专利汇可以提供人骨形成蛋白-4成熟肽的大肠杆菌高表达载体和制备方法专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且本 发明 涉及人骨形成蛋白-4成熟肽的大肠杆菌表达载体及其所表达的人骨形成蛋白-4成熟肽的制备方法。所述的载体是指用分子克隆技术重组获得的大肠杆菌表达载体pDH2-hB4m,载体全长4,014个核苷酸对;所述利用表达载体pDH2-hB4m制备具有 生物 学活性人骨形成蛋白-4成熟肽的方法,包括宿主菌转化表达、培养、纯化、复性、活性鉴定步骤。本发明所提供的大肠杆菌高表达载体和用该载体转化宿主菌表达人骨形成蛋白-4成熟肽的制备方法,可以作为新的基因工程产品及其方法推向临床 治疗 、诊断和科学研究应用,并推向市场。,下面是人骨形成蛋白-4成熟肽的大肠杆菌高表达载体和制备方法专利的具体信息内容。
1、一种人骨形成蛋白-4成熟肽的大肠杆菌表达载体,其特征在于:所述的人骨形 成蛋白-4成熟肽的大肠杆菌表达载体是指用分子克隆技术将从人体组织cDNA文库中扩 增得到人骨形成蛋白-4成熟肽的cDNA序列,再克隆重组获得的大肠杆菌表达载体 pDH2-hB4m,该载体能够在大肠杆菌中高水平表达出人骨形成蛋白-4成熟肽,载体DNA 全长4,014个核苷酸对,全部核苷酸序列如下:
1 AGATCTCTCT CACCTACCAA ACAATGCCCC CCTGCAAAAA ATAAATTCAT ATAAAAAACA
TCTAGAGAGA GTGGATGGTT TGTTACGGGG GGACGTTTTT TATTTAAGTA TATTTTTTGT
61 TACAGATAAC CATCTGCGGT GATAAATTAT CTCTGGCGGT GTTGACATAA ATACCACTGG
ATGTCTATTG GTAGACGCCA CTATTTAATA GAGACCGCCA CAACTGTATT TATGGTGACC
121 CGGTGATACT GAGCACATCA GCAGGACGCA CTGACCACCA TGAAGGTGAC GCTCTTAAAA
GCCACTATGA CTCGTGTAGT CGTCCTGCGT GACTGGTGGT ACTTCCACTG CGAGAATTTT
181 ATTAAGCCCT GAAGAAGGGC AGCATTCAAA GCAGAAGGCT TTGGGGTGTG TGATACGAAA
TAATTCGGGA CTTCTTCCCG TCGTAAGTTT CGTCTTCCGA AACCCCACAC ACTATGCTTT
241 CGAAGCATTG GTTAAAAATT AAGGAGAATT CATGAAGCAT CACTCACAGC GGGCCAGGAA
GCTTCGTAAC CAATTTTTAA TTCCTCTTAA GTACTTCGTA GTGAGTGTCG CCCGGTCCTT
301 GAAGAATAAG AACTGCCGGC GCCACTCGCT CTATGTGGAC TTCAGCGATG TGGGCTGGAA
CTTCTTATTC TTGACGGCCG CGGTGAGCGA GATACACCTG AAGTCGCTAC ACCCGACCTT
361 TGACTGGATT GTGGCCCCAC CAGGCTACCA GGCCTTCTAC TGCCATGGGG ACTGCCCCTT
ACTGACCTAA CACCGGGGTG GTCCGATGGT CCGGAAGATG ACGGTACCCC TGACGGGGAA
421 TCCACTGGCT GACCACCTCA ACTCAACCAA CCATGCCATT GTGCAGACCC TGGTCAATTC
AGGTGACCGA CTGGTGGAGT TGAGTTGGTT GGTACGGTAA CACGTCTGGG ACCAGTTAAG
481 TGTCAATTCC AGTATCCCCA AAGCCTGTTG TGTGCCCACT GAACTGAGTG CCATCTCCAT
ACAGTTAAGG TCATAGGGGT TTCGGACAAC ACACGGGTGA CTTGACTCAC GGTAGAGGTA
541 GCTGTACCTG GATGAGTATG ATAAGGTGGT ACTGAAAAAT TATCAGGAGA TGGTAGTAGA
CGACATGGAC CTACTCATAC TATTCCACCA TGACTTTTTA ATAGTCCTCT ACCATCATCT
