治疗组合物和方法
阅读：776发布：2020-11-14
专利汇可以提供治疗组合物和方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及皮质醇阻断剂(糖皮质 激素 受体[GR]拮抗剂)作为 治疗 剂和与 诊断剂 一起用于 预防 或治疗成瘾诱导的焦虑和 戒断 副作用 的用途。此类成瘾可以是，但不限于，酒精、药物、咖啡因、糖、食物、烟 碱 等。本发明还涉及皮质醇阻断剂(GR拮抗剂)用于 伤口愈合 和移 植物 ，预防或治疗压 力 诱导的骨质疏松症和与骨有关的损伤的快速愈合，以及再生疗法的用途。，下面是治疗组合物和方法专利的具体信息内容。
1.一种用于治疗或预防成瘾、成瘾诱导的焦虑、和/或戒断症状的方法，其中所述方法包括以治疗有效量向需要此治疗的患者施用至少一种糖皮质激素受体拮抗剂。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述至少一种糖皮质激素受体拮抗剂是在药物制品中。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述糖皮质激素受体拮抗剂选自由以下组成
的组：ORG 34517、11-(取代的苯基)-雌-4,9-二烯衍生物、和式I的11-(取代的苯基)-雌-4,9-二烯衍生物
其中，A为包含不相互连接并独立地选自O和S的2个杂原子的五元环或六元环的残
基，所述环任选地被一个或更多个卤素原子取代，或A为其中不存在C-C双键的五元环或六元环的残基，包含选自O和S的1个杂原子，该杂原子在用星号表示的位置上与苯基相连，所述环任选地被一个或更多个卤素原子取代；R1是H或1-氧代(1-4C)烷基；R2是H、(1-8C)烷基、卤素或CF3；X选自(H,OH)、O和NOH；且中断线表示任选的键。
4.一种用于在需要其的患者中治疗或预防成瘾、成瘾诱导的焦虑、和/或戒断症状的方法，所述方法包括：施用包含以下的组合物：
i)第一治疗剂，所述第一治疗剂为GCR拮抗剂，或其药学上可接受的盐；
ii)选自由抗焦虑药、抗抑郁剂、精神安定药、或其他精神病药物和其组合组成的组中的至少一种或可能更多种另外的治疗剂；和
iii)至少一种药学上可接受的载体，
其中所述第一治疗剂和第二治疗剂各自以组合用于治疗或预防成瘾、成瘾诱导的焦虑、和/或戒断症状的治疗有效量的量存在。
5.根据权利要求4所述的方法，其中所述第二治疗剂选自由至少一种抗焦虑药物、至少一种抗抑郁药物和至少一种精神安定药物以及其组合组成的组，其中所述至少一种抗焦虑药物选自由阿普唑仑、溴西泮、地西泮、劳拉西泮、氯硝西泮、替马西泮、奥沙西泮、氟硝西泮、三唑仑、氯氮卓、氟西泮、艾司唑仑、硝西泮、和其药学上可接受的盐、异构体、以及混合物组成的组；且/或至少一种抗抑郁药物选自由西酞普兰、草酸依他普兰、氟西汀、氟伏沙明、帕罗西汀、舍曲林、达泊西汀；文拉法辛与度洛西汀；哈马灵、异丙烟肼、异卡波肼、烟肼酰胺、帕吉林、苯乙肼、司来吉兰、托洛沙酮、反苯环丙胺、溴法罗明、吗氯贝胺；阿米替林、阿莫沙平、布替林、氯丙咪嗪、地昔帕明、二苯西平、度硫平、多虑平、丙咪嗪、伊普吲哚、洛非帕明、美利曲辛、去甲替林、奥匹哌醇、普罗替林、曲米帕明；马普替林、米安色林、奈法唑酮、曲唑酮、及其药学上可接受的盐、异构体、以及组合物组成的组，且/或至少一种精神安定药物选自由氟哌啶醇、氟哌利多、苯哌利多、三氟哌多、美哌隆、仑哌隆、阿扎哌隆、多潘立酮、利培酮、氯丙嗪、氟非那嗪、奋乃静、丙氯拉嗪、硫利达嗪、三氟拉嗪、美索达嗪、哌氰嗪、丙嗪、三氟丙嗪、左美丙嗪、异丙嗪、匹莫齐特、氰美马嗪、氯普噻吨、氯哌噻吨、氟哌噻吨、替沃噻吨、珠氯噻醇、氯氮平、奥氮平、利培酮、喹硫平、齐拉西酮、氨磺必利、阿塞那平、帕潘立酮、伊潘立酮、佐替平、舍吲哚、鲁拉西酮、阿立哌唑、和其药学上可接受的盐、异构体、以及组合组成的组。
6.根据权利要求4所述的方法，其中所述GCR拮抗剂选自由以下组成的组ORG 34517、
11-(取代的苯基)-雌-4,9-二烯衍生物、和式I的11-(取代的苯基)-雌-4,9-二烯衍生物
其中，A为包含不相互连接并独立地选自O和S的2个杂原子的五元环或六元环的残
基，所述环任选地被一个或更多个卤素原子取代，或A为其中不存在C-C双键的五元环或六元环的残基，包含选自O和S的1个杂原子，所述杂原子在用星号表示的位置上与苯基相连，所述环任选地被一个或更多个卤素原子取代；R1是H或1-氧代(1-4C)烷基；R2是H、(1-8C)烷基、卤素或CF3；X选自(H,OH)、O和NOH；且中断线表示任选的键。
7.一种在患者中治疗或预防成瘾、成瘾诱导的焦虑、和/或戒断症状的方法，包括以下步骤：
a)任选地在预先决定的时间，使用测试样品收集单元从所述患者中获得测试样品；
b)在反应单元中将所述测试样品与缓冲体系合并以形成混合物；
c)测量混合物的参数以确定空白测量结果；
d)在反应单元中将所述测试样品和缓冲液混合物与结合皮质醇的标记的配体合并以生成测定溶液，其中所述标记的配体被提供于标记单元中；或合并所述测试样品和缓冲液混合物并递送它到在反应单元中的包含结合皮质醇的标记的配体的载体以生成测定固定化的复合物，其中所述标记的配体被提供于标记单元中；
e)测量所述测定溶液或复合物的参数；
f)将所述测定溶液的测量结果相对于所述空白测量结果进行比较；
g)基于所述测量结果的变化确定所述患者的循环皮质醇水平；
h)将所述测量的皮质醇水平与预先决定的参考范围皮质醇水平进行比较，其中当所述皮质醇的水平相对于所述预先决定的参考范围提高时，则所述患者具有提高的皮质醇，且因此适于GCR(糖皮质激素受体)拮抗剂治疗；且
i)当所述患者适于GCR拮抗剂治疗时，施用至少一种GCR拮抗剂，
从而在所述患者中治疗或预防成瘾、成瘾诱导的焦虑、和/或戒断症状。
8.根据权利要求7所述的方法，其中所述患者的测试样品选自由唾液、血液、血浆、血清、尿、其他体液、和其组合组成的组。
9.根据权利要求7所述的方法，其中所述样品在选自由早晨、中午和晚上组成的组的一个时间被从所述患者获得。
10.根据权利要求7所述的方法，其中所述样品以超过一次被从患者获得，且所述预先决定的时间被从由早晨、中午和晚上组成的组中选择以确定所述皮质醇昼夜节律的性质(包括其可能的扰乱或消除)。
11.根据权利要求7所述的方法，其中所述样品经连续数天被从所述患者获得。
12.根据权利要求7所述的方法，其中所述方法为确定所述患者中的所述皮质醇水平的昼夜节律循环，且所述预先决定的时间选自由每小时、每4小时、每6小时、每8小时和每
12小时组成的组。
13.根据权利要求7所述的方法，其中所述预先决定的参考范围是医学上标准参考范围。
14.根据权利要求7所述的方法，其中所述预先决定的参考范围是所述患者的先前测量的水平。
15.根据权利要求7所述的方法，其中所述配体被用选自由放射性同位素、荧光团、荧光猝灭剂、酶、亲和标签和表位标签组成的组的部分可检测地标记。
16.根据权利要求7所述的方法，其中所述混合物和所述测定溶液的所述参数的所述测量使用选自光谱法、光化学法、放射化学法、生化法、酶法、免疫化学法、化学标记置换法、表面等离子体共振法、荧光共振能量转移法、荧光猝灭法、侧向流法、和荧光偏振方法的方法进行。
17.根据权利要求7所述的方法，其中所述GCR(糖皮质激素受体)拮抗剂选自由以下组成的组：ORG 34517、11-(取代的苯基)-雌-4,9-二烯衍生物、和式I的11-(取代的苯基)-雌-4,9-二烯衍生物
其中A为包含不相互连接并独立地选自O和S的2个杂原子的五元环或六元环的残
基，该环任选地被一个或更多个卤素原子取代，或A为其中不存在C-C双键的五元环或六元环的残基，包含选自O和S的1个杂原子，该杂原子在用星号表示的位置上与苯基相连，所述环任选地被一个或更多个卤素原子取代；R1是H或1-氧代(1-4C)烷基；R2是H、(1-8C)烷基、卤素或CF3；X选自(H,OH)、O和NOH；且中断线表示任选的键。
18.一种用于治疗或预防成瘾、成瘾诱导的焦虑、和/或戒断症状的试剂盒，所述试剂盒包含：
(a)包含治疗有效量的至少一种糖皮质激素受体拮抗剂的药物组合物；和
(b)包含(a)的药物组合物和用于使用所述药物组合物治疗或预防成瘾、成瘾诱导的焦虑、和/或戒断症状的说明书的至少一种泡罩包装；有盖的泡罩；泡罩卡或泡罩包；泡沫塑胶盒；静脉注射(IV)包、IV小包装或IV容器；底盘或热缩塑料包。
19.一种用于治疗或预防成瘾、成瘾诱导的焦虑、和/或戒断症状的制品，所述制品包含：包含含有至少一种糖皮质激素受体拮抗剂的药物组合物和用于治疗或预防成瘾；成瘾诱导的焦虑；和/或戒断症状的说明书的泡罩包装；有盖的泡罩；泡罩卡或泡罩包；泡沫塑胶盒；静脉注射(IV)包、IV小包装或IV容器；底盘或热缩塑料包。
20.一种用于治疗骨折和/或骨相关的损伤的方法，其中所述方法包括以治疗有效量向需要此治疗的患者施用至少一种糖皮质激素受体拮抗剂。
21.根据权利要求20所述的方法，其中所述至少一种糖皮质激素受体拮抗剂是在药物制品中。
22.根据权利要求20所述的方法，其中所述GCR(糖皮质激素受体)拮抗剂选自由以下组成的组：ORG 34517、11-(取代的苯基)-雌-4,9-二烯衍生物、和式I的11-(取代的苯基)-雌-4,9-二烯衍生物
其中A为包含不相互连接并独立地选自O和S的2个杂原子的五元环或六元环的残
基，该环任选地被一个或更多个卤素原子取代，或A为其中不存在C-C双键的五元环或六元环的残基，包含选自O和S的1个杂原子，该杂原子在用星号表示的位置上与苯基相连，所述环任选地被一个或更多个卤素原子取代；R1是H或1-氧代(1-4C)烷基；R2是H、(1-8C)烷基、卤素或CF3；X选自(H,OH)、O和NOH；且中断线表示任选的键。
23.根据权利要求20所述的方法，其中所述GCR拮抗剂通过以下被施用：静脉内、皮内、动脉内、腹膜内、损伤内、颅内、关节内、前列腺内、胸腔内、气管内、鼻内、鞘内、玻璃体内、阴道内、直肠内、瘤内、肌内、腹膜内、眼内、皮下、结膜下、膀胱内、粘膜、心包内、脐内、眼内、口服、体表、局部、通过吸入、通过注射、通过输注、通过连续输注、通过局部灌注、通过在手术过程中直接应用、经由导管、经由灌洗、或通过导管插入、浸没、吸收、或吸附。
24.根据权利要求20所述的方法，其中所述方法向骨折周围的组织施用药物组合物。
25.根据权利要求20所述的方法，其中所述药物组合物的施用包括注射所述药物组合物到骨折周围的组织中。
26.根据权利要求20所述的方法，其中所述糖皮质激素受体拮抗剂选自由以下组
成的组：ORG 34517、11-(取代的苯基)-雌-4,9-二烯衍生物、和式I的11-(取代的苯基)-雌-4,9-二烯衍生物
其中A为包含不相互连接并独立地选自O和S的2个杂原子的五元环或六元环的残基，所述环任选地被一个或更多个卤素原子取代，或A为其中不存在C-C双键的五元环或六元环的残基，包含选自O和S的1个杂原子，该杂原子在用星号表示的位置上与苯基相连，所述环任选地被一个或更多个卤素原子取代；R1是H或1-氧代(1-4C)烷基；R2是H、(1-8C)烷基、卤素或CF3；X选自(H,OH)、O和NOH；且中断线表示任选的键。
27.一种用于治疗骨折和/或骨相关损伤的试剂盒，所述试剂盒包含：
(a)包含治疗有效量的至少一种糖皮质激素受体拮抗剂的药物组合物；和
(b)包含所述(a)的药物组合物和用于使用所述药物组合物治疗骨折和/或骨相关
损伤的说明书的至少一种泡罩包装；有盖的泡罩；泡罩卡或泡罩包；泡沫塑胶盒；静脉注射(IV)包、IV小包装或IV容器；底盘或热缩塑料包。
28.一种用于治疗骨折和/或骨相关损伤的制品，所述制品包含：包含含有至少一种糖皮质激素受体拮抗剂的药物组合物，和用于治疗骨折和/或骨相关损伤的说明书的泡罩包装；有盖的泡罩；泡罩卡或泡罩包；泡沫塑胶盒；静脉注射(IV)包、IV小包装或IV容器；底盘或热缩塑料包。
29.一种用于治疗或预防无论是应激诱导的或与老年人的失调的皮质醇或升高的皮质醇有关的骨质疏松症的方法，其中所述方法包括向需要此治疗的患者施用治疗有效量的至少一种糖皮质激素受体拮抗剂。
30.根据权利要求29所述的方法，其中所述至少一种糖皮质激素受体拮抗剂是在药物制品中。
31.根据权利要求29所述的方法，其中所述糖皮质激素受体拮抗剂选自由以下组
成的组：ORG 34517、11-(取代的苯基)-雌-4,9-二烯衍生物、和式I的11-(取代的苯基)-雌-4,9-二烯衍生物
其中A为包含不相互连接并独立地选自O和S的2个杂原子的五元环或六元环的残
基，所述环任选地被一个或更多个卤素原子取代，或A为其中不存在C-C双键的五元环或六元环的残基，包含选自O和S的1个杂原子，该杂原子在用星号表示的位置上与苯基相连，该环任选地被一个或更多个卤素原子取代；R1是H或1-氧代(1-4C)烷基；R2是H、(1-8C)烷基、卤素或CF3；X选自(H,OH)、O和NOH；且中断线表示任选的键。
32.根据权利要求29所述的方法，其中所述GCR拮抗剂通过以下被施用：静脉内、皮内、动脉内、腹膜内、损伤内、颅内、关节内、鼻内、直肠内、肌肉内、皮下、口服、体表、局部、通过吸入、通过注射、通过输注、通过连续输注、通过局部灌注、通过在手术期间直接应用、经由导管、经由灌洗、或通过导管插入、浸没、吸收、或吸附。
33.一种用于治疗或预防无论是应激诱导的或与老年人的失调的皮质醇或升高的皮质醇有关的骨质疏松症的试剂盒，所述试剂盒包含：
(a)包含治疗有效量的至少一种糖皮质激素受体拮抗剂的药物组合物；和
(b)包含所述(a)的药物组合物和用于使用所述药物组合物治疗或预防应激诱导的骨质疏松症的说明书的至少一种泡罩包装；有盖的泡罩；泡罩卡或泡罩包；泡沫塑胶盒；静脉注射(IV)包、IV小包装或IV容器；底盘或热缩塑料包。
34.一种用于治疗或预防无论是应激诱导的或与老年人的失调的皮质醇或升高的皮质醇有关的骨质疏松症的制品，所述制品包含：包含含有至少一种糖皮质激素受体拮抗剂的药物组合物，和用于治疗或预防无论是应激诱导的或与老年人的失调的皮质醇或升高的皮质醇有关的骨质疏松症的说明书的泡罩包装；有盖的泡罩；泡罩卡或泡罩包；泡沫塑胶盒；
静脉注射(IV)包、IV小包装或IV容器；底盘或热缩塑料包。
35.一种用于在需要此治疗的患者中增强干细胞的移植后功能的方法，所述方法包括以下步骤：
-提供干细胞，无论是胚胎干细胞、源自胚胎干细胞的干细胞或其分化的后代；诱导的多能干细胞或其后代；胎儿干细胞或其分化的后代；和出生后(成体)干细胞或其分化的后代；或源自任何这些组织的干细胞，
-用至少一种GCR拮抗剂处理所述干细胞或源自干细胞的分化的后代用于移植的准
备；且
-将处理的干细胞引入患者中。
36.根据权利要求35所述的方法，其中所述糖皮质激素受体拮抗剂选自由以下组
成的组ORG 34517、11-(取代的苯基)-雌-4,9-二烯衍生物、和式I的11-(取代的苯基)-雌-4,9-二烯衍生物：
其中A为包含不相互连接并独立地选自O和S的2个杂原子的五元环或六元环的残基，所述环任选地被一个或更多个卤素原子取代，或A为其中不存在C-C双键的五元环或六元环的残基，包含选自O和S的1个杂原子，该杂原子在用星号表示的位置上与苯基相连，所述环任选地被一个或更多个卤素原子取代；R1是H或1-氧代(1-4C)烷基；R2是H、(1-8C)烷基、卤素或CF3；X选自(H,OH)、O和NOH；且中断线表示任选的键。
37.根据权利要求35所述的方法，其中所述处理的干细胞通过以下被施用：静脉内、皮内、动脉内、腹膜内、损伤内、颅内、关节内、前列腺内、胸腔内、气管内、鼻内、鞘内、玻璃体内、阴道内、直肠内、瘤内、肌内、腹膜内、眼内、皮下、结膜下、膀胱内、粘膜、心包内、脐内、眼睛内、口服、体表、局部、通过吸入、通过注射、通过输注、通过连续输注、通过局部灌注、通过在手术期间直接应用、经由导管、经由灌洗、或通过导管插入、浸没、吸收、或吸附。
38.一种用于在哺乳动物中增强干细胞的移植后功能的药物组合物，所述药物组合物包含：
-治疗有效量的根据权利要求36的处理的干细胞，无论是胚胎干细胞、源自胚胎干细胞的干细胞或其分化的后代；诱导的多能干细胞或其后代；胎儿干细胞或其分化的后代；
和出生后(成体)干细胞或其分化的后代；或源自任何这些组织的干细胞，；和
-药学上可接受的介质或载体。
39.一种用于减少移植器官的移植后排斥和/或改善移植物功能和存活的方法，所述方法包括以下步骤：
-提供待移植的器官；
-在移植之前用GCR拮抗剂处理所述器官；且
-向需要此治疗的患者移植所述器官。
40.根据权利要求39所述的方法，其中所述的糖皮质激素受体选自由以下组成
的组：ORG 34517、11-(取代的苯基)-雌-4,9-二烯衍生物、和式I的11-(取代的苯基)-雌-4,9-二烯衍生物
其中A为包含不相互连接并独立地选自O和S的2个杂原子的五元环或六元环的残基，所述环任选地被一个或更多个卤素原子取代，或A为其中不存在C-C双键的五元环或六元环的残基，包含选自O和S的1个杂原子，该杂原子在用星号表示的位置上与苯基相连，所述环任选地被一个或更多个卤素原子取代；R1是H或1-氧代(1-4C)烷基；R2是H、(1-8C)烷基、卤素或CF3；X选自(H,OH)、O和NOH；且中断线表示任选的键。
41.一种用于减少移植后排斥和/或改善移植物功能和存活的方法，所述方法包括用GCR拮抗剂治疗需要此治疗的患者。
42.根据权利要求41所述的方法，其中所述糖皮质激素受体选自由以下组成的组：ORG
34517、11-(取代的苯基)-雌-4,9-二烯衍生物、和式I的11-(取代的苯基)-雌-4,9-二烯衍生物
其中A为包含不相互连接并独立地选自O和S的2个杂原子的五元环或六元环的残
基，所述环任选地被一个或更多个卤素原子取代，或A为的其中不存在C-C双键的五元环或六元环的残基，包含选自O和S的1个杂原子，该杂原子在用星号表示的位置上与苯基相连，所述环任选地被一个或更多个卤素原子取代；R1是H或1-氧代(1-4C)烷基；R2是H、(1-8C)烷基、卤素或CF3；X选自(H,OH)、O和NOH；且中断线表示任选的键。
43.根据权利要求41所述的方法，其中在移植之前所述GCR拮抗剂被血管内、动脉内、静脉内施用到器官移植物或施用到组织中或浸没所述器官的全部或部分。
44.一种用于减少移植后排斥和/或改善移植物功能和存活的试剂盒，所述试剂盒包含：
(a)包含治疗有效量的至少一种糖皮质激素受体拮抗剂的药物组合物；和
(b)器官保存液。
45.一种用于减少移植后排斥和/或改善移植物功能和存活的试剂盒，所述试剂盒包含：
(a)包含治疗有效量的至少一种糖皮质激素受体拮抗剂的药物组合物；和
(b)包含所述(a)的药物组合物和用于使用所述药物组合物减少移植后排斥的说明书的至少一种泡罩包装；有盖的泡罩；泡罩卡或泡罩包；泡沫塑胶盒；静脉注射(IV)包、IV小包装或IV容器；底盘或热缩塑料包。
