牡蛎多糖的制备方法
专利汇可以提供牡蛎多糖的制备方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了牡蛎多糖的制备方法，包括： 水 提、热水提、 碱 提、酶解、脱蛋白，首先将鲜牡蛎肉 脱脂 干燥得脱脂粉，将脱脂粉溶液进行常温水提、热水水提、碱液提取并 透析 、醇沉，然后在经胰蛋白酶与胃蛋白酶酶解，最后以氯仿、正丁醇、乙酸的混合物对酶解液进行脱蛋白处理即得牡蛎多糖。有益效果为：先后经碱性蛋白酶与酸性蛋白酶酶解，将牡蛎粗多糖中剩余的 蛋白质 水解 为小蛋白和多肽，并经后续脱蛋白除去，可以大大提高成品中的牡蛎多糖的含量与纯度；乙酸和适当比例的L- 酒石酸 二甲酯与D-酒石酸二甲酯可以作用于蛋白质变性胶状物，降低牡蛎多糖被分离出去的量，提高牡蛎多糖的得率与含量，提高多糖纯度。，下面是牡蛎多糖的制备方法专利的具体信息内容。
1.牡蛎多糖的制备方法，包括：水提、热水提、碱提、酶解、脱蛋白，其特征在于：所述脱蛋白步骤为：将氯仿、正丁醇、乙酸混合均匀，混合溶液中还含有1.5-1.8‰的酒石酸二甲酯；在不断搅拌下，按照体积比1:7-8的比例将酶解液倒入混合溶液中，密封后用磁力搅拌器搅拌45-60分钟，倒入分液漏斗中，静止分层后收集上层溶液，并离心分离出少量变性蛋白质，按上述步骤重复操作4-5次，使提取液中的蛋白质脱除完全，合并上清液经低温浓缩即得牡蛎多糖。
2.根据权利要求1所述的牡蛎多糖的制备方法，其特征在于：所述脱蛋白步骤中，氯仿、正丁醇、乙酸的比例为45-48:10-15:1。
3.根据权利要求1所述的牡蛎多糖的制备方法，其特征在于：所述脱蛋白步骤中，酒石酸二甲酯中L-酒石酸二甲酯与D-酒石酸二甲酯的比例为15.6-15.7:1。
4.根据权利要求1所述的牡蛎多糖的制备方法，其特征在于：所述水提步骤为：将牡蛎鲜肉绞碎、匀浆，用丙酮脱脂和低温干燥得脱脂粉，水提操作得提取液并浓缩；加入4-5倍质量的95-98%乙醇，1-4℃沉淀过夜，次日离心，收集沉淀，分别用无水乙醇和丙酮脱水，45-48℃下减压干燥即得牡蛎水提粗多糖。
5.根据权利要求4所述的牡蛎多糖的制备方法，其特征在于：所述水提步骤中，水提操作为：取脱脂粉加20-25倍质量体积的常温蒸馏水，室温搅拌3-5小时，离心，将残渣按上述方法重复提取，合并提取液。
6.根据权利要求1所述的牡蛎多糖的制备方法，其特征在于：所述热水提步骤为：将上述室温提取后的残渣加入15-18倍质量体积蒸馏水，60-66℃温度下磁力搅拌2-3小时，离心，浓缩，加入4-5倍质量体积的95-98%乙醇，1-4℃沉淀过夜，次日离心，收集沉淀，分别用无水乙醇和丙酮脱水，45-48℃下减压干燥即得牡蛎热水提粗多糖。
7.根据权利要求1所述的牡蛎多糖的制备方法，其特征在于：所述碱提步骤为：将上述热水提取后的残渣加入6-8倍体积2.5-3.0%的氢氧化钠溶液，60-65℃磁力搅拌2-3小时，用稀盐酸中和至中性，离心，浓缩，以3.5kDa透析袋透析48-72小时，取袋内液浓缩醇沉后收集沉淀，分别用无水乙醇和丙酮脱水，45-48℃下减压干燥即得牡蛎碱提粗多糖。
