含有活动精子结构域的蛋白质2和炎症
阅读：220发布：2021-10-30
专利汇可以提供含有活动精子结构域的蛋白质2和炎症专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本文公开了使用含有活动精子结构域的 蛋白质 2(MOSPD2)的 抑制剂 治疗 、 预防 炎性 疾病 或病症或减少所述炎性疾病或病症的发生率的方法以及抑制、预防细胞内的一种或多种活动或减少所述活动的发生率的方法。还公开了MOSPD2的抑制剂和含有MOSPD2抑制剂的药物组合物。，下面是含有活动精子结构域的蛋白质2和炎症专利的具体信息内容。
1.一种治疗或预防炎性疾病或病症的方法，其包括向有需要的受试者施用治疗有效量的含有活动精子结构域的蛋白质2(MOSPD2)的抑制剂。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述抑制剂是多肽、DNA或RNA。
3.如权利要求1所述的方法，其中所述抑制剂是(i)特异性结合至MOSPD2多肽的经分离的结合分子、(ii)特异性结合至MOSPD2多肽的配体的经分离的结合分子、(iii)针对MOSPD2多肽产生的抗血清、(iv)可溶性MOSPD2多肽或者(v)包含MOSPD2多肽的细胞外结构域、基本上由MOSPD2多肽的细胞外结构域组成或由MOSPD2多肽的细胞外结构域组成的可溶性MOSPD2多肽。
4.如权利要求1所述的方法，其中所述抑制剂是特异性地结合至MOSPD2多肽的抗体。
5.如权利要求1所述的方法，其中所述抑制剂是特异性地结合至MOSPD2多肽的抗体的抗原结合片段。
6.如权利要求4所述的方法，其中所述抗体是多克隆抗体、单克隆抗体、鼠抗体、人类抗体、人源化抗体或嵌合抗体。
7.如权利要求5所述的方法，其中所述抗原结合片段是Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、scFv、sdFv片段、VH结构域或VL结构域。
8.如权利要求1所述的方法，其中所述抑制剂是在严格条件下与编码MOSPD2多肽的核苷酸序列杂交的RNAi、miRNA、siRNA、shRNA、反义RNA、反义DNA、诱饵分子、诱饵DNA、双链DNA、单链DNA、复合的DNA、封装的DNA、病毒DNA、质粒DNA、裸RNA、封装的RNA、病毒RNA、双链RNA、能够生成RNA干扰的分子或其组合。
9.如权利要求2-7中任一项所述的方法，其中所述MOSPD2多肽具有与SEQ ID NO:1-4中的任一个至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少
98％、至少99％或100％相同的序列。
10.如权利要求2-7中任一项所述的方法，其中所述MOSPD2多肽由与SEQ ID NO:5-8中的任一个至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少
98％、至少99％或100％相同的序列编码。
11.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述炎性疾病或病症是特发性炎性疾病或病症、慢性炎性疾病或病症、急性炎性疾病或病症、自身免疫疾病或病症、感染性疾病或病症、炎性恶性疾病或病症、炎性移植相关疾病或病症、炎性退行性疾病或病症、与超敏反应相关的疾病或病症、炎性心血管疾病或病症、炎性脑血管疾病或病症、外周血管疾病或病症、炎性腺性疾病或病症、炎性胃肠疾病或病症、炎性皮肤疾病或病症、炎性肝脏疾病或病症、炎性神经疾病或病症、炎性肌肉骨骼疾病或病症、炎性肾脏疾病或病症、炎性生殖疾病或病症、炎性系统性疾病或病症、炎性结缔组织疾病或病症、坏死、炎性植入物相关性疾病或病症、炎性老化过程、免疫缺陷性疾病或病症或炎性肺部疾病或病症。
12.如权利要求11所述的方法，其中所述超敏反应是I型超敏反应、II型超敏反应、III型超敏反应、IV型超敏反应、速发型超敏反应、抗体介导型超敏反应、免疫复合物介导型超敏反应、T淋巴细胞介导型超敏反应、迟发型超敏反应、辅助性T淋巴细胞介导型超敏反应、细胞毒性T淋巴细胞介导型超敏反应、TH1淋巴细胞介导型超敏反应或TH2淋巴细胞介导型超敏反应。
13.如权利要求11所述的方法，其中所述炎性心血管疾病或病症是闭塞性疾病或病症、动脉粥样硬化、心脏瓣膜病、狭窄、再狭窄、支架内再狭窄、心肌梗塞、冠状动脉疾病、急性冠状动脉综合症、充血性心力衰竭、心绞痛、心肌局部缺血、血栓形成、韦氏肉芽肿病、高安氏动脉炎、川崎综合症、抗因子VIII自身免疫性疾病或病症、坏死性小血管炎、显微镜下多血管炎、丘-施综合征、微量免疫局灶性坏死性肾小球肾炎、新月体性肾小球肾炎、抗磷脂综合征、抗体诱导的心力衰竭、血小板减少性紫癜、自身免疫性溶血性贫血、心脏自身免疫、恰加斯氏疾病或病症或抗辅助性T淋巴细胞自身免疫。
14.如权利要求11所述的方法，其中所述炎性脑血管疾病或病症是中风、脑血管炎症、脑出血或脊椎动脉供血不足。
15.如权利要求11所述的方法，其中所述外周血管疾病或病症是坏疽、糖尿病性血管病变、缺血性肠病、血栓、糖尿病性视网膜病或糖尿病性肾病。
16.如权利要求11所述的方法，其中所述自身免疫疾病或病症是慢性类风湿性关节炎、幼年型类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、硬皮病、混合性结缔组织病、结节性多动脉炎、多发性肌炎/皮肌炎、斯耶格伦氏综合征、白塞氏病、多发性硬化症、自身免疫性糖尿病、桥本氏病、牛皮癣、原发性粘液水肿、恶性贫血、重症肌无力、慢性活动性肝炎、自身免疫性溶血性贫血、特发性血小板减少性紫癜、葡萄膜炎、血管炎或肝素诱导的血小板减少。
17.如权利要求11所述的方法，其中所述炎性腺性疾病或病症是胰脏疾病或病症、I型糖尿病、甲状腺疾病或病症、格雷夫斯氏疾病或病症、甲状腺炎、自发性自身免疫性甲状腺炎、桥本氏甲状腺炎、特发性粘液水肿、卵巢自身免疫、自身免疫性抗精子不育症、自身免疫性前列腺炎或I型自身免疫性多内分泌腺综合征。
18.如权利要求11所述的方法，其中所述炎性胃肠疾病或病症是结肠炎、回肠炎、克罗恩病、慢性炎性肠道疾病、炎性肠综合征、炎性肠病、乳糜泻、溃疡性结肠炎、溃疡、皮肤溃疡、褥疮、胃溃疡、消化性溃疡、口腔溃疡、鼻咽溃疡、食管溃疡、十二指肠溃疡或胃肠溃疡。
19.如权利要求11所述的方法，其中所述炎性皮肤疾病或病症是粉刺、自身免疫性大疱性皮肤疾病或病症、寻常型天疱疮、大疱性类天疱疮、落叶型天疱疮、接触性皮炎或药物疹。
20.如权利要求11所述的方法，其中所述炎性肝脏疾病或病症是自身免疫性肝炎、肝硬化或胆汁性肝硬化。
21.如权利要求11所述的方法，其中所述炎性神经疾病或病症是多发性硬化症、阿尔兹海默病、帕金森病、重症肌无力、运动神经病、格-巴二氏综合征、自身免疫性神经病变、朗-伊二氏肌无力综合征、副肿瘤性神经疾病或病症、副肿瘤性小脑萎缩、非副肿瘤性僵人综合征、进行性小脑萎缩、拉斯马森脑炎、肌萎缩性侧索硬化症、西登哈姆氏舞蹈病、抽动秽语综合征、自身免疫性多内分泌腺病、免疫异常性神经病、获得性神经性肌强直、多发性关节挛缩症、亨廷顿氏病、AIDS相关性痴呆、肌萎缩性脊髓侧索硬化症、多发性硬化症、中风、炎性肾脏疾病或病症、炎性眼部疾病或病症、视神经炎、海绵状脑病、偏头痛、头痛、丛集性头痛或僵人综合征。
22.如权利要求11所述的方法，其中所述炎性结缔组织疾病或严重是迪谢内肌营养不良(DMD)、自身免疫性肌炎、原发性斯耶格伦氏综合征、平滑肌自身免疫性疾病或病症、肌炎、肌腱炎、韧带炎症、软骨炎、关节炎症、滑膜炎症、腕管综合征、关节炎、类风湿性关节炎、骨关节炎、强直性脊柱炎、骨骼炎症、自身免疫性耳疾病或病症或自身免疫性内耳疾病或病症。
23.如权利要求11所述的方法，其中所述炎性肾脏疾病或病症是自身免疫性间质性肾炎。
24.如权利要求11所述的方法，其中所述炎性生殖疾病或病症是习惯性流产、卵巢囊肿或月经相关性疾病或病症。
25.如权利要求11所述的方法，其中所述炎性系统性疾病或病症是系统性红斑狼疮、系统性硬化病、感染性休克、中毒性休克综合征或恶病质。
26.如权利要求11所述的方法，其中所述感染性疾病或病症是慢性感染性疾病或病症、亚急性感染性疾病或病症、急性感染性疾病或病症、病毒性疾病或病症、细菌性疾病或病症、原生动物疾病或病症、寄生虫性疾病或病症、真菌疾病或病症、支原体疾病或病症、坏疽、败血病、朊病毒疾病或病症、流感、肺结核、疟疾、获得性免疫缺陷综合征或重度急性呼吸器官综合症。
27.如权利要求11所述的方法，其中所述炎性移植相关性疾病或病症是移植物排斥、慢性移植物排斥、亚急性移植物排斥、急性移植物排斥、过急性移植物排斥或移植物抗宿主疾病或病症。
28.如权利要求11所述的方法，其中所述植入物是假体植入物、乳腺植入物、硅酮植入物、牙齿植入物、阴茎植入物、心脏植入物、人工关节、骨折修复装置、骨替换植入物、药物递送植入物、导管、起搏器、人工心脏、人工心脏瓣膜、药物释放植入物、电极或呼吸器管。
29.如权利要求11所述的方法，其中所述炎性肺部疾病或病症是哮喘、过敏性哮喘、肺气肿、慢性阻塞性肺疾病或病症、结节病或支气管炎。
30.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述炎性疾病或病症是纤维变性。
31.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述炎性疾病或病症是罹患慢性自身免疫或慢性炎性疾病的受试者中的血管炎症。
32.如权利要求31所述的方法，其中所述慢性自身免疫性或炎性疾病是牛皮癣。
33.如权利要求31所述的方法，其中所述血管炎症与心血管疾病、外周血管疾病、冠状动脉疾病、脑血管疾病、肾动脉狭窄、缺血性疾病或主动脉瘤相关。
34.如权利要求31所述的方法，其中所述血管炎症与缺血性心脏病、动脉粥样硬化、急性冠脉综合征、不稳定型心绞痛、稳定型心绞痛或中风相关。
35.如权利要求31所述的方法，其中所述血管炎症是颈动脉炎症。
36.如权利要求31所述的方法，其中所述血管炎症是主动脉炎症。
37.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述炎性疾病或病症是与植入物相关的炎症。
38.如权利要求37所述的方法，其中与植入物相关的所述炎症是局部炎症或系统性炎性反应。
39.如权利要求37或38所述的方法，其中所述植入物是硅酮、盐水、金属、塑料或聚合物植入物。
40.如权利要求37-39中任一项所述的方法，其中所述植入物是美容植入物、假体植入物、皮下植入物、透皮植入物、骨替代植入物或骨折修复装置。
41.如权利要求37-39中任一项所述的方法，其中所述植入物是药物递送植入物或药物释放植入物。
42.如权利要求37-39中任一项所述的方法，其中所述植入物是人工关节、人工心脏、人工心脏瓣膜、睾丸假体、乳房植入物、牙科植入物、眼部植入物、耳蜗植入物、阴茎植入物、心脏植入物、导管、可植入控尿装置、起搏器、电极、疝支持装置或呼吸器管。
43.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述炎性疾病或病症是肝炎。
44.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述炎性疾病或病症是脂肪性肝炎。
45.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述炎性疾病或病症是非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。
46.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述炎性疾病或病症是肾小球肾炎。
47.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述炎性疾病或病症是局灶性节段性肾小球硬化(FSGS)。
48.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述炎性疾病或病症是骨质疏松症。
49.如权利要求1-48中任一项所述的方法，其中所述受试者为人类。
50.一种抑制细胞中的一种或多种活动的方法，其包括向有需要的受试者施用治疗有效量的MOSPD2的抑制剂，其中所述一种或多种活动是以下一种或多种：白细胞迁移、白细胞趋化性、趋化因子信号传导途径、EGF受体磷酸化、ERK磷酸化、AKT磷酸化以及FAK磷酸化。
51.如权利要求50所述的方法，其中所述抑制剂是多肽、DNA或RNA。
52.如权利要求50所述的方法，其中所述白细胞迁移是单核细胞迁移。
53.如权利要求50所述的方法，其中至少白细胞趋化性和趋化因子信号传导途径受到抑制。
54.如权利要求50或53所述的方法，其中所述白细胞趋化性是单核细胞趋化性。
55.如权利要求50或53所述的方法，其中所述抑制趋化因子信号传导途径是抑制ERK磷酸化和/或AKT磷酸化。
56.如权利要求50或53所述的方法，其中所述白细胞趋化性由超过一种趋化因子或趋化因子受体诱导。
57.如权利要求50-56中任一项所述的方法，其中所述抑制剂是(i)特异性结合至MOSPD2多肽的经分离的结合分子、(ii)特异性结合至MOSPD2多肽的配体的经分离的结合分子、(iii)针对MOSPD2多肽产生的抗血清、(iv)可溶性MOSPD2多肽或者(v)包含MOSPD2多肽的细胞外结构域、基本上由MOSPD2多肽的细胞外结构域组成或由MOSPD2多肽的细胞外结构域组成的可溶性MOSPD2多肽。
58.如权利要求57所述的方法，其中所述抑制剂是特异性地结合至MOSPD2多肽的抗体。
59.如权利要求57所述的方法，其中所述抑制剂是特异性地结合至MOSPD2多肽的抗体的抗原结合片段。
60.如权利要求58所述的方法，其中所述抗体是多克隆抗体、单克隆抗体、鼠抗体、人类抗体、人源化抗体或嵌合抗体。
61.如权利要求59所述的方法，其中所述抗原结合片段是Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、scFv、sdFv片段、VH结构域或VL结构域。
62.如权利要求50-56中任一项所述的方法，其中所述抑制剂是在严格条件下与编码MOSPD2多肽的核苷酸序列杂交的RNAi、miRNA、siRNA、shRNA、反义RNA、反义DNA、诱饵分子、诱饵DNA、双链DNA、单链DNA、复合的DNA、封装的DNA、病毒DNA、质粒DNA、裸RNA、封装的RNA、病毒RNA、双链RNA、能够生成RNA干扰的分子或其组合，或者是基因编辑系统。
63.如权利要求51-61中任一项所述的方法，其中所述MOSPD2多肽具有与SEQ ID NO:1-
4中的任一个至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。
64.如权利要求51-61中任一项所述的方法，其中所述MOSPD2多肽由与SEQ ID NO:5-8中的任一个至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少
98％、至少99％或100％相同的序列编码。
65.如权利要求50-64中任一项所述的方法，其中所述受试者为人类。
66.一种经分离的多肽，其抑制MOSPD2。
67.如权利要求66所述的经分离的多肽，其中所述多肽(i)特异性结合至MOSPD2多肽、(ii)特异性结合至MOSPD2多肽的配体、(iii)是针对MOSPD2多肽产生的抗血清、(iv)是可溶性MOSPD2多肽或者(v)是包含MOSPD2多肽的细胞外结构域、基本上由MOSPD2多肽的细胞外结构域组成或由MOSPD2多肽的细胞外结构域组成的可溶性MOSPD2多肽。
68.如权利要求66或67所述的经分离的抗体，其中所述MOSPD2多肽具有与SEQ ID NO:
1-4中的任一个至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的序列。
69.如权利要求66或67所述的经分离的抗体，其中所述MOSPD2多肽由与SEQ ID NO:5-8中的任一个至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少
98％、至少99％或100％相同的序列编码。
70.一种药物组合物，其包含如权利要求66-69中任一项所述的经分离的多肽和药学上可接受的载体。
71.一种药物组合物，其包含抑制MOSPD2的经分离的多肽和药学上可接受的载体。
72.如权利要求70或71所述的药物组合物，其适用于全身或局部施用。
73.如权利要求70或71所述的药物组合物，其适用于经鼻、经口或腹膜内施用。
74.如权利要求70或71所述的药物组合物，其适用于静脉内施用、肌内施用或皮下施用。
75.一种抑制细胞的MOSPD2的方法，其包括使所述细胞与有效量的MOSPD2抑制剂接触，所述抑制剂包括具有根据以下式I的结构的氧化磷脂：
或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物，
其中：
n是1至6的整数，其中当n是1时，Cn、Bn、Rn和Y是不存在的，并且C1连接至R'n；
B1、B2、……Bn-1和Bn各自独立地选自由氧、硫、氮、磷以及硅组成的组，由此所述氮、磷和硅中的每一个任选地被选自由以下组成的组的一个取代基取代：烷基、卤代基、环烷基、芳基、羟基、巯基、烷氧基、芳氧基、硫代芳氧基、硫代烷氧基以及氧代基；
A1、A2、……An-1和An中的每一个独立地选自由CR”R”'、C＝O和C＝S组成的组，Y选自由以下组成的组：氢、酰基、烷基、芳基、环烷基、羧基、糖、磷酸、磷酰基胆碱、磷酰基乙醇胺、磷酰基丝氨酸、磷酰基心磷脂、磷酰基肌醇、乙基磷酸胆碱、磷酰基甲醇、磷酰基乙醇、磷酰基丙醇、磷酰基丁醇、磷酰基乙醇胺-N-乳糖、磷酸乙醇胺–N-戊二酸、磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(丙二醇)]、磷酸肌醇-4-磷酸、磷酸肌醇-4,5-二膦酸、磷酸肌醇-4,5-双磷酸、焦磷酸酯、磷酸乙醇胺-二乙烯三胺-五乙酸、二硝基苯基-磷酸乙醇胺、磷酸甘油以及具有以下通式的部分：
其中：
B’和B'’中的每一个独立地选自由硫和氧组成的组；并且
D’和D'’中的每一个独立地选自由以下组成的组：氢、烷基、氨基取代的烷基、环烷基、膦酸根以及硫代膦酸根；并且
X1、X2、……Xn-1的每一个独立地是具有以下通式II的饱和或不饱和烃：
其中m是1至26的整数；并且
Z选自由以下组成的组：
H、 以及–OR”，
其中W选自由氧和硫组成的组；
其中X1、X2、……Xn-1中的至少一个包含除氢之外的Z，
并且其中：
R1、R'1、R2、……Rn-1、Rn、R'n中的每一个、R'’和R”’中的每一个以及Ra、R'a、Rb、R'b、……Rm-1、R'm-1、Rm和R'm中的每一个独立地选自由以下组成的组：键、氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基、卤代基、三卤代甲基、羟基、烷氧基、芳氧基、巯基、硫代烷氧基、硫代芳氧基、膦酸根、磷酸根、氧膦基、磺酰基、亚磺酰基、磺酰胺、酰胺、羰基、硫羰基、C-羧基、O-羧基、C-氨基甲酸根、N-氨基甲酸根、C-硫代羧基、S-硫代羧基以及氨基，或者可替代地，R1、R'1、R2、……Rn-1、Rn以及R'n中的至少两个和/或Ra、R'a、Rb、R'b、……Rm-1、R'm-1、Rm以及R'm中的至少两个形成至少一个四元、五元或六元芳环、杂芳环、脂环或杂脂环或者其药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物。
76.如权利要求75所述的方法，其中所述氧化磷脂具有根据以下式III的结构：
或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物。
其中n为选自1至4的整数；
B1、每个B2和B3独立地选自由氧、硫和NR4组成的组，其中R4选自氢、烷基、环烷基、芳基以及酰基；
A1和每个A2独立地选自由CReRee、CRe＝CRee、C＝O和C＝S组成的组，其中Re和Ree独立地选自氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基以及杂芳基；
Y选自由以下组成的组：氢、酰基、烷基、芳基、环烷基、羧基、糖、磷酸、磷酰基胆碱、磷酰基乙醇胺、磷酰基丝氨酸、磷酰基心磷脂、磷酰基肌醇、乙基磷酸胆碱、磷酰基甲醇、磷酰基乙醇、磷酰基丙醇、磷酰基丁醇、磷酰基乙醇胺-N-乳糖、磷酸乙醇胺–N-戊二酸、磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(丙二醇)]、磷酸肌醇-4-磷酸、磷酸肌醇-4,5-双磷酸、焦磷酸酯、磷酸乙醇胺-二乙烯三胺-五乙酸、二硝基苯基-磷酸乙醇胺、磷酸甘油以及具有以下通式的部分：
其中：B和Ba中的每一个独立地选自由硫和氧组成的组；并且D和Da独立地选自由以下组成的组：氢、烷基、氨基烷基、环烷基、膦酸根以及硫代膦酸根；
X1和每个X2独立地是饱和或不饱和的直链或支链烃，其中X1和X2中的至少一个被选自由以下组成的组的氧化部分Z取代：
其中W是氧或硫；并且Rd和Rdd独立地选自氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基以及杂芳基；
R1、R1a、每个R2、R3以及R3a独立地选自由以下组成的组：氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基、卤代基、三卤代甲基、羟基、烷氧基、芳氧基、巯基、硫代烷氧基、硫代芳氧基、膦酸根、磷酸根、氧磷基、磺酰基、亚磺酰基、磺酰胺、酰胺、羰基、硫羰基、C-羧基、O-羧基、C-氨基甲酸根、N-氨基甲酸根、C-硫代羧基、S-硫代羧基以及氨基，其中R1、R1a、R2、R3以及R3a中的至少两个任选地连接以形成四元、五元或六元芳环、杂芳环、脂环或杂脂环。
77.如权利要求76所述的方法，其中所述氧化磷脂具有根据式III的结构，并且其中式III中的X1和每个X2独立地具有以下通式IV：
其中m为选自1至26的整数；
Z选自由以下组成的组：
H、 以及OH；
其中W是氧或硫；并且Rd和Rdd独立地选自氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基以及杂芳基，并且其中X1和X2中的至少一个包含除氢之外的Z；并且
Ra、Raa、每个Rb、每个Rbb、Rc以及Rcc独立地选自由以下组成的组：氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基、卤代基、三卤代甲基、羟基、烷氧基、芳氧基、巯基、硫代烷氧基、硫代芳氧基、膦酸根、磷酸根、氧磷基、磺酰基、亚磺酰基、磺酰胺、酰胺、羰基、硫羰基、C-羧基、O-羧基、C-氨基甲酸根、N-氨基甲酸根、C-硫代羧基、S-硫代羧基以及氨基，其中Ra、Raa、Rb、Rbb、Rc以及Rcc中的至少两个任选地连接以形成四元、五元或六元芳环、杂芳环、脂环或杂脂环。
78.如权利要求75-77中任一项所述的方法，其中在式I中n是3或者在式III中n是1。
79.如权利要求75-78中任一项所述的方法，其中Y选自由以下组成的组：氢、酰基、烷基、芳基、环烷基、羧基、糖、磷酸、磷酰基胆碱、磷酰基乙醇胺、磷酰基丝氨酸、磷酰基心磷脂、磷酰基肌醇、乙基磷酸胆碱、磷酰基甲醇、磷酰基乙醇、磷酰基丙醇、磷酰基丁醇、磷酰基乙醇胺-N-乳糖、磷酸乙醇胺–N-戊二酸、磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(丙二醇)]、磷酸肌醇-4-磷酸、磷酸肌醇-4,5-双磷酸、焦磷酸酯、磷酸乙醇胺-二乙烯三胺-五乙酸、二硝基苯基-磷酸乙醇胺以及磷酸甘油。
80.如权利要求75-79中任一项所述的方法，其中Y选自由以下组成的组：氢、磷酰基胆碱和磷酰基乙醇胺。
81.如权利要求75-80中任一项所述的方法，其中B1、B2和B3中的每一个是氧。
82.如权利要求75-81中任一项所述的方法，其中Z是 其中W是氧。
83.如权利要求75所述的方法，其中所述氧化磷脂具有根据以下式IIIa的结构：
或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物，
其中B1、B2和B3独立地选自氧和硫，
A1和A2独立地选自由以下组成的组：CH2、CH＝CH、C＝O以及C＝S；
Y选自由以下组成的组：氢、酰基、烷基、芳基、环烷基、羧基、糖、磷酸、磷酰基胆碱、磷酰基乙醇胺、磷酰基丝氨酸、磷酰基心磷脂、磷酰基肌醇、乙基磷酸胆碱、磷酰基甲醇、磷酰基乙醇、磷酰基丙醇、磷酰基丁醇、磷酰基乙醇胺-N-乳糖、磷酸乙醇胺–N-戊二酸、磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(丙二醇)]、磷酸肌醇-4-磷酸、磷酸肌醇-4,5-双磷酸、焦磷酸酯、磷酸乙醇胺-二乙烯三胺-五乙酸、二硝基苯基-磷酸乙醇胺以及磷酸甘油；
R1、R1a、R2、R3以及R3a独立地选自由以下组成的组：氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基、卤代基、三卤代甲基、羟基、烷氧基、芳氧基、巯基、硫代烷氧基、硫代芳氧基、膦酸根、磷酸根、氧磷基、磺酰基、亚磺酰基、磺酰胺、酰胺、羰基、硫羰基、C-羧基、O-羧基、C-氨基甲酸根、N-氨基甲酸根、C-硫代羧基、S-硫代羧基以及氨基，其中R1、R1a、R2、R3以及R3a中的至少两个任选地连接以形成四元、五元或六元芳环、杂芳环、脂环或杂脂环，
并且其中X1和X2独立地是饱和或不饱和的直链或支链烃，其中X1和X2中的至少一个被具有选自以下的式的氧化部分Z取代：
其中W是氧或硫；并且Rd和Rdd独立地选自氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基以及杂芳基。
84.如权利要求83所述的方法，其中R1、R1a、R2、R3以及R3a各自是氢。
85.如权利要求83或84所述的方法，其中X1和X2独立地具有根据以下式IVa的结构：
其中m为选自1至26的整数，
Ra、Raa、每个Rb、每个Rbb、Rc以及Rcc独立地选自由以下组成的组：氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基、卤代基、三卤代甲基、羟基、烷氧基、芳氧基、巯基、硫代烷氧基、硫代芳氧基、膦酸根、磷酸根、氧磷基、磺酰基、亚磺酰基、磺酰胺、酰胺、羰基、硫羰基、C-羧基、O-羧基、C-氨基甲酸根、N-氨基甲酸根、C-硫代羧基、S-硫代羧基以及氨基，其中Ra、Raa、Rb、Rbb、Rc以及Rcc中的至少两个任选地连接以形成四元、五元或六元芳环、杂芳环、脂环或杂脂环；
Z选自由以下组成的组：
H、 以及ORd，
其中W是氧或硫；并且Rd和Rdd独立地选自氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基以及杂芳基，其中X1和X2中的至少一个包含除氢之外的Z。
86.如权利要求83-85中任一项所述的方法，其中Z是 并且其中W是氧。
87.如权利要求83-86中任一项所述的方法，其中Y选自由以下组成的组：氢、磷酰基胆碱和磷酰基乙醇胺。
88.如权利要求83-87中任一项所述的方法，其中B1、B2和B3中的每一个是氧。
89.如权利要求75所述的方法，其中所述氧化磷脂具有根据以下式VI的结构：
其中A1选自由以下组成的组：CH2、CH＝CH和C＝O；A2是不存在的或是CH2；X1是具有1至30个碳原子的烷基；X2是
其中
E是不存在的或者是具有1至24个碳原子的烷基链；
F选自由以下组成的组：氢、羟基、烷基、烷氧基、卤化物、乙酰氧基以及芳基；并且Z选自由以下组成的组：
以及-ORd，
其中Rd选自H、烷基和芳基；并且
Y选自由以下组成的组：氢、烷基、芳基、磷酸、磷酰基胆碱、磷酰基乙醇胺、磷酰基丝氨酸、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰心磷脂、磷脂酰肌醇、磷酰基心磷脂、磷酰基肌醇、乙基磷酸胆碱、磷酰基甲醇、磷酰基乙醇、磷酰基丙醇、磷酰基丁醇、磷酰基乙醇胺-N-乳糖、磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(丙二醇)]、磷酸肌醇-4-磷酸、磷酸肌醇-4,5-双磷酸、焦磷酸酯、磷酸乙醇胺-二乙烯三胺-五乙酸、二硝基苯基-磷酸乙醇胺、磷酸甘油。
90.如权利要求89所述的方法，其中X1是具有10至30个碳原子的烷基。
91.如权利要求89或90所述的方法，其中E是具有1至10个碳原子的烷基。
92.如权利要求89-91中任一项所述的方法，其中Y是磷酸胆碱。
93.如权利要求75-92中任一项所述的方法，其中所述磷酸胆碱是
或其药学上可接受的盐。
94.如权利要求75-93中任一项所述的方法，其中所述磷酸胆碱是
或其药学上可接受的盐。
