶(elastase)、激肽原酶(kininogenase)、核糖核酸酶(ribonuclease)、 脱氧核糖核酸酶(deoxyribonuclease)、α-淀粉酶(α-amylase)、木瓜蛋白酶 (papain)、木瓜凝乳蛋白酶(chymopapain)、谷蛋白酶(glutenase)、菠萝蛋白酶 (bromelain)、无花果蛋白酶(ficin)、β-淀粉酶(β-amylase)、纤维素酶(cellulase)、 β-半乳糖苷酶(β-Galactosidase)、乳糖酶(lactase)、蔗糖酶(sucrase)、异麦芽糖 酶(isomaltase)和这些酶的混合物。
在本发明的一个实施方案中，所述经稳定化的消化酶为胰酶。本申请 使用的术语“胰酶(pancreatic enzyme)”是指在胰脏分泌中存在的任何一种酶 类型(如淀粉酶、脂肪酶、蛋白酶或这些酶的混合物)或胰脏起源的具有酶活 性的任何提取物(如胰酶制剂)。所述胰酶可通过从胰脏中提取或人工制备来 得到或从不是胰脏的其它来源(如微生物、植物或其它动物组织)中得到。
在本发明的另一个实施方案中，所述经稳定化的消化酶为胰脂肪酶。 术语“胰脂肪酶”或“胰酶制剂”是指几种类型酶的混合物，这些酶包括淀粉 酶、脂肪酶和蛋白酶。胰脂肪酶可例如从Nordmark Arzneimittel GmbH或 Scientific Protein Laboratories LLC商业得到。
在本发明组合物的一个实施方案中，所述经稳定化的消化酶包括脂肪 酶。术语“脂肪酶”是指催化脂质水解为甘油和简单脂肪酸的酶。
适用于本发明的脂肪酶的实例包括但不限于动物脂肪酶(例如猪脂肪 酶)、细菌脂肪酶(例如假单胞菌属(Pseudomonas)脂肪酶和/或伯克霍尔德氏 菌属(Burkholderia)脂肪酶)、真菌脂肪酶、植物脂肪酶、重组脂肪酶(例如通 过重组DNA技术经由合适的宿主细胞(选自以下任何一种：细菌、酵母、 真菌、植物、昆虫或哺乳动物宿主细胞)在培养物中产生的脂肪酶，包括与 天然存在的序列同源或基本相同的氨基酸序列的重组脂肪酶，或由与天然 存在的脂肪酶编码核酸同源或基本相同的核酸编码的脂肪酶等)、经化学修 饰的脂肪酶或这些酶的混合物。
在本发明组合物的另一个实施方案中，所述经稳定化的消化酶包括淀 粉酶。术语“淀粉酶”是指分解淀粉的糖苷水解酶(glycoside hydrolase enzyme)，例如α-淀粉酶、β-淀粉酶、γ-淀粉酶、酸性α-葡萄糖苷酶(acid α-glucosidases)、唾液淀粉酶(如唾液素(ptyalin))等。
适用于本发明组合物的淀粉酶包括但不限于动物淀粉酶、细菌淀粉酶、 真菌淀粉酶(例如曲霉属(Aspergillus)淀粉酶，优选为米曲霉(Aspergillus oryzae)淀粉酶)、植物淀粉酶、重组淀粉酶(例如通过重组DNA技术经由合 适的宿主细胞(选自以下任何一种：细菌、酵母、真菌、植物、昆虫或哺乳 动物宿主细胞)在培养物中产生的淀粉酶，包括与天然存在的序列同源或基 本相同的氨基酸序列的重组淀粉酶，或由与天然存在的淀粉酶编码核酸同 源或基本相同的核酸编码的淀粉酶等)、经化学修饰的淀粉酶或这些酶的混 合物。
在本发明组合物的另一个实施方案中，所述经稳定化的消化酶包括蛋 白酶。术语“蛋白酶”通常是指在蛋白质的氨基酸之间使肽键断裂的酶(例如 蛋白酶(proteinase)、肽酶(peptidase)或蛋白水解酶(proteolytic enzyme))。蛋白 酶通常按照其催化类型来鉴定，例如天冬氨酸肽酶、半胱氨酸(巯基)肽酶 (cysteine(thiol)peptidase)、金属肽酶、丝氨酸肽酶、苏氨酸肽酶、碱性或半 碱性蛋白酶、中性蛋白酶和催化机理未知的肽酶。
适用于本发明组合物或口服剂型的蛋白酶的非限制性实例包括丝氨酸 蛋白酶、苏氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶(例如疟原虫天 冬氨酸蛋白酶(plasmepsin))、金属蛋白酶、谷氨酸蛋白酶等。此外，适用于 本发明组合物或口服剂型的蛋白酶包括但不限于动物蛋白酶、细菌蛋白酶、 真菌蛋白酶(例如Aspergillus melleus蛋白酶)、植物蛋白酶、重组蛋白酶(例 如通过重组DNA技术经由合适的宿主细胞(选自以下任何一种：细菌、酵 母、真菌、植物、昆虫或哺乳动物宿主细胞)在培养物中产生的蛋白酶，包 括与天然存在的序列同源或基本相同的氨基酸序列的重组蛋白酶，或由与 天然存在的蛋白酶编码核酸同源或基本相同的核酸编码的蛋白酶等)、经化 学修饰的蛋白酶或这些酶的混合物。
本发明的组合物或口服剂型可包含一种或多种脂肪酶(即一种脂肪酶 或两种或更多种脂肪酶)、一种或多种淀粉酶(即一种淀粉酶或两种或更多种 淀粉酶)、一种或多种蛋白酶(即一种蛋白酶或两种或更多种蛋白酶)、一种 或多种脂肪酶与一种或多种淀粉酶的混合物、一种或多种脂肪酶与一种或 多种蛋白酶的混合物、一种或多种淀粉酶与一种或多种蛋白酶的混合物或 一种或多种脂肪酶与一种或多种淀粉酶以及一种或多种蛋白酶的混合物。
在一个实施方案中，所述消化酶为猪胰脏提取物(pancreatic extract)，所 述猪胰脏提取物包含各种脂肪酶(例如脂肪酶、辅脂肪酶、磷脂酶A2、胆固 醇酯酶)、蛋白酶(例如胰蛋白酶、糜蛋白酶、羧肽酶A和B、弹性蛋白酶、 激肽原酶、胰蛋白酶抑制剂)、淀粉酶以及任选的核酸酶(核糖核酸酶、脱氧 核糖核酸酶)。在另一个实施方案中，所述消化酶基本上与人胰液相似。在 另一个实施方案中，所述消化酶为美国药典胰脂肪酶(pancrelipase USP)。在 另一个实施方案中，所述消化酶为胰脂肪酶ESP，其具有69-120U USP/mg 的脂肪酶活性、大于或等于216U USP/mg的淀粉酶活性、大于或等于264U USP/mg的蛋白酶活性以及大于或等于264U USP/mg的总蛋白酶活性。
本发明的组合物或口服剂型中的脂肪酶活性可以是约4500-25,000IU， 例如约4500-5500IU、约9000-11,000IU、约13,500-16,500IU或约 18,000-22,000IU。本发明的组合物或口服剂型中的淀粉酶活性可以是约 8100-180,000IU，例如约8000-45,000IU、约17,000-90,000IU、约 26,000-135,000IU或约35,000-180,000IU。本发明的组合物或口服剂型中的 蛋白酶活性可以是约8000-134,000IU，例如约8000-34,000IU、 17,000-67,000IU、26,000-100,000IU或35,000-134,000IU。在一个实施方案 中，所述脂肪酶活性的范围为约4500-5500IU，所述淀粉酶活性的范围为约 8000-45,000IU，及所述蛋白酶活性的范围为约8000-34,000IU。在另一个实 施方案中，所述脂肪酶活性的范围为约9000-11,000IU，所述淀粉酶活性的 范围为约17,000-90,000IU，及所述蛋白酶活性的范围为约17,000-67,000IU。 在另一个实施方案中，所述脂肪酶活性的范围为约13,500-16,500IU，所述 淀粉酶活性的范围为约26,000-135,000IU，及所述蛋白酶活性的范围为约 26,000-100,000IU。在另一个实施方案中，所述脂肪酶活性的范围为约 18,000-22,000IU，所述淀粉酶活性的范围为约35,000-180,000IU，及所述蛋 白酶活性的范围为约35,000-134,000IU。
本发明的组合物或口服剂型中脂肪酶∶蛋白酶∶淀粉酶的比例范围可为 约1∶10∶10至约10∶1∶1或约1.0∶1.0∶0.15(基于酶活性)。本发明的组合物或口 服剂型中淀粉酶/脂肪酶的比例范围可为约1.8-8.2，例如约1.9-8.2以及约 2.0-8.2。本发明的组合物或口服剂型中蛋白酶/脂肪酶的比例范围可为约 1.8-6.2，例如约1.9-6.1以及约2.0-6.1。
在另一个实施方案中，脂肪酶、蛋白酶和淀粉酶的活性可以是下表A 中所述的那些活性：
表A