8.根据权利要求1所述的牡蛎多糖的制备方法，其特征在于：所述酶解步骤为：将牡蛎粗多糖合并，用纯水配制成质量分数为8-10%的溶液，加入胰蛋白酶酶解4-5小时，反应完毕后用稀盐酸调中性后在95-98℃灭酶12-18分钟，冷却至室温，加入胃蛋白酶酶解3-4小时，反应完毕后经稀氢氧化钠溶液中和，低温浓缩至10-15%即得酶解液。
9.根据权利要求8所述的牡蛎多糖的制备方法，其特征在于：所述酶解步骤中，胰蛋白酶酶解操作为：调节pH至8.2-8.4，加入胰蛋白酶终质量分数为0.3-0.5%，酶解温度为52-55℃；胃蛋白酶酶解操作为：调节pH至2.3-2.4，加入胃蛋白酶至终质量分数为0.5-0.7%，酶解温度为37-40℃。
牡蛎多糖的制备方法
技术领域
发明内容
热水提：将上述室温提取后的残渣加入15-18倍质量体积蒸馏水，60-66℃温度下磁力搅拌2-3小时，离心，浓缩，加入4-5倍质量体积的95-98%乙醇，1-4℃沉淀过夜，次日离心，收集沉淀，分别用无水乙醇和丙酮脱水，45-48℃下减压干燥即得牡蛎热水提粗多糖；通过热水提纯，可以提高水溶性蛋白质的溶解度，进一步分离富集出粗多糖中的蛋白质；
碱提：将上述热水提取后的残渣加入6-8倍体积2.5-3.0%的氢氧化钠溶液，60-65℃磁力搅拌2-3小时，用稀盐酸中和至中性，离心，浓缩，以3.5kDa透析袋透析48-72小时，取袋内液浓缩后加入4-5倍质量体积的95-98%乙醇，1-4℃沉淀过夜，次日离心，收集沉淀，分别用无水乙醇和丙酮脱水，45-48℃下减压干燥即得牡蛎碱提粗多糖；通过碱提，可以更进一步地将多余的蛋白质分离出去，为进一步的酶解做好准备；
酶解：将牡蛎粗多糖合并，用纯水配制成质量分数为8-10%的溶液，调节pH至8.2-8.4，加入胰蛋白酶终质量分数为0.3-0.5%，在52-55℃温度下保温反应4-5小时；反应完毕后用稀盐酸调中性后在95-98℃灭酶12-18分钟，冷却至室温，调节pH至2.3-2.4，加入胃蛋白酶至终质量分数为0.5-0.7%，在37-40℃温度下保温反应3-4小时，反应完毕后经稀氢氧化钠溶液中和，低温浓缩至10-15%即得酶解液；先后经碱性蛋白酶与酸性蛋白酶酶解，将牡蛎粗多糖中剩余的蛋白质水解为小蛋白和多肽，并经后续脱蛋白除去，可以大大提高成品中的牡蛎多糖的含量与纯度；牡蛎多糖能够对细菌细胞膜产生影响，改变细胞膜流动性和通透性，破坏细胞细胞膜的超分子结构而造成细胞内成分流失，也可以作用于细菌细胞壁影响细菌新陈代谢，从而起到抑菌效果；