601 GGGATGTGGG TGCCGCTGAT AATCTAGAGT CGACCTGCAG GCATGCAAGC TTCTGTTTTG
CCCTACACCC ACGGCGACTA TTAGATCTCA GCTGGACGTC CGTACGTTCG AAGACAAAAC
661 GCGGATGAGA GAAGATTTTC AGCCTGATAC AGCTTAAATC AGAACGCAGA AGCGGTCTGA
CGCCTACTCT CTTCTAAAAG TCGGACTATG TCGAATTTAG TCTTGCGTCT TCGCCAGACT
721 TAAAACAGAA TTTGCCTCCC GGCAGTAGCG CGGTGGTCCC ACCTGACCCC ATGCCGAACT
ATTTTGTCTT AAACGGAGGG CCGTCATCGC GCCACCAGGG TGGACTGGGG TACGGCTTGA
781 CAGAAGTGAA ACGCCGTAGC GCCGATGGTA GTGTGGGGTC TCCCCATGCG AGAGTAGCCA
GTCTTCACTT TGCGGCATCG CGGCTACCAT CACACCCCAG AGGGGTACGC TCTCATCGGT
841 ACTGCCAGGC ATCAAATAAA ACGAAAGGCT CAGTCGAAAG ACTGGGCCTT TCGTTTTATC
TGACGGTCCG TAGTTTATTT TGCTTTCCGA GTCAGCTTTC TGACCCGGAA AGCAAAATAG
901 TGTTGTTTGT CGGTGAACGC TCTCCTGAGT AGGACAAATC CGCCGGGAGC GGATTTGAAC
ACAACAAACA GCCACTTGCG AGAGGACTCA TCCTGTTTAG GCGGCCCTCG CCTAAACTTG
961 GTTGCGAAGC AACGGCCCGG AGGGTGGCGG GCAGGACGCC CGCCATAAAC TGCCAGGCAT
CAACGCTTCG TTGCCGGGCC TCCCACCGCC CGTCCTGCGG GCGGTATTTG ACGGTCCGTA
1021 CAAATTAAGC AGAAGGCCAT CCTGACGGAT GGCCTTTTTG CGTTTCTACA AACTCTTTGT
GTTTAATTCG TCTTCCGGTA GGACTGCCTA CCGGAAAAAC GCAAAGATGT TTGAGAAACA
1081 TTATTTTTCT AAATACATTC AAATATGTAT CCGCTCATGA GACAATAACC CTGATAAATG
AATAAAAAGA TTTATGTAAG TTTATACATA GGCGAGTACT CTGTTATTGG GACTATTTAC
1141 CTTCAATAAT ATTGAAAAAG GAAGAGTATG AGTATTCAAC ATTTCCGTGT CGCCCTTATT
GAAGTTATTA TAACTTTTTC CTTCTCATAC TCATAAGTTG TAAAGGCACA GCGGGAATAA
1201 CCCTTTTTTG CGGCATTTTG CCTTCCTGTT TTTGCTCACC CAGAAACGCT GGTGAAAGTA
GGGAAAAAAC GCCGTAAAAC GGAAGGACAA AAACGAGTGG GTCTTTGCGA CCACTTTCAT
1261 AAAGATGCTG AAGATCAGTT GGGTGCACGA GTGGGTTACA TCGAACTGGA TCTCAACAGC
TTTCTACGAC TTCTAGTCAA CCCACGTGCT CACCCAATGT AGCTTGACCT AGAGTTGTCG
1321 GGTAAGATCC TTGAGAGTTT TCGCCCCGAA GAACGTTTTC CAATGATGAG CACTTTTAAA
CCATTCTAGG AACTCTCAAA AGCGGGGCTT CTTGCAAAAG GTTACTACTC GTGAAAATTT
1381 GTTCTGCTAT GTGGCGCGGT ATTATCCCGT ATTGACGCCG GGCAAGAGCA ACTCGGTCGC
CAAGACGATA CACCGCGCCA TAATAGGGCA TAACTGCGGC CCGTTCTCGT TGAGCCAGCG