本发明的组合物或口服剂型中消化酶的总量(按重量计)可以是约 20-100％、20-90％、20-80％、20-70％、20-60％、20-50％、20-40％、20-30％， 或可以是约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、 约90％或约100％。在一个实施方案中，消化酶的总量为60-90％。在另一 个实施方案中，消化酶(例如胰脂肪酶)的总量为约68-72％。
在一个实施方案中，包含至少一种消化酶的本发明组合物或口服剂型 的含湿量为约3％或更小、约2.5％或更小、约2％或更小、约1.5％或更小， 或约1％或更小，包括在这些数值之间的所有范围和亚范围(即以下任何范 围：约2.5％至3％、2％至3％、1.5％至3％、1％至3％、2％至2.5％、1.5％ 至2.5％、1％至2.5％、1.5％至2％、1％至2％、1％至1.5％等)。已经发现的 是，维持在低含湿量的本发明组合物或口服剂型与维持在较高含湿量(例如 在约3％之上或更高)的常规组合物相比是基本上较稳定的。
术语“含湿量”，也称为“含水量(water content)”，是指组合物所含有的水 量。对于在含湿量改变的情况下体积不改变的组合物而言，所述含湿量可 基于体积(即按体积计)而表达为水分质量与物质干燥体积的比例。对于在含 湿量改变的情况下体积改变的组合物而言，所述含湿量可基于重量(即按重 量计)而表达为(进行干燥后所除去的水质量)/(样品的单位干燥质量)。含湿量 的确定可通过本领域已知的任何常规方法来实现。例如，所述含湿量可通 过化学滴定如卡尔·费歇尔滴定(Karl Fischer titration)来确定，其中在电化学 滴定池中将样品溶解。来自样品的水在电化学反应中被消耗，其终点通过 电势分析(potentiometrically)来测量，由此提供有关样品中水量的直接测量 结果。可供选择地，可使用相对简单的热重分析法(thermogravimetric method) 如“干燥失重”(LoD)，其中在受控干燥(controlled drying)之前和之后对样品质 量进行测量。干燥后的质量损失归因于水分的损失。市售的水分分析仪(例 如可从Mettler Toledo，Sartorius AG等得到)也可用于确定含湿量。本发明组 合物或口服剂型的含湿量可通过本领域已知的任何合适方法如LoD来测 量。
在另一个实施方案中，包含至少一种消化酶的本发明组合物或口服剂 型的水活性为约0.6或更小、约0.5或更小、约0.4或更小、约0.3或更小、 约0.2或更小或约0.1或更小，包括在这些数值之间的所有范围和亚范围(即 以下任何范围：约0.5至0.6、0.4至0.6、0.3至0.6、0.2至0.6、0.1至0.6、 0.4至0.5、0.3至0.5、0.2至0.5、0.1至0.5、0.3至0.4、0.2至0.4、0.1至 0.4、0.2至0.3、0.1至0.3、0.1至0.2等)。已经发现的是，维持在低水活性 的本发明组合物或口服剂型与维持在较高水活性水平的常规消化酶组合物 相比是基本上较稳定的。
水活性，也称为“aw”，是物质中水的相对可用性(relative availability)。 本申请使用的术语“水活性”被定义为样品中水的蒸气压除以纯水在相同温 度的蒸气压。纯蒸馏水具有确切为1的水活性。水活性是温度依赖性的。 换言之，水活性随温度变化而变化。在本发明中，在范围为约0℃至约50℃ 优选为约10℃至约40℃的温度对水活性进行测量。
产品的水活性可通过在平衡时测量样品周围空气的相对湿度来确定。 因此，对样品中水活性的测量通常在可发生这种平衡的密闭(通常是隔离的) 空间中进行。在平衡时，样品的水活性和所述空气的相对湿度是相等的， 因此有关腔室中空气的平衡相对湿度(ERH)的测量结果提供了有关样品水 活性的测量结果。至少两种不同类型的水活性仪器是市售的。一种类型的 水活性仪器使用冷镜式露点技术(chilled-mirror dewpoint technology)(例如可 从Decagon Devices，Inc.得到的AquaLabTM水活性计量器)，而其它仪器通过 改变电阻或改变电容的传感器对相对湿度进行测量(例如可从Rotronic得到 的水活性计量器)。本发明组合物或口服剂型的水活性可通过本领域已知的 任何合适方法来测量。
在另一个实施方案中，包含至少一种经稳定化的消化酶的本发明组合 物或口服剂型在六个月的加速稳定性试验后所显示的酶活性损失不超过约 25％、不超过约20％、不超过约15％、不超过约12％、不超过约10％、不 超过约8％或不超过约5％。
术语“加速稳定性试验”或“加速贮存试验”是指用来模拟相对长期的贮 存条件对酶活性的影响的试验方法，所述方法可在相对短的时间内进行。 加速稳定性试验方法是在本领域中已知作为真实时间稳定性试验的可靠替 换方法，并且可准确地预测生物产品的贮存期限。这样的“加速稳定性试验” 条件是本领域已知的，并且与International Conference for Harmonization of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use： Stability Testing of New Drug Substances and Products Q1A相一致，在此将其 全文引入作为参考。
加速稳定性试验的一种方法包括在40℃/75％相对湿度将消化酶组合物 的样品在密封的Nialene(尼龙、铝、聚乙烯层压物)(GOGLIO SpA，Milan)袋 中贮存6个月。
在贮存后(或在贮存过程中定期地)，样品的酶活性可使用测定消化酶活 性的常规方法来测试(例如United States Pharmacopoeia，Pancrelipase：Assay for lipase activity，在此将其全文引入作为参考)。
本发明的组合物或口服剂型也可进一步包含一种或多种增强或改善本 发明组合物或口服剂型稳定性的稳定剂。合适的稳定剂的非限制性实例包 括脯氨酸(proline)、海藻糖(trehalose)、葡聚糖(dextran)、麦芽糖(maltose)、 蔗糖(sucrose)、甘露醇(mannitol)、多元醇(polyol)、硅胶(silica gel)、氨基胍 (aminoguanidine)、吡多胺(pyridoxamine)、无水金属盐(anhydrous metal salt) 如碳酸氢钠、氧化镁、氧化钙、氧化铝以及上述物质的混合物。所述一种 或多种稳定剂可具有约3％或更小的含湿量和/或0.6或更小的水活性。
可用于本发明组合物或口服剂型的合适形式的海藻糖的非限制性实例 包括海藻糖二水合物(TD)、无定形海藻糖(AT)、无水海藻糖(例如无水无定 形海藻糖(AAT)、无水结晶海藻糖(ACT))。粉末状无水海藻糖可含有任何 AAT和/或ACT。本申请使用的术语“海藻糖”是指海藻糖的任何物理形式， 包括无水形式、部分水合形式、完全水合形式和这些形式的混合物以及它 们的溶液。术语“无水海藻糖”是指含有少于2％水的海藻糖的任何物理形式。 海藻糖的无水形式可含有0-2％水。无定形海藻糖含有约2-9％水，而海藻糖 二水合物含有约9-10％水。无水海藻糖可如在PCT/GB97/00367中所述的那 样来制备，在此将其全文引入作为参考。在一个实施方案中，本发明的组 合物或口服剂型包含一种或多种经稳定化的消化酶和无水海藻糖。
本发明的组合物中无水海藻糖(AAT或ACT)的量可为约5-50％、5-40％、 5-30％、5-20％、5-15％、5-10％或7-15％，或为约5％、约7％、约10％、约 15％或约20％。
无水海藻糖可按粉末的形式引入本发明的组合物或口服剂型中。所述 无水海藻糖粉末的粒度可在约2-2000μm的范围内。