95.如权利要求4-7中任一项所述的方法，其中所述抗体或其抗原结合片段结合至MOSPD2，其结合亲和力(KD)为约10-6M至约10-12M。
96.如权利要求4-7或95中任一项所述的方法，其中所述MOSPD2是人类MOSPD2。
97.如权利要求4-7、95和96中任一项所述的方法，其中所述抗体或其抗原结合片段特异性结合至根据SEQ ID NO:1编号的人类MOSPD2的以下氨基酸区域中的一个或多个：约508至约517、约501至约514、约233至约241、约509至约517、约212至约221、约13至约24、约505至约517、约505至约514、约89至约100、约506至约517、约233至约245、约504至约514、约128至约136、约218至约226、约15至约24、约83至约96、约42至约50、约462至474、约340至约
351、约504至约517、约462至约470、约327至约337、约21至约32、约217至约226、约510至约
517、约178至约190、约497至约509、约504至约516、约64至约77、约504至约515、约147至约
159、约503至约515、约88至约97、约208至约218、约178至约191、约502至约515、约503至约
516、约497至约505、约500至约509、约189至约202、约189至约197、约505至约516、约1至约
63、约82至约239、约93至约234、约327至约445、约327至约431以及约497至约517。
98.如权利要求4-7和95-97中任一项所述的方法，其中所述抗体或其抗原结合片段特异性结合至根据SEQ ID NO:1编号的人类MOSPD2的以下氨基酸区域中的一个或多个：约505至约515、约500至约515、约230至约240、约510至约520、约210至约220、约15至约25、约505至约520、约505至约515、约90至约100、约505至约525、约230至约245、约505至约510、约130至约140、约220至约230、约15至约30、约80至约95、约40至约50、约460至约475、约340至约
350、约500至约515、约460至约470、约325至约335、约20至约35、约215至约225、约510至约
520、约175至约190、约500至约510、约505至约530、约60至约75、约500至约520、约145至约
160、约502至约515、约85至约100、约205至约220、约175至约190、约500至约505、约500至约
525、约495至约505、约495至约510、约190至约200、约190至约198、约502至约515、约1至约
60、约80至约240、约90至约235、约330至约445、约330至约430以及约495至约515。
99.如权利要求4-7和95-98中任一项所述的方法，其中所述抗体是IgG、IgM、IgE、IgA或IgD分子，或者来源于它们。
100.如权利要求4-7和95-99中任一项所述的方法，其中所述抗体包含Fc区。
含有活动精子结构域的蛋白质2和炎症
发明领域
[0001] 本发明涉及抗炎方法，例如使用含有活动精子结构域的蛋白质2(MOSPD2)的抑制剂治疗、预防细胞中的一种或多种活动或一种或多种炎性疾病或病症或者减少所述活动或疾病或病症的发生率的方法。本发明还涉及包含一种或多种MOSPD2的抑制剂的药物组合
物。
物。
[0002] 发明背景
[0003] 白细胞是免疫系统中参与身体防御感染性疾病和异物的细胞。单核细胞是一种类型的白细胞并且在先天性免疫和适应性免疫、免疫监督和粒子清除中具有重要作用。虽然单核细胞亚群是“驻留的”并且独立于炎性刺激而募集到组织以有助于稳态监督、创伤愈合和炎症消退，但是大部分(80％-90％)人类循环单核细胞被分类为“炎性的”。循环单核细胞可以感测炎性刺激并且通过血管或淋巴内皮细胞快速迁移到外周，在外周它们可以分化成巨噬细胞和树突状细胞(DC)，所述巨噬细胞和树突状细胞与另外的细胞亚群合作来促进炎症。虽然在宿主防御中起必要作用，但是单核细胞被鉴定为若干种炎性病症的重要介质，所述病症包括动脉粥样硬化、类风湿性关节炎(RA)和多发性硬化症(MS)。
[0004] 趋化因子受体和粘附分子在调节白细胞运输方面起关键性作用。在白细胞系和亚群上不同地表达的趋化因子受体(G-蛋白偶联受体(GPCR))的复杂阵列在不同条件下调节将迁移的细胞类型和将迁移到的组织。趋化因子或趋化性细胞因子是调节单核细胞和基质细胞的迁移和活化的分泌蛋白。趋化因子与趋化因子受体的结合活化信号传导途径，诸如MAPK/ERK和PI3K/AKT途径，从而分别引起ERK和AKT的磷酸化。在炎性单核细胞的情况下，从骨髓出来穿过内皮细胞单层(血球渗出)以进入循环系统(内渗)并且迁移到发炎组织是依
赖于C-C基序受体2(CCR2)信号传导，这响应于由趋化因子C-C基序配体(CCL)2(也称为单核细胞趋化蛋白-1；MCP-1)和CCL7(MCP-3)进行的活化。在另一方面，驻留单核细胞到未发炎组织的组成型迁移大部分依赖于CCL3(也称为巨噬细胞炎性蛋白-1α；MIP-1α)和趋化因子(C-X3-C基序)配体1(CX3CL1)。
赖于C-C基序受体2(CCR2)信号传导，这响应于由趋化因子C-C基序配体(CCL)2(也称为单核细胞趋化蛋白-1；MCP-1)和CCL7(MCP-3)进行的活化。在另一方面，驻留单核细胞到未发炎组织的组成型迁移大部分依赖于CCL3(也称为巨噬细胞炎性蛋白-1α；MIP-1α)和趋化因子(C-X3-C基序)配体1(CX3CL1)。
[0005] 抑制炎性细胞朝向炎性部位迁移(例如，白细胞趋化性)是一种治疗慢性疾病的有吸引力的抗炎方法。抑制不需要的单核细胞和/或巨噬细胞在慢性发炎组织中的累积具有治疗潜力，并且迁移抑制剂因此在动物模型和临床试验中证实了有利的治疗结果。然而，可能由于靶受体的丰余性和异质疾病(诸如多发性硬化症和类风湿性关节炎)的复杂性，趋化因子和趋化因子受体拮抗剂已存在若干II期临床试验失败。
[0006] 另外，炎症的抑制也与骨质疏松症的治疗相关，因为炎症对骨转换产生影响，从而诱导骨质疏松症。
[0007] 含有活动精子结构域的蛋白质2(MOSPD2)是在人类与小鼠之间具有90％同源性的、长518个氨基酸的高度保守性蛋白质。生物信息学分析指示MOSPD2含有CRAL-TRIO区域，这是以细胞视黄醛结合蛋白(CRALBP)和TRIO蛋白命名。MOSPD2还含有与线虫类主要精子蛋白在结构上相关的区域和一个跨膜区域。尚未描述MOSPD2的生物功能。
[0008] 发明概述
[0009] 在一些实施方案中，本发明涉及使用含有活动精子结构域的蛋白质2(MOSPD2)的抑制剂治疗、预防炎性疾病或病症或减少所述炎性疾病或病症的发生率的方法，并且涉及使用MOSPD2的抑制剂抑制或预防细胞中的一种或多种活动的方法。在一些实施方案中，本发明涉及各种治疗或预防方法，包括治疗、预防炎性疾病或病症或减少所述炎性疾病或病症的发生率的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的MOSPD2的抑制剂。
在其它实施方案中，本发明涉及一种抑制、预防细胞中的一种或多种活动或减少所述活动的发生率的方法，其包括向有需要的受试者施用治疗有效量的MOSPD2的抑制剂，其中所述一种或多种活动是以下中的一种或多种：MOSPD2表达、炎性细胞迁移(例如，白细胞或单核细胞迁移)、趋化性(例如，白细胞或单核细胞趋化性)、趋化因子信号传导途径、ERK磷酸化以及AKT磷酸化。在一些实施方案中，MOSPD2的抑制剂是抗体或其抗原结合片段。在其它实施方案中，所述抗体是多克隆抗体、单克隆抗体、鼠抗体、人类抗体、人源化抗体或嵌合抗体。在一些实施方案中，本发明涉及抑制细胞中的MOSPD2的各种方法，其包括使所述细胞与有效量的MOSPD2的抑制剂接触。
在其它实施方案中，本发明涉及一种抑制、预防细胞中的一种或多种活动或减少所述活动的发生率的方法，其包括向有需要的受试者施用治疗有效量的MOSPD2的抑制剂，其中所述一种或多种活动是以下中的一种或多种：MOSPD2表达、炎性细胞迁移(例如，白细胞或单核细胞迁移)、趋化性(例如，白细胞或单核细胞趋化性)、趋化因子信号传导途径、ERK磷酸化以及AKT磷酸化。在一些实施方案中，MOSPD2的抑制剂是抗体或其抗原结合片段。在其它实施方案中，所述抗体是多克隆抗体、单克隆抗体、鼠抗体、人类抗体、人源化抗体或嵌合抗体。在一些实施方案中，本发明涉及抑制细胞中的MOSPD2的各种方法，其包括使所述细胞与有效量的MOSPD2的抑制剂接触。
[0010] 在一些实施方案中，MOSPD2抑制剂为小分子，诸如氧化磷脂。在一个优选的实施方案中，MOSPD2抑制剂为VB-201。在一些实施方案中，MOSPD2抑制剂为非氧化磷脂的MOSPD2抑制剂。在一些实施方案中，MOSPD2抑制剂为非VB-201的MOSPD2抑制剂。在一些实施方案中，MOSPD2抑制剂结合至细胞表面(例如，炎性细胞表面)上表达的MOSPD2。
[0011] 在其它实施方案中，本发明还涉及抑制MOSPD2的多肽和含有抑制MOSPD2的多肽的药物组合物。在一些实施方案中，所述多肽是抗体或其抗原结合片段。
[0012] 在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段特异性结合至MOSPD2。在其它实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合至MOSPD2，其平衡解离常数(KD)为约10-6M至约10-12M。在其它实施方案中，MOSPD2为人类MOSPD2。在其它实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段特异性结合至根据SEQ ID NO:1编号的人类MOSPD2的以下氨基酸区域中的一个或多个：约508至约517、约501至约514、约233至约241、约509至约517、约212至约221、约13至约
24、约505至约517、约505至约514、约89至约100、约506至约517、约233至约245、约504至约
514、约128至约136、约218至约226、约15至约24、约83至约96、约42至约50、约462至474、约
340至约351、约504至约517、约462至约470、约327至约337、约21至约32、约217至约226、约
510至约517、约178至约190、约497至约509、约504至约516、约64至约77、约504至约515、约
147至约159、约503至约515、约88至约97、约208至约218、约178至约191、约502至约515、约
503至约516、约497至约505、约500至约509、约189至约202、约189至约197、约505至约516、约1至约63、约82至约239、约93至约234、约327至约445、约327至约431以及约497至约517。
24、约505至约517、约505至约514、约89至约100、约506至约517、约233至约245、约504至约
514、约128至约136、约218至约226、约15至约24、约83至约96、约42至约50、约462至474、约
340至约351、约504至约517、约462至约470、约327至约337、约21至约32、约217至约226、约
510至约517、约178至约190、约497至约509、约504至约516、约64至约77、约504至约515、约
147至约159、约503至约515、约88至约97、约208至约218、约178至约191、约502至约515、约
503至约516、约497至约505、约500至约509、约189至约202、约189至约197、约505至约516、约1至约63、约82至约239、约93至约234、约327至约445、约327至约431以及约497至约517。
[0013] 在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段特异性结合至根据SEQ ID NO:1编号的人类MOSPD2的以下氨基酸区域中的一个或多个：约505至约515、约500至约515、约
230至约240、约510至约520、约210至约220、约15至约25、约505至约520、约505至约515、约
90至约100、约505至约525、约230至约245、约505至约510、约130至约140、约220至约230、约
15至约30、约80至约95、约40至约50、约460至约475、约340至约350、约500至约515、约460至约470、约325至约335、约20至约35、约215至约225、约510至约520、约175至约190、约500至约510、约505至约530、约60至约75、约500至约520、约145至约160、约502至约515、约85至约
100、约205至约220、约175至约190、约500至约505、约500至约525、约495至约505、约495至约510、约190至约200、约190至约198、约502至约515、约1至约60、约80至约240、约90至约
235、约330至约445、约330至约430以及约495至约515。
230至约240、约510至约520、约210至约220、约15至约25、约505至约520、约505至约515、约
90至约100、约505至约525、约230至约245、约505至约510、约130至约140、约220至约230、约
15至约30、约80至约95、约40至约50、约460至约475、约340至约350、约500至约515、约460至约470、约325至约335、约20至约35、约215至约225、约510至约520、约175至约190、约500至约510、约505至约530、约60至约75、约500至约520、约145至约160、约502至约515、约85至约
100、约205至约220、约175至约190、约500至约505、约500至约525、约495至约505、约495至约510、约190至约200、约190至约198、约502至约515、约1至约60、约80至约240、约90至约
235、约330至约445、约330至约430以及约495至约515。
[0015] 在此参考附图，仅通过举例来描述本发明的一些实施方案。现在详细地具体参考附图，应当强调的是通过举例并且出于本发明的实施方案的说明性讨论的目的显示细节。
[0016] 图1示出使用针对MOSPD2(sh-MOSPD2)的小发夹RNA(sh-RNA)获得的含有活动精子结构域的蛋白质2(MOSPD2)mRNA表达的抑制。用对照慢病毒颗粒(sh-Cont)或针对MOSPD2的三个不同mRNA区域的慢病毒颗粒(标记为Sh-MOSPD2#12、#25、#42、#62和#96)转导U937细胞。使用定量聚合酶链反应(PCR)评估细胞中的MOSPD2mRNA表达并且使用β-肌动蛋白表达归一化。指示使用sh-MOSPD2与sh-对照相比的MOSPD2表达降低百分比。
[0017] 图2示出MOSPD2抑制对RANTES-诱导的U937细胞迁移的作用。在跨孔测定中测试用对照慢病毒颗粒(Lenti sh-Cont)或sh-MOSPD2(Lenti sh-MOSPD2转导的U937细胞朝向RANTES的迁移。所示结果是三个孔的迁移±标准偏差的平均值百分比。*p<0.05。
[0018] 图3示出MOSPD2抑制对RANTES-诱导的U937细胞迁移的进一步作用。使用溶剂(Sol)处理用对照慢病毒颗粒(Lenti sh-Cont)或针对基因转录物上的不同区域的sh-
MOSPD2(Lenti sh-MOSPD2)(Lenti sh#25或Lenti sh#42或Lenti#96)转导U937细胞，并且然后在跨孔测定中测试朝向RANTES的迁移。所示结果是三个孔的迁移±标准偏差的平均值百分比。
MOSPD2(Lenti sh-MOSPD2)(Lenti sh#25或Lenti sh#42或Lenti#96)转导U937细胞，并且然后在跨孔测定中测试朝向RANTES的迁移。所示结果是三个孔的迁移±标准偏差的平均值百分比。
[0019] 图4呈现示出在用RANTES活化之后MOSPD2抑制对磷酸化ERK(p-ERK)和磷酸化AKT(p-AKT)水平的作用的蛋白质印迹图像。将用对照慢病毒颗粒(Lenti sh-Cont)或sh-
MOSPD2(Lenti sh-MOSPD2#25或Lenti sh-MOSPD2#42)转导的U937细胞使用RANTES处理2分钟或5分钟。热休克蛋白90(HSP90)的表达也示出为加样对照。
MOSPD2(Lenti sh-MOSPD2#25或Lenti sh-MOSPD2#42)转导的U937细胞使用RANTES处理2分钟或5分钟。热休克蛋白90(HSP90)的表达也示出为加样对照。
[0020] 图5示出MOSPD2抑制对趋化因子-诱导的U937细胞迁移的作用。在跨孔测定中测试用对照慢病毒颗粒(Lenti sh-Cont)或Lenti sh-MOSPD2慢病毒颗粒(Lenti sh-MOSPD2)转导的U937细胞朝向MCP-3、MCP-1、RANTES和SDF-1的迁移。所示结果是三个孔的迁移±标准偏差的平均值百分比。*p<0.05。
[0021] 图6呈现示出在用趋化因子活化之后MOSPD2抑制对磷酸化ERK(p-ERK)和磷酸化AKT(p-AKT)水平的作用的蛋白质印迹图像。使用RANTES、MCP-3、MCP-1和SDF-1处理用对照慢病毒颗粒(sh-Con)或sh-MOSPD2转导的U937细胞。微管蛋白(Tub)的表达也示出为加样对照。
[0022] 图7示出MOSPD2抑制对U937细胞增殖的作用。接种用对照慢病毒颗粒(Lenti sh-Cont,-◆-)或sh-MOSPD2慢病毒颗粒(Lenti sh-MOSPD2,-■-)转导的U937细胞并且每24小时计数一次，持续连续三天(第1天、第2天和第3天)。所示结果是三次重复的平均细胞数目/天±标准偏差。
[0023] 图8A-8B呈现显示经分离的兔多克隆α-MOSPD2抗体检测内源性人类MOSPD2并使其沉淀的蛋白质印迹图像。在图8A中，由用对照或sh-MOSPD2慢病毒颗粒(分别为Lenti sh-对照或Lenti sh-MOSPD2)转导的U937细胞制备细胞裂解物。将样品装载在凝胶上并且使用经分离的α-MOSPD2抗体进行印迹分析。还将HSP90的表达确定为加样对照。在图8B中，还使用经分离的α-MOSPD2抗体或兔IgG作为对照来使U937细胞裂解物免疫沉淀。通过使用经分离的α-MOSPD2抗体进行免疫印迹来分析所得沉淀，接着用山羊抗兔抗体-HRP孵育。
[0024] 图9呈现显示MOSPD2在转染的HEK293细胞的细胞表面上表达的柱状图。在图9中，用空载体或HA-rhMOSPD2质粒(MOSPD2-HA)转染HEK293细胞。收集转染的细胞并且用抗HA-PE抗体染色。使用FACSCalibur(BD Bioscience)评估MOSPD2的表达。
[0025] 图10呈现显示MOSPD2定位到从外周血液中分离的人类CD14单核细胞的膜部分的图像。图10是基于使用抗-MOSPD2抗体对人类CD14单核细胞以及膜(M)和细胞质(C)级分进行的分析。使用抗-ERK或抗-MHC I类抗体分别评价细胞质和膜蛋白质的分离纯度。
[0026] 图11呈现显示VB-201结合至来自人类CD14单核细胞的细胞裂解物的MOSPD2的蛋白质印迹图像。将标记的VB-201或VB-221(OB201或OB221)添加到细胞裂解物中并且使蛋白质沉淀。在凝胶上运行样品并且针对TLR2和MOSPD2进行印迹分析，其结果示出在图11中。
[0027] 图12呈现显示对于血球凝集素(HA)呈阳性染色的HEK293细胞与OB201而非OB221具有强结合的柱状图。图12因此显示VB-201结合至用HA-标记的MOSPD2表达载体转染的
HEK293细胞的细胞表面上的MOSPD2。在图12中，将HEK293细胞用标记的VB-201或VB-221
(OB201或OB221)孵育，然后进行链霉亲和素-APC染色。
HEK293细胞的细胞表面上的MOSPD2。在图12中，将HEK293细胞用标记的VB-201或VB-221
(OB201或OB221)孵育，然后进行链霉亲和素-APC染色。
[0028] 图13列出17种抗-MOSPD2F(ab')2单克隆抗体(mAb)克隆，所述单克隆抗体克隆在初步筛选以用于结合至过度表达MOSPD2的细胞之后鉴定。使用酶联免疫吸附测定(ELISA)对用于MOSPD2结合的克隆进行进一步分析鉴定了O.D.值相对于本底大于5倍(在图13中
的*)的12种克隆。
的*)的12种克隆。
[0029] 图14A-14B示出两种代表性抗-MOSPD2F(ab')2mAb克隆与过度表达MOSPD2的细胞的结合。
[0030] 图15A-15D示出MOSPD2的细胞表达特异性和定位。
[0031] 图16A-16C显示MOSPD2在已浸润到发炎组织中的单核细胞上表达。
[0032] 图17A-17B分别显示MOSPD2不会影响IFN-γ-诱导的STAT1磷酸化(p-Stat1)或PMA-介导的ERK1/2磷酸化(p-ERK1/2)。
[0033] 发明详述
[0034] 在详细地解释本发明的实施方案之前，应理解本发明并不限于其在以下描述中所阐述的或通过实施例所列举的细节方面的应用。本发明能够具有其它实施方案或能够以各种方式实践或执行。此外，应理解本文中采用的措辞和术语是出于描述的目的并且不应视为具有限制性。
[0035] 一般定义
[0036] 术语“包括(comprises)”、“包括(comprising)”、“包含(includes)”、“包含(including)”、“具有(having)”以及其动词变化意指“包括但不限于”。
[0037] 术语“由...组成”意指“包括并限于”。
[0039] 词语“示例性”在本文中用于意指“充当一个实例、例子或说明”。描述为“示例性”的任何实施方案不一定被解释为是比其它实施方案优选的或者有利的，和/或排除来自其它实施方案的特征的并入。
[0040] 词语“任选地”在本文中用于意指“被提供在一些实施方案中而未被提供在其它实施方案中”。本发明的任何特定实施方案可以包括多个“任选的”特征，除非此类特征冲突。
[0041] 除非上下文另外清楚地指示，否则如在此所使用的单数形式“一个/种(a/an)”和“该”包括复数个指示物。例如，术语“化合物”或“至少一种化合物”可包括多种化合物，包括其混合物。
[0042] 如本文所用，修饰与本发明相关的量的术语“约”是指例如通过常规测试和处理；通过此类测试和处理中的粗心误差；通过制造的差异、来源或用于本发明中的成分纯度；以及类似情况可能发生的数值量的变化。无论是否由术语“约”修饰，权利要求都包括所引述量的等效值。在一个实施方案中，术语“约”意指在所报告的数值的10％内。在另一个实施方案中，术语“约”意指在所报告的数值的5％内。
[0043] 贯穿本申请，本发明的各种实施方案可以范围形式来呈现。应当了解，呈范围形式的描述仅仅是为了方便和简洁，不应理解为对本发明范围的硬性限制。因此，范围的描述应被认为具有确切公开的所有可能的子范围以及所述范围内的单独数值。例如，范围(诸如从1至6)的描述应当被认为是具有确切公开的子范围，如从1至3、从1至4、从1至5、从2至4、从2至6、从3至6等，以及该范围内的单独数字，例如1、2、3、4、5和6。不管范围有多宽，这都适用。
[0044] 如在此使用，术语“方法”指用于完成给定任务的方式、手段、技术以及程序，包括但不限于由化学、药理学、生物学、生物化学以及医学领域从业者已知或易于从已知方式、手段、技术以及程序开发的那些方式、手段、技术以及程序。
[0045] 如在此使用，术语“治疗(treating)”包括消除、基本上抑制、减缓或逆转病状进展、基本上改善病状的临床或美学症状或基本上防止病状的临床或美学症状的出现。
[0046] 如本文所用，“MOSPD2”是指被分类为含有活动精子结构域的蛋白质2的任何多肽。MOSPD2的实例包括但不限于SEQ ID NO:1-4的多肽或其任何变体(例如，具有与SEQ ID NO:
1-4中的任一个至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的序列)。MOSPD2的其它实例包括但不限于由SEQ ID NO:5-8中任一个的多核苷酸或其任何变体(例如，具有与SEQ ID NO:5-8中的任一个至少75％、至少
80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的序列)编码的多肽。编码MOSPD2的多核苷酸序列可进行密码子优化以通过本领域已知的方法在特定生物体中表达。MOSPD2的其它实例可以通过搜索如本领域技术人员已熟知的公共数据库(例如，BLAST)来鉴定。
1-4中的任一个至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的序列)。MOSPD2的其它实例包括但不限于由SEQ ID NO:5-8中任一个的多核苷酸或其任何变体(例如，具有与SEQ ID NO:5-8中的任一个至少75％、至少
80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的序列)编码的多肽。编码MOSPD2的多核苷酸序列可进行密码子优化以通过本领域已知的方法在特定生物体中表达。MOSPD2的其它实例可以通过搜索如本领域技术人员已熟知的公共数据库(例如，BLAST)来鉴定。
[0047] 如本文所用，“MOSPD2的活性”或“MOSPD2活性”包括含有活动精子结构域的蛋白质2的任何已知或本文所述的功能。此类活动包括例如调节炎性细胞迁移(例如，白细胞或单核细胞迁移)、趋化性、趋化因子诱导的白细胞迁移或趋化性、趋化因子受体信号传导途径、生长因子信号传导途径、EGF受体磷酸化、ERK磷酸化、AKT磷酸化、FAK磷酸化或炎症。
[0048] 如本文所用，“炎性细胞”包括但不限于白细胞、粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜碱性粒细胞、嗜碱性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞或肥大细胞。
[0049] 如本文所用，“趋化性”是指细胞响应于化学刺激而移动。趋化性包括但不限于炎性细胞诸如单核细胞向趋化因子移动。
[0050] 如本文所用，“MOSPD2的抑制剂”和“MOSPD2抑制剂”是指下调MOSPD2的活性的任何化合物。所述抑制剂可以是例如多肽、DNA或RNA。MOSPD2的抑制也可以例如通过经由感染异位过度表达MOSPD2来发生，并且预期MOSPD2的抑制剂或MOSPD2抑制剂涵盖这种类型的抑制。抑制剂也可以是例如特异性结合至MOSPD2多肽的分子、特异性结合至MOSPD2多肽的配体的分子、针对MOSPD2多肽产生的抗血清、可溶性MOSPD2多肽或者包含MOSPD2多肽的细胞外结构域、基本上由MOSPD2多肽的细胞外结构域组成或由MOSPD2多肽的细胞外结构域组成的可溶性MOSPD2多肽。抑制剂也可以是例如特异性结合至MOSPD2多肽的抗体或特异性结合至MOSPD2多肽的抗体的抗原结合片段。抑制剂也可以是例如与编码MOSPD2多肽的核苷酸序列杂交的RNAi、miRNA、siRNA、shRNA、反义RNA、反义DNA、诱饵分子、诱饵DNA、双链DNA、单链DNA、复合的DNA、封装的DNA、病毒DNA、质粒DNA、裸RNA、封装的RNA、病毒RNA、双链RNA、能够生成RNA干扰的分子或其组合。抑制剂也可以是下调MOSPD2的活性的小分子化学化合物。
[0051] 抑制剂也可以是成簇有规律间隔的短回文重复CRISPR-CAS9系统。CRISPR-CAS9系统已在文献中描述并且可以包含例如CAS9和指导RNA。其它基因编辑技术也已描述于文献中并且也可以使用。
[0052] “抗体”或抗体的“抗原结合片段”包括但不限于多克隆抗体、单克隆抗体、鼠抗体、人类抗体、人源化抗体或嵌合抗体、单链抗体、表位结合片段，例如Fab、Fab'和F(ab')2、Fd、Fv、单链Fv(scFv)、单链抗体、二硫化物连接的Fv(sdFv)、轻链可变区(VL)或重链可变区(VH)结构域、包含VL或VH结构域的片段以及由Fab表达文库产生的片段。抗体或抗体抗原结合片段可以是免疫球蛋白分子的任何类型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、类别(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或子类别。用于制备抗体的抗原结合片段的方法是已知的并且包括例如对抗体进行化学或蛋白酶消化。
[0053] 抗体的“恒定区”是指单独或组合的抗体轻链的恒定区或抗体重链的恒定区。