脱蛋白：将氯仿、正丁醇、乙酸按照体积比45-48:10-15:1的比例混合均匀，混合溶液中还含有1.5-1.8‰的酒石酸二甲酯，酒石酸二甲酯中L-酒石酸二甲酯与D-酒石酸二甲酯的比例为15.6-15.7:1；在不断搅拌下，按照体积比1:7-8的比例将酶解液倒入混合溶液中，密封后用磁力搅拌器搅拌45-60分钟，倒入分液漏斗中，静止分层后收集上层溶液，并离心分离出少量变性蛋白质，按上述步骤重复操作4-5次，使提取液中的蛋白质脱除完全，合并上清液经低温浓缩即得牡蛎多糖；氯仿、正丁醇的混合溶液可以将游离蛋白与多肽转变为不溶性物质，经离心去除，可以达到去除牡蛎多糖中蛋白质的目的，乙酸和适当比例的L-酒石酸二甲酯与D-酒石酸二甲酯可以作用于蛋白质变性胶状物，降低蛋白质变性胶状物包裹住牡蛎多糖的几率，从而可以大大降低牡蛎多糖被分离出去的量，提高牡蛎多糖的得率与含量，降低产物中蛋白质的含量，提高多糖纯度。
2）先后经碱性蛋白酶与酸性蛋白酶酶解，将牡蛎粗多糖中剩余的蛋白质水解为小蛋白和多肽，并经后续脱蛋白除去，可以大大提高成品中的牡蛎多糖的含量与纯度；牡蛎多糖能够对细菌细胞膜产生影响，改变细胞膜流动性和通透性，破坏细胞细胞膜的超分子结构而造成细胞内成分流失，也可以作用于细菌细胞壁影响细菌新陈代谢，起到抑菌效果。
具体实施方式
牡蛎多糖的制备方法，包括以下步骤：
1）将牡蛎鲜肉绞碎、匀浆，用丙酮脱脂和低温干燥得脱脂粉，取脱脂粉加20倍质量体积的常温蒸馏水，室温搅拌3小时，离心，将残渣按上述方法重复提取，合并提取液，浓缩；加入
4倍质量的95%乙醇，1℃沉淀过夜，次日离心，收集沉淀，分别用无水乙醇和丙酮脱水，45℃下减压干燥即得牡蛎水提粗多糖；2）将上述室温提取后的残渣加入15倍质量体积蒸馏水，
60℃温度下磁力搅拌2小时，离心，浓缩，加入4倍质量体积的95%乙醇，1℃沉淀过夜，次日离心，收集沉淀，分别用无水乙醇和丙酮脱水，45℃下减压干燥即得牡蛎热水提粗多糖；
3）将上述热水提取后的残渣加入6倍体积2.5%的氢氧化钠溶液，60℃磁力搅拌2小时，用稀盐酸中和至中性，离心，浓缩，以3.5kDa透析袋透析48小时，取袋内液浓缩后加入4倍质量体积的95%乙醇，1℃沉淀过夜，次日离心，收集沉淀，分别用无水乙醇和丙酮脱水，45℃下减压干燥即得牡蛎碱提粗多糖；4）将牡蛎粗多糖合并，用纯水配制成质量分数为8%的溶液，调节pH至8.2，加入胰蛋白酶终质量分数为0.3%，在52℃温度下保温反应4小时；反应完毕后用稀盐酸调中性后在95℃灭酶12分钟，冷却至室温，调节pH至2.3，加入胃蛋白酶至终质量分数为0.5%，在37℃温度下保温反应3小时，反应完毕后经稀氢氧化钠溶液中和，低温浓缩至10%即得酶解液；5）将氯仿、正丁醇、乙酸按照体积比45:10:1的比例混合均匀，混合溶液中还含有1.5‰的酒石酸二甲酯，酒石酸二甲酯中L-酒石酸二甲酯与D-酒石酸二甲酯的比例为15.6:1；在不断搅拌下，按照体积比1:7的比例将酶解液倒入混合溶液中，密封后用磁力搅拌器搅拌45分钟，倒入分液漏斗中，静止分层后收集上层溶液，并离心分离出少量变性蛋白质，按上述步骤重复操作4次，使提取液中的蛋白质脱除完全，合并上清液经低温浓缩即得牡蛎多糖。