46.一种用于减少移植后排斥的制品，所述制品包含：包含含有至少一种糖皮质激素受体拮抗剂的药物组合物，和用于减少移植后排斥和/或改善移植后移植物功能和存活的说明书的泡罩包装；有盖的泡罩；泡罩卡或泡罩包；泡沫塑胶盒；静脉注射(IV)包、IV小包装或IV容器；底盘或热缩塑料包。
47.一种用于在需要其的患者中改善伤口愈合并预防过多瘢痕形成的方法，所述方法包括向哺乳动物施用治疗有效量的糖皮质激素受体拮抗剂。
48.根据权利要求47所述的方法，其中所述糖皮质激素受体拮抗剂选自由以下组
成的组：ORG 34517、11-(取代的苯基)-雌-4,9-二烯衍生物、和式I的11-(取代的苯基)-雌-4,9-二烯衍生物
其中A为包含不相互连接并独立地选自O和S的2个杂原子的五元环或六元环的残基，所述环任选地被一个或更多个卤素原子取代，或A为其中不存在C-C双键的五元环或六元环的残基，包含选自O和S的1个杂原子，该杂原子在用星号表示的位置上与苯基相连，所述环任选地被一个或更多个卤素原子取代；R1是H或1-氧代(1-4C)烷基；R2是H、(1-8C)烷基、卤素或CF3；X选自(H,OH)、O和NOH；且中断线表示任选的键。
49.根据权利要求47所述的方法，其中用糖皮质激素受体拮抗剂处理所述伤口，其中所述糖皮质激素受体拮抗剂通过以下被施用：静脉内、皮内、动脉内、腹膜内、损伤内、颅内、关节内、前列腺内、胸腔内、气管内、鼻内、鞘内、玻璃体内、阴道内、直肠内、瘤内、肌内、腹膜内、眼内、皮下、结膜下、膀胱内、粘膜、心包内、脐内、眼内、口服、体表、局部、通过吸入、通过注射、通过输注、通过连续输注、通过局部灌注、通过在手术期间直接应用、经由导管、经由灌洗、或通过导管插入、浸没、吸收、或吸附、或通过用拮抗剂浸透的绷带、纱布或缝合线的体表应用。
50.一种用于改善伤口愈合并预防过多瘢痕的药物组合物，所述药物组合物包含：
-选自由以下组成的组的治疗有效量的糖皮质激素受体拮抗剂：ORG34517、11-(取代的苯基)-雌-4,9-二烯衍生物、和式I的11-(取代的苯基)-雌-4,9-二烯衍生物
其中A为包含不相互连接并独立地选自O和S的2个杂原子的五元环或六元环的残基，所述环任选地被一个或更多个卤素原子取代，或A为其中不存在C-C双键的五元环或六元环的残基，包含选自O和S的1个杂原子，该杂原子在用星号表示的位置上与苯基相连，所述环任选地被一个或更多个卤素原子取代；R1是H或1-氧代(1-4C)烷基；R2是H、(1-8C)烷基、卤素或CF3；X选自(H,OH)、O和NOH；且中断线表示任选的键；和
-药学上可接受的介质或载体。
治疗组合物和方法
[0001] 相关申请的交叉参考
[0004] 发明背景
[0005] 1.发明领域
[0006] 本发明涉及皮质醇阻断剂(糖皮质激素受体[GB]拮抗剂)作为治疗剂以及与诊断剂一起用于预防或治疗成瘾诱导的焦虑和戒断副作用的用途。此类成瘾可以是，但不限于，酒精、药物、咖啡因、糖、食物、烟碱等。本发明还涉及皮质醇阻断剂(GR拮抗剂)用于伤口愈合和移植、预防或治疗无论是压力诱导的还是与老年人的失调的皮质醇或升高的皮质醇有关的骨质疏松症，和骨相关的损伤的快速愈合，以及干细胞相关的再生疗法的用途。
[0007] 2.相关领域的描述
[0008] ORG 34517是一类设计为阻断糖皮质激素受体(GR)的治疗剂之一，充当用于内源皮质醇的拮抗剂。它的主要开发途径已经作为以常伴有比正常循环水平更高的内源皮质醇的在下丘脑-垂体-肾上腺轴中的失调的信号传导为特征的神经精神疾病的治疗。特别值得注意的是已经完成了用于治疗精神病性抑郁的2期临床试验。在调查研究中的此疾病种类中的其他可能用途包括：创伤后精神紧张症(post-traumatic stress disorder)、在需要长期抗精神病药物的患者中的体重增加、老年人的医院谵妄等。
[0009] 本发明提供了低成本快速响应诊断系统以确定患者中唾液皮质醇水平，所述患者被选择作为利用诸如ORG 34517的GCR拮抗剂的GCR(糖皮质激素受体)拮抗剂治疗的可能候选人。(参见美国专利申请公开号20120201747(Altschul等)，在此以其全部内容并入本文)。
[0010] 内源糖皮质激素为主要在肾上腺皮质中生成的类固醇。糖皮质激素是用于中间代谢、免疫、肌肉骨骼、结缔组织和脑功能的重要类固醇。在身体中主要的糖皮质激素为皮质醇。皮质醇的生成和分泌由包括下丘脑、脑垂体和肾上腺(即，下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA))的复杂且高效的系统所支配。皮质醇分泌有着昼夜释放节律，具有在清晨中的峰值和在午夜中的谷值(trough value)。
[0011] 最重要的糖皮质激素皮质醇的生成和分泌由包括下丘脑、脑垂体和肾上腺(即下丘脑-垂体-肾上腺轴)的复杂且高效的系统所支配。皮质醇分泌被下丘脑的视交叉上核调节为昼夜释放节律。时间与暗-光变化的太阳日同步，这通常反映了惯常的睡眠-清醒模式。因此在健康人中，皮质醇分泌有着24小时昼夜模式，具有在清晨、睡眠开始后的3-6小时的峰血清水平、和约在午夜的最低点水平。身体和心理应激源也活化皮质醇分泌。血清皮质醇水平的改变的模式已被观察到与异常促肾上腺皮质激素(ACTH)水平、临床抑郁、心理应激和生理应激源诸如低血糖、疾病、发热、外伤、手术、恐惧、疼痛、强体力活动、或温度极限有关。对于老年人个体和在具有孤独症或艾斯伯格综合症(Asperger's syndrome)的个体中的皮质醇水平和响应性也可以与正常不同。
[0012] 糖皮质激素(GC)诸如在人类中的皮质醇执行了若干重要功能。这些包括通过信令肝制造葡萄糖和糖原、信令脂肪组织释放脂类和脂肪酸进入血流，并信令骨骼肌以释放蛋白或氨基酸进入血流来参与碳水化合物、蛋白质和脂肪代谢的调节。GC还减少骨形成。
[0013] GC还同样地调节身体的炎性反应。GC是免疫系统中抑制免疫活性(即，炎症)的反馈机制的部分。GC通过结合到GCR引起它们的效果。活化的GCR复合物转而上调在细胞核中的抗炎性蛋白的表达(被称为反式激活的过程)并通过阻止其他转录因子从胞液进入细胞核的转位(反式抑制)来抑制胞液中促炎性蛋白的表达(Rhen T和Cidlowski JA.NEJM2005；353:1711-23)。
[0014] GCR拮抗剂治疗对具有皮质醇的异常高水平(然而维持昼夜节律)、超过正常水平响应性、或作为扰乱的昼夜节律的特征的高夜间皮质醇水平的患者是有帮助的。此改变的皮质醇生理可与急性或慢性应激有关(例如与身体或心理创伤有关)或作为老年人个体中与年龄相关的变化。因此，此类剂的成功治疗用途常常取决于确定昼夜皮质醇水平(在白天例如在正午期间的峰水平，或在24小时期间中的每4小时或每6小时获取的测量结果)。唾液皮质醇定量作为用于它的配对的GCR拮抗剂的允许装置的该组合的系统将识别GCR拮抗剂疗法对其具有益处的个体。
[0015] 糖皮质激素受体(GR)在一些正常组织中以高水平被表达，而在其他组织中不是。同样地，不同类型和部位的恶性肿瘤具有可变的GR表达。当在正常组织或肿瘤(良性或恶性)组织中出现时，该GR表达可被不同地定位于其细胞亚区室(sub-compartment)的一些或全部中：1.干细胞；2.活化的干细胞的祖(所谓的“短暂扩增”)细胞的后代；和3.活化的干细胞或祖细胞的分化的后代。
[0016] 因此，本发明涉及GR拮抗剂(例如，ORG 34517-相对特异性GR拮抗剂、RU486-非特异性GR拮抗剂，以及其他)作为治疗剂用于预防或治疗成瘾诱导的焦虑和戒断副作用、用于伤口愈合和移植、用于预防或治疗无论是应激诱导的或与老年人的失调的或升高的皮质醇相关的骨质疏松症、和用于骨相关损伤的快速愈合、和干细胞再生疗法的用途。
[0017] 为了避免GR的全身性阻塞的可能负面副作用，本发明还涉及GR拮抗剂通过以下的局部治疗：直接应用到，例如骨折区域、在移植前身体外部的细胞、组织或器官或用于治疗前调节的注射；或体表应用到外伤伤口部位上。
[0018] 本文引用的所有参考文献通过引用以其全部内容被并入本文。
[0019] 发明概述
[0020] 本发明提供了用于治疗或预防成瘾、成瘾诱导的焦虑、和/或戒断症状的方法，其中所述方法包括向需要此治疗的患者以治疗有效量施用至少一种糖皮质激素受体拮抗剂。本发明提供了其中至少一种糖皮质激素受体拮抗剂是在药物制品中的方法。本发明提供了其中糖皮质激素受体拮抗剂选自由以下组成的组的方法：ORG 34517、11-(取代的苯基)-雌-4,9-二烯衍生物、和式I的11-(取代的苯基)-雌-4,9-二烯衍生物
[0021]
[0022] 其中A为包含不相互连接并独立地选自O和S的2个杂原子的五元环或六元环的残基，该环任选地被一个或更多个卤素原子取代，或A为其中不存在C-C双键的五元环或六元环的残基，包含选自O和S的1个杂原子，该杂原子在用星号表示的位置上与苯基相连，该环任选地被一个或更多个卤素原子取代；R1是H或1-氧代(1-4C)烷基；R2是H、(1-8C)烷基、卤素或CF3；X选自(H,OH)、O和NOH；且中断线表示任选的键。
[0023] 本发明提供了在需要其的患者中治疗或预防成瘾、成瘾诱导的焦虑、和/或戒断症状的方法，包括：施用包含以下的组合物：i)第一治疗剂，其为GCR拮抗剂，或其药学上可接受的盐；ii)选自由抗焦虑药、抗抑郁药、精神安定药、或其他精神病药物和其组合组成的组的至少一种或可能更多种另外的治疗剂；和iii)至少一种药学上可接受的载体，其中所述第一治疗剂和第二治疗剂各自以组合用于治疗或预防成瘾、成瘾诱导的焦虑、和/或戒断症状的治疗有效量的量存在。
[0024] 本发明提供了其中第二治疗剂选自由至少一种抗焦虑药物、至少一种抗抑郁药物和至少一种精神安定药物以及其组合组成的组的方法，其中所述至少一种抗焦虑药物选自由阿普唑仑、溴西泮、地西泮(diazepam)、劳拉西泮、氯硝西泮、替马西泮、奥沙西泮、氟硝西泮、三唑仑、氯氮卓、氟西泮、艾司唑仑、硝西泮、和其药学上可接受的盐、异构体、以及混合物组成的组；且/或至少一种抗抑郁药物选自由西酞普兰、草酸依他普兰、氟西汀、氟伏沙明、帕罗西汀、舍曲林、达泊西汀；文拉法辛与度洛西汀；哈马灵、异丙烟肼、异卡波肼、烟肼酰胺、帕吉林、苯乙肼、司来吉兰、托洛沙酮(toloxatone)、反苯环丙胺、溴法罗明(brofaromine)、吗氯贝胺；阿米替林、阿莫沙平、布替林(butriptyline)、氯丙咪嗪、地昔帕明、二苯西平(dibenzepin)、度硫平(dothiepin)、多虑平、丙咪嗪、伊普吲哚(iprindole)、洛非帕明、美利曲辛、去甲替林、奥匹哌醇(opipramol)、普罗替林、曲米帕明；马普替林、米安色林、奈法唑酮、曲唑酮、及其药学上可接受的盐、异构体、以及组合物组成的组，且/或至少一种精神安定药物选自由氟哌啶醇、氟哌利多、苯哌利多(Benperidol)、三氟哌多、美哌隆、仑哌隆、阿扎哌隆、多潘立酮、利培酮、氯丙嗪、氟非那嗪、奋乃静、丙氯拉嗪、硫利达嗪、三氟拉嗪、美索达嗪、哌氰嗪、丙嗪、三氟丙嗪、左美丙嗪、异丙嗪、匹莫齐特、氰美马嗪、氯普噻吨、氯哌噻吨、氟哌噻吨、替沃噻吨、珠氯噻醇、氯氮平、奥氮平、利培酮、喹硫平、齐拉西酮、氨磺必利、阿塞那平、帕潘立酮、伊潘立酮、佐替平、舍吲哚、鲁拉西酮、阿立哌唑、和其药学上可接受的盐、异构体、以及组合组成的组。
[0025] 本发明提供了其中GCR拮抗剂选自由以下组成的组的方法；ORG34517、11-(取代的苯基)-雌-4,9-二烯衍生物、和式I的11-(取代的苯基)-雌-4,9-二烯衍生物
[0026]
[0027] 其中A为包含不相互连接并独立地选自O和S的2个杂原子的五元环或六元环的残基，该环任选地被一个或更多个卤素原子取代，或A为其中不存在C-C双键的五元环或六元环的残基，包含选自O和S的1个杂原子，该杂原子在用星号表示的位置上与苯基相连，该环任选地被一个或更多个卤素原子取代；R1是H或1-氧代(1-4C)烷基；R2是H、(1-8C)烷基、卤素或CF3；X选自(H,OH)、O和NOH；且中断线表示任选的键。
[0028] 本发明提供了用于在患者中治疗或预防成瘾、成瘾诱导的焦虑、和/或戒断症状的方法，包括以下的步骤：a)任选地在预先决定的时间使用测试样品收集单元从所述患者中获得测试样品；b)在反应单元中将所述测试样品与缓冲体系合并以形成混合物；c)测量混合物的参数以确定空白测量结果；d)在反应单元中将所述测试样品和缓冲液混合物与结合皮质醇的标记的配体合并以生成测定溶液，其中所述标记的配体被提供于标记单元中；或合并所述测试样品和缓冲液混合物并递送它到在反应单元中的包含结合皮质醇的标记的配体的载体以生成测定固定化的复合物，其中标记的配体被提供于标记单元中；e)测量所述测定溶液或复合物的参数；f)将所述测定溶液的测量结果相对于所述空白测量结果进行比较；g)基于测量结果的变化确定患者的循环皮质醇水平；h)比较被测量的皮质醇水平与预先决定的参考范围皮质醇水平，其中当皮质醇的水平相对于预先决定的参考范围提高时，则患者具有提高的皮质醇，且因此适于GCR(糖皮质激素受体)拮抗剂治疗；且i)当患者适于GCR拮抗剂治疗时，施用至少一种GCR拮抗剂，从而治疗或预防患者中成瘾、成瘾诱导的焦虑、和/或戒断症状。
[0029] 本发明提供在其中患者的测试样品选自由唾液、血液、血浆、血清、尿、其他体液、和其组合组成的组的方法。本发明提供在其中样品在选自由早晨、中午和晚上组成的组的一个时间被从患者获得的方法。本发明提供了在其中样品以超过多于一个时间被从患者获得的方法，且预先决定的时间被从由早晨、中午和晚上组成的组中选择以确定皮质醇昼夜节律的性质(包括其可能的扰乱或消除)。本发明提供了在其中样品经连续数天被从患者获得的方法。本发明提供了在其中该方法为确定患者中的皮质醇水平的昼夜节律循环，且预先决定的时间选自由每小时、每4小时、每6小时、每8小时和每12小时组成的组的方法。本发明提供了在其中预先决定的参考范围是医学上标准参考范围的方法。本发明提供了在其中预先决定的参考范围是患者的先前测量的水平的方法。本发明提供了在其中配体被用选自由放射性同位素、荧光团、荧光猝灭剂、酶、亲和标签和表位标签组成的组的部分可检测地标记的方法。本发明提供了在其中所述混合物和所述测定溶液的所述参数的所述测量使用选自光谱法、光化学法、放射化学法、生化法、酶法、免疫化学法、化学标记置换法、表面等离子体共振法、荧光共振能量转移法、荧光猝灭法、侧向流法、和荧光偏振方法的方法进行的方法。
[0030] 本发明提供了在其中GCR(糖皮质激素受体)拮抗剂选自由以下组成的组的方法：ORG 34517、11-(取代的苯基)-雌-4,9-二烯衍生物、和式I的11-(取代的苯基)-雌-4,9-二烯衍生物
[0031]
[0032] 其中A为包含不相互连接并独立地选自O和S的2个杂原子的五元环或六元环的残基，该环任选地被一个或更多个卤素原子取代，或A为其中不存在C-C双键的五元环或六元环的残基，包含选自O和S的1个杂原子，该杂原子在用星号表示的位置上与苯基相连，该环任选地被一个或更多个卤素原子取代；R1是H或1-氧代(1-4C)烷基；R2是H、(1-8C)烷基、卤素或CF3；X选自(H,OH)、O和NOH；且中断线表示任选的键。
[0033] 本发明提供了用于治疗或预防成瘾、成瘾诱导的焦虑、和/或戒断症状的试剂盒，包含：(a)包含治疗有效量的至少一种糖皮质激素受体拮抗剂的药物组合物；和(b)包含(a)的药物组合物和用于使用所述药物组合物治疗或预防成瘾、成瘾诱导的焦虑、和/或戒断症状的说明书的至少一种泡罩(blister)包装；有盖的泡罩；泡罩卡或泡罩包；泡沫塑胶盒(clamshell)；静脉注射(IV)包、；IV小包装或IV容器；底盘(trap)或热缩塑料包。
[0034] 本发明提供了用于治疗或预防成瘾、成瘾诱导的焦虑、和/或戒断症状的制品，所述制品包含含有至少一种糖皮质激素受体拮抗剂的药物组合物，和用于治疗或预防成瘾、成瘾诱导的焦虑、和/或戒断症状的说明书的泡罩包装；有盖的泡罩；泡罩卡或泡罩包；泡沫塑胶盒；静脉注射(IV)包、IV小包装或IV容器；底盘或热缩塑料包。
[0035] 本发明提供了用于治疗骨折和/或骨相关的损伤的方法，其中所述方法包括向需要此治疗的患者施用治疗有效量的至少一种糖皮质激素受体拮抗剂。本发明提供了其中至少一种糖皮质激素受体拮抗剂是在药物制品中的方法。本发明提供了其中GCR(糖皮质激素受体)拮抗剂选自由以下组成的组的方法：ORG 34517、11-(取代的苯基)-雌-4,9-二烯衍生物、和式I的11-(取代的苯基)-雌-4,9-二烯衍生物
[0036]
[0037] 其中，A为包含不相互连接并独立地选自O和S的2个杂原子的五元环或六元环的残基，该环任选地被一个或更多个卤素原子取代，或A为其中不存在C-C双键的五元环或六元环的残基，包含选自O和S的1个杂原子，该杂原子在用星号表示的位置上与苯基相连，该环任选地被一个或更多个卤素原子取代；R1是H或1-氧代(1-4C)烷基；R2是H、(1-8C)烷基、卤素或CF3；X选自(H,OH)、O和NOH；且中断线表示任选的键。本发明提供其中GCR拮抗剂通过以下被施用的方法：静脉内、皮内、动脉内、腹膜内、损伤内、颅内、关节内、前列腺内、胸腔内、气管内、鼻内、鞘内、玻璃体内、阴道内、直肠内、瘤内、肌内、腹膜内、眼内、皮下、结膜下、膀胱内、粘膜、心包内、脐内、眼内、口服、体表(topically)、局部(locally)、通过吸入、通过注射、通过输注、通过连续输注、通过局部灌注、通过在手术过程中直接应用、经由导管、经由灌洗、或通过导管插入、浸没、吸收、或吸附。本发明提供了其中该方法包括向骨折周围的组织施用所述药物组合物的方法。本发明提供了其中所述药物组合物的施用包含向骨折周围的组织中注射所述药物组合物的方法。本发明提供其中糖皮质激素受体拮抗剂选自由以下组成的组的方法：ORG 34517、11-(取代的苯基)-雌-4,9-二烯衍生物、和式I的11-(取代的苯基)-雌-4,9-二烯衍生物
[0038]
[0039] 其中，A为包含不相互连接并独立地选自O和S的2个杂原子的五元环或六元环的残基，该环任选地被一个或更多个卤素原子取代，或A为其中不存在C-C双键的五元环或六元环的残基，包含选自O和S的1个杂原子，该杂原子在用星号表示的位置上与苯基相连，该环任选地被一个或更多个卤素原子取代；R1是H或1-氧代(1-4C)烷基；R2是H、(1-8C)烷基、卤素或CF3；X选自(H,OH)、O和NOH；且中断线表示任选的键。