[0054] 术语“Fc区”用于定义免疫球蛋白重链的C端区。“Fc区”可以是天然序列Fc区或变体Fc区。尽管免疫球蛋白重链的Fc区的边界可发生改变，但是人类IgG重链Fc区通常被定义为从位置Cys226的氨基酸残基或从Pro230到其羧基末端的片段。Fc区中残基的编号是Kabat中的EU索引的编号。Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological
Interest，第5版，Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.,1991。免疫球蛋白的Fc区通常包含两个恒定结构域CH2和CH3。
Interest，第5版，Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.,1991。免疫球蛋白的Fc区通常包含两个恒定结构域CH2和CH3。
[0055] “特异性结合”通常意指抗体或其片段、变体或衍生物通过其抗原结合结构域结合至表位，并且结合需要在抗原结合结构域与表位之间有一些互补。根据这个定义，当抗体或其片段、变体或衍生物经由其抗原结合结构域结合至表位比它结合至随机、不相关的表位更容易时，认为所述抗体或其片段、变体或衍生物“特异性结合”至该表位。
[0056] 如本文所用，术语“表位”是指抗体可以特异性结合的抗原的局部区域。表位可以是例如多肽的连续氨基酸(线性或相邻表位)或者表位可以例如一起来自一种或多种多肽的两个或更多个非连续区域(构象、非线性、不连续或非连续表位)。在某些实施方案中，抗体特异性结合的表位可以通过文献中和本文中所述的方法来确定，所述方法例如NMR光谱学、X-射线衍射晶体学研究、ELISA测定、与质谱分析(例如，MALDI质谱分析)相联接的氢/氘交换、基于阵列的寡肽扫描测定和/或诱变作图(例如，定点诱变作图)。
[0057] 如本领域中已知的术语“同一性百分比”是指两个或更多个多肽序列或者两个或更多个多核苷酸序列之间的关系，如通过比较所述序列来确定的。在本领域中，“同一性”和“同一性百分比”还意指多肽或多核苷酸序列之间的序列相关程度，这视情况而定，如通过此类序列串之间的匹配所确定的。“同一性”和“相似性”可以容易通过已知方法和公众可获得资源来计算，所述方法和资源包括但不限于以下所述的那些：(1)Computational Molecular Biology(Lesk,A.M.编辑)Oxford University:NY(1988)；(2)Biocomputing:
Informatics and Genome Projects(Smith,D.W.编辑)Academic:NY(1993)；(3)Computer Analysis of Sequence Data,Part I(Griffin,A.M.和Griffin,H.G.编辑)Humania:NJ
(1994)；(4)Sequence Analysis in Molecular Biology(von Heinje,G.编辑)Academic
(1987)；以及(5)Sequence Analysis Primer(Gribskov,M.和Devereux,J.编辑)Stockton:
NY(1991)。
Informatics and Genome Projects(Smith,D.W.编辑)Academic:NY(1993)；(3)Computer Analysis of Sequence Data,Part I(Griffin,A.M.和Griffin,H.G.编辑)Humania:NJ
(1994)；(4)Sequence Analysis in Molecular Biology(von Heinje,G.编辑)Academic
(1987)；以及(5)Sequence Analysis Primer(Gribskov,M.和Devereux,J.编辑)Stockton:
NY(1991)。
[0058] 当核酸片段的单链形式可以在适当的温度和溶液离子强度的条件下退火至其它核酸片段时，多核苷酸可以与另一个多核苷酸“杂交”。杂交和洗涤条件是已熟知的并且例如在以下各项中举例说明：Sambrook等,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,第2
版,Cold Spring Harbor Laboratory:Cold Spring Harbor,N.Y.(1989)，特别是其中的第
11章和表11.1(以引用的方式整体并入本文)。温度和离子强度的条件决定杂交的“严格
性”。严格条件可以进行调节以筛选适度类似的片段(诸如来自远缘生物的同源序列)至高度类似的片段(诸如复制来自远缘生物的功能酶的基因)。杂交后洗涤决定严格条件。一组示例性严格条件使用一系列洗涤，在室温下以6xSSC、0.5％SDS开始，持续15分钟，然后在45℃下用2xSSC、0.5％SDS重复30分钟，并且然后在50℃下用0.2xSSC、0.5％SDS重复两次，持续30分钟。另一组示例性严格条件使用更高的温度，其中洗涤与以上那些相同，除了最后两次30分钟在0.2xSSC、0.5％SDS中洗涤的温度增加至60℃。此组严格条件通过增加在65℃下以0.1xSSC、0.1％SDS进行的两次最终洗涤来修改成“高严格条件”。另一组示例性严格条件包括例如在0.1xSSC、0.1％SDS、65℃下的杂交和使用2xSSC、0.1％SDS接着用0.1xSSC、
0.1％SDS进行的洗涤。
版,Cold Spring Harbor Laboratory:Cold Spring Harbor,N.Y.(1989)，特别是其中的第
11章和表11.1(以引用的方式整体并入本文)。温度和离子强度的条件决定杂交的“严格
性”。严格条件可以进行调节以筛选适度类似的片段(诸如来自远缘生物的同源序列)至高度类似的片段(诸如复制来自远缘生物的功能酶的基因)。杂交后洗涤决定严格条件。一组示例性严格条件使用一系列洗涤，在室温下以6xSSC、0.5％SDS开始，持续15分钟，然后在45℃下用2xSSC、0.5％SDS重复30分钟，并且然后在50℃下用0.2xSSC、0.5％SDS重复两次，持续30分钟。另一组示例性严格条件使用更高的温度，其中洗涤与以上那些相同，除了最后两次30分钟在0.2xSSC、0.5％SDS中洗涤的温度增加至60℃。此组严格条件通过增加在65℃下以0.1xSSC、0.1％SDS进行的两次最终洗涤来修改成“高严格条件”。另一组示例性严格条件包括例如在0.1xSSC、0.1％SDS、65℃下的杂交和使用2xSSC、0.1％SDS接着用0.1xSSC、
0.1％SDS进行的洗涤。
[0059] 杂交要求两个核酸含有互补序列，虽然根据杂交的严格性，碱基之间有可能存在错配。用于使核酸杂交的适当严格性取决于核酸的长度和互补的程度、本领域中熟知的变量。两个核苷酸序列之间的类似性或同源性程度越大，对于具有那些序列的核酸的杂交体的Tm的值越大。核酸杂交的相对稳定性(对应于较高的Tm)以以下顺序降低：RNA:RNA、DNA:RNA、DNA:DNA。对于长度大于100个核苷酸的杂交体，已推导出用于计算Tm的等式(参见
Sambrook等人,9.50-9.51)。对于使用较短核酸(即寡核苷酸)的杂交，错配的位置变得更加重要，并且寡核苷酸的长度决定其特异性(参见Sambrook等人，同上,11.7-11.8)。在一个实施方案中，可杂交核酸的长度为至少约10个核苷酸。在其它实施方案中，可杂交核酸的最小长度为至少约15个核苷酸或至少约20个核苷酸。
Sambrook等人,9.50-9.51)。对于使用较短核酸(即寡核苷酸)的杂交，错配的位置变得更加重要，并且寡核苷酸的长度决定其特异性(参见Sambrook等人，同上,11.7-11.8)。在一个实施方案中，可杂交核酸的长度为至少约10个核苷酸。在其它实施方案中，可杂交核酸的最小长度为至少约15个核苷酸或至少约20个核苷酸。
[0060] 如本文全文所用，术语“烷基”是指饱和脂肪烃类，包括直链和支链基团。在一些实施方案中，烷基具有1至20个碳原子。无论本文中陈叙数值范围；例如“1-20”时，其暗示在此情况下烷基可以含有1个碳原子、2个碳原子、3个碳原子等、高达并包含20个碳原子。在一些实施方案中，烷基是具有1至10个碳原子的中等尺寸烷基。在一些实施方案中，烷基是具有1至4个碳原子的低级烷基。所述烷基基团可以是取代的或未取代的。当是取代的时，取代基基团可以例如是环烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、杂脂环基、卤代基、羟基、烷氧基、芳氧基、巯基、硫代烷氧基、硫代芳氧基、亚磺酰基、磺酰基、氰基、硝基、叠氮基、磺酰基、亚磺酰基、磺酰胺基、膦酰基、氧膦基、氧代基、羰基、硫代羰基、脲、硫脲、O-氨基甲酰基、N-氨基甲酰基、O-硫代氨基甲酰基、N-硫代氨基甲酰基、C-胺基、N-胺基、C-羧基、O-羧基、磺酰氨基以及氨基，这些术语在本文中定义。
[0061] “环烷基”基团是指所有碳单环或稠合环(即，共享一对相邻的碳原子的环)基团，其中一个或多个环不具有完全共轭的π电子体系。环烷基基团的非限制性实例是环丙烷、环丁烷、环戊烷、环戊烯、环己烷、环己二烯、环庚烷、环庚三烯以及金刚烷。环烷基基团可以是取代的或未取代的。当是取代的时，取代基基团可以例如是烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、杂脂环基、卤代基、羟基、烷氧基、芳氧基、巯基、硫代烷氧基、硫代芳氧基、亚磺酰基、磺酰基、氰基、硝基、叠氮基、磺酰基、亚磺酰基、磺酰胺基、膦酰基、氧膦基、氧代基、羰基、硫代羰基、脲、硫脲、O-氨基甲酰基、N-氨基甲酰基、O-硫代氨基甲酰基、N-硫代氨基甲酰基、C-胺基、N-胺基、C-羧基、O-羧基、磺酰氨基以及氨基，这些术语在本文中定义。
[0062] “烯基”基团是指由至少两个碳原子和至少一个碳碳双键组成的烷基基团。
[0063] “炔基”基团是指由至少两个碳原子和至少一个碳碳三键组成的烷基基团。
[0064] “芳基”基团是指所有碳单环或稠合环多环(即，共享几对相邻的碳原子的环)基团，其具有完全共轭的π电子体系。芳基基团的非限制性实例是苯基、萘基和蒽基。所述芳基可以是取代的或未取代的。当是取代的时，取代基基团可以例如是烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基、杂脂环基、卤代基、羟基、烷氧基、芳氧基、巯基、硫代烷氧基、硫代芳氧基、亚磺酰基、磺酰基、氰基、硝基、叠氮基、磺酰基、亚磺酰基、磺酰胺基、膦酰基、氧膦基、氧代基、羰基、硫代羰基、脲、硫脲、O-氨基甲酰基、N-氨基甲酰基、O-硫代氨基甲酰基、N-硫代氨基甲酰基、C-胺基、N-胺基、C-羧基、O-羧基、磺酰氨基以及氨基，这些术语在本文中定义。
[0065] “杂芳基”基团是指单环或稠合环(即，共享一对原子的环)基团，其在环中具有一个或多个原子，例如像氮、氧和硫，并且另外具有完全共轭的π电子体系。杂芳基的非限制性实例包括吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、噁唑、噻唑、吡唑、吡啶、嘧啶、喹啉、异喹啉以及嘌呤。所述杂芳基基团可以是取代的或未取代的。当是取代的时，取代基基团可以例如是烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基、杂脂环基、卤代基、羟基、烷氧基、芳氧基、巯基、硫代烷氧基、硫代芳氧基、亚磺酰基、磺酰基、氰基、硝基、叠氮基、磺酰基、亚磺酰基、磺酰胺基、膦酰基、氧膦基、氧代基、羰基、硫代羰基、脲、硫脲、O-氨基甲酰基、N-氨基甲酰基、O-硫代氨基甲酰基、N-硫代氨基甲酰基、C-胺基、N-胺基、C-羧基、O-羧基、磺酰氨基以及氨基，这些术语在本文中定义。
[0066] “杂脂环”基团是指在环中具有一个或多个原子诸如氮、氧和硫的单环或稠合环基团。所述环也可以具有一个或多个双键。然而，所述环不具有完全共轭的π电子体系。所述杂脂环可以是取代的或未取代的。当是取代的时，取代的基团可以例如是孤对电子、烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基、杂脂环基、卤代基、羟基、烷氧基、芳氧基、巯基、硫代烷氧基、硫代芳氧基、亚磺酰基、磺酰基、氰基、硝基、叠氮基、磺酰基、亚磺酰基、磺酰胺基、膦酰基、氧膦基、氧代基、羰基、硫代羰基、脲、硫脲、O-氨基甲酰基、N-氨基甲酰基、O-硫代氨基甲酰基、N-硫代氨基甲酰基、C-胺基、N-胺基、C-羧基、O-羧基、磺酰氨基以及氨基，这些术语在本文中定义。代表性实例是哌啶、哌嗪、四氢呋喃、四氢吡喃、吗啉代以及类似基团。
[0067] “烷氧基”基团是指如本文所定义的-O-烷基和-O-环烷基基团。
[0068] “芳氧基”基团是指如本文所定义的-O-芳基和-O-杂芳基基团。
[0069] “硫代烷氧基”基团是指如本文所定义的-S-烷基和-S-环烷基基团。
[0070] “硫代芳氧基”基团是指如本文所定义的-S-芳基和-S-杂芳基基团。
[0071] “羰基”基团是指-C(＝O)-R基团，其中R是如本文所定义的氢、烷基、烯基、环烷基、芳基、杂芳基(通过环碳键合)或杂脂环(通过环碳键合)。
[0072] “醛”基团是指羰基，其中R是氢。
[0073] “硫代羰基”基团是指-C(＝S)-R基团，其中R是如本文所定义的。
[0074] “C-羧基”基团是指-C(＝O)-O-R基团，其中R是如本文所定义的。
[0075] “O-羧基”基团是指RC(＝O)-O-基团，其中R是如本文定义的。
[0076] “氧代基”基团是指＝O基团。
[0077] “羧酸”基团是指C-羧基基团，其中R是氢。
[0078] “卤代基”基团是指氟、氯、溴或碘。
[0079] “三卤代甲基”基团是指-CX3基团，其中X是如本文所定义的卤代基基团。
[0080] “亚磺酰基”基团是指-S(＝O)-R基团，其中R是如本文所定义的。
[0081] “磺酰基”基团是指-S(＝O)2-R基团，其中R是如本文所定义的。
[0082] “S-磺酰氨基”基团是指-S(＝O)2-NR2基团，其中每个R是如本文所定义的。
[0083] “N-磺酰氨基”基团是指RS(＝O)2-NR基团，其中每个R是如本文所定义的。
[0084] “O-氨基甲酰基”基团是指-OC(＝O)-NR2基团，其中每个R是如本文所定义的。
[0085] “N-氨基甲酰基”基团是指ROC(＝O)-NR-基团，其中每个R是如本文所定义的。
[0086] “O-硫代氨基甲酰基”基团是指-OC(＝S)-NR2基团，其中每个R是如本文所定义的。
[0087] “N-硫代氨基甲酰基”基团是指ROC(＝S)NR-基团，其中每个R是如本文所定义的。
[0088] “氨基”基团是指–NR2基团，其中每个R是如本文所定义的。
[0089] “C-酰氨基”基团是指-C(＝O)-NR2基团，其中每个R是如本文所定义的。
[0090] “N-酰氨基”基团是指RC(＝O)-NR-基团，其中每个R是如本文所定义的。
[0091] “脲”基团是指-NRC(＝O)-NR2基团，其中每个R是如本文所定义的。
[0092] “胍基”基团是指-RNC(＝N)-NR2基团，其中每个R是如本文所定义的。
[0093] “脒基”基团是指R2NC(＝N)-基团，其中每个R是如本文所定义的。
[0094] 术语“膦酰基”或“膦酸根”描述-P(＝O)(OR)2基团，其中每个R是如本文所定义的。
[0095] 术语“磷酸根”描述-O-P(＝O)(OR)2基团，其中每个R是如本文所定义的。
[0096] “磷酸”是磷酸根基团，其中每个R是氢。
[0097] 术语“氧膦基”描述-PR2基团，其中每个R是如本文所定义的。
[0098] 术语“硫脲”描述-NR-C(＝S)-NR-基团，其中每个R是如本文所定义的。
[0099] 术语“糖类”是指一种或多种糖单元，无论是开链糖单元或环状糖单元(例如，基于吡喃糖或呋喃糖的单元)，并且除非另外指示，否则涵盖任何单糖、二糖和寡糖。
[0100] 术语“盐”包括内盐或外盐二者。在一些实施方案中，所述盐是内盐，即两性离子结构。在一些实施方案中，所述盐是外盐。在一些实施方案中，所述外盐是具有适合的抗衡离子的药学上可接受的盐。用于药学用途的适合的抗衡离子是本领域中已知的。
[0101] 术语“VB-201”是指1-十六烷基-2-(4'-羧基)丁基-甘油-3-磷酸胆碱。根据本发明的实施方案，VB-201可以是1-十六烷基-2-(4'-羧基)丁基-甘油-3-磷酸胆碱的手性对映体，即(R)-对映体((R)-1-十六烷基-2-(4'-羧基)丁基-sn-甘油-3-磷酸胆碱)或(S)-对映体((S)-1-十六烷基-2-(4'-羧基)丁基-sn-甘油-3-磷酸胆碱)或其混合物(例如，外消旋
物)。根据示例性实施方案，VB-201是(R)-1-十六烷基-2-(4'-羧基)丁基-sn-甘油-3-磷酸胆碱。如本领域技术人员所理解的，将VB-201指示为(R)-对映体或(S)-对映体不需要100％对映体纯度，而是指基本上富集的呈R或S异构体形式的单个对映体(例如，具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或更高的对映体过量)。在一些实施方案中，VB-201是具有至少90％对映体过量的(R)-1-十六烷基-2-(4'-羧基)丁基-sn-甘油-
3-磷酸胆碱。术语OB201是指如实施例部分所述的卵清蛋白结合的VB-201。
物)。根据示例性实施方案，VB-201是(R)-1-十六烷基-2-(4'-羧基)丁基-sn-甘油-3-磷酸胆碱。如本领域技术人员所理解的，将VB-201指示为(R)-对映体或(S)-对映体不需要100％对映体纯度，而是指基本上富集的呈R或S异构体形式的单个对映体(例如，具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或更高的对映体过量)。在一些实施方案中，VB-201是具有至少90％对映体过量的(R)-1-十六烷基-2-(4'-羧基)丁基-sn-甘油-
3-磷酸胆碱。术语OB201是指如实施例部分所述的卵清蛋白结合的VB-201。
[0102] 术语“VB-221”是指1-(2'-辛基)十二烷基-2-(4'-羧基)丁基-甘油-3-磷酸胆碱。根据本发明的实施方案，VB-221可以是1-(2'-辛基)十二烷基-2-(4'-羧基)丁基-甘油-3-磷酸胆碱的手性对映体，即(R)-对映体或(S)-对映体或其任何混合物(例如，外消旋物)。根据示例性实施方案，VB-221是(R)-1-(2'-辛基)十二烷基-2-(4'-羧基)丁基-sn-甘油-3-磷酸胆碱。类似地，如本领域技术人员所理解的，将VB-221指示为(R)-对映体或(S)-对映体不需要100％对映体纯度，而是指基本上富集的呈R或S异构体形式的单个对映体(例如，具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或更高的对映体过量)。在一些实施方案中，VB-221是具有至少90％对映体过量的(R)-1-1-(2'-辛基)十二烷基-2-(4'-羧基)丁基-sn-甘油-3-磷酸胆碱。术语OB221是指如实施例部分所述的卵清蛋白结合的VB-
221。
221。
[0103] 应理解，出于清晰目的而在分开的实施方案的上下文中所描述的本发明的某些特征也可在单个实施方案中组合提供。相反地，为简便起见，为了简洁而在单个实施方案的背景下描述的本发明的不同特征也可以单独地或以任何适合的子组合提供或者在适当情况下提供于本发明的任何其它描述的实施方案中。在不同实施方案的上下文中描述的某些特征不认为是那些实施方案的必需特征，除非实施方案在没有那些要素的情况下是无效的。
[0104] MOSPD2和MOSPD2的抑制剂
[0105] 本申请部分是基于含有活动精子结构域的蛋白质2(MOSPD2)的生物功能的鉴定。已发现抑制MOSPD2会抑制单核细胞朝向不同趋化因子迁移并且阻断趋化因子受体信号传
导途径的活化。这些结果指示MOSPD2对于白细胞和单核细胞迁移是关键的并且阻断其活性抑制了炎症并且在炎性疾病和病症中具有治疗性作用。
导途径的活化。这些结果指示MOSPD2对于白细胞和单核细胞迁移是关键的并且阻断其活性抑制了炎症并且在炎性疾病和病症中具有治疗性作用。
[0106] 本发明的一些实施方案涉及MOSPD2的抑制剂或者涉及包含MOSPD2的抑制剂的方法和组合物。在一些实施方案中，抑制剂是抑制MOSPD2的经分离的结合分子。在其它实施方案中，抑制剂是多肽、DNA或RNA。在其它实施方案中，抑制剂是特异性结合至MOSPD2的多肽。
在其它实施方案中，抑制剂是特异性结合至MOSPD2的抗体或其抗原结合片段。在其它实施方案中，抑制剂是RNA沉默剂。
在其它实施方案中，抑制剂是特异性结合至MOSPD2的抗体或其抗原结合片段。在其它实施方案中，抑制剂是RNA沉默剂。
[0107] 在其它实施方案中，MOSPD2的抑制剂是特异性结合至MOSPD2多肽的抗体或其抗原结合片段。在其它实施方案中，所述抗体是多克隆抗体、单克隆抗体、鼠抗体、人类抗体、人源化抗体、嵌合抗体或单链抗体。在其它实施方案中，抗原结合片段是Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、scFv、sdFv片段、VH结构域或VL结构域。
[0108] 在一些实施方案中，本发明涉及一种特异性结合至MOSPD2的经分离的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，本文所述的特异性结合至MOSPD2(例如，人类MOSPD2)的抗体或其抗原结合片段包括VH、VL或VH和VL。在其它实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含恒定区。
[0109] 在一些实施方案中，VH、VL或VH和VL包含一个或多个互补决定区(CDR)。在一些实施方案中，VH包含CDR1、CDR2、CDR3或其任何组合。在一些实施方案中，VL包含CDR1、CDR2、CDR3或其任何组合。
[0110] 在一些实施方案中，VH、VL或VH和VL包含一个或多个框架区(FR)。在一些实施方案中，VH包含FR1、FR2、FR3、FR4或其任何组合。在一些实施方案中，VL包含FR1、FR2、FR3、FR4或其任何组合。
[0111] 在一个具体实施方案中，本文所述的特异性结合至MOSPD2(例如，人类MOSPD2)的抗体或其抗原结合片段包含含有CDR1、CDR2和CDR3的VH和含有CDR1、CDR2和CDR3的VL。
[0112] 在其它实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含恒定区。在一些实施方案中，轻链的恒定区包含人类κ轻链恒定区或人类λ轻链恒定区的氨基酸序列。在一些实施方案中，重链的恒定区包含人类γ重链恒定区的氨基酸序列。已描述了人类恒定区序列的非限制性实例，例如参见美国专利号5,693,780和Kabat,EA等人，(1991)。在一些实施方案中，已修饰恒定区氨基酸序列(例如，一个、两个或更多个氨基酸取代)，以使得其与天然人类序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性。
[0113] 在另一个方面，本文提供识别或结合至MOSPD2的表位(例如，人类MOSPD2的表位)的抗体或其抗原结合片段。在另一个方面，本文提供识别或结合至与本文所述的抗体(例如，实施例5或8所述的抗体)相同的MOSPD2(例如，人类MOSPD2)表位或重叠表位的抗体或其抗原结合片段。在另一个方面，抗体或其抗原结合片段识别MOSPD2的超过一个表位(例如，两个、三个、四个、五个或六个表位)。
[0114] 在某些实施方案中，MOSPD2的表位可以通过文献中所述的一种或多种方法来确定，所述方法例如NMR光谱学、X-射线衍射晶体学研究、ELISA测定、与质谱分析(例如，MALDI质谱分析)相联接的氢/氘交换、基于阵列的寡肽扫描测定和/或诱变作图(例如，定点诱变作图)。对于X-射线晶体学，结晶可以使用文献中所述的方法来实现(例如，GiegéR等人，(1994)Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 50(Pt 4):339-350；McPherson A(1990)Eur J Biochem 189:1-23；Chayen NE(1997)Structure 5:1269-1274；McPherson A(1976)J Biol Chem 251:6300-6303)。抗体:抗原晶体可以使用已熟知的X-射线衍射技术进行研究并且可以使用计算机软件精炼，所述软件诸如X-PLOR(Yale University,1992,由
Molecular Simulations,Inc.分销；参见例如Meth Enzymol(1985)第114和115卷，Wyckoff HW等人编辑；美国专利申请号2004/0014194)和BUSTER(Bricogne G(1993)Acta
Crystallogr D Biol Crystallogr 49(Pt 1):37-60；Bricogne G(1997)Meth
Enzymol276A:361-423，Carter CW编辑；Roversi P等人，(2000)Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 56(Pt 10):1316-1323)。诱变作图研究可以使用文献中所述的方法来实现。
关于诱变技术的描述，参见例如，Champe M等人，(1995)同上和Cunningham BC&Wells JA(1989)同上，所述诱变技术包括丙氨酸扫描诱变技术。在一个特定实施方案中，抗体或其抗原结合片段的表位使用丙氨酸扫描诱变研究来确定。抗体的表位表征也可以通过以下文献中提高的方法来确定：Ravn等人，Journal of Biological Chemistry 288:19760-19772(2013)。
Molecular Simulations,Inc.分销；参见例如Meth Enzymol(1985)第114和115卷，Wyckoff HW等人编辑；美国专利申请号2004/0014194)和BUSTER(Bricogne G(1993)Acta
Crystallogr D Biol Crystallogr 49(Pt 1):37-60；Bricogne G(1997)Meth
Enzymol276A:361-423，Carter CW编辑；Roversi P等人，(2000)Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 56(Pt 10):1316-1323)。诱变作图研究可以使用文献中所述的方法来实现。
关于诱变技术的描述，参见例如，Champe M等人，(1995)同上和Cunningham BC&Wells JA(1989)同上，所述诱变技术包括丙氨酸扫描诱变技术。在一个特定实施方案中，抗体或其抗原结合片段的表位使用丙氨酸扫描诱变研究来确定。抗体的表位表征也可以通过以下文献中提高的方法来确定：Ravn等人，Journal of Biological Chemistry 288:19760-19772(2013)。
[0115] 另外，识别或结合至MOSPD2(例如，人类MOSPD2)的相同或重叠表位的抗体或其抗原结合片段可使用常规技术(诸如免疫测定)，例如通过显示一种抗体阻断另一抗体与靶抗原结合的能力(即竞争性结合测定)来鉴定。在某一测定中可以测定竞争性结合，其中所测试的免疫球蛋白抑制参考抗体与共同抗原(诸如MOSPD2)特异性结合。已描述了许多类型的竞争结合测定，例如：固相直接或间接放射性免疫测定(RIA)、固相直接或间接酶免疫测定(EIA)、夹心竞争测定(参见Stahli C等人，(1983)Methods Enzymol 9:242-253)；固相直接生物素-抗生物素蛋白EIA(参见Kirkland TN等人，(1986)J Immunol 137:3614-9)；固相直接标记测定、固相直接标记夹心测定(参见Harlow E&Lane D,(1988)Antibodies:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Press)；使用I-125标记的固相直接标记RIA(参见Morel GA等人，(1988)Mol Immunol 25(1):7-15)；固相直接生物素-抗生物素蛋白EIA(Cheung RC等人，(1990)Virology 176:546-52)；以及直接标记RIA(Moldenhauer G等人，(1990)Scand J Immunol 32:77-82)。通常，所述测定涉及使用结合至固体表面的纯化抗原(例如MOSPD2，诸如人类MOSPD2)，或带有这些未标记的测试免疫球蛋白和标记的参考免疫球蛋白中任一者的细胞。竞争性抑制可以通过测定在测试免疫球蛋白存在下结合至固体表面或细胞的标记的量来测量。通常，测试免疫球蛋白过量存在。通常，当竞争性抗体过量存在时，其将使参考抗体与共同抗原的特异性结合抑制至少50-55％、55-60％、60-65％、65-