包含一种或多种经稳定化的消化酶和无水海藻糖的本发明组合物或口 服剂型提供了经改善的酶稳定性。应该相信的是，无水海藻糖如下使本发 明的组合物或口服剂型得以稳定：所述无水海藻糖吸收或隔离来自环境湿 度的水分或来自制造过程或在制剂本身中的残留水分。
基于所述组合物的预期用途和需要，所述经稳定化的消化酶与所述稳 定剂的重量比例范围为约99∶1至80∶20。所述稳定剂可如下引入本发明的组 合物或口服剂型中：对至少一种经稳定化的消化酶与至少一种稳定剂进行 湿法共混或干法共混。在一个实施方案中，对一种或多种经稳定化的消化 酶与一种或多种稳定剂进行干法共混。在另一个实施方案中，对一种或多 种经稳定化的消化酶与一种或多种稳定剂进行湿法共混。
除了所述经稳定化的消化酶和/或稳定剂(一种或多种)外，本发明的组 合物或口服剂型还可包含一种或多种药用赋形剂。术语“赋形剂”包括为了改 善加工性、稳定性、适口性等而加到组合物的活性组分(一种或多种)(例如 所述经稳定化的消化酶)中的其它药用成分。合适的赋形剂的非限制性实例 包括药用粘合剂、稳定剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、稀释剂和它们的混 合物等。药物制剂领域技术人员应该理解的是，特定的赋形剂可在所述组 合物中发挥多种功能。因此，粘合剂例如也可用作稀释剂等。所述赋形剂 可具有约3％或更小的含湿量和/或约0.6或更小的水活性。
合适的粘合剂的非限制性实例包括淀粉、糖(例如乳糖)、糖醇(例如木 糖醇、山梨糖醇、麦芽糖醇)、纤维素(例如微晶纤维素)、改性纤维素(例如 羟丙基纤维素、羧甲基纤维素钠)、海藻酸、聚乙烯吡咯烷酮(聚维酮)和它 们的混合物。合适的崩解剂的非限制性实例包括磷酸氢钙(dibasic calcium phosphate)、磷酸氢钙二水合物、磷酸钙(tribasic calcium phosphate)、海藻酸、 羟丙基纤维素、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠、交联羧甲基纤维素钠、 可溶胀离子交换树脂(swellable ion exchange resin)、海藻酸盐(alginate)、甲 醛-酪蛋白(formaldehyde-casein)、纤维素、交联羧甲纤维素钠(croscarmellose sodium)、交聚维酮(例如交联聚乙烯吡咯烷酮)、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、 羟基乙酸淀粉钠(sodium starch glycolate)、淀粉(玉米淀粉、米淀粉(rice starch)) 和它们的混合物。合适的润滑剂的非限制性实例包括硬脂酸钙、硬脂酸镁、 硬脂基富马酸酯钠(sodium stearyl fumarate)、硬脂酸、硬脂酸锌、滑石、蜡、 和它们的混合物。合适的助流剂的非限制性实例包括 胶体二氧化硅、滑石和它们的混合物。合适的稀释剂的非限制性实例包括 甘露醇、蔗糖、无水磷酸氢钙、无水磷酸氢钙二水合物(anhydrous dibasic calcium phosphate dihydrate)、磷酸钙、纤维素、乳糖、碳酸镁、微晶纤维素 和它们的混合物。合适的稳定剂的非限制性实例包括海藻糖、脯氨酸、葡 聚糖、麦芽糖、蔗糖、甘露醇、多元醇、硅胶、氨基胍、吡多胺和它们的 混合物。
在一个实施方案中，所述崩解剂为交聚维酮(例如POLYPLASDONE XL、POLYPLASDONE XL-10)。在另一个实施方案中，所述崩解剂为交联 羧甲纤维素钠(例如AC-DI-SOL)。在另一个实施方案中，所述崩解剂为羟基 乙酸淀粉钠(例如EXPLOTAB、EXPLOTAB CV)。在另一个实施方案中，本 发明的组合物或口服剂型可包含崩解剂的组合，如微晶纤维素和羟基乙酸 淀粉钠的组合或交联羧甲纤维素钠和交聚维酮的组合。
崩解剂的量可为以下范围中的任何一种：约0.1-30％、1％-30％、 1％-25％、1％-20％、1％-15％、1％-10％、1％-5％、5％-10％、5％-15％、5％-20％、 5％-25％或5％-30％。在一个实施方案中，崩解剂的量为约2％-4％、约2％-3％ 或约2.5％。
合适的稀释剂的非限制性实例包括微晶纤维素、淀粉、磷酸钙、乳糖、 蔗糖、甘露醇、山梨糖醇和它们的组合。在一个实施方案中，所述稀释剂 为微晶纤维素(例如Avicel)。在另一个实施方案中，所述稀释剂为淀粉。在 另一个实施方案中，所述稀释剂为乳糖(例如Pharmatol)。在另一个实施方 案中，本发明的组合物或口服剂型可包含稀释剂的组合，如微晶纤维素、 淀粉和乳糖的组合。
稀释剂的量可为以下范围中的任何一种：约0.1-99％、1％-30％、 1％-25％、1％-20％、1％-15％、1％-10％、1％-5％、5％-10％、5％-15％、5％-20％、 5％-25％或5％-30％。在一个实施方案中，稀释剂的量为约2％-5％、3％-5％ 或约4％。
本发明组合物或口服剂型的一种或多种赋形剂可用作使所述组合物进 一步稳定的干燥剂。可用作干燥剂的合适赋形剂包括与水紧密结合或降低 组合物水活性的任何药用赋形剂。例如，本发明的组合物可包含约1-4％硅 胶或约2.5％硅胶。
可将本发明的组合物制备成任何合适的口服剂型。合适的剂型的非限 制性实例包括片剂、胶囊剂或囊剂(sachet)。因为某些消化酶如胰脂肪酶可 能需要保护使其在十二指肠释放前不发生胃灭活，所以可能期望的是，本 发明经稳定化的消化酶组合物或口服剂型以控制释放制剂或延迟释放制剂 的形式来提供。这样的控制释放制剂或延迟释放制剂可包括包有肠溶衣的 片剂或颗粒，所述肠溶衣用于保护pH敏感性消化酶使其不发生胃灭活，而 在十二指肠中释放所述消化酶。可供选择地，所述控制释放制剂可包括填 充有本发明经稳定化的消化酶组合物或口服剂型的胶囊剂，其中所述胶囊 剂保护内容物使其不发生胃灭活，而在十二指肠中释放所述消化酶。然而， 本发明经稳定化的消化酶组合物或口服剂型不限于易发生胃灭活的消化 酶，例如在胃环境中是天然稳定的某些消化酶，如胃脂肪酶、一系列蛋白 酶(包括胰脏起源的那些蛋白酶)和淀粉酶。从微生物中得到或提取的某些消 化酶具有内在的稳定性或已经通过交联而进行了化学改性。
当将本发明的组合物配制成片剂时，可使用本领域已知的方法对所述 经稳定化的消化酶(一种或多种)进行“压片”(即形成片剂)，随后再次使用本 领域已知的方法用肠溶衣进行包衣。
当将本发明的组合物配制成胶囊剂时，可使用本领域已知的方法来配 制胶囊的内容物。例如，所述经稳定化的消化酶组合物可以按适于引入胶 囊中的颗粒或片剂的形式来提供。
本申请使用的术语“颗粒”包括细粉(fine powder)(具有范围为约1μm的 粒径)上至直径为约5mm的小丸(pellet)。
经稳定化的消化酶组合物也可成形为包有包衣的颗粒，其中所述包衣 包含肠溶性聚合物。术语“肠溶性聚合物”是指保护消化酶使其不与胃内容物 接触的聚合物，例如在酸性pH时稳定但是在较高pH时快速崩解的聚合物 或这样的聚合物，其水解速率或溶蚀速率慢得足以确保当消化酶在胃中时 胃内容物与消化酶的接触是相对小的，这与胃肠道的其它部分相反。肠溶 性聚合物的非限制性实例包括本领域已知的那些肠溶性聚合物，如改性的 或未改性的天然聚合物(如乙酸邻苯二甲酸纤维素(cellulose acetate phthalate)、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素(hydroxypropyl methylcellulose phthalate)、乙酸琥珀酸羟丙基甲基纤维素(hydroxypropylmethylcellulose acetate succinate)和虫胶)或合成的聚合物(如丙烯酸(酯)聚合物或共聚物、甲 基丙烯酸聚合物和共聚物、甲基丙烯酸甲酯共聚物和甲基丙烯酸/甲基丙烯 酸甲酯共聚物)。