[0040] 本发明提供了用于治疗骨折和/或骨相关损伤的试剂盒，所述试剂盒包含：(a)包含治疗有效量的至少一种糖皮质激素受体拮抗剂的药物组合物；和(b)包含(a)的药物组合物和使用所述药物组合物用于治疗骨折和/或骨相关损伤的说明书的至少一种泡罩包装；有盖的泡罩；泡罩卡或泡罩包；泡沫塑胶盒；静脉注射(IV)包、IV小包装或IV容器；底盘或热缩塑料包。
[0041] 本发明提供了用于治疗骨折和/或骨相关损伤的制品，所述制品包含：包含含有至少一种糖皮质激素受体拮抗剂的药物组合物，和用于治疗骨折和/或骨相关损伤的说明书的泡罩包装；有盖的泡罩；泡罩卡或泡罩包；泡沫塑胶盒；静脉注射(IV)包、IV小包装或IV容器；底盘或热缩塑料包。
[0042] 本发明提供了用于治疗或预防无论是应激诱导的还是与老年人的失调的皮质醇或升高的皮质醇有关的骨质疏松症的方法，其中所述方法包括向需要此治疗的患者施用治疗有效量的至少一种糖皮质激素受体拮抗剂。本发明提供了其中所述至少一种糖皮质激素受体拮抗剂是在药物制品中的方法。
[0043] 本发明根据了其中糖皮质激素受体拮抗剂选自由以下组成的组的方法：ORG34517、11-(取代的苯基)-雌-4,9-二烯衍生物、和式I的11-(取代的苯基)-雌-4,9-二烯衍生物
[0044]
[0045] 其中，A为包含不相互连接并独立地选自O和S的2个杂原子的五元环或六元环的残基，该环任选地被一个或更多个卤素原子取代，或A为其中不存在C-C双键的五元环或六元环的残基，包含选自O和S的1个杂原子，该杂原子在用星号表示的位置上与苯基相连，该环任选地被一个或更多个卤素原子取代；R1是H或1-氧代(1-4C)烷基；R2是H、(1-8C)烷基、卤素或CF3；X选自(H,OH)、O和NOH；且中断线表示任选的键。本发明提供了其中GCR拮抗剂通过以下被施用的方法：静脉内、皮内、动脉内、腹膜内、损伤内、颅内、关节内、鼻内、直肠内、肌肉内、皮下、口服、体表、局部、通过吸入、通过注射、通过输注、通过连续输注、通过局部灌注、通过在手术期间直接应用、经由导管、经由灌洗、或通过导管插入、浸没、吸收、或吸附。
[0046] 本发明提供了用于治疗或预防无论是应激诱导的或与老年人的失调的皮质醇或升高的皮质醇有关的骨质疏松症的试剂盒，所述试剂盒包含：(a)包含治疗有效量的至少一种糖皮质激素受体拮抗剂的药物组合物；和(b)包含(a)的药物组合物和使用所述药物组合物用于治疗或预防应激诱导的骨质疏松症的说明书的至少一种泡罩包装；有盖的泡罩；泡罩卡或泡罩包；泡沫塑胶盒；静脉注射(IV)包、；IV小包装或IV容器；底盘或热缩塑料包。
[0047] 本发明提供了用于治疗或预防无论是应激诱导的或与老年人的失调的皮质醇或升高的皮质醇有关的骨质疏松症的制品，所述制品包含：包含含有至少一种糖皮质激素受体拮抗剂的药物组合物，和用于治疗或预防无论是应激诱导的或与老年人的失调的皮质醇或升高的皮质醇有关的骨质疏松症的说明书的泡罩包装；有盖的泡罩；泡罩卡或泡罩包；泡沫塑胶盒；静脉注射(IV)包、IV小包装或IV容器；底盘或热缩塑料包。
[0048] 本发明提供了用于在需要此治疗的患者中增强干细胞的移植后功能的方法，所述方法包括以下步骤：提供干细胞，无论是胚胎干细胞、源自胚胎干细胞的干细胞或其分化的后代；诱导的多能干细胞或其后代；胎儿干细胞或其分化的后代；和出生后(成体)干细胞或其分化的后代；或源自任何这些的组织的干细胞，用至少一种GCR拮抗剂处理干细胞或源自干细胞的分化的后代用于移植的准备；且将处理的干细胞引入患者中。
[0049] 本发明提供了其中糖皮质激素受体拮抗剂选自由以下组成的组的方法：ORG34517、11-(取代的苯基)-雌-4,9-二烯衍生物、和式I的11-(取代的苯基)-雌-4,9-二烯衍生物
[0050]
[0051] 其中A为包含不相互连接并独立地选自O和S的2个杂原子的五元环或六元环的残基，该环任选地被一个或更多个卤素原子取代，或A为其中不存在C-C双键的五元环或六元环的残基，包含选自O和S的1个杂原子，该杂原子在用星号表示的位置上与苯基相连，该环任选地被一个或更多个卤素原子取代；R1是H或1-氧代(1-4C)烷基；R2是H、(1-8C)烷基、卤素或CF3；X选自(H,OH)、O和NOH；且中断线表示任选的键。本发明提供了其中处理的干细胞通过以下被施用的方法：静脉内、皮内、动脉内、腹膜内、损伤内、颅内、关节内、前列腺内、胸腔内、气管内、鼻内、鞘内、玻璃体内、阴道内、直肠内、瘤内、肌内、腹膜内、眼内、皮下、结膜下、膀胱内、粘膜、心包内、脐内、眼内、口服、体表、局部、通过吸入、通过注射、通过输注、通过连续输注、通过局部灌注、通过在手术期间直接应用、经由导管、经由灌洗、或通过导管插入、浸没、吸收、或吸附。
[0052] 本发明提供了用于在哺乳动物中增强干细胞的移植后功能的药物组合物，所述药物组合物包含：治疗有效量的处理的干细胞，无论是胚胎干细胞、源自胚胎干细胞的干细胞或其分化的后代；诱导的多能干细胞或其后代；胎儿干细胞或其分化的后代；和出生后(成体)干细胞或其分化的后代；或源自任何这些的组织的治疗有效量的处理的干细胞；和药学上可接受的介质或载体。
[0053] 本发明提供了用于减少移植器官的移植后排斥和/或改善移植物功能和存活的方法，所述方法包括以下步骤：提供待移植的器官；在移植之前用GCR拮抗剂处理器官；并向需要此治疗的患者移植器官。本发明提供了其中糖皮质激素受体拮抗剂选自由以下组成的组的方法ORG 34517、11-(取代的苯基)-雌-4,9-二烯衍生物、和式I的11-(取代的苯基)-雌-4,9-二烯衍生物
[0054]
[0055] 其中，A为包含不相互连接并独立地选自O和S的2个杂原子的五元环或六元环的残基，该环任选地被一个或更多个卤素原子取代，或A为其中不存在C-C双键的五元环或六元环的残基，包含选自O和S的1个杂原子，该杂原子在用星号表示的位置上与苯基相连，该环任选地被一个或更多个卤素原子取代；R1是H或1-氧代(1-4C)烷基；R2是H、(1-8C)烷基、卤素或CF3；X选自(H,OH)、O和NOH；且中断线表示任选的键。本发明提供了用于减少移植后排斥和/或改善移植物功能和存活的方法，所述方法包括用GCR拮抗剂治疗需要此治疗的患者。本发明提供了其中糖皮质激素受体拮抗剂选自由以下组成的组的方法：ORG34517、11-(取代的苯基)-雌-4,9-二烯衍生物、和式I的11-(取代的苯基)-雌-4,9-二烯衍生物
[0056]
[0057] 其中，A为包含不相互连接并独立地选自O和S的2个杂原子的五元环或六元环的残基，该环任选地被一个或更多个卤素原子取代，或A为其中不存在C-C双键的五元环或六元环的残基，包含选自O和S的1个杂原子，该杂原子在用星号表示的位置上与苯基相连，该环任选地被一个或更多个卤素原子取代；R1是H或1-氧代(1-4C)烷基；R2是H、(1-8C)烷基、卤素或CF3；X选自(H,OH)、O和NOH；且中断线表示任选的键。本发明提供了其中GCR拮抗剂在移植之前被血管内、动脉内、静脉内施用到器官移植物或被施用到组织中或浸没器官的全部或部分的方法。
[0058] 本发明提供了用于减少移植后排斥和/或改善移植物功能和存活的试剂盒，所述试剂盒包含：(a)包含治疗有效量的至少一种糖皮质激素受体拮抗剂的药物组合物；和(b)器官保存液。
[0059] 本发明提供了用于减少移植后排斥和/或改善移植物功能和存活的试剂盒，所述试剂盒包含：(a)包含治疗有效量的至少一种糖皮质激素受体拮抗剂的药物组合物；和(b)包含(a)的药物组合物和使用所述药物组合物用于减少移植后排斥的说明书的至少一种泡罩包装；有盖的泡罩；泡罩卡或泡罩包；泡沫塑胶盒；静脉注射(IV)包、IV小包装或IV容器；底盘或热缩塑料包。
[0060] 本发明提供了用于减少移植后排斥的制品，所述制品包含：包含含有至少一种糖皮质激素受体拮抗剂的药物组合物，和用于减少移植后排斥和/或改善移植后移植物功能和存活的说明书的泡罩包装；有盖的泡罩；泡罩卡或泡罩包；泡沫塑胶盒；静脉注射(IV)包、IV小包装或IV容器；底盘或热缩塑料包。
[0061] 本发明提供了用于在需要其的患者中改善伤口愈合并预防过多瘢痕形成的方法，所述方法包括向哺乳动物施用治疗有效量的糖皮质激素受体拮抗剂。本发明提供了其中糖皮质激素受体拮抗剂选自由以下组成的组的方法：ORG 34517、11-(取代的苯基)-雌-4,9-二烯衍生物、和式I的11-(取代的苯基)-雌-4,9-二烯衍生物
[0062]
[0063] 其中，A为包含不相互连接并独立地选自O和S的2个杂原子的五元环或六元环的残基，该环任选地被一个或更多个卤素原子取代，或A为其中不存在C-C双键的五元环或六元环的残基，包含选自O和S的1个杂原子，该杂原子在用星号表示的位置上与苯基相连，该环任选地被一个或更多个卤素原子取代；R1是H或1-氧代(1-4C)烷基；R2是H、(1-8C)烷基、卤素或CF3；X选自(H,OH)、O和NOH；且中断线表示任选的键。本发明提供了其中用糖皮质激素受体拮抗剂处理所述伤口的方法，其中所述糖皮质激素受体拮抗剂为通过以下被施用：静脉内、皮内、动脉内、腹膜内、损伤内、颅内、关节内、前列腺内、胸腔内、气管内、鼻内、鞘内、玻璃体内、阴道内、直肠内、瘤内、肌内、腹膜内、眼内、皮下、结膜下、膀胱内、粘膜、心包内、脐内、眼内、口服、体表、局部、通过吸入、通过注射、通过输注、通过连续输注、通过局部灌注、通过在手术期间直接应用、经由导管、经由灌洗、或通过导管插入、浸没、吸收、或吸附、或通过用拮抗剂浸透的绷带、纱布或缝合线的体表应用。
[0064] 本发明提供了用于改善伤口愈合并预防过多瘢痕形成的药物组合物，所述药物组合物包含：治疗有效量的选自由以下组成的组糖皮质激素受体拮抗剂：ORG 34517、11-(取代的苯基)-雌-4,9-二烯衍生物、和式I的11-(取代的苯基)-雌-4,9-二烯衍生物
[0065]
[0066] 其中，A为包含不相互连接并独立地选自O和S的2个杂原子的五元环或六元环的残基，该环任选地被一个或更多个卤素原子取代，或A为其中不存在C-C双键的五元环或六元环的残基，包含选自O和S的1个杂原子，该杂原子在用星号表示的位置上与苯基相连，该环任选地被一个或更多个卤素原子取代；R1是H或1-氧代(1-4C)烷基；R2是H、(1-8C)烷基、卤素或CF3；X选自(H,OH)、O和NOH；且中断线表示任选的键；和药学上可接受的介质或载体。
[0068] 本发明将联合以下附图一起被描述，其中同样的参考数字表示同样的要素且其中：
[0069] 图1显示了ORG 34517与酒精的共同施用显著减少了酒精戒断行为异常(图1A)。在连续4天中的08:00小时即将无节制(binge)酒精施用(胃内(i.g.))前每天一次施用选择性糖皮质激素受体拮抗剂ORG 34517(20mg/kg；皮下(s.c.))，显著地减少了在成年雄性大鼠中酒精戒断综合征的行为症状。全身震颤和甩水抖动(wet shake)的减少是最明显的。*＝与对照相比P<0.05；**＝与酒精戒断(酒精戒断(EtOH WD))相比P<0.001(图
1B)。4天疗程内的血液酒精峰水平为180.27-103.5mg/dl。对无酒精(ethanol-naive)大鼠施用ORG 34517没有以任何方式改变行为。此外，与在仅接受酒精和ORG 34517媒介物的动物中得到的中毒评级(intoxication ratings)相比，经过4天每天3次酒精施用的每一次施用之后的8小时确定的平均中毒评级没有被ORG 34517施用所改变。
1B)。4天疗程内的血液酒精峰水平为180.27-103.5mg/dl。对无酒精(ethanol-naive)大鼠施用ORG 34517没有以任何方式改变行为。此外，与在仅接受酒精和ORG 34517媒介物的动物中得到的中毒评级(intoxication ratings)相比，经过4天每天3次酒精施用的每一次施用之后的8小时确定的平均中毒评级没有被ORG 34517施用所改变。
[0070] 图2显示了皮质酮对酒精戒断毒性的加重被ORG 34517共施用所阻断(图2A)。器官型海马脑片培养物暴露到皮质酮(1μΜ)与酒精(50mM)，随后为在皮质酮存在下的1天酒精戒断，在CA1区域椎体细胞中产生了显著毒性(20x)(摄取了非致命的核标志物碘化丙啶、伪色红，以下显示的)。单独暴露于皮质酮或ORG 34517HCl(100μΜ)没有改变碘化丙摄取取。共暴露于选择性糖皮质激素受体拮抗剂ORG 34517与酒精和皮质酮阻止了该戒断毒性。上面为代表性PI图，(图2B)。结果以图表形式显示。*＝与对照相比P<0.05；**＝与酒精戒断+皮质酮相比P<0.05。
[0071] 发明详述
[0072] 本发明涉及GR拮抗剂(例如ORG 34517、RU486及其它)作为治疗剂用于预防或治疗成瘾诱导的焦虑和戒断副作用、用于伤口愈合和移植、用于预防或治疗应激诱导的骨质疏松症和用于骨相关的损伤的快速愈合、以及再生疗法的用途。
[0073] 当一个量在受试者中提供了效果，则该量为如本文所用的“有效的”。如本文所用的，术语“有效量”意指化合物或组合物的量足以显著地诱导积极益处，包括独立的本文公开的益处或与本文公开的益处组合，然而足够地低以避免严重副作用，即，在技术人员的正确判断的范围内提供了合理的益处风险比。对于那些本领域技术人员而言，基于本公开内容，根据他们的知识和仅为常规实验的标准方法学可容易地确定施用的有效量、以及剂量和频率。
[0074] 如本文使用的，术语“受试者”和“患者”可互换使用。如本文使用的，术语“患者”是指动物，优选哺乳动物诸如非灵长类(例如奶牛、猪、马、猫、狗、大鼠等)和灵长类(例如猴和人)，且最优选人。在一些实施方案中，受试者是非人动物诸如农场动物(例如马、猪或奶牛)或宠物(例如狗或猫)。在具体实施方案中，受试者是年长的人类。在另一个实施方案中，受试者是成年的人类。在另一个实施方案中，受试者是人类的儿童。在又另一个实施方案中，受试者是人类的婴儿。
[0075] 如本文使用的，术语“药学上可接受的”意指被联邦政府或州政府的管理机构所批准的，或在美国药典、欧洲药典或其他通常所公认的药典中被列出用于在动物中、更特别地在人类中的使用。
[0076] 如本文使用的，在向受试者施用疗法或疗法的组合(例如预防剂或治疗剂的组合)的上下文中的术语“预防(prevent)、预防(preventing)和预防(prevention)”是指预防或抑制疾病或状况的复发、发作和/或发展。
[0077] 如本文使用的，术语“疗法(therapies)”和“疗法(therapy)”可指可被用于预防、治疗和/或管理疾病或状况，或其一种或更多种症状的任何方法、组合物和/或剂。
[0078] 如本文使用的，在向受试者施用疗法的上下文中的术语“治疗(treat)”、“治疗(treatment)”、“治疗(treating)”是指减少或抑制疾病或状况的进展和/或持续时间、减少或改善疾病或状况的严重性、和/或改善由施用一种或更多种疗法引起的其一种或更多种症状。
[0079] 糖皮质激素受体
[0080] 糖皮质激素受体在许多培养的细胞系中是广泛分布和表达的，且因此，通过糖皮质激素的基因表达的控制已经作为用于转录调控的模型被广泛地研究。已经鉴定了大量的糖皮质激素受体反应性转录单元，包括小鼠乳腺肿瘤病毒(MMTV)基因(Ringold等,1975；Parks等,1974)、小鼠和人金属硫蛋白基因(Eager,等；Karin等,1980)、大鼠的α2M-球蛋白(Kurtz等,1977)及大鼠生长激素基因和人生长激素基因(Spindler等,1982；Evans等,1982；Robins等,1982)。介导若干这些基因的转录刺激的DNA序列已被定位。对于MMTV，这些序列为表现为在转录起始位点上游的不连续基因组区域，它们独立于方向和位置而发挥其作用(Chandler等,1983；Ostrowski等,1984)。类固醇/受体复合物表现为结合到这些调节序列且纯化的受体已被用于定义特异性结合位点(Govinda等,1982；
Scheidereit等,1983；Pfahl等,1982；Payvar等,1983)。糖皮质激素反应性元件(GRE)改变其位置和方向又还保持启动子的可诱导性的能力，表示它类似于被称为增强子的顺式作用(cis-acting)调控序列的类(Chandler等,1983)。首次发现于病毒中并随后发现于在细胞基因中的这些序列对于体内有效转录是必需的(Laimonis等,1982；Benoist等,1981；
Baerji等,1983)。已经表明增强子通过组织特异性转录控制被介导调控作用的反式作用(trans-acting)因子所识别。尽管增强因子还没有被充分表征，糖皮质激素受体可充当用于这些推定基因激活子蛋白的范例。
Scheidereit等,1983；Pfahl等,1982；Payvar等,1983)。糖皮质激素反应性元件(GRE)改变其位置和方向又还保持启动子的可诱导性的能力，表示它类似于被称为增强子的顺式作用(cis-acting)调控序列的类(Chandler等,1983)。首次发现于病毒中并随后发现于在细胞基因中的这些序列对于体内有效转录是必需的(Laimonis等,1982；Benoist等,1981；
Baerji等,1983)。已经表明增强子通过组织特异性转录控制被介导调控作用的反式作用(trans-acting)因子所识别。尽管增强因子还没有被充分表征，糖皮质激素受体可充当用于这些推定基因激活子蛋白的范例。
[0081] 普遍认为，无配体糖皮质激素受体(GR)位于细胞质，并且激素的活化导致核聚集和基因活化两者。(Steroid Hormone Receptors:Their Intracellular Localisation,编 .Clark,C.R.(Ellis Horwood Ltd,Chichester,England) 中 的 Gasc,J.-M. 和Baulieu,E.E.(1987), 第 233 页 - 第 250 页 中；Beato,M.(1989)Cell 56,335-344；Carson-Jurica,M.A.,Schrader,W.T. 和 O'Malley,B.W.(1990)Endocr.Rev.11,201-220；
Steroid Hormone Action, 编 .Parker,M.G.(Oxford University Press,New York) 中的Gronemeyer,H.(1993),第 94页 -第117 页 中；Tsai,M.J.和 O'Malley,B.W.(1994)Annu.Rev.Biochem.63,451-486；Akner,G.,Wikstrom,A.C. 和 Gustafsson,J.A.(1995)J.Steroid Biochem.Mol.Biol.52,1-16)，和在其中的参考文献。然而，涉及核转位和类固醇受体靶向核染色质中的调控位点的机制一直理解较少。以前一直难以区分给定受体突变体、或给定的受体/配体组合参与受体活化、核转运、序列特异性结合和启动子活化的单独过程的能力。