70％、70-75％或75％以上。竞争结合测定可以使用标记的抗原或标记的抗体以大量不同的格式配置。在此测定的常见版本中，将抗原固定至96孔板上。然后使用放射性标记或酶标记测量标记的抗体阻断标记的抗体与抗原的结合的能力。关于进一步细节，参见例如Wagener C等人，(1983)J Immunol 130:2308-2315；Wagener C等人，(1984)J Immunol Methods 68:
269-274；Kuroki M等人，(1990)Cancer Res 50:4872-4879；Kuroki M等人，(1992)Immunol Invest 21:523-538；Kuroki M等人，(1992)Hybridoma 11:391-407以及Antibodies:A
Laboratory Manual,Ed Harlow E&Lane D编辑，同上，第386-389页。
70％、70-75％或75％以上。竞争结合测定可以使用标记的抗原或标记的抗体以大量不同的格式配置。在此测定的常见版本中，将抗原固定至96孔板上。然后使用放射性标记或酶标记测量标记的抗体阻断标记的抗体与抗原的结合的能力。关于进一步细节，参见例如Wagener C等人，(1983)J Immunol 130:2308-2315；Wagener C等人，(1984)J Immunol Methods 68:
269-274；Kuroki M等人，(1990)Cancer Res 50:4872-4879；Kuroki M等人，(1992)Immunol Invest 21:523-538；Kuroki M等人，(1992)Hybridoma 11:391-407以及Antibodies:A
Laboratory Manual,Ed Harlow E&Lane D编辑，同上，第386-389页。
[0116] 在一个实施方案中，竞争测定使用表面等离振子共振 例如通过“串联方法”，诸如Abdiche YN等人，(2009)Analytical Biochem 386:172-180所述的方法来进行，从而使MOSPD2抗原固定在芯片表面上，例如CM5传感器芯片，并且然后所述芯片上运行抗-MOSPD2抗体。为了确定抗体或其抗原结合片段是否与本文所述的抗-MOSPD2抗体或其抗原结合片段竞争，首先在芯片表面上运行抗-MOSPD2抗体或其抗原结合片段以实现饱和并且然后添加潜在的竞争性抗体。然后可以测定竞争性抗体的结合并且将其相对于非竞争性对照来定量。
[0117] 在某些方面，竞争结合测定可以用于确定抗体或其抗原结合片段是否例如以剂量依赖性方式被另一种抗体竞争性阻断，例如当两种抗体在竞争结合测定诸如竞争性ELISA测定中识别相同或空间上重叠的表位时，一种抗体基本上结合与参考抗体相同的表位或重叠表位，所述测定可以使用标记的抗原或标记的抗体以所有数目的不同形式配置。在一个具体实施方案中，抗体或其抗原结合片段可以在竞争结合测定中使用本文所述的抗体(例如，实施例5或8中的那些)、或其嵌合抗体或Fab抗体、或包含本文所述的抗体的VH CDR和VL CDR的抗体(例如，实施例5或8中的那些)进行测试。
[0118] 因此，在某一方面，本文提供与本文所述的抗体(例如，实施例5或8)竞争(例如，以剂量依赖性方式)结合至MOSPD2(例如，人类MOSPD2)的抗体或其抗原结合片段，如使用本领域技术人员已知的或本文所述的测定(例如，ELISA竞争测定、表面等离振子共振或斯卡查德(Scatchard)分析)来确定的。
[0119] 在一些实施方案中，本发明的抗-MOSPD2抗体或其抗原结合片段特异性结合至MOSPD2的以下氨基酸区域(表位)中的一个或多个，所述氨基酸区域根据SEQ ID NO:1(氨基酸残基1-518)来编号：508-517、501-514、233-241、509-517、212-221、13-24、505-517、505-
514、89-100、506-517、233-245、504-514、128-136、218-226、15-24、83-96、42-50、462-474、
340-351、504-517、462-470、327-337、21-32、217-226、510-517、178-190、497-509、504-
516、64-77、504-515、147-159、503-315、88-97、208-218、178-191、502-515、503-516、497-
505、500-509、189-202、189-197、505-516、1-63、82-239、93-234、327-445、327-431以及
497-517。
514、89-100、506-517、233-245、504-514、128-136、218-226、15-24、83-96、42-50、462-474、
340-351、504-517、462-470、327-337、21-32、217-226、510-517、178-190、497-509、504-
516、64-77、504-515、147-159、503-315、88-97、208-218、178-191、502-515、503-516、497-
505、500-509、189-202、189-197、505-516、1-63、82-239、93-234、327-445、327-431以及
497-517。
[0120] 在一些实施方案中，本发明的抗-MOSPD2抗体或其抗原结合片段特异性结合至MOSPD2的以下氨基酸区域(表位)中的一个或多个，所述氨基酸区域根据SEQ ID NO:1(氨基酸残基1-518)来编号：约508至约517、约501至约514、约233至约241、约509至约517、约212至约221、约13至约24、约505至约517、约505至约514、约89至约100、约506至约517、约233至约245、约504至约514、约128至约136、约218至约226、约15至约24、约83至约96、约42至约
50、约462至约474、约340至约351、约504至约517、约462至约470、约327至约337、约21至约
32、约217至约226、约510至约517、约178至约190、约497至约509、约504至约516、约64至约
77、约504至约515、约147至约159、约503至约515、约88至约97、约208至约218、约178至约
191、约502至约515、约503至约516、约497至约505、约500至约509、约189至约202、约189至约197、约505至约516、约1至约63、约82至约239、约93至约234、约327至约445、约327至约
431以及约497至约517。
50、约462至约474、约340至约351、约504至约517、约462至约470、约327至约337、约21至约
32、约217至约226、约510至约517、约178至约190、约497至约509、约504至约516、约64至约
77、约504至约515、约147至约159、约503至约515、约88至约97、约208至约218、约178至约
191、约502至约515、约503至约516、约497至约505、约500至约509、约189至约202、约189至约197、约505至约516、约1至约63、约82至约239、约93至约234、约327至约445、约327至约
431以及约497至约517。
[0121] 在一些实施方案中，本发明的抗-MOSPD2抗体或其抗原结合片段特异性结合至MOSPD2的以下氨基酸区域(表位)中的一个或多个，所述氨基酸区域根据SEQ ID NO:1(氨基酸残基1-518)来编号：约505至约515、约500至约515、约230至约240、约510至约520、约210至约220、约15至约25、约505至约520、约505至约515、约90至约100、约505至约525、约230至约245、约505至约510、约130至约140、约220至约230、约15至约30、约80至约95、约40至约
50、约460至约475、约340至约350、约500至约515、约460至约470、约325至约335、约20至约
35、约215至约225、约510至约520、约175至约190、约500至约510、约505至约530、约60至约
75、约500至约520、约145至约160、约502至约515、约85至约100、约205至约220、约175至约
190、约500至约505、约500至约525、约495至约505、约495至约510、约190至约200、约190至约198、约502至约515、约1至约60、约80至约240、约90至约235、约330至约445、约330至约
430以及约495至约515。
50、约460至约475、约340至约350、约500至约515、约460至约470、约325至约335、约20至约
35、约215至约225、约510至约520、约175至约190、约500至约510、约505至约530、约60至约
75、约500至约520、约145至约160、约502至约515、约85至约100、约205至约220、约175至约
190、约500至约505、约500至约525、约495至约505、约495至约510、约190至约200、约190至约198、约502至约515、约1至约60、约80至约240、约90至约235、约330至约445、约330至约
430以及约495至约515。
[0122] 在一些实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段以以下抗体-抗原平衡解离常数(KD)结合至MOSPD2：约10-6M至约10-12M或其值的任何范围(例如，约10-7M至约10-12、10-
8M至约10-12M、约10-9M至约10-12M、约10-10M至约10-12M、约10-11M至约10-12M、约10-6M至约10-
11 -7 -11 -8 -11 -9 -11 -10 -11 -6
M、约10 M至约10 M、约10 M至约10 M、约10 M至约10 M、约10 M至约10 M、约10 M
至约10-10M、约10-7M至约10-10M、约10-8M至约10-10M、约10-9M至约10-10M、约10-6M至约10-9M、约
10-7M至约10-9M、约10-8M至约10-9M、约10-6M至约10-8M或约10-7M至约10-8)。在其它实施方案中，抗体或其抗原结合片段具有的KD为约10-6M、约10-7M、约10-8M、约10-9M、约10-10M、约10-11M-12
或约10 M。在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段结合至MOSPD2上的一个或多个表位。
在一些实施方案中，KD通过斯卡查德分析、表面等离振子共振或本文所述的其他方法来测定，在一些实施方案中是在37℃下测定。
8M至约10-12M、约10-9M至约10-12M、约10-10M至约10-12M、约10-11M至约10-12M、约10-6M至约10-
11 -7 -11 -8 -11 -9 -11 -10 -11 -6
M、约10 M至约10 M、约10 M至约10 M、约10 M至约10 M、约10 M至约10 M、约10 M
至约10-10M、约10-7M至约10-10M、约10-8M至约10-10M、约10-9M至约10-10M、约10-6M至约10-9M、约
10-7M至约10-9M、约10-8M至约10-9M、约10-6M至约10-8M或约10-7M至约10-8)。在其它实施方案中，抗体或其抗原结合片段具有的KD为约10-6M、约10-7M、约10-8M、约10-9M、约10-10M、约10-11M-12
或约10 M。在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段结合至MOSPD2上的一个或多个表位。
在一些实施方案中，KD通过斯卡查德分析、表面等离振子共振或本文所述的其他方法来测定，在一些实施方案中是在37℃下测定。
[0123] 在一些实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段以以下抗体-抗原Kon常数结合至MOSPD2：约103 1/Ms至约106 1/Ms或其值的任何范围(例如，约104 1/Ms至约106 1/Ms或105 1/Ms至约106 1/Ms)。在其它实施方案中，抗体或其抗原结合片段具有的Kon为约103 1/Ms、约104 1/Ms、约105 1/Ms或约106 1/Ms。
[0124] 在一些实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段以以下抗体-抗原Koff常数结合至MOSPD2：约10-3 1/s至约10-6 1/s或其值的任何范围(例如，约10-4 1/s至约10-6 1/s或10-5 1/s至约10-6 1/s)。在其它实施方案中，抗体或其抗原结合片段具有的Koff为约10-3 1/s、-4 -5 -6约10 1/s、约10 1/s或约10 1/s。
[0125] 在一些实施方案中，抗体是IgG、IgM、IgE、IgA或IgD分子或者来源于这些分子。在其它实施方案中，抗体包含Fc区。
[0126] 在一些实施方案中，本发明涉及一种药物组合物，其包含本文所述的抗体或抗原结合片段以及药学上可接受的载体。在其它实施方案中，本发明涉及一种治疗、预防本文所述的疾病或病症或减少所述疾病或病症的发生率的方法，其包括向有需要的受试者施用治疗有效量的本文所述的抗体或其抗原结合片段或本文所述的药物组合物。
[0127] 在本发明的另外的实施方案中，MOSPD2的抑制和MOSPD2活性的下调可以在基因组和/或转录水平上使用干扰转录和/或翻译的各种分子[例如，RNA沉默剂(例如，反义、siRNA、shRNA、微小-RNA)、核糖酶和DNA酶]来实现，或者在蛋白质水平上使用例如拮抗剂、裂解蛋白质的酶、干扰蛋白质活性的小分子(例如，竞争性配体)以及类似分子来实现。
[0128] 以下是能够下调靶标诸如MOSPD2的表达水平和/或活性的药剂的示例性列表。
[0129] MOSPD2的抑制可以例如通过经由感染异位过度表达MOSPD2来发生，并且预期MOSPD2的抑制剂或MOSPD2抑制剂涵盖这种类型的抑制。
[0130] MOSPD2的下调也可以通过基因编辑来实现。基因编辑可以例如使用成簇有规律间隔的短回文重复CRISPR-CAS9系统来进行。CRISPR-CAS9系统已在文献中描述并且可以包含例如CAS9和指导RNA。其它基因编辑技术也已描述于文献中并且也可以使用。
[0131] MOSPD2的下调也可以通过RNA沉默来实现。如本文所用，短语“RNA沉默”是指由RNA分子介导的一组调节性机制[例如，RNA干扰(RNAi)、转录基因沉默(TGS)、转录后基因沉默(PTGS)、基因压制、共同抑制以及翻译阻遏]，所述机制使得对应蛋白质编码基因的表达受到抑制或“沉默”。已在许多类型的生物体中观察到RNA沉默，所述生物体包括植物、动物和真菌。
[0132] 如本文所用，术语“RNA沉默剂”是指能够特异性“抑制”或“沉默”靶基因的表达的RNA。在一些实施方案中，RNA沉默剂能够通过转录后沉默机制来预防mRNA分子的完全加工(例如，完全翻译和/或表达)。RNA沉默剂包括非编码RNA分子，例如包含成对链的RNA双链体以及可以生成此类小非编码RNA的前体RNA。示例性RNA沉默剂包括dsRNA，诸如siRNA、miRNA和shRNA。在一个实施方案中，RNA沉默剂能够诱导RNA干扰。在另一个实施方案中，RNA沉默剂能够介导翻译阻遏。
[0133] RNA干扰是指在动物体内由短干扰RNA(siRNA)介导的序列特异性转录后基因沉默的过程。植物中的对应过程通常称为转录后基因沉默或RNA沉默并且在真菌中也称为基因压制。转录后基因沉默过程被认为是用于防止外来基因表达的进化保守性细胞防御机制并且通常是不同植物区系和门所共有的。免遭外来基因表达的所述保护可能已响应于源于病毒性感染或转位子元件通过特异性破坏同源单链RNA或病毒基因组RNA的细胞反应随机整
合至宿主基因组中的双链RNA(dsRNA)产生而进化。
合至宿主基因组中的双链RNA(dsRNA)产生而进化。
[0134] 本发明的一些实施方案涵盖使用dsRNA下调来自mRNA的蛋白质表达。
[0135] 术语“siRNA”是指诱导RNA干扰(RNAi)途径的小抑制性RNA双链体(通常在18-30个碱基对之间)。通常，siRNA被化学合成为具有中心19bp双链体区域和末端上的对称2-碱基3'-突出端的21聚体，虽然最近已描述长度为25-30个碱基的化学合成的RNA双链体与21聚体的相同位置相比可以具有多达100倍的效力增加。使用较长RNA获得的在触发RNAi方面观察到的增加的效力在理论上通过提供具有底物(27聚体)而非产物(21聚体)的Dicer来产生并且这改进了siRNA双链体进入RISC的速率或效率。
[0136] 双链干扰RNA(例如，siRNA)的链可以连接来形成发夹或茎-环结构(例如，shRNA或sh-RNA)。因此，正如所提及的，本发明的一些实施方案的RNA沉默剂也可以是短发夹RNA(shRNA)。
[0137] 如本文所用，术语“shRNA”或“sh-RNA”是指具有茎-环结构的RNA药剂，其包含互补序列的第一区域和第二区域，互补程度和区域的取向是足够的以使得在所述区域之间发生碱基配对，所述第一区域和所述第二区域由环区域连接，所述环由于环区域内的核苷酸(或核苷酸类似物)之间缺乏碱基配对而产生。所述环中的核苷酸的编号是在3至23、或5至15、或7至13、或4至9、或9至11之间(并包括在内)的编号。环中的一些核苷酸可能参与和环中的其它核苷酸的碱基对相互作用。
[0138] 将了解的是，本发明的一些实施方案的RNA沉默剂不需要局限于仅含有RNA的那些分子，而是进一步涵盖化学修饰的核苷酸和非核苷酸。
[0139] 在一些实施方案中，本文所提供的RNA沉默剂可能在功能上与穿膜肽相关联。如本文所用，“穿膜肽”是包含短(约12-30个残基)氨基酸序列或功能基序的肽，所述肽赋予与膜可渗透复合物穿过细胞的细胞质和/或核膜的转运相关联的能量独立性(即，非内吞)易位特性。
[0140] 根据另一个实施方案，RNA沉默剂可以是miRNA或其模拟物。
[0141] 术语“微小RNA”、“miRNA”和“miR”是同义词并且是指长度为约19-28个核苷酸的、调节基因表达的非编码单链RNA分子的集合。miRNA可见于广泛范围的生物体中并且已显示在发育、体内平衡和疾病病因学中起作用。
[0142] 术语“微小RNA模拟物”是指能够进入RNAi途径并且调节基因表达的合成的非编码RNA。miRNA模拟物模拟内源性微小RNA(miRNA)的功能并且可以被称为称述的双链分子或模拟物前体(例如，或前体-miRNA)。miRNA模拟物可以包括修饰或未修饰的RNA、DNA、RNA-DNA杂交体或替代性核酸化学物(例如，LNA或2'-O,4'-C-乙烯-桥连核酸(ENA))。对于成熟的双链miRNA模拟物，双链体区域的肠道可以在13-33、18-24或21-23个核苷酸之间变化。miRNA也可以包含总计至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个核苷酸。miRNA的序列可以是前体-miRNA的前13-33个核苷酸。miRNA的序列也可以是前体-miRNA的最后13-33个核苷酸。
[0143] 能够下调靶标的另一种药剂是能够特异性裂解靶标的mRNA转录物或DNA序列的DNA酶分子。DNA酶是能够裂解单链和双链靶序列的单链多核苷酸。(Breaker等人，
Chemistry and Biology 1995；2:655；Santoro等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1997；943:
4262。)已提出DNA酶的一般模型(“10-23”模型)。“10-23”DNA酶具有15个脱氧核糖核苷酸的催化结构域，其侧接各自七至九个脱氧核糖核苷酸的两个底物识别结构域。这种类型的DNA酶可以有效地在嘌呤:嘧啶接合部处裂解底物RNA。(Santoro等人，；Khachigian,
Curr.Opin.Mol.Ther.2002；4:119-121。)
Chemistry and Biology 1995；2:655；Santoro等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1997；943:
4262。)已提出DNA酶的一般模型(“10-23”模型)。“10-23”DNA酶具有15个脱氧核糖核苷酸的催化结构域，其侧接各自七至九个脱氧核糖核苷酸的两个底物识别结构域。这种类型的DNA酶可以有效地在嘌呤:嘧啶接合部处裂解底物RNA。(Santoro等人，；Khachigian,
Curr.Opin.Mol.Ther.2002；4:119-121。)
[0144] 靶标的下调也可以通过使用能够与编码所述靶标的mRNA转录物特异性杂交的反义多核苷酸来实现。
[0145] 能够下调靶标的另一种药剂是能够特异性裂解编码靶标的mRNA转录物的核糖酶分子。核糖酶逐渐增加地用于通过裂解编码感兴趣蛋白质的mRNA来对基因表达进行序列特异性抑制。(Welch等人，Curr.Opin.Biotechnol.1998；9:486-96。)
[0146] 能够下调靶标的另一种药剂是结合至所述靶标和/或裂解所述靶标的任何分子。此类分子可以是靶标的拮抗剂或靶标的抑制性肽。
[0147] 将了解的是，靶标的至少一个催化或结合部分的非功能类似物也可以用作下调靶标的药剂。
[0148] 可以连同本发明的下调靶标的一些实施方案一起使用的另一种药剂是预防靶标活化或底物结合的分子。
[0149] 在一些实施方案中，给定蛋白质靶标的抑制剂通过结合至所述蛋白质、通过结合至一种化合物(所述化合物结合至所述蛋白质(例如，底物、调节性蛋白质))和/或通过结合至编码所述蛋白质的寡核苷酸(例如，mRNA)来抑制蛋白质。
[0150] 在一些实施方案中，MOSPD2的抑制剂是小分子(例如，其特征在于小于800Da的分子量)。在一些实施方案中，小分子MOSPD2抑制剂是生育酚或其衍生物(例如，α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚)、三萜(例如，角鲨烯)、维生素A或其衍生物(例如，视黄醛)、磷脂酰甘油(例如，磷脂酰肌醇)或磷脂(例如，磷脂酰胆碱、氧化的磷脂)。
[0151] 在一些实施方案中，小分子MOSPD2抑制剂是具有根据以下式I的结构的氧化磷脂：
[0152]
[0153] 或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物，
[0154] 其中：
[0155] n是1至6的整数，其中当n是1时，Cn、Bn、Rn和Y是不存在的，并且C1连接至R'n；
[0156] B1、B2、……Bn-1和Bn各自独立地选自由氧、硫、氮、磷以及硅组成的组，由此所述氮、磷和硅中的每一个任选地被选自由以下组成的组的一个取代基取代：烷基、卤代基、环烷基、芳基、羟基、巯基、烷氧基、芳氧基、硫代芳氧基、硫代烷氧基以及氧代基；
[0157] A1、A2、……An-1和An中的每一个独立地选自由CR”R”'、C＝O和C＝S组成的组，[0158] Y选自由以下组成的组：氢、酰基、烷基、芳基、环烷基、羧基、糖、磷酸、磷酰基胆碱、磷酰基乙醇胺、磷酰基丝氨酸、磷酰基心磷脂、磷酰基肌醇、乙基磷酸胆碱、磷酰基甲醇、磷酰基乙醇、磷酰基丙醇、磷酰基丁醇、磷酰基乙醇胺-N-乳糖、磷酸乙醇胺–N-戊二酸、磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(丙二醇)]、磷酸肌醇-4-磷酸、磷酸肌醇-4,5-二膦酸、磷酸肌醇-4,5-双磷酸、焦磷酸酯、磷酸乙醇胺-二乙烯三胺-五乙酸、二硝基苯基-磷酸乙醇胺、磷酸甘油以及具有以下通式的部分：
[0159]
[0160] 其中：
[0161] B’和B”中的每一个独立地选自由硫和氧组成的组；并且
[0162] D’和D”中的每一个独立地选自由以下组成的组：氢、烷基、氨基取代的烷基、环烷基、膦酸根以及硫代膦酸根；并且
[0163] X1、X2、……Xn-1的每一个独立地是具有以下通式II的饱和或不饱和烃：
[0164]
[0165] 其中m是1至26的整数；并且
[0166] Z选自由以下组成的组：
[0167] H、 以及–OR”，
[0168] 其中W选自由氧和硫组成的组；
[0169] 其中X1、X2、……Xn-1中的至少一个包含除氢之外的Z，
[0170] 并且其中：
[0171] R1、R'1、R2、……Rn-1、Rn、R'n中的每一个、R”和R”'中的每一个以及Ra、R'a、Rb、R'b、……Rm-1、R'm-1、Rm和R'm中的每一个独立地选自由以下组成的组：键、氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基、卤代基、三卤代甲基、羟基、烷氧基、芳氧基、巯基、硫代烷氧基、硫代芳氧基、膦酸根、磷酸根、氧膦基、磺酰基、亚磺酰基、磺酰胺、酰胺、羰基、硫羰基、C-羧基、O-羧基、C-氨基甲酸根、N-氨基甲酸根、C-硫代羧基、S-硫代羧基以及氨基，或者可替代地，R1、R'1、R2、……Rn-1、Rn以及R'n中的至少两个和/或Ra、R'a、Rb、R'b、……Rm-1、R'm-1、Rm以及R'm中的至少两个形成至少一个四元、五元或六元芳环、杂芳环、脂环或杂脂环或者其药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物。在任何本文所述的实施方案中，氧化磷脂可以任何比率的立体异构混合物的形式，例如以基本上富集的单个对映体诸如R或S异构体(例如，具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或更高的对映体过量)的形式或者以两种对映体的混合物(例如，外消旋混合物)的形式；和/或以基本上富集的单个非对映体(例如具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或更高的非对映体过量)的形式或者以两种或更多种非对映体的混合物的形式存在。
[0172] 在一个实施方案中，适用于本发明的任何方法中的氧化磷脂具有根据以下式III的结构：
[0173]
[0174] 或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物。
[0175] 在式III中，n是选自1至4的整数。
[0176] 在式III中，B1、每个B2和B3独立地选自由氧、硫和NR4组成的组，其中R4选自氢、烷基、环烷基、芳基以及酰基。
[0177] 在式III中，A1和每个A2独立地选自由CReRee、CRe＝CRee、C＝O和C＝S组成的组，其中Re和Ree独立地选自氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基以及杂芳基。
[0178] 在式III中，Y选自由以下组成的组：氢、酰基、烷基、芳基、环烷基、羧基、糖、磷酸、磷酰基胆碱、磷酰基乙醇胺、磷酰基丝氨酸、磷酰基心磷脂、磷酰基肌醇、乙基磷酸胆碱、磷酰基甲醇、磷酰基乙醇、磷酰基丙醇、磷酰基丁醇、磷酰基乙醇胺-N-乳糖、磷酸乙醇胺–N-戊二酸、磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(丙二醇)]、磷酸肌醇-4-磷酸、磷酸肌醇-4,5-双磷酸、焦磷酸酯、磷酸乙醇胺-二乙烯三胺-五乙酸、二硝基苯基-磷酸乙醇胺、磷酸甘油以及具有以下通式的部分：
[0179]
[0180] 其中：
[0181] B和Ba各自独立地选自由硫和氧组成的组；并且
[0182] D和Da独立地选自由以下组成的组：氢、烷基、氨基烷基、环烷基、膦酸根以及硫代膦酸根。
[0183] 在式III中，X1和每个X2独立地是饱和或不饱和的直链或支链烃，其中X1和X2中的至少一个被选自由以下组成的组的氧化部分Z取代：
[0184] 以及
[0185] 其中W是氧或硫；并且Rd和Rdd独立地选自氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基以及杂芳基。
[0186] 在一个实施方案中，在式III中，X1和每个X2独立地具有以下通式IV：
[0187]
[0188] 在式IV中，m是选自1至26的整数。
[0189] 在式IV中，Z选自由以下组成的组：
[0190] H、 以及OH，
[0191] 其中W是氧或硫；并且Rd和Rdd独立地选自氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基以及杂芳基，
[0192] 其中X1和X2中的至少一个包含除氢之外的Z。
