一种具有ACE抑制活性的银杏果蛋白肽及其制备方法
专利汇可以提供一种具有ACE抑制活性的银杏果蛋白肽及其制备方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种具有ACE抑制活性的 银 杏果蛋白肽的制备方法。具体步骤如下：将新鲜银杏果脱壳、 粉碎 处理后提取 粗蛋白 ；粗蛋白经蛋白酶酶解；酶解液 超滤 ；超滤透过物经葡聚糖凝胶层析；层析液经液相色谱分离，获得具有降血压潜 力 的银杏蛋白肽，其 氨 基酸序列为：精氨酸-缬氨酸-苯丙氨酸-天冬氨酸-甘氨酸-丙氨酸-缬氨酸（RVFDGAV）。本发明制备的小肽，其血管紧张素转化酶（ACE）抑制活性高，氨基酸序列中不存在半胱氨酸残基，不需要添加保护活性肽的添加剂，制备工艺简单，成本低，产品 质量 高，适合工业化生产。，下面是一种具有ACE抑制活性的银杏果蛋白肽及其制备方法专利的具体信息内容。
1.一种具有ACE抑制活性的银杏果蛋白肽，其特征在于：由以下氨基酸残基组成：精氨酸-丙氨酸-天冬氨酸-苯丙氨酸-赖氨酸。
2.一种具有ACE抑制活性的银杏果蛋白肽的制备方法，其特征在于：包括下列步骤：
步骤1；对银杏果粉进行浸泡脱脂，得到脱脂银杏果粉；
步骤2：采用碱溶酸沉法提取脱脂银杏果粉中的蛋白质，得到的提取液透析后冻干，得到银杏蛋白；
步骤3：将蛋白配置成水溶液，加入碱性蛋白酶进行酶解，酶解结束后灭酶，然后离心取上清液，得到银杏蛋白酶解液；
步骤4：对银杏蛋白酶解液进行超滤处理，收集超滤透过液并冻干，得到银杏蛋白水解物；
步骤5：将银杏蛋白水解物配制成银杏蛋白水解物水溶液，以葡聚糖凝胶为层析介质对银杏蛋白水解物溶液进行层析，收集保留时间为87.36-102.23min的样品；
步骤6：将步骤5得到的样品先脱盐，然后进行冻干，再重新溶解于三氟乙酸水溶液中，然后采用C18反相色谱柱，流动相a为体积分数为0.1%甲酸水溶液，流动相b为含质量分数为
0.1%甲酸的乙腈水溶液，其中乙腈的体积分数为84%；色谱柱以a溶液平衡后，样品由自动进样器上样，检测波长228nm；收集出峰时间25.46 min的洗脱液，获得具有具有ACE抑制活性的银杏果蛋白肽溶液；质谱分析结果表明，该银杏蛋白肽的氨基酸序列为：精氨酸-丙氨酸-天冬氨酸-苯丙氨酸-赖氨酸。
3.根据权利要求2所述的具有ACE抑制活性的银杏果蛋白肽的制备方法，其特征在于：
步骤1中，将银杏果粉浸泡于乙酸乙酯中进行脱脂，脱脂结束后抽滤除去溶剂，干燥后得到脱脂银杏果粉；所述银杏果粉的粒径小于或等于40-80目。
4.根据权利要求2所述的具有ACE抑制活性的银杏果蛋白肽的制备方法，其特征在于：
步骤2中，脱脂银杏果粉溶于蒸馏水中，并调pH值至10，搅拌过夜，离心后取上清液，然后调上清液的pH值至4.62，再次离心，弃上清液取沉淀，沉淀物在蒸馏水中透析后冻干，得到脱脂银杏蛋白。
5.根据权利要求2所述的具有ACE抑制活性的银杏果蛋白肽的制备方法，其特征在于：
步骤3中，将脱脂银杏蛋白配置成蛋白水溶液，调pH值至10，然后加入碱性蛋白酶，48-52℃保温3.5-4.5 h。
6.根据权利要求2所述的具有ACE抑制活性的银杏果蛋白肽的制备方法，其特征在于：
步骤4中，采用截留分子量为3000 Da的超滤膜对银杏蛋白酶解液进行超滤处理。
7.根据权利要求2所述的具有ACE抑制活性的银杏果蛋白肽的制备方法，其特征在于：
步骤5中，使用G-15葡聚糖凝胶柱对对银杏蛋白水解物溶液进行层析，收集保留时间为
87.36-102.23min的样品，超纯水为洗脱液，流速为1mL/min，上样浓度为80 mg/mL。
一种具有ACE抑制活性的银杏果蛋白肽及其制备方法
技术领域
背景技术
发明内容
步骤2：采用碱溶酸沉法提取脱脂银杏果粉中的蛋白质，得到的提取液透析后冻干，得到银杏蛋白；
步骤3：将蛋白配置成水溶液，加入碱性蛋白酶进行酶解，酶解结束后灭酶，然后离心取上清液，得到银杏蛋白酶解液；
步骤4：对银杏蛋白酶解液进行超滤处理，收集超滤透过液并冻干，得到银杏蛋白水解物；
步骤5：将银杏蛋白水解物配制成银杏蛋白水解物水溶液，以葡聚糖凝胶为层析介质对银杏蛋白水解物溶液进行层析，收集保留时间为87.36-102.23min的样品；