Steroid Hormone Action, 编 .Parker,M.G.(Oxford University Press,New York) 中的Gronemeyer,H.(1993),第 94页 -第117 页 中；Tsai,M.J.和 O'Malley,B.W.(1994)Annu.Rev.Biochem.63,451-486；Akner,G.,Wikstrom,A.C. 和 Gustafsson,J.A.(1995)J.Steroid Biochem.Mol.Biol.52,1-16)，和在其中的参考文献。然而，涉及核转位和类固醇受体靶向核染色质中的调控位点的机制一直理解较少。以前一直难以区分给定受体突变体、或给定的受体/配体组合参与受体活化、核转运、序列特异性结合和启动子活化的单独过程的能力。
[0082] 糖皮质激素受体(GR)被表达于ERα阳性和ERα阴性乳腺癌两者以及其他恶性肿瘤诸如一些卵巢癌、肝细胞癌、食管鳞状细胞癌的子集中。体外(in vitro)和体内(in vivo)实验表明在ER阴性恶性肿瘤前乳腺上皮细胞和癌症细胞中GR的活化在通常诱导显著性细胞死亡的应激条件(例如化疗、辐射、生长因子剥夺)下起始了细胞存活途径。
[0083] 糖皮质激素受体(GR)出现于糖皮质激素反应性细胞中，在其中它以非活性状态存在于胞液中直至它被激动剂所刺激。刺激之后，糖皮质激素受体转运到细胞核，在其中它与DNA和/或蛋白特异性相互作用并以糖皮质激素反应性方式调节转录。与糖皮质激素受体相互作用的蛋白的两个实例是转录因子API和NFκ-B。此类相互作用导致了API介导的转录和NFκ-B介导的转录的抑制并被认为是造成内源施用的糖皮质激素的一些抗炎性活性的原因。此外，糖皮质激素还可独立于核转录发挥生理作用。生物学上相关的糖皮质激素受体激动剂包括皮质醇和皮质酮。存在许多合成的糖皮质激素受体激动剂，包括地塞米松、强的松和氢化泼尼松。
[0084] 糖皮质激素受体拮抗剂
[0085] 糖皮质激素受体拮抗剂结合到受体，并防止糖皮质激素受体激动剂结合并诱发GR介导的事件，包括转录。RU486是非选择性糖皮质激素受体拮抗剂的实例。
[0086] 具有高糖皮质激素受体结合亲和性并加上高体内抗糖皮质激素活性、同时具有例如低雄激素与孕激素活性的化合物被公开于美国专利号6,011,025，在此通过引用以其全部内容被并入。ORG 34517是具有高糖皮质激素受体结合亲和性同时具有低雄激素与孕激素活性的化合物的实例。
[0087] 已经发现式I的11-(取代的苯基)-雌-4,9-二烯衍生物显示了特异性的和高的糖皮质激素受体结合亲和性并为在体内高度活性的，显示了主要抗糖皮质激素活性[0088]
[0089] 其中，
[0090] A为包含不相互连接并独立地选自O和S的2个杂原子的五元环或六元环的残基，该环任选地被一个或更多个卤素原子取代，或A为其中不存在C-C双键的五元环或六元环的残基，包含选自O和S的1个杂原子，该杂原子在用星号表示的位置上与苯基相连，该环任选地被一个或更多个卤素原子取代；R1是H或1-氧代(1-4C)烷基；R2是H、(1-8C)烷基、卤素或CF3；X选自(H,OH)、O和NOH；且中断线表示任选的键。
[0091] 该化合物缺少对于盐皮质激素、孕酮、雌激素和雄激素受体的可评估的亲和性，这表明了干净的副作用谱。
[0092] 本发明的11-(取代的苯基)-雌-4,9-二烯衍生物可被用于预防和治疗糖皮质激素依赖性疾病或症状，如库欣综合征(Cushing syndrome)、糖尿病、青光眼、睡眠障碍、抑郁症、焦虑症、动脉粥样硬化、高血压、肥胖症、骨质疏松症和由于麻醉剂及其混合物的戒断症状。
[0093] 根据该发明的优选的化合物为其中杂原子为O，五元环或六元环任选地被一个或更多个氟原子取代；R1是H；且X是O或NOH的11-(取代的苯基)-雌-4,9-二烯衍生物。更优选的化合物是其中A是五元环的残基的11-(取代的苯基)-雌-4,9-二烯衍生物。特别优选其中A包含2个为O的杂原子的11-(取代的苯基)-雌-4,9-二烯衍生物。
[0094] 特别优选其中R2为甲基且中断线表示键的11-(取代的苯基)-雌-4,9-二烯衍生物。
[0095] 最 优 选 的 化 合 物 为(11β,17β)-11-(1,3- 苯 并 间 二 氧 杂 环 戊 烯(benzodioxol)-5-基)-17-羟基-17-(1-丙炔基)雌-4,9-二烯-3-酮(ORG 34517)。
[0096]
[0097] 术语卤素意指氟原子、氯原子、溴原子或碘原子。氟是环A中优选的卤素且当R2是卤素时，优选氯。
[0098] 如R1和R2的定义中所用的术语(1-4C)烷基和(1-8C)烷基分别意指分别具有1个-4个和1个-8个碳原子的烷基基团，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、新戊基、己基、辛基。
[0099] 根据本发明的11-(取代的苯基)-雌-4,9-二烯衍生物可通过如下的过程制备：其中式II的化合物被脱氢和被脱保护，在此之后17β-OH任选地通过与适当羧酸的反应被酯化以给出其中R1为1-氧代(1-4C)烷基的衍生物，且任选地3-氧代基被转化为相应的
3-羟基-或3肟衍生物，
3-羟基-或3肟衍生物，
[0100]
[0101] 其中A、R2和中断线具有如前所定义的含义，R1是H，且P是被保护的酮基。通过使用适合的还原剂诸如硼氢化钠，3-氧代基可被还原形成3-羟基衍生物。3-肟衍生物可通过在适合的溶剂如吡啶中通过羟胺处理制备。
[0102] 式II的衍生物可根据用于制备类固醇所描述的和所使用的公知的方法来被制备。
[0103] 用于制备式II的衍生物的合适过程从雌-4,9-二烯-3,17-二酮开始。例如用硼氢化钠选择性还原17-酮基为17β-OH、17α-H，随后例如通过用乙二醇、原甲酸三乙酯和对甲苯磺酸的缩酮化保护3-酮基，并例如用氯铬酸吡啶氧化17-羟基，提供了3-酮基保护的雌-5(10),9(11)-二烯-3,17-二酮。在17位炔基化(得到17α-炔基、17β-OH衍生物)，随后，例如根据如欧洲专利申请EP 0298020所公开的方法用在二氯甲烷中的过氧化氢、三氟乙酰苯与吡啶环氧化5(10)双键，提供了3-酮基保护的5α,10α-环氧-17α-炔基-17β-羟基-雌-9(11)-烯-3-酮。
[0104] 随后，式II的化合物从此环氧化物衍生物形成，例如通过与以下式的有机金属化合物反应：
[0105]
[0106] 其中X是(碱)金属，如锂；或卤化镁，优选溴化镁。
[0107] 合适的保护性基团和去除这些基团的方法在本领域中是已知的，例如从T.W.Green:Protective Groups in Organic Synthesis(Wiley,NY,1981)。用于酮基保护的特别适合的保护性基团为缩醛，例如1,2-乙烯缩酮。
[0108] ORG 34517对于阻断GR的特异性，而没有对其他相关的类固醇激素受体(诸如用于雌激素和孕酮的那些)的显著地交叉结合，消除了显著毒性和副作用的可能性。事实上，没有毒性或副作用被发现于已用该化合物进行的所有的大量I期和II期临床试验中。由于药物被预期为以随着时间有限给药而使用，与典型用于化学治疗剂的间歇给药策略配合，GR阻断也不会导致HPA轴功能的显著改变，给药后HPA轴快速恢复到基线。
[0109] 组合疗法
[0110] 本发明提供用于治疗受试者中GC-反应性状况的组合物和方法，包括例如，作为治疗剂预防或治疗成瘾诱导的焦虑和戒断副作用、用于伤口愈合和移植、用于预防或治疗应激诱导的骨质疏松症和用于骨相关损伤的快速愈合、和再生疗法的组合物和方法。
[0111] 根据本发明的实施方案提供在受试者中治疗GC-反应性状况的方法，其包括以治疗有效量联合施用GR拮抗剂和至少一种选自以下组成的组的另外治疗剂：至少一种抗焦虑药物、至少一种抗抑郁药物和至少一种精神安定药物以及其组合物，其中所述至少一种抗焦虑药物选自由阿普唑仑、溴西泮、地西泮、劳拉西泮、氯硝西泮、替马西泮、奥沙西泮、氟硝西泮、三唑仑、氯氮卓、氟西泮、艾司唑仑、硝西泮、和其药学上可接受的盐、异构体、以及混合物组成的组；且或至少一种抗抑郁药物选自由西酞普兰、草酸依他普兰、氟西汀、氟伏沙明、帕罗西汀、舍曲林、达泊西汀；文拉法辛与度洛西汀；哈马灵、异丙烟肼、异卡波肼、烟肼酰胺、帕吉林、苯乙肼、司来吉兰、托洛沙酮、反苯环丙胺、溴法罗明、吗氯贝胺；阿米替林、阿莫沙平、布替林、氯丙咪嗪、地昔帕明、二苯西平、度硫平、多虑平、丙咪嗪、伊普吲哚、洛非帕明、美利曲辛、去甲替林、奥匹哌醇、普罗替林、曲米帕明；马普替林、米安色林、奈法唑酮、曲唑酮、及其药学上可接受的盐、异构体、以及组合组成的组，且/或至少一种精神安定药物选自由氟哌啶醇、氟哌利多、苯哌利多、三氟哌多、美哌隆、仑哌隆、阿扎哌隆、多潘立酮、利培酮、氯丙嗪、氟非那嗪、奋乃静、丙氯拉嗪、硫利达嗪、三氟拉嗪、美索达嗪、哌氰嗪、丙嗪、三氟丙嗪、左美丙嗪、异丙嗪、匹莫齐特、氰美马嗪、氯普噻吨、氯哌噻吨、氟哌噻吨、替沃噻吨、珠氯噻醇、氯氮平、奥氮平、利培酮、喹硫平、齐拉西酮、氨磺必利、阿塞那平、帕潘立酮、伊潘立酮、佐替平、舍吲哚、鲁拉西酮、阿立哌唑、和其药学上可接受的盐、异构体、以及组合组成的组。在某些实施方案中，剂在同一剂型中被施用。在某些实施方案中，治疗剂单独地被施用。
[0112] 在特定实施方案中，本发明提供了组合物，所述组合物为治疗有效量的GR拮抗剂和选自由至少一种抗焦虑药物、至少一种抗抑郁药物和至少一种精神安定药物和其组合所组成的组的至少一种另外治疗剂，其中所述至少一种抗焦虑药物选自由阿普唑仑、溴西泮、地西泮、劳拉西泮、氯硝西泮、替马西泮、奥沙西泮、氟硝西泮、三唑仑、氯氮卓、氟西泮、艾司唑仑、硝西泮、和其药学上可接受的盐、异构体、以及混合物组成的组；且/或至少一种抗抑郁药物选自由西酞普兰、草酸依他普兰、氟西汀、氟伏沙明、帕罗西汀、舍曲林、达泊西汀；文拉法辛与度洛西汀；哈马灵、异丙烟肼、异卡波肼、烟肼酰胺、帕吉林、苯乙肼、司来吉兰、托洛沙酮、反苯环丙胺、溴法罗明、吗氯贝胺；阿米替林、阿莫沙平、布替林、氯丙咪嗪、地昔帕明、二苯西平、度硫平、多虑平、丙咪嗪、伊普吲哚、洛非帕明、美利曲辛、去甲替林、奥匹哌醇、普罗替林、曲米帕明；马普替林、米安色林、奈法唑酮、曲唑酮、及其药学上可接受的盐、异构体、以及组合组成的组，且/或至少一种精神安定药物选自由氟哌啶醇、氟哌利多、苯哌利多、三氟哌多、美哌隆、仑哌隆、阿扎哌隆、多潘立酮、利培酮、氯丙嗪、氟非那嗪、奋乃静、丙氯拉嗪、硫利达嗪、三氟拉嗪、美索达嗪、哌氰嗪、丙嗪、三氟丙嗪、左美丙嗪、异丙嗪、匹莫齐特、氰美马嗪、氯普噻吨、氯哌噻吨、氟哌噻吨、替沃噻吨、珠氯噻醇、氯氮平、奥氮平、利培酮、喹硫平、齐拉西酮、氨磺必利、阿塞那平、帕潘立酮、伊潘立酮、佐替平、舍吲哚、鲁拉西酮、阿立哌唑、和其药学上可接受的盐、异构体、以及组合组成的组。在某些实施方案中，剂在同一剂型中。在某些实施方案中，治疗剂在单独剂型中。
[0113] 如本文使用的短语“联合施用”指治疗有效量的一种或更多种GR拮抗剂和至少一种另外治疗剂的任何形式的施用，所述至少一种另外的治疗剂选自由至少一种抗焦虑药物、至少一种抗抑郁药物和至少一种精神安定药物和其组合所组成的组，其中所述至少一种抗焦虑药物选自由阿普唑仑、溴西泮、地西泮、劳拉西泮、氯硝西泮、替马西泮、奥沙西泮、氟硝西泮、三唑仑、氯氮卓、氟西泮、艾司唑仑、硝西泮、和其药学上可接受的盐、异构体、以及混合物组成的组；且/或至少一种抗抑郁药物选自由西酞普兰、草酸依他普兰、氟西汀、氟伏沙明、帕罗西汀、舍曲林、达泊西汀；文拉法辛与度洛西汀；哈马灵、异丙烟肼、异卡波肼、烟肼酰胺、帕吉林、苯乙肼、司来吉兰、托洛沙酮、反苯环丙胺、溴法罗明、吗氯贝胺；阿米替林、阿莫沙平、布替林、氯丙咪嗪、地昔帕明、二苯西平、度硫平、多虑平、丙咪嗪、伊普吲哚、洛非帕明、美利曲辛、去甲替林、奥匹哌醇、普罗替林、曲米帕明；马普替林、米安色林、奈法唑酮、曲唑酮、及其药学上可接受的盐、异构体、以及组合组成的组；且/或至少一种精神安定药物选自由氟哌啶醇、氟哌利多、苯哌利多、三氟哌多、美哌隆、仑哌隆、阿扎哌隆、多潘立酮、利培酮、氯丙嗪、氟非那嗪、奋乃静、丙氯拉嗪、硫利达嗪、三氟拉嗪、美索达嗪、哌氰嗪、丙嗪、三氟丙嗪、左美丙嗪、异丙嗪、匹莫齐特、氰美马嗪、氯普噻吨、氯哌噻吨、氟哌噻吨、替沃噻吨、珠氯噻醇、氯氮平、奥氮平、利培酮、喹硫平、齐拉西酮、氨磺必利、阿塞那平、帕潘立酮、伊潘立酮、佐替平、舍吲哚、鲁拉西酮、阿立哌唑、和其药学上可接受的盐、异构体、以及组合组成的组。在某些实施方案中，剂是在同一剂型中。在某些实施方案中，治疗剂是在单独剂型中。
[0114] 成瘾和戒断
[0115] 本发明涉及用于治疗和减轻与物质滥用和戒断相关的症状的方法和组合物。本发明涉及用于治疗对例如酒精、药物、咖啡因、糖、食物、烟碱、阿片剂、和/或大麻等的成瘾的方法和组合物。
[0116] 物质成瘾和滥用是多因素神经疾病。随着时间，重复的暴露到内源性和外源性两者的多种物质，引起神经传递回路的修改和受体后信号传导级联的适应。此神经修改存在多种影响。在它们之中，存在活化奖赏途径的天然奖赏的能力的减少，这导致受压抑的动机与情绪以及增强的补偿生理变化的冲动。
[0117] 尽管构成成瘾基础的共同认知是“奖赏回路”的，快感可能未必为足以驱动人们趋向成瘾的强烈的冲动。而是，成瘾行为由控制和/或避免当某人经历戒断时出现的焦虑的强烈期望引起。
[0118] 用于物质依赖性，诸如苯二氮卓类滥用的传统治疗已经基于认知行为疗法或药物疗法，或其组合。然而，治疗的常规方法由于没有解决伴随成瘾和依赖性发生的生理化学变化而失败了。因此，用于控制戒断症状和对于成瘾物质的渴望的常规治疗具有有限的成功并常具有不希望的副作用。
[0119] 因此，所需要的是用于预防对成瘾物质的成瘾和生理性依赖的改进的方法和组合物。还需要的是用于控制由物质滥用引起的渴望和戒断症状的改进的治疗方法学。
[0120] 因此，本发明提供了用于预防对成瘾物质的成瘾和生理性依赖的改进的方法和组合物。还提供的是用于控制由物质滥用引起的渴望和戒断症状的改进的治疗方法学的方法和组合物。
[0121] 本发明涉及皮质醇阻断剂(糖皮质激素受体[GR]拮抗剂)作为治疗剂及与诊断剂一起用于预防或治疗成瘾诱导的焦虑和戒断副作用的用途。
[0122] 本发明的化合物可被肠内或肠胃外施用。与例如如在标准参考文献Gennaro等,Remington's Pharmaceutical Sciences中所描述的药学上适合的助剂混合。化合物可被压缩为固体剂量单元，诸如丸剂、片剂，或被加工为胶囊或栓剂。借助于药学上适合的液体，化合物还可以溶液、悬液、乳液的形式被应用，例如作为注射剂或滴眼剂、或作为喷雾剂使用，例如用于作为喷鼻剂使用。
[0123] 为了制备剂量单元，例如片剂，常规添加剂诸如填充剂、着色剂、聚合粘合剂等等的使用是预期的。通常，可使用不干扰活性化合物的功能的任何药学上可接受的添加剂。可与以适合的量使用的组合物一起施用的适合载体包括乳糖、淀粉、纤维素衍生物等等，或其混合物。
[0124] 本发明的化合物可被口服、体表、静脉内等施用。借助于药学上适合的液体，化合物可以溶液、悬液或乳液的形式被应用。化合物还可被配制为贴片(patch)、软膏或可装到用于局部施用到皮肤的装置中。
[0125] 本发明反映出内源性糖皮质激素(GC)在戒断物质滥用和成瘾物质(下文被称为“药物”或“多种药物”，包括但不限于酒精、烟碱、咖啡因、可卡因(包括快克(crack)可卡因)、大麻、苯丙胺(包括结晶甲基苯丙胺)、阿片剂和阿片剂类似物(包括海洛因、羟考酮、二氢可待因酮、氢化吗啡酮、美沙酮)、右美沙芬、苯二氮卓类、摇头丸(MDMA)、GHB、巴比妥类、柯特(khat)、卡痛(kratom)、PCP、LSD、氯胺酮、皮约特(peyote)、麦司卡林(mescaline)、赛洛西宾(psilocybin)、罗眠乐(rohypnol)、墨西哥鼠尾草(Salvia divinorum)、抗抑郁药、抗焦虑药5、安眠药、过敏药)中的作用。
[0126] 增加的GC循环水平可涉及滥用物质直接提高的作用或来自响应于于戒断的神经精神病学应激和身体应激的应激相关的GC提高。
[0127] 本发明涉及在药物使用的活性中毒阶段期间、在药物使用之前、或在药物使用停止之后被施用的选择性GC受体拮抗剂诸如ORG34517的共施用，以减少戒断的神经精神病学和身体症状，所述症状诸如焦虑、幻觉、烦躁、抑郁、震颤谵妄、受寒、抖动、震颤、静坐不能、躁动、不宁腿综合征、肌肉骨骼疼痛(musculoskeletal aches and pains)、痉挛、受寒、虚弱。
[0128] 本发明涉及GC受体拮抗剂的单剂量或持续几个小时、几天、几周或几个月的GC受体拮抗剂的持续的施用，用于预防和/或治疗药物戒断的症状。
[0129] 本发明可被考虑用于与抗焦虑药物和抗抑郁药物共同施用以更好地控制焦虑或抑郁的散发发作、爆发(flare-up)。本发明与抗焦虑和/或抗抑郁药物常规共施用。
[0130] 本发明还可与用于特定组分诊断剂(例如，使用唾液、血液、血浆、血清、尿或泪作为底物的诊断测试)一起使用，以监测个体中所述组分的特定水平以预防焦虑和戒断的发生，所述特定组分即：酒精、可卡因、咖啡因、烟碱等。
[0131] 本发明还可与用于皮质醇的诊断剂(例如，使用唾液、血液、血浆、血清、尿或泪作为底物的诊断测试)一起使用，以确定哪个个体具有提高的循环皮质醇或失调的皮质醇并可因此最可能受益于GC受体拮抗剂的施用。
[0132] 本发明还可被包装用于作为单剂量(通过处方或非处方(over the counter))、作为在被设计以特别地指导自我施用的包装中的有限次定时剂量单独使用，和与用于自我施用或由健康护理专业人员或技术人员施用的药物或皮质醇诊断测试(使用唾液、血液、血浆、血清、尿或泪作为底物)组合。
[0133] 再生疗法
[0134] GR激动剂的活性和其细胞功能的改变依据复杂细胞内分子信号传导而变化，为细胞和组织特异性的。具有糖皮质激素受体的细胞之中，有身体的全部组织和器官的干细胞和祖细胞。
[0135] 因此，此类分子结合到标准的、“组织内”干细胞和这些干细胞的后代细胞(被称为“短暂扩增”祖细胞)导致了可变的(variable)细胞和组织特异性作用，抑制或增强了干细胞和祖细胞功能，包括活化、增殖、迁移和分化，所有这些取决于讨论的组织/器官。
[0136] GR拮抗剂诸如例如ORG34517将因此阻止GR激动剂以组织特异性方式的作用，在一些组织中增强干细胞/祖细胞功能，在其他组织中抑制它。GR拮抗剂将在其中可以使用对疾病和伤口愈合的再生药物方法的特定临床环境中具有有益效果，包括：