肠溶性聚合物包衣可以是合成的聚合物，所述聚合物任选包含无机材 料如碱化剂(alkalinizing agent)。所得到的包衣颗粒提供了延迟释放珠，所述 珠包括含有经稳定化的消化酶(一种或多种)的核芯和包裹所述核芯的肠溶 衣。然后可将经包衣的稳定化消化酶颗粒配制成片剂或胶囊剂。
所述肠溶性聚合物和至少一种无机材料为本发明的包衣提供了肠溶性 质。换言之，当用作药物时，所述包衣将作为屏障来保护药物使其不与胃 酸性环境接触，并且在药物到达小肠前基本上防止药物的释放(即酶在胃中 的释放小于组合物中酶总量的约10-20％)。
所述无机材料可包括例如碱化剂。碱化剂的非限制性实例包括二氧化 硅、钠盐、钙盐、镁盐、铝盐、氢氧化铝、氢氧化钙、氢氧化镁、滑石和 它们的组合。在一个实施方案中，所述碱化剂为滑石。
基于所述组合物的预期用途，所述肠溶性聚合物和至少一种无机材料 的比例范围按重量计可为约10∶1至约1∶60。在另一个实施方案中，所述肠 溶性聚合物和至少一种无机材料的比例范围按重量计为约8∶1至约1∶50。 在另一个实施方案中，所述肠溶性聚合物和至少一种无机材料的比例范围 按重量计为约6∶1至约1∶40。在另一个实施方案中，所述肠溶性聚合物和至 少一种无机材料的比例范围按重量计为约5∶1至约1∶30。在另一个实施方案 中，所述肠溶性聚合物和至少一种无机材料的比例范围按重量计为约4∶1至 约1∶25。在另一个实施方案中，所述肠溶性聚合物和至少一种无机材料的 比例范围按重量计为约4∶1至约1∶9。在另一个实施方案中，所述肠溶性聚 合物和至少一种无机材料的比例范围按重量计为约10∶4至约10∶7。
在一个实施方案中，本发明的组合物或口服剂型包含包有肠溶衣的稳 定化消化酶颗粒，所述肠溶衣包含肠溶性聚合物和无机材料(如滑石)。在具 体的实施方案中，所述肠溶衣的无机材料按重量计占所述颗粒总重量的约 1-10％重量。在另一个实施方案中，所述无机材料按重量计占所述颗粒的约 3％、约5％、约7％或约10％。在其它实施方案中，所述无机材料为碱化剂， 并且占干包衣(dry coating)重量的约20-60％。在其它实施方案中，所述碱化 剂为干包衣重量的约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％或 约55％(包括在这些数值之间的所有范围、亚范围和值)。在具体的实施方案 中，所述碱化剂为滑石。在另一个具体的实施方案中，所述颗粒的干包衣 包含约35％滑石。
在本发明的另一个实施方案中，所述包衣还包含增塑剂。合适的增塑 剂的实例包括但不限于三醋精(triacetin)、柠檬酸三丁酯、柠檬酸三乙酯、乙 酰氧基柠檬酸三正丁酯(acetyl tri-n-butyl citrate)、邻苯二甲酸二乙酯、癸二 酸二丁酯、聚乙二醇、聚丙二醇、蓖麻油、乙酰化甘油一酯(acetylated mono-glyceride)、乙酰化甘油二酯(acetylated di-glyceride)和它们的混合物。
本发明的剂型可为含有本发明组合物(例如所述稳定化消化酶组合物 的包有肠溶性聚合物和碱化剂的控制释放颗粒)的胶囊剂。胶囊本身可由本 领域已知的任何常规生物可降解材料构成，所述生物可降解材料例如明胶、 多糖(如芽霉菌糖(pullulan))或经改性的纤维素材料(如羟丙基甲基纤维素)。 为了改善所述经稳定化的消化酶的稳定性，可在填充前对胶囊进行干燥， 或可选择由低含湿量材料构成的胶囊。在本发明剂型的一个实施方案中， 所述胶囊由羟丙基甲基纤维素构成。在本发明剂型的另一个实施方案中， 所述胶囊由以下羟丙基甲基纤维素构成，所述羟丙基甲基纤维素的含水量 为约6％或更小，例如以下任何一种：约4％或更小、约2％或更小、约2-6％ 或约4-6％。在另一个实施方案中，所述胶囊由含水量小于约2％的羟丙基 甲基纤维素构成。
本发明的剂型可包含单一的消化酶或消化酶的混合物。若将经稳定化 的消化酶组合物配制成包有肠溶衣的颗粒，则所述经包衣的颗粒可各自含 有包含单一消化酶或消化酶混合物的核芯。所述剂型也可包含经包衣的颗 粒，每个所述颗粒标称具有相同的组成，或所述剂型可包含不同种类包衣 颗粒的混合物。例如，所述剂型可为填充有包衣颗粒的胶囊剂，其中每个 包衣颗粒具有包含胰脂肪酶的核芯。可供选择地，所述剂型可为填充有包 衣颗粒的胶囊剂，其中一些包衣颗粒具有包含胰脂肪酶的核芯，而其它包 衣颗粒具有包含不同脂肪酶或蛋白酶或淀粉酶的核心。不同组成的包衣颗 粒的任何合适组合都可用于提供所期望的治疗效果。
此外，当本发明的剂型由经稳定化的消化酶的包衣颗粒构成时，各个 颗粒可各自具有相同的包衣组成，或所述剂型可包括颗粒的混合物，这些 颗粒中的一些具有不同的包衣组成。包衣组成的任何合适组合都可用于提 供所期望类型的控制释放或治疗效果。
包衣颗粒的核芯可具有任何合适的粒度或形状。例如，所述经包衣的 颗粒可呈粒度范围为约50-5000微米的包衣粉末的形式，或可呈标称粒径范 围为约2-5mm的“小片(minitab)”的形式。对于其它应用而言，包衣颗粒的核 芯可为标称粒径小于约2mm例如约1-2mm的“微片(microtab)”。
在一个实施方案中，本发明的组合物或口服剂型可包含多种经包衣的 消化酶(例如胰脂肪酶)颗粒。所述消化酶颗粒可包含消化酶、至少一种崩解 剂、至少一种聚合物粘合剂或稀释剂以及任选的至少一种增塑剂、任选的 至少一种助流剂和任选的至少一种润滑剂。在一个实施方案中，所述消化 酶颗粒可包含约60-90％的消化酶、约1-4％的至少一种崩解剂、约2-6％的 至少一种聚合物粘合剂或稀释剂以及任选约0.5-1.0％的至少一种增塑剂、任 选约0.2-0.6％的至少一种助流剂和任选约0.2-0.6％的至少一种润滑剂。例 如，所述消化酶颗粒可包含约60-90％的胰脂肪酶、约1-4％的交联羧甲纤维 素钠、约0.5-1.0％的氢化蓖麻油、约0.2-0.6％的胶体二氧化硅、约2-6％的 微晶纤维素以及约0.2-0.6％的硬脂酸镁。所述包衣可包含至少一种肠溶性聚 合物、约4-10％的至少一种碱化剂(基于颗粒的总重量)以及任选至少一种增 塑剂。在一个实施方案中，所述包衣可包含约10-20％的至少一种肠溶性聚 合物、约4-10％的至少一种碱化剂以及约1-2％的至少一种增塑剂(基于颗粒 的总重量)。例如，所述包衣可包含约10-20％的邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维 素、约4-10％的滑石以及约1-2％的柠檬酸三乙酯(基于颗粒的总重量)。然 后，多种经包衣的消化酶颗粒可成形为片剂或填充到胶囊中。在一个实施 方案中，所述胶囊包含羟丙基甲基纤维素。
与常规的消化酶(例如胰脂肪酶)组合物和剂型相比，本发明的组合物和 包含本发明组合物的剂型具有改善的稳定性。因此，就将临床有用量的消 化酶递送至有此需要的患者而言，本发明的剂型不需要如常规的消化酶剂 型那样“过量填充”(即零过量填充)。常规的消化酶组合物和剂型需要高达 65％的过量填充水平(即所需消化酶剂量的165％)来补偿差的酶稳定性。因 此，就常规的消化酶组合物所递送的剂量而言存在不确定性。因此，常规 的“过量填充”剂型在制造后不久可能递送高于期望剂量的消化酶，但随着时 间过去，酶活性可能降至所期望的剂量之下。
在一个实施方案中，包含本发明组合物的剂型是基本上零过量填充的。 术语“基本上零过量填充”是指这样的本发明组合物，其中额外的消化酶活性 的量(即高于预期剂量的额外的酶活性的量)小于或等于约10％(即约10％)、 小于约10％、小于或等于约9％、小于或等于约8％、小于或等于约7％、小 于或等于约6％、小于或等于约5％、小于或等于约4％、小于或等于约3％、 小于或等于约2％、小于或等于约1％或约0％。因此，例如若所预期的剂量 为约4500IU脂肪酶，则本发明基本上零过量填充的剂型可含有小于或等于 约4950IU脂肪酶(即小于或等于110％的4500IU脂肪酶)。在另一个实施方 案中，所述零过量填充的剂型含有4500IU脂肪酶。