1）水提：将牡蛎鲜肉绞碎、匀浆，用丙酮脱脂和低温干燥得脱脂粉，取脱脂粉加25倍质量体积的常温蒸馏水，室温搅拌5小时，离心，将残渣按上述方法重复提取，合并提取液，浓缩；加入5倍质量的98%乙醇，4℃沉淀过夜，次日离心，收集沉淀，分别用无水乙醇和丙酮脱水，48℃下减压干燥即得牡蛎水提粗多糖；通过脱脂并水提后，可以去除水溶性蛋白质，并且为进一步的脱除蛋白提供有利条件；
2）热水提：将上述室温提取后的残渣加入18倍质量体积蒸馏水，66℃温度下磁力搅拌3小时，离心，浓缩，加入5倍质量体积的98%乙醇，4℃沉淀过夜，次日离心，收集沉淀，分别用无水乙醇和丙酮脱水，48℃下减压干燥即得牡蛎热水提粗多糖；通过热水提纯，可以提高水溶性蛋白质的溶解度，进一步分离富集出粗多糖中的蛋白质；
3）碱提：将上述热水提取后的残渣加入8倍体积3.0%的氢氧化钠溶液，65℃磁力搅拌3小时，用稀盐酸中和至中性，离心，浓缩，以3.5kDa透析袋透析72小时，取袋内液浓缩后加入
5倍质量体积的98%乙醇，4℃沉淀过夜，次日离心，收集沉淀，分别用无水乙醇和丙酮脱水，
48℃下减压干燥即得牡蛎碱提粗多糖；通过碱提，可以更进一步地将多余的蛋白质分离出去，为进一步的酶解做好准备；
4）酶解：将牡蛎粗多糖合并，用纯水配制成质量分数为10%的溶液，调节pH至8.4，加入胰蛋白酶终质量分数为0.5%，在55℃温度下保温反应5小时；反应完毕后用稀盐酸调中性后在98℃灭酶18分钟，冷却至室温，调节pH至2.4，加入胃蛋白酶至终质量分数为0.7%，在40℃温度下保温反应4小时，反应完毕后经稀氢氧化钠溶液中和，低温浓缩至15%即得酶解液；先后经碱性蛋白酶与酸性蛋白酶酶解，将牡蛎粗多糖中剩余的蛋白质水解为小蛋白和多肽，并经后续脱蛋白除去，可以大大提高成品中的牡蛎多糖的含量与纯度；牡蛎多糖能够对细菌细胞膜产生影响，改变细胞膜流动性和通透性，破坏细胞细胞膜的超分子结构而造成细胞内成分流失，也可以作用于细菌细胞壁影响细菌新陈代谢，从而起到抑菌效果；
5）脱蛋白：将氯仿、正丁醇、乙酸按照体积比48:15:1的比例混合均匀，混合溶液中还含有1.5-1.8‰的酒石酸二甲酯，酒石酸二甲酯中L-酒石酸二甲酯与D-酒石酸二甲酯的比例为15.7:1；在不断搅拌下，按照体积比1:8的比例将酶解液倒入混合溶液中，密封后用磁力搅拌器搅拌60分钟，倒入分液漏斗中，静止分层后收集上层溶液，并离心分离出少量变性蛋白质，按上述步骤重复操作5次，使提取液中的蛋白质脱除完全，合并上清液经低温浓缩即得牡蛎多糖；氯仿、正丁醇的混合溶液可以将游离蛋白与多肽转变为不溶性物质，经离心去除，可以达到去除牡蛎多糖中蛋白质的目的，乙酸和适当比例的L-酒石酸二甲酯与D-酒石酸二甲酯可以作用于蛋白质变性胶状物，降低蛋白质变性胶状物包裹住牡蛎多糖的几率，从而可以大大降低牡蛎多糖被分离出去的量，提高牡蛎多糖的得率与含量，降低产物中蛋白质的含量，提高多糖纯度。