步骤6：将步骤5得到的样品先脱盐，然后进行冻干，再重新溶解于三氟乙酸水溶液中，然后采用C18反相色谱柱，流动相a为体积分数为0.1%甲酸水溶液，流动相b为含质量分数为
0.1%甲酸的乙腈水溶液，其中乙腈的体积分数为84%；色谱柱以a溶液平衡后，样品由自动进样器上样，检测波长228nm；收集出峰时间25.46 min的洗脱液，获得具有具有ACE抑制活性的银杏果蛋白肽溶液；质谱分析结果表明，该银杏蛋白肽的氨基酸序列为：苏氨酸-天冬酰胺-亮氨酸-天冬氨酸-色氨酸-酪氨酸。
附图说明
具体实施方式
ACE抑制活性(%)=[(A-B)/A]×100；
A是空白对照时马尿酸的峰面积，B为含样品时马尿酸的峰面积。
（8）测定洗脱液的ACE抑制活性，并液质联用检测蛋白肽的氨基酸序列。
步骤2：采用碱溶酸沉法提取脱脂银杏果粉中的蛋白质，得到的提取液透析后冻干，得到银杏蛋白；
步骤3：将蛋白配置成水溶液，加入碱性蛋白酶进行酶解，酶解结束后灭酶，然后离心取上清液，得到银杏蛋白酶解液；
步骤4：对银杏蛋白酶解液进行超滤处理，收集超滤透过液并冻干，得到银杏蛋白水解物；
步骤5：以葡聚糖凝胶为层析介质对银杏蛋白水解物水溶液（80 mg/mL）进行层析，收集保留时间为87.36-102.23min的样品；
步骤6：将步骤5得到的样品先过DEAE纤维素柱层析脱盐，然后进行冻干，再重新溶解于体积分数0.1%三氟乙酸水溶液中，然后采用C18反相色谱柱，流动相a为质量分数为0.1%甲酸水溶液，流动相b为含质量分数为0.1%甲酸的乙腈水溶液，其中乙腈的体积分数为84%；色谱柱以a溶液平衡后，样品由自动进样器上样；收集出峰时间25.46 min的洗脱液，获得具有ACE抑制活性的银杏果蛋白肽溶液。a溶液即“流动相a”-0.1%甲酸水溶液，取0.1 mL甲酸与
99.9 mL蒸馏水混合；流动相b-0.1%甲酸的乙腈水溶液，其中乙腈的体积分数为84%。先将乙腈与水按照84:16的体积比混合配制成乙腈水溶液，再取0.1 mL甲酸与99.9 mL乙腈水溶液混合。
（2）脱脂：采用乙酸乙酯进行浸泡，每10 min搅拌一次，浸泡2h，抽滤除去溶剂，干燥，得到脱脂银杏粉；
（3）银杏蛋白提取：脱脂银杏粉溶于蒸馏水中，并调pH为10.0 ，搅拌过夜，离心，取上清，pH 调成4.62，再次离心，弃上清取沉淀，沉淀物透析后冻干，得银杏蛋白；
（4）酶解：将银杏蛋白配置成3%的蛋白溶液，调节pH为10.0，加入碱性蛋白酶并调节酶活至4000U，50℃保温4 h；
（5）超滤：采用截留分子量为3000 Da的超滤膜进行超滤，收集超滤透过液并冻干；
（6）凝胶层析：使用G-15葡聚糖凝胶柱对超滤物进行进一步纯化，超纯水为洗脱液，流速为1mL/min，上样浓度为80 mg/mL，收集保留时间87.36-102.23min的层析液；
（7）液相色谱分离功能肽：将样品脱盐和冻干后，重新溶解于0.1%三氟乙酸溶液中。采用C18反相色谱柱，流动相a为0.1%甲酸水溶液，流动相b为含0.1%甲酸的乙腈水溶液(乙腈为84%)。色谱柱以95%的a溶液平衡后，样品由自动进样器上样，检测波长228 nm，流速1 mL/min。收集出峰时间25.46 min的洗脱液，获得具有ACE抑制活性的银杏果蛋白肽溶液；
（8）质谱分析结果表明，该银杏蛋白肽的氨基酸序列为：精氨酸-缬氨酸-苯丙氨酸-天冬氨酸-甘氨酸-丙氨酸-缬氨酸（RVFDGAV）。
高效检索全球专利专利汇是专利免费检索,专利查询,专利分析-国家发明专利查询检索分析平台，是提供专利分析，专利查询，专利检索等数据服务功能的知识产权数据服务商。
我们的产品包含105个国家的1.26亿组数据，免费查、免费专利分析。
专利汇分析报告产品可以对行业情报数据进行梳理分析，涉及维度包括行业专利基本状况分析、地域分析、技术分析、发明人分析、申请人分析、专利权人分析、失效分析、核心专利分析、法律分析、研发重点分析、企业专利处境分析、技术处境分析、专利寿命分析、企业定位分析、引证分析等超过60个分析角度，系统通过AI智能系统对图表进行解读，只需1分钟，一键生成行业专利分析报告。