[0137] -自体干细胞移植物的增强的移植后功能(取决于起源的组织和/或靶组织)。
[0138] -与手术或其他身体创伤(例如战伤)相关的分解代谢应激激素的围手术(peri-surgical)效果的减轻。
[0139] 全身性GR阻断将是不适当的，然而体表地(例如以防止伤口裂开)或通过直接注射或血管内输注(用于内脏器官损伤)地直接应用ORG34517到损伤/伤口部位将是有益的。
[0140] 本发明涉及皮质醇阻断剂(糖皮质激素受体[GR]拮抗剂)处理干细胞用于再生疗法的用途。
[0141] 干细胞
[0142] 术语“干细胞”通常指处于面对两种发展选择的分裂中的细胞：子代细胞(daughter cell)可与原始细胞相同(自我更新)或它们可以是更为特化的细胞类型的祖先(分化)。因此，干细胞能够采用一种或其他种途径(存在其中每个细胞类型中的一个可被形成的另一途径)。因此，干细胞为没有终末分化的细胞并能够生成其他类型的细胞。
[0143] 胚胎干细胞(ESC)可从胚泡的内细胞团(ICM)中被分离，胚泡为当着床发生时胚胎发育的阶段。
[0144] 多功能干细胞(pluripotent stem cell)为真正的干细胞，具有制备身体中任何分化的细胞的潜能。然而，它们不能促进制备源自滋养层的胚外膜。已经发现了若干类型的多功能干细胞。
[0145] 多能干细胞(multipotent stem cell)是真正的干细胞，然而仅可分化为有限数目的类型。例如，骨髓包含产生所有血液细胞而不产生其他类型细胞的多能干细胞。多能干细胞被发现于成年动物中。认为在身体中每个器官中包含它们，在那里它们可置换死亡或损伤的细胞。
[0146] 表征干细胞的方法在本领域中是已知的，并包括使用标准分析方法诸如无性系分析、流式细胞术、长期培养和分子生物技术例如PCR、RT-PCR和DNA印迹法。
[0147] 成体干细胞包含很多类型，包括神经元干细胞、皮肤干细胞和为骨髓移植中活性成分的血形成干细胞。
[0148] 这些后面的干细胞类型也是源自脐带干细胞的主要特征。尽管细胞类型的确切数目受到所选择的干细胞的类型限制，成体干细胞可在实验室和在身体两者中成熟为功能性、更特化的细胞类型。
[0149] 诱导的多功能干细胞，通常被简写为iPS细胞或iPSC，为一类多功能干细胞，其通过插入某些基因人工地源自非多功能细胞，典型地成年体细胞。iPS细胞在Takahashi,K.和Yamanaka(2006)、Yamanaka S,等.(2007)、Wemig M等(2007),Maherali N等(2007)、Yu J等(2007)以及Takahashi等,(2007)中被综述并被讨论，它们全部通过引用被并入本文。
[0150] iPS细胞典型地通过转染某些干细胞相关的基因到非多功能细胞，诸如成体成纤维细胞来衍生。转染典型地通过病毒载体实现，例如通过反转录病毒重编程。转染的基因包括主转录调节子Oct-3/4(Pouf51)与Sox2，尽管表明其他基因增强了诱导的效率。在3-4周后，少量被转染的细胞开始变得与多功能干细胞形态学上和生化上相似，并典型地通过形态选择、倍增时间或通过报道基因和抗生素感染被分离。
[0151] iPSC可通过用一种或更多种转录因子转染而由体细胞诸如成纤维细胞诱导。在一些情况下，细胞用Oct3/4、Sox2、c-Myc和Klf4转化。细胞可另外地被其他基因所转染，包括转录因子和/或标记基因。可使用转座子系统诸如Cre/IoxP重组系统，或使用非整合载体引入基因，以产生不含外源重编程基因的iPSC。转染可使用病毒载体诸如逆转录病毒实现。病毒可以是兼嗜性病毒。细胞被转染后，它们可在饲养细胞上生长直到转移到ESC培养基。
[0152] iPS细胞可源自任何适合细胞类型，包括肺细胞、包皮成纤维细胞、皮肤成纤维细胞、角质形成细胞、血液祖细胞、骨髓细胞、肝细胞、胃上皮细胞、胰腺细胞、神经干细胞、B淋巴细胞、源自ES的体细胞和胚胎成纤维细胞。在一些情况下，细胞不是人真皮成纤维细胞。iPSC可显示与ESC类似模式的基因表达和表型。
[0153] 诱导的多功能干细胞的来源
[0154] 现在已经提供了用于通过例如转化(诱导)成年体细胞或生殖细胞分离多功能干细胞的不导致破坏胚胎的若干方法，。这些方法包括：
[0155] 1.通过核移植的重编程。该技术包括将细胞核从体细胞转移进入卵母细胞或受精卵。在一些情况下，这可导致创造动物-人杂合细胞。例如，细胞可通过人的体细胞与动物卵母细胞或受精卵的融合或通过人的卵母细胞或受精卵与动物体细胞融合被创造。2.通过与胚胎干细胞融合的重编程。此技术包括体细胞与胚胎干细胞的融合。如以上第1点中，此技术还可导致动物-人杂合细胞的创造。3.通过培养的自发重编程。此技术包括在长期培养之后由非多功能细胞产生多功能细胞。例如，多功能胚胎生殖(EG)细胞已通过原生殖细胞(PGC)的长期培养产生(Matsui等,Derivation of pluripotential embryonic stem cells from murine primordial germ cells inculture.Cell 70,841-847,1992,通过引用被并入本文)。在骨髓源细胞的延长的培养之后多功能干细胞的发育也已被报道(Jiang等 ,Pluripotency of mesenchymal stem cells derived from adult marrow.Nature418,41-49,2002,通过引用并入本文)。他们称这些细胞为多能成体祖细胞(MAPC)。
Shinohara等还证明了多功能干细胞可在来自初生小鼠睾丸的种系干细胞(GS)的培养过程中产生，他们将其称为多能种系干(mGS)细胞(Kanatsu-Shinohara等,Generation of pluripotent stem cells from neonatal mouse testis.Cell 119,1001-1012,2004)。
4.通过限定的因子的重编程。例如，通过逆转录病毒介导的转录因子(诸如Oct-3/4、Sox2、c-Myc和KLF4)到小鼠胚胎成纤维细胞或成年成纤维细胞的引入来产生iPS细胞，例如如以上所述的。Kaji等(Virus-free induction of pluripotency and subsequent excision of reprogramming factors.Nature.Online publication 1Mar.2009)也描述了单个多蛋白表达载体的非病毒转染，该载体包含与2A肽连接的c-Myc、Klf4、Oct4和Sox2的编码序列，所述编码序列可重编程小鼠和人成纤维细胞两者。用此非病毒载体生成的iPS细胞显示了多功能性标志物的稳健表达，表明通过体外分化测定功能性地确认的重编程状态和成年嵌合体小鼠的形成。他们成功地从胚胎成纤维细胞建立了稳健表达多功能性标志物的重编程的人细胞系。
Shinohara等还证明了多功能干细胞可在来自初生小鼠睾丸的种系干细胞(GS)的培养过程中产生，他们将其称为多能种系干(mGS)细胞(Kanatsu-Shinohara等,Generation of pluripotent stem cells from neonatal mouse testis.Cell 119,1001-1012,2004)。
4.通过限定的因子的重编程。例如，通过逆转录病毒介导的转录因子(诸如Oct-3/4、Sox2、c-Myc和KLF4)到小鼠胚胎成纤维细胞或成年成纤维细胞的引入来产生iPS细胞，例如如以上所述的。Kaji等(Virus-free induction of pluripotency and subsequent excision of reprogramming factors.Nature.Online publication 1Mar.2009)也描述了单个多蛋白表达载体的非病毒转染，该载体包含与2A肽连接的c-Myc、Klf4、Oct4和Sox2的编码序列，所述编码序列可重编程小鼠和人成纤维细胞两者。用此非病毒载体生成的iPS细胞显示了多功能性标志物的稳健表达，表明通过体外分化测定功能性地确认的重编程状态和成年嵌合体小鼠的形成。他们成功地从胚胎成纤维细胞建立了稳健表达多功能性标志物的重编程的人细胞系。
[0156] 方 法 1-4 由 Shinya Yamanaka 在 Strategies and New Developments in the Generation of Patient-Specific Pluripotent Stem Cells(Cell Stem Cell1,Jul.2007Elsevier Inc)中描述并被讨论，通过引用并入本文。
[0157] 5.从单卵裂球或活组织检查的卵裂球衍生hESC系。参见KlimanskayaI,Chung Y,Becker S,Lu S J,Lanza R.Human embryonic stem cell lines derived from single blastomeres.Nature 2006；444:512，Lei 等 Xeno-free derivation and culture of human embryonic stem cells:current status,problems and challenges.Cell Research(2007)17:682-688，Chung Y,Klimanskaya I,Becker S 等 .Embryonic and extraembryonic stem cell lines derived from single mouse blastomeres.Nature.2006；439:216-219.Klimanskaya I,Chung Y,Becker S 等 .Human embryonic stem cell lines derived from single blastomeres.Nature.2006；444:481-485.Chung Y,Klimanskaya I,Becker S等Human embryonic stem cell lines generated without embryo destruction.Cell Stem Cell.2008；2:113-117以及Dusko Ilic等(Derivation of human tri embryonic stem cell lines from biopsied blastomeres on human feeders with a minimal exposure to xenomaterials.Stem Cells And Development—paper in pre-publication)，全部通过引用并入本文。6.从停止了分裂并未能在体外发育为桑椹胚和胚泡的停滞的胚胎中获得hESC系。参见Zhang X,Stojkovic P,Przyborski S等 .Derivation of human embryonic stem cells from developing and arrested embryos.Stem Cells 2006；24:2669-2676和Lei等Xeno-free derivation and culture of human embryonic stem cells:current status,problems and challenges.Cell Research(2007)17:682-688，两者皆通过引用被并入本文。7.单性生殖(或孤雌生殖)。此技术包括对未受精卵的化学刺激或电刺激以便导致它发育为卵裂球，胚胎干细胞可从卵裂球衍生。例如，参见Lin等Multilineage potential of homozygous stem cells derived from metaphase II oocytes.Stem Cells.2003；21(2):152-61，其采用了未受精的细胞分裂中期II卵母细胞的化学活化以生成干细胞。8.胎儿起源的干细胞。这些细胞在潜能性方面介于胚胎干细胞和成体干细胞之间并可被用于获得多功能细胞或多能细胞。表达多能性(pluripotency)的标志物(包括Nanog、Oct-4、Sox-2、Rex-1、SSEA-3、SSEA-4、Tra-1-60、和Tra-1-81、如通过β-半乳糖苷酶染色所显示的衰老最小证据以及端粒酶活性的一致表达)的人脐带源的胎儿间充质干细胞(UC fMSC)已经被成功地由Chris H.Jo等(Fetal mesenchymal stem cells derived from human umbilical cord sustain primitive characteristics during extensive expansion.Cell Tissue Res(2008)334:423-433,在此通过引用被并入)衍生。Winston Costa Pereira等(Reproducible methodology for the isolation of mesenchymal stem cells from human umbilical cord and its potential for cardiomyocyte generation J Tissue Eng Regen Med 2008；2:394-399,通过引用被并入本文)从人脐带的脐带胶质(Wharton's jelly)中分离了纯的间充质干细胞群体。源自脐带胶质的间充质干细胞也在Troyer与Weiss(Concise Review:Wharton's Jelly-Derived Cells Are a primitive Stromal Cell Population.Stem Cells
2008:26:591-599) 中 综 述。Kim 等 (Ex vivo characteristics of human amniotic membrane-derived stem cells.Cloning Stem Cells 2007Winter；9(4):581-94,在此通过引用被并入)从人羊膜中成功地分离了人羊膜源的间充质细胞。脐带是通常被丢弃的组织且源自此组织的干细胞预期不会引起道德或伦理异议。
2008:26:591-599) 中 综 述。Kim 等 (Ex vivo characteristics of human amniotic membrane-derived stem cells.Cloning Stem Cells 2007Winter；9(4):581-94,在此通过引用被并入)从人羊膜中成功地分离了人羊膜源的间充质细胞。脐带是通常被丢弃的组织且源自此组织的干细胞预期不会引起道德或伦理异议。
[0158] 诱导的多功能干细胞具有它们可通过不引起胚胎的破坏，更特别地通过不引起人或哺乳动物胚胎的破坏，的方法被获得的优势。像这样，本发明的各方面可通过使用不是专门地通过必然涉及破坏那些细胞可从其衍生的人或动物胚胎的方法制备的细胞，进行或付诸于实践中。此任选的限制被特别地预期考虑到欧洲专利局扩大上诉委员会的2008年11月25日的G0002/06决定。
[0159] 间充质干细胞
[0160] 间充质干细胞已知是多潜能(multipotent)的并显示分化为不同细胞/组织谱系，包括软骨、骨、脂肪组织、肌腱及韧带的潜能。这些多潜能间充质祖细胞被表示为基质干细胞或间充质干细胞。骨髓包含两种主要细胞类型：造血细胞和基质细胞。由于用于非造血组织的干细胞分化为间充质细胞或基质细胞的能力，它们被称为间充质细胞。
[0161] 因此，在此说明书中间充质干细胞(MSC)是指能够分化为造骨细胞、软骨细胞、肌细胞、脂肪细胞和内皮细胞的多潜能干细胞。特别地，在此说明书中MSC指能够分化为作为骨形成过程的一部分的成骨细胞的多潜能干细胞。
[0162] 间充质细胞通过微创技术可从骨髓中容易地获得并可在培养物中扩增并被允许分化为期望的谱系。分化可通过特定生长因子的应用被诱导。转化生长因子β(TGF-β)超家族成员蛋白诸如骨形成蛋白(BMP)是间充质干细胞的软骨形成分化和成骨分化的重要因子。
[0163] 适合的MSC可获自或源自从骨髓的吸出物收集的骨髓单核细胞(BMNNC)(例如Wexler等Adult bone marrow is a rich source of human mesenchymal'stem"cells but umbilical cord and mobilized adult blood are not.HAEMOPOIESIS AND LEUCOCYTES British Journal of Haematology121(2):368-374,April 2003.)或脐带的脐带胶质(例如Ta等.Long-term Expansion and Pluripotent Marker Array Analysis of Wharton's Jelly-Derived Mesenchymal Stem Cells.Stem Cells Dev.2009Jul.20(Epub))。
[0164] MSC分化为成骨谱系可通过在成骨培养基中培养实现。例如，MSC以3,000/cm2被接种于6孔、12孔和腔室培养玻片(chamber slide)中的维持培养基(DMEM，1g/l葡萄糖、10％FCS、2mM L-谷氨酰胺、50U/ml盘尼西林与50U/ml链霉素)中持续24小时，随后更换到成骨培养基(维持培养基、10nM地塞米松、25mu.g/ml抗坏血酸和10mMβ-甘油磷酸酯)。
接着，细胞被维持多达28天，每3-4天更换培养基。在14天后，在腔室培养玻片中的细胞可在4％PFA中被固定并在4℃下储存于PBS中用于免疫组织化学。在14天和28天后，针对钙用茜素红S(alizarin red S)，以及针对磷酸钙用冯库萨(van kossa)染色细胞。RNA还可使用Nucleospin RNA提取试剂盒按照制造厂商的说明书(Macherey Nagel)被提取用于分析且蛋白样品可被提取用于分析。
接着，细胞被维持多达28天，每3-4天更换培养基。在14天后，在腔室培养玻片中的细胞可在4％PFA中被固定并在4℃下储存于PBS中用于免疫组织化学。在14天和28天后，针对钙用茜素红S(alizarin red S)，以及针对磷酸钙用冯库萨(van kossa)染色细胞。RNA还可使用Nucleospin RNA提取试剂盒按照制造厂商的说明书(Macherey Nagel)被提取用于分析且蛋白样品可被提取用于分析。
