一种金刚烷胺和金刚乙胺的特异性分子印迹聚合物、化学发光试剂盒、检测方法及应用
专利汇可以提供一种金刚烷胺和金刚乙胺的特异性分子印迹聚合物、化学发光试剂盒、检测方法及应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种能识别金刚烷胺和金刚乙胺的特异性分子印迹 聚合物 ，和以其为识别元件的 化学发光 试剂 盒 及检测方法和应用。该分子印迹聚合物以金刚烷为假性分子模板，合成的特异性分子印迹聚合物能同时识别金刚烷胺和金刚乙胺。基于该分子印迹聚合物制备的化学发光试剂盒，可以对肉组织中金刚烷胺和金刚乙胺进行多残留检测，且可重复使用，提高了检测灵敏度，缩短了检测时间，降低了检测成本。，下面是一种金刚烷胺和金刚乙胺的特异性分子印迹聚合物、化学发光试剂盒、检测方法及应用专利的具体信息内容。
1.一种金刚烷胺和金刚乙胺的特异性分子印迹聚合物，其特征在于由如下方法制备，以下原料按物质的量计：
（a）将1份假分子模板金刚烷、3 6份功能单体甲基丙烯酸、20 30份的引发剂偶氮二异~ ~
丁腈和20 30份的交联剂乙二醇二甲基丙烯酸酯置于氯仿中，60 70℃振荡反应10 12小时；
~ ~ ~
（b）将上述反应后所得的固体颗粒物放在弗氏提取器中，用提取液连续回流12 24小~
时，将所述假分子模板金刚烷提取出来；
（c）将步骤（b）反应后的固体颗粒物烘干后，得金刚烷胺和金刚乙胺的特异性分子印迹聚合物。
2.如权利要求1所述的分子印迹聚合物，其特征在于，所述的步骤（a）中所用的溶剂为氯仿，步骤（b）中所用的提取液为甲醇与乙酸的混合溶液，并且甲醇与乙酸的体积比为9：
0.5 2。
~
3.一种金刚烷胺和金刚乙胺的特异性检测的化学发光试剂盒，其特征在于该化学发光试剂盒以如权利要求1或2所述的分子印迹聚合物为识别试剂，以金刚烷胺的辣根过氧化物酶标记物为信号试剂，以鲁米诺和过氧化氢为化学发光试剂，以4-(咪唑-1-基)苯酚为增强剂，根据发光强度与待测物浓度具有反比关系对待测物浓度做出检测。
4.如权利要求3所述的化学发光试剂盒，其特征在于，所述金刚烷胺的辣根过氧化物酶标记物通过如下方法制备：
（a）将金刚烷胺溶解于N,N-二甲基甲酰胺中，搅拌溶解得A液，将辣根过氧化物酶溶解于磷酸盐缓冲溶液中，得B液；
（b）将所述溶液A滴加至所述溶液B中，充分搅拌得到溶液C；
（c）向溶液C中逐滴加入质量分数为25%的戊二醛水溶液，室温反应6小时；
（d）将步骤（c）所得液体置于透析袋中，在4℃用磷酸盐缓冲液透析3天即可。
5.利用权利要求3或4所述的化学发光试剂盒对金刚烷胺和金刚乙胺的检测方法，其特征在于包括如下步骤：
（a）将权利要求1或2所述的分子印迹聚合物悬浮于重量百分比为0.3 2%聚乙烯醇溶液~
中，然后加入到聚苯乙烯滴定板的小孔中，放置1 2小时；
~
（b）将待检测的金刚烷胺和/或金刚乙胺药物或样品提取液和所述的金刚烷胺的辣根过氧化物酶标记物加入到不透明的聚苯乙烯滴定板的小孔中，室温放置5 50分钟；
~
（c）对所述聚苯乙烯滴定板的小孔进行洗涤，清除杂质和没有被捕获的金刚烷胺和/或金刚乙胺药物；
（d）将鲁米诺、过氧化氢和4-(咪唑-1-基)苯酚加入到所述聚苯乙烯滴定板的小孔中，将该聚苯乙烯滴定板置于化学发光仪或多功能酶标仪中，读取各小孔的化学发光值。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤（c）中，用乙醇对所述聚苯乙烯滴定板的小孔进行洗涤。
7.如权利要求3所述的化学发光试剂盒在同时检测金刚烷胺和金刚乙胺领域的应用。
一种金刚烷胺和金刚乙胺的特异性分子印迹聚合物、化学发
光试剂盒、检测方法及应用
技术领域
背景技术
发明内容
（a）将1份假分子模板金刚烷、3 6份功能单体甲基丙烯酸、20 30份的引发剂偶氮二异~ ~
丁腈和20 30份的交联剂乙二醇二甲基丙烯酸酯置于氯仿中，60 70℃振荡反应10 12小时；
~ ~ ~
（b）将上述反应后所得的固体颗粒物放在弗氏提取器中，用提取液连续回流12 24小~
时，将所述假分子模板金刚烷提取出来；
（c）将步骤（b）反应后的固体颗粒物烘干后，得金刚烷胺和金刚乙胺的特异性分子印迹聚合物。
（b）将所述溶液A滴加至所述溶液B中，充分搅拌得到溶液C；
（c）向溶液C中逐滴加入质量分数为25%的戊二醛水溶液，室温反应6小时；