[0193] 在式III和式IV中，R1、R1a、每个R2、R3、R3a、Ra、Raa、每个Rb、每个Rbb、Rc以及Rcc独立地选自由以下组成的组：氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基、卤代基、三卤代甲基、羟基、烷氧基、芳氧基、巯基、硫代烷氧基、硫代芳氧基、膦酸根、磷酸根、氧磷基、磺酰基、亚磺酰基、磺酰胺、酰胺、羰基、硫羰基、C-羧基、O-羧基、C-氨基甲酸酯、N-氨基甲酸根、C-硫代羧基、S-硫代羧基以及氨基，其中R1、R1a、R2、R3以及R3a中的至少两个任选地连接以形成四元、五元或六元芳环、杂芳环、脂环或杂脂环，并且其中Ra、Raa、Rb、Rbb、Rc以及Rcc中的至少两个任选地连接以形成四元、五元或六元芳环、杂芳环、脂环或杂脂环。
[0194] 在一个实施方案中，在式III中，n是1或2。在另一个实施方案中，在式III中，n是1。
[0195] 在一个实施方案中，在式III中，Y选自由以下组成的组：氢、酰基、烷基、芳基、环烷基、羧基、糖、磷酸、磷酰基胆碱、磷酰基乙醇胺、磷酰基丝氨酸、磷酰基心磷脂、磷酰基肌醇、乙基磷酸胆碱、磷酰基甲醇、磷酰基乙醇、磷酰基丙醇、磷酰基丁醇、磷酰基乙醇胺-N-乳糖、磷酸乙醇胺–N-戊二酸、磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(丙二醇)]、磷酸肌醇-4-磷酸、磷酸肌醇-4,5-双磷酸、焦磷酸酯、磷酸乙醇胺-二乙烯三胺-五乙酸、二硝基苯基-磷酸乙醇胺以及磷酸甘油。
[0196] 在另一个实施方案中，在式III中，Y选自由以下组成的组：氢、磷酰基胆碱和磷酰基乙醇胺。
[0197] 在另一个实施方案中，在式III中，Y选自由以下组成的组：磷酰基胆碱和磷酰基乙醇胺。在一个实施方案中，在式III中，Y是磷酰基胆碱。
[0198] 在一个实施方案中，在式III中，Z是
[0199] 在另一个实施方案中，在式III中，Z是羧酸基团。
[0200] 在另一个实施方案中，在式III中，n是1并且Y是磷酰基胆碱。
[0201] 在另一个实施方案中，在式III中，B1、B2和B3中的每一个均是氧。
[0202] 在另一个实施方案中，在式III中，n是1，Y是磷酰基胆碱，B1、B2和B3中的每一个均是氧。
[0203] 在一个实施方案中，适用于本发明的任何方法中的氧化磷脂具有根据以下式IIIa的结构：
[0204]
[0205] 或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物。
[0206] 在式IIIa中，B1、B2和B3独立地选自氧和硫。
[0207] 在式IIIa中，A1和A2独立地选自由以下组成的组：CH2、CH＝CH、C＝O以及C＝S。
[0208] 在式IIIa中，Y选自由以下组成的组：氢、酰基、烷基、芳基、环烷基、羧基、糖、磷酸、磷酰基胆碱、磷酰基乙醇胺、磷酰基丝氨酸、磷酰基心磷脂、磷酰基肌醇、乙基磷酸胆碱、磷酰基甲醇、磷酰基乙醇、磷酰基丙醇、磷酰基丁醇、磷酰基乙醇胺-N-乳糖、磷酸乙醇胺–N-戊二酸、磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(丙二醇)]、磷酸肌醇-4-磷酸、磷酸肌醇-4,5-双磷酸、焦磷酸酯、磷酸乙醇胺-二乙烯三胺-五乙酸、二硝基苯基-磷酸乙醇胺以及磷酸甘油。
[0209] 在式IIIa中，R1、R1a、R2、R3以及R3a独立地选自由以下组成的组：氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基、卤代基、三卤代甲基、羟基、烷氧基、芳氧基、巯基、硫代烷氧基、硫代芳氧基、膦酸根、磷酸根、氧磷基、磺酰基、亚磺酰基、磺酰胺、酰胺、羰基、硫羰基、C-羧基、O-羧基、C-氨基甲酸根、N-氨基甲酸根、C-硫代羧基、S-硫代羧基以及氨基，其中R1、R1a、R2、R3以及R3a中的至少两个任选地连接以形成四元、五元或六元芳环、杂芳环、脂环或杂脂环，并且其中Ra、Raa、Rb、Rbb、Rc以及Rcc中的至少两个任选地连接以形成四元、五元或六元芳环、杂芳环、脂环或杂脂环；
[0210] 在式IIIa中，X1和X2独立地是饱和或不饱和的直链或支链烃，其中X1和X2中的至少一个被具有选自以下的式的氧化部分Z取代：
[0211] 以及
[0212] 其中W是氧或硫；并且Rd和Rdd独立地选自氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基以及杂芳基。
[0213] 在一个实施方案中，在式IIIa中，X1和X2独立地具有根据以下式IVa的结构：
[0214]
[0215] 在式IVa中，m是选自1至26的整数。
[0216] 在式IVa中，Ra、Raa、每个Rb、每个Rbb、Rc以及Rcc独立地选自由以下组成的组：氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基、卤代基、三卤代甲基、羟基、烷氧基、芳氧基、巯基、硫代烷氧基、硫代芳氧基、膦酸根、磷酸根、氧磷基、磺酰基、亚磺酰基、磺酰胺、酰胺、羰基、硫羰基、C-羧基、O-羧基、C-氨基甲酸根、N-氨基甲酸根、C-硫代羧基、S-硫代羧基以及氨基，其中Ra、Raa、Rb、Rbb、Rc以及Rcc中的至少两个任选地连接以形成四元、五元或六元芳环、杂芳环、脂环或杂脂环。
[0217] 在式IVa中，Z选自由以下组成的组：
[0218] H、 以及ORd，
[0219] 其中W是氧或硫；并且Rd和Rdd独立地选自氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基以及杂芳基，其中X1和X2中的至少一个包含除氢之外的Z。
[0220] 在一个实施方案中，在式IIIa中，Z是 在另一个实施方案中，在式IIIa中，Z是羧酸基团。
[0221] 在一个实施方案中，在式IIIa中，Y选自由以下组成的组：氢、酰基、烷基、芳基、环烷基、羧基、糖、磷酸、磷酰基胆碱、磷酰基乙醇胺、磷酰基丝氨酸、磷酰基心磷脂、磷酰基肌醇、乙基磷酸胆碱、磷酰基甲醇、磷酰基乙醇、磷酰基丙醇、磷酰基丁醇、磷酰基乙醇胺-N-乳糖、磷酸乙醇胺–N-戊二酸、磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(丙二醇)]、磷酸肌醇-4-磷酸、磷酸肌醇-4,5-双磷酸、磷酸乙醇胺-二乙烯三胺-五乙酸、二硝基苯基-磷酸乙醇胺以及磷酸甘油。
[0222] 在一个实施方案中，在式IIIa中，Y选自由以下组成的组：氢、磷酰基胆碱和磷酰基乙醇胺。
[0223] 在另一个实施方案中，在式IIIa中，Y选自由以下组成的组：磷酰基胆碱和磷酰基乙醇胺。
[0224] 在一个实施方案中，在式IIIa中，Y是磷酰基胆碱。
[0225] 在另一个实施方案中，在式IIIa中，B1、B2和B3中的每一个均是氧。
[0226] 在另一个实施方案中，在式IIIa中，Y是磷酰基胆碱，B1、B2和B3中的每一个均是氧。
[0227] 在一个实施方案中，在式IIIa中，氧化磷脂独立地具有根据以下式V的结构：
[0228]
[0229] 其中B1、B2、B3、A1、A2、X1、X2以及Y是如对于式IIIa所定义的。
[0230] 在一个实施方案中，式V中的B1、B2、B3是氧并且氧化磷脂具有根据以下式VI的结构：
[0231]
[0232] 在式VI中，A1选自由以下组成的组：CH2、CH＝CH和C＝O。在一个实例中，在式VI中A1是CH2。
[0233] 在式VI中，A2是不存在的或者是CH2。
[0234] 在式VI中，X1是具有1至30个碳原子的烷基。
[0235] 在式VI中，X2是
[0236] 其中
[0237] E是不存在的或者是具有1至24个碳原子的烷基链；
[0238] F选自由以下组成的组：氢、羟基、烷基、烷氧基、卤化物、乙酰氧基以及芳基；并且[0239] Z选自由以下组成的组：
[0240] 以及-ORd，
[0241] 其中Rd选自H、烷基和芳基。
[0242] 在式VI中，Y选自由以下组成的组：氢、烷基、芳基、磷酸、磷酰基胆碱、磷酰基乙醇胺、磷酰基丝氨酸、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰心磷脂、磷脂酰肌醇、磷酰基心磷脂、磷酰基肌醇、乙基磷酸胆碱、磷酰基甲醇、磷酰基乙醇、磷酰基丙醇、磷酰基丁醇、磷酰基乙醇胺-N-乳糖、磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(丙二醇)]、磷酸肌醇-4-磷酸、磷酸肌醇-4,5-双磷酸、焦磷酸酯、磷酸乙醇胺-二乙烯三胺-五乙酸、二硝基苯基-磷酸乙醇胺、磷酸甘油。
[0243] 在一个实施方案中，在式VI中，X1是具有10至30个碳原子或8至30个碳原子的烷基。
[0244] 在一个实施方案中，在式VI中，E是具有1至10个碳原子或1至4个碳原子的烷基。
[0245] 在一个实施方案中，在式VI中，Y是磷酰基胆碱。
[0246] 在式I、II、III、IIIa、V以及VI中的每个碳原子是手性或非手性碳原子，其中每个手性碳原子可以具有S-构型或R-构型。
[0247] 在一个优选的实施方案中，氧化磷脂是1-十六烷基-2-(4'-羧基)丁基-甘油-3-磷酸胆碱。在另一个优选的实施方案中，氧化磷脂是(R)-1-十六烷基-2-(4'-羧基)丁基-sn-甘油-3-磷酸胆碱。
[0248] 在一个优选的实施方案中，氧化磷脂是
[0249] 或其药学上可接受的盐。
[0250] 在一个优选的实施方案中，氧化磷脂是
[0251] 或其药学上可接受的盐。
[0252] 本文所述的小分子MOSPD2抑制剂可以在本文所述的任何方法中单独用作单一药剂或者其可以与另一种药剂(例如，另一种MOSPD2抑制剂)组合使用。在任何本文所述的实施方案中，有用的小分子MOSPD2抑制剂包括当与VB-221相比时更强效的MOSPD2(例如，单核细胞的细胞表面上的人类MOSPD2)抑制剂，例如具有与VB-221相比更低的IC50值的那些。更优选地，有用的小分子MOSPD2抑制剂包括当与VB-201相比时同等强效或更强效的MOSPD2
(例如，单核细胞的细胞表面上的人类MOSPD2)抑制剂，例如具有与VB-201相比更低的IC50值的那些。如本领域技术人员所理解的，IC50值指示特定药物或其它物质(抑制剂)将给定生物过程(或过程的组分，即酶、细胞、细胞受体或微生物)抑制成一半的量。用于测定IC50值的方法是本领域中已知的。
(例如，单核细胞的细胞表面上的人类MOSPD2)抑制剂，例如具有与VB-201相比更低的IC50值的那些。如本领域技术人员所理解的，IC50值指示特定药物或其它物质(抑制剂)将给定生物过程(或过程的组分，即酶、细胞、细胞受体或微生物)抑制成一半的量。用于测定IC50值的方法是本领域中已知的。
[0253] 当向受试者施用单独作为单一药剂的药物组合物中的小分子MOSPD2抑制剂(如本文所述的)或其与另一种药剂的组合时，小分子MOSPD2抑制剂(例如，VB-201)以一定量存在，以使得施用引起MOSPD2(例如，人类MOSPD2)的一种或多种活动(例如，MOSPD2表达、炎性细胞迁移(例如，白细胞或单核细胞迁移)、趋化性(例如，白细胞或单核细胞趋化性)、趋化因子信号传导途径、EGF受体磷酸化、ERK磷酸化、AKT磷酸化)的至少10％(例如，至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少
99％或更高)抑制。在一些实施方案中，向人类受试者施用小分子MOSPD2抑制剂引起人类MOSPD2的一种或多种活动的至少10％(例如，至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少99％或更高)抑制。在一个方面，施用小分子MOSPD2抑制剂引起MOSPD2的一种或多种活动的约10％至100％、约10％至约99％、约10％至约95％、约10％至约90％、约10％至约85％、约10％至约80％、约10％至约70％、约
20％至约99％、约20％至约95％、约20％至约90％、约20％至约85％、约20％至约80％、约
30％至约95％、约30％至约90％、约30％至约85％、约30％至约80％、约40％至约95％、约
40％至约90％、约40％至约85％、约40％至约80％、约50％至约95％、约50％至约90％、约
50％至约85％、约50％至约80％、约60％至约95％、约60％至约90％、约60％至约85％或约
60％至约80％抑制，例如炎性细胞迁移、趋化因子信号传导途径、生长因子信号传导途径、EGF受体磷酸化、ERK磷酸化、AKT磷酸化和/或FAK磷酸化的调节。优选地，小分子MOSPD2抑制剂是VB-201。
99％或更高)抑制。在一些实施方案中，向人类受试者施用小分子MOSPD2抑制剂引起人类MOSPD2的一种或多种活动的至少10％(例如，至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少99％或更高)抑制。在一个方面，施用小分子MOSPD2抑制剂引起MOSPD2的一种或多种活动的约10％至100％、约10％至约99％、约10％至约95％、约10％至约90％、约10％至约85％、约10％至约80％、约10％至约70％、约
20％至约99％、约20％至约95％、约20％至约90％、约20％至约85％、约20％至约80％、约
30％至约95％、约30％至约90％、约30％至约85％、约30％至约80％、约40％至约95％、约
40％至约90％、约40％至约85％、约40％至约80％、约50％至约95％、约50％至约90％、约
50％至约85％、约50％至约80％、约60％至约95％、约60％至约90％、约60％至约85％或约
60％至约80％抑制，例如炎性细胞迁移、趋化因子信号传导途径、生长因子信号传导途径、EGF受体磷酸化、ERK磷酸化、AKT磷酸化和/或FAK磷酸化的调节。优选地，小分子MOSPD2抑制剂是VB-201。
[0254] 在一些实施方案中，给定蛋白质的抑制剂通过结合至蛋白质和/或编码所述蛋白质的寡核苷酸(例如，mRNA)来抑制蛋白质。
[0255] 在其它实施方案中，MOSPD2抑制剂是(i)特异性结合至MOSPD2多肽的经分离的结合分子、(ii)特异性结合至MOSPD2多肽的配体的经分离的结合分子、(iii)针对MOSPD2多肽产生的抗血清、(iv)可溶性MOSPD2多肽或者(v)包含MOSPD2多肽的细胞外结构域、基本上由MOSPD2多肽的细胞外结构域组成或由MOSPD2多肽的细胞外结构域组成的可溶性MOSPD2多
肽。
肽。
[0256] 在另一些其他实施方案中，抑制剂是特异性结合至MOSPD2多肽的抗体。在其它实施方案中，抑制剂是特异性结合至MOSPD2多肽的抗体的抗原结合片段。在其它实施方案中，所述抗体是多克隆抗体、单克隆抗体、鼠抗体、人类抗体、人源化抗体、嵌合抗体或单链抗体。在其它实施方案中，抗原结合片段是Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、scFv、sdFv片段、VH结构域或VL结构域。
[0257] 在一些实施方案中，抑制剂是本文所述的抗体或其抗原结合片段，其特异性结合至MOSPD2(例如，人类MOSPD2)，包括VH、VL或VH和VL。在其它实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含恒定区。
[0258] 在一些实施方案中，VH、VL或VH和VL包含一个或多个互补决定区(CDR)。在一些实施方案中，VH包含CDR1、CDR2、CDR3或其任何组合。在一些实施方案中，VL包含CDR1、CDR2、CDR3或其任何组合。
[0259] 在一些实施方案中，VH、VL或VH和VL包含一个或多个框架区(FR)。在一些实施方案中，VH包含FR1、FR2、FR3、FR4或其任何组合。在一些实施方案中，VL包含FR1、FR2、FR3、FR4或其任何组合。
[0260] 在一个具体实施方案中，本文所述的特异性结合至MOSPD2(例如，人类MOSPD2)的抗体或其抗原结合片段包含含有CDR1、CDR2和CDR3的VH和含有CDR1、CDR2和CDR3的VL。
[0261] 在其它实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含恒定区。在一些实施方案中，轻链的恒定区包含人类κ轻链恒定区或人类λ轻链恒定区的氨基酸序列。在一些实施方案中，重链的恒定区包含人类γ重链恒定区的氨基酸序列。已描述了人类恒定区序列的非限制性实例，例如参见美国专利号5,693,780和Kabat,EA等人，(1991)。在一些实施方案中，已修饰恒定区氨基酸序列(例如，一个、两个或更多个氨基酸取代)，以使得其与天然人类序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性。在另一个方面，本文提供识别或结合至MOSPD2的表位(例如，人类MOSPD2的表位)的抗体或其抗原结合片段。在另一个方面，本文提供识别或结合至与本文所述的抗体(例如，实施例1或8所述的抗体)相同的MOSPD2(例如，人类MOSPD2)表位或重叠表位的抗体或其抗原结合片段。在另一个方面，抗体或其抗原结合片段识别MOSPD2的超过一个表位(例如，两个、三个、四个、五个或六个表位)。
[0262] 在某些实施方案中，MOSPD2的表位可以通过文献中所述的一种或多种方法来确定，所述方法例如NMR光谱学、X-射线衍射晶体学研究、ELISA测定、与质谱分析(例如，MALDI质谱分析)相联接的氢/氘交换、基于阵列的寡肽扫描测定和/或诱变作图(例如，定点诱变作图)。对于X-射线晶体学，结晶可以使用文献中所述的方法来实现(例如，Giegé R等人，(1994)Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 50(Pt 4):339-350；McPherson A(1990)Eur J Biochem 189:1-23；Chayen NE(1997)Structure 5:1269-1274；McPherson A(1976)J Biol Chem 251:6300-6303)。抗体:抗原晶体可以使用已熟知的X-射线衍射技术进行研究并且可以使用计算机软件精炼，所述软件诸如X-PLOR(Yale University,1992,
distributed by Molecular Simulations,Inc.；参见例如Meth Enzymol(1985)第114和
115卷，Wyckoff HW等人编辑；美国专利申请号2004/0014194)和BUSTER(Bricogne G(1993)Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 49(Pt 1):37-60；Bricogne G(1997)Meth
Enzymol 276A:361-423，Carter CW编辑；Roversi P等人，(2000)Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 56(Pt 10):1316-1323)。诱变作图研究可以使用文献中所述的方法来实现。关于诱变技术的描述，参见例如，Champe M等人，(1995)同上和Cunningham BC&Wells JA(1989)同上，所述诱变技术包括丙氨酸扫描诱变技术。在一个特定实施方案中，抗体或其抗原结合片段的表位使用丙氨酸扫描诱变研究来确定。抗体的表位表征也可以通过以下文献中提高的方法来确定：Ravn等人，Journal of Biological Chemistry 288:19760-19772(2013)。
distributed by Molecular Simulations,Inc.；参见例如Meth Enzymol(1985)第114和
115卷，Wyckoff HW等人编辑；美国专利申请号2004/0014194)和BUSTER(Bricogne G(1993)Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 49(Pt 1):37-60；Bricogne G(1997)Meth
Enzymol 276A:361-423，Carter CW编辑；Roversi P等人，(2000)Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 56(Pt 10):1316-1323)。诱变作图研究可以使用文献中所述的方法来实现。关于诱变技术的描述，参见例如，Champe M等人，(1995)同上和Cunningham BC&Wells JA(1989)同上，所述诱变技术包括丙氨酸扫描诱变技术。在一个特定实施方案中，抗体或其抗原结合片段的表位使用丙氨酸扫描诱变研究来确定。抗体的表位表征也可以通过以下文献中提高的方法来确定：Ravn等人，Journal of Biological Chemistry 288:19760-19772(2013)。
[0263] 另外，识别或结合至MOSPD2(例如，人类MOSPD2)的相同或重叠表位的抗体或其抗原结合片段可使用常规技术(诸如免疫测定)，例如通过显示一种抗体阻断另一抗体与靶抗原结合的能力(即竞争性结合测定)来鉴定。在某一测定中可以测定竞争性结合，其中所测试的免疫球蛋白抑制参考抗体与共同抗原(诸如MOSPD2)特异性结合。已描述了许多类型的竞争结合测定，例如：固相直接或间接放射性免疫测定(RIA)、固相直接或间接酶免疫测定(EIA)、夹心竞争测定(参见Stahli C等人，(1983)Methods Enzymol 9:242-253)；固相直接生物素-抗生物素蛋白EIA(参见Kirkland TN等人，(1986)J Immunol 137:3614-9)；固相直接标记测定、固相直接标记夹心测定(参见Harlow E&Lane D,(1988)Antibodies:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Press)；使用I-125标记的固相直接标记RIA(参见Morel GA等人，(1988)Mol Immunol 25(1):7-15)；固相直接生物素-抗生物素蛋白EIA(Cheung RC等人，(1990)Virology 176:546-52)；以及直接标记RIA(Moldenhauer G等人，(1990)Scand J Immunol 32:77-82)。通常，所述测定涉及使用结合至固体表面的纯化抗原(例如MOSPD2，诸如人类MOSPD2)，或带有这些未标记的测试免疫球蛋白和标记的参考免疫球蛋白中任一者的细胞。竞争性抑制可以通过测定在测试免疫球蛋白存在下结合至固体表面或细胞的标记的量来测量。通常，测试免疫球蛋白过量存在。通常，当竞争性抗体过量存在时，其将使参考抗体与共同抗原的特异性结合抑制至少50-55％、55-60％、60-65％、65-
70％、70-75％或75％以上。竞争结合测定可以使用标记的抗原或标记的抗体以大量不同的格式配置。在此测定的常见版本中，将抗原固定至96孔板上。然后使用放射性标记或酶标记测量标记的抗体阻断标记的抗体与抗原的结合的能力。关于进一步细节，参见例如Wagener C等人，(1983)J Immunol 130:2308-2315；Wagener C等人，(1984)J Immunol Methods 68:
269-274；Kuroki M等人，(1990)Cancer Res 50:4872-4879；Kuroki M等人，(1992)Immunol Invest 21:523-538；Kuroki M等人，(1992)Hybridoma 11:391-407以及Antibodies:A
Laboratory Manual,Ed Harlow E&Lane D编辑，同上，第386-389页。
70％、70-75％或75％以上。竞争结合测定可以使用标记的抗原或标记的抗体以大量不同的格式配置。在此测定的常见版本中，将抗原固定至96孔板上。然后使用放射性标记或酶标记测量标记的抗体阻断标记的抗体与抗原的结合的能力。关于进一步细节，参见例如Wagener C等人，(1983)J Immunol 130:2308-2315；Wagener C等人，(1984)J Immunol Methods 68:
269-274；Kuroki M等人，(1990)Cancer Res 50:4872-4879；Kuroki M等人，(1992)Immunol Invest 21:523-538；Kuroki M等人，(1992)Hybridoma 11:391-407以及Antibodies:A
Laboratory Manual,Ed Harlow E&Lane D编辑，同上，第386-389页。
[0264] 在一个实施方案中，竞争测定使用表面等离振子共振 例如通过“串联方法”，诸如Abdiche YN等人，(2009)Analytical Biochem 386:172-180所述的方法来进行，从而使MOSPD2抗原固定在芯片表面上，例如CM5传感器芯片，并且然后所述芯片上运行抗-MOSPD2抗体。为了确定抗体或其抗原结合片段是否与本文所述的抗-MOSPD2抗体或其抗原结合片段竞争，首先在芯片表面上运行抗-MOSPD2抗体或其抗原结合片段以实现饱和并且然后添加潜在的竞争性抗体。然后可以测定竞争性抗体的结合并且将其相对于非竞争性对照来定量。
[0265] 在某些方面，竞争结合测定可以用于确定抗体或其抗原结合片段是否例如以剂量依赖性方式被另一种抗体竞争性阻断，例如当两种抗体在竞争结合测定诸如竞争性ELISA测定中识别相同或空间上重叠的表位时，一种抗体基本上结合与参考抗体相同的表位或重叠表位，所述测定可以使用标记的抗原或标记的抗体以所有数目的不同形式配置。在一个具体实施方案中，抗体或其抗原结合片段可以在竞争结合测定中使用本文所述的抗体(例如，实施例中的那些)、或其嵌合抗体或Fab抗体、或包含本文所述的抗体的VH CDR和VL CDR的抗体(例如，实施例中的那些)进行测试。
[0266] 因此，在某一方面，本文提供与本文所述的抗体(例如，实施例中的那些)竞争(例如，以剂量依赖性方式)结合至MOSPD2(例如，人类MOSPD2)的抗体或其抗原结合片段，如使用本领域技术人员已知的或本文所述的测定(例如，ELISA竞争测定、表面等离振子共振或斯卡查德分析)来确定的。
[0267] 在一些实施方案中，本发明的抗-MOSPD2抗体或其抗原结合片段特异性结合至MOSPD2的以下氨基酸区域(表位)中的一个或多个，所述氨基酸区域根据SEQ ID NO:1(氨基酸残基1-518)来编号：508-517、501-514、233-241、509-517、212-221、13-24、505-517、505-
514、89-100、506-517、233-245、504-514、128-136、218-226、15-24、83-96、42-50、462-474、
340-351、504-517、462-470、327-337、21-32、217-226、510-517、178-190、497-509、504-
516、64-77、504-515、147-159、503-315、88-97、208-218、178-191、502-515、503-516、497-
505、500-509、189-202、189-197、505-516、1-63、82-239、93-234、327-445、327-431以及
497-517。
514、89-100、506-517、233-245、504-514、128-136、218-226、15-24、83-96、42-50、462-474、
340-351、504-517、462-470、327-337、21-32、217-226、510-517、178-190、497-509、504-
516、64-77、504-515、147-159、503-315、88-97、208-218、178-191、502-515、503-516、497-
505、500-509、189-202、189-197、505-516、1-63、82-239、93-234、327-445、327-431以及
497-517。
[0268] 在一些实施方案中，本发明的抗-MOSPD2抗体或其抗原结合片段特异性结合至MOSPD2的以下氨基酸区域(表位)中的一个或多个，所述氨基酸区域根据SEQ ID NO:1(氨基酸残基1-518)来编号：约508至约517、约501至约514、约233至约241、约509至约517、约212至约221、约13至约24、约505至约517、约505至约514、约89至约100、约506至约517、约233至约245、约504至约514、约128至约136、约218至约226、约15至约24、约83至约96、约42至约
50、约462至约474、约340至约351、约504至约517、约462至约470、约327至约337、约21至约