1441 CGCATACACT ATTCTCAGAA TGACTTGGTT GAGTACTCAC CAGTCACAGA AAAGCATCTT
GCGTATGTGA TAAGAGTCTT ACTGAACCAA CTCATGAGTG GTCAGTGTCT TTTCGTAGAA
1501 ACGGATGGCA TGACAGTAAG AGAATTATGC AGTGCTGCCA TAACCATGAG TGATAACACT
TGCCTACCGT ACTGTCATTC TCTTAATACG TCACGACGGT ATTGGTACTC ACTATTGTGA
1561 GCGGCCAACT TACTTCTGAC AACGATCGGA GGACCGAAGG AGCTAACCGC TTTTTTGCAC
CGCCGGTTGA ATGAAGACTG TTGCTAGCCT CCTGGCTTCC TCGATTGGCG AAAAAACGTG
1621 AACATGGGGG ATCATGTAAC TCGCCTTGAT CGTTGGGAAC CGGAGCTGAA TGAAGCCATA
TTGTACCCCC TAGTACATTG AGCGGAACTA GCAACCCTTG GCCTCGACTT ACTTCGGTAT
1681 CCAAACGACG AGCGTGACAC CACGATGCCT GTAGCAATGG CAACAACGTT GCGCAAACTA
GGTTTGCTGC TCGCACTGTG GTGCTACGGA CATCGTTACC GTTGTTGCAA CGCGTTTGAT
1741 TTAACTGGCG AACTACTTAC TCTAGCTTCC CGGCAACAAT TAATAGACTG GATGGAGGCG
AATTGACCGC TTGATGAATG AGATCGAAGG GCCGTTGTTA ATTATCTGAC CTACCTCCGC
1801 GATAAAGTTG CAGGACCACT TCTGCGCTCG GCCCTTCCGG CTGGCTGGTT TATTGCTGAT
CTATTTCAAC GTCCTGGTGA AGACGCGAGC CGGGAAGGCC GACCGACCAA ATAACGACTA
1861 AAATCTGGAG CCGGTGAGCG TGGGTCTCGC GGTATCATTG CAGCACTGGG GCCAGATGGT
TTTAGACCTC GGCCACTCGC ACCCAGAGCG CCATAGTAAC GTCGTGACCC CGGTCTACCA
1921 AAGCCCTCCC GTATCGTAGT TATCTACACG ACGGGGAGTC AGGCAACTAT GGATGAACGA
TTCGGGAGGG CATAGCATCA ATAGATGTGC TGCCCCTCAG TCCGTTGATA CCTACTTGCT
1981 AATAGACAGA TCGCTGAGAT AGGTGCCTCA CTGATTAAGC ATTGGTAACT GTCAGACCAA
TTATCTGTCT AGCGACTCTA TCCACGGAGT GACTAATTCG TAACCATTGA CAGTCTGGTT
2041 GTTTACTCAT ATATACTTTA GATTGATTTA AAACTTCATT TTTAATTTAA AAGGATCTAG
CAAATGAGTA TATATGAAAT CTAACTAAAT TTTGAAGTAA AAATTAAATT TTCCTAGATC
2101 GTGAAGATCC TTTTTGATAA TCTCATGACC AAAATCCCTT AACGTGAGTT TTCGTTCCAC
CACTTCTAGG AAAAACTATT AGAGTACTGG TTTTAGGGAA TTGCACTCAA AAGCAAGGTG
2161 TGAGCGTCAG ACCCCGTAGA AAAGATCAAA GGATCTTCTT GAGATCCTTT TTTTCTGCGC
ACTCGCAGTC TGGGGCATCT TTTCTAGTTT CCTAGAAGAA CTCTAGGAAA AAAAGACGCG
2221 GTAATCTGCT GCTTGCAAAC AAAAAAACCA CCGCTACCAG CGGTGGTTTG TTTGCCGGAT
CATTAGACGA CGAACGTTTG TTTTTTTGGT GGCGATGGTC GCCACCAAAC AAACGGCCTA