本发明的组合物或剂型(例如片剂或胶囊剂)可贮存在任何合适的包装 中。例如，所述包装可为带有螺纹闭合件或压配合闭合件(threaded or press-fit closure)的玻璃瓶或塑料瓶。可供选择地，本发明的组合物或剂型可包装为 在“泡罩包装(blister pack)”中的单位剂型。申请人已发现所述消化酶组合物 或剂型的改善稳定性可通过提供防潮(moisture-proof)密封件和/或防潮包装 来提供。合适的防潮包装的非限制性实例包括玻璃瓶、合并有水分屏障树 脂或涂层的塑料瓶、铝化塑料(例如Mylar)包装等。术语“防潮”是指水渗透 性(permeability to water)小于约0.5mg水/cm3容器体积/年的包装。
容器(例如瓶)可用任何合适的闭合件尤其是在贮存期间使水分进入最 小化的闭合件来闭合。例如，本发明的组合物或剂型可用像Saf-Cap III-A(Van Blarcom Closures，Inc.)那样的闭合件来闭合，所述Saf-Cap III-A包 含印制为密封衬垫(sealing liner)的HS 035Heat Seal/20F(SANCAP Liner Technology，Inc.)。
为了在贮存期间确保包装完整性以及使水分进入最小化，可在分配本 发明的组合物或剂型以及密封包装后，对包含本发明组合物或剂型的密封 包装进行泄漏检验。例如，所述密封包装可如下检验：将受控的真空状态 施用至所述闭合件，并检测真空状态随着时间过去的降低。合适的泄漏检 验设备包括Bonfiglioli所制造的那些设备(例如LF-01-PKV型或PKV 516 型)。
包含本发明组合物或剂型的包装也可含有能够降低包装内部湿度的干 燥剂(即吸收(absorb)水的物质、与水反应的物质或吸附(adsorb)水的物质)， 例如能够从密封在包装内的气氛中“清除”水分的干燥剂胶囊。可置于所述包 装内部的合适干燥剂的非限制性实例包括沸石(zeolite)(例如分子筛如分 子筛)、粘土(clay)(例如蒙脱土(montmorillonite clay))、硅胶、活性炭或它们 的组合。在一个实施方案中，所述干燥剂包含分子筛。
此外，常见的实践是，当包装口服药物单位剂量时，将由纤维性材料 如棉花构成的“塞(plug)”加到容器顶部以填充容器顶部的空白空间，由此使 内容物的移动最小化。纤维性材料是有点吸湿性的，并可作为包装内部水 分的“贮器”。因此，在本发明包装的一个实施方案中，在包装中不存在纤维 性“塞”或棉花“塞”。在本发明包装的另一个实施方案中，所述包装缺少纤维 性塞或棉花塞而包含干燥剂。
本发明的组合物可使用常规技术来制备，但可根据本申请的说明进行 修饰以提供约3％或更小的含湿量，提供约0.6或更小的水活性，或提供在 三个月的加速稳定性试验后显示出不超过约15％的活性损失的稳定化消化 酶组合物。例如，消化酶(例如胰脂肪酶)的颗粒可在配有除湿器(dehumidifier) 的流化床包衣装置中包衣。在一个实施方案中，所述包衣装置在具有以下 含水量的气氛中操作：约4g/m3或更小、约3.5g/m3或更小、约3g/m3或更 小、约2.5g/m3或更小、约2.0g/m3或更小、约1.5g/m3或更小、约1.0g/m3 或更小或约0.5g/m3或更小，包括在这些数值之间的所有范围和亚范围。在 其中进行包衣的气氛可包括经除湿的空气、经除湿的氮气或另一种经除湿 的惰性气体。
所述包衣可按肠溶性聚合物(以及任选的悬浮无机材料)于有机溶剂中 的溶液的形式来应用，所述有机溶剂如醇(例如乙醇)、酮(例如丙酮)、二氯 甲烷或它们的混合物(例如丙酮/乙醇的混合物)。
本发明的组合物在患有与消化酶缺乏相关的疾病或病症的患者中提供 了对脂肪、蛋白质和碳水化合物的改善吸收。在一个实施方案中，本发明 的组合物，特别是胰脂肪酶或胰酶制剂组合物，可用于治疗与各种疾病相 关的胰腺外分泌机能不全(EPI)。所述疾病包括但不限于囊性纤维化(CF)。 在一些实施方案中，所述组合物可在囊性纤维化患者和其他患者(包括儿科 患者)中基本上减轻与EPI相关的吸收不良(例如脂肪吸收不良)。在一些实 施方案中，所述组合物可在囊性纤维化患者中将脂肪吸收系数(coefficient of fat absorption，CFA)提高到至少约85％或更大。当与其它药物或组合物共同 给药时，可实现这些结果，或在不与其它药物共同给药的情况下，可实现 这些结果。在一个实施方案中，在不与质子泵抑制剂如 等共同给药的情况下，实现了这些CFA结果。
对于被鉴定为具有低GI pH水平(胃肠道pH水平)(例如GI pH水平＜约 4)的患者而言，可通过将本发明的组合物或剂型与质子泵抑制剂、抗酸药和 提高胃肠道pH的其它药物一起给药来得到改善的结果。例如，本发明的组 合物或剂型可与质子泵抑制剂、抗酸药或其它药物分开给药(在给药质子泵 抑制剂、抗酸药等之前、同时或之后给药)。可供选择地，所述质子泵抑制 剂、抗酸药或其它药物可与本发明的胰酶制剂组合物组合为单一剂型。
在另一个实施方案中，本发明提供了治疗或预防与消化酶缺乏相关的 病症的方法，所述方法包括将本发明的组合物给予有此需要的哺乳动物。 在一个实施方案中，所述哺乳动物为人类。
在另一个实施方案中，本发明提供了治疗或预防与消化酶缺乏相关的 病症的方法，所述方法包括将本发明的组合物或剂型给予有此需要的哺乳 动物，其中本发明的组合物或剂型除了至少一种消化酶外还包含质子泵抑 制剂、抗酸药或增加GI pH的其它药物。在另一个实施方案中，本发明提 供了治疗或预防与消化酶缺乏相关的病症的方法，所述方法包括给药本发 明的组合物或剂型以及包含质子泵抑制剂、抗酸药或增加GI pH的其它药 物的剂型。
可用本发明的组合物或剂型治疗的病症包括其中患者不具有消化酶或 低水平消化酶的病症或其中患者需要消化酶补充给药(digestive enzyme supplementation)的病症。例如，所述病症可包括囊性纤维化、慢性胰腺炎、 其它胰脏疾病(例如遗传性胰腺炎、创伤后胰腺炎和同种异体移植物胰腺炎 (allograft pancreatitis)、血色素沉着病(hemochromatosis)、施瓦赫曼综合征 (Shwachman syndrome)、脂肪过多症(lipomatosis)或甲状旁腺功能亢进 (hyperparathyroidism))、癌症或癌症治疗的副作用、手术(例如胃肠旁路手术 (gastrointestinal bypass surgery)、惠普尔措施(Whipple procedure)、全胰切除 术(total pancreatectomy)等)的副作用、其中胰酶不能到达肠的其它病症、不 充分混合(poor mixing)(例如比罗特II式胃切除术(Billroth II gastrectomy)、其 它类型的胃旁路手术、胃泌素瘤(gastrinoma)等)、药物治疗(如用二甲双胍或 用于治疗HIV症状和自身免疫性疾病如糖尿病的药物进行的治疗，在这些 疾病中胰脏可能遭受损害)的副作用、阻塞(例如胰管和胆管结石病、胰脏和 十二指肠肿瘤(pancreatic and duodenal neoplasm)、管狭窄(ductal stenosis))、 与乳糜泻(celiac disease)相关的吸收不良、食物变态反应和衰老。
本发明的组合物或剂型每天给予哺乳动物(例如人类)的量取决于所预 期的结果。技术人员能够根据他对待治疗病症的诊断而开具所需剂量的处 方。
例如，对于在人类中治疗消化酶缺乏(例如与囊性纤维化相关的消化酶 缺乏)而言，根据US FDA(美国食品与药品监督管理局)的推荐，开始剂量应 为500至1000脂肪酶单位/kg/餐，而总剂量不超过2500脂肪酶单位/kg/餐 或4000脂肪酶单位/g脂肪/餐。典型地，患者每天应接受至少4次剂型，优 选与食物一起给药。
实施例
实施例1
胰脂肪酶MT(小片)为胰脂肪酶原料(例如得自Nordmark)和赋形剂的共 混物，使用圆形2mm直径斜冲头(beveled punch)来对其进行压片。胰脂肪 酶MT在包衣前的物理性质如下表1所示。