[0165] MSC分化为成脂谱系可通过在成脂培养基中培养实现。例如，MSC以18,000/cm2被接种于维持培养基并如以上孵育持续2天。去除培养基且将细胞在PBS中洗涤一次，随后添加成脂维持培养基(DMEM，4.5g/1葡萄糖、10％FCS、L-谷氨酰胺和盘尼西林以及链霉素)或成脂培养基(含10mu.g/ml胰岛素、115microg/ml甲基异丁基黄嘌呤、1mu.M地塞米松和20mu.M吲哚美辛的成脂维持培养基)。然后，将细胞维持多达28天，每3-4天更换培养基。在14天和28天之后，细胞可用油红0(oil-red-0)染色以将脂肪滴染色。RNA和蛋白质还可被提取用于分析。
[0166] MSC分化为软骨形成谱系可通过在软骨形成培养基中培养实现。例如，MSC被计数5
并以5×10细胞/ml重悬于含或不含10ng/ml TGF正交3(quadrature.3)(Cambrex)的软骨形成培养基(含Cambrex软骨形成单一等份的DMEM)中且然后500ml等份被放置到15ml管中，随后在室温下以150×g离心10分钟并在37℃下孵育2天。两天后，管将包含松散的圆形沉淀物。沉淀物用每3-4天更换的培养基维持21天，随后使用Trizol(Invitrogen)分离RNA或将细胞沉淀物固定于4％PFA中并包埋用于冷冻切片。制备连续切片(serial section)，随后将切片储存在-80℃用于免疫组织化学。
并以5×10细胞/ml重悬于含或不含10ng/ml TGF正交3(quadrature.3)(Cambrex)的软骨形成培养基(含Cambrex软骨形成单一等份的DMEM)中且然后500ml等份被放置到15ml管中，随后在室温下以150×g离心10分钟并在37℃下孵育2天。两天后，管将包含松散的圆形沉淀物。沉淀物用每3-4天更换的培养基维持21天，随后使用Trizol(Invitrogen)分离RNA或将细胞沉淀物固定于4％PFA中并包埋用于冷冻切片。制备连续切片(serial section)，随后将切片储存在-80℃用于免疫组织化学。
[0167] 当在汇合条件下研究成骨分化和成脂分化时，细胞可以以30,000/cm2被接种并被允许达到汇合，随后换到相关分化培养基并如以上培养。
[0168] 干细胞的培养
[0169] 可使用任何适合培养干细胞的方法，且可将任何适合的容器用于增殖干细胞。适合的容器包括在美国专利公布US2007/0264713(Terstegge)中所描述的那些。
[0170] 例如，容器可包括生物反应器和旋转器。“生物反应器”是适于真核细胞例如动物细胞或哺乳动物细胞培养诸如以大规模培养的容器。受控的生物反应器的典型的培养体积在20ml和500ml之间。
[0171] 生物反应器可包括受控的生物反应器，其中一种或更多种条件可被控制或被监测，例如氧分压。用于测量和调节这些条件的装置在本领域是已知的。例如，氧电极可被用于氧分压。氧分压可通过选择的气体混合物(例如空气或空气和/或氧气和/或氮气和/或二氧化碳的混合物)的量和组成被调节。用于测量和调节氧分压的合适装置由Bailey,J E.(Bailey,J E.,Biochemical Engineering Fundamentals, 第 二 版 ,McGraw-Hill Inc.ISBN0-07-003212-2Higher Education,(1986)) 或 Jackson A T.Jackson A T.,Verfahrenstechnik in der Biotechnologie,Springer,ISBN 3540561900(1993))描述。
[0172] 其他合适的容器包括旋转器。旋转器是受控的或非受控的生物反应器，其可使用多种搅拌器机制搅动，所述搅拌器诸如玻璃球搅拌器、转子搅拌器、和其他适合的搅拌器。2 2
旋转器的培养体积典型地在20ml和500ml之间。滚瓶是具有400cm和2000cm 之间的培养面积、由塑料或玻璃制成的圆形细胞培养烧瓶。细胞沿这些烧瓶的整个内部表面被培养；
细胞通过“滚动”运动，即围绕瓶子自身的单轴转动瓶子，实现被培养基包被。
旋转器的培养体积典型地在20ml和500ml之间。滚瓶是具有400cm和2000cm 之间的培养面积、由塑料或玻璃制成的圆形细胞培养烧瓶。细胞沿这些烧瓶的整个内部表面被培养；
细胞通过“滚动”运动，即围绕瓶子自身的单轴转动瓶子，实现被培养基包被。
[0173] 可选地，培养物可是静态的，即其中不采取培养物/培养基的主动搅动。通过减少培养物的搅动，可允许形成细胞的聚集物。然而，可采用一些搅动以促进培养基在被培养的细胞上的分配和流动，这可被应用以便基本上不干扰聚集物的形成。例如，可采用低rpm搅动，例如少于30rpm或少于20rpm。
[0174] 通过传代的增殖
[0175] 细胞培养的方法可包括在培养期间传代或分流(split)。该方法可包括连续或持续传代。
[0176] 通过在组织培养基中稀释以及再铺平板(replating)/再培养，培养中的细胞可从基质或烧瓶中解离，并“分流”、被亚培养或被传代。
[0177] 术语“传代”通常可指获取等份的细胞培养物、将细胞完全或部分地解离、在培养基中稀释并接种的过程。传代可重复一次或更多次。等份可包含细胞培养物的全部或部分。等份的细胞可完全地、部分地汇合或没有汇合。传代可包括以下顺序的步骤的至少一些：抽吸、冲洗、胰蛋白酶消化、孵育、取出、猝灭、再接种和等分。可使用由Hedrick Lab,UC San Diego出版的方案。
[0178] 细胞可通过任何适合方法解离，诸如本领域已知的机械方法或酶促方法。细胞可通过机械解离被分散，例如使用细胞刮棒或移液器。细胞可通过合适筛尺寸诸如通过100微米或500微米筛的筛分被解离。细胞可通过酶促解离被分流，例如通过用胶原酶或收获的trypLE的处理。解离可为完全或部分的。
[0179] 稀释可具有任何适合的稀释度。在细胞培养物中的细胞可以以任何合适的比被分流。例如，细胞可以以1:2或更多的比、1:3或更多的比、1:4或更多的比、1:5或更多的比被分流。因此，干细胞可被传代1代或更多。例如干细胞可被传代2代、3代、4代、5代、6代、7代、8代、9代、10代、11代、12代、13代、14代、15代、16代、17代、18代、19代、20代、21代、22代、23代、24代、25代或更多。传代可被表示为细胞生长的世代(generation)。干细胞可被增殖1世代、2世代、3世代、4世代、5世代、6世代、7世代、8世代、9世代、10世代、
11世代、12世代、13世代、14世代、15世代、16世代、17世代、18世代、19世代、20世代、21世代、22世代、23世代、24世代、25世代或更多。干细胞可被增殖1细胞倍增、2细胞倍增、
3细胞倍增、4细胞倍增、5细胞倍增、6细胞倍增、7细胞倍增、8细胞倍增、9细胞倍增、10细胞倍增、11细胞倍增、12细胞倍增、13细胞倍增、14细胞倍增、15细胞倍增、16细胞倍增、17细胞倍增、18细胞倍增、19细胞倍增、20细胞倍增、21细胞倍增、22细胞倍增、23细胞倍增、
24细胞倍增、25细胞倍增或更多。
11世代、12世代、13世代、14世代、15世代、16世代、17世代、18世代、19世代、20世代、21世代、22世代、23世代、24世代、25世代或更多。干细胞可被增殖1细胞倍增、2细胞倍增、
3细胞倍增、4细胞倍增、5细胞倍增、6细胞倍增、7细胞倍增、8细胞倍增、9细胞倍增、10细胞倍增、11细胞倍增、12细胞倍增、13细胞倍增、14细胞倍增、15细胞倍增、16细胞倍增、17细胞倍增、18细胞倍增、19细胞倍增、20细胞倍增、21细胞倍增、22细胞倍增、23细胞倍增、
24细胞倍增、25细胞倍增或更多。
[0180] 共培养物和饲养者(feeder)
[0181] 方法可包括存在或缺少共培养物的情况下培养干细胞。术语“共培养物”是指在一起生长的两种或更多种不同类型的细胞的混合物。两种或更多种不同类型细胞可生长于同一表面，诸如颗粒或细胞容器表面、或生长于不同表面。不同类型的细胞可生长于不同颗粒上。
[0182] 饲养细胞(feeder cell)可意指用于不同类型细胞的培养或不同类型细胞的培养所需要的细胞。在干细胞培养的情况中，饲养细胞具有保护存活、增殖、以及维持细胞多能性或多潜能性(multipotency)的功能。细胞多能性/多潜能性可通过直接地共培养饲养细胞而被确保。例如，容器诸如培养盘的内表面可被饲养细胞层包被。饲养细胞释放营养物到培养基中。可选地或另外地，饲养细胞可在培养基中被培养以调理它。经调理的培养基可被用于培养干细胞。因此，其中饲养细胞是不存在的或不需要的安排也是可能的。
[0183] 本发明提供了用GR拮抗剂处理干细胞以收获GR拮抗剂处理的干细胞。
[0184] 骨质疏松症和骨相关的损伤
[0185] 糖皮质激素(GC)对炎性和免疫紊乱的治疗是极为重要的。然而，这些类固醇深刻地影响了骨骼，特别是当被施用用于延长阶段时。事实上，高剂量的GC疗法几乎普遍地与骨损伤相关，引起骨质疏松症的最有害的形式之一。尽管GC诱导的骨质疏松症的频率和严重性，它的治疗不令人满意，表明它的发病机理未完全地被理解。本发明提供了通过组合皮质醇阻断剂即ORG34517及任选使用骨髓冲洗法(irrigation)、骨相容性胶粘剂和PTH疗法，用于这些紊乱以及快速部位特异性骨生长的方法和治疗。
[0186] 本发明涉及GR拮抗剂或GR拮抗剂处理的干细胞用于预防或治疗应激诱导的骨质疏松症和骨相关损伤的快速愈合的用途。
[0187] 本发明涉及GR拮抗剂或GR拮抗剂处理的干细胞治疗骨折的治疗用途(人用和兽医用)。这里报道的GR拮抗剂或GR拮抗剂处理的干细胞提高骨中的伤口愈合。GR拮抗剂刺激损伤之后的骨再生并有助于改善骨的伤口愈合。GR拮抗剂和GR拮抗剂处理的干细胞提供了骨折修复的速度中的改进，使得从损伤中恢复时间的减少成为可能。
[0188] 骨折是一种医疗状况。在此申请中“骨折”包括对其中骨被切断、被打断或被切碎的骨的损害或损伤。打断指骨的不连续性。骨折可由身体冲击、机械应力或由医学状况诸如骨质疏松症或骨关节炎引起。
[0189] 骨折的骨科分类包括闭合骨折或开放性骨折以及单纯性骨折或多碎片骨折。在闭合骨折中皮肤保持完整，而在开放性骨折中骨可通过伤口部位被暴露，这带来了更高的感染风险。单纯性骨折沿单线发生，倾向于将骨分成两部分。多碎片骨折将骨分裂成为多个碎片。
[0190] 其他骨折类型包括压迫性骨折、压缩性骨折(compacted fracture)、螺旋形骨折、完全和不完全骨折、横向、线性和斜形骨折和粉碎性骨折。
[0191] 在大多数受试者中，骨愈合(骨折连接)自然地发生并在损伤之后起始。出血通常导致凝血以及白血球和成纤维细胞的吸引，随后生成胶原纤维。在这之后为转化胶原基质为骨的骨基质(钙羟基磷灰石)沉积作用(矿化作用)。不成熟的再生骨典型地比成熟骨更弱，且随时间的推移不成熟骨经受了重塑过程以生成成熟“薄层状”骨。完全骨愈合过程花费相当多时间，典型地许多个月。
[0192] 其中骨折发生且其可受益于使用GR拮抗剂的骨包括所有骨类型，特别是所有哺乳动物的骨，包括但不限于长骨(例如股骨、肱骨、指骨)、短骨(例如腕骨、跗骨)、扁骨(例如颅骨、肋骨、肩胛骨、胸骨、骨盆带)、不规则骨(例如椎骨)、籽骨(例如髌骨)。
[0193] 骨折还包括病理性孔隙度(pathological porosity)，诸如患有骨质疏松症的受试者所表现的。
[0194] 提供了GR拮抗剂和GR拮抗剂处理的干细胞及包含GR拮抗剂和GR拮抗剂处理的干细胞的药物组合物和药物，用于在治疗哺乳动物受试者中的骨折的方法中使用。
[0195] 治疗可包括骨的伤口愈合。治疗可涉及骨的修复、再生和生长。GR拮抗剂和GR拮抗剂处理的干细胞通过促进新骨形成来促进骨折修复。GR拮抗剂发挥改善骨折修复速度的作用，使得骨愈合更快地发生成为可能，导致从损伤中改善的恢复时间。治疗可导致改善的骨强度。
[0196] 治疗还可包括治疗骨质疏松症或骨关节炎。
[0197] GR拮抗剂和GR拮抗剂处理的干细胞的施用可针对例如骨折周围的组织。这可包括针对其中已经发生骨折的骨组织的直接施用。施用可针对骨周围或骨折周围的结缔组织或针对接近骨并供应骨的脉管系统(例如血管)。施用可直接针对损伤的部位并可针对由伤口最初愈合所形成的胼胝。
[0198] 根据本发明的药物和药物组合物可被配制用于通过许多途径的施用。GR拮抗剂和GR拮抗剂处理的干细胞可以被配制呈用于注射的流体或液体形式，或作为适于应用到骨或骨折周围的其他组织的凝胶的部分。
[0199] 施用优选以“治疗有效量”，与相应的未处理的骨折或用从对照条件下培养物中获得的GR拮抗剂处理的干细胞处理的骨折相比，这足以改善骨折的愈合。施用的实际量、及施用率和时间进程将取决于骨折的性质和严重性。治疗的处方，例如关于剂量等的决定在全科医师和其他医生的责任之内，并将典型地考虑到骨折的性质、个体患者的状况、递送的部位、施用的方法和医师已知的其他因素。GR拮抗剂或GR拮抗剂处理的干细胞剂量的单次施用或多次施用可按照处方医师的指导施用。以上所涉及的技术和方案的实例可见于Remington's Pharmaceutical Sciences,第20版,2000,pub.Lippincott,Williams&Wilkins。
[0200] GR拮抗剂或GR拮抗剂处理的干细胞可与其他治疗，诸如施用减轻疼痛或抗炎性药物、骨的固定和放置例如固定受伤的肢体到石膏绷带夹中、手术介入例如重新放置骨或移动骨以校正移位、成角度(angulation)或脱位(dislocation)一起用于治疗骨折。如果手术是需要的，GR拮抗剂或GR拮抗剂处理的干细胞可在手术程序期间被直接施用到(例如被应用到)骨折处。
[0201] 本发明的药物组合物和药物可采用GR拮抗剂或GR拮抗剂处理的干细胞包被的和/或浸渍的生物材料的形式。植入物或假体可从生物材料形成。此类植入物或假体可通过手术植入以辅助骨生长、再生、重建和/或重塑。
[0202] GR拮抗剂或GR拮抗剂处理的干细胞可被应用到植入物或假体中以加速期望位置的新骨形成。生物材料可用GR拮抗剂或GR拮抗剂处理的干细胞包被和/或浸渍。浸渍可包括将GR拮抗剂与生物材料接触，以允许它们被吸附到和/或吸收到和/或吸收进生物材料。包被可包括将GR拮抗剂或GR拮抗剂处理的干细胞吸附到生物材料的表面。生物材料的包被或浸渍可包括将GR拮抗剂或GR拮抗剂处理的干细胞接种到生物材料上或接种到其中。
[0203] 当施用或植入受试者中时，生物材料应当允许包被的或浸渍的GR拮抗剂或GR拮抗剂处理的干细胞从生物材料中释放。生物材料释放动力学可通过改变生物材料的结构例如孔隙度被改变。
[0204] 除了以GR拮抗剂或GR拮抗剂处理的干细胞包被或浸渍生物材料之外，一种或更多种生物活性分子可浸渍或包被到生物材料上。例如，选自由以下组成的组的至少一种：BMP-2、BMP-4、OP-1、FGF-1、FGF-2、TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3、VEGF、胶原蛋白、层粘连蛋白、纤连蛋白、玻连蛋白(vitronectin)。除了以上生物活性分子以外，或可选地，一种或更多种二膦酸盐可与GR拮抗剂一起浸渍或包被到生物材料上。有用的二膦酸盐的实例可包括选自由以下组成的组的至少一种：依替膦酸盐、氯膦酸盐、阿仑膦酸盐、帕米膦酸盐、利塞膦酸盐、唑来膦酸盐。任选地，GR拮抗剂或GR拮抗剂处理的干细胞被排除而未被浸渍或包被在生物材料上。
[0206] 生物材料提供了支架或基质支持物。生物材料可适用于在组织中的植入，或可适用于施用(例如在溶液中作为微胶囊)。
[0207] 植入物或假体应当是生物可相容的，例如非毒性的或具有低免疫原性(最优选地非免疫原性的)。生物材料可以是生物可降解的，使得生物材料随着伤口愈合发生而降解，最终地在受试者中仅留下原位再生的骨。可选地，非生物可降解的生物材料可被用于，例如在骨愈合期间引导骨跨越大的不连续性而再生和/或充当结构支持物，在成功伤口愈合之后手术去除生物材料作为任选要求。
[0208] 生物材料可以是柔软的和/或有弹性的，例如水凝胶、纤维蛋白网或网格、或胶原海绵。“水凝胶”是当有机聚合物被放置或固化时形成的以创建捕获水分子或其他溶液分子以形成凝胶的三维开放性晶格结构的物质，所述有机聚合物可以是天然或合成的。固化可通过聚集、凝固、疏水相互作用或交联发生。
[0209] 可选地，生物材料可以是例如从固体材料诸如塑料或生物惰性金属诸如钛所形成的相对地刚性结构。
[0210] 生物材料可具有多孔基质结构，其可通过交联的聚合物提供。基质优选对于骨生长所需的营养物和生长因子是可渗透的。
[0211] 基质结构可通过以适合的交联剂例如钙盐、聚丙烯酸、肝素交联纤维，例如纤维蛋白或胶原，或海藻酸钠、壳聚糖、或其他多糖的液膜形成。可选地，支架可作为使用本领域技术人员已知的公认的方法交联的胶原蛋白或海藻酸盐制备的凝胶形成。
[0212] 用于基质形成的适合的聚合物材料包括但不限于生物可降解的/生物可吸收的聚合物，其可选自由以下组成的组：琼脂糖、胶原、纤维蛋白、壳聚糖、聚己内酯、聚(DL-丙交酯-共-己内酯)、聚(L-丙交酯-共-己内酯-共-乙交酯)、聚乙交酯、聚丙交酯、聚羟基烷酸酯、其共聚物；或非生物可降解的聚合物，其可选自由以下组成的组：乙酸纤维素、丁酸纤维素、藻酸盐、聚砜、聚氨酯、聚丙烯腈、磺化聚砜、聚酰胺、聚丙烯腈、聚甲基丙烯酸甲酯、其共聚物。
[0213] 由于胶原的生物相容性以及支持细胞附着和功能的有利性质，其是用于基质构建有前途的材料(美国专利号5,019,087；Tanaka,S.；Takigawa,T.；Ichihara,S.与 Nakamura,T.Mechanical properties of the bioabsorbable polyglycolicacid-collagen nerve guide tube Polymer Engineering&Science2006,46,1461-1467)。
临床上可接受的胶原海绵是基质的一个实例并在本领域中(例如从Integra Life
Sciences)是公知的。
临床上可接受的胶原海绵是基质的一个实例并在本领域中(例如从Integra Life
Sciences)是公知的。