32、约217至约226、约510至约517、约178至约190、约497至约509、约504至约516、约64至约
77、约504至约515、约147至约159、约503至约515、约88至约97、约208至约218、约178至约
191、约502至约515、约503至约516、约497至约505、约500至约509、约189至约202、约189至约197、约505至约516、约1至约63、约82至约239、约93至约234、约327至约445、约327至约
431以及约497至约517。
50、约462至约474、约340至约351、约504至约517、约462至约470、约327至约337、约21至约
32、约217至约226、约510至约517、约178至约190、约497至约509、约504至约516、约64至约
77、约504至约515、约147至约159、约503至约515、约88至约97、约208至约218、约178至约
191、约502至约515、约503至约516、约497至约505、约500至约509、约189至约202、约189至约197、约505至约516、约1至约63、约82至约239、约93至约234、约327至约445、约327至约
431以及约497至约517。
[0269] 在一些实施方案中，本发明的抗-MOSPD2抗体或其抗原结合片段特异性结合至MOSPD2的以下氨基酸区域(表位)中的一个或多个，所述氨基酸区域根据SEQ ID NO:1(氨基酸残基1-518)来编号：约505至约515、约500至约515、约230至约240、约510至约520、约210至约220、约15至约25、约505至约520、约505至约515、约90至约100、约505至约525、约230至约245、约505至约510、约130至约140、约220至约230、约15至约30、约80至约95、约40至约
50、约460至约475、约340至约350、约500至约515、约460至约470、约325至约335、约20至约
35、约215至约225、约510至约520、约175至约190、约500至约510、约505至约530、约60至约
75、约500至约520、约145至约160、约502至约515、约85至约100、约205至约220、约175至约
190、约500至约505、约500至约525、约495至约505、约495至约510、约190至约200、约190至约198、约502至约515、约1至约60、约80至约240、约90至约235、约330至约445、约330至约
430以及约495至约515。
50、约460至约475、约340至约350、约500至约515、约460至约470、约325至约335、约20至约
35、约215至约225、约510至约520、约175至约190、约500至约510、约505至约530、约60至约
75、约500至约520、约145至约160、约502至约515、约85至约100、约205至约220、约175至约
190、约500至约505、约500至约525、约495至约505、约495至约510、约190至约200、约190至约198、约502至约515、约1至约60、约80至约240、约90至约235、约330至约445、约330至约
430以及约495至约515。
[0270] 在一些实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段以以下抗体-抗原平衡解离-6 -12 -7 -12 -
常数(KD)结合至MOSPD2：约10 M至约10 M或其值的任何范围(例如，约10 M至约10 、10
8M至约10-12M、约10-9M至约10-12M、约10-10M至约10-12M、约10-11M至约10-12M、约10-6M至约10-
11M、约10-7M至约10-11M、约10-8M至约10-11M、约10-9M至约10-11M、约10-10M至约10-11M、约10-6M至约10-10M、约10-7M至约10-10M、约10-8M至约10-10M、约10-9M至约10-10M、约10-6M至约10-9M、约-7 -9 -8 -9 -6 -8 -7 -8
10 M至约10 M、约10 M至约10 M、约10 M至约10 M或约10 M至约10 )。在其它实施方案
中，抗体或其抗原结合片段具有的KD为约10-6M、约10-7M、约10-8M、约10-9M、约10-10M、约10-11M或约10-12M。在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段结合至MOSPD2上的一个或多个表位。
在一些实施方案中，KD通过斯卡查德分析、表面等离振子共振或本文所述的其他方法来测定，在一些实施方案中是在37℃下测定。
常数(KD)结合至MOSPD2：约10 M至约10 M或其值的任何范围(例如，约10 M至约10 、10
8M至约10-12M、约10-9M至约10-12M、约10-10M至约10-12M、约10-11M至约10-12M、约10-6M至约10-
11M、约10-7M至约10-11M、约10-8M至约10-11M、约10-9M至约10-11M、约10-10M至约10-11M、约10-6M至约10-10M、约10-7M至约10-10M、约10-8M至约10-10M、约10-9M至约10-10M、约10-6M至约10-9M、约-7 -9 -8 -9 -6 -8 -7 -8
10 M至约10 M、约10 M至约10 M、约10 M至约10 M或约10 M至约10 )。在其它实施方案
中，抗体或其抗原结合片段具有的KD为约10-6M、约10-7M、约10-8M、约10-9M、约10-10M、约10-11M或约10-12M。在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段结合至MOSPD2上的一个或多个表位。
在一些实施方案中，KD通过斯卡查德分析、表面等离振子共振或本文所述的其他方法来测定，在一些实施方案中是在37℃下测定。
[0271] 在一些实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段以以下Kon结合至MOSPD2：约103 1/Ms至约106 1/Ms或其值的任何范围(例如，约103 1/Ms至约105 1/Ms、约104 1/Ms至约105
1/Ms、约104 1/Ms至约106 1/Ms、约105 1/Ms至约106 1/Ms或约103 1/Ms至约104 1/Ms)。在其它实施方案中，抗体或抗原结合片段具有的Kon为约103 1/Ms、约104 1/Ms、约105 1/Ms或约106 1/Ms。
1/Ms、约104 1/Ms至约106 1/Ms、约105 1/Ms至约106 1/Ms或约103 1/Ms至约104 1/Ms)。在其它实施方案中，抗体或抗原结合片段具有的Kon为约103 1/Ms、约104 1/Ms、约105 1/Ms或约106 1/Ms。
[0272] 在一些实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段以以下Koff结合至MOSPD2：约10-3 1/s至约10-6 1/s或其值的任何范围(例如，约10-3 1/s至约10-5 1/s、约10-4 1/s至约
10-5 1/s、约10-4 1/s至约10-6 1/s、约10-5 1/s至约10-6 1/s或约10-3 1/s至约10-4 1/s)。在其它实施方案中，抗体或抗原结合片段具有的Koff为约10-3 1/s、约10-4 1/s、约10-5 1/s或约10-6 1/s。
10-5 1/s、约10-4 1/s至约10-6 1/s、约10-5 1/s至约10-6 1/s或约10-3 1/s至约10-4 1/s)。在其它实施方案中，抗体或抗原结合片段具有的Koff为约10-3 1/s、约10-4 1/s、约10-5 1/s或约10-6 1/s。
[0273] 在另一些其他实施方案中，抑制剂是RNAi、miRNA、siRNA、shRNA、反义RNA、反义DNA、诱饵分子、诱饵DNA、双链DNA、单链DNA、复合的DNA、封装的DNA、病毒DNA、质粒DNA、裸RNA、封装的RNA、病毒RNA、双链RNA、能够生成RNA干扰的分子或其组合。在一些实施方案中，抑制剂与编码MOSPD2多肽的核苷酸序列杂交。在一些实施方案中，杂交是在严格条件下或在高度严格条件下。
[0274] 在一些实施方案中，抑制剂是成簇有规律地间隔的短回文重复CRISPR-CAS9系统。
[0275] 在其它实施方案中，MOSPD2多肽具有与SEQ ID NO:1-4中的任一个至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或100％相同的序列。在其它实施方案中，MOSPD2多肽具有与SEQ ID NO:1-4中的任一个至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的序列。在其它实施方案中，MOSPD2多肽具有与SEQ ID NO:1-4中的任一个约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％或约99％相同的序列。在其它实施方案中，MOSPD2多肽具有与SEQ ID No:1-4中的任一个有75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在其它实施方案中，MOSPD2多肽具有与SEQ ID NO:1-4中的任一个有约75％至100％同一性或其值的任何范围，例如与SEQ ID NO:1-4中的任一个有约80％至100％同一性、约85％至100％同一性、约90％至100％同一性、约95％至
100％同一性、约96％至100％同一性、约97％至100％同一性、约98％至100％同一性、约
99％至约100％同一性、约75％至约99％同一性、约80％至约99％同一性、约85％至约99％同一性、约90％至约99％同一性、约95％至约99％同一性、约96％至约99％同一性、约97％至约99％同一性、约98％至约99％同一性、约99％至约100％同一性、约75％至约95％同一性、约80％至约95％同一性、约85％至约95％同一性或约90％至约95％同一性的序列。
100％同一性、约96％至100％同一性、约97％至100％同一性、约98％至100％同一性、约
99％至约100％同一性、约75％至约99％同一性、约80％至约99％同一性、约85％至约99％同一性、约90％至约99％同一性、约95％至约99％同一性、约96％至约99％同一性、约97％至约99％同一性、约98％至约99％同一性、约99％至约100％同一性、约75％至约95％同一性、约80％至约95％同一性、约85％至约95％同一性或约90％至约95％同一性的序列。
[0276] 在本发明的其它实施方案中，MOSPD2多肽由与SEQ ID NO:5-8中的任一个具有至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或100％同一性的多核苷酸序列编码。在其它实施方案中，MOSPD2多肽由与SEQ ID NO:5-8中的任一个具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少
95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的多核苷酸序列编码。在其它实施方案中，MOSPD2多肽由与SEQ ID NO:5-8中的任一个具有约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％或约99％同一性的多核苷酸序列编码。在其它实施方案中，MOSPD2多肽由与SEQ ID No:1-4中的任一个75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的多核苷酸序列编码。在其它实施方案中，MOSPD2多肽由与SEQ ID NO:5-8中的任一个具有约75％至100％同一性或其值的任何范围，例如与SEQ ID NO:5-8中的任一个具有约80％至100％同一性、约85％至100％同一性、约90％至100％同一性、约95％至100％同一性、约96％至100％同一性、约97％至100％同一性、约98％至100％同一性、约99％至约
100％同一性、约75％至约99％同一性、约80％至约99％同一性、约85％至约99％同一性、约
90％至约99％同一性、约95％至约99％同一性、约96％至约99％同一性、约97％至约99％同一性、约98％至约99％同一性、约99％至约100％同一性、约75％至约95％同一性、约80％至约95％同一性、约85％至约95％同一性或约90％至约95％同一性的多核苷酸序列编码。
95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的多核苷酸序列编码。在其它实施方案中，MOSPD2多肽由与SEQ ID NO:5-8中的任一个具有约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％或约99％同一性的多核苷酸序列编码。在其它实施方案中，MOSPD2多肽由与SEQ ID No:1-4中的任一个75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的多核苷酸序列编码。在其它实施方案中，MOSPD2多肽由与SEQ ID NO:5-8中的任一个具有约75％至100％同一性或其值的任何范围，例如与SEQ ID NO:5-8中的任一个具有约80％至100％同一性、约85％至100％同一性、约90％至100％同一性、约95％至100％同一性、约96％至100％同一性、约97％至100％同一性、约98％至100％同一性、约99％至约
100％同一性、约75％至约99％同一性、约80％至约99％同一性、约85％至约99％同一性、约
90％至约99％同一性、约95％至约99％同一性、约96％至约99％同一性、约97％至约99％同一性、约98％至约99％同一性、约99％至约100％同一性、约75％至约95％同一性、约80％至约95％同一性、约85％至约95％同一性或约90％至约95％同一性的多核苷酸序列编码。
[0277] 药物组合物
[0278] 本发明的其它实施方案涉及一种包含MOSPD2的抑制剂的药物组合物。在一些实施方案中，药物组合物包含MOSPD2的抑制剂和药学上可接受的载体。在其它实施方案中，药物组合物包含治疗有效量的MOSPD2(例如，本文所述的抗体或抗体的抗原结合片段)的抑制剂。
[0279] 在其它实施方案中，MOSPD2的抑制剂是抗体或抗体抗原结合片段，并且治疗有效量是约1μg/ml至约10μg/ml或其值的任何范围(例如，约2μg/ml至约10μg/ml、约3μg/ml至约10μg/ml、约4μg/ml至约10μg/ml、约5μg/ml至约10μg/ml、约6μg/ml至约10μg/ml、约7μg/ml至约10μg/ml、约8μg/ml至约10μg/ml、约9μg/ml至约10μg/ml、约1μg/ml至约9μg/ml、约2μg/ml至约9μg/ml、约3μg/ml至约9μg/ml、约4μg/ml至约9μg/ml、约5μg/ml至约9μg/ml、约6μg/ml至约9μg/ml、约7μg/ml至约9μg/ml、约8μg/ml至约9μg/ml、约1μg/ml至约8μg/ml、约2μg/ml至约8μg/ml、约3μg/ml至约8μg/ml、约4μg/ml至约8μg/ml、约5μg/ml至约8μg/ml、约6μg/ml至约8μg/ml、约7μg/ml至约8μg/ml、约1μg/ml至约7μg/ml、约2μg/ml至约7μg/ml、约3μg/ml至约7μg/ml、约4μg/ml至约7μg/ml、约5μg/ml至约7μg/ml、约6μg/ml至约7μg/ml、约1μg/ml至约6μg/ml、约2μg/ml至约6μg/ml、约3μg/ml至约6μg/ml、约4μg/ml至约6μg/ml、约5μg/ml至约6μg/ml、约1μg/ml至约5μg/ml、约2μg/ml至约5μg/ml、约3μg/ml至约5μg/ml、约4μg/ml至约5μg/ml、约1μg/ml至约4μg/ml、约2μg/ml至约4μg/ml、约3μg/ml至约4μg/ml、约1μg/ml至约3μg/ml、约2μg/ml至约3μg/ml或约1μg/ml至约2μg/ml)。在其它实施方案中，MOSPD2的抑制剂是抗体或抗体的抗原结合片段，并且治疗有效量是约1μg/ml、约2μg/ml、约3μg/ml、约4μg/ml、约5μg/ml、约6μg/ml、约7μg/ml、约8μg/ml、约9μg/ml或约10μg/ml。
[0280] 在一些实施方案中，MOSPD2的抑制剂是抗体或抗体抗原结合片段，并且治疗有效量是约10mg/kg至约40mg/kg或其值的任何范围(例如，约15mg/kg至约40mg/kg、约20mg/kg至约40mg/kg、约25mg/kg至约40mg/kg、约30mg/kg至约40mg/kg、约35mg/kg至约40mg/kg、约10mg/kg至约35mg/kg、约15mg/kg至约35mg/kg、约20mg/kg至约35mg/kg、约25mg/kg至约
35mg/kg、约30mg/kg至约35mg/kg、约10mg/kg至约30mg/kg、约15mg/kg至约30mg/kg、约
20mg/kg至约30mg/kg、约25mg/kg至约30mg/kg、约10mg/kg至约25mg/kg、约15mg/kg至约
25mg/kg、约20mg/kg至约25mg/kg、约10mg/kg至约20mg/kg、约15mg/kg至约20mg/kg或约
10mg/kg至约15mg/kg)。在其它实施方案中，MOSPD2的抑制剂是抗体或抗体的抗原结合片段，并且治疗有效量是约10mg/kg、约15mg/kg、约20mg/kg、约25mg/kg、约30mg/kg、约35mg/kg或约40mg/kg。
35mg/kg、约30mg/kg至约35mg/kg、约10mg/kg至约30mg/kg、约15mg/kg至约30mg/kg、约
20mg/kg至约30mg/kg、约25mg/kg至约30mg/kg、约10mg/kg至约25mg/kg、约15mg/kg至约
25mg/kg、约20mg/kg至约25mg/kg、约10mg/kg至约20mg/kg、约15mg/kg至约20mg/kg或约
10mg/kg至约15mg/kg)。在其它实施方案中，MOSPD2的抑制剂是抗体或抗体的抗原结合片段，并且治疗有效量是约10mg/kg、约15mg/kg、约20mg/kg、约25mg/kg、约30mg/kg、约35mg/kg或约40mg/kg。
[0281] 在一些实施方案中，MOSPD2抑制剂(例如，抗体或其抗原结合片段)以一定量存在，以使得MOSPD2抑制剂的施用引起MOSPD2(例如，人类MOSPD2)的一种或多种活动(例如，MOSPD2表达、炎性细胞迁移(例如，白细胞或单核细胞迁移)、趋化性(例如，白细胞或单核细胞趋化性)、趋化因子信号传导途径、EGF受体磷酸化、ERK磷酸化和AKT磷酸化)的至少10％(例如，至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少
90％、至少95％、至少99％或更高)抑制。在一些实施方案中，向人类受试者施用MOSPD2抑制剂引起人类MOSPD2的一种或多种活动的至少10％(例如，至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少99％或更高)抑制。
90％、至少95％、至少99％或更高)抑制。在一些实施方案中，向人类受试者施用MOSPD2抑制剂引起人类MOSPD2的一种或多种活动的至少10％(例如，至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少99％或更高)抑制。
[0282] 在另一个方面，施用MOSPD2抑制剂(例如，抗-MOSPD2抗体或其抗原结合片段)引起MOSPD2的一种或多种活动的约10％至100％、约10％至约99％、约10％至约95％、约10％至约90％、约10％至约85％、约10％至约80％、约10％至约70％、约20％至约99％、约20％至约95％、约20％至约90％、约20％至约85％、约20％至约80％、约30％至约95％、约30％至约
90％、约30％至约85％、约30％至约80％、约40％至约95％、约40％至约90％、约40％至约
85％、约40％至约80％、约50％至约95％、约50％至约90％、约50％至约85％、约50％至约
80％、约60％至约95％、约60％至约90％、约60％至约85％或约60％至约80％抑制，例如炎性细胞迁移、趋化因子信号传导途径、生长因子信号传导途径、EGF受体磷酸化、ERK磷酸化、AKT磷酸化和/或FAK磷酸化的调节。
90％、约30％至约85％、约30％至约80％、约40％至约95％、约40％至约90％、约40％至约
85％、约40％至约80％、约50％至约95％、约50％至约90％、约50％至约85％、约50％至约
80％、约60％至约95％、约60％至约90％、约60％至约85％或约60％至约80％抑制，例如炎性细胞迁移、趋化因子信号传导途径、生长因子信号传导途径、EGF受体磷酸化、ERK磷酸化、AKT磷酸化和/或FAK磷酸化的调节。
[0283] 如本文所用，“药物组合物”是指如本文所述的一种或多种药剂(例如，MOSPD2抑制剂或MOSPD2抑制剂和本文所述的一种或多种其它药剂)或其生理学上可接受的盐或前药与其它化学组分的制备物，所述化学组分包括但不限于药学上可接受的载体、赋形剂、润滑剂、缓冲剂、抗菌剂、填充剂(例如，甘露糖醇)、抗氧化剂(例如，抗坏血酸或亚硫酸氢钠)以及类似组分。药物组合物的目的是有利于向受试者施用药剂。
[0284] 如本文所用，向受试者“施用(administration/administering)”包括但不限于为受试者开出本发明的药物组合物处方的医生或其它医学专家的作用。
[0285] 在本文中，短语“药学上可接受的载体”是指不会对受试者引起显著刺激并且不会消除本文所述的药剂的生物活性和特性的载体或稀释剂。
[0286] 如本文所用，术语“载体”是指使用其来施用治疗剂的稀释剂、佐剂、赋形剂或媒介物。
[0287] 在本文中，术语“赋形剂”是指添加到药物组合物中以进一步有利于活性成分的施用的惰性物质。
[0288] 在一些实施方案中，包含MOSPD2抑制剂的药物组合物还包含一种或多种另外的活性剂。
[0289] 当施用呈药物组合物形式的两种或更多种药剂时，每种药剂可以任选地以单独组合物施用和/或经由不同施用路径施用。每种药剂可能的施用路径独立地包括但不限于胃肠外施用、经粘膜施用、经直肠施用、经颊施用和/或吸入(例如，如本文所述的)。
[0290] 在一些实施方案中，药物组合物适用于全身或局部施用。在其它实施方案中，药物组合物适用于经鼻、经口或腹膜内施用。在其它实施方案中，药物组合物适用于静脉内施用、肌内施用或皮下施用。
[0291] 治疗、预防炎症和炎性疾病或病症或者减少所述炎症和炎性疾病或病症的发生率的方法
[0292] 本发明的实施方案涉及一种用于治疗、预防炎症或减少所述炎症的发生率的方法，其包括施用MOSPD2的抑制剂。在一些实施方案中，本发明涉及一种用于治疗、预防炎性疾病或病症或减少所述炎性疾病或病症的发生率的方法，其包括施用MOSPD2的抑制剂。在其它实施方案中，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的MOSPD2的抑制剂。
[0293] 在所述方法的一些实施方案中，MOSPD2的抑制剂是本文所述的抗体或抗体的抗原结合片段。例如，抗体或其抗原结合片段可具有以下抗体-抗原平衡解离常数(KD)：10-6M至约10-12M或其值的任何范围(例如，约10-7M至约10-12、10-8M至约10-12M、约10-9M至约10-12M、约10-10M至约10-12M、约10-11M至约10-12M、约10-6M至约10-11M、约10-7M至约10-11M、约10-8M至约
10-11M、约10-9M至约10-11M、约10-10M至约10-11M、约10-6M至约10-10M、约10-7M至约10-10M、约10-
8M至约10-10M、约10-9M至约10-10M、约10-6M至约10-9M、约10-7M至约10-9M、约10-8M至约10-9M、约
10-6M至约10-8M或约10-7M至约10-8)。在其它实施方案中，抗体或其抗原结合片段具有的KD为约10-6M、约10-7M、约10-8M、约10-9M、约10-10M、约10-11M或约10-12M。在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段结合至MOSPD2上的一个或多个表位。在一些实施方案中，KD通过斯卡查德分析、表面等离振子共振或本文所述的其他方法来测定，在一些实施方案中是在37℃下测定。
10-11M、约10-9M至约10-11M、约10-10M至约10-11M、约10-6M至约10-10M、约10-7M至约10-10M、约10-
8M至约10-10M、约10-9M至约10-10M、约10-6M至约10-9M、约10-7M至约10-9M、约10-8M至约10-9M、约
10-6M至约10-8M或约10-7M至约10-8)。在其它实施方案中，抗体或其抗原结合片段具有的KD为约10-6M、约10-7M、约10-8M、约10-9M、约10-10M、约10-11M或约10-12M。在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段结合至MOSPD2上的一个或多个表位。在一些实施方案中，KD通过斯卡查德分析、表面等离振子共振或本文所述的其他方法来测定，在一些实施方案中是在37℃下测定。
[0294] 在一些实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段以以下Kon结合至MOSPD2：约103 1/Ms至约106 1/Ms或其值的任何范围(例如，约103 1/Ms至约105 1/Ms、约104 1/Ms至约105
4 6 5 6 3 4
1/Ms、约10 1/Ms至约10 1/Ms、约10 1/Ms至约10 1/Ms或约10 1/Ms至约10 1/Ms)。在
其它实施方案中，抗体或抗原结合片段具有的Kon为约103 1/Ms、约104 1/Ms、约105 1/Ms或约106 1/Ms。
4 6 5 6 3 4
1/Ms、约10 1/Ms至约10 1/Ms、约10 1/Ms至约10 1/Ms或约10 1/Ms至约10 1/Ms)。在
其它实施方案中，抗体或抗原结合片段具有的Kon为约103 1/Ms、约104 1/Ms、约105 1/Ms或约106 1/Ms。
[0295] 在一些实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段以以下Koff结合至MOSPD2：约10-3 1/s至约10-6 1/s或其值的任何范围(例如，约10-3 1/s至约10-5 1/s、约10-4 1/s至约
10-5 1/s、约10-4 1/s至约10-6 1/s、约10-5 1/s至约10-6 1/s或约10-3 1/s至约10-4 1/s)。在其它实施方案中，抗体或抗原结合片段具有的Koff为约10-3 1/s、约10-4 1/s、约10-5 1/s或约10-6 1/s。
10-5 1/s、约10-4 1/s至约10-6 1/s、约10-5 1/s至约10-6 1/s或约10-3 1/s至约10-4 1/s)。在其它实施方案中，抗体或抗原结合片段具有的Koff为约10-3 1/s、约10-4 1/s、约10-5 1/s或约10-6 1/s。