*USP方法
使用配有Munters ML 1350除湿器的流化床Glatt-GPCG1装置在加工气 流(process airflow)中用包衣配方(表2)对胰脂肪酶MT进行包衣。用三种不 同含湿量(表3)的加工空气(process air)来进行包衣加工。对于每批而言，包 衣重量为包衣颗粒总重量的约15％。用于各组加工条件的包衣颗粒的组成 是大致上相同的(表4)，并且在显微镜检查后似乎为均一、光滑和匀质的。




三组样品(即P9A165、P9A167和P9A170)显示出与加工气流含湿量相 应的残留含湿量(表5)。

残留水分对活性随时间推移的损失的影响在以下加速稳定性条件下进 行评价：
硬明胶胶囊(剂量为20,000IU脂肪酶)用上述三批经包衣的胰脂肪酶MT 小片填充，并且在40℃和75％相对湿度贮存在密封的Nialene袋中。
在贮存15天和4个月后评价脂肪酶活性。结果示于表6中。

表6的结果显示，含湿量小于约2％的组合物提供了改善的稳定性。可 供选择地，在含湿量小于3.6g/m3至0.4g/m3的气氛下进行包衣，由此提供 了改善的稳定性。
实施例2
胰脂肪酶MT颗粒用含有不同量滑石的两种包衣组合物进行包衣(表 7)。


为了确保加工气流处于低含湿量(即低于1g/m3)，使用配有Munters ML 1350除湿器的流化床Glatt-GPCG1装置来进行包衣试验(coating trial)。包衣 重量为约15％。两批的理论组成参见表8。显微镜检查表明，所有样品上的 包衣都是光滑和匀质的。残留含湿量通过干燥失重来测量(表9)。


不同包衣组合物对活性随时间推移的损失的影响在以下加速稳定性条 件下进行评价：
硬明胶胶囊(剂量为20,000IU脂肪酶)用上述两批经包衣的胰脂肪酶MT 填充，然后在40℃和75％相对湿度贮存在密封的Nialene袋中。
在贮存1、2和3个月后检查脂肪酶活性，结果示于表10中。

结果显示，在加速稳定性条件下贮存三个月后，对于用高滑石含量包 衣进行包衣的样品(批次P9A240)而言，其活性损失是显著较低的。因此， 将滑石浓度从约1％增加至约7％，这导致酶稳定性的显著改善。
实施例3
包衣组合物溶剂的作用如下评价：制备与表7所述那些组合物相似的 “高滑石”包衣组合物和“低滑石”包衣组合物，不同的是乙醇(96％乙醇，4％ 水)/丙酮溶剂用100％丙酮代替(表11)。


为了确保加工气流处于低含湿量(低于1g/m3)，使用配有Munters ML 1350除湿器的流化床Glatt-GPCG1装置来进行包衣试验。包衣重量为约 15％。两批的理论组成参见表12。

批次P9A318与商业产品说明书相符，但批次P9A352没有通过耐胃试 验(gastro-resistance test)。显微镜检查显示，批次P9A352的膜包衣不如其它 经包衣的样品那样光滑和匀质，这可能是因为与在先前样品中使用的乙醇/ 丙酮混合物相比丙酮的蒸发速率较高，以及包衣中的滑石浓度较高。
然后在加速稳定性条件下如下对批次P9A318进行评价：
制备硬明胶胶囊(剂量为20,000IU脂肪酶)，并且在40℃和75％相对湿 度贮存在密封的Nialene袋中。在贮存1、2和3个月后测量脂肪酶活性， 结果示于表13中。

与在相似包衣条件下用相似包衣制备的批次P9A230的稳定性相比，批 次P9A318的稳定性显著地改善(表14)。因此，在包衣制剂中用丙酮代替96％ 乙醇，这似乎提供了随时间推移显著较低的酶活性损失。

实施例4
将CPS明胶胶囊和HPMC(羟丙基甲基纤维素)胶囊用相同的经包衣的 脂肪酶组合物填充。明胶胶囊的含水量为约14％，而HPMC胶囊的含水量 为约4％。此外，将一组HPMC胶囊干燥至水分水平小于2％。使所有样品 接受加速稳定性条件(40℃和75％相对湿度；将样品热密封在Nialene袋中)， 并且在15、30和90天后测试脂肪酶活性。结果示于下表15-17中。
1)HPMC CPS(HPMC胶囊)对明胶CPS(明胶胶囊)