[0214] 纤维蛋白支架(例如纤维蛋白胶)提供了可选的基质材料。纤维蛋白胶作为伤口密封剂，递送生长因子的容器并作为生物植入物的放置和固定中的辅助物享有广泛的临床应用(Rajesh Vasita,Dhirendra S Katti.Growth factor delivery systems for tissue engineering:a materials perspective.Expert Reviews in Medical Devices.2006；3(1):29-47；Wong C,Inman E,Spaethe R,Helgerson S.Thromb.Haemost.200389(3):573-582；Pandit A S,Wilson D J,Feldman D S.Fibrin scaffold as an effective vehicle for the delivery of acidic growth factor(FGF-1).J.Biomaterials Applications.2000；14(3)；229-242；DeBlois Cote M F.Doillon C J.Heparin-fibroblast growth factor fibrin complex:in vitro and in vivo applications to collagen based materials.Biomaterials.1994；15(9):665-672.)。
[0215] Luong-Van 等 (In vitro biocompatibility and bioactivity ofmicroencapsulated heparan sulphate Biomaterials 28(2007)2127-2136)，描述了HS从聚己酸内酯微胶囊的延长的局部递送，通过引用并入本文。生物材料的又一实例是掺入羟基磷灰石或透明质酸的聚合物。
[0216] 生物材料可补充有另外的细胞。例如，技术人员可用源自成纤维细胞的饲养细胞“接种”生物材料(或共合成生物材料)，这对于支持GR拮抗剂的生长和维持可以是有用的。
[0217] 待被治疗的受试者可以是任何动物或人。受试者优选哺乳动物。在一些实施方案中，受试者是人。在其他实施方案中，受试者是动物，更优选是非人哺乳动物。非人哺乳动物可以是家养宠物，或为了商业目的保持的动物，例如赛马、或家畜诸如猪、绵羊或牛。如此，本发明可具有兽医应用。非人哺乳动物包括兔、豚鼠、大鼠、小鼠或其他啮齿动物(包括在啮齿目(Rodentia)级别中的任何动物)、猫、狗、猪、绵羊、山羊、牛(包括母牛、或在牛属(Bos)级别中的任何动物)、马(包括在马科(Equidae)级别中的任何动物)、驴和非人灵长类。受试者可以是男性或女性。受试者可以是患者。
[0218] 伤口愈合和移植物
[0219] 尽管提高的皮质醇在面对极端身体和情绪应激时在生理内稳态中起着重要作用，其可通过结合到它们的糖皮质激素受体(GR)抑制对于伤口修复重要的细胞(包括干细胞)，对伤口愈合具有消极影响。
[0220] 应用GR拮抗剂诸如Org 34517可在此类情况下改善伤口愈合。然而，必须避免与GR结合的全身性皮质醇的阻断。因此，本发明提供了用于(通过在皮肤伤口中的局部应用或通过直接注射或局部血管输注)将ORG34517局部应用到伤口，将有助于在面对急性身体创伤(例如战伤)时的伤口修复而同时保留由皮质醇贡献的全身性内稳态。
[0221] 对干细胞疗法的相同应用也通过以ORG34517预处理可移植的干细胞被提供。
[0222] 另外，本发明提供了在接受者中的移植之前预处理可移植器官。本发明提供了在接受者中移植期间处理可移植器官。
[0223] 灌注系统
[0224] 用于细胞的灌注系统可被用于将组织或器官暴露到呈液体或半固体形式的GR拮抗剂。灌注指溶液连续流经或流过细胞群。与用回收的培养基将细胞洗涤出来的连续流式培养(例如，恒化器)相反，这意味着将细胞保留在培养单元中。灌注允许对培养环境(pH、pO2、营养物水平、GR拮抗剂水平等)的更好控制，并是显著增加培养中用于细胞附着的表面面积的利用的方法。
[0225] 灌注技术被发展以模拟体内细胞环境，其中细胞以血液、淋巴或其他体液连续地供应。在没有生理营养液的灌注的情况下，培养中的细胞经受饲养和饥饿的交替阶段，因此限制了其生长和代谢潜能的完全表达。在本发明的上下文中，灌注系统还可被用于用GR拮抗剂灌注细胞以诱导静态平衡(stasis)。
[0226] 本领域技术人员熟悉灌注系统，且存在大量市售可得的灌注系统。本发明可采用任何这些灌注系统。灌注系统的一个实例是使用无纺布(non-woven fabrics)的床基质的灌注的填充床反应器(a perfused packed-bed reactor)( New BrunswickScientific,Edison,N J.；Wang等,1992；Wang等,1993；Wang等,1994)。简要描述地，该反应器包含用于培养贴壁依赖性细胞和非贴壁依赖性细胞两者的改进的反应器。反应器被设计为具有提供内部再循环的工具的填充床。优选地，纤维基质载体被放置于反应器容器之内的篮(basket)中。篮的顶部和底部具有孔，允许培养基流过篮。特别设计的转子通过纤维基质所占据的空间提供了培养基的再循环，用于确保营养物的均匀供应和废料的去除。这同时确保了总细胞群中可以忽略的量被悬浮在培养基中。篮与再循环的组合还提供了含氧培养基无气泡地流经纤维基质。纤维基质是具有从10微米到100微米“孔”径的无纺布，提供了具有对应于个体细胞体积的1倍到20倍的孔体积的高内部体积。
[0227] 灌注的填充床反应器提供了若干优势。通过纤维基质载体，细胞被保护以对抗来自搅动和起泡的机械应力。流过篮的自由培养基为细胞提供最优的受控水平的氧气、pH和营养物。产物可连续地从培养物中移出且获得的产物不含细胞并
可在低蛋白培养基中生产，其使随后的纯化步骤变得容易。该技术详细地解释于WO
94/17178(Aug.4,1994,Freedman等)中，其由此通过引用以其全部内容被并入。
可在低蛋白培养基中生产，其使随后的纯化步骤变得容易。该技术详细地解释于WO
94/17178(Aug.4,1994,Freedman等)中，其由此通过引用以其全部内容被并入。
[0228] (Corning-Costar)模块提供了用于基质附着的细胞的固定化和生长的大的苯乙烯表面面积。它是具有一系列连接的平行培养板以在邻近板之间创造薄的密封的层状流动空间的整体封装的无菌单次使用装置。
[0229] 模块具有彼此斜对并辅助调节培养基的流动的入口和出口。在生长的最初几天中，培养物通常被初始接种后系统内所包含的培养基满足。初始接种和培养基灌注的起始之间的时间量取决于种子接种物(seeding inoculum)中的细胞密度和细胞生长速率。循环培养基中营养物浓度的测量结果是培养物状态的良好指标。在建立程序时，以多种不同灌注速率监测营养物组成以确定最经济和最富有成效的操作参数可以是必需的。
[0230] 其他市售可得的灌注系统包括，例如 (Laboratories MABIO International,Tourcoing,France)和Stovall Flow Cell(Stovall Life Science,Inc.,Greensboro,N.C.)。
[0231] 培养物的产生阶段的时间和参数取决于特定细胞系的类型和用途。与培养物的生长期所需的相比，许多培养物需要不同培养基用于生产。在传统培养中，从一个阶段到其他阶段的过渡期将很可能需要多次洗涤步骤。然而，灌注系统的益处之一是提供多个操作阶段之间的温和过渡的能力。灌注系统还可使得从生长阶段到由GR拮抗剂诱导的静态阶段(static phase)的过渡变得容易。同样地，通过用例如生理营养培养基置换包含GR拮抗剂的溶液，灌注系统可使从静态阶段到生长阶段变得容易。
[0232] 制剂
[0233] 本发明的化合物可被肠内或肠胃外施用。与药学上适合的助剂相混合，例如如在标准参考文献Gennaro等,Remington's Pharmaceutical Sciences中所描述的。化合物可被压制为固体剂量单元，诸如丸剂、片剂，或被加工为胶囊或栓剂。借助于药学上适合的液体，化合物还可以以溶液、悬液、乳液的形式被应用，例如用于作为注射制品或滴眼剂使用，或作为喷雾剂，例如用于作为喷鼻剂使用。
[0234] 为了制备剂量单元，例如片剂，常规添加剂诸如填充剂、着色剂、聚合粘合剂等等的使用是预期的。通常，可使用不干扰活性化合物的功能的任何药学上可接受的添加剂。组合物藉以可被施用的适合载体包括以适合的量使用的乳糖、淀粉、纤维素衍生物等等，或其混合物。
[0235] 剂型
[0236] 本发明的组合物可通过团聚、空气悬浮冷却、空气悬浮干燥、成球、凝聚、包衣、粉碎、压制、低温制粒(cryopelletization)、胶囊化、挤压、湿法制粒、干法制粒、均质化、包结络合(inclusion complexation)、冻干法、烊化、微胶囊化、混合、模制、锅包衣(pan coating)、溶剂脱水、声处理、滚圆(spheronization)、喷雾冷却、喷雾凝结、喷雾干燥、或本领域中已知的其他过程被加工。组合物可以以微胶囊、胶囊、片剂、植入物、药片(troche)、锭剂(小片)、临时或永久悬液、卵状小体、栓剂(suppository)、圆片(wafer)、咀嚼片、迅速(quick)或快速(fast)溶解片剂、泡腾片、含服或舌下固体、颗粒剂、薄膜、散剂(sprinkle)、微丸剂(pellet)、珠剂(bead)、丸剂、粉末、研磨剂(triturate)、薄片(platelet)、条形剂(strip)或冲剂(sachet)的形式被提供。组合物还可作为“干糖浆”施用，其中完成的剂型被直接放置在舌头上并被吞下或随着饮水或饮料被吞下。这些形式是本领域公知的并被适当地包装。组合物可被配制用于口服、经鼻、含服、眼、尿道、透粘膜、阴道、体表或直肠递送。
[0237] 药物组合物可用一种或更多种肠溶包衣(enteric coating)、密封包衣、薄膜包衣、防护包衣(barrier coating)、压制包衣(compress coating)、快速崩解包衣、或酶可降解的包衣来包衣。多种包衣可被应用于期望的性能。此外，剂型可被设计用于立即释放、脉冲释放、控释(controlled release)、缓释(extended release)、延时释放(delayed release)、靶向释放、同步释放或靶向延时释放。对于释放/吸收控制，含有或不含活性成分的固体载体可由多种组分类型和水平或厚度的包衣制成。此类多种固体载体可被混合入剂型中以取得期望的性能。这些术语的定义为本领域技术人员已知的。另外，剂型释放曲线可受聚合基质组合物、包衣的基质组合物、多颗粒组合物、包衣的多颗粒组合物、基于离子交换树脂的组合物、基于渗透的组合物或可生物降解的聚合组合物的影响。不希望被理论所束缚，认为释放可通过有利的扩散、溶解、侵蚀、离子交换、渗透或其组合实现。
[0238] 当被配制为胶囊时，胶囊可以是硬明胶胶囊或软明胶胶囊、淀粉胶囊或纤维素胶囊。尽管不限于胶囊，此类剂型可进一步被例如密封包衣、肠溶衣、缓释包衣或靶向延时释放包衣所包衣。这些不同的包衣是本领域中已知的，但为了清楚起见，提供了以下简述：密封包衣或具有隔离层包衣：多达20微米厚度的薄层可为了各种理由被应用，包括为了颗粒孔隙度减少、减少尘埃、为了化学保护、掩盖味道、减少气味、最小化胃肠刺激等。隔离效果与包衣的厚度成比例。水溶性纤维素醚优选地用于此应用。HPMC和乙基纤维素的组合，或Eudragit E100可以是特别适用于味道掩盖应用。其他地方列出的传统肠溶包衣材料也可被用于形成隔离层。
[0239] 缓释包衣被设计以实现经一段延长的时间的递送。缓释包衣是由例如乙基纤维素、羟丙基纤维素、甲基纤维素、羟甲基纤维素、羟乙基纤维素、丙烯酸酯、或羧甲基纤维素钠形成的pH非依赖性包衣。取决于包衣材料和/或包衣厚度的选择，各种缓释剂型可容易被本领域技术人员设计以取得向小肠和大肠两者、仅向小肠或仅向大肠的递送。
[0240] 肠溶包衣是药学上可接受的赋形剂的混合物，其被应用到载体或组合物、与其组合、与其混合或另外被添加至其。包衣可被应用到压制的或模制的或挤压的片剂、明胶胶囊、和/或微丸剂、珠剂、颗粒剂或载体或组合物的颗粒。包衣可通过水分散系或溶解于适当溶剂之后被应用。另外的添加剂和它们的水平，以及一种或更多种主要包衣材料的选择将取决于以下特性：1.对在胃中溶解和崩解的耐受性；2.在胃中时对胃液和药物/载体/酶的不渗透性；3.在肠的靶部位中快速溶解或崩解的能力；4.在存储期间物理和化学稳定性；5.无毒性；6.容易作为包衣应用(基质友好性)；及7.经济实用性。
[0241] 本发明的组合物的剂型还可被配制为肠溶包衣的延时释放口服剂型，即配制为如本文所描述的药物组合物的口服剂型，其利用肠溶包衣以影响下胃肠道中的释放。肠溶包衣剂型可包含颗粒剂、微丸剂、珠剂或活性成分的颗粒和/或其他组合物组分的压制的或模制的或挤压的片剂/模制物(包衣的或未包衣的)，所述组合物组分本身被包衣或未包衣。肠溶包衣的口服剂型还可以是包含其本身被包衣或未包衣的固体载体或组合物的微丸剂、珠剂或颗粒剂的胶囊(包衣的或未包衣的)。
[0242] 延时释放通常是指递送使得释放可在下胃肠道中的一些通常可预测的位置上实现，该位置在如果不存在延时释放改变被实现的位置的更远端。用于延时释放的优选方法是包衣。任何包衣应当以足够的厚度被应用，以至于整个包衣在低于大约5的pH下不溶解于胃肠液中，而在pH大约5及高于pH 5下溶解。预期表现出pH依赖性溶解曲线的任何阴离子聚合物可被用作本发明实践中的肠溶包衣以实现向下胃肠道的递送。用于在本发明中使用的聚合物为阴离子羧基聚合物。
[0243] 虫胶，也被称为纯化的紫胶(lac)，从昆虫的树脂分泌物获得的精制产品。此包衣在pH>7的介质中溶解。
[0245] 为了实施本发明的方法，本发明的组合物可施用到哺乳动物物种，诸如狗、猫、人等，且如此可被掺入常规全身性剂型，诸如片剂、胶囊、酏剂或可注射剂。以上剂型还将包括必需的载体材料、赋形剂、润滑剂、缓冲剂、抗菌剂、填充剂(诸如甘露醇)、抗氧化剂(抗坏血酸或亚硫酸氢钠)等等。
[0246] 被施用的剂量必须根据患者的年龄、体重和状况以及施用途径、剂型和疗法及期望的结果小心地调整。
[0247] 本发明的药物组合物可以以单次剂量或每天1次到4次的分次剂量的剂型被施用。患者以低剂量组合开始并逐步地达到高剂量组合可以是可取的。
[0248] 可制备各种尺寸例如总重约1mg到2000mg的包含一种或两种活性药物组分的片剂，剩余物为根据可接受的药学实践的生理学上可接受其他材料的载体。这些片剂可被刻痕以提供部分剂量。明胶胶囊可被类似地配制。
[0249] 还可通过将一种活性物质或活性物质的组合溶解或悬浮到对于药物施用可接受的常规液体媒介物中来制备液体制剂，以提供以1茶匙的量到4茶匙的量的期望的剂量。
[0250] 剂型可按照例如每天1个剂量、2个剂量、3个剂量、4个剂量、5个剂量、6个剂量、或其他剂量的方案被施用到患者。
[0251] 为了更细微地调节剂量时间表，活性物质可以以单独剂量单位同时或仔细协调时间地分别施用。由于通过调节的时间表的施用建立并维持了血液水平，相同结果通过两种物质的同时存在被取得。各自的物质可以以与以上描述的相似的方式被分别配制在单独的单位剂型中。
[0253] 可被掺入片剂的佐剂的阐述如下：粘合剂诸如黄蓍胶、阿拉伯胶、玉米淀粉或明胶；赋形剂诸如磷酸氢二钙或纤维素；崩解剂，诸如玉米淀粉、马铃薯淀粉、藻酸等等；润滑剂诸如硬脂酸或硬脂酸镁；甜味剂诸如蔗糖、阿司帕坦、乳糖或糖精；调味剂例如橙、薄荷油、冬青油或樱桃。当剂量单位形式是胶囊时，除了上述类型的材料之外它可以包含液体载体诸如脂肪油。各种其他材料可作为包衣存在或可存在以另外修饰剂量单元的物理形式。例如，片剂或胶囊可用虫胶、糖或两者包衣。酏剂的糖浆可包含活性化合物、水、酒精等等作为载体，甘油作为增溶剂，蔗糖作为甜味剂，对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯作为防腐剂，染料和调味剂诸如樱桃或橙。
[0254] 本发明的一个实施方案包括通过向受试者施用公开的纳米颗粒、复合纳米颗粒、纳米悬液或纳米胶囊治疗、预防或诊断特定疾病或状况的方法。在许多情况下，纳米颗粒、复合纳米颗粒或纳米胶囊被单独施用或可被包含在药物组合物之内。通常，有效量的药物组合物被定义为足够减轻、减少、最小化或限制疾病或状况的程度的量。可应用更严格的定义，包括消除、根除或治愈疾病或状况。
[0255] “纳米颗粒”为具有例如小于约1微米(micron)(微米(micrometer))的平均粒径的固体颗粒。1微米为1,000纳米(nm)。
[0256] “稳定的”纳米颗粒为用稳定材料包衣的并相对于不含稳定包衣的本发明化合物的纳米颗粒具有减少的聚集倾向和分散损失的纳米颗粒。
[0257] 纳米喷雾剂是包含纳米颗粒的喷雾剂或产生纳米颗粒的喷雾剂。纳米分散体是包含纳米颗粒的分散体。纳米悬液是包含纳米颗粒的悬液。
[0258] 本文有用的液体制剂可包括溶剂、溶液、悬液、微悬液、纳米悬液、乳液、微乳液、凝胶或甚至含有一种或多种活性成分的熔体。在一些实施方案中，纳米颗粒、纳米纤维或纳米纤丝可以呈颗粒、粉末、悬液、溶液、可溶解的薄膜、垫子、网、片剂或可释放的形式特别是可释放的剂型，或在其中或在其上。其他特别有用的形式为在使用之前向其中加入稀释液体的浓缩物。产品还可在使用之前被喷雾到容器的内部表面上，随后将液体加入所述容器，且纳米颗粒、纳米纤维或纳米纤丝被释放到液体中。
[0259] 本发明的药物组合物可包括本发明的纳米颗粒、复合纳米颗粒、纳米悬液或纳米胶囊。
[0260] 在例如某些非限制实施方案中，药物组合物可包含例如至少约0.1％的活性成分或纳米颗粒、复合纳米颗粒、或纳米胶囊。在例如其他实施方案中，活性成分或纳米颗粒、复合纳米颗粒、或纳米胶囊可构成约2％到约75％之间的单位重量，或约25％到约60％之间的单位重量，及在其中可推出的任何范围。在从本文列出的数字中可推出的范围的非限制性实例中，约5mg/kg/体重到约100mg/kg/体重、约5微克/kg/体重到约500微克/kg/体重的范围等可被施用。
[0261] 组合物还可包含多种抗氧化剂以阻止一种或更多种活性成分或纳米颗粒、复合纳米颗粒、纳米悬液或纳米胶囊的氧化。阻止微生物的作用可通过防腐剂诸如多种抗菌剂和抗真菌剂，包括但不限于对羟基苯甲酸酯类(例如，对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯)、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞或其组合产生。
[0262] 为了增加用本发明的纳米颗粒、纳米凝胶、复合纳米颗粒、纳米悬液或纳米胶囊的治疗的效果，可以预期将这些纳米颗粒、复合纳米颗粒或纳米胶囊与在特定疾病或状况的治疗中有效的其他疗法相组合。
[0263] 可持续延长的时间施用如以上所述的制剂，即，可持续长达疾病或状况的可能性依然存在或症状继续。
[0264] 包装/治疗试剂盒