[0296] 在所述方法的一些实施方案中，MOSPD2的抑制剂是抗体或抗体的抗原结合片段，并且治疗有效量是约1μg/ml至约10μg/ml或其值的任何范围(例如，约2μg/ml至约10μg/ml、约3μg/ml至约10μg/ml、约4μg/ml至约10μg/ml、约5μg/ml至约10μg/ml、约6μg/ml至约10μg/ml、约7μg/ml至约10μg/ml、约8μg/ml至约10μg/ml、约9μg/ml至约10μg/ml、约1μg/ml至约9μg/ml、约2μg/ml至约9μg/ml、约3μg/ml至约9μg/ml、约4μg/ml至约9μg/ml、约5μg/ml至约9μg/ml、约6μg/ml至约9μg/ml、约7μg/ml至约9μg/ml、约8μg/ml至约9μg/ml、约1μg/ml至约8μg/ml、约2μg/ml至约8μg/ml、约3μg/ml至约8μg/ml、约4μg/ml至约8μg/ml、约5μg/ml至约8μg/ml、约6μg/ml至约8μg/ml、约7μg/ml至约8μg/ml、约1μg/ml至约7μg/ml、约2μg/ml至约7μg/ml、约3μg/ml至约7μg/ml、约4μg/ml至约7μg/ml、约5μg/ml至约7μg/ml、约6μg/ml至约7μg/ml、约1μg/ml至约6μg/ml、约2μg/ml至约6μg/ml、约3μg/ml至约6μg/ml、约4μg/ml至约6μg/ml、约5μg/ml至约6μg/ml、约1μg/ml至约5μg/ml、约2μg/ml至约5μg/ml、约3μg/ml至约5μg/ml、约4μg/ml至约5μg/ml、约1μg/ml至约4μg/ml、约2μg/ml至约4μg/ml、约3μg/ml至约4μg/ml、约1μg/ml至约3μg/ml、约2μg/ml至约3μg/ml或约1μg/ml至约2μg/ml)。在其它实施方案中，MOSPD2的抑制剂是抗体或抗体的抗原结合片段，并且治疗有效量是约1μg/ml、约2μg/ml、约3μg/ml、约4μg/ml、约5μg/ml、约6μg/ml、约7μg/ml、约8μg/ml、约9μg/ml或约10μg/ml。
[0297] 在所述方法的一些实施方案中，MOSPD2的抑制剂是抗体或抗体的抗原结合片段，并且治疗有效量是约10mg/kg至约40mg/kg或其值的任何范围(例如，约15mg/kg至约40mg/kg、约20mg/kg至约40mg/kg、约25mg/kg至约40mg/kg、约30mg/kg至约40mg/kg、约35mg/kg至约40mg/kg、约10mg/kg至约35mg/kg、约15mg/kg至约35mg/kg、约20mg/kg至约35mg/kg、约25mg/kg至约35mg/kg、约30mg/kg至约35mg/kg、约10mg/kg至约30mg/kg、约15mg/kg至约
30mg/kg、约20mg/kg至约30mg/kg、约25mg/kg至约30mg/kg、约10mg/kg至约25mg/kg、约
15mg/kg至约25mg/kg、约20mg/kg至约25mg/kg、约10mg/kg至约20mg/kg、约15mg/kg至约
20mg/kg或约10mg/kg至约15mg/kg)。在其它实施方案中，MOSPD2的抑制剂是抗体或抗体的抗原结合片段，并且治疗有效量是约10mg/kg、约15mg/kg、约20mg/kg、约25mg/kg、约30mg/kg、约35mg/kg或约40mg/kg。
30mg/kg、约20mg/kg至约30mg/kg、约25mg/kg至约30mg/kg、约10mg/kg至约25mg/kg、约
15mg/kg至约25mg/kg、约20mg/kg至约25mg/kg、约10mg/kg至约20mg/kg、约15mg/kg至约
20mg/kg或约10mg/kg至约15mg/kg)。在其它实施方案中，MOSPD2的抑制剂是抗体或抗体的抗原结合片段，并且治疗有效量是约10mg/kg、约15mg/kg、约20mg/kg、约25mg/kg、约30mg/kg、约35mg/kg或约40mg/kg。
[0298] 在所述方法的一些实施方案中，MOSPD2抑制剂(例如，抗体或其抗原结合片段)引起MOSPD2(例如，人类MOSPD2)的一种或多种活动(例如，MOSPD2表达、炎性细胞迁移(例如，白细胞或单核细胞迁移)、趋化性(例如，白细胞或单核细胞趋化性)、趋化因子信号传导途径、EGF受体磷酸化、ERK磷酸化和AKT磷酸化)的至少10％(例如，至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少99％或更高)抑制。在一些实施方案中，向人类受试者施用MOSPD2抑制剂引起人类MOSPD2的一种或多种活动的至少10％(例如，至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少
80％、至少90％、至少95％、至少99％或更高)抑制。
80％、至少90％、至少95％、至少99％或更高)抑制。
[0299] 在另一个方面，施用MOSPD2抑制剂(例如，抗-MOSPD2抗体或其抗原结合片段)引起MOSPD2的一种或多种活动的约10％至100％、约10％至约99％、约10％至约95％、约10％至约90％、约10％至约85％、约10％至约80％、约10％至约70％、约20％至约99％、约20％至约95％、约20％至约90％、约20％至约85％、约20％至约80％、约30％至约95％、约30％至约
90％、约30％至约85％、约30％至约80％、约40％至约95％、约40％至约90％、约40％至约
85％、约40％至约80％、约50％至约95％、约50％至约90％、约50％至约85％、约50％至约
80％、约60％至约95％、约60％至约90％、约60％至约85％或约60％至约80％抑制，例如炎性细胞迁移、趋化因子信号传导途径、生长因子信号传导途径、EGF受体磷酸化、ERK磷酸化、AKT磷酸化和/或FAK磷酸化的调节。
90％、约30％至约85％、约30％至约80％、约40％至约95％、约40％至约90％、约40％至约
85％、约40％至约80％、约50％至约95％、约50％至约90％、约50％至约85％、约50％至约
80％、约60％至约95％、约60％至约90％、约60％至约85％或约60％至约80％抑制，例如炎性细胞迁移、趋化因子信号传导途径、生长因子信号传导途径、EGF受体磷酸化、ERK磷酸化、AKT磷酸化和/或FAK磷酸化的调节。
[0301] 在所述方法的其它实施方案中，所述炎性疾病或病症是特发性炎性疾病或病症、慢性炎性疾病或病症、急性炎性疾病或病症、自身免疫疾病或病症、感染性疾病或病症、炎性恶性疾病或病症、炎性移植相关疾病或病症、炎性退行性疾病或病症、与超敏反应相关的疾病或病症、炎性心血管疾病或病症、炎性脑血管疾病或病症、外周血管疾病或病症、炎性腺性疾病或病症、炎性胃肠疾病或病症、炎性皮肤疾病或病症、炎性肝脏疾病或病症、炎性神经疾病或病症、炎性肌肉骨骼疾病或病症、炎性肾脏疾病或病症、炎性生殖疾病或病症、炎性系统性疾病或病症、炎性结缔组织疾病或病症、坏死、炎性植入物相关性疾病或病症、炎性老化过程、免疫缺陷性疾病或病症或炎性肺部疾病或病症。
[0302] 在一些实施方案中，超敏反应是I型超敏反应、II型超敏反应、III型超敏反应、IV型超敏反应、速发型超敏反应、抗体介导型超敏反应、免疫复合物介导型超敏反应、T淋巴细胞介导型超敏反应、迟发型超敏反应、辅助性T淋巴细胞介导型超敏反应、细胞毒性T淋巴细胞介导型超敏反应、TH1淋巴细胞介导型超敏反应或TH2淋巴细胞介导型超敏反应。
[0303] 在其它实施方案中，炎性心血管疾病或病症是闭塞性疾病或病症、动脉粥样硬化、心脏瓣膜病、狭窄、再狭窄、支架内再狭窄、心肌梗塞、冠状动脉疾病、急性冠状动脉综合症、充血性心力衰竭、心绞痛、心肌局部缺血、血栓形成、韦氏(Wegener's)肉芽肿病、高安氏(Takayasu's)动脉炎、川崎(Kawasaki)综合症、抗因子VIII自身免疫性疾病或病症、坏死性小血管炎、显微镜下多血管炎、丘-施(Churg and Strauss)综合征、微量免疫局灶性坏死性肾小球肾炎、新月体性肾小球肾炎、抗磷脂综合征、抗体诱导的心力衰竭、血小板减少性紫癜、自身免疫性溶血性贫血、心脏自身免疫、恰加斯氏(Chagas’)疾病或病症或抗辅助性T淋巴细胞自身免疫性。
[0304] 在其它实施方案中，炎性脑血管疾病或病症是中风、脑血管炎症、脑出血或脊椎动脉供血不足。
[0305] 在其它实施方案中，外周血管疾病或病症是坏疽、糖尿病性血管病变、缺血性肠病、血栓、糖尿病性视网膜病或糖尿病性肾病。
[0306] 在一些实施方案中，自身免疫疾病或病症是慢性类风湿性关节炎、幼年型类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、硬皮病、混合性结缔组织病、结节性多动脉炎、多发性肌炎/皮肌炎、斯耶格伦氏(Sjogren's)综合征、白塞氏(Bechet's)病、多发性硬化症、自身免疫性糖尿病、桥本氏(Hashimoto's)病、牛皮癣、原发性粘液水肿、恶性贫血、重症肌无力、慢性活动性肝炎、自身免疫性溶血性贫血、特发性血小板减少性紫癜、葡萄膜炎、血管炎或肝素诱导的血小板减少。
[0307] 在一些实施方案中，炎性腺性疾病或病症是胰脏疾病或病症、I型糖尿病、甲状腺疾病或病症、格雷夫斯氏(Graves’)疾病或病症、甲状腺炎、自发性自身免疫性甲状腺炎、桥本氏甲状腺炎、特发性粘液水肿、卵巢自身免疫、自身免疫性抗精子不育症、自身免疫性前列腺炎或I型自身免疫性多内分泌腺综合征。
[0308] 在一些实施方案中，炎性胃肠疾病或病症是结肠炎、回肠炎、克罗恩病、慢性炎性肠道疾病、炎性肠综合征、炎性肠病、肠易激综合征、慢性炎性肠病、乳糜泻、溃疡性结肠炎、溃疡、皮肤溃疡、褥疮、胃溃疡、消化性溃疡、口腔溃疡、鼻咽溃疡、食管溃疡、十二指肠溃疡或胃肠溃疡。
[0309] 在一些实施方案中，炎性皮肤疾病或病症是粉刺、自身免疫性大疱性皮肤疾病或病症、寻常型天疱疮、大疱性类天疱疮、落叶型天疱疮、接触性皮炎或药物疹。
[0310] 在一些实施方案中，炎性肝脏疾病或病症是自身免疫性肝炎、肝硬化或胆汁性肝硬化。
[0311] 在一些实施方案中，炎性神经疾病或病症是多发性硬化症、阿尔兹海默病、帕金森病、重症肌无力、运动神经病、格-巴二氏(Guillain-Barre)综合征、自身免疫性神经病变、朗-伊二氏(Lambert-Eaton)肌无力综合征、副肿瘤性神经疾病或病症、副肿瘤性小脑萎缩、非副肿瘤性僵人综合征、进行性小脑萎缩、拉斯马森(Rasmussen's)脑炎、肌萎缩性侧索硬化症、西登哈姆氏(Sydeham)舞蹈病、抽动秽语综合征(Gilles de la Tourette syndrome)、自身免疫性多内分泌腺病、免疫异常性神经病、获得性神经性肌强直、多发性关节挛缩症、亨廷顿氏病、AIDS相关性痴呆、肌萎缩性脊髓侧索硬化症、多发性硬化症、中风、炎性肾脏疾病或病症、炎性眼部疾病或病症、视神经炎、海绵状脑病、偏头痛、头痛、丛集性头痛或僵人综合征。
[0312] 在一些实施方案中，炎性结缔组织疾病或严重是迪谢内(Duchenne)肌营养不良(DMD)、自身免疫性肌炎、原发性斯耶格伦氏综合征、平滑肌自身免疫性疾病或病症、肌炎、肌腱炎、韧带炎症、软骨炎、关节炎症、滑膜炎症、腕管综合征、关节炎、类风湿性关节炎、骨关节炎、强直性脊柱炎、骨骼炎症、自身免疫性耳疾病或病症或自身免疫性内耳疾病或病症。
[0313] 在一些实施方案中，炎性肾脏疾病或病症是自身免疫性间质性肾炎。
[0314] 在一些实施方案中，炎性生殖疾病或病症是习惯性流产、卵巢囊肿或月经相关性疾病或病症。
[0315] 在一些实施方案中，炎性系统性疾病或病症是系统性红斑狼疮、系统性硬化病、感染性休克、中毒性休克综合征或恶病质。
[0316] 在一些实施方案中，感染性疾病或病症是慢性感染性疾病或病症、亚急性感染性疾病或病症、急性感染性疾病或病症、病毒性疾病或病症、细菌性疾病或病症、原生动物疾病或病症、寄生虫性疾病或病症、真菌疾病或病症、支原体疾病或病症、坏疽、败血病、朊病毒疾病或病症、流感、肺结核、疟疾、获得性免疫缺陷综合征或重度急性呼吸器官综合症。
[0317] 在一些实施方案中，炎性移植相关性疾病或病症是移植物排斥、慢性移植物排斥、亚急性移植物排斥、急性移植物排斥、过急性移植物排斥或移植物抗宿主疾病或病症。
[0318] 在一些实施方案中，所述植入物是假体植入物、乳腺植入物、硅酮植入物、牙齿植入物、阴茎植入物、心脏植入物、人工关节、骨折修复装置、骨替换植入物、药物递送植入物、导管、起搏器、人工心脏、人工心脏瓣膜、药物释放植入物、电极或呼吸器管。
[0319] 在一些实施方案中，炎性肺部疾病或病症是哮喘、过敏性哮喘、肺气肿、慢性阻塞性肺疾病或病症、结节病或支气管炎。
[0321] 在一些实施方案中，炎性疾病或病症是罹患慢性自身免疫或慢性炎性疾病的受试者中的血管炎症。在一些实施方案中，慢性自身免疫或炎性疾病是牛皮癣。在一些实施方案中，血管炎症与心血管疾病、外周血管疾病、冠状动脉疾病、脑血管疾病、肾动脉狭窄、缺血性疾病或主动脉瘤相关。在一些实施方案中，血管炎症与缺血性心脏病、动脉粥样硬化、急性冠脉综合征、不稳定型心绞痛、稳定型心绞痛或中风相关。在其它实施方案中，血管炎症是颈动脉炎症。在其它实施方案中，血管炎症是主动脉炎症。
[0322] 在一些实施方案中，炎性疾病或病症是与植入物相关的炎症。在一些实施方案中，与植入物相关的炎症是局部炎症或系统性炎性反应。在一些实施方案中，植入物是硅酮、盐水、金属、塑料或聚合物植入物。在一些实施方案中，植入物是美容植入物、假体植入物、皮下植入物、透皮植入物、骨替代植入物或骨折修复装置。在一些实施方案中，植入物是药物递送植入物或药物释放植入物。在其它实施方案中，植入物是人工关节、人工心脏、人工心脏瓣膜、睾丸假体、乳房植入物、牙科植入物、眼部植入物、耳蜗植入物、阴茎植入物、心脏植入物、导管、可植入控尿装置、起搏器、电极、疝支持装置或呼吸器管。
[0323] 在其它实施方案中，炎性疾病或病症是肝炎或脂肪性肝炎。在一些实施方案中，炎性疾病或病症是非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。在一些实施方案中，炎性疾病或病症是肾小球肾炎。在一些实施方案中，炎性疾病或病症是局灶性节段性肾小球硬化(FSGS)。
[0324] 因此炎症对骨转换产生影响，从而诱导骨质疏松症，骨质疏松症也是本发明的炎性疾病或病症的一个实例。因此，在本发明的一些实施方案中，炎性疾病或病症是骨质疏松症。
[0325] 抑制或预防一种或多种细胞活动的方法
[0326] 本发明的实施方案还涉及抑制或预防细胞中的一种或多种活动的方法，其包括施用MOSPD2的抑制剂。在一些实施方案中，所述方法还包括向有需要的受试者施用治疗有效量的MOSPD2抑制剂。
[0327] 在一些实施方案中，MOSPD2的抑制剂是本文所述的抗体或抗体的抗原结合片段。例如，抗体或其抗原结合片段可具有以下抗体-抗原平衡解离常数(KD)：约10-6M至约10-12M或其值的任何范围(例如，约10-7M至约10-12M、10-8M至约10-12M、约10-9M至约10-12M、约10-10M至约10-12M、约10-11M至约10-12M、约10-6M至约10-11M、约10-7M至约10-11M、约10-8M至约10-11M、约10-9M至约10-11M、约10-10M至约10-11M、约10-6M至约10-10M、约10-7M至约10-10M、约10-8M至约-10 -9 -10 -6 -9 -7 -9 -8 -9 -6
10 M、约10 M至约10 M、或约10 M至约10 M、约10 至约10 、约10 M至约10 M、约10 M
至约10-8、或约10-7M至约10-8M)。在其它实施方案中，MOSPD2的抑制剂是具有以下KD的抗体或抗体的抗原结合片段：约10-6M、约10-7M、约10-8M、约10-9M、约10-10M、约10-11M或约10-12M。在一些实施方案中，KD通过斯卡查德分析、表面等离振子共振或本文所述的其他方法来测定，在一些实施方案中是在37℃下测定。
10 M、约10 M至约10 M、或约10 M至约10 M、约10 至约10 、约10 M至约10 M、约10 M
至约10-8、或约10-7M至约10-8M)。在其它实施方案中，MOSPD2的抑制剂是具有以下KD的抗体或抗体的抗原结合片段：约10-6M、约10-7M、约10-8M、约10-9M、约10-10M、约10-11M或约10-12M。在一些实施方案中，KD通过斯卡查德分析、表面等离振子共振或本文所述的其他方法来测定，在一些实施方案中是在37℃下测定。
[0328] 在一些实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段以以下Kon结合至MOSPD2：约103 1/Ms至约106 1/Ms或其值的任何范围(例如，约103 1/Ms至约105 1/Ms、约104 1/Ms至约105
1/Ms、约104 1/Ms至约106 1/Ms、约105 1/Ms至约106 1/Ms或约103 1/Ms至约104 1/Ms)。在其它实施方案中，抗体或抗原结合片段具有的Kon为约10-3 1/Ms、约10-4 1/Ms、约10-5 1/Ms或约10-6 1/Ms。
1/Ms、约104 1/Ms至约106 1/Ms、约105 1/Ms至约106 1/Ms或约103 1/Ms至约104 1/Ms)。在其它实施方案中，抗体或抗原结合片段具有的Kon为约10-3 1/Ms、约10-4 1/Ms、约10-5 1/Ms或约10-6 1/Ms。
[0329] 在一些实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段以以下Koff结合至MOSPD2：约10-3 1/s至约10-6 1/s或其值的任何范围(例如，约10-3 1/s至约10-5 1/s、约10-4 1/s至约
10-5 1/s、约10-4 1/s至约10-6 1/s、约10-5 1/s至约10-6 1/s或约10-3 1/s至约10-4 1/s)。在其它实施方案中，抗体或抗原结合片段具有的Koff为约10-3 1/s、约10-4 1/s、约10-5 1/s或-6
约10 1/s。
10-5 1/s、约10-4 1/s至约10-6 1/s、约10-5 1/s至约10-6 1/s或约10-3 1/s至约10-4 1/s)。在其它实施方案中，抗体或抗原结合片段具有的Koff为约10-3 1/s、约10-4 1/s、约10-5 1/s或-6
约10 1/s。
[0330] 在一些实施方案中，MOSPD2的抑制剂是抗体或抗体抗原结合片段，并且治疗有效量是约1μg/ml至约10μg/ml或其值的任何范围(例如，约2μg/ml至约10μg/ml、约3μg/ml至约10μg/ml、约4μg/ml至约10μg/ml、约5μg/ml至约10μg/ml、约6μg/ml至约10μg/ml、约7μg/ml至约10μg/ml、约8μg/ml至约10μg/ml、约9μg/ml至约10μg/ml、约1μg/ml至约9μg/ml、约2μg/ml至约9μg/ml、约3μg/ml至约9μg/ml、约4μg/ml至约9μg/ml、约5μg/ml至约9μg/ml、约6μg/ml至约9μg/ml、约7μg/ml至约9μg/ml、约8μg/ml至约9μg/ml、约1μg/ml至约8μg/ml、约2μg/ml至约8μg/ml、约3μg/ml至约8μg/ml、约4μg/ml至约8μg/ml、约5μg/ml至约8μg/ml、约6μg/ml至约8μg/ml、约7μg/ml至约8μg/ml、约1μg/ml至约7μg/ml、约2μg/ml至约7μg/ml、约3μg/ml至约7μg/ml、约4μg/ml至约7μg/ml、约5μg/ml至约7μg/ml、约6μg/ml至约7μg/ml、约1μg/ml至约6μg/ml、约2μg/ml至约6μg/ml、约3μg/ml至约6μg/ml、约4μg/ml至约6μg/ml、约5μg/ml至约6μg/ml、约1μg/ml至约5μg/ml、约2μg/ml至约5μg/ml、约3μg/ml至约5μg/ml、约4μg/ml至约5μg/ml、约1μg/ml至约4μg/ml、约2μg/ml至约4μg/ml、约3μg/ml至约4μg/ml、约1μg/ml至约3μg/ml、约2μg/ml至约3μg/ml或约1μg/ml至约2μg/ml)。在其它实施方案中，MOSPD2的抑制剂是抗体或抗体的抗原结合片段，并且治疗有效量是约1μg/ml、约2μg/ml、约3μg/ml、约4μg/ml、约5μg/ml、约6μg/ml、约7μg/ml、约8μg/ml、约9μg/ml或约10μg/ml。
[0331] 在一些实施方案中，MOSPD2的抑制剂是抗体或抗体抗原结合片段，并且治疗有效量是约10mg/kg至约40mg/kg或其值的任何范围(例如，约15mg/kg至约40mg/kg、约20mg/kg至约40mg/kg、约25mg/kg至约40mg/kg、约30mg/kg至约40mg/kg、约35mg/kg至约40mg/kg、约10mg/kg至约35mg/kg、约15mg/kg至约35mg/kg、约20mg/kg至约35mg/kg、约25mg/kg至约
35mg/kg、约30mg/kg至约35mg/kg、约10mg/kg至约30mg/kg、约15mg/kg至约30mg/kg、约
20mg/kg至约30mg/kg、约25mg/kg至约30mg/kg、约10mg/kg至约25mg/kg、约15mg/kg至约
25mg/kg、约20mg/kg至约25mg/kg、约10mg/kg至约20mg/kg、约15mg/kg至约20mg/kg或约
10mg/kg至约15mg/kg)。在其它实施方案中，MOSPD2的抑制剂是抗体或抗体的抗原结合片段，并且治疗有效量是约10mg/kg、约15mg/kg、约20mg/kg、约25mg/kg、约30mg/kg、约35mg/kg或约40mg/kg。
35mg/kg、约30mg/kg至约35mg/kg、约10mg/kg至约30mg/kg、约15mg/kg至约30mg/kg、约
20mg/kg至约30mg/kg、约25mg/kg至约30mg/kg、约10mg/kg至约25mg/kg、约15mg/kg至约
25mg/kg、约20mg/kg至约25mg/kg、约10mg/kg至约20mg/kg、约15mg/kg至约20mg/kg或约
10mg/kg至约15mg/kg)。在其它实施方案中，MOSPD2的抑制剂是抗体或抗体的抗原结合片段，并且治疗有效量是约10mg/kg、约15mg/kg、约20mg/kg、约25mg/kg、约30mg/kg、约35mg/kg或约40mg/kg。
[0332] 在一些实施方案中，MOSPD2抑制剂(例如，抗体或其抗原结合片段)引起MOSPD2(例如，人类MOSPD2)的一种或多种活动(例如，MOSPD2表达、炎性细胞迁移(例如，白细胞或单核细胞迁移)、趋化性(例如，白细胞或单核细胞趋化性)、趋化因子信号传导途径、EGF受体磷酸化、ERK磷酸化、AKT磷酸化和/或FAK磷酸化)的至少约10％(例如，至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约
95％、至少约99％或更高)抑制。在一些实施方案中，向人类受试者施用MOSPD2抑制剂引起人类MOSPD2的一种或多种活动的至少约10％(例如，至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约99％或更高)抑制。
95％、至少约99％或更高)抑制。在一些实施方案中，向人类受试者施用MOSPD2抑制剂引起人类MOSPD2的一种或多种活动的至少约10％(例如，至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约99％或更高)抑制。
[0333] 在一些实施方案中，所述一种或多种活动是以下中的一种或多种：MOSPD2表达、炎性细胞迁移、趋化性、趋化因子信号传导途径、ERK磷酸化、AKT磷酸化和/或FAK磷酸化。在一些实施方案中，抑制了至少两种、至少三种、至少四种、至少五种或所有这些活动。
[0334] 在一些实施方案中，抑制了至少白细胞趋化性和趋化因子信号传导途径。在其它实施方案中，抑制趋化因子信号传导途径是抑制ERK磷酸化和/或AKT磷酸化。在其它实施方案中，趋化性通过超过一种趋化因子或趋化因子受体诱导。
[0335] 在一些实施方案中，炎性细胞是例如白细胞、粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜碱性粒细胞、嗜碱性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞或肥大细胞。
[0336] 在其它实施方案中，趋化性与炎性细胞诸如白细胞或单核细胞相关。
[0337] 在一些实施方案中，趋化因子是CCL14、CCL19、CCL20、CCL21、CCL25、CCL27、CXCL12、CXCL13、CXCL-8、CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CCL11、CXCL10、CCL7、CCL8、CCL13、CCL17或CCL22。在其它实施方案中，迁移或趋化性通过RANTES、MCP-3、MCP-1和SDF-1中的一种或多种来诱导。实施例
[0338] 现在提及以下实施例，其连同以上描述一起以非限制性方式说明本发明的一些实施方案。
[0339] 材料和方法
[0340] MOSPD2抑制
[0341] U937单核细胞系(CRL-1593.2)获得自美国典型培养物保藏中心(ATCC)(Manassas,VA)。将细胞(2x 106个/2ml)放置在15ml管中。将对照慢病毒颗粒(2x 105个病毒颗粒)(SHC202V,Sigma,Israel)或含有MOSPD2sh-RNA(2x 106个病毒颗粒；Sigma)的慢病毒颗粒施加于细胞，然后在2000rpm下在室温下在8μg/ml聚凝胺(Sigma)存在下将细胞离心60分钟。在SEQ ID NO:9-14中提供人工shRNA发夹序列以及其在MOSPD2上的对应靶序列。然后将所述细胞接种到6孔板的RPMI培养基中，所述培养基含有全部来自Biological
Industries(Beit Haemek,Israel)的谷氨酰胺、10％胎牛血清(FCS)和青霉素/链霉素。在
72小时之后，添加含有嘌呤霉素(4μg/ml,Sigma)的新鲜培养基，以用于选择转导的细胞。
Industries(Beit Haemek,Israel)的谷氨酰胺、10％胎牛血清(FCS)和青霉素/链霉素。在
72小时之后，添加含有嘌呤霉素(4μg/ml,Sigma)的新鲜培养基，以用于选择转导的细胞。
[0342] 细胞迁移跨孔测定
[0343] 为了测试趋化因子诱导的细胞迁移，将RANTES(CCL5,100ng/ml)、MCP-1(CCL2,100ng/ml)、MCP-3(CCL7,100ng/ml)或SDF-1(CXCL12,25ng/ml)(PeproTech,Israel)溶解在补充有0.5％胎牛血清(FBS)的RPMI-1640培养基中并且将其放置在QCM 24-孔5mm孔迁移测定板(Corning-Costar,Corning,NY)的下部腔室中。使用对照慢病毒颗粒或含有MOSPD2sh-RNA(sh-MOSPD2)的慢病毒颗粒转导U937细胞(3x 105)，将其接种在上部腔室中并且孵育2-
4小时。随后，通过荧光活化细胞分选(FACS)确定迁移到下部腔室中的细胞数目。
4小时。随后，通过荧光活化细胞分选(FACS)确定迁移到下部腔室中的细胞数目。
[0344] 蛋白质印迹
[0345] 在含有0.5％FCS(Biological Industries,Beit Haemek,Israel)的RPMI培养基中将sh-对照或sh-MOSPD2慢病毒转导的U937细胞(106)饥饿3小时，并且然后用RANTES
(100ng/ml)、MIP-1α(100ng/ml)、MCP-3(100ng/ml)或SDF-1(25ng/ml)活化5分钟。将细胞洗涤并重悬于含有1:100二硫苏糖醇(DTT)、磷酸酶和蛋白酶抑制剂(Thermo Scientific)的裂解缓冲液中。将样品加样到预制Criterion TGX凝胶(Bio-Rad,Hemel Hempstead,UK)上并且将其转移到硝基纤维素膜上。将印迹用Tris缓冲盐水和Tween 20(TBST)中的5％乳或牛血清白蛋白(BSA)封闭1小时，之后用一级抗体和二级抗体孵育。使用ECL试剂盒(Thermo Scientific)对膜进行显影。将以下抗体用于免疫印迹：
(100ng/ml)、MIP-1α(100ng/ml)、MCP-3(100ng/ml)或SDF-1(25ng/ml)活化5分钟。将细胞洗涤并重悬于含有1:100二硫苏糖醇(DTT)、磷酸酶和蛋白酶抑制剂(Thermo Scientific)的裂解缓冲液中。将样品加样到预制Criterion TGX凝胶(Bio-Rad,Hemel Hempstead,UK)上并且将其转移到硝基纤维素膜上。将印迹用Tris缓冲盐水和Tween 20(TBST)中的5％乳或牛血清白蛋白(BSA)封闭1小时，之后用一级抗体和二级抗体孵育。使用ECL试剂盒(Thermo Scientific)对膜进行显影。将以下抗体用于免疫印迹：
[0346] 一级抗体：抗微管蛋白(1:4000)和抗磷酸细胞外调节性激酶(p-ERK1/2)(Thr 183和Tyr 185,1:4000)抗体购自Sigma(Israel)。抗-磷酸-AKT(Ser 473,1:1000)抗体购自Cell Signaling。抗热休克蛋白90(HSP)90(1:1000)抗体购自Santa Cruz Biotechnology(Dallas,TX)。
[0347] 二级抗体：辣根过氧化物酶(HRP)驴抗兔(1:5000)抗体和HRP山羊抗小鼠(1:5000)抗体购自Jackson ImmunoResearch(West Grove,PA)。