（d）将步骤（c）所得液体置于透析袋中，在4℃用磷酸盐缓冲液透析3天即可。
中，然后加入到聚苯乙烯滴定板的小孔中，放置1 2小时；
~
（b）将待检测的金刚烷胺和/或金刚乙胺药物或样品提取液和所述的金刚烷胺的辣根过氧化物酶标记物加入到不透明的聚苯乙烯滴定板的小孔中，室温放置5 50分钟；
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（c）对所述聚苯乙烯滴定板的小孔进行洗涤，清除杂质和没有被捕获的金刚烷胺和/或金刚乙胺药物；
（d）将鲁米诺、过氧化氢和4-(咪唑-1-基)苯酚加入到所述聚苯乙烯滴定板的小孔中，将该聚苯乙烯滴定板置于化学发光仪或多功能酶标仪中，读取各小孔的化学发光值。
具体实施方式
（a）将1份假分子金刚烷、3份功能单体甲基丙烯酸、20份的引发剂偶氮二异丁腈和20份的交联剂乙二醇二甲基丙烯酸酯置于氯仿溶剂中， 60℃反应12小时，得到固体颗粒物；
（b）将所述固体颗粒物放在索氏提取器中，用甲醇与乙酸（9：1，V/V）提取液连续回流12小时，将印迹的假分子模板金刚烷提取出来；
（c）将步骤（b）反应后的固体颗粒物烘干后，得金刚烷胺和金刚乙胺的特异性的分子印迹聚合物。
30份的交联剂乙二醇二甲基丙烯酸酯置于氯仿溶剂中， 70℃反应10小时，得到固体颗粒物；
（b）将所述固体颗粒物放在索氏提取器中，用甲醇与乙酸（9：2，V/V）提取液连续回流24小时，将印迹的假分子模板金刚烷提取出来；
（c）将步骤（b）反应后的固体颗粒物烘干后，得金刚烷胺和金刚乙胺的特异性的分子印迹聚合物。
25份的交联剂乙二醇二甲基丙烯酸酯置于氯仿溶剂中，65℃反应11小时，得到固体颗粒物；
（b）将所述固体颗粒物放在索氏提取器中，用甲醇与乙酸（9：0.5，V/V）提取液连续回流
18小时，将印迹的假分子模板金刚烷提取出来；
（c）将步骤（b）反应后的固体颗粒物烘干后，得金刚烷胺和金刚乙胺的特异性的分子印迹聚合物。
实施例1、2或3所制备的分子印迹聚合物，作为识别试剂，其可以捕捉金刚烷胺和金刚乙胺，为检测提供基础；
金刚烷胺的辣根过氧化物酶标记物是信号试剂，因该试剂上偶联了金刚烷胺分子，也能被分子印迹聚合物吸附。当滴定板小孔中定量的分子印迹聚合物吸附了待测物金刚烷胺或金刚乙胺时，吸附的信号试剂就会减少，则加入发光试剂后被诱发的发光强度降低，因此发光减弱代表金刚烷胺或金刚乙胺的含量升高；
鲁米诺和过氧化氢，二者为化学发光试剂；
4-(咪唑-1-基)苯酚，为增强剂，对反应起到催化作用，使其快速发光；
发光后，利用化学发光仪根据发光强度与待测物浓度具有反向变化关系对待测物浓度做出检测。
（b）将所述溶液A滴加至所述溶液B中，充分搅拌得到溶液C；
（c）向溶液C中逐滴加入质量分数为25%的戊二醛水溶液，室温反应6小时；
（d）将步骤（c）所得液体置于透析袋中，在4℃用磷酸盐缓冲液透析3天即可。
（a）将权利要求1或2所述的分子印迹聚合物悬浮于重量百分比为0.3 2%聚乙烯醇溶液~
中，然后加入到聚苯乙烯滴定板的小孔中，放置1 2小时；
~
（b）将待检测的金刚烷胺和/或金刚乙胺药物或样品提取液和所述的金刚烷胺的辣根过氧化物酶标记物加入到不透明的聚苯乙烯滴定板的小孔中，室温放置5 50分钟；
~
（c）对所述聚苯乙烯滴定板的小孔进行洗涤，清除杂质和没有被捕获的金刚烷胺和/或金刚乙胺药物；
（d）将鲁米诺、过氧化氢和4-(咪唑-1-基)苯酚加入到所述聚苯乙烯滴定板的小孔中，将该聚苯乙烯滴定板置于化学发光仪或多功能酶标仪中，读取各小孔的化学发光值。
0.005、0.01、0.05、0.1、0.5、1.0、5.0、10、50 ng/mL），然后分别按上述方法进行实验。以各孔的光密度值A为纵坐标，以标准品实验溶液浓度的Log值为纵坐标，绘制半对数标准曲线图。根据标准曲线得出10%抑制量(LOD)和半数抑制量（IC50），检测灵敏度。抑制率用以下式计算：
抑制率（%）=（ODmax-ODmin）-(ODx-ODmin)/(ODmax-ODmin)
式中ODmax为不加标准品时的光密度值（阴性对照），ODx为标准品浓度x时的光密度值，ODmin为空白对照孔的光密度值。
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