[0265] 本发明涉及用于方便地并有效地执行根据本发明的方法的试剂盒。此类试剂盒可适用于固体口服剂型诸如片剂或胶囊的递送。这样的试剂盒可包括大量单位剂量。此类试剂盒可包括用于包含以其预期的使用顺序被导向的剂量的工具。包含以其预期的使用顺序的剂量的工具的实例为卡片。此试剂盒的实例是“泡罩包(blister pack)”。泡罩包是包装工业中公知的，并广泛地用于包装药物单位剂型。如果期望的话，泡罩可以是对儿童安全的泡罩的形式，即儿童难以打开而成人可容易地打开的泡罩。如果期望的话，可提供记忆辅助物，所述记忆辅助物例如以数字、字母或其他标记的形式或用日历功能和/或日历插入物提供，所述记忆辅助物表明了其中剂量可被施用的治疗时间表中的天数和一天中的部分，诸如上午的剂量(AM dose)与“中午”和下午剂量(PM dose)一起被包装；或上午剂量与下午剂量一起被包装。可选地，可包括呈类似于药物活性剂量的形式或与其不同的形式的安慰剂剂量、或维生素或膳食补充剂。
[0266] 在一方面，包装、试剂盒或容器包括“泡罩包装(blister package)”(也被称为泡罩包或气泡包)。在一方面，泡罩包装包括两种或更多种单独隔室：本发明的上午剂量、和本发明的下午剂量或本发明的中午剂量。此泡罩包装是由两种单独的材料要素组成：形状适于产品的透明塑料腔及其泡罩背板。然后，这两种要素通过热封过程连接到一起，这允许产品被悬挂或被显示。“泡罩包装”的示例性类型包括：面密封泡罩包装、多槽泡罩包装(gang run blister package)、模拟泡罩包装(mock blister package)、交互泡罩包装、滑动泡罩包装。
[0267] 泡罩包、泡沫塑胶盒或底盘为用于货物的包装形式；因此，本发明提供了包含本发明的组合物(例如，活性成分的组合(本发明的药物的多成分组合))的泡罩包、泡沫塑胶盒或底盘。泡罩包、泡沫塑胶盒或底盘可被设计为不可重新盖紧的，因此消费者可看出来包装是否已经被打开。它们被用于包装其中产品篡改(product tampering)是考虑因素的待售货物，诸如本发明的药物。在一个方面中，被箔层压片覆盖的本发明的泡罩包包括成型的PVC基底，具有增加的面积(“泡罩”)以容纳包含本发明组合的片剂、丸剂等。通过从后面剥离箔或通过推挤泡罩以迫使片剂打破箔，片剂、丸剂等从包中移出。在一个方面中，泡罩包的特定形式是条形包。
[0268] 在一个方面中，泡罩包还包括其中包含本发明成分的组合的组合物被包含于卡和透明PVC之间的包装方法。PVC可以是透明的，因此物品(丸剂、片剂、小胶片(geltab)等)可被看到并容易地被检查；且在一个方面中，PVC可围绕模具周围形成真空，因此它可紧密地包含物品并具有在购买后被打开的空间。在一个方面中，卡取决于内部的物品(丸剂、片剂、小胶片等)被明亮地着色并被设计，且使用其中放置了粘合剂的预先形成的标签将PVC贴到卡上。粘合剂可足够强使得包装可悬挂到钉上，然而足够弱使得通过这种方法人们可撕开连接处并取得物品。有时候，在大的物品或多个被封闭的丸剂、片剂、小胶片等的情况下，卡具有用于获取的打孔的窗口。在一个方面中，例如用于本发明的物品诸如丸剂、片剂、小胶片等的更多个安全泡罩包被使用，且它们可包含在边缘处啮合在一起的两种真空形成的PVC片，在内部具有信息卡。
[0269] 在一个方面中，泡罩包装包含至少两种组分(例如，为本发明药物的多成分组合)：存放产品(例如，本发明的药物组合)的热成形的“泡罩”，和然后为在前表面上具有粘合剂涂层的印刷卡片的“泡罩卡”。在装配过程中，使用泡罩机器将最常见由PVC制成的泡罩组分附接到泡罩卡。该机器将热引到泡罩的翼缘区，其使卡片上在该特定区域的胶起作用并最终将PVC泡罩固定到印刷的泡罩卡上。热形成的PVC泡罩和印刷的泡罩卡可以是小的或大的。常规泡罩包还可使用正规的热密封工具被密封(例如，使用AERGO8SCA Consumer Packaging,Inc.,DeKalb,Ill)。使用热密封工具的该可选的方面，可密封常见的热成形的包装类型。
[0270] 如本文所讨论的，本发明的制品可包含将本发明的治疗药物组合，单独或组合地包装作为“泡罩包装”或作为多个小包，包括如有盖的泡罩包装、有盖泡罩或泡罩卡或小包、或热缩塑料包。
[0271] 在一个方面中，使用了层压的铝箔泡罩包，例如用于制备被设计在患者口中立即溶解的药物。该示例性过程包括使本发明的药物组合制备为水溶液，所述水溶液(例如，根据测量的剂量)分散到泡罩包的铝(例如，铝箔(alufoil))层压的底盘部分。然后，该底盘被冻干以形成呈泡罩袋形状的片剂。底盘和盖子两者的铝箔层压片完全保护了任何高吸湿性和/或易受影响的个体剂量。在一个方面中，包装并入了对儿童安全的剥开安全性层压片。在一个方面中，当它们从水状变化到固态时，系统通过模压(emboss)图案到被片剂所占据的铝箔袋中，给片剂提供了识别标记。在一个方面中，使用了单独的“推开”泡罩包/小包，例如使用硬回火(hard temper)铝(例如，铝箔)有盖材料。在一个方面中，使用了气密密封的高防护铝(例如，铝箔)压层。在一个方面中，本发明任何的制品，包括试剂盒或泡罩包，使用了箔压层和条带包、棒形包、小袋(sachet)和袋状物(pouch)、结合了箔、纸和薄膜的可剥离的和不可剥离的压层用于高防护包装。
[0272] 用于包含所述单位剂量的其他工具可包括瓶和小瓶(vial)，其中瓶或小瓶包含记忆辅助物，诸如用于施用所述单位剂量或多个剂量的印刷的标签。标签还可包含用于放置在日历上的可移除的提醒便签或每日备忘录(dayminder)以进一步辅助患者记住何时服用剂量或何时剂量已被服用。
[0273] 体表制剂(Topical Formulation)
[0274] 如本文采用的术语“体表”是指被掺入到适合的药物载体中的并被应用于部位以发挥局部作用的如本文所述的化合物、衍生物或类似物的使用。因此，此类体表组合物包括其中化合物通过直接与待处理的皮肤表面接触被外部应用的那些形式。用于此目的的常规形式包括软膏、搽剂、霜剂、洗发剂、洗剂、糊剂、凝胶剂、喷雾剂、气溶胶、肥皂等等，并可取决于待治疗的身体的部分以贴片或浸渍的敷料剂应用。术语“软膏”包含具有油质、吸收性、水溶性和乳状基底，例如矿脂、羊毛脂、聚乙二醇、以及这些的混合物的制剂(包括霜剂)。
[0275] 对于体表使用，本发明的剂可使用软膏、霜剂、搽剂或贴片作为活性成分的载体被有利地配制。而且，取决于分配器和使用性质，这些制剂可以包含或不包含防腐剂。此类防腐剂包括以上提到的那些，以及对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、或对羟基苯甲酸丁酯、甜菜碱、氯己定(chlorhexidine)、苯扎氯铵(benzalkonium chloride)等等。用于缓慢释放递送的多种基质也可被使用。典型地，取决于制剂，待应用的剂量是每天约0.1ng到约100mg的范围、或每天约1ng到约10mg的范围、或每天约10ng到约1mg的范围。体表制品的非限制性实例可包括但不限于涂抹棒、睫毛膏、眉着色制品、眼影或其他眼睑着色制品、眼线膏、卸妆制品、抗衰老制品、面部或身体粉、指甲油、摩丝、喷雾剂、定型胶、护甲素(nail conditioner)、沐浴露、洗发水、调理剂(conditioner)、营养发水(cream rinse)、染发和着色制品、护发素、防晒乳液(sun tanning lotion)和霜剂和喷雾剂、遮光剂和防晒霜、皮肤调理剂、冷霜、保湿剂、头发喷雾剂、肥皂、身体磨砂膏、去角质剂、收敛剂、脱毛剂和烫发溶液、去头屑制剂、除汗剂和止汗剂组合物、剃须膏、剃须前和剃须后制品、保湿剂、除臭剂、冷霜、清洁剂、皮肤凝胶剂和冲洗剂。
[0277] 例如，体表制品可例如通过应用预期留在皮肤上或其他角质组织上(即，“留置型(leave-on)”组合物)的皮肤洗剂、清理洗剂、乳状洗剂、霜剂、凝胶剂、泡沫剂、软膏、糊剂、乳剂、喷雾剂、调理剂、补剂、化妆品、涂抹棒、笔状物、粉底、指甲油、须后水等等的形式的组合物被应用。在应用组合物到角质组织(例如，皮肤)之后，其在一个实施方案中，其被留置持续至少约15分钟、或至少约30分钟、或至少约1小时、或持续至少几个小时例如多达约12小时的时间段。在一个实施方案中，体表制品被留置过夜，在另一个实施方案中，体表制品被留置全天。面部、头发和/或指甲的外部的任何部分可被处理(例如，脸、嘴唇、下眼区、眼睑、头皮、颈部、躯干、手臂、腿、胸、手、腿、脚、手指甲、脚趾甲、头发、睫毛、眉毛等)。
[0278] 任何合适方法可被用于应用体表制品，包括但不限于例如使用手的手掌和/或手指或装置或工具(例如，棉球、药签、衬垫、涂抹笔、喷雾涂布器、眉刷、眉刷笔状物、笔状物、睫毛刷等)。确保角质组织持续地暴露到至少最低水平的体表制品的另一种方法是通过使用被应用到例如面部的贴片来应用化合物。贴片可为闭合的、半闭合的或非闭合的，并可以是粘合的或非粘合的。体表制品可被包含在贴片之内或在贴片应用之前被应用到皮肤。贴片还可包括另外的活性物质诸如用于放热反应的化学指示剂，诸如于PCT申请WO9701313和Wu等的美国专利号5,821,250、5,981,547、和5,972,957中描述的那些。贴片可留置持续任何适合的时间段。例如，至少约5分钟、或至少约15分钟、或至少约30分钟、或至少约1小时、或在夜间作为夜用疗法的形式，或在另一个实施方案中全天的时间段。
[0279] 施用
[0280] 药物组合物可被优化用于特定类型的递送。例如，使用本领域公知的药学上可接受的载体配制用于口服递送的药物组合物。载体使在组合物中的剂被配制例如作为用于通过受试者口服摄取的片剂、丸剂、胶囊、溶液、悬液、持续释放制剂、粉末、液体或凝胶。
[0281] 药物组合物还可从加压罐、喷雾器或从干粉吸入器中以气溶胶喷雾制品被递送。可被用于喷雾器的适合的推进剂包括，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷和二氧化碳。在加压气溶胶的情况下，剂量可通过提供阀以递送受控量的化合物而被确定。
[0282] 用于吸入或吹入的组合物包括在药学上可接受的水性溶剂或有机溶剂或其混合物中的溶液和悬液、以及粉末。液体或固体组合物可包含如以上列出的适合的药学上可接受的赋形剂。优选地，组合物通过口服、经鼻或呼吸途径被施用用于局部或全身效果。优选的无菌药学上可接受的溶剂中的组合物可通过使用惰性气体被喷雾。喷雾的溶液可从喷雾装置直接地被呼吸或喷雾装置可被附接到面罩、面罩吸入器(face tent)或间歇性正压呼吸机。溶液、悬液或粉末组合物可从以适当方式递送制剂的装置中被优选地口服或经鼻施用。
[0283] 典型地，组合物可反复持续一段时间地局部应用到待治疗的身体部分，例如眼睑、眉毛、皮肤或头皮。给药方案通常将包含定期施用，诸如每日施用持续至少一个月、或至少三个月、或至少6个月的治疗时间。
[0284] 可选地，组合物可间歇地或以脉冲的方式被应用。因此，本发明的可选实施方案为按照间歇或脉冲的剂量时间表应用组合物。例如，本发明的组合物可被使用2天或更多天，停止，然后在从2周到3个月以后的时间再次重新开始，且在头皮的情况下以甚至更长间隔的时间再次重新开始。
[0285] 本发明的化合物的施用途径将随待治疗的状况的位置和性质和制剂而自然地改变，并包括例如吸入、皮内、透皮(transdermal)、肠胃外、静脉内、肌内、鼻内、皮下、经皮(percutaneous)、气管内、腹膜内、肿瘤内、灌注、灌洗、直接注射、及口服施用。如以下详述的，GR拮抗剂可作为通过吸入或插管的医用气体，作为通过血管内、静脉内、动脉内、脑室内(intracerobroventicular)、腹膜内、皮下施用的可注射液体，作为体表液体或凝胶，或以固体口服剂型被施用。
[0286] 此外，量可取决于生物材料的类型(细胞类型、组织类型、生物体的属和种等)和/或其尺寸(重量、表面面积等)而变化。情况通常将是生物体越大，剂量越大。因此，用于小鼠的有效量将通常比用于大鼠的有效量更低，用于大鼠的有效量通常将比用于狗的有效量更低，用于狗的有效量将通常比用于人的有效量更低。本发明的化合物例如在人中实现静态平衡的有效浓度，取决于剂型和施用途径。对于吸入，在一些实施方案中有效浓度是以50ppm到500ppm的范围连续地递送。对于静脉内给药，在一些实施方案中有效浓度是以0.5毫克到50毫克每千克体重连续地递送。
[0287] 类似地，施用的时间长度可根据生物物质的类型(细胞类型、组织类型、生物体的属和种等)和/或其尺寸(重量、表面面积等)变化并将部分地依赖于剂型和施用途径。在特定实施方案中，本发明的化合物可被提供持续大约或至少30秒、1分钟、2分钟、3分钟、5分钟、10分钟、15分钟、30分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、8小时、12小时、24小时、或大于24小时。本发明的化合物可以以单次剂量或多次剂量被施用，施用的剂量之间具有变化的时间量。
[0288] 治疗可包括多个“单位剂量”。单位剂量被定义为包含治疗组合物的预先确定的量。待被施用的量、和特定途径和制剂在临床领域中技术人员的技能之内。单位剂量不需要作为单次注射被施用，而可包含经设定时间段的连续输注。可选地，具体的量可以是施用作为平均每日、平均每周或平均每月剂量的量。
[0289] 在移植物的情况下，本发明可在手术前或手术后被使用以使得宿主或移植物材料不引起病痛(quiescent)。在具体实施方案中，30个手术部位可被注射或灌注有包含GR拮抗剂的制剂。灌注可在手术后继续，例如通过在手术部位留下植入的导管。
[0290] 另外的递送设备或装置
[0291] 在一些实施方案中，预期方法或组合物将包括特定递送设备或装置。本文所讨论的任何方法可通过用于递送或施用的任何设备实施，包括但不限于本文所讨论的那些。
[0292] 对于体表施用，本发明的GR拮抗剂可被配制为如本领域所公知的溶液、凝胶、软膏、膏剂、悬浮剂等。全身性制剂可包括被设计用于通过注射或输注例如皮下、静脉内、肌肉内、鞘内或腹膜内注射施用的那些，以及被设计用于经皮、透粘膜、口服或肺部施用的那些。
[0293] 对于口服施用，本发明的GR拮抗剂被配制为片剂、丸剂、糖衣丸、胶囊、液体、凝胶、糖浆剂、浆液、悬液等等，用于被待治疗的患者口服摄入或口服液体制品诸如例如悬液、酏剂和溶液。
[0294] 对于含服施用，组合物可采取以常规手段配制的片剂、锭剂等的形式。其他粘膜内递送可通过栓剂或鼻内地。
[0295] 对于通过吸入直接施用到肺，可通过许多不同设备将本发明的化合物方便地递送到肺。
[0296] 另一药物递送系统包括一种或更多种球形半导体聚集体并促进储存在容器中的药物的释放。第一聚集体被用于传感和记忆，且第二聚集体用于控制方面，诸如用于药物的泵送和分配。系统可与远程控制系统通讯，或凭借本地电源经很长一段时间独立地操作用于基于患者的请求的药物递送、系统控制下的定时释放、或根据测量的标志物的递送。参见美国专利号6,464,687，在此通过引用以其全部内容被并入。
[0297] PUMPS和输注设备：输注泵或灌注器(perfusor)将液体、药物或营养物灌注到患者循环系统中。输注泵可以以非常可靠和便宜的方式施用液体。例如，它们可施用少至0.1mL每小时注射(对于滴液而言太小)、每分钟注射、由患者所请求的反复推注的注射、多达每小时最大数量(例如在病人自控性镇痛中)、或其体积随每天的时间变化的流体。
[0298] 可植入的药物递送系统：另一个药物递送系统包含一种或更多种球形半导体聚集体并促进储存在容器中的药物的释放。第一聚集体被用于传感和记忆，且第二聚集体用于控制方面，诸如用于药物的泵送和分配。系统可与远程控制系统通讯，或凭借本地电源经很长一段时间独立地操作用于基于患者的请求的药物递送、系统控制下的定时释放、或根据测量的标志物的递送。参见美国专利号6,464,687，在此通过引用以其全部内容被并入。
[0299] 诊断系统和试剂盒
[0300] 诊断试剂盒可包括以下组分的一些或全部：1)一种或更多种标准品，所述标准品包含一种或更多种本发明的生物标志物诸如皮质醇；2)配体，诸如抗体或多种抗体，其对使用试剂盒分析的生物标志物是特异性的；3)书面说明书；4)用于样品和标准品的稀释剂；5)洗涤缓冲液；6)显色剂；7)终止溶液；和8)配体载体，诸如抗体载体，例如侧向流装置、或带有结合的抗体的微型板、或聚丙烯珠。此试剂盒的实例在美国专利申请公布号20120201747(Altschul等)中列出，在此以其全部内容被并入。
[0301] 本发明将参考以下实施例被更详细地阐述，然而应当理解本发明不被认为被其所限制。实施例
[0302] 实施例1.ORG 34517与酒精的共施用显著地减少了酒精戒断行为异常(图1A)。连续4天中的08:00小时即将无节制酒精施用(胃内)前每天一次施用选择性糖皮质激素受体拮抗剂ORG 34517(20mg/kg；皮下)，显著地减少了在成年雄性大鼠中酒精戒断综合征的行为症状。全身震颤和甩水抖动的减少是最明显的。*＝与对照相比P<0.05；**＝与酒精戒断(酒精戒断)相比P<0.001。4天疗程内的血液酒精峰水平为180.27-103.5mg/dl。对无酒精大鼠施用ORG 34517没有以任何方式改变行为。此外，与在仅接受酒精和ORG 34517媒介物的动物中得到的中毒评级相比，经过4天每天3次酒精施用的每一次施用之后的8小时确定的平均中毒评级没有被ORG34517施用所改变(图1B)。
[0303] 这些发现结果证明，在酒精中毒期间糖皮质激素受体的特定药理学抑制显著地减少了酒精戒断的行为症状，该作用与酒精中毒或其他不良作用的减少不相关。
[0304] 实施例2.皮质酮对酒精戒断毒性的加重通过ORG 34517共施用阻断。将器官型海马脑切片培养物暴露到皮质酮(1μΜ)与酒精(50mM)，随后为在皮质酮存在下的1天酒精戒断，在CA1区域椎体细胞中产生了显著毒性(摄取了非致命的标志物碘化丙啶，以下显示)(20x)(图2)。单独暴露于皮质酮或ORG 34517HCl(100μΜ)没有改变碘化丙啶摄取。共暴露于选择性糖皮质激素受体拮抗剂ORG 34517与酒精和皮质酮阻止了此戒断毒性。上面为代表性PI图，下面为图表。与*＝对照相比P<0.05；**＝与酒精戒断+皮质酮相比P<0.05。
[0305] 这些发现结果证明了，在酒精暴露期间糖皮质激素受体的特定药理学抑制在体外显著地减少了酒精戒断诱导的神经元兴奋性和损伤。
[0306] 尽管本发明已详细地并参考其具体实施例被描述，各种变化和修改可在其中被做出而不偏离本发明的精神和范围，这对本领域技术人员而言是明显的。
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