2281 CAAGAGCTAC CAACTCTTTT TCCGAAGGTA ACTGGCTTCA GCAGAGCGCA GATACCAAAT
GTTCTCGATG GTTGAGAAAA AGGCTTCCAT TGACCGAAGT CGTCTCGCGT CTATGGTTTA
2341 ACTGTCCTTC TAGTGTAGCC GTAGTTAGGC CACCACTTCA AGAACTCTGT AGCACCGCCT
TGACAGGAAG ATCACATCGG CATCAATCCG GTGGTGAAGT TCTTGAGACA TCGTGGCGGA
2401 ACATACCTCG CTCTGCTAAT CCTGTTACCA GTGGCTGCTG CCAGTGGCGA TAAGTCGTGT
TGTATGGAGC GAGACGATTA GGACAATGGT CACCGACGAC GGTCACCGCT ATTCAGCACA
2461 CTTACCGGGT TGGACTCAAG ACGATAGTTA CCGGATAAGG CGCAGCGGTC GGGCTGAACG
GAATGGCCCA ACCTGAGTTC TGCTATCAAT GGCCTATTCC GCGTCGCCAG CCCGACTTGC
2521 GGGGGTTCGT GCACACAGCC CAGCTTGGAG CGAACGACCT ACACCGAACT GAGATACCTA
CCCCCAAGCA CGTGTGTCGG GTCGAACCTC GCTTGCTGGA TGTGGCTTGA CTCTATGGAT
2581 CAGCGTGAGC ATTGAGAAAG CGCCACGCTT CCCGAAGGGA GAAAGGCGGA CAGGTATCCG
GTCGCACTCG TAACTCTTTC GCGGTGCGAA GGGCTTCCCT CTTTCCGCCT GTCCATAGGC
2641 GTAAGCGGCA GGGTCGGAAC AGGAGAGCGC ACGAGGGAGC TTCCAGGGGG AAACGCCTGG
CATTCGCCGT CCCAGCCTTG TCCTCTCGCG TGCTCCCTCG AAGGTCCCCC TTTGCGGACC
2701 TATCTTTATA GTCCTGTCGG GTTTCGCCAC CTCTGACTTG AGCGTCGATT TTTGTGATGC
ATAGAAATAT CAGGACAGCC CAAAGCGGTG GAGACTGAAC TCGCAGCTAA AAACACTACG
2761 TCGTCAGGGG GGCGGAGCCT ATGGAAAAAC GCCAGCAACG CGGCCTTTTT ACGGTTCCTG
AGCAGTCCCC CCGCCTCGGA TACCTTTTTG CGGTCGTTGC GCCGGAAAAA TGCCAAGGAC
2821 GCCTTTTGCT GGCCTTTTGC TCACATGTTC TTTCCTGCGT TATCCCCTGA TTCTGTGGAT
CGGAAAACGA CCGGAAAACG AGTGTACAAG AAAGGACGCA ATAGGGGACT AAGACACCTA
2881 AACCGTATTA CCGCCTTTGA GTGAGCTGAT ACCGCTCGCC GCAGCCGAAC GACCGAGCGC
TTGGCATAAT GGCGGAAACT CACTCGACTA TGGCGAGCGG CGTCGGCTTG CTGGCTCGCG
2941 AGCGAGTCAG TGAGCGAGGA AGCGGAAGAG CGCCCTTATC TTTCCCTTTA TTTTTGCTGC
TCGCTCAGTC ACTCGCTCCT TCGCCTTCTC GCGGGAATAG AAAGGGAAAT AAAAACGACG
3001 GGTAAGTCGC ATAAAAACCA TTCTTCATAA TTCAATCCAT TTACTATGTT ATGTTCTGAG
CCATTCAGCG TATTTTTGGT AAGAAGTATT AAGTTAGGTA AATGATACAA TACAAGACTC
3061 GGGAGTGAAA ATTCCCCTAA TTCGATGAAG ATTCTTGCTC AATTGTTATC AGCTATGCGC
CCCTCACTTT TAAGGGGATT AAGCTACTTC TAAGAACGAG TTAACAATAG TCGATACGCG
3121 CGACCAGAAC ACCTTGCCGA TCAGCCAAAC GTCTCTTCAG GCCACTGACT AGCGATAACT