如表15-17所示，HPMC胶囊中的脂肪酶组合物显示出在加速稳定性 条件下贮存15、30和90天后显著较高的脂肪酶活性，以及与含有平衡水 分水平的那些HPMC胶囊相比，干燥的HPMC胶囊提供了较好的稳定性。
实施例5
明胶胶囊和羟丙基甲基纤维素胶囊用经包衣的脂肪酶组合物小片形式 填充。用于明胶胶囊组合物(P200050)的包衣含有约10％滑石，而用于羟丙 基甲基纤维素胶囊组合物(P200550)的包衣含有约33％滑石。包衣组合物在 其它方面是相同的。下表18对在加速稳定性条件下贮存后的降解水平与组 合物的含湿量进行了比较。如表18所示，在所述组合物中，较高的脂肪酶 活性水平与较低的水分水平相关。此外，填充在HPMC胶囊中的组合物比 填充在明胶胶囊中的组合物更稳定。
表18


实施例6
在包含干燥剂的包装中含有脂肪酶组合物的贮存胶囊的作用如下评 价：在加速稳定性条件(40℃和75％相对湿度；将样品热密封在Nialene袋中) 下贮存30和90天后测量样品中的脂肪酶活性。如表19和20所示，在包 含干燥剂的包装中以及在低于其平衡含湿量的条件下干燥的胶囊中脂肪酶 活性是显著较高的。
2)干燥剂
干燥剂1：硅胶在袋中
干燥剂2：分子筛在袋中


实施例7
使用丙酮或乙醇/丙酮的混合物作为包衣溶剂，胰脂肪酶MT颗粒用两 种包衣组合物进行包衣，所述包衣组合物具有介于上文所用“低”水平和“高” 水平中间的滑石水平(HP55∶TEC∶滑石＝10∶1∶5)。两种包衣混悬液的理论组成 示于下表21中。

为了确保加工气流处于低含湿量(低于1g/m3)，使用配有Munters ML 1350除湿器的流化床Glatt-GPCG1装置来进行包衣试验。
各批如下制备：在包衣重量为约15％的情况下对胰脂肪酶MT进行包 衣。三批用乙醇/丙酮包衣溶剂来制备，而三批用丙酮包衣溶剂来制备。理 论组成(六批的理论组成是相同的)示于下表22中。

对所有六种样品的包衣进行显微镜检查，其似乎为光滑和匀质的。然 后将经包衣的胰脂肪酶MT颗粒填充到HPMC胶囊中，并包装在含有干燥 剂(分子筛)的玻璃瓶中。然后将瓶密封，在加速稳定性条件下贮存，并且如 下表23所示在各时段对脂肪酶活性进行评价。
各种样品的包装条件如下。将十二个HPMC胶囊(剂量为20,000IU脂 肪酶)和作为干燥剂的1g分子筛(Minipax sorbent-Multisorb)置于容量为 30mL的玻璃瓶中。瓶用包含印制为密封衬垫的HS 035 Heat Seal/20F的 Saf-Cap III-A封闭，并在40℃/75％RH贮存。


如表23所示，用乙醇/丙酮包衣溶剂制备的三种样品显示出相似的脂肪 酶活性损失。贮存2个月后，用丙酮包衣溶剂制备的样品中的两种没有显 示出任何活性损失，而第三种显示出4％的活性降低。这表明用丙酮包衣溶 剂制备的样品比用乙醇/丙酮包衣溶剂制备的样品更稳定。
实施例8
微片
为了提供有关剂量的进一步选择，制备了片剂尺寸显著降低的制剂。 胰脂肪酶共混物用圆形1.5mm直径和1.2mm曲率半径的冲头压片。
设置压制参数以得到脆碎度低于2.5％(USP方法)的微片(“μT”)。批次 P9A402的性质示于表24中。

为了确保加工气流处于低含湿量(低于1g/m3)，在配有Munters ML 1350 除湿器的流化床Glatt-GPCG1装置中用具有表2所示组成的混悬液对批次 P9A402进行包衣。得到22％的包衣重量。对膜包衣进行的显微镜检查表明 所有样品似乎都是光滑和匀质的。
批次P9A422的理论组成示于表25中。

另外两个批次的微片如上所述来制备，并且它们的性质示于下表26中。

使用丙酮或乙醇/丙酮的混合物作为包衣溶剂，胰脂肪酶微片用两种混 悬液中的一种进行包衣，所述混悬液具有介于上述“高”水平和“低”水平中间 的滑石水平(HP55∶TEC∶滑石＝10∶1∶5)(表27)。
为了确保加工气流处于低含湿量(低于1g/m3)，使用配有Munters ML 1350除湿器的流化床Glatt-GPCG1装置来进行六次试验。包衣重量为约 22％，并且显微镜检查表明所述包衣是光滑和匀质的。


各批的理论组成概述于表28中。

HPMC胶囊用上述经包衣的微片填充，并包装在含有干燥剂(分子筛) 的玻璃瓶中。瓶用包含印制为密封衬垫的HS 035Heat Seal/20F的Saf-Cap III-A封闭，并在加速稳定性条件(40℃和75％相对湿度)下贮存。将十二个 HPMC胶囊(剂量为5,000IU脂肪酶)和作为干燥剂的1g分子筛(Minipax sorbent-Multisorb)置于容量为30mL的玻璃瓶中。如表29和30所示，在贮 存20、30、40和60天测量脂肪酶活性。



使用乙醇/丙酮包衣溶剂制备的所有三种样品显示出相似的行为，并且 贮存两个月后，脂肪酶活性损失为2％-4％。贮存两个月后，使用丙酮包衣 溶剂制备的两种样品的活性损失没有显示出脂肪酶活性损失的任何迹象， 而第三种样品显示出5％的脂肪酶活性降低。因此，用丙酮作为包衣溶剂制 备的组合物比用乙醇/丙酮包衣溶剂制备的样品更稳定，这可能与所用乙醇 的含水量相关。
上述制备的微片是稍微长方形的(参见表24和26)；微片厚度和直径之 间的比例为1.22∶1至1.15∶1。
为了进一步减小微片的尺寸，制备了厚度与直径比例接近1∶1的新样品 (批次O9A006)，其示于表31中。

用表32所示的组合物以22％的包衣重量对批次Q9A006进行包衣。为 了确保加工气流处于低含湿量(低于1g/m3)，使用配有Munters ML 1350除 湿器的流化床Glatt-GPCG1装置来进行包衣试验。
经包衣的微片批次Q9A019的理论组成与表28所示相同。显微镜检查 表明所述包衣是光滑和匀质的。

上述实施例显示，稳定性得以改善的消化酶组合物可如下制备：例如 通过用丙酮代替含水乙醇/丙酮包衣溶剂，在经除湿的加工气流(其例如具有 0.4g/m3至3.6g/m3的含湿量)中对小片和微片进行包衣，由此在所述组合物 的组分中维持低含湿量和低水活性。此外，提高包衣中无机材料的水平(例 如HP55∶TEC∶滑石比例范围为10∶1∶1至10∶1∶5)，选择吸湿性较小的胶囊材 料(例如HPMC或干燥的HPMC)，以及改善包装技术(例如贮存在含有干燥 剂的密封良好的玻璃瓶中)，这些措施提供了稳定性得以改善的消化酶组合 物和剂型。
实施例9
下表33显示了对用Eudragit(丙烯酸树脂)包衣的胰脂肪酶小片进行的 加速稳定性试验(在瓶中；40℃和75％相对湿度)。
表33

结果表明，常规的肠溶衣(如Eudragit)不能提供经稳定化的胰脂肪酶组 合物。
实施例10
剂型的实施例示于下表34中，所述剂型包含各种剂量/胶囊的如先前实 施例所述那样进行包衣的ER包衣珠。


实施例11
下表35显示了含有包含本发明组合物的胶囊的各种大小的容器的含水 量。所述含水量包括来自胶囊的全部水和经过两年贮存时间渗入容器中的 水。“等效分子筛重量(equivalent molecular sieves weight)”为吸收容器中存在 的水所需的分子筛的最小量。
表35