水提：将牡蛎鲜肉绞碎、匀浆，用丙酮脱脂和低温干燥得脱脂粉，取脱脂粉加24倍质量体积的常温蒸馏水，室温搅拌4小时，离心，将残渣按上述方法重复提取，合并提取液，浓缩；
加入4倍质量的96%乙醇，2℃沉淀过夜，次日离心，收集沉淀，分别用无水乙醇和丙酮脱水，
46℃下减压干燥即得牡蛎水提粗多糖；通过脱脂并水提后，可以去除水溶性蛋白质，并且为进一步的脱除蛋白提供有利条件；
热水提：将上述室温提取后的残渣加入16倍质量体积蒸馏水，65℃温度下磁力搅拌2.5小时，离心，浓缩，加入4倍质量体积的96%乙醇，1-4℃沉淀过夜，次日离心，收集沉淀，分别用无水乙醇和丙酮脱水，46℃下减压干燥即得牡蛎热水提粗多糖；通过热水提纯，可以提高水溶性蛋白质的溶解度，进一步分离富集出粗多糖中的蛋白质；
碱提：将上述热水提取后的残渣加入7倍体积2.8%的氢氧化钠溶液，64℃磁力搅拌2.5小时，用稀盐酸中和至中性，离心，浓缩，以3.5kDa透析袋透析60小时，取袋内液浓缩后加入
4倍质量体积的96%乙醇，2℃沉淀过夜，次日离心，收集沉淀，分别用无水乙醇和丙酮脱水，
46℃下减压干燥即得牡蛎碱提粗多糖；通过碱提，可以更进一步地将多余的蛋白质分离出去，为进一步的酶解做好准备；
酶解：将牡蛎粗多糖合并，用纯水配制成质量分数为9%的溶液，调节pH至8.3，加入胰蛋白酶终质量分数为0.4%，在54℃温度下保温反应4小时；反应完毕后用稀盐酸调中性后在96℃灭酶15分钟，冷却至室温，调节pH至2.3，加入胃蛋白酶至终质量分数为0.6%，在38℃温度下保温反应3.5小时，反应完毕后经稀氢氧化钠溶液中和，低温浓缩至12%即得酶解液；先后经碱性蛋白酶与酸性蛋白酶酶解，将牡蛎粗多糖中剩余的蛋白质水解为小蛋白和多肽，并经后续脱蛋白除去，可以大大提高成品中的牡蛎多糖的含量与纯度；牡蛎多糖能够对细菌细胞膜产生影响，改变细胞膜流动性和通透性，破坏细胞细胞膜的超分子结构而造成细胞内成分流失，也可以作用于细菌细胞壁影响细菌新陈代谢，从而起到抑菌效果；
脱蛋白：将氯仿、正丁醇、乙酸按照体积比45:14:1的比例混合均匀，混合溶液中还含有
1.6‰的酒石酸二甲酯，酒石酸二甲酯中L-酒石酸二甲酯与D-酒石酸二甲酯的比例为15.6:
1；在不断搅拌下，按照体积比1:7的比例将酶解液倒入混合溶液中，密封后用磁力搅拌器搅拌45分钟，倒入分液漏斗中，静止分层后收集上层溶液，并离心分离出少量变性蛋白质，按上述步骤重复操作4次，使提取液中的蛋白质脱除完全，合并上清液经低温浓缩即得牡蛎多糖；氯仿、正丁醇的混合溶液可以将游离蛋白与多肽转变为不溶性物质，经离心去除，可以达到去除牡蛎多糖中蛋白质的目的，乙酸和适当比例的L-酒石酸二甲酯与D-酒石酸二甲酯可以作用于蛋白质变性胶状物，降低蛋白质变性胶状物包裹住牡蛎多糖的几率，从而可以大大降低牡蛎多糖被分离出去的量，提高牡蛎多糖的得率与含量，降低产物中蛋白质的含量，提高多糖纯度。
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