[0348] Q-PCR
[0349] 为了测定MOSPD2抑制，使用RNeasy微型试剂盒(Qiagen,Valencia,CA)从用对照慢病毒颗粒或含有sh-MOSPD2的慢病毒颗粒转导的U937细胞中提取RNA。对于cDNA制备，将2μg RNA与qScript反应混合物和qScript逆转录酶(Quanta Bioscience,Gaithersburg,MD)合并。将反应物放置在热循环器(BioRad,Hercules,CA)中并且根据制造商说明书设定运行程序。在Applied Biosystems7300实时PCR系统(Grand Island,NY)上使用多组将RNA水平归一化的人类MOSPD2的引物28S(Biosearch Technologies,Petaluma,CA)和SYBR Green PCR Master Mix(Applied Biosystems,Warrington,UK)进行实时PCR反应。
[0350] MOSPD2转染
[0351] 使用jetPRIME转染试剂(Polyplus transfection,France)将HEK293细胞用空质粒或编码血球凝集素(HA)-标记的人类MOSPD2转染48小时。通过流式细胞术使用抗-HA-PE(miltenyi Biotec,Germany)抗体测定转染效率。
[0352] 人类单核细胞的分离
[0353] 根据Sheba Medical Center,Ramat Gan,Israel的机构审查委员会，从健康男性供体获得静脉血样品。在Ficoll-Paque PLUS(GE Healthcare,Sweden)上使用50ml
Leucosep管(Greiner Bio-One,Germany)分离外周血单核细胞(PBMC)。在磷酸盐缓冲盐水(PBS)(Beit Haemek,Israel)中洗涤细胞，并且在4℃下在含有PBS和0.5％牛血清白蛋白
(BSA)的缓冲液中使用人类CD14微珠粒(Miltenyi Biotec,Bergisch Gladbach,Germany)
孵育15分钟。
Leucosep管(Greiner Bio-One,Germany)分离外周血单核细胞(PBMC)。在磷酸盐缓冲盐水(PBS)(Beit Haemek,Israel)中洗涤细胞，并且在4℃下在含有PBS和0.5％牛血清白蛋白
(BSA)的缓冲液中使用人类CD14微珠粒(Miltenyi Biotec,Bergisch Gladbach,Germany)
孵育15分钟。
[0354] 亚细胞分离
[0355] 使用亚细胞蛋白质分离试剂盒(Thermo Fisher Scientific)根据制造商说明书进行细胞区室的分离。
[0356] 细胞增殖
[0357] 将用对照慢病毒颗粒或含有sh-MOSPD2的慢病毒颗粒转导的U937细胞接种在6孔板(104个/孔)的RPMI培养基中，所述培养基含有全部来自Biological Industries(Beit Haemek,Israel)的谷氨酰胺、10％FCS和青霉素/链霉素。通过FACS计数细胞，在三个孔中每
24小时一次，持续连续3天。
24小时一次，持续连续3天。
[0358] 实施例1
[0359] MOSPD2和趋化因子诱导的单核细胞迁移
[0360] 为了评估MOSPD2在单核细胞迁移中的作用，如材料和方法部分所述在U937细胞中使用含有针对MOSPD2mRNA的三个不同区域的sh-RNA(sh-MOSPD2)的慢病毒颗粒沉默MOSPD2表达。使用定量PCR(Q-PCR)评估细胞中的MOSPD2mRNA表达并且使用β-肌动蛋白表达作为对照归一化。图1显示所有测试的sh-MOSPD2显著降低人类MOSPD2的mRNA表达水平。使用跨孔迁移测定测试用对照慢病毒颗粒或sh-MOSPD2慢病毒颗粒转导的U937细胞朝向趋化因子RANTES的迁移。图2和3显示由RANTES诱导的细胞迁移在sh-MOSPD2转导的细胞中与其中
MOSPD2未沉默的细胞相比受到显著抑制。
MOSPD2未沉默的细胞相比受到显著抑制。
[0361] 实施例2
[0362] MOSPD2、ERK磷酸化和AKT磷酸化
[0363] 通过测试MOSPD2抑制对ERK和AKT磷酸化的作用来测定MOSPD2抑制对趋化因子诱导的信号传导途径的作用。将用对照慢病毒颗粒或sh-MOSPD2慢病毒颗粒转导的U937细胞使用RANTES处理2或5分钟并且然后通过蛋白质印迹对磷酸化ERK和AKT进行分析。将热休克蛋白90(HSP90)用作加样对照。图4显示MOSPD2的抑制几乎完全消除了RANTES诱导的ERK和AKT磷酸化。
[0364] 实施例3
[0365] MOSPD2和趋化因子受体驱动的信号传导
[0366] 还测试MOSPD2抑制对其它趋化因子的作用。在跨孔测定中测试用对照慢病毒颗粒或sh-MOSPD2慢病毒颗粒转导的U937细胞朝向MCP-3、MCP-1、RANTES和SDF-1的迁移并且通过蛋白质印迹测试ERK和AKT的磷酸化。图5显示MOSPD2抑制显著抑制了由所有测试的趋化因子诱导的细胞迁移。另外，图6显示MOSPD2的抑制几乎完全消除了由所有测试的趋化因子诱导的ERK和AKT磷酸化。这样，MOSPD2抑制对迁移和信号传导的作用不限于单个趋化因子或趋化因子受体途径。
[0367] 实施例4
[0368] MOSPD2和U937细胞增殖
[0369] 还测试MOSPD2抑制对U937细胞增殖的作用。如方法和材料中所述地接种用对照慢病毒颗粒或sh-MOSPD2慢病毒颗粒转导的U937细胞并且每24小时计数一次，持续连续三天。图7显示MOSPD2抑制不会影响U937增殖，这表明通过抑制趋化因子受体下游的细胞内过程而非通过一般抑制单核细胞活性来发生MOSPD2抑制对迁移和信号传导的作用。
[0370] 实施例5
[0371] 抗MOSPD2抗体
[0372] 根据以下方法生成抗-MOSPD2多克隆抗体。
[0373] 材料和方法
[0374] 血球凝集素(HA)-标记的重组人类MOSPD2(HA-rhMOSPD2)的产生和纯化
[0375] 使用EcoRI和XbaI限制性位点将全长人类MOSPD2cDNA插入到慢病毒质粒载体pLVX-EF1α-IRES-Puro(Clonetech,CA)中。使用EcoRI限制性位点将编码HA-标签的寡核苷酸(YPYDVPDYA；SEQ ID NO:15)插入到MOSPD2的N-末端区域。对于转导，在室温下在8μg/ml聚凝胺(Sigma,Israel)和含有表达HA-rhMOSPD2的载体的慢病毒颗粒存在下将A2058黑素
瘤细胞(ATCC CRL-11147,VA)以2000rpm旋转60分钟。然后将细胞接种在6孔板中。在72小时之后，添加含有嘌呤霉素(4μg/ml Sigma,Israel)的新鲜培养基，以用于选择转导的细胞。
为了纯化HA-rhMOSPD2，使用M-PER哺乳动物蛋白质提取试剂(Thermo Scientific)裂解
A2058转导的细胞并且使其穿过抗-HA琼脂糖珠粒(Thermo Scientific)。将甘氨酸或硫氰酸钠用于从所述珠粒中洗脱HA-rhMOSPD2，接着针对PBS彻底透析。
瘤细胞(ATCC CRL-11147,VA)以2000rpm旋转60分钟。然后将细胞接种在6孔板中。在72小时之后，添加含有嘌呤霉素(4μg/ml Sigma,Israel)的新鲜培养基，以用于选择转导的细胞。
为了纯化HA-rhMOSPD2，使用M-PER哺乳动物蛋白质提取试剂(Thermo Scientific)裂解
A2058转导的细胞并且使其穿过抗-HA琼脂糖珠粒(Thermo Scientific)。将甘氨酸或硫氰酸钠用于从所述珠粒中洗脱HA-rhMOSPD2，接着针对PBS彻底透析。
[0376] α-MOSPD2多克隆抗体的生成和分离
[0377] 用大约0.5mg于完全费氏佐剂中乳化的HA-rhMOSPD2免疫兔，接着每三周用大约0.25mg于不完全费氏佐剂中乳化的HA-rhMOSPD2进行三次加强。在每次加强后一周收集血清以评估抗体免疫原性和滴度。使用蛋白质A/G珠粒(SantaCruz,CA)将α-MOSPD2抗体从血清中分离。
[0378] 结果
[0379] 兔多克隆α-MOSPD2抗体检测内源性人类MOSPD2并使其沉淀
[0380] 评价经分离的α-MOSPD2多克隆抗体检测内源性MOSPD2并使其沉淀的能力。将细胞裂解物由用对照或sh-MOSPD2慢病毒颗粒转导的U937细胞制备。通过蛋白质印迹使用经分离的α-MOSPD2抗体(稀释1:5000)分析样品。将HSP90的表达确定为加样对照。还使用经分离的α-MOSPD2抗体或兔IgG(10μg)作为对照来进行U397细胞裂解物的免疫沉淀。通过使用经分离的α-MOSPD2抗体进行免疫印迹来分析所得沉淀，接着用山羊抗兔抗体-HRP(1:5000)孵育。图8显示经分离的α-MOSPD2抗体容易检测(图8A)U937细胞中内源性表达的MOSPD2并且使其免疫沉淀(图8B)。
[0381] 实施例6
[0382] MOSPD2亚细胞定位
[0383] 使用HEK293细胞研究MOSPD2的亚细胞定位，所述细胞如方法和材料中所述地使用空质粒或HA标记的人类MOSPD2质粒转染。然后在仅允许表面染色(无洗涤剂)的条件下使用抗HA抗体染色HEK293细胞。图9显示用HA标记的MOSPD2质粒转染的细胞在细胞质膜上表达蛋白质。为了确定内源性MOSPD2是否也可以定位到细胞膜，将亚细胞级分从初代人类CD14单核细胞中分离并且测试MOSPD2的存在(参见方法和材料)。图10中的结果显示MOSPD2可见于膜中而不可见于细胞质级分中。使用ERK和MHC I类抗体分别证明细胞质级分和膜级分的纯度。
[0384] 实施例7
[0385] VB-201抑制MOSPD2
[0386] VB-201和VB-221的标记
[0387] 用生物素如下标记VB-201和VB-221。将VB-201、VB-221和卵清蛋白(OVA,Sigma,Israel)溶解在0.1M MES缓冲液(Thermo Scientific,Rockford,IL)中并且使用EDC[1-乙
基-3-(二甲基氨基丙基)碳二亚胺HCL](Thermo Scientific)以摩尔比率100(VB-201/VB-
221):1(OVA):240(EDC)在室温下缀合2-3小时。此后，将样品转移到10kDa透析盒(Thermo Scientific)并且针对PBS透析过夜。然后使用EDC将卵清蛋白结合的VB-201(OB201)和VB-
221(OB221)与胺-PEG2-生物素(在0.1M MES缓冲液中)以摩尔比1(OB201/OB221):100(胺-
PEG2-生物素):700(EDC)缀合。使反应在室温下进行2-3小时，之后再次将样品转移至10kDa透析盒中并且针对PBS透析过夜。
基-3-(二甲基氨基丙基)碳二亚胺HCL](Thermo Scientific)以摩尔比率100(VB-201/VB-
221):1(OVA):240(EDC)在室温下缀合2-3小时。此后，将样品转移到10kDa透析盒(Thermo Scientific)并且针对PBS透析过夜。然后使用EDC将卵清蛋白结合的VB-201(OB201)和VB-
221(OB221)与胺-PEG2-生物素(在0.1M MES缓冲液中)以摩尔比1(OB201/OB221):100(胺-
PEG2-生物素):700(EDC)缀合。使反应在室温下进行2-3小时，之后再次将样品转移至10kDa透析盒中并且针对PBS透析过夜。
[0388] 通过流式细胞术获得的VB-201和VB-221细胞表面结合特异性
[0389] 在流式细胞术实验中使用链霉亲和素-APC(eBioscience,San Diego,CA)检测标记的VB-201或VB-221的结合。
[0390] 沉淀
[0391] 使用含有1:100蛋白酶和磷酸酶抑制剂的1％NP-40裂解缓冲液裂解细胞，并且之后在冰上孵育20分钟并以最大速度离心15分钟。在旋转器中将样品在4℃下用溶剂、OB201或OB221孵育过夜。添加链霉亲和素琼脂糖珠粒(Sigma,Israel)，持续2小时。使用没有DTT的裂解缓冲液进行蛋白质洗脱，在室温下持续10分钟。如上所述地进行样品加样、转移和免疫印迹。
[0392] 结果
[0393] VB-201结合表面表达的MOSPD2
[0394] 先前已显示VB-201抑制单核细胞在体外和体内的迁移。然而，VB-201的衍生物VB-221不抑制人类单核细胞中的趋化因子诱导的信号传导和迁移。使用标记的VB-201和VB-
221，使得来自人类单核细胞的蛋白质沉淀并且研究通过质谱获得的差别显示。质谱结果显示MOSPD2与VB-201具有强结合而与VB-221没有。
221，使得来自人类单核细胞的蛋白质沉淀并且研究通过质谱获得的差别显示。质谱结果显示MOSPD2与VB-201具有强结合而与VB-221没有。
[0395] 为了进一步验证这些结果，将标记的VB-201和VB-221应用于来自人类CD14单核细胞的细胞裂解物上。然后用抗MOSPD2和TLR2探测样品。然而VB-201和VB-221以相当的强度沉淀TLR2，VB-201比VB-221显著更强地沉淀MOSPD2(图11)。这些结果还指示VB-201结合MOSPD2。
[0396] 还进行研究以评估VB-201当在细胞表面上表达时是否以其天然形式结合MOSPD2。因此，使用编码HA标记的人类MOSPD2的质粒转染HEK293细胞并且然后用标记的VB-201或
VB-221染色。图12显示标记的VB-201与表达MOSPD2(HA阳性)的细胞的强染色，而使用标记的VB-221仅检测到弱染色。总的来说，这些结果显示VB-201可以结合细胞表面表达的人类MOSPD2。
VB-221染色。图12显示标记的VB-201与表达MOSPD2(HA阳性)的细胞的强染色，而使用标记的VB-221仅检测到弱染色。总的来说，这些结果显示VB-201可以结合细胞表面表达的人类MOSPD2。
[0397] 实施例8
[0398] 抗-MOSPD2(Fab')2单克隆抗体的生成
[0399] 使用含有噬菌体展示的人类Fab的选择的HuCAL Platform(Bio-Rad AbD Serotec,GmnH)来获得抗-MOSPD2(Fab')2单克隆抗体(mAb)。
[0400] 简言之，将融合至人类Fc的MOSPD2的细胞外区域的重组蛋白固定至固体支撑物上。用固定抗原孵育噬菌体颗粒上呈递的 文库。通过充分洗涤来去除非特异性
抗体并且通过添加还原剂来稀释特异性抗体噬菌体。将抗体DNA以汇集物的形式分离并且将其亚克隆到大肠杆菌表达载体中以生成二价F(ab')2mAb。挑出菌落并且使其在微量滴定板中生长。使培养物裂解以释放抗体分子并且通过ELISA和FACS筛选特异性抗原结合。表达独特抗体并且使用一步亲和力色谱法纯化，并且接着再次通过ELISA和FACS测试特异性。
抗体并且通过添加还原剂来稀释特异性抗体噬菌体。将抗体DNA以汇集物的形式分离并且将其亚克隆到大肠杆菌表达载体中以生成二价F(ab')2mAb。挑出菌落并且使其在微量滴定板中生长。使培养物裂解以释放抗体分子并且通过ELISA和FACS筛选特异性抗原结合。表达独特抗体并且使用一步亲和力色谱法纯化，并且接着再次通过ELISA和FACS测试特异性。
[0401] 图13列出17种抗-MOSPD2F(ab')2单克隆抗体，所述单克隆抗体在初步筛选以用于结合至过度表达MOSPD2的细胞之后鉴定。使用ELISA对用于MOSPD2结合的克隆进行进一步分析鉴定了值相对于本底大于5倍(在图13中的*)的12种克隆。
[0402] 实施例9
[0403] 抗-MOSPD2F(ab')2mAb结合细胞上过度表达的人类MOSPD2
[0404] 用HA-标记的人类MOSPD2转染A2058黑素瘤，以生成过度表达MOSPD2的细胞。
[0405] 使用流式细胞术使用这些细胞测试在实施例8中鉴定的12种抗体克隆与MOSPD2的结合。特别地，在4℃下在100μl FACS缓冲液(PBS+2％FCS+0.02％叠氮化钠)中将105个细胞用2.5μg F(ab')2mAb孵育1小时。然后洗涤细胞，将其重悬于FACS缓冲液中并且在4℃下使用Alexa-Fluor 647-缀合的(Fab')2山羊抗人类IgG F(ab')21:200(目录号109-606-097,
Jackson Immunoresearch,PA)染色30分钟。洗涤细胞，将其重悬于FACS缓冲液中并且在
FACS-Calibur装置上分析。
Jackson Immunoresearch,PA)染色30分钟。洗涤细胞，将其重悬于FACS缓冲液中并且在
FACS-Calibur装置上分析。
[0406] 所有克隆均阳性染色细胞。2个克隆的代表性染色示出在图14A-14B中。将在实施例8中使用ELISA未鉴定为阳性克隆的克隆用作阴性对照。
[0407] 实施例10
[0408] 限定MOSPD2的细胞表达特异性和定位
[0409] 不同免疫细胞子群的分析指示MOSPD2相对于T和B淋巴细胞主要在CD14+单核细胞中表达(图15A)。为了确定MOSPD2mRNA表达水平，使用RNeasy微型试剂盒(Qiagen,
ValenVBa,CA)从细胞中提取RNA。对于cDNA制备，将2μg RNA与qScript反应混合物和
qScript逆转录酶(Quanta Bioscience,Gaithersburg,MD)合并。将反应物放置在热循环器(BioRad,Hercules,CA)中并且根据制造商说明书编程运行。在Applied Biosystems 7300实时PCR系统(Grand Island,NY)上使用多组将RNA水平归一化的人类MOSPD2的引物28S
(BIOSEARCH TECHNOLOGIES,Petaluma,CA)和SYBR Green PCR Master Mix(Applied
Biosystems,Warrington,UK)进行实时PCR反应。
ValenVBa,CA)从细胞中提取RNA。对于cDNA制备，将2μg RNA与qScript反应混合物和
qScript逆转录酶(Quanta Bioscience,Gaithersburg,MD)合并。将反应物放置在热循环器(BioRad,Hercules,CA)中并且根据制造商说明书编程运行。在Applied Biosystems 7300实时PCR系统(Grand Island,NY)上使用多组将RNA水平归一化的人类MOSPD2的引物28S
(BIOSEARCH TECHNOLOGIES,Petaluma,CA)和SYBR Green PCR Master Mix(Applied
Biosystems,Warrington,UK)进行实时PCR反应。
[0410] 预测MOSPD2是具有一个跨膜区域和一个残基长度的细胞内尾的质膜蛋白。细胞区室的分馏和人类单核细胞的免疫荧光染色以及对转染来过度表达HA-标记的MOSPD2的HEK 293细胞进行的流式细胞术(根据上文所述的方法进行)揭示MOSPD2是在人类单核细胞的质膜上表达的细胞表面蛋白(分别为图15B-15D)。
[0411] 实施例11
[0412] MOSPD2在浸润到发炎组织的单核细胞上表达
[0413] 将福尔马林固定的组织脱水、嵌入在石蜡中并且切片成4μm。在Benchmark XT染色模块(Ventana Medical Systems)上完全校准免疫染色。在将切片脱蜡并脱水之后，分别以1:80和1:100稀释抗-CD163(Cell Marque,Rocklin,USA,MRQ-26)或抗-MOSPD2，静止添加40分钟。使用UltraView通用碱性磷酸酶红色检测试剂盒(Ventana Medical Systems,760-
501)检测抗-CD163染色并且使用UltraView通用DAB检测试剂盒(Ventana Medical
Systems,760-500)检测抗-MOSPD2染色。当施加双重染色时，首先进行MOSPD2染色，接着进行CD163染色。用苏木精(Ventana Medical Systems)复染载玻片。在完成自动化染色器上的运行之后，将载玻片连续地在70％乙醇、95％乙醇和100％乙醇中脱水，每次10秒。在盖滑动之前，在二甲苯中清洁切片10秒并且使用Entellan封固。使用Olympus BX51显微镜查看MOSPD2和CD163染色的载玻片。使用Nikon数字视觉照相机和NIS元素成像软件获取图像。
501)检测抗-CD163染色并且使用UltraView通用DAB检测试剂盒(Ventana Medical
Systems,760-500)检测抗-MOSPD2染色。当施加双重染色时，首先进行MOSPD2染色，接着进行CD163染色。用苏木精(Ventana Medical Systems)复染载玻片。在完成自动化染色器上的运行之后，将载玻片连续地在70％乙醇、95％乙醇和100％乙醇中脱水，每次10秒。在盖滑动之前，在二甲苯中清洁切片10秒并且使用Entellan封固。使用Olympus BX51显微镜查看MOSPD2和CD163染色的载玻片。使用Nikon数字视觉照相机和NIS元素成像软件获取图像。
[0414] 如图16A-16C所示，MOSPD2在浸润到许多发炎组织中的单核细胞上表达。图16A示出来自类风湿性关节炎患者的滑膜的CD163、MOSPD2或CD163和MOSPD2二者的染色。图16B示出颈动脉粥样硬化组织的CD163、MOSPD2或CD163和MOSPD2二者的染色。图16C示出侵袭性导管癌乳腺组织的MOSPD2的染色。黑色箭头指示肿瘤细胞的阳性染色。淡色箭头指示侵袭性单核细胞的染色。
[0415] 实施例12
[0416] MOSPD2不会影响IFN-γ-诱导的活化或PKC-介导的活化
[0417] 靶向MOSPD2不会损害单核细胞除迁移之外的生物功能。用如上文所述的sh-慢对照或sh-慢MOSPD2病毒颗粒转导U937单核细胞系并且用IFN-γ或PMA处理。处理的细胞的蛋白质印迹分析显示沉默MOSPD2不会改变IFN-γ或PMA对下游信号传导标记的磷酸化(分别
是图17A和17B)。这些结果表明MOSPD2特异性地促进单核细胞迁移。
是图17A和17B)。这些结果表明MOSPD2特异性地促进单核细胞迁移。
[0418] 实施例13
[0419] 抗-MOSPD2抗体的表位作用
[0420] 为了确定抗-MOSPD2抗体在人类MOSPD2上可以特异性结合的一个或多个表位，测量与不同人类MOSPD2片段的结合亲和力，如本文所述的，通过经由SA芯片上预先固定的链霉亲和素(SA)来捕获N-末端生物素化MOSPD2片段并测量跨过MOSPD2表面滴定的抗-MOSPD2抗体( 3000TM表面等离振子共振(SPR)系统，Biacore,Inc.,Piscataway NJ)的结
合动力学来测量。在HBS-EP运行缓冲液(10mM HEPES pH 7.4、150mM NaCl、3mM EDTA、
0.005％v/v聚山梨酸酯P20)中进行BIAcore测定。通过将N-生物素化MOSPD2稀释到HBS-EP缓冲液中稀释至小于0.001mg/mL的浓度并且使用可变接触时间将其注射穿过SA传感器芯
片来制备MOSPD2表面。与捕获水平<50个响应单位(RU)对应的低容量表面用于高分辨率动力学研究，而高容量表面(约800RU的捕获的MOSPD2)用于浓度研究、筛选和溶液亲和力测定。
合动力学来测量。在HBS-EP运行缓冲液(10mM HEPES pH 7.4、150mM NaCl、3mM EDTA、
0.005％v/v聚山梨酸酯P20)中进行BIAcore测定。通过将N-生物素化MOSPD2稀释到HBS-EP缓冲液中稀释至小于0.001mg/mL的浓度并且使用可变接触时间将其注射穿过SA传感器芯
片来制备MOSPD2表面。与捕获水平<50个响应单位(RU)对应的低容量表面用于高分辨率动力学研究，而高容量表面(约800RU的捕获的MOSPD2)用于浓度研究、筛选和溶液亲和力测定。
[0421] 通过将抗体G1 Fab以两倍或三倍增量连续稀释至跨越1μM-0.1nM的浓度(目标在于0.1-10倍评估的Kd)来获得动力学数据。通常将样品以100μL/min注入1分钟并且允许至少10分钟的解离时间。在每次结合循环之后，用25％v/v乙醇中的25mM NaOH再生表面，所述NaOH在数以百计的循环中耐受。使用BIA评价程序将整个滴定系列(通常重复生成)整体拟合至1:1Langmuir结合模型。这对每个结合相互作用返回了一对独特的缔合和解离动力学速率常数(分别为Kon和Koff)，其比率得到平衡解离常数(KD＝Koff/Kon)。
[0422] 抗-MOSPD2抗体可以特异性结合至根据SEQ ID NO:1(氨基酸残基1-518)编号的人类MOSPD2的以下氨基酸区域中的一个或多个：508-517、501-514、233-241、509-517、212-
221、13-24、505-517、505-514、89-100、506-517、233-245、504-514、128-136、218-226、15-
24、83-96、42-50、462-474、340-351、504-517、462-470、327-337、21-32、217-226、510-517、
178-190、497-509、504-516、64-77、504-515、147-159、503-315、88-97、208-218、178-191、
502-515、503-516、497-505、500-509、189-202、189-197、505-516、1-63、82-239、93-234、
327-445、327-431以及497-517。
221、13-24、505-517、505-514、89-100、506-517、233-245、504-514、128-136、218-226、15-
24、83-96、42-50、462-474、340-351、504-517、462-470、327-337、21-32、217-226、510-517、
178-190、497-509、504-516、64-77、504-515、147-159、503-315、88-97、208-218、178-191、
502-515、503-516、497-505、500-509、189-202、189-197、505-516、1-63、82-239、93-234、
327-445、327-431以及497-517。
[0423] 实施例14
[0424] 另外的抗MOSPD2抗体
[0425] 根据实施例5(多克隆抗体)或实施例8(单克隆抗体)所述的方法生成识别一个或多个MOSPD2表位的另外的抗-MOSPD2抗体。
[0426] 简言之，在将实施例14中鉴定为MOSPD2表位的MOSPD2部分融合至人类Fc并且将其固定在固体支撑体上。用固定的抗原孵育噬菌体颗粒上呈递的 文库(HuCAL 平台；Bio-Rad AbD Serotec,GmnH)。通过充分洗涤来去除非特异性抗体并
且通过添加还原剂来稀释特异性抗体噬菌体。将抗体DNA以汇集物的形式分离并且将其亚克隆到大肠杆菌表达载体中以生成二价F(ab')2mAb。挑出菌落并且使其在微量滴定板中生长。使培养物裂解以释放抗体分子并且通过ELISA和FACS筛选特异性抗原结合。表达独特抗体并且使用一步亲和力色谱法纯化，并且接着再次通过ELISA和FACS测试特异性。
且通过添加还原剂来稀释特异性抗体噬菌体。将抗体DNA以汇集物的形式分离并且将其亚克隆到大肠杆菌表达载体中以生成二价F(ab')2mAb。挑出菌落并且使其在微量滴定板中生长。使培养物裂解以释放抗体分子并且通过ELISA和FACS筛选特异性抗原结合。表达独特抗体并且使用一步亲和力色谱法纯化，并且接着再次通过ELISA和FACS测试特异性。
[0427] 本申请中所提及的所有公布、专利和专利申请在本文中以引用的方式整体并入本说明书中，达到如同每个单独的公布、专利或专利申请被专门地并且单独地指示以引用的方式并入本文的相同程度。此外，本申请中任何参考文献的引用或标明不应解释为承认可获得所述参考文献作为本发明的现有技术。就使用段落标题方面而言，它们不应认为是必要地进行限制。
高效检索全球专利专利汇是专利免费检索,专利查询,专利分析-国家发明专利查询检索分析平台，是提供专利分析，专利查询，专利检索等数据服务功能的知识产权数据服务商。
我们的产品包含105个国家的1.26亿组数据，免费查、免费专利分析。
分析报告
专利汇分析报告产品可以对行业情报数据进行梳理分析，涉及维度包括行业专利基本状况分析、地域分析、技术分析、发明人分析、申请人分析、专利权人分析、失效分析、核心专利分析、法律分析、研发重点分析、企业专利处境分析、技术处境分析、专利寿命分析、企业定位分析、引证分析等超过60个分析角度，系统通过AI智能系统对图表进行解读，只需1分钟，一键生成行业专利分析报告。
鼻导管热门专利
-
3 一种鼻喷装置
-
5 鼻导管盛放装置
-
7 新型空气过滤口罩
-
8 鼻饲饮食推进器
-
10 一次性泪囊导管留置器
QQ群二维码
意见反馈
意见反馈