实施例12
进行III期随机双盲安慰剂对照交叉研究，从而在患有EPI的年龄为7 岁或更大的34位CF患者中对表34的胰脂肪酶组合物的治疗效果与安慰剂 的治疗效果进行比较。研究在遍及美国的14个CF中心进行。研究的初级 终点(primary endpoint)比较了在对5,000、10,000、15,000或20,000脂肪酶 单位/胶囊进行组合的情况下以小于或等于10,000脂肪酶单位/千克体重的 日剂量口服给药所述胰脂肪酶组合物后的脂肪吸收系数与口服给药安慰剂 后的脂肪吸收系数。试验的二级终点(secondary endpoint)评价了用于确定蛋 白质吸收的氮吸收系数的变化以及胆固醇的变化、脂溶性维生素的变化、 重量的变化、体重指数的变化和EPI症状的变化。
与接受安慰剂的那些患者相比，用这些组合物治疗的患者在脂肪吸收 系数和氮吸收系数方面显示出统计学上显著的增加，并且具有较少的与受 损吸收(impaired absorption)相关的症状(如胃气胀(bloating)、肠胃气胀 (flatulence)、疼痛和粪便(stool)中脂肪的迹象)。与安慰剂相比，在服用这些 胰脂肪酶组合物的患者中还观察到平均胆固醇水平的增加和平均维生素水 平的增加。在每天排便频率方面得到了统计学上显著的降低。这些组合物 就患者而言是良好耐受的，并且在研究期间没有观察到与药物相关的任何 严重不良事件。
与接受安慰剂的患者中62.76％的平均脂肪吸收系数百分比相比，接受 这些组合物的患者中的平均脂肪吸收系数百分比为88.28％。与接受安慰剂 的患者中65.7％的平均氮吸收系数百分比相比，平均氮吸收系数百分比为 87.2％，以及对于各患者组而言平均每天排便次数为2.66至1.77。
实施例13
进行儿科III期临床试验，从而在美国的11个CF治疗中心在标签公开 研究(open-label study)的情况下在19位年龄在7岁以下的患者中评价表34 的组合物的治疗效果-此规模的首次胰脏补充疗法试验(pancreatic replacement therapy trial)在患有胰腺外分泌机能不全的幼儿和婴儿中进行。 研究设计包括七天剂量稳定期和随后的七天治疗期；患者每天接受5,000脂 肪酶单位/胶囊，其中按需要将产品洒在食物上。研究的初级终点为“应答者 (responder)”的百分比或在治疗一周和两周后粪便中没有过量的脂肪并且没 有吸收不良的体征和症状的那些患者。二级终点包括重量变化、营养状态、 排便频率和粪便稠度、胃胀气的发生率、疼痛的发生率和肠胃胀气的发生 率以及医师和父母或监护人对临床症状改善的判断。还评价了产品安全性。
在研究方案中定义的平均应答者百分比在筛选时(稳定期的开始即当 患者开始接受先前胰酶补充疗法时以及在治疗前)为52.6％。在稳定期结束 和治疗期结束时，平均应答者百分比分别为66.4％和57.9％。在所研究的儿 童中，在治疗期结束时的吸收不良症状显著地低于在筛选时的吸收不良症 状，这与在以上实施例12所述III期试验中显示的有关对吸收不良症状进 行控制的观察结果相一致。本发明的胰脂肪酶组合物也被这些患者良好地 耐受，并且在试验期间没有观察到与药物相关的任何严重不良事件。
结果显示，本发明的组合物有效地控制了吸收不良的体征和症状并支 持了在实施例12所述关键III期试验中得到的结果。显著比例的医师和患 者感觉到的是，与先前的疗法相比，用本发明的组合物对症状进行的控制 是得以改善的。
实施例14
在10位患有胰腺外分泌机能不全的慢性胰腺炎患者中进行III期标签 公开随机单中心单治疗交叉研究以比较表34的胰脂肪酶组合物的治疗效 果，从而确定这些组合物在进食条件下的胃肠利用度。排斥性药物 (exclusionary drug)(质子泵抑制剂(PPI’s)、抗酸药和能够改变GI运动性的药 物)被停药7天，然后进入研究。在每次操作时患者随机接受单独的Ensure PlusTM(得自Abbott的维生素强化营养补剂)或Ensure PlusTM与75,000USP 脂肪酶单位(各含有20,000单位的3个胶囊加上各含有5000单位的3个胶 囊)的组合。将胶囊打开，并且在给药前才对它们的内容物与480mL Ensure PlusTM进行混合。在一天清除期(washout period)后，重复此操作，不同的是 先前接受单独Ensure PlusTM的患者接受Ensure PlusTM与75,000USP脂肪酶 单位的组合，而先前接受Ensure PlusTM与脂肪酶组合的患者接受单独的 Ensure PlusTM。在第二天，患者接受身体检查，并收集血样和尿样。本发明 组合物的生物利用度通过在Ensure PlusTM的存在下给药所述组合物后在十 二指肠中释放和回收的各种酶(即脂肪酶、淀粉酶和糜蛋白酶)的量来评估。 还测量了血液中的胆囊收缩素(cholecystokinin)水平以及胃和十二指肠的 pH。脂肪酶活性根据以下文献的方法来测量：Carriere，F，；Barrowman，J.A.； Verger，R.；Laugier，R.Secretion and contribution to lipolysis of gastric and pancreatic lipases during a test meal in humans.Gastroenterology 1993，105， 876-88。淀粉酶和糜蛋白酶根据以下文献中描述的方法来测量：Carriere，F.； Grandval，P.；Renou，C.；Palomba，A.；Prieri，F.；Giallo，J；Henniges，F.； Sander-Struckmeier，S.；Laugier，R.Quantitative study of digestive enzyme secretion and gastrointestinal lipolysis in chronic pancreatitis Clin.Gastroenterol. Hepatol.2005，3，28-38。
发现用本发明的胰脂肪酶组合物进行的治疗导致以下结果：与仅接受 Ensure PlusTM的患者相比，在接受Ensure PlusTM与胰脂肪酶组合的患者的十 二指肠中释放的淀粉酶的量、脂肪酶的量和糜蛋白酶的量是统计学上显著 较大的(在就pH(作为致混淆因素(confounding factor))而言进行校正后)。
按照方案完成研究的八位患者对脂肪酶、淀粉酶和糜蛋白酶的平均生 物利用度分别为27.5％、21.6％和40.1％。发现患者分成两种不同的GI pH 亚群(“正常pH”和“低pH”)。对于具有“正常pH”值的患者(即平均十二指肠 pH大于4的患者)而言，脂肪酶的平均生物利用度、淀粉酶的平均生物利用 度和糜蛋白酶的平均生物利用度高于整个研究组：分别为45.6％、26.9％和 47.7％。在两种治疗之间没有观察到在胆囊收缩素值方面的任何差异。
因为对于“正常pH”和“低pH”患者而言，脂肪酶的生物利用度、淀粉酶 的生物利用度和糜蛋白酶的生物利用度(特别是脂肪酶的生物利用度)是不 同的，所以可通过共同给药增加GI pH的药物(例如PPI’s和抗酸药)来提高 本发明胰脂肪酶组合物或剂型的效力(例如在“低pH”患者中)。然而，本发 明的组合物或剂型可在没有共同给药例如PPI’s的情况下来给药。
出于解释和描述的目的，已提供了有关本发明的先前描述。其并非意 在排除或将本发明局限于所披露的具体形式。根据上述教导，修改和变化 是可能的。为了解释和描述本发明的原理及其实际应用，对有关实施方案 的描述进行了选择，而非意在对权利要求的范围进行限制。
将本申请引用的所有出版物和专利或专利申请以相同的程度整体引入 作为参考，就如同每篇单独的出版物、专利或专利申请被明确并且单独地 指明其被整体引入作为参考一样。