GCTGGTCTTG TGGAACGGCT AGTCGGTTTG CAGAGAAGTC CGGTGACTGA TCGCTATTGA
3181 TTCCCCACAA CGGAACAACT CTCATTGCAT GGGATCATTG GGTACTGTGG GTTTAGTGGT
AAGGGGTGTT GCCTTGTTGA GAGTAACGTA CCCTAGTAAC CCATGACACC CAAATCACCA
3241 TGTAAAAACA CCTGACCGCT ATCCCTGATC AGTTTCTTGA AGGTAAACTC ATCACCCCCA
ACATTTTTGT GGACTGGCGA TAGGGACTAG TCAAAGAACT TCCATTTGAG TAGTGGGGGT
3301 AGTCTGGCTA TCCAGAAATC ACCTGGCTCA ACAGCCTGCT CAGGGTCAAC GAGAATTAAC
TCAGACCGAT AGGTCTTTAG TGGACCGAGT TGTCGGACGA GTCCCAGTTG CTCTTAATTG
3361 ATTCCGTCAG GAAAGCTCGG CTTGGAGCCT GTTGGTGCGG TCATGGAATT ACCTTCAACC
TAAGGCAGTC CTTTCGAGCC GAACCTCGGA CAACCACGCC AGTACCTTAA TGGAAGTTGG
3421 TCAAGCCAGA ATGCAGAATC ACTGGCTTTT TTGGTTGTGC TTACCCATCT CTCCGAATCA
AGTTCGGTCT TACGTCTTAG TGACCGAAAA AACCAACACG AATGGGTAGA GAGGCTTAGT
3481 CCTTTGGTAA AGGTTCTCAG CTTAGGTGAG AACATCCCTG CCTGAACATG AGAAAAAACA
GGAAACCATT TCCAAGAGTC GAATCCACTC TTGTAGGGAC GGACTTGTAC TCTTTTTTGT
3541 GGGTACTCAT ACTCACTTCT AAGTGACGGC TGCATACTAA CCGCTTCATA CATCTCGTAG
CCCATGAGTA TGAGTGAAGA TTCACTGCCG ACGTATGATT GGCGAAGTAT GTAGAGCATC
3601 ATTTCTCTGG CGATTGAAGG GCTAAATTCT TCAAGGCTAA CTTTGAGAAT TTTTGCAAGC
TAAAGAGACC GCTAACTTCC CGATTTAAGA AGTTCCGATT GAAACTCTTA AAAACGTTCG
3661 AATGCGGCGT TATAAGCATT TAATGCATTG ATGCCATTAA ATAAAGCACC AACGCCTGAC
TTACGCCGCA ATATTCGTAA ATTACGTAAC TACGGTAATT TATTTCGTGG TTGCGGACTG
3721 TGGGCCATCC CCATCTTGTC TGCGACAGAT TCCTGGGATA AGCCAAGTTC ATTTTTCTTT
ACCCGGTAGG GGTAGAACAG ACGCTGTCTA AGGACCCTAT TCGGTTCAAG TAAAAAGAAA
3781 TTTTCATAAA TTGCTTTAAG GCCACGTGCG TCCTCAAGCT GCTCTTGTGT TAATGGTTTC
AAAAGTATTT AACGAAATTC CGGTGCACGC AGGAGTTCGA CGAGAACACA ATTACCAAAG
3841 TTTTTTGTGC TCATACGTTA AATCTATGAC CGCAAGGGAT AAATATCTAA CACCGTGCGT
AAAAAACACG AGTATGCAAT TTAGATACTG GCGTTCCCTA TTTATAGATT GTGGCACGCA
3901 GTTGACTATT TTAGCTCTGG CGGTGATAAT GGTTGCATGT ACTAAGGTTG TATGGAACAA
CAACTGATAA AATCGAGACC GCCACTATTA CCAACGTACA TGATTCCAAC ATACCTTGTT
3961 CGCATAACCC TGAAAGATTA TGCAATGCGC TTTGGGCAAA CCAAGACAGC TAAA
GCGTATTGGG ACTTTCTAAT ACGTTACGCG AAACCCGTTT GGTTCTGTCG ATTT。
2、一种用权利要求1所述的人骨形成蛋白-4成熟肽的大肠杆菌表达载体制备人骨 形成蛋白-4成熟肽的方法,包括宿主菌转化表达、培养、纯化、复性、活性鉴定过程, 其特征在于:具体步骤如下:
步骤1:用权利要求1所述的表达载体pDH2-hB4m转化大肠杆菌宿主菌,构建成为 能够表达人骨形成蛋白-4成熟肽的细菌;所述的大肠杆菌宿主菌是指公知的大肠杆菌 DH5α或TOP10或TAP106或TB1或用于基因工程可转化的大肠杆菌;
步骤2:采用在培养器中震摇培养液或在发酵罐中发酵的方法,对经表达载体 pDH2-hB4m转化的大肠杆菌扩大培养后,升高温度,诱导表达人骨形成蛋白-4成熟肽;
具体方法为:
菌种复苏及培养扩增:取-70℃保存的pDH2-hB4m/DH5α菌甘油菌种,划LB琼脂 平板,32℃培养20小时;挑单菌落入6ml LB琼脂平板,30℃摇床培养16小时;然后转 入300ml LB琼脂平板,30℃摇床培养10小时;
恒溶氧高密度培养:转入15升发酵罐30℃培养,计算机自动控制搅拌、通气溶氧, 30℃培养16小时,取样检测OD600值=33;
恒溶氧高密度培养诱导表达:15升发酵罐42℃诱导表达6小时,结束发酵,取出 全部发酵液,取样检测OD600值=43.5;
离心收菌:4℃、6000rpm,离心20min,收得菌体;
步骤3:收集经诱导表达后的细菌,用包括加入溶菌酶、DNA酶、超声波的化学物 理手段裂解细菌,获得包涵体,对包涵体进行洗涤纯化;具体方法为:
向收得的湿菌体加入裂解缓冲液,加溶菌酶,冰浴中超声裂菌;离心所得包涵体沉 淀,经过4次离心洗涤,收得包涵体;
裂菌、包涵体洗涤步骤的具体过程如下:
裂解缓冲液,加溶菌酶,冰浴中超声裂菌;
离心所得包涵体沉淀,2~6次离心洗涤,取包涵体沉淀样作电泳分析;
步骤4:用变性剂溶解包涵体,经离子交换层析纯化人骨形成蛋白-4成熟肽;具体 方法为:
洗涤后的包涵体溶解于6~8M尿素pH3~7缓冲液中,上离子柱层析,依次用不同 摩尔浓度NaCl洗脱得洗脱峰液1、2、3;
收集合并洗脱峰液2,透析去除尿素,离心,得湿沉淀;
步骤5:用稀释复性或透析复性或凝胶过滤复性或层析柱上复性的方法,使纯化的 人骨形成蛋白-4成熟肽复性成为有生物学活性的产品;具体方法为:
将经离子交换柱层析纯化的蛋白质湿沉淀样品溶解于8M尿素pH6.5缓冲液中,10℃ 环境下对6M尿素pH4.8缓冲液透析48h,再对10mMpH4.8缓冲液透析去除尿素;取出透 析液,为无色透明液体,蛋白质处于完全溶解的水溶液状态;
步骤6:用凝胶过滤或离子交换层析或疏水层析或亲和层析的方法分离复性后的人 骨形成蛋白-4成熟肽二聚体;
步骤7:对复性后的人骨形成蛋白-4成熟肽进行理化鉴定;包括以下内容:
蛋白质定量分析:用BCA法作蛋白质定量,复性的蛋白质溶液浓度为4.32mg/ml; 计算经离子交换柱层析纯化的蛋白质湿沉淀样品每克含蛋白质为:4.32mg/ml×50ml= 216mg,即按蛋白质约占湿沉淀样品重量的20%,并计算rhBMP-4m的收获量;
分析复性后的rhBMP-4m二聚体含量:取复性后的rhBMP-4m作还原和非还原 SDS-PAGE电泳分析,还原电泳图显示rhBMP-4m纯度>98%,非还原电泳图显示rhBMP-4m 二聚体占蛋白量的43%;
测定纯化的rhBMP-4m氨基酸序列:测定纯化的rhBMP-4m氨基端即N-端20个氨基 酸序列和羧基端即C端的氨基酸,结果与设计的预期完全一致,N-端的第一个蛋氨酸己 被切除;从编码的cDNA序列推断和实际测定结果可知rhBMP-4m蛋白由116个氨基酸组 成;测定所取得的人骨形成蛋白-4成熟肽的氨基酸序列;
步骤8:检测复性后的人骨形成蛋白-4成熟肽及其二聚体的生物学活性;包括用对 特定培养细胞株的刺激的体外实验方法、用整体动物诱导异位骨组织生成的方法检测复 性后的人骨形成蛋白-4成熟肽的生物学活性。
3、根据权利要求2所述的制备人骨形成蛋白-4成熟肽的方法,其特征在于:所述 的不同摩尔浓度NaCl溶液分别为0.1~0.3M、0.4~0.8M、0.9~1.2M。
本发明属于生物工程技术领域,涉及人骨形成蛋白-4成熟肽的大肠杆菌表达载体及 其所表达的人骨形成蛋白-4成熟肽的制备方法。
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